KR20120031748A - Cell culture container and method of fabricating the same - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A container for cell cultures for enhancing proliferation and differentiation efficiency of various cells including adult stem cells is provided to save cost and time for cell culturing. CONSTITUTION: A container for cell cultures contains a cell culture side(11) for proliferating and differentiating adult stem cells by adhering to the adult stem cells. The cell culture side has a micro structure(11a) placed on a cell culture side at a predetermined interval. The micro structure has a protrusion. The container is placed on the upper side of the micro structure at a predetermined interval and has a plurality of nano structures. The contact angle of the cell culture side and water is 50 degrees or more. The micro structure is formed of thermoplastic resin, thermosetting resin, or an elastomer.

Description

세포 배양용 용기 및 그 제조 방법{CELL CULTURE CONTAINER AND METHOD OF FABRICATING THE SAME}Cell culture container and its manufacturing method {CELL CULTURE CONTAINER AND METHOD OF FABRICATING THE SAME}

본 발명은 세포 배양용 용기 및 그 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 세포 배양면에 마이크로 또는 나노 구조물을 포함하여 증식 및 분화 효율을 향상시킨 세포 배양용 용기 및 그 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a cell culture container and a method for manufacturing the same, and more particularly, to a cell culture container and a method for producing the same, including micro or nanostructures on the cell culture surface to improve the proliferation and differentiation efficiency.

현재 질병의 치료에 배양 세포들을 이용하는 세포 치료가 확대됨에 따라 세포 배양에 대한 관심이 높아지고 있다. 배양계(culture system)에는 다양한 기기들이 관계하고 있으며, 이에 있어서 중요한 요소 중의 하나가 세포 배양용 용기이다. 일반적으로 많은 수의 세포를 얻기 위하여, 배양 세포의 특성에 따라 인공적으로 만들어진 배양 접시, 배양 플라스크, 롤러 병 등의 세포 배양용 용기에서 세포를 배양하게 된다.At present, interest in cell culture is increasing as cell therapy using cultured cells for the treatment of diseases is expanded. A variety of devices are involved in the culture system, and one of the important factors is the cell culture vessel. In general, in order to obtain a large number of cells, cells are cultured in a cell culture vessel such as a culture dish, a culture flask, a roller bottle, and the like artificially made according to the characteristics of the cultured cells.

인공적으로 배양하는 세포들은 주로 세포 배양용 용기의 바닥에 부착되어 성장, 증식 및 분화의 과정을 거치면서 생존한다. 그러나 일부 세포는 여러 층을 형성하면서 다른 세포 위에 겹쳐 증식하기도 하고, 또 다른 일부 세포는 세포 배양액 내에서 부유 상태를 유지하면서 성장, 증식 및 분화하기도 한다.Artificially cultured cells are mainly attached to the bottom of the cell culture vessel and survive through the process of growth, proliferation and differentiation. However, some cells multiply on top of other cells while forming several layers, while others grow, proliferate, and differentiate while remaining suspended in cell culture.

이와 같이, 인공적으로 만들어진 세포 배양용 용기는 원래 세포가 안주하고 있는 세포외 기질과는 다른 표면 특성을 갖고 있어, 세포 증식 및 분화 효율이 저하될 수 있다. 실제로, 다양한 세포들이 인공적으로 증식한 후 임상 치료에 이용되고 있으나, 환자 치료를 위한 줄기세포 등을 포함하는 각종 세포의 분화 유도가 쉽게 성공하지 못하고 있는 문제가 있다.As such, the artificially made cell culture vessel has a surface characteristic different from that of the extracellular matrix in which the cells are originally placed, and thus, cell proliferation and differentiation efficiency may be reduced. Indeed, although various cells have been artificially proliferated and used for clinical treatment, there is a problem that induction of differentiation of various cells including stem cells for patient treatment is not successful.

본 발명은 상술한 배경기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 성체 줄기세포를 비롯한 각종 세포의 증식 및 분화 효율을 높이는 세포 배양용 용기를 제공하는 데 그 목적이 있다.The present invention is to solve the problems of the above-described background, an object of the present invention is to provide a cell culture container for enhancing the proliferation and differentiation efficiency of various cells, including adult stem cells.

본 발명의 또 다른 목적은 세포 배양용 용기를 제조할 때 마이크로 구조물 또는 나노 구조물을 함께 성형하여 세포의 증식 및 분화를 유도하는 데 필요한 비용을 저감시키는 데 있다.Still another object of the present invention is to reduce the cost required to induce proliferation and differentiation of cells by molding together microstructures or nanostructures when preparing a cell culture vessel.

본 발명의 일 실시예에 따른 세포 배양용 용기는 성체 줄기세포를 점착하여 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함한다. 또한, 상기 세포 배양면은 상기 세포 배양면 상에서 일정한 간격을 두고 배치되는 마이크로 구조물을 포함하고, 상기 마이크로 구조물은 돌출된 형상을 갖고, 1㎛ 내지 4㎛ 사이의 범위에 속하는 폭 또는 직경을 갖는다.Cell culture container according to an embodiment of the present invention includes a cell culture surface for adhering to adult stem cells to proliferate and differentiate. In addition, the cell culture surface includes microstructures that are arranged at regular intervals on the cell culture surface, the microstructures have a protruding shape, and has a width or diameter in the range between 1 μm and 4 μm.

상기 마이크로 구조물은 반구 또는 기둥 형상으로 형성될 수 있다. The microstructures may be formed in a hemispherical or columnar shape.

상기 마이크로 구조물은 1㎛ 내지 2㎛ 사이의 범위에 속하는 높이를 가질 수 있으며, 4㎛ 내지 8㎛ 사이의 일정한 간격을 두고 배치될 수 있다.The microstructures may have a height that falls in the range between 1 μm and 2 μm, and may be disposed at regular intervals between 4 μm and 8 μm.

본 실시예에 따른 세포 배양용 용기는 상기 마이크로 구조물의 상면에 일정한 간격을 두고 배치되고, 균일한 나노 사이즈로 형성되는, 다수의 나노 구조물을 더 포함할 수 있다.The cell culture container according to the present embodiment may further include a plurality of nanostructures, which are arranged at regular intervals on the upper surface of the microstructures and are formed in a uniform nanosize.

