KR20120081510A - Kit and method for the assessment of a semen quality - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A method and a kit for evaluating the quality of semen using phenol red is provided to identify the color of a semen sample with naked eyes and to quickly and conveniently evaluate the quality of semen. CONSTITUTION: A method for evaluating the quality of semen comprises: a step of storing a semen sample containing phenol red; a step of positioning the semen sample and the semen sample containing phenol red at partitioned sections; a step of detecting the color of the semen sample containing phenol red with naked eyes; and a step of determining the semen sample is usable in case that the color of the semen sample containing phenol red corresponds to the preset range. The semen sample is prepared from human body, pig, dog, deer, or cow.

Description

정액의 품질 평가 방법 및 평가용 키트{Kit and method for the assessment of a semen quality}Kit and method for the assessment of a semen quality}

본 발명은 정액의 품질 평가 방법 및 정액의 품질 평가용 키트에 관한 것이다. The present invention relates to a method for evaluating the quality of semen and a kit for evaluating the quality of semen.

정액을 이용한 기술분야, 예를 들면 인공수정 분야에서 정액은 채취된 후 바로 사용되기도 하지만, 저장된 후 사용되기도 한다. 저장은 동결보존되거나 희석된 상태에서 저장되기도 한다. 동물의 인공수정 분야에 있어서 희석된 정액 (통상 액상 정액)의 냉장 저장 기간은 통상 10일 정도이고, 동결 정액의 경우는 반영구적이다. 이러한 액상 정액은 최초로 채취된 상태와는 달리, 여러 가지 원인에 의하여 인공수정에 적합하지 않은 상태로 변할 수 있다. 예를 들면, 시간의 경과에 따라 정액 중의 정자의 활동성 또는 수태 능력이 감소되거나, 또는 외래 물질의 오염에 의하여 정자의 활동성 또는 수태능력이 감소할 수 있다. 따라서, 보관중인 정액은 사용 전에 정액의 품질이 수정에 사용하기에 적합한지 여부를 검사할 필요가 있다. In the technical field using semen, for example, in the field of artificial insemination, semen may be used immediately after being collected, but may also be used after being stored. Storage may be stored cryopreserved or diluted. In the field of artificial insemination of animals, the refrigerated storage period of diluted semen (usually liquid semen) is usually about 10 days, and semipermanent in the case of frozen semen. Unlike the state in which the liquid semen is first collected, the liquid semen may change to a state unsuitable for artificial insemination due to various causes. For example, over time, the activity or fertility of sperm in semen may decrease, or the activity or fertility of sperm may decrease due to contamination of foreign substances. Therefore, the semen in storage needs to be checked before use for whether the quality of semen is suitable for use in fertilization.

종래 통상적인 정액의 품질 평가 방법은, 현미경 하에서 정액을 관찰하여, 육안적으로 정자의 움직임 및 수를 관찰하는 것이었다. 그러나, 이러한 종래의 방법으로 정액을 관찰하기 위하여 포장된 용기를 개봉하여 일부분을 취해야 하고, 그에 따라 외부 환경에 의한 오염 가능성과 관찰 또는 검사 시간이 길게 소요되었고, 관찰하기 위한 기구나 장비가 필요하며 또한 정액 검사요령을 숙지하여야 되어 불편과 어려움이 많았다. The conventional method for evaluating the quality of semen has been to observe semen under a microscope and visually observe the movement and number of sperm. However, in order to observe semen by this conventional method, a packaged container needs to be opened and a part of it is taken. Therefore, the possibility of contamination by the external environment and the observation or inspection time are long, and an apparatus or equipment for observation is required. In addition, there was a lot of inconvenience and difficulty to know the semen test tips.

따라서, 정액이 보관된 용기를 직접적으로 개봉하지 않으면서도, 또한 별도의 관찰 기기를 필요하지 않으면서도 신속하게 정액의 품질을 평가할 수 있는 방법이 요구되고 있었다.Therefore, there has been a demand for a method for quickly evaluating the quality of semen without directly opening the container in which the semen is stored and without the need for a separate observation device.

본 발명자들은 이러한 종래 기술의 문제점을 해결하고자 페놀 레드를 포함하는 별도의 정액 시료를 사용하고자 하는 정액 시료와 동일한 조건에서 함께 저장 또는 보관하고, 사용 직전에 대조군 정액의 색상 변화를 관찰함으로써 정액 시료의 품질을 효과적으로 평가할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.In order to solve the problems of the prior art, the present inventors store or store together the semen sample containing phenol red under the same conditions as the semen sample, and observe the color change of the semen sample immediately before use. The present invention has been completed by discovering that quality can be effectively evaluated.

본 발명의 일 예는 정액의 품질을 효율적으로 평가하는 방법을 제공하는 것이다.One example of the present invention is to provide a method for efficiently evaluating the quality of semen.

본 발명의 다른 일 예는 정액의 품질을 효율적으로 평가하기 위한 키트를 제공하는 것이다.Another example of the present invention is to provide a kit for efficiently evaluating the quality of semen.

본 발명의 일 구체예는, 정액 시료; 및 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 저장하는 단계로서, 상기 정액 시료와 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 서로 구분된 영역에 위치하는 것인 단계;One embodiment of the present invention, the semen sample; And storing the semen sample containing phenol red, wherein the semen sample and the semen sample containing phenol red are located in regions separated from each other;

상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상을 육안으로 확인하는 단계; 및Visually confirming the color of the semen sample containing the phenol red; And

상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위에 해당하는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용가능한 것으로 판정하고, 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위를 벗어나는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용가능하지 않은 것으로 판정하는 단계;를 포함하는, 정액의 품질을 평가하는 방법을 제공한다.
When the color of the semen sample containing the phenol red is a color corresponding to the set range, it is determined that the semen sample is usable, and when the color of the semen sample containing the phenol red is a color outside the set range, And determining that the semen sample is not usable.

본 발명의 정액의 품질 평가 방법은 정액 시료; 및 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 저장하는 단계로서, 상기 정액 시료와 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 서로 구분된 영역에 위치하는 것인 단계를 포함한다. 상기 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 동일한 조건에서 저장되는 것일 수 있다. 상기 저장은 통상적으로 정액 보존에 사용되는 조건에서 저장되는 것일 수 있다. 예를 들면, 돼지 인공 수정에 사용되는 정액의 경우, 4 내지 38℃에서 저장되는 것일 수 있다. 또한, 상기 저장의 기간은 1 내지 10일의 범위일 수 있으나, 이들 예에 한정되는 것은 아니다. 상기 정액은 포유동물의 정액일 수 있다. 예를 들면, 사람, 돼지, 개, 사슴 및 소로 이루어진 군으로부터 선택되는 정액일 수 있다. Semen quality evaluation method of the present invention comprises a semen sample; And storing the semen sample containing phenol red, wherein the semen sample and the semen sample containing phenol red are located in regions separated from each other. The semen sample and the semen sample containing phenol red may be stored under the same conditions. The storage may be one stored under the conditions normally used for semen preservation. For example, in the case of semen used for pig artificial insemination, it may be stored at 4 to 38 ℃. In addition, the storage period may range from 1 to 10 days, but is not limited to these examples. The semen may be semen from a mammal. For example, it may be semen selected from the group consisting of human, pig, dog, deer and cow.

