KR20120130552A - 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 기질표면상에 자기조립 단분자막(self assembled monolayer; SAM)을 형성시키고, 상기 형성된 자기조립 단분자막에 말단이 작용기로 활성화된 사이클로덱스트린(cyclodextrin; CD)을 결합시킨 다음, 상기 결합된 사이클로덱스트린에 항체 등의 단백질을 부착시킴으로써 화학수식, 링커부착 및 태깅과정 없이 단백질을 용이하고 안정적으로 칩상에 고정시킬 수 있는 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법은 화학수식, 링커부착, 태깅과정 없이 단백질을 용이하고 안정적으로 칩상에 고정시킬 수 있어 단백질의 고유 활성을 유지시킬 수 있고, 단백질/단백질간의 상호작용을 포함하여 단백질/단백질간의 결합 억제물질을 신속하고 편리하게 스크린할 수 있어 새로운 진단 칩, ELISA 키트 개발 등에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법{Proteins Immobilization Method Using Cyclodextrin?Self Assembled Monolayers}
본 발명은 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는, 기질표면상에 자기조립 단분자막(self assembled monolayers; SAMs)을 형성시키고, 상기 형성된 자기조립 단분자막에 말단이 작용기로 활성화된 사이클로덱스트린(cyclodextrin; CD)을 결합시킨 다음, 상기 결합된 사이클로덱스트린에 항체 등의 단백질을 부착시킴으로써 화학수식, 링커부착 및 태깅과정 없이 단백질을 용이하고 안정적으로 칩상에 고정시킬 수 있는 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법에 관한 것이다.
최근 게놈 프로젝트에 의해 3 만개 이상으로 예측되는 인간 유전자 중, 1 만여 개의 기능이 밝혀져 있고, 이러한 유전자들의 대부분은 질환과 직접적인 연관이 있는 것으로 알려져 있다. 또한, 대부분의 질병은 유전자 수준이 아닌 단백질 수준에서 유발되기 때문에, 현재까지 개발되었거나 개발 중에 있는 의약품의 95% 이상이 단백질을 표적으로 하고 있다.
일반적으로 단백질 칩은 목적 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 등의 단백질을 지지체의 표면상에 고정시킨 후, 시료와의 반응 또는 면역 반응을 이용하여 그 결합 정도를 분석함으로써, 시료 내의 특정 단백질을 분석하는 것이다. 이러한 측정방법은 고전적인 방법으로는 불가능하였던 질병에 대한 치료 및 예방법을 개발하기 위한 핵심기술로 소량의 물질을 선택적으로 분석할 수 있으며 실시간으로 측정할 수 있기 때문에 기초과학 연구뿐만 아니라, 환경오염 물질의 측정 및 약물이나 바이러스의 진단 등에 널리 이용되고 있다.
현재 사용되고 있는 단백질 칩들은 지지체로서 유리, 플라스틱, 금속 등과 같은 소재의 기판들을 사용하며, 이들 기판에 금을 코팅하여 제조된 골드 칩(Gold Chip)의 표면에 아민(amine), 리간드 싸이올(ligand thiol), 알데히드(aldehyde)를 수식화하거나, 기능기가 부착된 리간드를 자기조립 단분자층(self-assembly monolayer)을 형성하여 목적 단백질을 고정하고, 단백질 간 상호작용을 표면 플라즈몬 공명 현상을 이용하여 분석하는 것이다.
이와 관련하여 현재 단백질의 분석에 폭넓게 사용되고 있는 방법 중의 하나가 바로 카르복시메틸-덱스트란(carboxymethyl-dextran)을 사용하는 것이다. 즉, 골드 칩에 알카인 싸이올(alkane thiol)을 부착시킨 다음, 에피클로로히드린(epichlorohydrin)과 같은 에폭사이드를 이용하여 덱스트란을 고정시킨 다음, 브로모아세트산과 반응시켜 덱스트란에 카르복시기를 도입하여 단백질 분석칩을 제조함으로서 카르복시기(carboxyl group)에 단백질의 아미노기(amino group)가 결합되어 단백질 분석을 할 수 있도록 한 것이다.
그러나 상기한 종래의 방법으로 CM-덱스트란 단백질 칩을 제조하는 기술은 모든 반응이 골드 칩 상에서 순차적으로 이루어짐에 따라 각각의 반응단계가 고체 액체간의 반응으로 볼 수 있어 반응속도가 매우 느리다는 단점을 가진다. 이러한 반응의 속도에 기인하여 알카인 싸이올이 도입된 골드 칩으로부터 카르복실기를 갖는 덱스트란이 형성된 단백질 칩을 제조하는데 2일 이상의 장시간이 소요되어 생산성에 많은 문제점이 있다.