상기 세포 배양면과 물의 접촉각은 50° 이상일 수 있다.The contact angle of the cell culture surface and water may be 50 ° or more.

상기 마이크로 구조물이 배치된 상기 세포 배양면은 열가소성 수지, 열경화성 수지 또는 탄성중합체로 형성될 수 있다.The cell culture surface on which the microstructures are disposed may be formed of a thermoplastic resin, a thermosetting resin, or an elastomer.

본 발명의 일 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 제조 방법은 기판 상에 포토레지스트를 적층하는 단계, 상기 포토레지스트 상에 자외선을 조사하여, 마이크로 사이즈의 제1 패턴을 형성하는 단계 및 전주 도금(electroforming) 공정을 통해 상기 기판 상에서 상기 제1 패턴에 대응하는 제2 패턴을 갖는 금속 몰드를 형성하는 단계를 포함한다.Method for manufacturing a cell culture container according to an embodiment of the present invention comprises the steps of laminating a photoresist on a substrate, by irradiating UV light on the photoresist, forming a first pattern of a micro size and electroplating ( forming a metal mold having a second pattern corresponding to the first pattern on the substrate through an electroforming process.

상기 금속 몰드는 알루미늄으로 형성할 수 있고, 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 제조 방법은 알루미늄 양극 산화(Anode Aluminum Oxide, AAO) 공정을 통해 상기 금속 몰드에 나노 패턴을 형성하는 단계를 더 포함할 수 있다.The metal mold may be formed of aluminum, and the method for manufacturing a cell culture container according to the present embodiment may further include forming a nano pattern on the metal mold through an aluminum anodic oxidation (AAO) process. can do.

본 발명의 일 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 제조 방법은 상기 금속 몰드를 이용하여 엠보싱 공정을 통해 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양면이 형성된 세포 배양용 용기를 형성하는 단계를 더 포함할 수 있다.The method for manufacturing a cell culture container according to an embodiment of the present invention may further include forming a cell culture container in which a cell culture surface including a microstructure is formed through an embossing process using the metal mold. .

이 때, 상기 세포 배양용 용기는 열가소성 수지, 열경화성 수지 및 탄성중합체 중 어느 하나로 형성할 수 있다.In this case, the cell culture container may be formed of any one of a thermoplastic resin, a thermosetting resin, and an elastomer.

본 발명의 일 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 제조 방법은 상기 금속 몰드를 이용하여 엠보싱 공정을 통해 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양면을 형성하는 단계 및 세포 배양용 용기의 일면에 상기 세포 배양면을 부착하는 단계를 더 포함할 수 있다.Method for producing a cell culture container according to an embodiment of the present invention using the metal mold to form a cell culture surface comprising a microstructure through the embossing process and the cell culture surface on one surface of the cell culture container It may further comprise the step of attaching.

이 때, 상기 세포 배양면은 열가소성 수지, 열경화성 수지 및 탄성중합체 중 어느 하나로 형성할 수 있다.In this case, the cell culture surface may be formed of any one of a thermoplastic resin, a thermosetting resin, and an elastomer.

본 발명의 일 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 제조 방법은 세포 배양용 용기의 형상을 갖는 캐비티(cavity)를 포함하고, 상기 캐비티의 일면에 상기 금속 몰드가 부착된 금형을 배치하는 단계와, 상기 캐비티 내에 수지를 주입하는 단계와, 상기 수지가 경화되어 형성된 세포 배양용 용기를 인출하는 단계를 포함할 수 있다.Method for producing a cell culture container according to an embodiment of the present invention includes a cavity having a shape of the cell culture container (cavity), disposing a metal mold attached to one side of the cavity; And injecting a resin into the cavity, and withdrawing the container for cell culture formed by curing the resin.

이 때, 상기 수지는 열가소성 수지일 수 있다.In this case, the resin may be a thermoplastic resin.

본 발명의 실시예에 따르면, 세포의 증식 및 분화에 영향을 주어 특정 세포로의 분화를 유도하거나 그 효율을 높일 수 있다.According to an embodiment of the present invention, the proliferation and differentiation of cells may be influenced to induce differentiation into specific cells or increase efficiency thereof.

또한, 마이크로 구조물 또는 나노 구조물을 포함하는 세포 배양용 용기의 대량 생산이 가능하여 세포 배양을 위한 비용과 시간을 저감시킬 수 있다.In addition, it is possible to mass-produce a cell culture container including a microstructure or a nanostructure, thereby reducing the cost and time for cell culture.

도 1은 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 개략도이다.
도 2는 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 세포 배양면을 나타내는 도면이다.
도 3은 도 2의 Ⅲ-Ⅲ 선을 따라 절취하여 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 배양면 상에 형성된 돌기를 나타내는 단면도이다.
도 4는 본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 배양면 상에 형성된 돌기를 나타내는 단면도이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 순차적으로 나타내는 도면이다.
도 6은 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 나타내는 도면이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 세포 배양용 용기에서 배양한 지방유래 줄기세포의 세포 행동을 광학 현미경을 통해 관찰한 사진이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 세포 배양용 용기에서 배양한 지방유래 줄기세포의 점착률과 증식율을 나타내는 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 세포 배양용 용기에서 배양한 지방유래 줄기세포의 국부 점착(focal adhesion) 형태를 광학 현미경을 통해 관찰한 사진이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예 및 비교예에 따른 세포 배양용 용기에서 배양한 지방유래 줄기세포의 분화 효율을 광학 현미경을 통해 관찰한 사진이다.1 is a schematic diagram of a cell culture vessel according to a first embodiment of the present invention.
2 is a view showing a cell culture surface of the cell culture container according to the first embodiment of the present invention.
Figure 3 is a cross-sectional view showing the projection formed on the cell culture surface according to the first embodiment of the present invention cut along the line III-III of FIG.
Figure 4 is a cross-sectional view showing the projection formed on the cell culture surface according to a second embodiment of the present invention.
5 is a view sequentially showing a process for producing a cell culture container according to an embodiment of the present invention.
6 is a view showing a process for producing a cell culture container according to another embodiment of the present invention.
Figure 7 is a photograph of the cell behavior of the adipose derived stem cells cultured in the cell culture container according to one embodiment and comparative example of the present invention through an optical microscope.
8 is a graph showing the adhesion rate and proliferation rate of the adipose derived stem cells cultured in the cell culture container according to an embodiment and comparative example of the present invention.
9 is a photograph of a focal adhesion form of fat-derived stem cells cultured in a cell culture container according to one embodiment and a comparative example of the present invention through an optical microscope.
Figure 10 is a photograph of observing the differentiation efficiency of adipose derived stem cells cultured in a cell culture container according to one embodiment and comparative example of the present invention through an optical microscope.

