KR20130102177A - The ginseng polysaccaride hydrolysates with inhivition of helicobacter pylori-cell adhesion and a composition for preventing or treating gastrointestinal disease - Google Patents

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KR20130102177A
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Abstract

PURPOSE: A ginseng polysaccharide hydrolysate is provided to suppress Helicobacter pylori-cell adhesion. CONSTITUTION: A composition for preventing and treating gastrointestinal diseases contains hydrolysates with enhanced suppression of hemagglutination by Helicobacter pylori. The hydrolysates are prepared by treating ginseng polysaccharides with glycolytic enzyme. Hydrolase is selected among alpha-amylase, amyloglucosidase, alpha-glucosidase, beta-glucosidase, cellulase, and pectinase. The enzyme used in polysaccharide hydrolysis is alpha-amylase. [Reference numerals] (AA) Ginseng root (pulverizing); (BB) Extracting with water; (CC,FF,II) Precipitate; (DD,GG,JJ) Supernatant; (EE) Concentrating, adding ethanol; (HH) Enzyme processing; (KK) Enzyme hydrolysate

Description

헬리코박터 파이로리의 세포결합 저해활성을 갖는 인삼 다당체 가수분해물과 이를 함유하는 위장질환 예방 및 치료용 조성물 {The ginseng polysaccaride hydrolysates with inhivition of Helicobacter pylori-cell adhesion and a composition for preventing or treating gastrointestinal disease}The ginseng polysaccaride hydrolysates with inhivition of Helicobacter pylori-cell adhesion and a composition for preventing or treating gastrointestinal disease}

본 발명은 인삼 다당체 가수분해물 및 이를 유효성분으로 함유하는 소화성질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 위장질환 발병 원인균으로 알려져 있는 Helicobacter pylori의 위장내 점막 세포 결합을 저해하는 인삼뿌리에서 분리된 다당체 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 위장질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a ginseng polysaccharide hydrolyzate and a composition for preventing and treating digestive diseases containing the same as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to a composition for preventing and treating gastrointestinal diseases, which contains a polysaccharide hydrolyzate isolated from ginseng root that inhibits gastric mucosal cell binding of Helicobacter pylori, which is known as a causative agent of gastrointestinal diseases.

Helicobacter pylori는 그램음성(Gram-negative) 박테리아로서 만성 활동성 위염, 위십이지장궤양의 원인균이며, 위암과 위점막연관 림프 조직형 위림프종의 중요 인자로 인식되고 있는 균이다. 1994년 세계보건기구(World Health Organization, WHO)에서는 H. pylori를 위암의 제 1군 발암 인자로 규정한 이후 H. pylori의 중요성이 더욱 부각되었으며 H. pylori의 병리학적 위장질환에 대한 발병기전을 밝히기 위하여 많은 연구가 이루어지고 있다. Helicobacter pylori is a Gram-negative bacterium that causes chronic active gastritis and gastroduodenal ulcers and is recognized as an important factor in gastric cancer and gastric mucosal lymphoid tissue. In 1994, the World Health Organization (WHO) defined H. pylori as the primary carcinogen of gastric cancer, and the importance of H. pylori became more important and the pathogenesis of H. pylori pathological diseases was Much research is being done to find out.

선진국의 경우에는 감염률이 개도국이나 후진국의 경우보다 비교적 낮기는 하지만 그렇다고 하더라고 감염률이 60%를 상회하고 있어 간과해서는 안 될 병원균이다. 더욱이 oral to oral, fecal to oral 등의 주된 감염 경로를 감안할 때 환경적인 요인이 감염에 큰 영향을 주므로 가족 구성원 중에 이 균에 감염된 성인이 있을 경우, 그 가족의 아동들은 감염률이 높으므로, 그들이 성인이 되었을 때 위궤양 혹은 위암이 발생할 수 있는 위험률이 증가하게 된다고 보고되고 있다. In developed countries, the infection rate is relatively lower than that in developing and developing countries. However, the infection rate is higher than 60% and should not be overlooked. Furthermore, given the main paths of infection, such as oral to oral and fecal to oral, environmental factors have a significant impact on the infection, so if any family member has an adult, the children of the family have a high infection rate, so they It is reported that this increases the risk of developing gastric ulcer or gastric cancer.

이전에는 위염, 위궤양과 같은 위장 질환이 일차적으로 위산과다, 즉 과량의 위산 분비에 기인하며 그 원인으로 스트레스, 식품 및 유전적 요인 등에 의해 일어난다고 알려져 왔지만 최근에 와서는 H. pylori에 감염되었을 때 위장에 염증이 발생한다는 것이 정설로 되어 있다. 염증이 위장내 점막하층까지 퍼지게 되면 위궤양으로 발전하게 된다. 그리고 이것이 곧바로 위암으로 진행되는 것은 아니지만, H. pylori에 감염되면 위암으로 진행될 가능성이 3∼5배 정도 높아지는 것으로 알려지고 있다.
Previously, gastrointestinal diseases such as gastritis and gastric ulcers were known to be primarily caused by excessive gastric acid secretion, which is caused by stress, food, and genetic factors, but recently, when infected with H. pylori It is hypothesized that inflammation of the stomach occurs. When inflammation spreads to the submucosa of the stomach, it develops into gastric ulcers. And although this does not immediately lead to gastric cancer, it is known that infection with H. pylori increases the risk of developing gastric cancer by 3-5 times.