상기 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 서로 구분된 영역에 위치하는 것이면 어떠한 형태의 용기에 포함되는 것도 포함된다. 따라서, 상기 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 별도의 용기에 포함되어 있거나 동일한 용기 내의 구분된 영역에 위치하는 것일 수 있다. 동일한 용기 내의 구분된 영역에 위치하는 것은 모세관 형상의 재질 내에 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 서로 직접적으로 접촉하지 않도록 매질을 매개시켜 위치시키는 것일 수 있다. 상기 모세관 형상의 재질은 동물의 인공수정에 관련된 업계에서는 "스트로우" 또는 "정액 스트로우"라고 통칭하며 널리 사용되고 있는 것으로 보통 투명 재질, 예를 들면 플라스틱일 수 있다. 상기 매질은 상기 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 구분시키는 것으로서 반응성이 적은 물질이면 어느 것이나 될 수 있다. 예를 들면, 상기 매질은 공기층, 또는 불활성 기체를 포함하는 층일 수 있다. 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 동일한 용기 내의 구분된 영역에 위치시키는 것은, 예를 들면, 스트로우의 한쪽 말단은 섬유 영역, PVA 영역 및 섬유 영역의 순서로 채워져 있고, 다음으로 정액 시료가 채워진 다음 공기층이 채워지고, 마지막으로 대조군 정액 시료가 채워진 후 다른 쪽 말단이 밀봉된 형태의 것일 수 있다. 상기 스트로우를 채우는 방법은 먼저 섬유 영역, PVA 영역 및 섬유 영역의 순서로 채워져 있는 스트로우의 한쪽 말단에 실리콘 튜브와 연결된 주사기를 넣고 음압을 가하여 반대편 입구로부터 정액 시료, 공기 및 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 차례대로 흡입시키면, 정액 시료가 PVA 영역에 접촉하게 되면 PVA는 용해되어 굳어져 밀봉되고, 반대편 입구는 통상의 방법으로 밀봉시킨다. 통상적으로 사용되는 밀봉재는 유리볼, 목화솜, 합성섬유, 폴리비닐알콜 (PVA), 플라스틱 바 등 다양한 재질이 사용될 수 있다. PVA는 통상적으로 공기는 잘 통하고 액체는 접촉과 동시에 녹아 굳어지기 때문에 밀봉효과를 나타낸다. The semen sample and the semen sample containing phenol red are included in any type of container as long as the semen sample is located in separate areas. Therefore, the semen sample and the semen sample containing phenol red may be contained in separate containers or located in separate areas within the same container. The location of the semen sample in the same container may be mediated so that the semen sample and the semen sample including phenol red are not directly contacted with each other in the capillary material. The capillary material is commonly used in the industry related to artificial insemination of animals as "strow" or "semen straw" and may be a transparent material, for example, plastic. The medium distinguishes the semen sample from the semen sample including phenol red and may be any substance having a low reactivity. For example, the medium may be an air layer or a layer comprising an inert gas. Placing the semen sample and the semen sample containing phenol red in separate regions in the same container, for example, one end of the straw is filled in the order of the fiber region, the PVA region and the fiber region, and then the semen sample is After filling, the air layer may be filled, and finally, after the control semen sample is filled, the other end may be sealed. The method of filling the straw is first put a syringe connected to a silicone tube at one end of the straw filled in the order of the fiber zone, PVA zone and fiber zone, and apply a negative pressure to the semen sample containing the semen sample, air and phenol red from the opposite inlet If the semen sample is brought into contact with the PVA region, PVA is dissolved and hardened and sealed, and the opposite inlet is sealed in a conventional manner. Conventionally used sealing material may be used a variety of materials such as glass balls, cotton, synthetic fibers, polyvinyl alcohol (PVA), plastic bars. PVA typically has a sealing effect because air passes well and the liquid melts and solidifies upon contact.

상기 정액 시료 또는 페놀 레드를 포함하는 정액 시료가 포함되는 용기는 정액의 보존에 통상적으로 사용되는 재질의 것일 수 있다. 예를 들면, 비닐, 유리 및 플라스틱 재질로 된 것일 수 있다. 예를 들면, 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌일 수 있다. 상기 용기는 상기 정액 시료 및 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 포함하고 밀봉되어진 것일 수 있다. 상기 용기는 투명재질로 된 튜브, 예를 들면, 모세관 튜브 (straw) 형태일 수 있다.
The container containing the semen sample or the semen sample containing phenol red may be of a material commonly used for the storage of semen. For example, it may be made of vinyl, glass, and plastic. For example, it can be polyethylene or polypropylene. The container may be sealed containing a semen sample containing the semen sample and phenol red. The container may be in the form of a tube of transparent material, for example, a capillary tube.