이하, 첨부한 도면들을 참고로 하여 본 발명의 실시예에 대하여 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있을 정도로 상세하게 설명한다. 도면에서 나타난 각 구성의 크기 및 두께 등은 설명의 편의를 위하여 임의로 나타내었으므로, 본 발명이 반드시 도시된 바에 한정되지 않는다.DETAILED DESCRIPTION Hereinafter, exemplary embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings so that those skilled in the art may easily implement the present invention. The size and thickness of each of the components shown in the drawings are arbitrarily shown for convenience of description, and thus, the present invention is not necessarily limited to the illustrated.

도 1은 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 배양용 용기를 나타내는 개략도이고, 도 2는 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 일면에 형성된 세포 배양면을 나타내는 도면이며, 도 3은 도 2의 Ⅲ-Ⅲ 선을 따라 절취하여 세포 배양면의 단면 형상을 나타내는 도면이다.1 is a schematic view showing a cell culture container according to a first embodiment of the present invention, Figure 2 is a view showing a cell culture surface formed on one surface of the cell culture container according to a first embodiment of the present invention, 3 is a view showing a cross-sectional shape of the cell culture surface by cutting along the line III-III of FIG.

도 1을 참조하면, 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기(10)는 그 일면에 세포 배양면(11)을 포함한다. 세포 배양면(11)은 인공적으로 세포를 증식 및 분화시키기 위한 것으로, 배양하고자 하는 세포를 세포 배양면(11) 상에 점착시켜 원하는 방향으로 분화를 유도하게 된다. 성체 줄기세포에는 골수유래 줄기세포, 태반유래 줄기세포, 지방유래 줄기세포 등이 있는데, 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기(10)는 이러한 성체 줄기세포의 증식 효율을 향상시키고, 연골세포, 골세포 및 지방세포로의 분화 효율을 향상시키기 위한 것이다.Referring to FIG. 1, the cell culture container 10 according to the present embodiment includes a cell culture surface 11 on one surface thereof. The cell culture surface 11 is for artificially proliferating and differentiating cells. The cells to be cultured are adhered to the cell culture surface 11 to induce differentiation in a desired direction. Adult stem cells include bone marrow-derived stem cells, placental stem cells, adipose-derived stem cells, etc., the cell culture container 10 according to the present embodiment improves the proliferation efficiency of such adult stem cells, cartilage cells, bone To improve the efficiency of differentiation into cells and adipocytes.

도 2 및 도 3을 참조하면, 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기(10)의 세포 배양면(11)에는 세포가 점착하는 일면에 미세하게 돌출된 다수의 마이크로 구조물(11a)이 형성된다. 본 실시예에서 마이크로 구조물(11a)은 약 1㎛ 내지 약 4㎛ 사이의 균일한 폭 또는 직경으로 형성되고, 높이는 약 1㎛ 내지 약 2㎛ 사이의 균일한 크기로 형성된다. 또한, 본 실시예에서 마이크로 구조물(11a)은 일정한 간격을 두고 배치된다. 구체적으로는, 약 4㎛ 내지 약 8㎛ 사이의 일정한 간격을 사이에 두어 배치된다.2 and 3, a plurality of microstructures 11a are formed on the cell culture surface 11 of the cell culture container 10 according to the present embodiment, which protrudes finely on one surface to which cells adhere. In this embodiment, the microstructure 11a is formed to have a uniform width or diameter between about 1 μm and about 4 μm, and the height is formed to have a uniform size between about 1 μm and about 2 μm. In addition, in the present embodiment, the microstructures 11a are disposed at regular intervals. Specifically, it arrange | positions with a fixed space between about 4 micrometers and about 8 micrometers.

한편, 본 실시예에서는 세포 배양면(11) 상에 돌출되어 형성된 마이크로 구조물(11a)이 원기둥 형상으로 형성되는데, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니고, 세포 배양면 상의 마이크로 구조물은 사각기둥, 삼각기둥, 타원기둥 등과 같이 다양한 단면 형상을 같는 기둥 또는 반구 등의 다양한 형상으로 형성될 수 있다.Meanwhile, in the present embodiment, the microstructures 11a protruding from the cell culture surface 11 are formed in a cylindrical shape, but the present invention is not limited thereto, and the microstructures on the cell culture surface may be rectangular columns or triangular columns. It may be formed in various shapes such as columns or hemispheres having the same cross-sectional shape, such as elliptic cylinders.

본 실시예에서는 세포 배양면(11)을 폴리디메틸실록산(polydimethylsiloxane, PDMS)으로 형성하는데, 이와 같이 폴리디메틸실록산으로 형성된 세포 배양면(11)은 물과 50° 이상의 접촉각을 가져 세포의 점착에 불리하다. 하지만, 이는 세포 배양용 용기의 제조 공정에 있어서 마이크로 구조물을 형성하기 위한 패턴 형성에 유리하고, 상기와 같이 물과 50° 이상의 큰 접촉각을 갖는 특성에도 불구하고 전술한 바와 같이 세포 배양면(11) 상에 마이크로 구조물 또는 나노 구조물을 형성함으로써 세포의 점착력 등을 향상시켜 세포 배양에 적합한 조건을 형성한다. 한편, 본 발명은 이에 한정되지 않고, 세포 배양면을 폴리디메틸실록산 이외의 탄성중합체로 형성할 수 있다. 또한, 폴리메틸메타크릴레이트(polymethyl methacrylate, PMMA), 폴리스티렌(polystyrene, PS), 폴리카보네이트(polycarbonate, PC) 등의 열가소성 수지 또는 열경화성 수지를 사용하여 형성할 수 있다. In this embodiment, the cell culture surface 11 is formed of polydimethylsiloxane (PDMS), and thus the cell culture surface 11 formed of polydimethylsiloxane has a contact angle with water of 50 ° or more, which is disadvantageous for cell adhesion. Do. However, this is advantageous for pattern formation for forming microstructures in the manufacturing process of the cell culture container, and despite the characteristics of having a large contact angle with water of 50 ° or more as described above, the cell culture surface 11 as described above. By forming microstructures or nanostructures on the cell to improve the adhesion and the like to form conditions suitable for cell culture. In addition, this invention is not limited to this, The cell culture surface can be formed from elastomer other than polydimethylsiloxane. In addition, it may be formed using a thermoplastic resin or thermosetting resin such as polymethyl methacrylate (PMMA), polystyrene (PS), polycarbonate (PC) or the like.