또한, 제조된 단백질 칩에 있어서도 카르복실기와 단백질의 아미노기간의 결합 친화도가 낮은 관계로 낮은 농도의 단백질 분석이 어려울 뿐만 아니라 반응에 상당한 시간이 소요되어 신속한 단백질 분석에의 활용이 곤란하다는 단점을 가지고 있다.
한편, 상기 반응이 진행되는 골드 칩은 여러 종류의 단백질 분석을 동시에 진행하기 위하여 유리기판의 표면에 스퍼터링 방법으로 소정의 직경을 갖는 골드를 다수 개 코팅하여서 된 것인데, 주지된 바와 같이 골드와 골드 사이의 유리부분에는 단백질 칩에 올려지는 단백질 용액간의 간섭을 최소화하기 위해 소수성 처리를 한다. 소수성 처리과정은 먼저 골드 부분과 유리 부분 모두를 친수성 처리를 한 후, 유리 부분에 실란(silane)작용기를 가진 알킬 체인(alkyl chain)의 일종인 옥타데실트리클로로 실란(octadecyltrichloro silane, OTS)를 처리하여 수행된다. 그러나, 기존 에폭사이드를 이용하여 카르복시메틸-덱스트란 단백질 칩을 제조하는 과정에서 사용되는 에폭사이드 작용기가 유리 부분의 OH기와 반응하여 친수성화 되어 단백질 분석 시 단백질이 유리부분에까지 퍼져 섞임으로써 단백질의 동시 분석에 어려움이 있었다.
그 밖에 단백질 고정화 방법으로는, 사이클로덱스트린을 단분자막으로 형성시킨 다음, 상기 사이클로덱스트린에 스트렙아비딘, 비오딘 등의 링커를 이용하여 항체를 고정시키는 방법(Manon J.W. Ludden et al ., J. AM . Chem . Soc ., 130, 22, 6964-6973, 2008; Manon J.W. Ludden et al ., Small , 2, 10, 1192-1202, 2006) 등이 개시되어 있으나, 이 방법 역시 링커를 이용하여 항체를 고정화시킴으로써 많은 정제과정과 표면처리 과정을 거치면서 많은 비용과 시간이 요구되는 단점이 있다.
이에, 본 발명자들은 상기 종래기술의 문제점을 해결하고자 예의 노력한 결과, 기질표면상에 자기조립 단분자막을 형성시키고, 상기 형성된 자기조립 단분자막에 말단이 작용기로 활성화된 사이클로덱스트린을 결합시킨 다음, 상기 결합된 사이클로덱스트린에 단백질을 고정화시킬 경우, 화학수식, 링커부착 및 태깅과정 없이 단백질을 용이하고 안정적으로 칩상에 고정화시킬 수 있고, 단백질/단백질간의 비특이적 결합을 최소화할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 주된 목적은 화학수식, 링커부착 및 태깅과정 없이 단백질을 용이하고 안정적으로 고정화시킬 수 있는 동시에 단백질/단백질간의 비특이적 결합을 최소화시킬 수 있는 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법, 및 상기 방법으로 제조된 단백질칩을 제공하는데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 기질 표면에 자기조립 단분자막을 형성시키는 단계; (b) 자기조립 단분자막에 사이클로덱스트린을 결합시키는 단계; 및 (c) 상기 사이클로덱스트린에 단백질을 부착시키는 단계를 포함하는, 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 방법으로 제조되고, 자기조립 단분자막에 결합된 사이클로덱스트린에 단백질이 부착되어 있는 것을 특징으로 하는 단백질칩을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 단백질칩을 이용한 단백질/단백질 간의 상호작용 또는 항체/항원간의 상호작용을 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 단백질칩을 이용한 단백질/단백질 간의 결합 또는 항체/항원간의 결합을 억제하는 물질의 스크리닝 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법은 화학수식, 링커부착, 태깅과정 없이 단백질을 용이하고 안정적으로 칩상에 고정시킬 수 있어 단백질의 고유 활성을 유지시킬 수 있고, 단백질/단백질간의 상호작용을 포함하여 단백질/단백질간의 결합 억제물질을 신속하고 편리하게 스크린할 수 있어 새로운 진단 칩, ELISA 키트 개발 등에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법의 계략도이다.
도 2는 본 발명에 따른 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질칩 및 기존 자기조립 단분자막을 이용한 단백질칩의 표면 플라즈몬 공명을 측정한 결과 그래프이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.
