KR20130093983A - Screening method of candidate material for anti oxidant - Google Patents

Screening method of candidate material for anti oxidant Download PDF

Info

Publication number
KR20130093983A
KR20130093983A KR1020120015273A KR20120015273A KR20130093983A KR 20130093983 A KR20130093983 A KR 20130093983A KR 1020120015273 A KR1020120015273 A KR 1020120015273A KR 20120015273 A KR20120015273 A KR 20120015273A KR 20130093983 A KR20130093983 A KR 20130093983A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
daf
nucleus
antioxidant
treated
degree
Prior art date
Application number
KR1020120015273A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
김주원
조은경
이태룡
Original Assignee
(주)아모레퍼시픽
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)아모레퍼시픽 filed Critical (주)아모레퍼시픽
Priority to KR1020120015273A priority Critical patent/KR20130093983A/en
Publication of KR20130093983A publication Critical patent/KR20130093983A/en

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/43504—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates
    • G01N2333/43526—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms
    • G01N2333/4353—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms from nematodes
    • G01N2333/43534—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from invertebrates from worms from nematodes from Caenorhabditis
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

PURPOSE: An antioxidant screening method is provided to include a step of evaluating an extent that DAF-16 moves to a nucleus in an animal treated with candidate material, thereby easily and simply screening material having an excellent antioxidant effect in a short time. CONSTITUTION: An antioxidant screening method comprises: a step of treating an animal with candidate material; and a step of evaluating an extent that DAF-16 moves to a nucleus in the animal treated with the candidate material. The animal includes caenorhabditis elegans. The animal is caenorhabditis elegans which includes DAF-16 labeled by fluorescence.

Description

항산화 물질 스크리닝 방법{Screening method of candidate material for anti oxidant}Screening method of candidate material for anti oxidant

본 발명은 DAF-16의 핵으로의 이동 정도에 대한 평가를 기초로 하는 항산화 물질 스크리닝 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to an antioxidant screening method based on an assessment of the degree of migration of DAF-16 to the nucleus.

노화의 주 원인 중 하나는 산화 스트레스에 의한 생체 분자의 손상이라고 알려져 있으므로, 항산화 물질로 활성 산소를 감소시키는 경우 생명체의 수명을 효과적으로 연장시키고 노화를 방지 및 예방할 수 있다.One of the main causes of aging is known to damage biomolecules by oxidative stress, so reducing antioxidants with antioxidants can effectively prolong life and prevent and prevent aging.

DAF-16은 인슐린 신호 전달 경로(IIS, Insulin/IGF-like signaling)에 위치하는 전사 인자로서, Mn-SOD, 카탈라아제(Catalase)와 같은 항산화 효소의 발현에 작용하는 단백질이다. IIS에서 DAF-16의 상위에 위치하는 DAF-2, AGE-1과 같은 인자들을 억제하면 DAF-16을 활성화시키고 나아가 생명체의 수명을 연장시킬 수 있다고 알려져 있다. 다시 말해, 생체 내 DAF-16를 활성화시키면 노화를 억제할 수 있을 것이다.
DAF-16 is a transcription factor located in the insulin signaling pathway (IIS, Insulin / IGF-like signaling) and is a protein that acts on the expression of antioxidant enzymes such as Mn-SOD and catalase. Inhibition of factors such as DAF-2 and AGE-1, which are located above DAF-16 in IIS, is known to activate DAF-16 and extend lifespan. In other words, activating DAF-16 in vivo would inhibit aging.

미국출원공개 제2009/0092551호(2009.4.9. 공개) 명세서United States Application Publication No. 2009/0092551, published September 9, 2009

본 발명은 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 포함함으로써, 짧은 시간 안에 쉽고 간편하게 항산화 물질을 스크리닝하는 방법을 제공하고자 한다.
The present invention includes a step of evaluating the degree of migration of DAF-16 into the nucleus in an animal treated with a candidate substance, to provide a method for screening an antioxidant substance easily and simply in a short time.

본 발명의 일측면은 후보 물질을 동물에 처리하는 단계; 및 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법을 제공한다.One aspect of the invention is a step of treating a candidate substance in an animal; And evaluating the degree of DAF-16 migration to the nucleus in the animal treated with the candidate substance.

본 발명의 다른 일측면은 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 장치를 포함하는 항산화 물질 스크리닝 키트를 제공한다.
Another aspect of the invention provides an antioxidant screening kit comprising an apparatus for assessing the extent to which DAF-16 migrates to the nucleus in an animal treated with a candidate substance.

본 발명의 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 방법은 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 포함하여, 짧은 시간 안에 쉽고 간편하게 우수한 항산화 효과가 있는 물질을 스크리닝할 수 있다.
Antioxidant screening method according to an aspect of the present invention comprises the step of evaluating the degree of DAF-16 migration to the nucleus in the animal treated with the candidate material, to screen a substance having a good antioxidant effect easily and simply in a short time Can be.