상기와 같이, 본 실시예에서는 다수의 마이크로 구조물(11a)들이 균일한 크기로 형성되고 일정한 간격을 두고 배치됨으로써, 세포의 접착, 증식 및 분화에 영향을 주어 세포의 분화를 원하는 방향으로 유도하거나 그 효율을 높이는 역할을 한다. 또한, 세포 배양면 상에서 세포의 점착력을 향상시키기 위한 표면의 플라즈마 처리, 오존 처리 또는 세포 점착 증진 물질의 코팅 등의 추가적인 표면 처리 없이, 마이크로 또는 나노 구조물의 폭 또는 직경, 높이 및 형상 등을 조절함으로써 세포의 점착, 증식 및 분화를 유도할 수 있게 된다.As described above, in the present embodiment, the plurality of microstructures 11a are formed in a uniform size and are arranged at regular intervals, thereby affecting adhesion, proliferation, and differentiation of cells to induce differentiation of cells in a desired direction or It increases the efficiency. In addition, by adjusting the width or diameter, height and shape of the micro or nano structure, without additional surface treatment such as plasma treatment of the surface to improve the adhesion of the cell on the cell culture surface, ozone treatment or coating of the cell adhesion promoting material, etc. Induce adhesion, proliferation and differentiation of cells.

도 4는 본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 배양용 용기의 세포 배양면의 단면 형상을 나타내는 도면이다. 이를 참조하면, 본 발명의 제2 실시예에 따른 세포 배양면(21)에는 마이크로 사이즈로 돌출되어 형성된 마이크로 구조물(21a) 상에 나노 사이즈의 나노 구조물(21b)이 돌출되어 형성된다. 즉, 본 실시예에서는 세포 배양면(21) 상에 마이크로-나노 복합 구조물이 형성되는 것으로서, 이와 같은 구조에 의하여 세포의 접착, 증식 및 분화에 영향을 주어 세포의 분화를 원하는 방향으로 유도하거나 그 효율을 높일 수 있게 된다.4 is a view showing a cross-sectional shape of the cell culture surface of the cell culture container according to a second embodiment of the present invention. Referring to this, the cell culture surface 21 according to the second embodiment of the present invention is formed by protruding the nano-structure nanostructure 21b on the microstructure 21a formed to protrude in a micro size. That is, in the present embodiment, a micro-nano composite structure is formed on the cell culture surface 21, and by such a structure, the adhesion, proliferation, and differentiation of the cells are influenced to induce differentiation of the cells in a desired direction, or Efficiency can be increased.

도 5는 본 발명의 일 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 순차적으로 나타내는 도면으로, 이하에서는 이를 참조하여 세포 배양용 용기의 제조 방법을 설명한다.5 is a view sequentially showing a process for producing a cell culture container according to an embodiment of the present invention, hereinafter will be described a method of manufacturing a cell culture container with reference to this.

도 5의 (a)를 참조하면, 우선 기판(110) 상에 포토레지스트 층(photoresist layer)(120)을 적층한다. 이 때, 포토레지스트 층(120)은 SU-8 등의 음각(negative-tone) 포토레지스트 또는 AZ 계열의 양각(positive-tone) 포토레지스트로 형성할 수 있다. 도 5의 (b) 및 (c)를 참조하면, 포토레지스트 층(120)이 적층된 기판(110) 상에 마스크(130)를 배치하고 자외선을 조사하여, 제1 패턴이 형성된 패턴층(125)을 형성한다. 이 때, 제1 패턴은 마이크로 사이즈의 돌기를 갖도록 형성한다. 구체적으로, 돌기는 원기둥 형상으로 형성될 수 있고, 약 1㎛ 내지 약 4㎛ 사이의 균일한 직경을 갖고, 약 1㎛ 내지 약 2㎛ 사이의 균일한 높이로 형성할 수 있고, 약 4㎛ 내지 약 8㎛ 사이의 일정한 간격을 사이에 두어 배치되도록 형성할 수 있다.Referring to FIG. 5A, first, a photoresist layer 120 is stacked on the substrate 110. In this case, the photoresist layer 120 may be formed of a negative-tone photoresist such as SU-8 or a positive-tone photoresist of AZ series. Referring to FIGS. 5B and 5C, the mask layer 130 is disposed on the substrate 110 on which the photoresist layer 120 is laminated and irradiated with ultraviolet rays to form a pattern layer 125 having a first pattern. ). At this time, the first pattern is formed to have a micro-sized projection. Specifically, the protrusions may be formed in a cylindrical shape, have a uniform diameter between about 1 μm and about 4 μm, and may have a uniform height between about 1 μm and about 2 μm, and between about 4 μm and about It may be formed so as to be disposed with a constant interval between about 8㎛.

이어서, 도 5의 (d)를 참조하면, 패턴층(125)이 형성된 기판(110) 상에 금속 몰드(130)를 형성한다. 금속 몰드(130)는 기판(110) 상에서 전주 도금(electroforming) 공정을 통해 형성할 수 있고, 이에 의하여 금속 몰드(130)는 패턴층(125)의 제1 패턴에 대응하는 제2 패턴을 갖도록 형성된다.Subsequently, referring to FIG. 5D, a metal mold 130 is formed on the substrate 110 on which the pattern layer 125 is formed. The metal mold 130 may be formed on the substrate 110 through an electroforming process, whereby the metal mold 130 is formed to have a second pattern corresponding to the first pattern of the pattern layer 125. do.