H. pylori가 위장관 병변을 일으키기 위하여 필수적으로 진행되어야 하는 과정은 H. pylori와 위장관 상피세포 사이에서 일어나는 부작(혹은 유착) 과정이다. 종래에 보고된 바에 의하면 H. pylori는 위장내 점막 상피세포에 결합하는데, 결합 기작이 주로 탄수화물과 이를 인식하는 박테리아 표면 단백질간의 상호작용에 의존하는 것으로 보고되고 있다. 상기 인식 탄수화물로는 뮤신(mucin) 당단백질의 황산화당(sulfated carbohydrate), 시알릴락토스(sialyllactose) 및 퓨코실 루이스 비 항원(fucosylated Lewis b antigen) 등이 알려져 있다. 최근에는 글리코스핑고리피드(glycosphingolipid)나 침속에 있는 뮤신단백질을 이용하여 박테리아의 세포결합을 저해하려는 노력이 경주되고 있다. 이미 박테리아 표면 단백질수용체(adhesin)의 분리와 동정이 이루어져 있고, 인식 탄수화물을 이용한 당배합체의 개발은 매우 중요한 발명대상에 속한다.
The essential process for H. pylori to cause gastrointestinal lesions is the side effect (or adhesion) that occurs between H. pylori and gastrointestinal epithelial cells. It has been reported previously that H. pylori binds to gastrointestinal mucosal epithelial cells, the binding mechanism of which is mainly dependent on the interaction between carbohydrates and bacterial surface proteins that recognize it. Examples of the recognized carbohydrates include sulfated carbohydrates of mucin glycoproteins, sialyllactose and fucosylated Lewis b antigens. Recently, efforts have been made to inhibit bacterial cell binding using glycosphingolipids or mucin proteins in saliva. The isolation and identification of bacterial surface protein receptors (adhesin) has already been made, and the development of glycopolymers using recognized carbohydrates is a very important subject.

세포와 세포간 인식작용에 이용되어온 적혈구 세포의 표면은 위점막 상피세포와 같거나 비슷한 탄수화물 조성을 보유하고 있으며 헬리코박터와 결합함으로써 응집반응을 일으킨다. 대부분 박테리아 세포는 응집반응을 보이는데 이는 박테리아 표면에 존재하는 결합단백질이 적혈구와 같은 숙주세포 표면의 탄수화물을 인식함으로써 일어나는 반응이다.
The surface of red blood cells, which have been used for cell-to-cell recognition, possesses the same or similar carbohydrate composition as gastric mucosal epithelial cells and causes aggregation by binding to Helicobacter. Most bacterial cells show agglutination, which occurs when the binding protein on the bacterial surface recognizes carbohydrates on the surface of host cells such as red blood cells.

수년전까지 위장질환을 치료하기 위해서 제산제(antacid), 히스타민 수용체의 길항작용제 등이 사용되었을 뿐이었으며 미국 국립보건원은 90년대 중반에 와서야 헬리코박터와 위장질환과의 관계를 인정하여 테트라사이클린(tetracycline)이나 아목시실린(amoxicillin)과 같은 항생제의 사용을 다른 치료제와 병행하여 사용할 수 있도록 허용하였다.
Antagonists and histamine antagonists have been used to treat gastrointestinal diseases many years ago. The National Institutes of Health recognized the relationship between Helicobacter and gastrointestinal diseases only in the mid-90s. The use of antibiotics such as or amoxicillin was allowed to be used in combination with other therapeutic agents.

그러나, 항생제 사용에 따른 항생제의 인체내 축적, 부작용이 생길 뿐만 아니라 이의 사용으로 세포파괴가 일어나고 항생제에 내성을 갖는 박테리아의 출현 때문에 궁극적으로는 위장질환을 치료할 수 있는 대체약품 개발의 필요성이 대두되고 있으며 이에 따라 최근에 진행되고 있는 국내, 외 위장질환 치료제 및 예방용 제재의 개발현황을 보면 면역시스템이나 항균제를 이용하거나, 박테리아 세포 외 배출효소를 이용한 키트의 제조가 주류를 이루고 있으며 아직까지 헬리코박터의 세포인식에 관여하는 당배합체를 이용한 제재는 개발되고 있지 않다.
However, due to the use of antibiotics in the body of antibiotics accumulate and side effects, as well as the use of these cells and cell destruction and the emergence of antibiotic-resistant bacteria, the need for the development of alternative drugs that can eventually treat gastrointestinal diseases is emerging. As a result, the development of domestic and foreign gastrointestinal disease treatment and preventive agents has been the mainstream in the production of kits using immune system or antimicrobial agent or bacterial extracellular excretion enzyme. There is no development of a drug using a glycomer involved in cell recognition.

한편, 인삼은 동양의학에서 사용되어 온 약제 중 효능이 매우 우수한 것들 중 하나이다. 인삼에는 Panax ginseng(고려인삼), Panax quinquefolius(미국인삼), Eleutherococcus senticosus(시베리아인삼) 등이 있다. 일반적으로 우리나라에서 생산되는 고려인삼의 효과가 가장 좋은 것으로 알려져 있다. 인삼은 오랫동안 응급상황에서 생명을 구하기 위하여 사용되어 왔으며, 강장제, 정력제, 각성제 및 항노화제 등으로 사용되어 왔고, 몸의 건강상태를 호전시켜 각종 감염이나 질환에 저항하는 비특이적 면역반응을 활성화시키는 소위 'adaptogen'으로도 사용되고 있다. 최근에 현대의학적 관점에서 인삼의 효용을 규명하고자 하는 노력들이 많이 진행되고 있어 중추신경계, 심혈관계, 내분비계, 면역계에 대한 효과들이 밝혀지고 있다.
On the other hand, ginseng is one of the drugs that have been used in Oriental medicine is very effective. Panax ginseng includes Panax ginseng, Panax quinquefolius, and Eleutherococcus senticosus. In general, Korean ginseng produced in Korea is known to have the best effect. Ginseng has long been used to save lives in emergencies, and has been used as a tonic, energetic, stimulant and anti-aging agent, and improves the health of the body to activate nonspecific immune responses that resist various infections and diseases. It is also used as an 'adaptogen'. Recently, many efforts have been made to investigate the utility of ginseng from the modern medical point of view, and the effects on the central nervous system, the cardiovascular system, the endocrine system and the immune system have been revealed.