도 1에서 A는 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt를 처리한 경우, B는 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox를 처리한 경우, 그리고 C는 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 처리한 경우, 예쁜꼬마선충 와일드 타입 N2 체내의 활성 산소 정도를 보여주는 사진이다. 상기 A, B 및 C에서 위 패널은 DCFDA, 아래 패널은 MitoSOX를 사용한 경우를 각각 나타낸다.
도 2에서 A와 B는 각각 DCFDA와 MitoSOX를 사용하고, 왼쪽에서부터 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt를 처리한 경우, 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox를 처리한 경우, 그리고 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 처리한 경우에 예쁜꼬마선충 와일드 타입 N2 체내의 활성 산소 정도를 보여주는 그래프이다.
도 3에서 A는 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt를 처리한 경우, B는 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox를 처리한 경우, 그리고 C는 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 처리한 경우 DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종 체내의 활성 산소 정도를 보여주는 사진이다. 상기 A, B 및 C에서 위 패널은 DCFDA, 아래 패널은 MitoSOX를 사용한 경우를 각각 나타낸다.
도 4에서 A와 B는 각각 DCFDA와 MitoSOX를 사용하고, 왼쪽에서부터 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt를 처리한 경우, 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox를 처리한 경우, 그리고 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 처리한 경우에, DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종 체내의 활성 산소 정도를 보여주는 그래프이다.
도 5에서 A, B 및 C는 예쁜꼬마선충 와일드 타입 N2에 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt, 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox, 그리고 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 각각 처리한 결과이며, D, E 및 F는 DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종에 상기와 동일한 농도의 TAT-PtBP-Pt, Trolox 및 PBN을 각각 처리한 결과이다.
도 6에서 A, B 및 C는 DAF-16::gfp 예쁜꼬마선충에 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt, 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox, 그리고 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 각각 처리한 경우, DAF-16의 핵 이동 정도를 보여주는 사진이다.
도 7에서 A, B 및 C는 DAF-16::gfp 예쁜꼬마선충에 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt, 0, 100, 300 및 500 μM의 Trolox, 그리고 0, 10, 100 및 500 μM의 PBN을 각각 처리한 경우, DAF-16의 핵, 세포질 및 매개물(intermediate)에서의 형광 강도를 나타낸 그래프이다.
도 8에서 A, B 및 C는 0, 0.5, 5 및 50 μM의 TAT-PtBP-Pt, 0, 1, 3 및 5 μM의 Trolox 및 0, 0.1, 1 및 10 μM의 PBN을 각각 처리한 경우, FOXO3a의 핵 및 시토졸(세포질)에서의 정도를 나타낸 웨스턴 블랏 결과이다.In Fig. 1, A is treated with 0, 0.5, 5 and 50 μM of TAT-PtBP-Pt, B is treated with 0, 100, 300 and 500 μM of Trolox, and C is 0, 10, 100 and When 500 μM of PBN is treated, the photograph shows the degree of free radicals in the pretty nematode wild type N2. In A, B, and C, the upper panel is DCFDA, and the lower panel is a case using MitoSOX, respectively.
In FIG. 2, A and B use DCFDA and MitoSOX, respectively, and when treated with 0, 0.5, 5, and 50 μM of TAT-PtBP-Pt from the left, when treated with 0, 100, 300, and 500 μM of Trolox. , And a graph showing the degree of free radicals in the wild nematode wild type N2 when treated with 0, 10, 100 and 500 μM PBN.
In FIG. 3, A is treated with 0, 0.5, 5 and 50 μM of TAT-PtBP-Pt, B is treated with 0, 100, 300 and 500 μM of Trolox, and C is 0, 10, 100 and In the case of 500 μM PBN treatment, the photo shows the degree of free radicals in the mutant C. nematode strain that inactivated DAF-16. In A, B, and C, the upper panel is DCFDA, and the lower panel is a case using MitoSOX, respectively.
In FIG. 4, A and B use DCFDA and MitoSOX, respectively, and when treated with 0, 0.5, 5, and 50 μM of TAT-PtBP-Pt from the left, when treated with 0, 100, 300, and 500 μM of Trolox. And, when treated with 0, 10, 100 and 500 μM PBN, it is a graph showing the degree of free radicals in the pretty little nematode strain inactivated DAF-16.
5, A, B and C are 0, 0.5, 5 and 50 μM TAT-PtBP-Pt, 0, 100, 300 and 500 μM Trolox, and 0, 10, 100 and 500 The results of treatment of PBN of μM, respectively, D, E and F is the result of treatment of the same concentration of TAT-PtBP-Pt, Trolox and PBN to the pretty nymph nematode strain inactivated DAF-16.
In Figure 6 A, B and C are DAF-16 :: gfp DAF-16 treated with 0, 0.5, 5 and 50 μM of TAT-PtBP-Pt, 0, 100, 300 and 500 μM of Trolox and 0, 10, 100 and 500 μM of PBN The picture shows the degree of nuclear transfer.
In Figure 7, A, B and C are DAF-16 :: gfp DAF-16 treated with 0, 0.5, 5 and 50 μM of TAT-PtBP-Pt, 0, 100, 300 and 500 μM of Trolox and 0, 10, 100 and 500 μM of PBN Is a graph showing the fluorescence intensity in the nucleus, cytoplasm and mediators.
In Figure 8, A, B and C are treated with 0, 0.5, 5 and 50 μM of TAT-PtBP-Pt, 0, 1, 3 and 5 μM of Trolox and 0, 0.1, 1 and 10 μM of PBN, respectively. , Western blot results showing the degree of FOXO3a in the nucleus and cytosol (cytoplasm).

본 발명자들은 세포질에 존재하는 DAF-16이 핵으로 이동하여 항산화 효소들의 발현을 개시하고, DAF-16의 활성화는 DAF-16이 핵으로 이동한 정도에 비례하므로, 어떤 임의의 물질을 처리한 후 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가함으로써 그 물질이 항산화 효과가 있는 물질인지 여부를 판단할 수 있음을 밝혀, 본 발명을 완성하였다.
The inventors have discovered that DAF-16 present in the cytoplasm migrates to the nucleus to initiate the expression of antioxidant enzymes, and activation of DAF-16 is proportional to the extent to which DAF-16 migrates to the nucleus, thus, after treating any arbitrary substance. By evaluating the degree to which DAF-16 migrated to the nucleus, it was found that the substance was able to determine whether the substance had an antioxidant effect, thereby completing the present invention.

본 발명의 일측면은 후보 물질을 동물에 처리하는 단계; 및 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법을 제공한다.One aspect of the invention is a step of treating a candidate substance in an animal; And evaluating the degree of DAF-16 migration to the nucleus in the animal treated with the candidate substance.

본 발명의 다른 일측면은 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 장치를 포함하는 항산화 물질 스크리닝 키트를 제공한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 상기 항산화 물질 스크리닝 방법은 상기 항산화 물질 스크리닝 키트를 이용하여 행해질 수 있다.Another aspect of the invention provides an antioxidant screening kit comprising an apparatus for assessing the extent to which DAF-16 migrates to the nucleus in an animal treated with a candidate substance. In another aspect of the invention, the antioxidant screening method may be performed using the antioxidant screening kit.