상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료에서, 페놀 레드는 0.005 내지 0.02 % (w/v)의 농도이고, 상기 정자는 0.2 내지 1.0x108 cells/ml의 농도로 포함된 것일 수 있다. 상기 정액 시료 및 페놀 레드를 포함하는 정액 시료에서, 채취 직후의 정액 즉, 원 정액은 2 내지 200배의 비율로 희석된 것일 수 있다. 예를 들면, 소의 경우 10 내지 200배, 돼지의 경우 2 내지 40배 및 사람의 경우 2 내지 10배의 비율로 희석된 것일 수 있다. 희석되지 않은 정액 즉, 원 정액은 체외에서 통상의 액상 정액의 보존 조건에서 수 시간 이내에 사멸한다. 따라서, 원 정액에 페놀 레드를 첨가하여 색상을 구분하는 것은, 정자가 단시간 내에 사멸하기 때문에 색상을 구분할 실익이 없다. 또한, 페놀 레드의 색상은 시료 중의 정자 수의 많고 적음에 따라 달라진다. 따라서, 원 정액으로부터 적절하게 희석된 정액 시료에 대하여 색상대비표를 작성하는 것이 중요하다. 여기서 "색상대비표"란 pH에 대응되는 페놀 레드의 색상을 구분하여 표시하고, 각 구분된 색상에 대응하는 정액의 상태를 표시한 것을 말한다. 상기 최종 희석된 정액의 정자 농도는 0.2 내지 1.0x108 cells/ml의 범위일 수 있다. 상기 정액은 정액 보존액에 의하여 희석될 수 있다. 상기 정액 보존액은 정자를 사멸시키지 않고 정액이 보존될 수 있는 용액이면 어느 것이나 포함된다. 예를 들면, 상기 정액 보존액은 난황구연산산나트륨 (난구액), 난황구연산나트륨 당액, 및 분유 당액으로 이루어진 군으로부터 선택되는 용액일 수 있다. 대부분의 동물에 있어서 통상적으로 사용될 수 있는 보존액으로, 100ml 중 글루코스 (glucose) 11.0 내지 26.0g, EDTA 1.2 내지 2.4g, 소듐 시트레이트 (sodium citrate) 6.2 내지 12.4g, 소듐 히드로겐 카르보네이트 (sodium hydrogen carbonate) 1.2 내지 3.6g, 트리스(히드록시메틸)메틸아민) (tris(hydroxymethyl)methylamine) 5.0 내지 6.0g (예, 5.5g), 시스테인 (cysteine) 0.05 내지 0.07g (예, 0.07g), 및 포타슘 클로리드 (potassium chloride) 0.55 내지 0.60g (예, 0.75g)을 포함하는 정액 보존액일 수 있다 (이하 "통상적 정액 보존액"이라고도 함). 동결보존하고자 하는 정액의 경우에는 정액 보존액에는 동해 보호제, 예를 들면 침투성 동해 보호제 및/또는 비침투 동해 보호제를 포함할 수 있다. 여기에서 상기 동해 보호제로는 난황 (egg yolk), 우유 (milk), 글리세린 (glycerin) 및/또는 수크로즈 (sucrose)일 수 있다. 동물의 종류에 따라 정액 보존액과 포장 용량은 달라질 수 있다. 예를 들면, 상기 통상적 정액 보존액 외의 구연산 용액은 2.5 내지 3.5 % (w/v) (예, 2.99% (w/v)) 구연산 나트륨 용액으로 제조될 수도 있다.
In the semen sample containing the phenol red, phenol red is a concentration of 0.005 to 0.02% (w / v), the sperm may be contained in a concentration of 0.2 to 1.0x10 8 cells / ml. In the semen sample and the semen sample containing phenol red, the semen immediately after collection, that is, the original semen may be diluted in a ratio of 2 to 200 times. For example, it may be diluted in a ratio of 10 to 200 times for cattle, 2 to 40 times for pigs and 2 to 10 times for humans. Undiluted semen, ie, raw semen, dies within a few hours under the preservation conditions of ordinary liquid semen in vitro. Therefore, color separation by adding phenol red to raw semen has no benefit in distinguishing color because sperm die within a short time. The color of phenol red also depends on the high and low sperm count in the sample. Therefore, it is important to prepare a color contrast table for semen samples properly diluted from raw semen. Here, the "color contrast table" refers to the color of phenol red corresponding to pH, and displays the state of semen corresponding to each color. The sperm concentration of the final diluted semen may range from 0.2 to 1.0 × 10 8 cells / ml. The semen can be diluted by semen preservation solution. The semen preservative includes any solution that can preserve the semen without killing sperm. For example, the semen preservation liquid may be a solution selected from the group consisting of sodium yolk citrate (an egg yolk solution), sodium yolk citrate sugar solution, and milk powdered sugar solution. Preservatives that can be used commonly in most animals include 11.0 to 26.0 g of glucose, 1.2 to 2.4 g of EDTA, 6.2 to 12.4 g of sodium citrate, sodium hydrogen carbonate (sodium) hydrogen carbonate) 1.2 to 3.6 g, tris (hydroxymethyl) methylamine 5.0 to 6.0 g (eg 5.5 g), cysteine 0.05 to 0.07 g (eg 0.07 g), And 0.55 to 0.60 g (eg, 0.75 g) of potassium chloride (hereinafter also referred to as "normal semen preservation"). In the case of semen to be cryopreserved, the semen preservative may include an East Sea protectant, such as a permeable East Sea protector and / or a non-invasive East Sea protectant. Here, the East Sea protection agent may be egg yolk, milk, glycerin and / or sucrose. Depending on the type of animal, semen preservation and packaging capacity may vary. For example, a citric acid solution other than the conventional semen stock solution may be prepared from 2.5 to 3.5% (w / v) (eg, 2.99% (w / v)) sodium citrate solution.

페놀 레드는 페놀술폰프탈레인 (phenolsulfonphthalein: PSP)이라고도 한다. 페놀 레드는 pH 6.8 내지 7.7의 범위에 걸쳐서 노란색으로부터 붉은색을 나타내며, pH 7.7를 초과하는 경우, 짙은 붉은색 (dark pink color)을 띤다. 페놀 레드는 용액의 pH 수준을 나타내는 것으로 페놀 레드가 포함된 정액의 pH가 높은 상태에서는 붉은 색상을 띠며 pH가 낮은 상태에서는 노란 색상을 띤다. 정상적으로 희석된 정액은 통상 중성 수준 (pH 6.8 내지 7.2)을 나타내는데 소변이 혼입된 정액의 경우에는 pH 수준이 중성 이상으로 높아지고 (짙은 붉은 색), 오염된 정액의 경우에는 중성 이하로 낮아지게 된다 (노란색). 그러므로, 보관 중에 희석된 정액의 성상 (일반적으로 정자의 농도, 활력 및 생존율을 말함)이 나쁜 상태 (활력 또는 생존율이 20% 이하)에 있게 되면 중성의 붉은색이 짙은 붉은색이나 노란색으로 변하게 되며, pH 수준이 6.4 이하 또는 7.6 이상의 환경에서는 정자가 거의 장시간 생존할 수 없는 상태라고 할 수 있기 때문이다.
Phenol red is also known as phenolsulfonphthalein (PSP). Phenolic red ranges from yellow to red over a pH 6.8 to 7.7 range, and above pH 7.7 has a dark pink color. Phenol red represents the pH level of a solution. It is red when the pH of semen containing phenol red is high and yellow when the pH is low. Normally diluted semen usually exhibits neutral levels (pH 6.8 to 7.2), with urine-incorporated semen that the pH level rises above neutral (dark red), and contaminated semen falls below neutral ( yellow). Therefore, if the properties of the semen diluted during storage (usually sperm concentration, vitality and survival rate) are in poor condition (less than 20% vitality or survival rate), the neutral red color will change to a deep red or yellow color. This is because sperm cannot survive for a long time in an environment of pH 6.4 or below or 7.6 or above.

상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료가 포함되는 영역 또는 별도의 용기는 투명한 것으로서 내용물의 색상을 확인할 수 있는 재질일 수 있다. 상기 별도의 용기는 예를 들면, 비닐, 유리 및 플라스틱 재질로부터 선택된 된 것일 수 있다. 상기 플라스틱 재질은 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌일 수 있다. 상기 별도의 용기는 투명재질로 된 튜브, 예를 들면, 모세관 튜브 (straw) 형태일 수 있다.
The area or the separate container containing the semen sample containing the phenol red may be a material capable of identifying the color of the contents as transparent. The separate container may be selected from, for example, vinyl, glass and plastic materials. The plastic material may be polyethylene or polypropylene. The separate container may be in the form of a tube of transparent material, for example, a capillary tube (straw).

본 발명의 정액의 품질 평가 방법은 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상을 육안으로 확인하는 단계를 포함한다. 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상을 육안으로 확인으로써 다른 기기를 사용하지 않고도 정액의 정상 여부를 판정할 수 있는 것이다.
The method of evaluating the quality of semen of the present invention includes visually confirming the color of the semen sample containing the phenol red. By visually checking the color of the semen sample containing phenol red, it is possible to determine whether the semen is normal without using other equipment.

