KR20110133716A - T cell-targeting delivery of hdac inhibitors - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A T cell-specific HDAC inhibitor carrier is provided to enable delivery of HDAC inhibitor only into T cells and to minimize immune response or side effect. CONSTITUTION: A T cell-specific HDAC(Histone deacetylase) inhibitor carrier contains biocompatible polymers, HDAC inhibitor contained in the biocompatible polymers; and T cell CD receptor-specific binder which is conjugated on the surface of the biocompatible polymers. The biocompatible polymers are PLGA. The T cell CD receptor-specific binder is an antibody, peptide, or aptamer. The biocompatible polymer is nanoparticles. A composition for reactivation of HIV(human immunodeficiency virus) contains the T cell-specific HDAC inhibitor carrier.

Description

Ｔ 세포 특이적 ＨＤＡＣ 억제제 운반{T Cell-Targeting Delivery of HDAC Inhibitors}T Cell-Targeting Delivery of HDAC Inhibitors

본 발명은 T 세포 특이적 HDAC(histone deacetylase) 억제제에 대한 운반체에 대한 기술이다.
The present invention is a description of a carrier for T cell specific histone deacetylase (HDAC) inhibitors.

유전자 발현 억제 인자인 히스톤 탈아세틸화 효소(HDAC)는 RB, mSin3a, N-CoR과 같은 전사 억제 인자들과 상호 작용하여 거대 단백질 복합체를 형성하고, 상기 복합체는 크로마틴 구조를 이루고 있는 히스톤 단백질을 탈아세틸화함으로써 유전자의 발현을 억제하는데 관여하는 것으로 알려져 있다(Laszlo Nagy, et al., Cell, 89:373-380(1997); Robin X. Lwo, et al., Cell, 92:463-473(1998)). Histone deacetylase (HDAC), a gene expression inhibitory factor, interacts with transcription inhibitors such as RB, mSin3a, and N-CoR to form a large protein complex, which complexes histone protein with chromatin structure. It is known to be involved in inhibiting gene expression by deacetylation (Laszlo Nagy, et al., Cell , 89: 373-380 (1997); Robin X. Lwo, et al., Cell , 92: 463-473 (1998).

인간의 히스톤 탈아세틸화 효소는 조직별, 환경인자 자극별로 발현량에 차이가 있으며 특히 각종 암세포 및 미분화 백혈병 세포에서 다량 발현된다는 사실이 공지되어 있다 (Wen-Ming Yang, et al., Journal of Biological Chemistry, 272:28001-28007(1997)). It is known that human histone deacetylase is expressed differently in tissues and environmental factor stimuli and is expressed in various cancer cells and undifferentiated leukemia cells (Wen-Ming Yang, et al., Journal of Biological). Chemistry , 272: 28001-28007 (1997).

또한, HDAC은 HIV(Human immunodeficiency virus)의 감염 치료에 있어서 잠복 HIV 문제를 해결할 수 있는 타겟으로 활발하게 연구되고 있다. In addition, HDAC has been actively studied as a target to solve the latent HIV problem in the treatment of HIV (Human immunodeficiency virus) infection.

Nancie M. Archina, et al.은 HDAC 억제제가 T 세포에서 잠복 감염되어 있는 HIV의 재발현 즉 재활성화를 유도한다는 것을 발표하였고, 비선택적으로 HDAC을 억제하는 VPA(Valproic Acid)가 다른 선택적인 HDAC 억제제들 보다 바이러스 재발현에 뛰어난 효과를 지님을 발표 하였다(AIDS, 23:1799-1806(2009)). 그러나, 이러한 기술은 세포의 배양액 상에서 확산에 의한 약물 전달 효과를 본 것이기 때문에 실제 치료제로서의 사용 가능성은 낮다. 만일, 이 종래기술에 따라 동물 모델로 실험을 하게 되면, T 세포 이외의 다른 세포에 끼치는 영향 및 부작용을 통제할 수 없으며, 약물의 효율적인 전달 또한 어렵기 때문에 실제 HIV 활성화에 필요한 양보다 훨씬 많은 양을 처리하여야 할 것이다.
Nancie M. Archina, et al. Reported that HDAC inhibitors induce re-expression, or reactivation, of latent infected HIV in T cells, and selective HDACs other than VPA (Valproic Acid), which non-selectively inhibit HDACs. It has been shown to have a superior effect on virus re-expression than inhibitors ( AIDS , 23: 1799-1806 (2009)). However, since this technique has seen the effect of drug delivery by diffusion on the culture of cells, the possibility of use as a real therapeutic agent is low. If tested in animal models according to this prior art, the effects and side effects on cells other than T cells cannot be controlled, and the effective delivery of drugs is also difficult, so much more than the amount required for actual HIV activation. Will have to be dealt with.