본 발명의 일측면에서, 동물은 선충, 구체적으로 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans), 더 구체적으로 형광 표지된 DAF-16을 포함하는 예쁜꼬마선충을 포함한다.In one aspect of the invention, the animal is a nematode, specifically a pretty nematode ( Caenorhabditis) elegans ), and more specifically, the nematode nematodes, including fluorescently labeled DAF-16.

예쁜꼬마선충은 평균 14 내지 20일 정도의 짧은 수명, 약 1 내지 1.5 mm의 성체 크기, 약 1000 개 미만의 적은 세포 수, 투명한 몸체 및 인간과 중복되는 유전자를 상당히 가진다는 특성을 지녀, 최근 인간 노화 연구의 동물 모델로 널리 이용되고 있다. 본 발명의 일측면에서는 예쁜꼬마선충, 구체적으로 형광 표지된 DAF-16을 포함하는 예쁜꼬마선충, 더 구체적으로 DAF-16을 GFP(녹색 형광 단백질, Green Fluorescent Protein)로 가시화시킨 예쁜꼬마선충을 이용함으로써, DAF-16의 핵으로의 이동을 용이하게 판정하고, 그 이동 정도에 따라 예쁜꼬마선충에 처리한 후보 물질이 항산화 물질인지 여부를 쉽고 간편하며 효율적으로 판단할 수 있다.Pretty nematodes are characterized by a short life expectancy of 14 to 20 days, an adult size of about 1 to 1.5 mm, a small cell count of less than about 1000, a transparent body and significant overlap with genes in humans. It is widely used as an animal model for aging research. In one aspect of the present invention, a pretty little nematode, a pretty little nematode including a fluorescently labeled DAF-16, more specifically, a pretty little nematode that visualizes DAF-16 with GFP (Green Fluorescent Protein). As a result, the movement of the DAF-16 to the nucleus can be easily determined, and it can be determined easily and simply and efficiently whether the candidate substance treated by the pretty little nematode is an antioxidant substance depending on the degree of movement thereof.

종전에도 선충의 DAF-16을 이용하여 항노화 물질을 스크리닝하는 기술이 알려져 있긴 하였으나, 그러한 종래 기술들은 DAF-16의 유전자 발현 정도 또는 단백질 발현 정도를 측정함으로써 항노화 물질을 스크리닝하였다. 이와 같이 유전자 발현 정도 또는 단백질 발현 정도를 측정하는 경우에는 시간과 비용이 많이 소요된다는 단점이 있다. 이에 반해, 본 발명에서는 선충에서 DAF-16의 핵으로의 이동만을 관찰하여 처리한 후보 물질의 항산화 효과, 나아가 항노화 효과 유무를 판단할 수 있으므로, 종래 기술에 비해 경제성 및 효율성 면에서 매우 우수하다.Previously, techniques for screening anti-aging substances using nematode DAF-16 have been known, but such conventional techniques have screened anti-aging substances by measuring gene expression levels or protein expression levels of DAF-16. When measuring the degree of gene expression or protein expression as described above, there is a disadvantage that it takes a lot of time and money. On the contrary, in the present invention, it is possible to determine the antioxidant effect and further the anti-aging effect of the treated candidate material by observing only the migration of the nematode to the nucleus of the DAF-16. .

본 발명의 일측면에서, DAF-16의 핵으로의 이동은 육안 또는 현미경을 이용하여 관찰할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, "핵으로의 이동 정도"는 핵에서의 DAF-16 농도, 구체적으로 핵에서의 DAF-16 형광 강도로 판단할 수 있다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 핵으로의 이동 정도는 핵에서의 농도 변화 및 세포질에서의 농도 변화를 기초로 판단할 수 있다.In one aspect of the invention, movement of the DAF-16 to the nucleus can be observed with the naked eye or using a microscope. In another aspect of the invention, "degree of migration to the nucleus" can be determined by the concentration of DAF-16 in the nucleus, specifically DAF-16 fluorescence intensity in the nucleus. In another aspect of the invention, the degree of migration to the nucleus can be determined based on the change in concentration in the nucleus and the change in concentration in the cytoplasm.

본 발명의 일측면에서, 동물은 인간을 포함하지 않을 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 동물은 동물의 세포를 의미할 수 있다.In one aspect of the invention, the animal may not comprise a human. In another aspect of the invention, an animal may mean a cell of an animal.

본 발명의 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 방법은 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계 이후, DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도의 증가 여부는 후보 물질을 처리하지 않은 경우 또는 종래 항산화 물질로 알려진 물질을 처리한 경우와 대비하여 판단할 수 있다.Antioxidant screening method according to an aspect of the present invention after the step of evaluating the degree of DAF-16 moved to the nucleus, further comprising the step of determining a substance that increases the degree of DAF-16 moved to the nucleus as an antioxidant material can do. The increase in the degree to which the DAF-16 moves to the nucleus may be determined as compared with the case where the candidate substance is not treated or when the substance known as an antioxidant is treated.

본 발명의 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 방법은 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계 이후, 처리한 후보 물질의 농도 및 DAF-16의 핵으로의 이동 정도를 기초로 후보 물질이 항산화 효과를 나타내는 유효 농도 범위 및 최적 농도 범위를 판단하는 단계를 더 포함할 수 있다. 구체적으로, 특정 농도 범위의 후보 물질을 처리하였을 때 DAF-16의 핵으로의 이동 정도가 다른 농도 범위일 때보다 높은 경우, 그 특정 농도 범위를 우수한 항산화 효과를 가지는 농도 범위로 판단할 수 있다.In the antioxidant screening method according to an aspect of the present invention, after the step of evaluating the degree of DAF-16 migration to the nucleus, the candidate substance is antioxidant based on the concentration of the treated candidate material and the degree of migration of the DAF-16 to the nucleus The method may further include determining an effective concentration range and an optimal concentration range that produce the effect. Specifically, when the degree of migration of the DAF-16 to the nucleus is higher than that of the other concentration ranges when the candidate substance in the specific concentration range is treated, the specific concentration range may be determined as a concentration range having excellent antioxidant effect.