본원에서, "자기조립 단분자막(self assembled monolayers; SAMs)"은 기질의 표면에 자발적으로 입혀진 규칙적으로 잘 정렬된 유기 분자막을 의미하는데, 자기조립 물질은 기질 표면에서 자기조립 단분자막을 형성하여 기질 표면의 성질을 바꾸거나 표면의 반응성을 변화시킨다. 자기조립 단분자막은 예를 들어, 티올기, 아민기, 실라놀기 또는 포스핀기를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 일 관점에서, (a) 기질 표면에 자기조립 단분자막을 형성시키는 단계; (b) 상기 자기조립 단분자막에 사이클로덱스트린을 결합시키는 단계; 및 (c) 상기 사이클로덱스트린에 단백질을 부착시키는 단계를 포함하는,자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법에 관한 것이다.
보다 구체적으로, 본 발명에 따른 단백질을 고정화시키는 방법은 도 1에 나타난 바와 같이, 자기조립 단분자막(self assembled monolayers; SAMs)을 형성시키는 물질을 기질 표면에 도포하여 자기조립 단분자막을 형성시키고, 상기 형성된 자기조립 단분자막에 사이클로덱스트린(cyclodextrin; CD)을 결합시킨 다음, 상기 사이클로덱스트린에 단백질을 부착시킴으로써, 단백질 또는 칩의 화학수식(chemical modification)이나, 링커(linker)부착, 태깅(tagging)과정이 없어 단백질의 고유 활성의 상실 없이 단백질을 간단한 방법으로 안정하게 고정시킬 수 있고, 단백질/단백질간의 비특이적 결합으로 최소화할 수 있다.
본 발명에 있어서, 기질은 금, 유리, 실리콘, 플라스틱, 실리카 나노입자, 자성 나노입자 및 양자점 나노입자로 구성된 군에서 선택될 수 있으나, 이에 국한되지 않고, 자기조립 단분자막을 형성시킬 수 있는 것이면 사용 가능하다.
본 발명에 있어서, 단백질은 항체 또는 항원을 포함한 단백질/단백질 상호작용을 보여주는 모든 단백질로부터 선택될 수 있다.
본 발명에 있어서, 자기조립 단분자막(self assembled monolayers; SAMs)은 아미노티오페놀(4-aminothiophenol), 캘릭스크라운(calixcrown), 11-머캡토언데카노익 에시드(11-mercaptoundecanoic acid), 티옥틱 에시드(thioctic acid), 4-머캡토페닐아세틱 에시드(4-mercapto phenylacetic acid), 4-머캡토 벤조익 에시드(4-mercapto benzoic acid), 4-머캡토 프로파노익 에시드(4-mercapto propanoic acid), 티오말릭 에시드(2-thiomalic acid), 티올라틱 에시드(2-thiolactic acid), 12-머캡토 도데카노익 에시드(12-mercaptododecanoic acid), 시스테아민(cysteamine), 6-아미노-2-머캡토벤조티아졸(6-amino-2-mercaptobenzothiazole) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 자기 조립 단분자막 형성물질을 이용하여 기질에 단분자막을 형성시킬 수 있다.
또한, 자기 조립 단분자막의 형성방법은 기질 표면에 전술된 자기 조립 단분자막 형성물질을 도포하거나, 기질을 침지시켜 기질 표면에 단분자막을 형성시키는 등 기질상에 단분자막을 형성시킬 수 있는 방법이면 모두 사용 가능하여 기질의 형태나, 크기에 관계없이 기질 표면상에 단분자막을 용이하게 형성시킬 수 있다.
본 발명에 있어서, 사이클로덱스트린은 일측 또는 양측이 작용기로 활성화된 사이클로덱스트린을 사용할 수 있고, 상기 작용기로는 카르복실기, 아민기, 및 숙시닐기로 구성된 군에서 선택될 수 있으며, 사이클로덱스트린을 작용기로 개질시킬 수 있는 방법이면 사용 가능하다.
상기 사이클로덱스트린(cyclodextrin)은 포도당분자 6개 이상이 서로 연결된 고리 모양으로, α-, β- 및 γ-사이클로덱스트린 등이 있으며, 고리 모양의 안쪽은 소수성이므로 소수성 물질을 용해시키는 특성이 있고, 주인분자(host) 역할을 수행함으로써 후술되는 바와 같이, 단백질을 포접하여 부착시킨다.