한편, 인삼의 H. pylori 세포결합 저해에 관련된 종래 기술로는 H. pylori의 세포 결합을 저해하는 인삼뿌리에서 분리된 산성다당류(acidic polysaccharide) 분획과 그 제조방법(공개특허 10-0330138)이 있다. 인삼(Panax ginseng)의 수용성 추출물로부터 이온교환 크로마토크래피를 통해 분리된 산성다당류 분획은 다른 다당류 분획에 비하여 유로닌산(uronic acid)의 함량이 높고, 헬리코박터에 의한 적혈구 응집반응(hemagglutination)을 저해하는 활성이 상대적으로 높게 나타남으로써, 분리된 산성다당체 분획물은 H. pylori에 의하여 야기되는 위장질환 예방 및 치료제로 사용하는 기술이 개시 되었다.
Meanwhile, conventional techniques related to inhibition of H. pylori cell binding of ginseng include acidic polysaccharide fractions isolated from ginseng roots that inhibit cell binding of H. pylori and a method of preparing the same (Public Patent Publication 10-0330138). . The acidic polysaccharide fraction separated from the water-soluble extract of Panax ginseng by ion exchange chromatography has a higher content of uronic acid than other polysaccharide fractions and inhibits hemagglutination by Helicobacter. Due to the relatively high activity, isolated acidic polysaccharide fractions have been disclosed for use as a preventive and therapeutic agent for gastrointestinal diseases caused by H. pylori.

이처럼, 종래에는 인삼 다당류 혹은 탄수화물을 포함하는 조추출물로부터 이온교환 크로마토크래피를 통해 산성다당체를 분리정제하여 얻은 분획물을 이용한 생리활성 측정이 이루어져 왔다. 하지만 상기 방법은 산업적으로 이용하기에는 시간과 비용이 많이 소요되는 단점을 갖고 있다. 이에, 본 발명자들은 H. pylori 세포결합 저해제를 연구하던 중, 인삼뿌리에서 분리된 다당체 가수분해물이 H. pylori의 적혈구 응집반응에 대하여 강한 억제효과를 갖는다는 것을 확인함으로써 위장질환 예방 및 치료제로서 높은 가능성이 입증되어 본 발명을 완성하게 되었다.
As such, conventionally, biological activity measurement using fractions obtained by separating and purifying acidic polysaccharides from crude extracts containing ginseng polysaccharides or carbohydrates through ion exchange chromatography has been performed. However, the method has a disadvantage that it takes time and cost to use industrially. Therefore, the present inventors, while studying the inhibitor of H. pylori cell binding, confirmed that the polysaccharide hydrolyzate isolated from the ginseng root has a strong inhibitory effect on the hemagglutination reaction of H. pylori, which is a high preventive agent for preventing and treating gastrointestinal diseases. The possibilities have been demonstrated to complete the present invention.

따라서, 본 발명의 목적은 H. pylori의 세포결합 저해활성을 가지는 인삼 가수분해물을 제공함에 있다. Accordingly, it is an object of the present invention to provide a ginseng hydrolyzate having a cell binding inhibitory activity of H. pylori.

본 발명의 다른 목적은 상기 H. pylori의 세포결합 저해활성을 가지는 인삼 가수분해물의 제조방법을 제공함에 있다.
Another object of the present invention to provide a method for producing a ginseng hydrolyzate having a cell binding inhibitory activity of the H. pylori.

본 발명의 목적은 인삼의 수용성 추출물로부터 얻은 다당체에 효소로 처리하여 얻은 가수분해물이 가수분해 전의 다당체보다 H. pylori 적혈구 응집 저해활성에서 현저한 개선 효과를 나타냄으로써 위장질환 예방 및 치료용 조성물을 제조하는 방법을 제공하는데 있다.
An object of the present invention is to prepare a composition for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases by the hydrolyzate obtained by treating the polysaccharide obtained from the water-soluble extract of ginseng with an enzyme shows a significant improvement in H. pylori hemagglutination inhibitory activity than the polysaccharide before hydrolysis. To provide a method.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명은 인삼뿌리를 증류수 추출 한 후 에탄올 처리하여 다당체 분획물을 얻는 단계, 상기 분획물에 당분해효소로 가수분해시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 H. pylori 적혈구 응집 저해활성을 갖는 위장질환 예방 및 치료용 조성물의 제조방법을 제공한다.
The present invention for achieving the above object is a step of obtaining a polysaccharide fraction by ethanol treatment after extracting the ginseng root distilled water, hydrolysis of H. pylori hemagglutination, characterized in that it comprises the step of hydrolyzing the glycolysis enzyme in the fraction It provides a method for producing a composition for preventing and treating gastrointestinal diseases with activity.

본 발명은 인삼 다당체를 가수분해하여 우수한 헬리코박터 적혈구 응집반응을 저해하는 인삼 다당체 가수분해물을 제조하는 방법을 제공할 수 있다. 본 발명에 의한 인삼 다당체 가수분해물은 헬리코박터의 위 장관내 세포결합을 억제시켜 위장질환 예방 및 치료용 조성물이다.
The present invention can provide a method for producing a ginseng polysaccharide hydrolyzate that inhibits the Helicobacter erythrocyte aggregation reaction by hydrolyzing the ginseng polysaccharide. Ginseng polysaccharide hydrolyzate according to the present invention is a composition for preventing and treating gastrointestinal diseases by inhibiting gastric intestinal intestinal cell binding of Helicobacter.

도 1은 인삼으로부터 다당체 가수분해물을 얻는 방법을 설명하는 도면
도 2는 네 가지 당분해효소의 다당체 가수분해물의 H. pylori 적혈구 응집반응 저해활성의 현미경 사진
도 3은 α-amylase 효소가수분해물의 반응시간에 따른 H. pylori 적혈구 응집반응 저해활성의 현미경 사진
도 4는 α-amylase 효소가수분해물의 농도에 따른 H. pylori 적혈구 응집반응 저해활성의 현미경 사진
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The figure explaining the method of obtaining polysaccharide hydrolyzate from ginseng.
Figure 2 is a micrograph of H. pylori hemagglutination inhibitory activity of the polysaccharide hydrolysates of four glycolysis
3 is a micrograph of H. pylori hemagglutination inhibitory activity according to the reaction time of α-amylase enzyme hydrolyzate
4 is a micrograph of H. pylori hemagglutination inhibitory activity according to the concentration of α-amylase enzyme hydrolyzate

본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 인삼뿌리를 분쇄하여 열수추출한 후 에탄올 침전을 수행하여 얻어진 다당체에 있어서, 상기 에탄올 침전물을 효소로 가수분해하여 얻어진 물질을 특징으로 하는 H. pylori의 세포결합 저해활성이 있는 다당체 가수분해물을 제공한다.
In order to achieve the object of the present invention, the present invention is a polysaccharide obtained by pulverizing the ginseng root, hot water extraction and then ethanol precipitation, the cell of H. pylori characterized by a substance obtained by hydrolyzing the ethanol precipitate with an enzyme It provides a polysaccharide hydrolyzate having binding inhibitory activity.