본 발명의 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 방법은 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계에 부가하여, 후보 물질을 처리한 동물에서 FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 더 포함할 수 있다. FOXO3a 역시 생체 내 산화 및 노화에 관여하는 유전자로서, 핵으로 이동한 정도로 그 활성화 정도를 판단할 수 있으므로, 항산화 물질 스크리닝에 이용될 수 있다.Antioxidant screening method according to an aspect of the present invention, in addition to evaluating the degree of migration of DAF-16 to the nucleus, further comprising the step of evaluating the degree of FOXO3a migration to the nucleus in the animal treated with the candidate substance can do. FOXO3a is also a gene involved in oxidation and aging in vivo, and can be used for antioxidant screening because it can determine the degree of activation to the extent of migration to the nucleus.

본 발명의 다른 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 방법은 FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계 이후, FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단하는 단계를 더 포함할 수 있다. 상기에서 FOXO3a가 핵으로 이동한 정도의 증가 여부는 후보 물질을 처리하지 않은 경우 또는 종래 항산화 물질로 알려진 물질을 처리한 경우와 대비하여 판단할 수 있다.According to another aspect of the present invention, an antioxidant screening method may further include determining a substance that increases the degree of FOXO3a migration to the nucleus as an antioxidant after evaluating the degree to which the FOXO3a migrates to the nucleus. . The increase in the degree to which the FOXO3a is moved to the nucleus may be determined in comparison with the case where the candidate substance is not treated or when the substance known as an antioxidant is treated.

본 발명의 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 방법은 FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계 이후, 처리한 후보 물질의 농도 및 FOXO3a의 핵으로의 이동 정도를 기초로 후보 물질이 항산화 효과를 나타내는 유효 농도 범위 및 최적 농도 범위를 판단하는 단계를 더 포함할 수 있다. 구체적으로, 특정 농도 범위의 후보 물질을 처리하였을 때 FOXO3a의 핵으로의 이동 정도가 다른 농도 범위일 때보다 높은 경우, 그 특정 농도 범위를 우수한 항산화 효과를 가지는 농도 범위로 판단할 수 있다.Antioxidant screening method according to an aspect of the present invention is effective after the step of evaluating the degree of migration of FOXO3a to the nucleus, the candidate substance exhibits an antioxidant effect based on the concentration of the treated candidate substance and the degree of migration of FOXO3a to the nucleus The method may further include determining a concentration range and an optimal concentration range. Specifically, when the degree of migration of the FOXO3a to the nucleus is higher than that of other concentration ranges when the candidate substance in the specific concentration range is treated, the specific concentration range may be determined as a concentration range having excellent antioxidant effect.

본 발명의 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 키트는 후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단한다는 내용의 지시서를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 항산화 물질 스크리닝 키트는 후보 물질을 처리한 동물에서 FOXO3a가 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단한다는 내용의 지시서를 더 포함할 수 있다.Antioxidant screening kit according to an aspect of the present invention may further include instructions indicating that the substance that increases the degree of migration of DAF-16 to the nucleus in the animal treated with the candidate substance as an antioxidant. The antioxidant screening kit according to another aspect of the present invention may further include an instruction indicating that the substance that increases the degree of migration of FOXO3a to the nucleus in the animal treated with the candidate substance is determined to be an antioxidant.

본 발명의 일측면에서, 후보 물질은 항산화 물질인지 여부를 판단하는 대상 물질을 의미한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 후보 물질은 식물을 예로 들 수 있는 천연물 및 그 추출물 또는 화학 합성물을 모두 포함할 수 있다.In one aspect of the invention, the candidate substance refers to a target substance for determining whether it is an antioxidant. In another aspect of the present invention, the candidate material may include both natural products including plants and extracts or chemical compounds thereof.

본 발명의 일측면에서, 활성 산소가 감소하는 경우 생명체의 수명을 효과적으로 연장시키고 노화를 방지 및 예방할 수 있으므로, 항산화 물질은 항산화에 의한 노화 방지 또는 예방 물질을 포함한다.In one aspect of the present invention, antioxidants include anti-aging or prophylactic substances due to antioxidant, since reducing active oxygen can effectively prolong life and prevent and prevent aging.

본 발명의 일측면은 상기 스크리닝 방법으로 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 항산화용 화장품, 약학 또는 식품 조성물을 제공한다. 본 발명의 다른 일측면은 상기 스크리닝 방법으로 스크리닝된 물질을 유효 성분으로 포함하는 활성 산소 제거, 피부 미백, 주름 개선 및 노화 방지용 화장품, 약학 또는 식품 조성물을 제공한다.
One aspect of the present invention provides an antioxidant cosmetic, pharmaceutical or food composition comprising the substance screened by the screening method as an active ingredient. Another aspect of the present invention provides a cosmetic, pharmaceutical or food composition for active oxygen removal, skin whitening, wrinkle improvement and anti-aging comprising a substance screened by the screening method as an active ingredient.

이하, 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the configuration and effects of the present invention will be described in more detail with reference to experimental examples. However, the following experimental examples are provided only for the purpose of illustration in order to help the understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereto.