도 5의 (e) 및 (f)를 참조하면, 금속 몰드(130)를 상에 폴리디메틸실록산으로 이루어진 수지를 프레싱한다. 이와 같은 엠보싱 공정에 따라, 제2 패턴에 대응하는 패턴, 즉 제1 패턴이 형성된 세포 배양면(140)을 형성하게 된다.Referring to FIGS. 5E and 5F, a resin made of polydimethylsiloxane is pressed onto the metal mold 130. According to the embossing process, the cell culture surface 140 having the pattern corresponding to the second pattern, that is, the first pattern is formed.

이와 같이, 금속 몰드(130)를 이용하고 엠보싱 공정을 통해 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양면(140)을 형성할 수 있고, 이를 세포 배양용 용기의 일면에 부착함으로써 세포 점착력 등이 향상된 세포 배양용 용기를 형성할 수 있다. 본 실시예에서 세포 배양면(140)을 형성하는 수지로 폴리디메틸실록산을 이용하지만, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 즉, 세포 배양면을 폴리디메틸실록산 이외의 탄성중합체로 형성할 수도 있고, 폴리메타크릴레이트, 폴리스티렌, 폴리카보네이트 등의 열가소성 수지 또는 열경화성 수지를 사용하여 형성할 수도 있다.As such, the cell culture surface 140 including the microstructures may be formed by using the metal mold 130 and the embossing process, and the cell culture surface 140 may be attached to one surface of the cell culture container, thereby improving cell adhesion and the like. A container can be formed. Although polydimethylsiloxane is used as the resin for forming the cell culture surface 140 in the present embodiment, the present invention is not limited thereto. That is, the cell culture surface may be formed of an elastomer other than polydimethylsiloxane, or may be formed using a thermoplastic resin such as polymethacrylate, polystyrene, polycarbonate, or thermosetting resin.

한편, 상기와 같이 마이크로 구조물이 형성된 세포 배양면을 별도로 형성한 후 세포 배양용 용기의 일면에 부착할 수도 있지만, 금속 몰드(130)를 이용하여 일면에 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양용 용기를 직접 형성할 수도 있다. 즉, 세포 배양용 용기를 폴리디메틸실록산 등으로 형성하고, 금속 몰드(130)를 이용한 엠보싱 공정을 통해 일면에 마이크로 나노 구조물을 직접 형성할 수도 있다. On the other hand, after forming the cell culture surface with the microstructures formed as described above may be attached to one surface of the cell culture container, using a metal mold 130 directly to the cell culture container containing a microstructure on one surface It may be formed. That is, the cell culture vessel may be formed of polydimethylsiloxane or the like, and micro-nanostructures may be directly formed on one surface through an embossing process using the metal mold 130.

이와 같이 금속 몰드(130)를 이용하여 엠보싱 공정을 통해 돌출된 형상의 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양면 또는 세포 배양용 용기를 형성하는 경우, 세포 배양면 또는 세포 배양용 용기를 비교적 간단한 방법으로 생산하여 생산성을 향상시킬 수 있고, 이들의 대량 생산도 가능하게 된다.As described above, in the case of forming the cell culture surface or the cell culture container including the microstructure protruding through the embossing process using the metal mold 130, the cell culture surface or the cell culture container is produced by a relatively simple method. The productivity can be improved, and mass production of these is also possible.

도 6은 본 발명의 다른 실시예에 따라 세포 배양용 용기를 제조하는 공정을 나타낸다. 본 실시예에서는 세포 배양면을 별도로 제조하여 세포 배양용 용기에 부착하는 방식이 아니라, 마이크로 구조물이 형성된 세포 배양면을 세포 배양용 용기와 일체로 형성하는 방식으로 제조된다.Figure 6 shows a process for producing a cell culture vessel according to another embodiment of the present invention. In the present embodiment, the cell culture surface is prepared separately, and not attached to the cell culture container, but the cell culture surface on which the microstructures are formed is integrally formed with the cell culture container.

도 6을 참조하면, 세포 배양용 용기 형상의 캐비티(220)를 포함하는 금형(200)이 배치되고, 세포 배양면이 형성되는 위치에 도 5에서의 방식으로 제조된 오목한 형상의 마이크로 구조물을 포함하는 금속 몰드(210)를 배치시킨다. 이어서, 호퍼(250)로부터 세포 배양용 용기의 성형 재료인 수지가 실린더(260) 내부로 공급되고, 수지는 실린더(260) 내에서 히터(미도시)를 통해 가열되어 유동 상태가 된다. 스크루(270) 및 노즐을 거쳐 주입구(230)를 통해 유동 상태의 수지가 금형(200)의 캐비티(220) 내로 주입되고, 주입이 완료된 후 수지를 냉각하여 세포 배양용 용기를 완성하게 된다.Referring to FIG. 6, a mold 200 including a cell-shaped container 220 for cell culture is disposed, and includes a concave-shaped microstructure manufactured in the manner of FIG. 5 at a position at which a cell culture surface is formed. The metal mold 210 is disposed. Subsequently, a resin, which is a molding material for the cell culture container, is supplied from the hopper 250 into the cylinder 260, and the resin is heated in a cylinder 260 through a heater (not shown) to be in a flow state. The resin in the flow state is injected into the cavity 220 of the mold 200 through the injection hole 230 through the screw 270 and the nozzle, and after the injection is completed, the resin is cooled to complete a cell culture container.