본 발명의 헬리코박터의 세포결합 저해활성으로 인하여, H. pylori가 위 점막 상피세포에 결합하여 발생하는 각종 소화성 질환(즉, 위장병), 예컨대 위염, 위궤양, 위암 등의 예방 및 치료에 효과가 있을 것으로 이해된다.
Due to the cell binding inhibitory activity of the Helicobacter of the present invention, H. pylori is effective in the prevention and treatment of various digestive diseases (ie, gastrointestinal diseases) caused by binding to gastric mucosal epithelial cells, such as gastritis, gastric ulcer, and gastric cancer. I understand.

본 발명의 다당체 가수분해물에 있어서, 바람직하게는 당분해효소 α-amylase를 사용한 가수분해물인 것을 특징으로 한다. 상기 가수분해물에서 우수한 H. pylori의 세포결합 저해활성을 나타내었다.
In the polysaccharide hydrolyzate of the present invention, the hydrolyzate is preferably a hydrolyzate using glycolysis α-amylase. The hydrolyzate showed excellent cell binding inhibitory activity of H. pylori.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 (1) 인삼뿌리를 분쇄하고 60~100℃의 증류수로 추출한 다음 원심분리하여 얻은 상등액을 5~20 brix 까지 감압 농축하여 인삼 수용성 추출물을 얻는 단계; (2) 상기 (1)단계의 농축물에 에탄올을 1.5~7배 첨가하여 침지하고 원심분리하여 에탄올 침전물을 얻는 단계; (3) 상기(2)단계의 침전물을 증류수에 녹여 0.1~2%의 효소를 처리하여 가수분해물을 얻는 단계; (4) 상기 (3)단계에서 얻은 가수분해물을 동결건조하여 다당체 가수분해물을 얻는 단계를 포함하는 인삼 다당체 가수분해물의 제조방법을 제공한다.
In order to achieve the other object of the present invention, the present invention (1) pulverizing ginseng root and extracted with distilled water at 60 ~ 100 ℃ and centrifugation of the supernatant obtained by concentration under reduced pressure to 5 ~ 20 brix to obtain a ginseng water-soluble extract ; (2) adding ethanol 1.5-7 times to the concentrate of step (1) to immerse and centrifuge to obtain an ethanol precipitate; (3) dissolving the precipitate of step (2) in distilled water to obtain a hydrolyzate by treating 0.1-2% of the enzyme; (4) provides a method for producing a ginseng polysaccharide hydrolyzate comprising the step of lyophilizing the hydrolyzate obtained in step (3) to obtain a polysaccharide hydrolyzate.

본 발명의 다른 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 상기 발명에 따른 다당체 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 위장질환, 예컨대 위염, 위궤양 또는 위암의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a composition for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases, such as gastritis, gastric ulcer or gastric cancer, containing the polysaccharide hydrolyzate according to the invention as an active ingredient.

상기 위장 질환 예방 또는 치료용 조성물은 상기 다당체 가수분해물을 유효성분으로 단독으로 포함할 수 있고, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.
The composition for preventing or treating gastrointestinal diseases may include the polysaccharide hydrolyzate alone as an active ingredient, and additional ingredients, pharmaceutically acceptable or nutritionally acceptable carriers, depending on the formulation, method of use, and purpose of use. It may further comprise excipients, diluents or subcomponents.

보다 상세하게는 상기 위장 질환 예방 또는 치료용 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아키시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록 시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 다당체 가수분해물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.
More specifically, the composition for preventing or treating gastrointestinal diseases may further include nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, neutralizers, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners in addition to the active ingredient. , pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like. In addition, the carrier, excipient or diluent may be lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, ziitol, erythritol, maltitol, starch, acycia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline Group consisting of cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, dextrin, calcium carbonate, propylene glycol, liquid paraffin, physiological saline It may be one or more selected from, but is not limited to any conventional carriers, excipients or diluents can be used. The components may be added independently or in combination with the polysaccharide hydrolyzate which is the active ingredient.

또한, 상기 위장 질환 예방 또는 치료용 조성물은 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용 할 수 있다.
In addition, the composition for preventing or treating gastrointestinal diseases may further include conventional fillers, extenders, binders, disintegrants, surfactants, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers or preservatives, It can be used orally or parenterally.

구체적으로 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 다당체 가수분해물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
Specifically, the solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and the solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, calcium carbonate, It is prepared by mixing sucrose or lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, solvents, emulsions, and syrups.In addition to the commonly used simple diluents, water and liquid paraffin, various excipients may include, for example, wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives. have.

또한, 본 발명의 위장 질환 예방 또는 치료용 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 현탁제, 정제, 주사제, 주정제, 카타플라스마제(cataplasma), 캅셀제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.
In addition, the formulation of the composition for the prevention or treatment of gastrointestinal diseases of the present invention may be in a preferred form depending on the method of use, and is known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient, especially after administration to a mammal. Formulation may be adopted by formulating. Examples of specific formulations include granules, powders, syrups, solutions, suspensions, tablets, injections, spirits, cataplasma, capsules, soft or hard gelatin capsules, and the like.

더 나아가 본 발명의 위장 질환 예방 또는 치료용 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화될 수 있다.
Further, compositions for preventing or treating gastrointestinal diseases of the present invention can be prepared using methods known in the art or as disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (Recent), Mack Publishing Company, Easton PA. And preferably formulated.

또한, 본 발명은 상기 다당체 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 위장 질환 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
In addition, the present invention provides a food composition for preventing or improving gastrointestinal diseases, including the polysaccharide hydrolyzate as an active ingredient.