본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
Numerous papers and patent documents are referenced and cited throughout this specification. The disclosures of cited papers and patent documents are incorporated herein by reference in their entirety, and the level of the technical field to which the present invention belongs and the contents of the present invention are more clearly explained.

본 발명자들은 HIV(Human immunodeficiency virus) 감염 질환 예컨대 AIDS(Acquired immune deficiency syndrome)을 실질적으로 치료할 수 있는 기술을 개발하고자 노력하였으며, 이에 잠복 HIV를 재활성화 하는 HDAC(Histone deacetylase) 억제제가 내포되어 있고 표면에 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제가 결합되어 있는 생체적합성 폴리머로 이루어진 전달시스템을 개발하였고 이 새로운 전달시스템이 HIV가 잠복한 T 세포 특이적으로 작용하여 HIV의 재활성화를 효율적으로 달성함으로 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors have attempted to develop a technique capable of substantially treating HIV (Human immunodeficiency virus) infection diseases such as AIDS (Acquired immune deficiency syndrome). We have developed a delivery system consisting of a biocompatible polymer that binds to T cell CD receptor-specific binding agents and confirmed that this new delivery system can efficiently achieve reactivation of HIV by acting specifically on latent T cells. The present invention has been completed.

따라서, 본 발명의 목적은 T 세포 특이적 HDAC(Histone deacetylase) 억제제 운반체를 제공하는 데 있다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a T cell specific Histone deacetylase (HDAC) inhibitor carrier.

본 발명의 목적은 HIV(Human immunodeficiency virus) 재활성화용 조성물을 제공하는데 있다.An object of the present invention to provide a composition for reactivation of HIV (Human immunodeficiency virus).

본 발명의 다른 목적은 HIV(Human immunodeficiency virus) 감염 치료 약물 운반체를 제공하는 데 있다.Another object of the present invention is to provide a drug carrier for treating HIV (Human immunodeficiency virus) infection.

본 발명의 또 다른 목적은 HIV(Human immunodeficiency virus) 감염 치료 보조용(adjuvant) 조성물을 제공하는 데 있다.
Another object of the present invention to provide an adjuvant composition for the treatment of HIV (Human immunodeficiency virus) infection.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.

본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 다음을 포함하는 T 세포 특이적 HDAC(Histone deacetylase) 억제제 운반체를 제공한다:In accordance with an aspect of the present invention, the present invention provides a T cell specific Histone deacetylase (HDAC) inhibitor carrier comprising:

(a) 생체적합성 폴리머; (a) biocompatible polymers;

(b) 상기 생체적합성 폴리머 내에 포함되어 있는 HDAC(Histone deacetylase) 억제제; 및 (b) a Histone deacetylase (HDAC) inhibitor contained in the biocompatible polymer; And

(c) 상기 생체적합성 폴리머의 표면에 결합되어 있는 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제.
(c) T cell CD receptor-specific binding agent bound to the surface of the biocompatible polymer.

본 발명자들은 HIV(Human immunodeficiency virus) 감염 질환 예컨대 AIDS(Acquired immune deficiency syndrome)을 실질적으로 치료할 수 있는 기술을 개발하고자 노력하였으며, 이에 잠복 HIV를 재활성화 하는 HDAC(Histone deacetylase) 억제제가 내포되어 있고 표면에 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제가 결합되어 있는 생체적합성 폴리머로 이루어진 전달시스템을 개발하였고 이 새로운 전달시스템이 HIV가 잠복한 T 세포 특이적으로 작용하여 HIV의 재활성화를 효율적으로 달성함으로 확인하였다.The present inventors have attempted to develop a technique capable of substantially treating HIV (Human immunodeficiency virus) infectious diseases such as AIDS (Acquired immune deficiency syndrome), which is embedded with a surface-inhibited HDAC (Histone deacetylase) inhibitor that reactivates latent HIV. We have developed a delivery system consisting of a biocompatible polymer that binds to T cell CD receptor-specific binding agents, and confirmed that this new delivery system can efficiently achieve reactivation of HIV by acting specifically on T cells incubated with HIV. .