[실험예 1] 항산화 물질에 의한 활성 산소 감소 효과 평가Experimental Example 1 Evaluation of Reactive Oxygen Reduction Effect by Antioxidants

예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)에 항산화 물질을 처리하는 경우 활성 산소가 감소하는지 여부를 평가하기 위해, 먼저 예쁜꼬마선충 와일드 타입 N2를 항산화 물질을 포함한 M9 버퍼(22 mM Na2HPO4, 22 mM KH2PO4, 85 mM NaCl, 1 mM MgSO4 및 0.02% 젤라틴)로 10일 동안 처리하였다. 항산화 물질로서 우수한 항산화 물질로 알려진 TAT-PtBP-Pt(0, 0.5, 5 및 50 μM), Trolox(6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid)(0, 100, 300 및 500 μM) 및 PBN(0, 10, 100 및 500 μM)을 사용하였다. 이후, 10 μM CM-H2DCFDA 및 5 μM MitoSOX 레드(Sigma-Aldrich)를 포함한 2 ml의 행크 용액(Hank’s solution)(0.44 mM KH2PO4, 5.37 mM KCl, 0.34 mM Na2HPO4, 136.89 mM NaCl 및 5.55 mM D-glucose)에 옮긴 다음, 20℃에서 30분간 염색하였다.To assess whether free radicals are reduced when Caenorhabditis elegans is treated with antioxidants, we first use pretty little nematode wild type N2 with M9 buffer containing antioxidants (22 mM Na 2 HPO 4 , 22 mM KH). 2 PO 4 , 85 mM NaCl, 1 mM MgSO 4 and 0.02% gelatin) for 10 days. TAT-PtBP-Pt (0, 0.5, 5 and 50 μM), Trolox (6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid) (0, 100, 300 and 500 μM) and PBN (0, 10, 100 and 500 μM) were used. Then, 2 ml Hank's solution (0.44 mM KH 2 PO 4 , 5.37 mM KCl, 0.34 mM Na 2 HPO 4 , 136.89) containing 10 μM CM-H 2 DCFDA and 5 μM MitoSOX red (Sigma-Aldrich). mM NaCl and 5.55 mM D-glucose) and then stained at 20 ° C. for 30 minutes.

활성 산소종의 형광 강도는 Leica TCS SP2 레이저-스캐닝 공초점 현미경(laser-scanning confocal microscope)(DCFDA의 경우 Ex: 488 nm, Em: 510 nm, MitoSOX의 경우 Ex: 510 nm, Em: 580 nm)를 이용하여 측정하였고, 항산화 물질을 처리하지 않은 대조군과 항산화 물질을 처리한 실험군 간의 활성 산소종의 형광 강도 비교는 LCS 라이트 소프트웨어(Lite software)를 사용하여 행하였다. 도 1은 각 농도의 항산화 물질을 처리한 경우 예쁜꼬마선충 체내의 활성 산소 정도를 보여주는 사진(A: TAT-PtBP-Pt, B: Trolox, C: PBN)(위 패널: DCFDA, 아래 패널: MitoSOX)이고, 도 2는 각 농도별 항산화 물질 사용에 따른 예쁜꼬마선충 체내의 활성 산소 정도를 보여주는 그래프(A: DCFDA, B: MitoSOX)이다. 도 2에서 왼쪽에서부터 오른쪽 막대로 갈수록 높은 농도의 항산화 물질을 처리한 경우를 나타낸다.The fluorescence intensity of the reactive oxygen species is Leica TCS SP2 laser-scanning confocal microscope (Ex: 488 nm for DCFDA, Em: 510 nm, Ex: 510 nm for MitoSOX, Em: 580 nm) The fluorescence intensity comparison of the active oxygen species between the control group not treated with antioxidants and the experimental group treated with antioxidants was performed using LCS Lite software. 1 is a photograph showing the degree of free radicals in the pretty nematodes when treated with antioxidants of each concentration (A: TAT-PtBP-Pt, B: Trolox, C: PBN) (top panel: DCFDA, bottom panel: MitoSOX 2, and FIG. 2 is a graph showing the degree of active oxygen in the pretty nymph nematodes according to the use of antioxidant substances at each concentration (A: DCFDA, B: MitoSOX). In FIG. 2, a case in which high concentrations of antioxidants are treated from left to right bars is shown.

또한 DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종을 대상으로 위와 실질적으로 동일한 실험을 실시하였으며, 그 결과를 상기 도 1 및 도 2와 실질적으로 동일한 방법으로 도 3 및 도 4에 각각 나타내었다.In addition, the same experiment was performed on the pretty little nematode strain in which DAF-16 was inactivated, and the results are shown in FIGS. 3 and 4 in the same manner as in FIGS. 1 and 2, respectively.

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 항산화 물질을 처리하는 경우, DAF-16 불활성화 여부를 불문하고, 선충 체내의 활성 산소가 감소하였다. 즉, 항산화 물질은 선충의 활성 산소를 제거할 수 있음을 알 수 있다.
As can be seen from the above results, when treated with antioxidants, free radicals in nematodes decreased with or without DAF-16 inactivation. In other words, it can be seen that antioxidants can remove the active oxygen of nematodes.

[실험예 2] 항산화 물질에 의한 노화 억제에 관여하는 DAF-16Experimental Example 2 DAF-16 Involved in Inhibiting Aging by Antioxidant Substances

항산화 물질에 의한 노화 억제에 DAF-16이 관여하는지 여부를 평가하기 위해, 56 내지 220 마리(웰 당 30-40 마리)의 L4 유충(larvae) 상태의 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans) 와일드 타입 N2를 20℃에서 5-플루오로-2'-디옥시우리딘이 없는 S-medium(3 mM CaCl2, 3 mM MgSO4, 50 μM EDTA, 25 μM FeSO4, 10 μM MnCl2, 10 μM ZnSO4, 1 μM CuSO4 및 10 mM KH2PO4(pH 6.0)로 보강된 S-basal 배지)에 옮기고, 대장균 OP50을 먹이로 첨가하였다. To assess whether DAF-16 is involved in inhibiting aging by antioxidants, Caenorhabditis of 56-220 (30-40 per well) L4 larvae elegans ) Wild type N2 at 20 ° C. without S-medium (3 mM CaCl 2 , 3 mM MgSO 4 , 50 μM EDTA, 25 μM FeSO 4 , 10 μM MnCl 2 without 5-fluoro-2'-dioxyuridine) , S-basal medium supplemented with 10 μM ZnSO 4 , 1 μM CuSO 4 and 10 mM KH 2 PO 4 (pH 6.0), and E. coli OP50 was added as food.