본 명세서에서 식품이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제 등을 모두 포함하는 의도이다.
In the present specification, the term "food" means a natural product or processed product containing one or more nutrients, and preferably means a state in which it can be directly eaten through some processing process. It is intended to include all dietary supplements, beverages, food additives and beverage additives.

본 발명의 식품은 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
Examples of the food of the present invention include various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and health functional foods. In addition, the food in the present invention includes special nutritional products (e.g., prepared oils, infants, baby food, etc.), processed meat products, fish products, tofu, jelly, noodles (e.g. ramen, noodles, etc.), health supplements, seasoned foods ( For example, soy sauce, miso, red pepper paste, mixed soy sauce), sauces, confectionery (e.g. snacks), dairy products (e.g. fermented milk, cheese, etc.), other processed foods, kimchi, pickles (various kimchi, pickles, etc.), beverages ( Examples include, but are not limited to, fruits, vegetable drinks, soy milk, fermented beverages, and the like, and natural seasonings (eg, ramen soup). The food, health functional food, beverages, food additives and beverage additives may be prepared by conventional manufacturing methods.

본 발명에서 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.
In the present invention, a health functional food is a biological defense rhythm control, disease prevention and the like having a food group or a food composition which has added value to the food by using physical, biochemical, biotechnological techniques, etc. It means a food that is designed and processed to fully express the gymnastics function on recovery.

상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
The dietary supplement may include food acceptable food additives, and may further include appropriate carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of dietary supplements.

본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 건강기능음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 다당체 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가성분으로서 함유할 수 있다.
In the present invention, the drink refers to a generic term for drinking to quench thirst or to enjoy the taste and is intended to include a functional beverage. The beverage is not particularly limited to other ingredients other than including the polysaccharide hydrolyzate as an active ingredient as an essential ingredient at the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks. have.

상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 식품 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 5 내지 12g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.
Examples of such natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and other disaccharides such as maltose, sucrose and the like and polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, and Sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The ratio of the natural carbohydrate may generally be about 1 to 20 g, preferably 5 to 12 g per 100 ml of the food composition of the present invention, in addition to the composition of the present invention for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks, vegetable drinks It may further contain pulp for.

상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 다당체 가수분해물 100 중량부 당 0 내지 20 중량부 범위에서 선택될 수 있다.
In addition to the above, the food composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese, chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and Salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages and the like. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical, but may be selected in the range of 0 to 20 parts by weight per 100 parts by weight of the polysaccharide hydrolyzate of the present invention.

본 발명에서 건강기능음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.
In the present invention, the health functional beverage is a biological defense rhythm control or disease prevention of a beverage group or beverage composition which has added value to the beverage by using physical, biochemical and biotechnological techniques to act and express the function of the beverage for a specific purpose. Means a beverage that is designed and processed to fully express the gymnastic function related to recovery and the like.

상기 건강기능음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 다당체 가수분해물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
The health functional beverage is not particularly limited to other ingredients except the polysaccharide hydrolyzate of the present invention as an essential ingredient in the indicated ratio, and may contain various flavors or natural carbohydrates as additional ingredients, such as ordinary drinks. .

상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 5 내지 12 g이다.
Examples of such natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose, fructose and other disaccharides such as maltose, sucrose and the like and polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, and xylitol Sugar alcohols such as sorbitol and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (for example, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of natural carbohydrates is generally about 1 to 20 g, preferably 5 to 12 g per 100 ml of the composition of the present invention.

또한, 위장 질환의 예방 또는 개선의 효과를 목적으로 하는 식품 조성물에 있어서, 상기 다당체 가수분해물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 포함할 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 포함할 수 있다.
In addition, in the food composition for the purpose of preventing or improving gastrointestinal diseases, the amount of the polysaccharide hydrolyzate may include 0.01 to 15% by weight of the total food weight, the beverage composition is based on 100 ml 0.02 to 5g, preferably 0.3 to 1g.

이하, 본 발명을 자세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 위장질환 주요 병원균인 H. pylori에 의하여 야기되는 적혈구 응집반응을 저해하는 인삼 다당체 가수분해물의 제조방법으로 구성되어 있다. 우선, 1) 다당체 분획을 위하여 인삼의 일반적인 섭취 및 추출방식에 따라 뜨거운 증류수로 추출한다. 이는 기존의 천연 생리활성 물질 추출을 주로 식품 및 약품에 적용하기 어려운 유기용매를 이용하여 추출하는 방식과는 대조적으로, 생리활성 물질 탐색에 좀 더 실제적인 접근이며 인체 친화적이라고 할 수 있다. 2) 가수분해된 다당체는 기존에 보고된 인삼, 녹차, 쑥의 산성다당체의 H. pylori 인체 위 상피세포 부착 저해활성이 다소 낮게 나타나지만 산성다당체를 얻기 위한 이온교환 및 젤 여과 크로마토그래피 등의 분리 과정이 필요하지 않다는 점에서 산업적 이용가치가 높다고 할 수 있다. 따라서 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 인삼뿌리를 증류수로 추출하는 단계, 활성형 다당체인 산성다당체를 분리하는 이온교환 및 젤 여과 크로마토그래피 등의 분리과정을 거치지 않고, 식품첨가효소를 이용하여 단순 가수분해과정을 거쳐 다당체 가수분해물을 얻는 단계, 그리고 H. pylori에 의한 적혈구 응집반응을 저해하는 활성측정 단계로 이루어져 있다.
The present invention consists of a method for preparing ginseng polysaccharide hydrolyzate that inhibits erythrocyte aggregation reaction caused by H. pylori, a major pathogen of gastrointestinal diseases. First, for the polysaccharide fraction, it is extracted with hot distilled water according to the general intake and extraction method of ginseng. This is in contrast to the conventional extraction method of natural bioactive substances using organic solvents, which are difficult to apply mainly to foods and drugs, and can be said to be a more practical approach and human-friendly for the search for bioactive substances. 2) The hydrolyzed polysaccharides showed slightly lower inhibitory activity of H. pylori gastric epithelial cell adhesion of acidic polysaccharides of ginseng, green tea, and mugwort than previously reported, but separation processes such as ion exchange and gel filtration chromatography to obtain acidic polysaccharides. In the sense that this is not necessary, the industrial use value is high. Therefore, the technical problem to be achieved by the present invention is to extract the ginseng root with distilled water, without the separation process such as ion exchange and gel filtration chromatography to separate the active polysaccharide acid polysaccharide, using a simple water It is composed of the step of obtaining polysaccharide hydrolyzate through the decomposition process and the activity measurement step of inhibiting hemagglutination by H. pylori.