본 발명의 정액의 품질 평가 방법은 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위에 해당하는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용 또는 수정가능한 것으로 판정하고, 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위를 벗어나는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용 또는 수정가능하지 않은 것으로 판정하는 단계를 포함한다. In the method for evaluating the quality of semen of the present invention, when the color of the semen sample containing phenol red is a color corresponding to a set range, the semen sample is determined to be usable or correctable, and the semen sample containing phenol red is determined. If the color is outside the set range, the semen sample comprises determining that it is not to be used or correctable.

상기 설정된 범위는 대부분의 정액 (사람, 소, 돼지, 개, 사슴 등)의 품질 평가에 적용될 수 있다. 예를 들면, 상기 정액이 사람의 희석된 정액인 경우, 상기 정액의 성상이 정상적인 경우에는 설정된 범위에 해당하는 색상이 pH 6.8 내지 7.2에 해당하는 색상이 되고, 비정상적인 정액 (농도나 활력이 정상 수준보다 매우 낮은 상태)의 경우에는 pH 6.4 이하 또는 pH 7.6 이상에 해당하는 색상이 된다. The set range can be applied to the quality evaluation of most semen (humans, cows, pigs, dogs, deer, etc.). For example, when the semen is a diluted semen of human, when the semen is normal, the color corresponding to the set range is a color corresponding to pH 6.8 to 7.2, abnormal semen (concentration or vitality is normal level) Much lower), the color being below pH 6.4 or above pH 7.6.

상기 정액 품질을 판정하는 단계는 육안으로 관찰된 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상과 pH에 대응되는 색상이 연속적으로 표시된 색상대비표를 비교하여, 설정된 범위의 색상인지를 결정하는 것일 수 있다. 그 결과, 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위에 해당하는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용가능한 것으로 판정하고, 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위를 벗어나는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용가능하지 않은 것으로 판정할 수 있다. The determining of the semen quality may be to determine whether the color of the semen sample including phenol red observed by the naked eye and the color corresponding to the pH are continuously compared with the color contrast table displayed, and determine whether the color is in the set range. As a result, when the color of the semen sample containing phenol red is the color corresponding to the set range, the semen sample is determined to be usable, and the color of the semen sample containing the phenol red is a color outside the set range. In that case, the semen sample may be determined to be unavailable.

"정액의 품질"이란 정액의 수정 능력과 관련된 상태를 포함하는 의미로 해석된다. 즉, 정액의 pH 조건이 정상 범위에 포함되는 것인지를 판단함으로써, 정액이 외래 균에 오염되어 세균 등을 많이 포함하고 있는 상태, 또는 소변이 혼입되어 정자가 많이 사멸되어 있는 상태 등에 의하여 정액이 수정 가능한 정액 상태인지 수정되지 못할 정액 상태인지를 판정할 수 있다. 따라서, 상기 정액의 품질은 제시된 페놀 레드의 색상대비표에 의해 유효한 정액인지 유효하지 못한 정액인지를 구분할 수 있도록 나타내는 것을 포함한다.
"Quality of semen" is to be interpreted to include the condition associated with the ability to correct semen. In other words, by determining whether the pH condition of semen is within the normal range, the semen is corrected by a state in which semen is contaminated with foreign bacteria and contains a lot of bacteria, or a state where urine is mixed and a lot of sperm are killed. It is possible to determine whether there is a possible semen state or a semen state that cannot be corrected. Therefore, the quality of the semen may be represented by distinguishing whether it is valid semen or invalid semen according to the color contrast table of phenol red.

본 발명의 일 구체예는, 정액을 포함하는 제1 용기; 페놀 레드를 포함하는 보존액으로 희석된 정액 시료를 포함하는 제2 용기; 및 pH에 대응되는 색상이 연속적으로 표시된 색상대비표를 포함하는, 정액의 품질을 판정하기 위한 키트를 제공한다. One embodiment of the present invention, the first container containing the semen; A second container containing a seminal sample diluted with a preservative comprising phenol red; And a color contrast table in which colors corresponding to pH are continuously displayed.

상기 제1 용기는 정액의 보존에 통상적으로 사용되는 재질의 것일 수 있다. 상기 제1 용기는 예를 들면, 비닐, 유리 및 플라스틱 재질로 된 것일 수 있다. 상기 플라스틱은 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌일 수 있다. 상기 제1 용기는 상기 정액 시료를 포함하고 밀봉되어진 것일 수 있다. 상기 제1 용기는 투명 또는 불투명 재질로 된 것일 수 있다. 제1 용기 예를 들면, 모세관 튜브 (straw)와 같은 튜브 형태, 주입병 또는 팩의 형태일 수 있다. The first container may be of a material commonly used for the storage of semen. The first container may be made of, for example, vinyl, glass, or plastic. The plastic can be polyethylene or polypropylene. The first container may be one containing the semen sample and sealed. The first container may be made of a transparent or opaque material. The first container may be in the form of a tube, such as a capillary tube, in the form of an infusion bottle or a pack.

상기 제2 용기는 정액의 보존에 통상적으로 사용되는 재질의 것일 수 있다. 상기 제2 용기는 예를 들면, 비닐, 유리 및 플라스틱 재질로 된 것일 수 있다. 상기 플라스틱은 폴리에틸렌 또는 폴리프로필렌일 수 있다. 상기 제2 용기는 상기 페놀 레드가 포함된 정액 시료를 포함하고 밀봉되어진 것일 수 있다. 상기 제2 용기는 투명 재질로 된 것일 수 있다. 제2 용기는 예를 들면, 모세관 튜브 (straw)와 같은 튜브 형태일 수 있다. The second container may be of a material commonly used for the storage of semen. The second container may be made of, for example, vinyl, glass, or plastic. The plastic can be polyethylene or polypropylene. The second container may be sealed containing a semen sample containing the phenol red. The second container may be made of a transparent material. The second container may be in the form of a tube, for example a capillary tube.

상기 pH에 대응되는 색상이 연속적으로 표시된 색상대비표에 대하여는 상기한 바와 같다.
The color contrast table in which the color corresponding to the pH is continuously displayed is as described above.

본 발명의 정액의 품질을 평가하는 방법에 따르면, 정액을 사용하기 직전에 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상을 육안으로 확인함으로써 신속하고 편리하게 정액의 품질을 평가할 수 있다.According to the method for evaluating the quality of semen of the present invention, the quality of semen can be evaluated quickly and conveniently by visually confirming the color of the semen sample containing phenol red immediately before using semen.

본 발명의 정액의 품질을 판정하기 위한 키트에 의하면, 정액의 품질을 효율적으로 평가하는데 사용될 수 있다. According to the kit for determining the quality of semen of the present invention, it can be used to efficiently evaluate the quality of semen.