본 발명의 HIV 재활성화 조성물은 기본적으로 (a) 생체적합성 폴리머; (b) 상기 생체적합성 폴리머 내에 포함되어 있는 HDAC(Histone deacetylase) 억제제; 및 (c) 상기 생체적합성 폴리머의 표면에 결합되어 있는 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제를 포함한다.The HIV reactivation composition of the present invention basically comprises (a) a biocompatible polymer; (b) a Histone deacetylase (HDAC) inhibitor contained in the biocompatible polymer; And (c) a T cell CD receptor-specific binding agent bound to the surface of the biocompatible polymer.

본 발명에서 이용되는 생체적합성 폴리머는 당업계에서 통상적으로 이용되는 어떠한 생체적합성 폴리머도 포함한다.Biocompatible polymers used in the present invention include any biocompatible polymer commonly used in the art.

바람직하게는, 본 발명에 적합한 생체적합성 폴리머는 생체적합성 합성 폴리머 또는 천연 폴리머이다.Preferably, the biocompatible polymers suitable for the present invention are biocompatible synthetic polymers or natural polymers.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 생체 적합성 중합체로서의 합성 중합체는 폴리에스테르, 폴리하이드록시알카노에이트(PHAs), 폴리(α-하이드록시액시드), 폴리(β-하이드록시액시드), 폴리(3-하이드로식부티레이트-co-발러레이트; PHBV), 폴리(3-하이드록시프로프리오네이트; PHP), 폴리(3-하이드록시헥사노에이트; PHH), 폴리(4-하이드록시액시드), 폴리(4-하이드록시부티레이트), 폴리(4-하이드록시발러레이트), 폴리(4-하이드록시헥사노에이트), 폴리(에스테르아마이드), 폴리카프로락톤, 폴리락타이드, 폴리글리코라이드, (D,L-락트산-co-글리콜산; PLGA), 폴리디옥사논, 폴리오르토에스테르, 폴리언하이드라이드, 폴리(글리콜산-co-트리메틸렌 카보네이트), 폴리포스포에스테르, 폴리포스포에스테르 우레탄, 폴리(아미노산), 폴리사이아노아크릴레이트, 폴리(트리메틸렌 카보네이트), 폴리(이미노카보네이트), 폴리(타이로신 카보네이트), 폴리카보네이트, 폴리(타이로신 아릴레이트), 폴리알킬렌 옥살레이트, 폴리포스파젠스, PHA-PEG, 에틸렌 비닐 알코올 코폴리머(EVOH), 폴리우레탄, 실리콘, 폴리에스테르, 폴리올레핀, 폴리이소부틸렌과 에틸렌-알파올레핀 공중합체, 스틸렌-이소브틸렌-스틸렌 트리블록 공중합체, 아크릴 중합체 및 공중합체, 비닐 할라이드 중합체 및 공중합체, 폴리비닐 클로라이드, 폴리비닐 에테르, 폴리비닐 메틸 에테르, 폴리비닐리덴 할라이드, 폴리비닐리덴 플루오라이드, 폴리비닐리덴 클로라이드, 폴리플루오로알켄, 폴리퍼플루오로알켄, 폴리아크릴로니트릴, 폴리비닐 케톤, 폴리비닐 아로마틱스, 폴리스틸렌, 폴리비닐 에스테르, 폴리비닐 아세테이트, 에틸렌-메틸 메타크릴레이트 공중합체, 아크릴로니트릴-스틸렌 공중합체, ABS 수지와 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체, 폴리아마이드, 알키드 수지, 폴리옥시메틸렌, 폴리이미드, 폴리에테르, 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트 또는 폴리아크릴산-co-말레산이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the synthetic polymer as the biocompatible polymer is polyester, polyhydroxyalkanoate (PHAs), poly (α-hydroxyacid), poly (β-hydroxyacid), Poly (3-hydroxybutyrate-co-valorate; PHBV), poly (3-hydroxypropionate; PHP), poly (3-hydroxyhexanoate; PHH), poly (4-hydroxy liquid Seed), poly (4-hydroxybutyrate), poly (4-hydroxyvalorate), poly (4-hydroxyhexanoate), poly (esteramide), polycaprolactone, polylactide, polyglycolide , (D, L-lactic acid-co-glycolic acid; PLGA), polydioxanone, polyorthoester, polyanhydride, poly (glycolic acid-co-trimethylene carbonate), polyphosphoester, polyphospho Ester urethanes, poly (amino acids), polycyanoacrylates, Li (trimethylene carbonate), poly (iminocarbonate), poly (tyrosine carbonate), polycarbonate, poly (tyrosine arylate), polyalkylene oxalate, polyphosphazene, PHA-PEG, ethylene vinyl alcohol copolymer (EVOH), polyurethanes, silicones, polyesters, polyolefins, polyisobutylene and ethylene-alphaolefin copolymers, styrene-isobutylene-styrene triblock copolymers, acrylic polymers and copolymers, vinyl halide polymers and copolymers , Polyvinyl chloride, polyvinyl ether, polyvinyl methyl ether, polyvinylidene halide, polyvinylidene fluoride, polyvinylidene chloride, polyfluoroalkene, polyperfluoroalkene, polyacrylonitrile, polyvinyl ketone, Polyvinyl aromatics, polystyrene, polyvinyl ester, polyvinyl acetate, ethylene-methyl methacrylate Copolymer, acrylonitrile-styrene copolymer, ABS resin and ethylene-vinyl acetate copolymer, polyamide, alkyd resin, polyoxymethylene, polyimide, polyether, polyacrylate, polymethacrylate or polyacrylic acid- co-maleic acid.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 생체적합성 중합체로서의 천연 폴리머는 키토산, 덱스트란, 셀룰로오스, 헤파린, 히알루론산, 알기네이트, 이눌린, 녹말 또는 글리코겐이이다. According to a preferred embodiment of the present invention, the natural polymer as the biocompatible polymer is chitosan, dextran, cellulose, heparin, hyaluronic acid, alginate, inulin, starch or glycogen.