상기 사이클로덱스트린의 말단에 활성화된 작용기는 기질 표면상에 형성된 자기조립 단분자막과 가교제를 통하여 결합된다. 이때 가교제는 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 하이드로클로라이드(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride; EDC), N-하이드록시숙신이미드(N-hydroxysuccinimide; NHS), 숙시닉 언하이드라이드(succinic anhydride) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택될 수 있으나, 이에 국한되지 않고 사이클로덱스트린의 말단에 활성화된 작용기와 자기조립 단분자막을 결합시킬 수 있는 화합물이면 사용 가능하다.
또한, 본 발명에 따른 단백질을 고정화시키는 방법은 자기조립 단분자막에 실온에서 마이크로 어레이 기법으로 스폿팅(spotting)시켜 사이클로덱스트린을 결합시킴으로써, 단백질을 원하는 위치에 선택적이고 직접적으로 고정화할 수 있고, 비특이적 및 고정용 단백질에 대한 고가의 정제비용 등의 문제를 최소화할 수 있다.
이와 같이, 자기조립 단분자막에 결합된 사이클로덱스트린은 단백질이 함유된 용액에 침지시키거나, 상기 자기조립 단분자막에 결합된 사이클로덱스트린에 단백질이 함유된 용액을 흘려보내 상기 사이클로덱스트린의 틈으로 항체 등의 단백질이 포접되어 부착된다.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 방법에 의해 제조되고, 자기조립 단분자막에 결합된 사이클로덱스트린에 단백질이 부착되어 있는 것을 특징으로 하는 단백질칩에 관한 것이다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 단백질칩을 이용한 단백질/단백질 간의 상호작용 또는 항체/항원 간의 상호작용을 검출하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 단백질칩은 형광물질의 표지 없이 표면 플라즈몬 공명 시스템을 영상화하여 확인하는 표면플라즈몬 공명 이미징(surface plasmon resonance imaging; SPRI)방법을 적용할 수 있으며, 필요에 따라서는 당해분야에서의 주지된 다양한 분석 시스템이 적용될 수 있다.
본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 단백질칩을 이용한 단백질/단백질 간의 결합 또는 항체/항원 간의 결합을 억제하는 물질의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 단백질칩은 자기조립 단분자막과 사이클로덱스트린을 사용하여 제조됨으로써 단백질/단백질간의 비특이적 결합을 최소화할 수 있어 단백질/단백질간의 상호작용을 포함하여 단백질/단백질간의 결합 억제물질을 신속하고 편리하게 스크린할 수 있어, 새로운 진단칩, ELlSA 키트 개발 등에 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명이 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질칩 제조
아민기가 노출된 금 표면을 만들기 위해 10 mM 4-아미노티오페놀(4-Aminothiophenol)이 함유된 에탄올 용액에 금 칩(1㎝×1㎝, Biacore)을 담가 실온에서 12시간 동안 shaking incubation하여 자기조립 단분자막을 고정시켰다. 상기와 같이 자기조립 단분자막이 고정된 금 칩을 에탄올을 이용하여 3회 세척하고, 2분간 음파처리(sonication) 한 후에 질소가스로 건조시켜 4-ATP가 고정되어 아민기가 노출된 금 칩을 수득하였다. 상기 수득된 아민기가 노출된 금 칩 표면에 사이클로덱스트린을 고정시키기 위해 0.003 mM의 카르복실기가 말단에 부착된 사이클로덱스트린이 녹아 있는 EDC/NHS 용액 1ml를 단분자막이 형성되어 있는 금 표면에 반응시키고, 15분 후에 3차 증류수로 3회 세척 후 질소가스로 건조시켜 단백질 칩을 제조하였다.
비교예 1: 자기조립 단분자막을 이용한 단백질칩 제조
금 박막으로 코팅한 금 칩(1㎝×1㎝, Biacore)을 피란하 용액(Piranha solution; 70% H2SO2, 30% H2O2)로 65℃에서 15분 동안 처리하고, 3차 증류수로 5회 세척한 후 질소가스로 건조시켰다. 이렇게 건조된 금칩을 11-머캅토-1-운데카노익 에시드(11-mercapto-1-undecanoic acid; MUA) 1mM이 함유된 에탄올 용액에 16시간 동안 담지시켜 자기조립 단분자막을 형성시켰다. 이렇게 자기조립 단분자막이 고정된 금 칩을 BIACORE 3000에 장착한 다음, 인산 완충용액 (pH 7.4)을 10 ㎕/min 속도로 흘려주고, EDC(0.4M,Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)과 와 NHS(0.1M, N-hydroxysulfosuccinimide)를 1:1비율로 주입하여 금 칩 표면의 카르복실기를 활성화시켜 자기조립 단분자막을 이용한 단백질 칩을 제조하였다.