도 1은 색상대비표의 일 예를 나타내는 도면이다.
도 2는 색상대비표와 정액의 품질과 연관된 정보를 나타내는 도면이다.
도 3은 스트로우 형태의 동일한 용기 내의 구분된 영역 내에 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료가 포함된 예를 나타내는 도면이다.
도 4는 도 3의 스트로우의 구조를 도식적으로 나타낸 도면이다.
도 5는 수정에 사용되어질 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료가 별도의 용기에 포함된 예를 나타낸 도면이다.
도 6은 본 발명의 정액의 품질을 평가하는 방법의 흐름도를 나타내는 도면이다.1 is a diagram illustrating an example of a color contrast table.
2 is a diagram showing information related to the quality of the color contrast table and semen.
FIG. 3 is a view showing an example in which a semen sample and a semen sample including phenol red are included in separate regions in the same container in a straw form.
4 is a diagram schematically illustrating the structure of the straw of FIG. 3.
FIG. 5 is a view showing an example in which a semen sample to be used for fertilization and a semen sample including phenol red are included in separate containers.
6 is a flowchart illustrating a method of evaluating the quality of semen of the present invention.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예Example 1: 품질 판정용 페놀  1: Phenol for quality determination 레드Red 용액을 포함하는 정액 제조 Semen preparation containing solution

(1) 사람, 소 및 사슴 정액의 품질 평가(1) quality assessment of human, cow and deer semen

사람, 소 및 사슴과 같은 수정에 사용되는 정액의 양이 적은 동물에 대하여는, 동일한 용기 내에 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 주입하고, 이들을 불활성 매질로 구분시켜 직접적으로 접촉하지 못하도록 하였다. Animals with a small amount of semen used for fertilization, such as humans, cows and deer, were injected with semen samples and sperm samples containing phenol red in the same container, and these were classified into an inert medium to prevent direct contact.

품질 판정용 페놀 레드 용액을 포함하는 정액 (이하 대조군 정액 시료라 함)은 다음과 같이 제조하였다. 먼저, 채취된 정액을 보존액 또는 희석액으로 희석하였다. 상기 정액 보존액은 동물 종에 따라 조성은 차이가 있으며, 본 실시예에서는 모든 동물 종에 통상적으로 적용가능하고 상업적으로 가능한 보존액인 m-AndrohepTM (Minitube of America, Verona, Wis.)을 사용하였다. m-AndrohepTM (Minitube of America, Verona, Wis.)은 제조자의 지침에 따라 준비하여 사용하였다.Semen containing phenol red solution for quality determination (hereinafter referred to as control semen sample) was prepared as follows. First, the collected semen was diluted with a stock solution or diluent. The semen preservation liquid has a different composition depending on the animal species, and in this embodiment, m-Androhep ™ (Minitube of America, Verona, Wis.), Which is commonly applicable to all animal species and commercially available, was used. m-Androhep ™ (Minitube of America, Verona, Wis.) was prepared and used according to the manufacturer's instructions.

원 정액을 희석한 결과, 정액 중의 정자의 최종 농도가 0.2~1.0x 108 cells/ml가 되도록 하였다. 정자의 최종 농도는 동물에 따라 농도가 약간 다를 수 있으며, 정해진 농도에 따라 페놀 레드의 함량도 조정하게 된다. 상기 희석 정액의 일부에 페놀 레드 0.005 내지 0.01% (w/v)를 포함시켜 대조군 정액 시료를 얻었다. 이렇게 얻어진 희석된 정액 시료와 대조군 정액 시료를 동일한 용기 즉, 정액 스트로우 내의 별도로 구획된 구분된 영역에 각각 주입하고 밀봉한 다음 보관하였다. 정액의 보관은 액상 정액의 경우는 4~17℃에서 보관하고, 동결정액의 경우에는 -196℃ 정도에서 보관하였다. 동결정액의 경우에는 보존액 중에 동해보호제로 난황이나 우유를 포함시켰다. As a result of diluting the raw semen, the final concentration of sperm in the semen was 0.2-1.0x10 8 cells / ml. The final concentration of sperm may vary slightly from animal to animal, depending on the concentration of phenol red. A part of the diluted semen contained 0.005% to 0.01% (w / v) of phenol red to obtain a control semen sample. The diluted semen sample and the control semen sample thus obtained were injected, sealed, and stored in the same container, that is, separately divided areas in the semen straw. The semen was stored at 4 ~ 17 ℃ for liquid semen and -196 ℃ for copper crystal solution. In the case of the copper crystal solution, yolk or milk was included as a protector for the East Sea.

상기 정액은 보관 후 사용 직전에 정액 시료의 품질이 정상인지 여부를 별도 구획된 페놀 레드 포함 정액의 색상을 제시된 색상대비표와 비교하여 사용될 정액의 품질을 기기나 장비 없이 육안적으로 간단하게 판정될 수 있음은 자명한 사실이다.The semen can be determined visually and simply without equipment or equipment by comparing the color of semen with separate phenol red to the presented color contrast table to determine whether the quality of semen sample is normal immediately before use after storage. It can be obvious.

도 1은 색상대비표의 일 예를 나타내는 도면이다. 도 1에서, 색상대비표는 pH 6.2 내지 8.0에서 10개 색상으로 구분되어 있고, pH 6.8 내지 7.4에 해당하는 색상이 적정 색상으로 설정되어 있다. 1 is a diagram illustrating an example of a color contrast table. In FIG. 1, the color contrast table is divided into 10 colors at pH 6.2 to 8.0, and the color corresponding to pH 6.8 to 7.4 is set to an appropriate color.

도 2는 색상대비표와 정액의 품질과 연관된 정보를 나타내는 도면이다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 색상대비표에는 pH 6.8 내지 7.2에 해당하는 색상이 적정 색상으로 표시되어 있고, 정액이 수정에 사용가능한지, 불가능하지 또는 사용하기에 의심스러운 상태인지를 표시하였다. 또한, 색상대비표의 색상에 대응되는 정자의 활력 범위도 백분율로 표시하였다. 2 is a diagram showing information related to the quality of the color contrast table and semen. As shown in FIG. 2, the color contrast table indicates that the color corresponding to pH 6.8 to 7.2 is indicated by the appropriate color, and whether semen is available for fertilization, is not possible or suspected to use. In addition, the vitality range of sperm corresponding to the color of the color contrast table is also expressed as a percentage.

상기에서 제시된 색상대비표는 동물의 종류나 간편하게 적용시킬 용도에 따라 2단계 내지 10단계로도 구분하여 제시 될 수도 있으며, 이는 더욱 간편하게 구분하기 위한 것이거나 더욱 자세하게 구분하기 위한 것일 뿐이다. 각 색상 대비표의 단계별 정액 품질의 정도는 색상이 정액 품질의 정도를 알려줄 수 있음을 보여주고 있다. The color contrast table presented above may be presented in two to ten stages depending on the type of animal or the purpose of the application, which is simply to distinguish it more easily or to classify it in more detail. The level of semen quality in each color contrast table shows that the color can indicate the degree of semen quality.