이와 같은 방식에 의하여 세포 배양용 용기를 제작할 때, 마이크로 구조물이 형성된 세포 배양면을 일체로 형성할 수 있어 공정이 단순해지고 시간 및 비용을 절감할 수 있게 된다. 또한, 도 5에서의 오목한 형상의 마이크로 구조물을 포함하는 금속 몰드를 사용함으로써 균일한 크기의 마이크로 구조물을 용이하게 형성할 수 있고, 배양 대상 및 목적에 따라 마이크로 구조물의 크기 등을 용이하게 조절할 수 있게 된다. 본 실시예에 따른 제조 방법에서 사용하는 수지는 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 폴리카보네이트 등의 열가소성 수지를 사용하는 것이 바람직하다.When the cell culture container is manufactured in this manner, the cell culture surface on which the microstructures are formed can be integrally formed, thereby simplifying the process and reducing time and cost. In addition, by using a metal mold including a concave-shaped microstructure in Figure 5 it is possible to easily form a microstructure of a uniform size, and to easily adjust the size of the microstructure according to the culture target and purpose do. It is preferable to use thermoplastic resins, such as polymethyl methacrylate, polystyrene, and polycarbonate, for resin used by the manufacturing method which concerns on a present Example.

한편, 섀도우 마스크를 제조하는 과정에서 자외선 노광을 사용하지 않고 알루미늄 양극 산화(Anodic Aluminum Oxide, AAO) 공정을 통하여 나노 사이즈의 패턴이 형성된 섀도우 마스크를 제조할 수 있다. 금속 몰드는 알루미늄으로 형성할 수 있는데, 이를 양극 산화시킴으로써 잘 정렬된 다공성 알루미늄을 형성할 수 있는 바, 이를 이용하여 금속 몰드에 나노 사이즈의 패턴을 형성할 수 있다. 이와 같이, 금속 몰드에 마이크로 사이즈의 패턴 및 나노 사이즈의 패톤이 함께 형성됨으로써 마이크로-나노 복합 구조물을 갖는 세포 배양면을 형성할 수 있게 된다.Meanwhile, a shadow mask in which a nano-sized pattern is formed may be manufactured through an aluminum anodization process without using ultraviolet exposure in the process of manufacturing a shadow mask. The metal mold may be formed of aluminum, and by anodizing it, a well-arranged porous aluminum may be formed, and the nano mold may be formed in the metal mold. In this manner, the micro mold pattern and the nano size paton are formed together in the metal mold to form a cell culture surface having a micro-nano composite structure.

이와 같은 방식에 의하여 세포 배양용 용기를 제작할 때, 균일한 크기의 마이크로-나노 복합 구조물을 용이하게 형성할 수 있고, 배양 대상 및 목적에 따라 마이크로-나노 복합 구조물의 크기 등을 용이하게 조절할 수 있게 된다.When manufacturing the cell culture container by such a method, it is possible to easily form a micro-nano composite structure of uniform size, and to easily adjust the size of the micro-nano composite structure according to the culture target and purpose. do.

도 7 내지 도 10은 본 발명의 제1 실시예에 따른 세포 배양용 용기에서 지방유래 줄기세포를 점착, 증식 및 분화하였을 때의 영향을 비교예와 비교하여 관찰한 사진을 나타내는 것으로, 이하에서는 본 실시예에 따른 세포 배양용 용기에서의 세포 배양 실험 결과를 토대로 본 발명의 효과를 설명한다.7 to 10 are photographs showing the effect observed when the adhesion, proliferation and differentiation of adipose derived stem cells in the cell culture container according to the first embodiment of the present invention in comparison with the comparative example, The effect of the present invention will be described based on the results of cell culture experiments in the cell culture container according to the embodiment.

본 실시예에서는 세포 배양용 용기의 세포 배양면을 폴리디메틸실록산으로 형성하고, 세포 배양면 상에 직경 4㎛, 높이 1㎛의 원기둥 형상의 돌출된 마이크로 구조물을 다수 형성하였으며, 각 마이크로 구조물은 4㎛ 내지 8㎛의 간격을 두고 배치되도록 형성하였다. 비교예 1(Flat)은 어떠한 구조물도 형성하지 않은, 편평한 세포 배양면을 갖는 세포 배양용 용기에서 동일한 실험을 수행한 경우이고, 비교예 2(Microhole)는 본 실시예와 달리 마이크로 사이즈의 오목한 구조물을 형성한 세포 배양면을 갖는 세포 배양용 용기에서 동일한 실험을 수행한 경우이다.In this embodiment, the cell culture surface of the cell culture vessel is formed of polydimethylsiloxane, and a plurality of protruding microstructures having a cylindrical shape having a diameter of 4 μm and a height of 1 μm are formed on the cell culture surface. It was formed to be disposed at intervals of μm to 8 μm. Comparative Example 1 (Flat) is a case where the same experiment was carried out in a cell culture vessel having a flat cell culture surface without forming any structure, and Comparative Example 2 (Microhole) is a concave structure of micro size unlike the present Example The same experiment was carried out in a cell culture vessel having a cell culture surface formed thereon.

도 7은 비교예 1, 비교예 2 및 본 실시예에서 각각 지방유래 줄기세포를 배양하여 광학 현미경을 통해 1일과 6일째에 관찰한 사진이다. 이를 참조하면, 비교예 1과 비교예 2에서는 세포가 표면에 안정적으로 점착되지 못하고 응집체를 형성하였으며, 6일째에는 응집체들이 표면에서 떨어져나가 점착된 세포 수가 현저히 감소되는 현상이 관찰되었다. 한편, 본 실시예에서는 지방유래 줄기세포가 비교적 균일하게 표면에 점착된 것이 관찰되었다.Figure 7 is a photograph of culturing adipose derived stem cells in Comparative Example 1, Comparative Example 2 and the present Example and observed on day 1 and 6 through an optical microscope. Referring to this, in Comparative Example 1 and Comparative Example 2, the cells were not adhered stably to the surface, but aggregates were formed. On the 6th day, the aggregates were detached from the surface and the number of adhered cells was significantly decreased. On the other hand, in this Example, it was observed that the adipose derived stem cells adhered to the surface relatively uniformly.