배지에 항산화 물질로서 TAT-PtBP-Pt(0, 0.5, 5 및 50 μM), Trolox (0, 100, 300 및 500 μM) 및 PBN(0, 10, 100 및 500 μM)을 첨가하고, L4 유충을 옮긴 날을 출생일로 설정하였다. 2일마다 선충을 새로운 배지로 옮기면서 그 생존 수를 측정하였다. 선충 내부에서 부화할 때 죽은 선충은 측정에서 배제하였다. 생존 데이터는 Kaplan-Meier survival analysis를 이용해 분석하였고, 대조군과 실험군 간의 실험적 유의차 검증에는 Peto’s log-rank test를 사용하였다. 모든 측정은 3회 실시하였다.To the medium were added TAT-PtBP-Pt (0, 0.5, 5 and 50 μM), Trolox (0, 100, 300 and 500 μM) and PBN (0, 10, 100 and 500 μM) as antioxidants and L4 larvae The date of moving was set as the date of birth. Every two days, the nematodes were transferred to fresh medium and their viability counted. Nematodes that died when hatching inside the nematodes were excluded from the measurement. Survival data were analyzed using Kaplan-Meier survival analysis, and Peto's log-rank test was used to verify the experimental difference between control and experimental groups. All measurements were performed three times.

또한 DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종을 대상으로 위와 실질적으로 동일한 실험을 실시하였다.In addition, the same experiment was conducted on the pretty little nematode strain in which DAF-16 was inactivated.

그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에서 A, B 및 C는 예쁜꼬마선충 와일드 타입 N2에 각 농도별 TAT-PtBP-Pt, Trolox 및 PBN을 처리한 결과이며, D, E 및 F는 DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종에 각 농도별 TAT-PtBP-Pt, Trolox 및 PBN을 처리한 결과이다.The results are shown in Fig. In Figure 5, A, B and C are the results of treatment of TAT-PtBP-Pt, Trolox and PBN for each concentration in the pretty little nematode wild type N2, D, E and F are pretty little nematodes inactivating DAF-16 This is the result of treatment of TAT-PtBP-Pt, Trolox and PBN at each concentration.

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 항산화 물질을 처리한 예쁜꼬마선충 와일드 타입 N2에서는 항산화 물질 부가에 따른 수명 연장 효과를 관찰할 수 있었으나, DAF-16을 불활성화시킨 예쁜꼬마선충 변종은 항산화 물질을 처리하여도 수명 연장 효과가 나타나지 않았다. 이를 통해, 선충에서 항산화 물질에 의한 노화 억제 효과는 DAF-16을 매개로 하는 것임을 알 수 있다.As can be seen from the above results, the life expectancy effect of adding antioxidants was observed in the pretty nymph nematode wild type N2 treated with antioxidants, but the pretty nymph nematode, which inactivated DAF-16, was treated with antioxidants. Also did not show a life extension effect. Through this, it can be seen that the anti-aging effect of antioxidants in nematodes is mediated by DAF-16.

[실험예 3] 항산화 물질 처리에 의한 DAF-16의 핵 이동 정도 평가Experimental Example 3 Evaluation of Nuclear Migration of DAF-16 by Antioxidant Treatment

DAF-16을 GFP(녹색 형광 단백질, Green Fluorescent Protein)로 가시화한 DAF-16::gfp(zls356) 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)에 항산화 물질로서 TAT-PtBP-Pt(0, 0.5, 5 및 50 μM), Trolox (0, 100, 300 및 500 μM) 및 PBN(0, 10, 100 및 500 μM)을 2일 동안 처리하고 Leica TCS SP2 레이저-스캐닝 공초점 현미경(laser-scanning confocal microscope)을 이용한 형광 강도 측정을 통해 DAF-16의 핵 이동 정도를 평가하였다. 그 결과 사진은 도 6과 같다. 또한 핵, 세포질 및 매개물(intermediate) 각각의 DAF-16 형광 강도를 two-tailed Student’s t-test를 사용하여 비교하고, 그 결과를 도 7에 나타내었다.DAF-16 :: gfp (zls356) visualizes DAF-16 as GFP (Green Fluorescent Protein) TAT-PtBP-Pt (0, 0.5, 5 and 50 μM), Trolox (0, 100, 300 and 500 μM) and PBN (0, 10, 100 and 500 μM) as antioxidants in Caenorhabditis elegans Was treated for 2 days and the degree of nuclear migration of DAF-16 was assessed by fluorescence intensity measurement using a Leica TCS SP2 laser-scanning confocal microscope. As a result, the photograph is shown in FIG. In addition, DAF-16 fluorescence intensity of each of the nucleus, cytoplasm and mediator was compared using a two-tailed Student's t- test, and the results are shown in FIG. 7.

한편, 세포질과 핵의 분리는 회수한 세포를 세포질 성분 분리 용액(1 mM DTT 및 단백질 분해 효소 억제제로 보강된 10 mM HEPES(pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 10% NP-40 및 0.5 mM PMSF)으로 처리한 후, 핵 성분 분리 용액(1 mM DTT 및 단백질 분해 효소 억제제로 보강된 20 mM HEPES(pH 7.9), 400 mM NaCl, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA 및 1 mM PMSF)을 처리하여 실시하였다. 핵 성분을 포함한 침전은 냉동-해동 사이클로 처리 후, 초음파, 원심 분리로 처리하였다. On the other hand, the separation of the cytoplasm and the nucleus, the recovered cells were separated by cytoplasmic component separation solution (1 mM DTT and protease inhibitors, 10 mM HEPES (pH 7.9), 10 mM KCl, 0.1 mM EGTA, 0.1 mM EDTA, 10% After treatment with NP-40 and 0.5 mM PMSF, 20 mM HEPES (pH 7.9), 400 mM NaCl, 1 mM EGTA, 1 mM EDTA and 1 supplemented with nuclear component separation solution (1 mM DTT and protease inhibitors) mM PMSF). Precipitation including nuclear components was treated by freeze-thaw cycle followed by ultrasonic and centrifugation.