보다 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 생체적합성 폴리머는 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)(PLGA), 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리(카프로락톤), 폴리(발레로락톤), 폴리(하이드록시부틸레이트), 폴리(하이드록시발러레이트), 키토산, 덱스트란 또는 셀룰로오스이고, 가장 바람직하게는 PLGA이다. PLGA는 미국 FDA에서 생체 내 독성이 없는 것으로 승인을 받은 폴리머이다.More preferably, the biocompatible polymer used in the present invention is poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), polylactic acid, polyglycolic acid, poly (caprolactone), poly (valerolactone) , Poly (hydroxybutylate), poly (hydroxyvallate), chitosan, dextran or cellulose, most preferably PLGA. PLGA is a polymer that is approved by the US FDA as non-toxic in vivo.

본 발명에서 이용되는 생체적합성 폴리머는 바람직하게는 나노입자 형태를 갖는다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 생체적합성 폴리머는 50-500 nm의 크기, 보다 바람직하게는 100-400 nm의 크기를 갖는다.The biocompatible polymer used in the present invention preferably has the form of nanoparticles. According to a preferred embodiment of the invention, the biocompatible polymer has a size of 50-500 nm, more preferably of 100-400 nm.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 생체적합성 폴리머 내에 포함되어 있는 HDAC 억제제는 하이드록삼 산 계열의 억제제, 단쇄 지방산 계열의 억제제, 환형 테트라펩타이드 계열의 억제제, 벤자미드 계열의 억제제 또는 전자친화성 케톤 계열의 억제제이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the HDAC inhibitor included in the biocompatible polymer is a hydroxamic acid-based inhibitor, a short-chain fatty acid-based inhibitor, a cyclic tetrapeptide-based inhibitor, a benzamide-based inhibitor or an electron affinity ketone. Family of inhibitors.

하이드록삼 산 계열의 HDAC 억제제의 예는 SAHA, 파이록삼미드(Pyroxamide), CBHA, TSA(Trichostatin A), TSC(Trichostatin C), 살리실하이드록삼 산(Salicylhydroxamic Acid), ABHA(Azelaic Bishydroxamic Acid), AAHA(Azelaic-1-Hydroxamate-9-Anilide), 3Cl-UCHA[6-(3-Chlorophenylureido) carpoic Hydroxamic Acid)], 옥삼플라틴(Oxamflatin), A-161906, 스크립트에이드(Scriptaid), PXD-101, LAQ-824, CHAP, MW2796 및 MW2996을 포함한다.Examples of hydroxamic acid-based HDAC inhibitors include SAHA, pyroxamide, CBHA, Trichostatin A (TSA), Trichostatin C (TSC), Salicylhydroxamic Acid, Azelaic Bishydroxamic Acid (ABHA), AAHA (Azelaic-1-Hydroxamate-9-Anilide), 3Cl-UCHA [6- (3-Chlorophenylureido) carpoic Hydroxamic Acid)], Oxaplatin, A-161906, Scriptaid, PXD-101 , LAQ-824, CHAP, MW2796 and MW2996.