실험예 1: 표면 플라즈몬 공명 ( Surface Plasmon Resonance ) 측정
실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 단백질칩의 항체와 항원의 결합반응을 측정하기 위해 표면 플라즈몬 공명을 측정하였다. 상기 실시예 1 및 비교예 1에서 제조된 단백질 칩을 BIACORE 3000에 장착한 후에 인산 완충용액(pH 7.4)을 10㎕/min 속도로 흘려주고, 인산 완충용액에 항체(C-reactive protein; CRP antibody; Calbiochem 구입)를 0.1mg/ml으로 녹여 10㎕/min의 유속으로 5분간 흘려주면서, 굴절지수 변화를 측정하였다. 항체 고정화 후 인산 완충용액을 10㎍/min으로 5분간 흘려주고 인산 완충용액으로 BSA(bovine serum albumin, 1mg/ml)를 녹여 10㎕/min의 유속으로 5분간 흘려 골드 표면을 블로킹하고 항원(CRP;Calbiochem 구입)을 인산 완충용액에 0.1mg/ml으로 녹여 10㎕/min의 유속으로 5분간 흘려주면서, 굴절지수 변화를 측정하여 항원 항체의 상호 결합을 확인하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 제조된 단백질칩(b)은 비교예 1에서 제조된 단백질칩(a)보다 향상된 항체와 항원의 결합반응을 확인할 수 있었고, 표면 플라즈몬 공명의 ΔRU 값이 비교예 1에서 제조된 단백질칩보다 커 사이클로덱스트린과 항체의 결합력이 매우 안정적임을 알 수 있었다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (14)

  1. 다음 단계를 포함하는, 자기조립 단분자막 및 사이클로덱스트린을 이용한 단백질 고정화 방법:
    (a) 기질 표면에 자기조립 단분자막을 형성시키는 단계;
    (b) 상기 자기조립 단분자막에 사이클로덱스트린을 결합시키는 단계; 및
    (c) 상기 사이클로덱스트린에 단백질을 부착시키는 단계.
  2. 제1항에 있어서, 상기 기질은 금, 유리, 실리콘, 플라스틱, 실리카 나노입자, 자성 나노입자 및 양자점 나노입자로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 단백질은 항체 또는 항원인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 자기조립 단분자막 형성은 자기조립 단분자막 형성물질을 기질 표면에 도포하거나, 자기조립 단분자막 형성물질에 기질을 침지시켜 형성하는 것을 특징으로 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 자기조립 단분자막 형성물질은 아미노티오페놀(4-aminothiophenol), 캘릭스크라운(calixcrown), 11-머캡토언데카노익 에시드(11-mercaptoundecanoic acid), 티옥틱 에시드(thioctic acid), 4-머캡토페닐아세틱 에시드(4-mercapto phenylacetic acid), 4-머캡토 벤조익 에시드(4-mercapto benzoic acid), 4-머캡토 프로파노익 에시드(4-mercapto propanoic acid), 티오말릭 에시드(2-thiomalic acid), 티올라틱 에시드(2-thiolactic acid), 12-머캡토 도데카노익 에시드(12-mercaptododecanoic acid), 시스테아민(cysteamine), 6-아미노-2-머캡토벤조티아졸(6-amino-2-mercaptobenzothiazole) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 결합은, 다음 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (i) 상기 사이클로덱스트린의 말단을 카르복실기, 아민기 및 숙시닐기로 구성된 군에서 선택되는 작용기로 활성화시키는 단계; 및
    (ii) 상기 작용기로 말단이 활성화된 사이클로덱스트린을 가교제를 사용하여 상기 자기조립 단분자막과 결합시키는 단계.
  7. 제6항에 있어서, 상기 가교제는 EDC(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride), NHS(N-hydroxysuccinimide), 숙시닉 언하이드라이드(succinic anhydride) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 사이클로덱스트린과 항체의 부착은 사이클로덱스트린의 포접에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 방법으로 제조되고, 자기조립 단분자막에 결합된 사이클로덱스트린에 단백질이 부착되어 있는 것을 특징으로 하는 단백질칩.
  10. 제9항에 있어서, 상기 단백질은 항체 또는 항원인 것을 특징으로 하는 단백질칩.
  11. 제9항의 단백질칩을 이용한 단백질/단백질 간의 상호작용을 검출하는 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 단백질은 항체 또는 항원인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제9항의 단백질칩을 이용한 단백질/단백질 간의 결합을 억제하는 물질의 스크리닝 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 단백질은 항체 또는 항원인 것을 특징으로 하는 물질의 스크리닝 방법.


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