도 8은 비교예 1, 비교예 2 및 본 실시예에서 지방유래 줄기세포의 점착률과 증식률을 나타낸 그래프이다. 이를 참조하면, 본 실시예에서 배양한 지방유래 줄기세포는 비교예들보다 세포 점착률이 약 10% 정도 증가함을 알 수 있다. 또한, 비교예들에서는 시간이 지남에 따라 세포 증식율이 현저하게 감소하였으나, 본 실시예에서는 시간이 지날수록 세포수가 안정적으로 증가하는 것이 관찰되었다.8 is a graph showing the adhesion rate and proliferation rate of the adipose derived stem cells in Comparative Example 1, Comparative Example 2 and this example. Referring to this, the fat-derived stem cells cultured in this example can be seen that the cell adhesion rate is increased by about 10% than the comparative examples. In addition, in the comparative examples, although the cell proliferation rate was significantly decreased over time, it was observed that the number of cells stably increased with time in this example.

도 9는 비교예 1, 비교예 2 및 본 실시예에서 각각 지방유래 줄기세포의 국부 점착(focal adhesion) 형태를 비교한 사진이다. 이를 참조하면, 본 실시예에서는 지방유래 줄기세포가 상대적으로 뾰족한 단을 형성하고 있으며, 국부 점착이 세포의 외곽 부분에 고르게 분포되어 있음을 확인할 수 있다. 또한, 국부 점착의 위치가 마이크로 구조체를 중심으로 위치해 있음을 확인할 수 있다.9 is a photograph comparing the focal adhesion form of the adipose derived stem cells in Comparative Example 1, Comparative Example 2 and the present Example, respectively. Referring to this, in the present embodiment, it can be seen that the adipose derived stem cells form relatively pointed ends, and local adhesion is evenly distributed in the outer portion of the cells. In addition, it can be seen that the position of the local adhesive is located around the microstructure.

도 10은 비교예 1, 비교예 2 및 본 실시예에서 각각 지방유래 줄기세포를 지방세포(ORO), 연골세포(AB) 및 골세포(VK)로 분화 유도하여 이를 비교한 사진이다. 이를 참조하면, 실험예서는 비교예 1 및 비교예 2에서 배양한 지방유래 줄기세포보다 분화 효율이 상대적으로 높게 나타남을 확인할 수 있다.Figure 10 is a Comparative Example 1, Comparative Example 2 and in the present Example, the adipocyte-derived stem cells are induced by differentiation into adipocytes (ORO), chondrocytes (AB) and bone cells (VK), respectively. Referring to this, the experimental example can be seen that the differentiation efficiency is relatively higher than the fat-derived stem cells cultured in Comparative Example 1 and Comparative Example 2.

도 7 내지 도 10을 통해서 볼 때, 직경 4㎛, 높이 1㎛인 원기둥 형상의 마이크로 구조물을 규칙적으로 형성된 세포 배양면에서 성체 줄기세포를 배양한 경우를 마이크로 구조물을 형성하지 않거나 오목한 형태의 마이크로 구조물을 형성한 경우와 비교할 때, 점착율, 증식율 및 분화 효율이 상대적으로 향상되는 효과를 확인할 수 있다.7 through 10, when the adult stem cells were cultured on a cell culture surface in which cylindrical microstructures having a diameter of 4 μm and a height of 1 μm were regularly formed, the microstructures did not form or concave. When compared with the case of forming a, it can be confirmed that the effect of the relatively improved adhesion rate, growth rate and differentiation efficiency.

상기 실험 결과를 토대로 할 때, 본 실시예에서와 같은 돌출된 마이크로 구조물 상에 나노 사이즈로 돌출된 형상의 나노 구조물을 추가하여 세포 배양면을 형성하는 경우에도, 성체 줄기세포의 증식 및 분화 효율이 향상됨을 기대할 수 있다.Based on the above experimental results, even in the case of forming a cell culture surface by adding a nano-sized protruding shape nanostructure on the protruding micro-structure as in this embodiment, the growth and differentiation efficiency of adult stem cells You can expect improvement.

즉, 상기와 같이 적정한 크기를 갖고 돌출된 형상의 마이크로 구조물 또는 마이크로-나노 복합 구조물을 포함하는 세포 배양면에서 세포를 배양하는 경우, 안정적으로 세포 점착, 증식 및 분화가 유도되고, 보다 넓은 면적으로 안정적으로 표면에 점착되는 효과를 얻을 수 있다. 또한, 이러한 구조물을 포함하는 세포 배양용 용기에서 성체 줄기세포를 배양하는 경우, 세포 분화 효율을 증가시키고, 많은 수의 세포를 얻을 수 있을 것이다.That is, when culturing the cells in the cell culture surface including the microstructure or micro-nano composite structure of the appropriate size and protruding shape as described above, cell adhesion, proliferation and differentiation is stably induced, It can stably adhere to the surface. In addition, in the case of culturing adult stem cells in a cell culture vessel containing such a structure, it will be possible to increase cell differentiation efficiency and obtain a large number of cells.

이상에서, 본 발명을 바람직한 실시예들을 통하여 설명하였지만, 본 발명이 이들 실시예들에 한정되지는 않는다. 본 발명의 범위는 다음에 기재하는 특허청구범위의 기재에 의하여 결정되는 것으로, 특허청구범위의 개념과 범위를 벗어나지 않는 한 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것을 본 발명이 속하는 기술 분야에 종사하는 자들은 쉽게 이해할 것이다.In the above, the present invention has been described through preferred embodiments, but the present invention is not limited to these embodiments. The scope of the present invention is determined by the description of the claims set forth below, and those skilled in the art to which the present invention pertains can make various modifications and changes without departing from the concept and scope of the claims. Will be easy to understand.