도 3은 스트로우 형태의 동일한 용기 내의 구분된 영역 내에 정액 시료와 대조군 정액 시료가 포함된 예를 나타내는 도면이다. 도 3에 나타낸 바와 같이, 스트로우에 포장되는 정액의 경우 실제 주입될 정액은 스트로우의 왼쪽 (노란색 부분)에 포장하고 동일한 정액에 색상변화에 의한 품질을 평가하기 위한 페놀 레드 포함 정액 (대조군 정액 시료)을 스트로우의 오른쪽 (적색 부분)의 영역에 공기층을 매개하여 소량 구획 포장하여 시간 경과, 오염 및 보관상의 잘못으로 정액 품질에 문제가 발생하였을 경우에는 처음 포장시의 수정 가능 색상이 노란색이나 짙은 붉은색으로 변화됨으로써 그 변화 정도를 제시된 색상대비표와 비교하여 주입 또는 사용 전 정액의 품질을 누구라도 육안적으로 간단히 확인할 수 있도록 구성한 정액이다.FIG. 3 is a diagram illustrating an example in which a semen sample and a control semen sample are included in separate areas in the same container in a straw form. As shown in Fig. 3, in the case of semen packaged in the straw, the semen to be injected is packaged on the left side (yellow part) of the straw and the sperm containing phenol red for evaluating the quality by color change in the same semen (control semen sample). In the area on the right side of the straw (red portion), a small portion of the pavement is packaged through the air layer, and if the semen quality problem occurs due to time lapse, contamination, or storage error, the correctable color at the time of first packing is yellow or dark red. By changing the degree of change compared with the presented color contrast table, the semen is configured so that anyone can easily check the quality of semen before injection or use.

도 4는 도 3의 스트로우의 구조를 도식적으로 나타낸 도면이다. 도 4에 나타낸 바와 같이, 모세관으로 된 스트로우의 좌측 말단은 섬유영역 (10)과 섬유영역 (30) 사이에 PVA 분말 (20)이 채워져 있고, 그 다음에 정액 시료 (40)와 대조군 정액 시료 (60)가 공기층 (50)에 의하여 직접 접촉하지 않도록 분리되어 있다. 다른 쪽 말단인 우측 말단은 밀봉 수단에 의하여 밀봉 (70)되어 있다. 도 4에 나타낸 바에 의하면, 정액과 대조군 정액이 동일한 스트로우 내에 구분되게 포함됨으로써, 별도의 대조군 정액을 포함한 용기를 다룰 필요 없이, 동일한 조건에서 저장할 수 있고, 사용 직전에 정액 시료의 품질을 대조군 정액 시료의 색상을 색상대비표의 색상과 비교하여 확인할 수 있다는 효과가 있다. 4 is a diagram schematically illustrating the structure of the straw of FIG. 3. As shown in Fig. 4, the left end of the capillary straw is filled with PVA powder 20 between the fiber region 10 and the fiber region 30, and then the semen sample 40 and the control semen sample ( 60 are separated so that they are not in direct contact by the air layer 50. The right end, the other end, is sealed 70 by sealing means. As shown in FIG. 4, since semen and control semen are separately included in the same straw, the semen and control semen can be stored under the same conditions without having to handle a container containing a separate control semen, and the quality of the semen sample immediately before use can be controlled. It is effective to check the color of the color by comparing with the color of the contrast table.

(2) 돼지, 개 및 말 정액의 품질 평가(2) quality assessment of pig, dog and horse semen

수정 또는 사용시 주입 정액량이 많은 돼지, 개 및 말 등과 같은 동물 정액의 경우에는 정액 품질을 평가할 수 있도록 페놀 레드 포함 정액 (대조군 정액 시료)이 별도의 용기에 제공될 수도 있다. 즉, 수정에 사용될 정액 시료는 제1 용기에 포함하고, 페놀 레드 포함 정액 (대조군 정액 시료)은 제2 용기에 포함시키고, 제2 용기는 제1 용기에 부착시켜 동일한 조건하에서 저장될 수 있도록 한 것일 수 있다. 여기에서 페놀 레드 포함 정액이란 주입될 정액의 품질을 대신해서 판정받을 수 있도록 구성된 키트라고도 할 수 있다. 주입될 정액을 주입병이나 주입팩 등과 같은 제1용기에 포장하고, 주입될 정액의 일부를 취하고 여기에 페놀 레드를 첨가하여 색상을 조정한 대조군 정액을 제조한다. 다음으로, 소형 스트로우와 같은 제2 용기에 별도로 상기 대조군 정액을 포장하여 제1용기에 부착시킬 수 있다. 주입될 정액의 품질은 제1 용기에 부착되어진 제2 용기 내의 페놀 레드 색상과 색상대비표와 비교하여 주입 가능한 품질의 정액인지의 여부를 판정함으로써 판정될 수 있다.
In the case of animal semen, such as pigs, dogs, and horses, which have a large amount of injected semen when fertilized or used, semen containing phenol red (control semen sample) may be provided in a separate container so as to evaluate semen quality. That is, the semen sample to be used for fertilization is included in the first container, the phenol red-containing semen (control semen sample) is included in the second container, and the second container is attached to the first container so that it can be stored under the same conditions. It may be. Here, sperm-containing semen can be referred to as a kit configured to be judged on behalf of the quality of the semen to be injected. The semen to be injected is packaged in a first container such as an injection bottle or an injection pack, and a portion of the semen to be injected is taken and phenol red is added thereto to prepare a control semen adjusted in color. Next, the control semen may be packaged separately in a second container such as a small straw and attached to the first container. The quality of semen to be injected can be determined by judging whether it is semen of injectable quality compared to the phenol red color and color contrast table in the second container attached to the first container.

도 5는 수정에 사용되어질 정액 시료와 대조군 정액 시료가 별도의 용기에 포함된 예를 나타낸 도면이다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 수정에 사용될 정액 시료는 많은 양이므로 흰색의 주입병 (제1 용기)에 주입하고, 대조군 정액 시료는 스트로우 형태의 제2 용기에 주입한 후 제1 용기에 부착시켜 사용한다. 이렇게 부착시켜 사용함으로써 제1 용기 및 제2 용기는 동일한 조건에서 저장될 수 있고, 편리하게 사용할 수 있다. 5 is a view showing an example in which a semen sample and a control semen sample to be used for fertilization are contained in separate containers. As shown in Fig. 5, since the semen sample to be used for fertilization is a large amount, it is injected into a white injection bottle (first container), and the control semen sample is injected into a second container in a straw form and then attached to the first container. do. By attaching and using in this manner, the first container and the second container can be stored under the same conditions and can be conveniently used.

이와 같이, 정액 시료와 대조군 정액 시료가 별도의 용기에 포함시키는 것은 수정에 사용되는 정액의 양이 많은 동물의 경우, 하나의 용기에 정액 시료와 대조군 정액 시료를 모두 포함시키기 어려운 경우에도 특히 유용할 수 있다. 많은 양의 정액이 사용되어지는 동물의 경우에 주입병 뿐만 아니라 팩으로 형성된 재질의 용기도 포함될 수 있음은 분명한 사실이다. As such, the inclusion of the semen sample and the control semen sample in a separate container may be particularly useful in cases where it is difficult to include both the semen sample and the control semen sample in one container for animals with a large amount of semen used for fertilization. Can be. It is clear that animals containing large amounts of semen may include not only injection bottles but also containers of pack material.

도 6은 본 발명의 정액의 품질을 평가하는 방법의 흐름도를 나타내는 도면이다.
6 is a flowchart illustrating a method of evaluating the quality of semen of the present invention.