본 발명에 사용된 효소 알파-아밀라제(α-amylase), 아밀로글루코시다제(amyloglucosidase), 알파-글루코시다제(α-glucosidase), 베타-글루코시다제(β-glucosidase), 셀룰라아제(cellulase), 펙티나제(pectinase) 등은 시그마(Sigma, USA)에서 구입하였다.
Enzyme alpha-amylase, amyloglucosidase, alpha-glucosidase, beta-glucosidase, cellulase used in the present invention , Pectinase and the like were purchased from Sigma, USA.

본 발명에 사용된 적혈구 응집반응에 필요한 O형 적혈구는 한림대학교 보건소에서 확보하였으며, 항응고제 처리를 한 다음 이용하였다. 더욱 상세하게는 채취한 혈액을 4℃에서 300 x g로 10분간 원심분리하여 혈장을 제거하고, 침전된 적혈구를 EDTA가 포함된 0.1M 인산완충용액과 현탁하여 가볍게 교반, 세척하고 상기와 같이 원심분리하여 상층액을 제거하였다. 상층액이 맑아질 때까지 상기의 방법을 반복하여 백혈구의 혼입을 방지하였다.
Type O erythrocytes required for erythrocyte agglutination reaction used in the present invention was obtained from Hallym University Health Center, and used after treatment with anticoagulant. More specifically, the collected blood was centrifuged at 300 xg for 10 minutes at 4 ° C to remove plasma, and the precipitated erythrocytes were suspended with 0.1M phosphate buffer solution containing EDTA, gently stirred, washed and centrifuged as described above. The supernatant was removed. The above procedure was repeated until the supernatant became clear to prevent incorporation of white blood cells.

본 발명에 이용된 헬리코박터 박테리아(ATCC 43504)는 10% fetal bovin serum과 항생제(cefsulodin, vancomycin, trimethoprim)가 포함되어 있는 brucella broth에서 37℃, 10% CO2의 공기조성에서 2회 계대 배양하여 사용하였다.
The Helicobacter bacterium (ATCC 43504) used in the present invention was used in two passages at 37 ° C. and 10% CO 2 in brucella broth containing 10% fetal bovin serum and antibiotics (cefsulodin, vancomycin, trimethoprim). It was.

본 발명에 사용된 인삼은 시중에서 구입한 것을 이용하였다.
Ginseng used in the present invention was used commercially available.

본 발명에 사용된 인삼 다당체 가수분해물의 적혈구 응집반응 저해 정도를 측정하였을 때 여러 가수분해물 중 α-amylase 가수분해물이 1.66mg/mL의 낮은 농도에서 저해활성을 보임으로써, 다당체 가수분해물을 유효성분으로 하여 위장질환 예방 및 치료용 제품 등을 제조할 때 본 발명의 다당체 가수분해물의 최종농도가 1.66mg/mL 이상의 양이 첨가되는 것이 바람직하다.
When the degree of inhibition of erythrocyte aggregation reaction of the ginseng polysaccharide hydrolyzate used in the present invention was measured, the α-amylase hydrolyzate showed a inhibitory activity at a low concentration of 1.66 mg / mL. When preparing a product for the prevention and treatment of gastrointestinal diseases, the final concentration of the polysaccharide hydrolyzate of the present invention is preferably added in an amount of 1.66mg / mL or more.

이하 실시 예에 의해 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명의 권리범위는 이들 실시 예에만 국한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples.

제조예 1 : 인삼뿌리로부터 다당체 분획물 제조Preparation Example 1 Preparation of Polysaccharide Fraction from Ginseng Root

인삼 다당체 제조방법은 이미 보고된 바와 같이, 인삼뿌리 1kg을 분쇄하여 환류장치가 장착된 용기에서 80~100℃의 증류수 10L로 추출한 후 여과하여 그 추출액을 감압농축하여 농축액이 8~10 brix가 되도록 조절한 다음 2배 부피의 에탄올을 가하여 얻은 침전물을 동결건조 하였다. 얻어진 인삼 다당체 추출물은 36.5 g이었다.
As already reported, the ginseng polysaccharide manufacturing method is pulverized 1kg ginseng root, extracted with 10 L of distilled water at 80-100 ° C. in a vessel equipped with a reflux device, filtered and concentrated under reduced pressure to concentrate the extract to 8-10 brix. After adjusting, the precipitate obtained by adding 2 times the volume of ethanol was lyophilized. The ginseng polysaccharide extract obtained was 36.5 g.

실시예 1 내지 6 : 효소에 따른 다당체 가수분해물 제조 Examples 1 to 6: Preparation of hydrolyzate of polysaccharide according to enzyme

상기 제조예 1의 다당체 침전물 1g에 100mL의 증류수를 가하고 α-amylase, amyloglucosidase, α-glucosidase, β-glucosidase, cellulase, pectinase를 0.2%(w/w)의 농도로 첨가 하여 50℃에서 6시간 동안 반응시킨 후 100℃의 끓는 물에서 5분간 방치하여 효소를 불활성화 시킨 다음 원심분리(4,000rpm, 4℃, 20분)하여 침전물을 제거하고 얻어진 상등액은 동결건조 하였다.
100 mL of distilled water was added to 1 g of the polysaccharide precipitate of Preparation Example 1, and α-amylase, amyloglucosidase, α-glucosidase, β-glucosidase, cellulase, and pectinase were added at a concentration of 0.2% (w / w) for 6 hours at 50 ° C. After the reaction, the mixture was left in boiling water at 100 ° C. for 5 minutes to inactivate the enzyme, followed by centrifugation (4,000 rpm, 4 ° C., 20 minutes) to remove the precipitate, and the obtained supernatant was lyophilized.