10: 세포 배양용 용기 11, 21, 140: 세포 배양면
11a, 21a: 마이크로 구조물 21b: 나노 구조물
110: 기판 120: 포토레지스트 층
125: 패턴층 130, 210: 금속 몰드
200: 금형 220: 캐비티
230: 주입구 250: 호퍼
260: 실린더 270: 스크루10: cell culture vessels 11, 21, 140: cell culture surface
11a, 21a: microstructure 21b: nanostructure
110 substrate 120 photoresist layer
125: pattern layer 130, 210: metal mold
200: mold 220: cavity
230: injection hole 250: hopper
260: cylinder 270: screw

Claims (16)

성체 줄기세포를 점착하여 증식 및 분화시키기 위한 세포 배양면을 포함하는 세포 배양용 용기에 있어서,
상기 세포 배양면은 상기 세포 배양면 상에서 일정한 간격을 두고 배치되는 마이크로 구조물을 포함하고,
상기 마이크로 구조물은 돌출된 형상을 갖고, 1㎛ 내지 4㎛ 사이의 범위에 속하는 폭 또는 직경을 갖는, 세포 배양용 용기.A cell culture container comprising a cell culture surface for adhering, proliferating and differentiating adult stem cells,
The cell culture surface comprises microstructures arranged at regular intervals on the cell culture surface,
The microstructure has a protruding shape and has a width or diameter in a range between 1 μm and 4 μm. 제1항에 있어서,
상기 마이크로 구조물은 반구 또는 기둥 형상으로 형성되는, 세포 배양용 용기.The method of claim 1,
The microstructure is formed in a hemispherical or columnar container. 제1항에 있어서,
상기 마이크로 구조물은 1㎛ 내지 2㎛ 사이의 범위에 속하는 높이를 갖는, 세포 배양용 용기.The method of claim 1,
The microstructure has a height in a range of between 1 μm and 2 μm. 제1항에 있어서,
상기 마이크로 구조물은 4㎛ 내지 8㎛ 사이의 일정한 간격을 두고 배치되는, 세포 배양용 용기.The method of claim 1,
The microstructures are placed at regular intervals between 4 μm and 8 μm, the cell culture vessel. 제1항에 있어서,
상기 마이크로 구조물의 상면에 일정한 간격을 두고 배치되고, 균일한 나노 사이즈로 형성되는, 다수의 나노 구조물을 더 포함하는 세포 배양용 용기.The method of claim 1,
The cell culture vessel further comprises a plurality of nanostructures, which are arranged at regular intervals on the upper surface of the microstructures, are formed in a uniform nano size. 제1항에 있어서,
상기 세포 배양면과 물의 접촉각은 50° 이상인, 세포 배양용 용기.The method of claim 1,
The contact angle of the cell culture surface and water is 50 ° or more, the cell culture vessel. 제1항에 있어서,
상기 마이크로 구조물이 배치된 상기 세포 배양면은 열가소성 수지, 열경화성 수지 및 탄성중합체 중 어느 하나로 형성되는, 세포 배양용 용기.The method of claim 1,
The cell culture surface on which the microstructures are disposed is formed of any one of a thermoplastic resin, a thermosetting resin, and an elastomer. 기판 상에 포토레지스트를 적층하는 단계;
상기 포토레지스트 상에 자외선을 조사하여, 마이크로 사이즈의 제1 패턴을 형성하는 단계; 및
전주 도금(electroforming) 공정을 통해 상기 기판 상에서 상기 제1 패턴에 대응하는 제2 패턴을 갖는 금속 몰드를 형성하는 단계;
를 포함하는 세포 배양용 용기의 제조 방법.Depositing a photoresist on the substrate;
Irradiating ultraviolet light on the photoresist to form a micro sized first pattern; And
Forming a metal mold having a second pattern corresponding to the first pattern on the substrate through an electroforming process;
Method for producing a cell culture container comprising a. 제8항에 있어서,
상기 금속 몰드는 알루미늄으로 형성하는, 세포 배양 용기의 제조 방법.The method of claim 8,
And the metal mold is formed of aluminum. 제9항에 있어서,
알루미늄 양극 산화(Anode Aluminum Oxide, AAO) 공정을 통해 상기 금속 몰드 상에 나노 패턴을 형성하는 단계를 더 포함하는 세포 배양용 용기의 제조 방법.10. The method of claim 9,
The method of manufacturing a cell culture container further comprising the step of forming a nano-pattern on the metal mold through an Anode Aluminum Oxide (AAO) process. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 금속 몰드를 이용하여 엠보싱 공정을 통해 일면에 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양용 용기를 형성하는 단계를 더 포함하는 세포 배양용 용기의 제조 방법.The method according to any one of claims 8 to 10,
The method of manufacturing a cell culture container further comprising the step of forming a cell culture container including a microstructure on one surface through the embossing process using the metal mold. 제11항에 있어서,
상기 세포 배양용 용기는 열가소성 수지, 열경화성 수지 및 탄성중합체 중 어느 하나로 형성하는, 세포 배양용 용기의 제조 방법.The method of claim 11,
The cell culture container is formed of any one of a thermoplastic resin, a thermosetting resin and an elastomer, a method for producing a cell culture container. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 금속 몰드를 이용하여 엠보싱 공정을 통해 마이크로 구조물을 포함하는 세포 배양면을 형성하는 단계; 및
세포 배양용 용기의 일면에 상기 세포 배양면을 부착하는 단계;
를 더 포함하는 세포 배양용 용기의 제조 방법.The method according to any one of claims 8 to 10,
Forming a cell culture surface including a microstructure through an embossing process using the metal mold; And
Attaching the cell culture surface to one surface of the cell culture container;
Method for producing a cell culture vessel further comprising. 제13항에 있어서,
상기 세포 배양면은 열가소성 수지, 열경화성 수지 및 탄성중합체 중 어느 하나로 형성하는, 세포 배양용 용기의 제조 방법.The method of claim 13,
The cell culture surface is formed of any one of a thermoplastic resin, a thermosetting resin and an elastomer, a method for producing a cell culture container. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
세포 배양용 용기의 형상을 갖는 캐비티(cavity)를 포함하고, 상기 캐비티의 일면에 상기 금속 몰드가 부착된 금형을 배치하는 단계;
상기 캐비티 내에 수지를 주입하는 단계; 및
상기 수지가 경화되어 형성된 세포 배양용 용기를 인출하는 단계;
를 더 포함하는 세포 배양용 용기의 제조 방법.The method according to any one of claims 8 to 10,
Disposing a mold having a cavity having a shape of a cell culture container, and having a metal mold attached to one surface of the cavity;
Injecting a resin into the cavity; And
Withdrawing the container for cell culture formed by curing the resin;
Method for producing a cell culture vessel further comprising. 제15항에 있어서,
상기 수지는 열가소성 수지인, 세포 배양용 용기의 제조 방법.16. The method of claim 15,
The said resin is a thermoplastic resin, The manufacturing method of the cell culture container.
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