실시예Example 2: 페놀  2: phenol 레드Red 포함 정액의 품질을 평가할 수 있도록 색상대비표 (또는 조견표)가 함께 제시되는 정액 Semen with a color contrast chart (or lookup table) to assess the quality of the semen

페놀 레드 포함 정액 (대조군 정액)이란 사용될 정액 포장 용기 내에 별도로 구획되어 충진되었거나 별도 용기에 충진되었거나 간에 사용될 정액의 품질을 평가 가능하도록 페놀 레드 색상대비표 (또는 조견표)와 함께 제시된 정액을 말한다. 여기에서 색상대비표란 제시되는 색상대비표의 색상에 따른 정액 성상의 품질이 어느 정도인지를 제시한 조견표로 사용 직전 페놀 레드의 변화된 색상 정도에 따라 사용 가능 여부와 품질 정도가 어느 수준인지를 쉽게 확인할 수 있도록 한 것이다.Semen with phenol red (control semen) refers to semen presented with a phenol red contrast table (or lookup table) to assess the quality of semen used separately in the semen packaging container to be used or in a separate container. Here, the color contrast table is a lookup table that shows the quality of semen properties according to the color of the color contrast table presented, and it is easy to check the availability and quality level according to the changed color level of phenol red just before use. I would have to.

'페놀 레드 포함 정액의 품질을 평가할 수 있도록 색상대비표 (또는 조견표)와 함께 제시되는 정액’이란 사용 직전 정액 품질의 정도를 알려주는 색상대비표가 동시에 존재하여야 함은 자명한 사실이다. 단, 동일 개체의 정액이 빈번하게 반복되어 사용될 경우에는 색상대비표가 반드시 정액과 동시에 존재되지 않을 수 있다는 것도 분명한 사실이다.
Semen is presented with a color contrast table (or lookup table) to assess the quality of semen containing phenol red. It is obvious that a color contrast table must be present at the same time indicating the level of semen quality immediately before use. However, it is also clear that the color contrast table may not necessarily exist at the same time when semen from the same individual is used repeatedly.

주입될 정액의 양이 많은 동물의 경우, 정액 시료를 대용량의 용기 예를 들면, 정액 병 또는 팩에 주입하고, 대조군 정액 시료와 색상대비표를 상기 대용량의 용기에 각각 부착시킨 형태로 사용될 수 있다. 정액 시료를 사용하기 직전에, 대조군 정액의 색상을 색상대비표의 색상과 비교한 후 주입 가능한 정액인지를 판정할 할 수 있다.
For animals with a large amount of semen to be injected, the semen sample may be injected into a large container, for example, a semen bottle or a pack, and a control semen sample and a color contrast table may be attached to the large container. . Immediately before using the semen sample, the color of the control semen can be compared with the color of the color contrast table to determine whether it is an injectable semen.

실시예Example 3: 본 발명의 품질 평가 방법과 정액의 수정능력의 상관 관계 3: Correlation between Quality Evaluation Method of the Present Invention and Semen Fertility

페놀 레드 색상 변화에 의하여 품질 판정된 정액의 품질 평가 결과가 어느 정도 신뢰성을 갖는 것인지 확인하기 위하여 먼저, 정액 보존액 및 보존기간에 따른 정액의 품질 변화를 판정하였다. In order to confirm how reliable the quality evaluation result of semen quality determined by the phenol red color change was, first, the quality change of semen according to the semen stock solution and the storage period was determined.

돼지 액상 정액의 보존 기간별 대조군 정액의 색상에 의한 간편 품질평가 결과Results of Simple Quality Evaluation by Color of Control Semen by Storage Period of Liquid Sperm 보존기간 (일)Retention period (days) 1One 33 55 77 99 정확한 진단수
/대상 정액수Accurate diagnosis
/ Target semen 18/1818/18 18/1818/18 18/1818/18 17/1817/18 17/1817/18 정확도 (%)accuracy (%) 100100 100100 100100 94.594.5 94.594.5

* 정확한 진단 : 색상 대비 결과 정액의 활력이 80% 이상인 경우로 함.* Accurate diagnosis: When the color contrast result is more than 80% of semen vitality.

표 1에서, 돼지 정액은 Androhep PLUSTM (Minitube of America, Verona, Wis.)을 사용하여 2 내지 40배 희석한 돼지 정액을 4 내지 38℃에서 9일 동안 저장한 것이었다.
In Table 1, the pig sperm was a pig semen diluted 2 to 40 fold using Androhep PLUS ™ (Minitube of America, Verona, Wis.) For 9 days at 4 to 38 ° C.

돼지 액상 정액의 보존액 및 보존기간별 평균 페놀 레드 용액의 색상과 활력의 변화Changes in Color and Vitality of Porcine Liquid Semen and Mean Phenol Red Solution by Preservation Period 보존액/보관기간 (일)Retention / Storage Period (Days) 1One 33 55 77 99 Androhep PLUSAndrohep PLUS 운동성motility 92.8±2.992.8 ± 2.9 88.6±3.288.6 ± 3.2 84.6±3.384.6 ± 3.3 82.3±2.982.3 ± 2.9 75.6±4.175.6 ± 4.1 색상단계
(pH)Color level
(pH) 5.2
(7.2)5.2
(7.2) 5.2
(7.2)5.2
(7.2) 5.3
(7.3)5.3
(7.3) 5.3
(7.3)5.3
(7.3) 5.4
(7.4)5.4
(7.4) BTSBTS 운동성motility 91.5±3.291.5 ± 3.2 85.4±2.685.4 ± 2.6 80.6±3.380.6 ± 3.3 73.2±2.573.2 ± 2.5 65.5±4.265.5 ± 4.2 색상단계
(pH)Color level
(pH) 4.9
(6.8)4.9
(6.8) 5.0
(7.0)5.0
(7.0) 5.3
(7.4)5.3
(7.4) 5.7
(7.8)5.7
(7.8) 6.2
(8.3)6.2
(8.3)

표 2의 자료는 10 단계 페놀 레드 색상대비표 적용 시 자료임. The data in Table 2 is based on the 10-step phenol red color contrast table.

표 2에서, Androhep PLUS는 Androhep PLUSTM (Minitube of America, Verona, Wis.)를 나타내고, BTS는 Beltsville Thawing Solution을 나타내는 것으로 당업계에 통상적으로 사용되는 정액 보존액이다 (L.A. Johnson et al. Reproduction in Domestic Animals, Vol. 23, Issue 3, pp.49-55, May 1988). 돼지 정액은 Androhep PLUSTM와 BTS을 각각 사용하여 2 내지 40배 희석한 돼지 정액을 4 내지 38℃에서 9일 동안 저장한 것이었다.In Table 2, Androhep PLUS stands for Androhep PLUS TM (Minitube of America, Verona, Wis.) And BTS stands for Beltsville Thawing Solution, a semen stock solution commonly used in the art (LA Johnson et al. Reproduction in Domestic Animals, Vol. 23, Issue 3, pp. 49-55, May 1988). Pork semen was stored for 9 days at 4 to 38 ℃ the pig semen diluted 2 to 40 times using Androhep PLUS TM and BTS, respectively.