도 6 및 도 7에서 볼 수 있듯이, 항산화 물질을 처리하면 DAF-16의 핵에서의 농도가 증가하고 세포질에서의 농도가 감소하여, DAF-16의 핵으로의 이동이 증가하는 것을 알 수 있다. 즉, 항산화 물질을 처리하는 경우 DAF-16의 핵으로의 이동 정도는 증가한다. 이를 기초로, 임의의 물질을 처리하였을 때, 예쁜꼬마선충에서 DAF-16의 핵으로의 이동이 증가하는 경우, 그 처리한 물질은 항산화 효과, 나아가 노화 억제 효과가 있다고 판단할 수 있을 것이다. 또한, TAT-PtBP-Pt는 5 μM로 처리할 때, Trolox 는 300 μM로 처리할 때, PBN은 100 μM로 처리할 때 DAF-16의 핵으로의 이동 정도가 가장 높았다. 이를 기초로 처리한 항산화 물질의 농도 및 처리한 항산화 물질 농도에 따른 DAF-16의 핵으로의 이동 증가 정도에 따라 각 항산화 물질이 항산화 효과를 나타내는 유효 농도 범위를 예측할 수 있음을 알 수 있다.As can be seen in Figures 6 and 7, it can be seen that the treatment of antioxidants increases the concentration in the nucleus of DAF-16 and decreases the concentration in the cytoplasm, thereby increasing the migration of DAF-16 to the nucleus. In other words, the treatment of antioxidants increases the degree of DAF-16 migration to the nucleus. Based on this, when the treatment of any substance increases the migration of DAF-16 to the nucleus of pretty nematodes, the treated substance may be determined to have an antioxidant effect, and furthermore, an anti-aging effect. In addition, when TAT-PtBP-Pt was treated at 5 μM, Trolox at 300 μM, and PBN at 100 μM, DAF-16 had the highest migration to the nucleus. Based on this, it can be seen that the effective concentration range in which the antioxidant substances exhibit antioxidant effects can be predicted according to the increase of DAF-16 migration to the nucleus according to the concentration of the treated antioxidant and the treated antioxidant concentration.

한편, 항산화 물질로서 TAT-PtBP-Pt(0, 0.5, 5 및 50 μM), Trolox(0, 1, 3 및 5 μM) 및 PBN(0, 0.1, 1 및 10 μM)을 2일 동안 처리하고, 배양 세포 HEK293을 이용하여 웨스턴 블랏(western blot) 실험을 실시하였다. 각 20 ㎍의 핵 및 시토졸(cytosol)에 대해 항-FOXO3a, 항-β-액틴(actin) 및 항-라민(lamin) B로 검출하고, 그 결과를 도 8에 나타내었다(위 패널: FOXO3a, 중간 패널: β-액틴, 아래 패널: 라민 B).Meanwhile, TAT-PtBP-Pt (0, 0.5, 5 and 50 μM), Trolox (0, 1, 3 and 5 μM) and PBN (0, 0.1, 1 and 10 μM) as antioxidants were treated for 2 days and , Western blot experiment was performed using the cultured cell HEK293. Anti-FOXO3a, anti-β-actin and anti-lamin B were detected for each 20 μg of nucleus and cytosol, and the results are shown in FIG. 8 (top panel: FOXO3a). , Middle panel: β-actin, bottom panel: lamin B).

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 항산화 물질을 처리하는 경우 FOXO3a의 핵에서의 농도가 증가하고 세포질에서의 농도가 감소하여, FOXO3a의 핵으로의 이동 정도가 증가함을 알 수 있다. 이를 기초로, 임의의 물질을 처리하였을 때, 예쁜꼬마선충에서 FOXO3a의 핵으로의 이동이 증가하는 경우, 그 처리한 물질은 항산화 효과, 나아가 노화 억제 효과가 있다고 판단할 수 있을 것이다. As can be seen from the results, it can be seen that the treatment of antioxidants increases the concentration in the nucleus of FOXO3a and decreases the concentration in the cytoplasm, thereby increasing the degree of migration of FOXO3a to the nucleus. On the basis of this, when the treatment of any substance increases the migration of the FOXO3a to the nucleus of the pretty nematode, the treated substance may be determined to have an antioxidant effect, and furthermore, an anti-aging effect.

도 6 내지 도 8에서 A는 TAT-PtBP-Pt, B는 Trolox, 그리고 C는 PBN을 처리한 경우를 각각 나타낸다.6 to 8, A represents TAT-PtBP-Pt, B represents Trolox, and C represents a case of treating PBN.

Claims (12)