실시예 7 내지 10 : 효소 농도에 따른 가수분해물 제조Examples 7 to 10: Preparation of hydrolyzate according to enzyme concentration

상기 제조예 1의 다당체 침전물 1g에 100mL의 증류수를 가하고 α-amylase 효소를 0.02%~2%(w/w)의 다양한 농도로 첨가 하여 50℃에서 6시간 동안 반응시킨 후 100℃의 끓는 물에서 5분간 방치하여 효소를 불활성화 시킨 다음 원심분리(4,000rpm, 4℃, 20분)하여 침전물을 제거하고 얻어진 상등액은 동결건조 하였다.
100 mL of distilled water was added to 1 g of the polysaccharide precipitate of Preparation Example 1, and the α-amylase enzyme was added at various concentrations of 0.02% to 2% (w / w) and reacted at 50 ° C for 6 hours, followed by boiling water at 100 ° C. After standing for 5 minutes to inactivate the enzyme and centrifuged (4,000rpm, 4 ℃, 20 minutes) to remove the precipitate and the obtained supernatant was lyophilized.

실시예 11 내지 15 : 온도에 따른 가수분해물 제조Examples 11 to 15 Preparation of hydrolyzate according to temperature

상기 제조예 1의 다당체 침전물 1g에 100mL의 증류수를 가하고 α-amylase를 0.2%(w/w)의 농도로 첨가 하여 30℃~70℃까지 다양한 온도 조건에서 6시간 동안 반응시킨 후 100℃의 끓는 물에서 5분간 방치하여 효소를 불활성화 시킨 다음 원심분리(4,000rpm, 4℃, 20분)하여 침전물을 제거하고 얻어진 상등액은 동결건조 하였다.
100 mL of distilled water was added to 1 g of the polysaccharide precipitate of Preparation Example 1, and α-amylase was added at a concentration of 0.2% (w / w) to react for 6 hours at various temperature conditions from 30 ° C. to 70 ° C., followed by boiling at 100 ° C. After standing in water for 5 minutes to inactivate the enzyme and centrifuged (4,000rpm, 4 ℃, 20 minutes) to remove the precipitate and the supernatant obtained was lyophilized.

실시예 16 내지 20 : 시간에 따른 가수분해물 제조Examples 16-20: Preparation of Hydrolysates Over Time

상기 제조예 1의 다당체 침전물 1g에 100mL의 증류수를 가하고 α-amylase를 0.2%(w/w)의 농도로 첨가 하여 50℃에서 1, 3, 6, 9 및 24시간 동안 반응시킨 후 100℃의 끓는 물에서 5분간 방치하여 효소를 불활성화 시킨 다음 원심분리(4,000rpm, 4℃, 20분)하여 침전물을 제거하고 얻어진 상등액은 동결건조 하였다.
100 mL of distilled water was added to 1 g of the polysaccharide precipitate of Preparation Example 1, and α-amylase was added at a concentration of 0.2% (w / w) and reacted at 50 ° C. for 1, 3, 6, 9 and 24 hours, followed by 100 ° C. Incubated for 5 minutes in boiling water to inactivate the enzyme and centrifuged (4,000rpm, 4 ℃, 20 minutes) to remove the precipitate and the obtained supernatant was lyophilized.

실험예 1 : H. pylori에 의한 적혈구 응집반응 저해Experimental Example 1 Inhibition of Hemagglutination by H. pylori

배양된 H. pylori를 0.1M 인산 완충용액(pH 7.3)으로 묽게 만든 후 동량의 적혈구 용액과 혼합하여 실온에서 1~2시간 약하게 교반하여 반응시켜서 이를 양성 적혈구 응집반응(PC)으로 하였고, H. pylori 균을 첨가하지 않은 적혈구 희석액을 음성 적혈구 응집반응(NC)으로 하였다. 다당체 가수분해물의 응집반응에 대한 저해활성을 위해서, H. pylori 현탁액과 다당체 가수분해물을 혼합하여, 실온에서 30분 반응시킨 다음, 다시 적혈구 희석액을 혼합하여 반응시킨 후 응집반응을 현미경을 이용하여 측정하였다. The cultured H. pylori was diluted with 0.1 M phosphate buffer (pH 7.3), mixed with an equal amount of red blood cell solution, and stirred for 1 to 2 hours at room temperature to react with positive red blood cell aggregation (PC). Erythrocyte dilution without pylori was used as a negative hemagglutination (NC) reaction. In order to inhibit the agglutination reaction of the polysaccharide hydrolyzate, the H. pylori suspension and the polysaccharide hydrolyzate were mixed, reacted at room temperature for 30 minutes, and then reacted by mixing the red blood cell diluent again. It was.

가수분해 조건별 H. pylori에 의한 적혈구 응집 저해 활성Inhibitory Activity of Hemagglutination by H. pylori under Different Hydrolysis Conditions 구분division 최소저해활성 농도(mg/mL)Minimum inhibitory activity concentration (mg / mL) 제조예 1Production Example 1 인삼 다당체Ginseng Polysaccharide 16.616.6 실시예 1Example 1 α-amylase 처리군α-amylase treatment group 1.661.66 실시예 2Example 2 amyloglucosidase 처리군amyloglucosidase treatment group 3.33에서 저해활성 없음No inhibitory activity at 3.33 실시예 3Example 3 α-glucosidase 처리군α-glucosidase treatment group 3.33에서 저해활성 없음No inhibitory activity at 3.33 실시예 4Example 4 β-glucosidase 처리군β-glucosidase treatment group 3.33에서 저해활성 없음No inhibitory activity at 3.33 실시예 5Example 5 cellulase 처리군cellulase treatment group 3.33에서 저해활성 없음No inhibitory activity at 3.33 실시예 6Example 6 pectimase 처리군pectimase treatment group 3.333.33 실시예 7Example 7 0.02% 처리군0.02% treatment group 3.333.33 실시예 8Example 8 0.2% 처리군0.2% treatment group 1.661.66 실시예 9Example 9 1%처리군1% treatment group 2.492.49 실시예 10Example 10 2% 처리군2% treatment group 3.333.33 실시예 11Example 11 30℃ 반응30 ℃ reaction 3.33에서 저해활성 없음No inhibitory activity at 3.33 실시예 12Example 12 40℃ 반응40 ℃ reaction 2.492.49 실시예 13Example 13 50℃ 반응50 ℃ reaction 1.661.66 실시예 14Example 14 60℃ 반응60 ℃ reaction 3.333.33 실시예 15Example 15 70℃ 반응70 ℃ reaction 3.33에서 저해활성 없음No inhibitory activity at 3.33 실시예 16Example 16 1시간 반응1 hour response 2.492.49 실시예 17Example 17 3시간 반응3 hours response 1.661.66 실시예 18Example 18 6시간 반응6 hours reaction 1.661.66 실시예 19Example 19 9시간 반응9 hours response 3.333.33 실시예 20Example 20 24시간 반응24 hour reaction 3.333.33