주입 직전 품질 확인 또는 판정 후 인공수정이 수태율에 미치는 효과Effect of Insemination on Fertility Rate after Quality Check or Judgment Just Before Injection 보존액/보관기간 (일)Retention / Storage Period (Days) 1One 33 55 77 대조군(BTS)Control (BTS) 수정두수
(NR 두수)Correction head
(NR heads) 25
(23)25
(23) 2525 2424 2020 수태율Conception rate 90.2±5.290.2 ± 5.2 85.4±5.585.4 ± 5.5 74.6±8.574.6 ± 8.5 63.2±7.563.2 ± 7.5 페놀 레드 함유 Androhep PLUSAndrohep PLUS with Phenolic Red 수정두수
(NR 두수)Correction head
(NR heads) 2525 2525 2424 2424 수태율Conception rate 92.4±2.492.4 ± 2.4 90.2±5.290.2 ± 5.2 87.3±4.887.3 ± 4.8 85.2±5.285.2 ± 5.2

정액의 품질을 평가하여 사용가능한지 여부를 결정한 후, 인공수정을 진행한 경우에는 돼지의 수태율을 10% 이상 향상되었음을 확인하였다. 이렇게 얻어진 수태율을, 정액의 품질을 평가하지 않고 종래의 통상적인 방법으로 주입하는 경우와 비교한 결과 보존기간이 5일 이후에는 10% 이상의 수태율 상승 효과가 있었다. 이는 주입 직전 정액의 품질을 평가하는데 있어서 간편한 품질평가가 가능할 수 있도록 구성된 정액의 이용 또는 사용은 그렇지 않은 정액의 이용보다 생산성의 증가 즉, 수태율 향상에 의한 생산성 증가될 수 있다는 것을 나타낸다. After evaluating the quality of semen and determining whether it can be used, it was confirmed that the fertility rate of pigs was improved by 10% or more when artificial insemination proceeded. As a result of comparing the conception rate obtained as described above with the conventional conventional method without evaluating the quality of semen, the retention period was more than 10%. This indicates that the use or use of semen configured to enable simple quality assessment in evaluating the quality of semen immediately before infusion can increase productivity, ie, increase in fertility rate, than use of semen that is not.

Claims (9)

정액 시료; 및 페놀 레드를 포함하는 정액 시료를 저장하는 단계로서, 상기 정액 시료와 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 서로 구분된 영역에 위치하는 것인 단계;
상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상을 육안으로 확인하는 단계; 및
상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위에 해당하는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용가능한 것으로 판정하고, 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상이 설정된 범위를 벗어나는 색상인 경우, 상기 정액 시료는 사용가능하지 않은 것으로 판정하는 단계;를 포함하는, 정액의 품질을 평가하는 방법. Semen samples; And storing the semen sample containing phenol red, wherein the semen sample and the semen sample containing phenol red are located in regions separated from each other.
Visually confirming the color of the semen sample containing the phenol red; And
When the color of the semen sample containing the phenol red is a color corresponding to the set range, it is determined that the semen sample is usable, and when the color of the semen sample containing the phenol red is a color outside the set range, Determining that the semen sample is not usable. 제1항에 있어서, 상기 정액 시료는 사람, 돼지, 개, 사슴 및 소로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.The method of claim 1, wherein the semen sample is selected from the group consisting of human, pig, dog, deer, and cow. 제1항에 있어서, 상기 설정된 범위에 해당하는 색상은 pH 6.8 내지 7.2에서의 페놀 레드의 색상인 것인 방법. The method of claim 1, wherein the color corresponding to the set range is the color of phenol red at pH 6.8 to 7.2. 제1항에 있어서, 상기 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 별도의 용기에 포함되게 하거나 동일한 용기 내의 구분된 영역에 위치하는 것인 방법.The method of claim 1, wherein the semen sample and the semen sample comprising phenol red are contained in separate containers or located in separate areas within the same container. 제4항에 있어서, 상기 정액 시료와 페놀 레드를 포함하는 정액 시료는 동일한 밀봉된 스트로우 내에 존재하고 공기층에 의하여 서로 구분되어 있는 것인 방법.5. The method of claim 4, wherein the semen sample and the semen sample comprising phenol red are present in the same sealed straw and are separated from each other by an air layer. 제1항에 있어서, 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료에서, 페놀 레드는 0.005 내지 0.01% (w/v)의 농도이고, 상기 정액은 0.2 내지 1.0x108 cells/ml의 농도 범위로 존재시키는 방법. The method of claim 1, wherein in the semen sample containing phenol red, phenol red is present at a concentration of 0.005 to 0.01% (w / v) and the semen is present at a concentration range of 0.2 to 1.0 × 10 8 cells / ml. . 제1항에 있어서, 상기 대조군 정액 시료는, 사람, 소, 돼지, 사슴 및 개로 이루어진 군으로부터 선택된 동물에 통용될 수 있는 정액 보존액으로서, 100ml 중 글루코스 11.0 내지 26.0g, EDTA 1.2 내지 2.4g, 소듐 시트레이트 6.2 내지 12.4g, 소듐 히드로겐 카르보네이트 1.2 내지 3.6g, 트리스(히드록시메틸)메틸아민) 5.0 내지 6.0g, 시스테인 0.05 내지 0.07g, 및 포타슘 클로리드 0.55 내지 0.60g을 포함하는 정액 보존액으로 희석된 것인 방법. According to claim 1, wherein the control semen sample is a semen preservative that can be commonly used in animals selected from the group consisting of humans, cows, pigs, deer and dogs, glucose 11.0 to 26.0g, EDTA 1.2 to 2.4g, sodium in 100ml Semen comprising citrate 6.2-12.4 g, sodium hydrogen carbonate 1.2-3.6 g, tris (hydroxymethyl) methylamine) 5.0-6.0 g, cysteine 0.05-0.07 g, and potassium chloride 0.55-0.60 g Dilute with preservative. 제1항에 있어서, 상기 판정하는 단계는 육안으로 관찰된 상기 페놀 레드를 포함하는 정액 시료의 색상과 pH에 대응되는 색상이 연속적으로 표시된 색상대비표를 비교하여, 설정된 범위의 색상인지를 결정하는 것인 방법. The method of claim 1, wherein the determining comprises comparing the color of the sperm sample including the phenol red and the color corresponding to the pH continuously with the color contrast table displayed continuously to determine whether the color is within the set range. How. 정액을 포함하는 제1 용기; 페놀 레드를 포함하는 보존액으로 희석된 정액 시료를 포함하는 제2 용기; 및 pH에 대응되는 색상이 연속적으로 표시된 색상대비표를 포함하는, 정액의 품질을 결정하기 위한 키트.A first container containing semen; A second container containing a seminal sample diluted with a preservative comprising phenol red; And a color contrast table in which colors corresponding to pH are continuously displayed.
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CN103364396A (en) * 2012-03-27 2013-10-23 李章熙 Method and tool for evaluating semen quality

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