항산화 물질 스크리닝 방법으로서,
후보 물질을 동물에 처리하는 단계; 및
후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법.
As an antioxidant screening method,
Treating the candidate substance with an animal; And
An antioxidant screening method comprising the step of evaluating the degree of DAF-16 migration to the nucleus in the animal treated with the candidate material.
제 1 항에 있어서,
동물은 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)을 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법.
The method of claim 1,
An animal is an antioxidant screening method comprising Caenorhabditis elegans .
제 1 항에 있어서,
동물은 형광 표지된 DAF-16을 포함하는 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)인 항산화 물질 스크리닝 방법.
The method of claim 1,
The animal is an antioxidant screening method of Caenorhabditis elegans containing fluorescently labeled DAF-16.
제 1 항에 있어서,
DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계 이후, DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단하는 단계를 더 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법.
The method of claim 1,
And after the step of evaluating the degree of DAF-16 migration to the nucleus, determining the substance that increases the degree of DAF-16 migration to the nucleus as an antioxidant.
제 1 항에 있어서,
DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계에 부가하여, 후보 물질을 처리한 동물에서 FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계를 더 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법.
The method of claim 1,
And in addition to evaluating the extent to which the DAF-16 migrates to the nucleus, evaluating the extent to which FOXO3a migrates to the nucleus in the animal treated with the candidate substance.
제 5 항에 있어서,
FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 단계 이후, FOXO3a이 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단하는 단계를 더 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법.
The method of claim 5, wherein
And evaluating the extent to which FOXO3a migrates to the nucleus as an antioxidant after evaluating the extent to which FOXO3a migrates to the nucleus.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
항산화 물질은 항산화에 의한 노화 방지 물질을 포함하는 항산화 물질 스크리닝 방법.
7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Antioxidants are antioxidants screening method comprising an anti-aging material by antioxidant.
제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 스크리닝 방법으로 스크리닝된 물질을 포함하는 항산화용 화장품 조성물.
A cosmetic composition for antioxidant, comprising a substance screened by the screening method according to any one of claims 1 to 6.
후보 물질을 처리한 동물에서 DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 평가하는 장치를 포함하는 항산화 물질 스크리닝 키트.
An antioxidant screening kit comprising a device for evaluating the degree of DAF-16 migration to a nucleus in an animal treated with a candidate.
제 9 항에 있어서,
동물은 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)을 포함하는 항산화 물질 스크리닝 키트.
The method of claim 9,
The animal is an antioxidant screening kit comprising Caenorhabditis elegans .
제 9 항에 있어서,
동물은 형광 표지된 DAF-16을 포함하는 예쁜꼬마선충(Caenorhabditis elegans)인 항산화 물질 스크리닝 키트.
The method of claim 9,
The animal is an antioxidant screening kit of Caenorhabditis elegans containing fluorescently labeled DAF-16.
제 9 항에 있어서,
DAF-16이 핵으로 이동한 정도를 증가시키는 물질을 항산화 물질로 판단한다는 내용의 지시서를 더 포함하는 항산화 물질 스크리닝 키트.The method of claim 9,
An antioxidant screening kit further comprising instructions indicating that the substance that increases the degree of DAF-16 migration to the nucleus is an antioxidant.
KR1020120015273A 2012-02-15 2012-02-15 Screening method of candidate material for anti oxidant KR20130093983A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120015273A KR20130093983A (en) 2012-02-15 2012-02-15 Screening method of candidate material for anti oxidant

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120015273A KR20130093983A (en) 2012-02-15 2012-02-15 Screening method of candidate material for anti oxidant

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20130093983A true KR20130093983A (en) 2013-08-23

Family

ID=49217981

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120015273A KR20130093983A (en) 2012-02-15 2012-02-15 Screening method of candidate material for anti oxidant

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20130093983A (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106950202A (en) * 2016-01-07 2017-07-14 兰州红虫生物工程有限责任公司 A kind of anti-oxidation medicine screening reagent box

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106950202A (en) * 2016-01-07 2017-07-14 兰州红虫生物工程有限责任公司 A kind of anti-oxidation medicine screening reagent box
CN106950202B (en) * 2016-01-07 2021-09-28 杨同玥 Antioxidant drug screening kit

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pomatto et al. Adaptive homeostasis and the free radical theory of ageing
Yang et al. A mitochondrial superoxide signal triggers increased longevity in Caenorhabditis elegans
Yang et al. A measurable increase in oxidative damage due to reduction in superoxide detoxification fails to shorten the life span of long-lived mitochondrial mutants of Caenorhabditis elegans
Budde et al. Hydrogen sulfide increases hypoxia-inducible factor-1 activity independently of von Hippel–Lindau tumor suppressor-1 in C. elegans
Liu et al. Antioxidation and anti-aging activities of astaxanthin geometrical isomers and molecular mechanism involved in Caenorhabditis elegans
Okatsu et al. A dimeric PINK1-containing complex on depolarized mitochondria stimulates Parkin recruitment
Kampkötter et al. The Ginkgo biloba extract EGb761 reduces stress sensitivity, ROS accumulation and expression of catalase and glutathione S-transferase 4 in Caenorhabditis elegans
Yamashita et al. Selenoneine, a novel selenium-containing compound, mediates detoxification mechanisms against methylmercury accumulation and toxicity in zebrafish embryo
Wheeler et al. Identification of a novel gene family involved in osmotic stress response in Caenorhabditis elegans
Mukaigasa et al. Genetic evidence of an evolutionarily conserved role for Nrf2 in the protection against oxidative stress
Helmcke et al. Hormetic effect of methylmercury on Caenorhabditis elegans
Dancy et al. Effects of the mitochondrial respiratory chain on longevity in C. elegans
Thamsen et al. Is overoxidation of peroxiredoxin physiologically significant?
Lüersen et al. The glutathione reductase GSR-1 determines stress tolerance and longevity in Caenorhabditis elegans
Feitosa et al. Determination of parameters of oxidative stress in vitro models of neurodegenerative diseases-A review
Kernt et al. Filtering blue light reduces light‐induced oxidative stress, senescence and accumulation of extracellular matrix proteins in human retinal pigment epithelium cells
Li et al. Two thioredoxin reductases, trxr-1 and trxr-2, have differential physiological roles in Caenorhabditis elegans
Watt et al. JIP3 activates kinesin-1 motility to promote axon elongation
Mendler et al. daf-16/FOXO and glod-4/glyoxalase-1 are required for the life-prolonging effect of human insulin under high glucose conditions in Caenorhabditis elegans
Liu et al. The augmentation of O-GlcNAcylation reduces glyoxal-induced cell injury by attenuating oxidative stress in human retinal microvascular endothelial cells
Sun et al. The molecular mechanism of protecting cells against oxidative stress by 2-selenium-bridged β-cyclodextrin with glutathione peroxidase activity
Qin et al. Sulfur dioxide inhalation stimulated mitochondrial biogenesis in rat brains
Park et al. Electrolyzed-reduced water confers increased resistance to environmental stresses
Chen et al. Sodium nitroprusside alleviates nanoplastics-induced developmental toxicity by suppressing apoptosis, ferroptosis and inflammation
KR20130093983A (en) Screening method of candidate material for anti oxidant

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application