상기 표 1에서 보는 바와 같이 조건별 인삼 다당체 가수분해물의 H. pylori에 의한 적혈구 응집 저해 활성 측정 결과, 가수분해하지 않은 인삼 다당체 추출물(제조예 1)은 3.3mg/mL의 고농도에서도 저해 활성이 나타나지 않았으나, 여섯가지 당분해 효소(α-amylase, amyloglucosidase, α-glucosidase, β-glucosidase, cellulase, pectinase)를 처리한 가수분해물 중에서 α-amylase 효소 처리군에서 상대적으로 높은 저해 활성이 나타났다(도2). 그래서 농도별로 α-amylase 효소를 처리한 가수분해물은 0.2%, 1%의 처리군에서 상대적으로 우수한 저해활성이 나타났으며, 반응온도는 50℃, 시간에 따른 저해 활성은 효소 처리 후 3시간, 6시간에서 상대적으로 우수한 저해 활성이 나타남을 확인 할 수 있었다(도3). As shown in Table 1, as a result of measuring the hemagglutination inhibition activity of H. pylori by the ginseng polysaccharide hydrolyzate according to the conditions, the ginseng polysaccharide extract (Preparation Example 1) did not show the inhibitory activity even at a high concentration of 3.3 mg / mL. However, among the hydrolyzates treated with six glycolytic enzymes (α-amylase, amyloglucosidase, α-glucosidase, β-glucosidase, cellulase, pectinase), the α-amylase enzyme treatment group showed relatively high inhibitory activity (Fig. 2). . Therefore, the hydrolyzate treated with α-amylase enzyme by concentration showed relatively good inhibitory activity in the treated group of 0.2% and 1%, the reaction temperature was 50 ℃, and the inhibitory activity with time was 3 hours after enzyme treatment. It was confirmed that a relatively good inhibitory activity appeared at 6 hours (Fig. 3).

상기 실시예를 통하여 인삼 다당체 가수분해 조건을 0.2~1% α-amylase 효소를 처리하고, 온도는 40~50℃, 반응시간은 3~6시간 이내가 최적조건으로 확인되었다. 이 조건의 가수분해물은 농도 의존적으로 저해활성이 나타났으며 양성 적혈구 응집반응과 비교해서 1.66mg/mL의 낮은 농도에서도 저해활성이 있음을 확인하였다(도4).
Ginseng polysaccharide hydrolysis conditions through the above Example was treated with 0.2 ~ 1% α-amylase enzyme, the temperature is 40 ~ 50 ℃, the reaction time was confirmed as the optimum conditions within 3 to 6 hours. The hydrolyzate under these conditions showed inhibitory activity in a concentration-dependent manner, and the inhibitory activity was found even at a low concentration of 1.66 mg / mL compared to the positive erythrocyte aggregation reaction (FIG. 4).

Claims (5)

인삼 다당체에 당분해효소를 처리하는 단계를 포함하는 H. pylori에 의한 적혈구 응집반응 저해활성이 강화된 가수분해물을 함유하는 것을 특징으로 하는 위장질환 예방 및 치료용 조성물 A composition for preventing and treating gastrointestinal diseases, wherein the ginseng polysaccharide contains a hydrolyzate having enhanced inhibitory activity against erythrocyte aggregation by H. pylori, which comprises the step of treating glycolytic enzymes. 제 1항에 있어서, 가수분해 효소는 알파-아밀라제, 아밀로글루코시다제, 알파-글루코시다제, 베타-글루코시다제, 셀룰라아제, 펙티나제 중에서 선택된 하나 이상임을 특징으로 하는 H. pylori에 의한 적혈구 응집반응 저해활성이 강화된 가수분해물의 제조방법The method according to claim 1, wherein the hydrolase is at least one selected from alpha-amylase, amyloglucosidase, alpha-glucosidase, beta-glucosidase, cellulase, and pectinase. Method for producing hydrolyzate with enhanced hemagglutination inhibitory activity 제 1항에 있어서, 다당체 가수분해에 사용되는 효소는 알파-아밀라제인 것을 특징으로 하는 H. pylori에 의한 적혈구 응집반응 저해활성이 강화된 가수분해물의 제조방법The method of claim 1, wherein the enzyme used for hydrolysis of the polysaccharide is alpha-amylase. 제 1항에 있어서, 다당체 가수분해에 사용되는 효소 알파-아밀라제는 0.01~2% 첨가하는 것을 특징으로 하는 H. pylori에 의한 적혈구 응집반응 저해활성이 강화된 가수분해물의 제조방법
The method of claim 1, wherein the enzyme alpha-amylase used in the hydrolysis of polysaccharide is added to 0.01 to 2%.
제 1항에 있어서, 알파-아밀라제 효소 처리한 다당체는 30~60℃에서 1~24시간 반응하는 것을 특징으로 하는 H. pylori에 의한 적혈구 응집반응 저해활성이 강화된 가수분해물의 제조방법
The method of claim 1, wherein the alpha-amylase enzyme-treated polysaccharide reacts for 1 to 24 hours at 30 to 60 ° C.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN107205461A (en) * 2014-07-29 2017-09-26 韩国食品研究院 The ginseng source polysaccharide component handled through ferment and preparation for improving immunity function

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