단쇄 지방산(SCFA) 계열의 HDAC 억제제의 예는 소듐 부티레이트, 이소발레레이트, 발레레이트, 4-PBA(4-Phenylbutyrate), PB(Phenylbutyrate), 프로피오네이트, 부티르아미드, 이소부티르아미드, 페닐아세테이트, 3-브로모프로피오네이트, 트리부티린, 발프로산 및 발프로에이트를 포함한다.Examples of short-chain fatty acid (SCFA) family of HDAC inhibitors include sodium butyrate, isovalerate, valerate, 4-Phenylbutyrate (4-PBA), phenylbutyrate (PB), propionate, butyramide, isobutyramide, phenylacetate , 3-bromopropionate, tributyrin, valproic acid and valproate.

환형 테트라펩타이드 계열의 HDAC 억제제의 예는 Trapoxin A, FR901228 (FK 228 or Depsipeptide), FR225497, Apicidin, CHAP, HC-Toxin, WF27082 및 Chlamydocin을 포함한다.Examples of cyclic tetrapeptide family HDAC inhibitors include Trapoxin A, FR901228 (FK 228 or Depsipeptide), FR225497, Apicidin, CHAP, HC-Toxin, WF27082 and Chlamydocin.

벤자미드 계열의 HDAC 억제제의 예는 CI-994, MS-27-275 (MS-275) 및 MS-27-275의 3’-아미노 유도체를 포함한다.Examples of benzamide family of HDAC inhibitors include CI-994, MS-27-275 (MS-275) and 3'-amino derivatives of MS-27-275.

전자친화성 케톤 계열의 HDAC 억제제의 예는 트리플루오로메틸 케톤 및 α-케토 아미드를 포함한다.Examples of electron-affinity ketone family HDAC inhibitors include trifluoromethyl ketones and α-keto amides.

보다 바람직하게는, 본 발명에 이용되는 HDAC 억제제는 단쇄 지방산 계열의 억제제이고, 가장 바람직하게는 발프로산이다.More preferably, the HDAC inhibitors used in the present invention are short chain fatty acid inhibitors, most preferably valproic acid.

상기 생체적합성 폴리머의 표면에 결합되어 있는 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는, 바람직하게는 CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e 및 CD2-CD244 수용체로 구성된 군으로부터 선택되는 CD 수용체에 특이적으로 결합하는 결합제이며, 가장 바람직하게는 CD7 수용체에 특이적으로 결합하는 것이다. 본 발명의 약물전달체가 T 세포의 CD 수용체, 예컨대 CD7에 결합하면 엔도사이토시스를 통해 세포내로 들어간다(internalization).The T cell CD receptor-specific binding agent bound to the surface of the biocompatible polymer specifically binds to a CD receptor selected from the group consisting of CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e and CD2-CD244 receptors. Is a binder, and most preferably, specifically binds to the CD7 receptor. When the drug carrier of the present invention binds to a T cell CD receptor, such as CD7, it enters the cell through endocytosis (internalization).

T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 다양한 물질을 포함한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 항체, 펩타이드 또는 앱타머이며, 보다 바람직하게는 항체이며, 보다 더 바람직하게는 scFv(single-chain variable fragment) 항체이다.T cell CD receptor-specific binding agents include various substances. According to a preferred embodiment of the invention, the T cell CD receptor-specific binding agent is an antibody, peptide or aptamer, more preferably an antibody, even more preferably a single-chain variable fragment (scFv) antibody.

본 명세서 사용되는 용어 “항체(antibody)”는 T 세포 CD 수용체에 대한 특이 항체로서, T 세포 CD 수용체에 대해 특이적으로 결합하며, 완전한 항체 형태뿐만 아니라 항체 분자의 항원 결합 단편[예컨대, scFv, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv] 을 포함한다. As used herein, the term “antibody” refers to a specific antibody to the T cell CD receptor, which specifically binds to the T cell CD receptor, and which forms antigens as well as antigen-binding fragments of the antibody molecule [eg, scFv, Fab, F (ab '), F (ab') 2 and Fv].

본 발명의 항체는 단일클론 항체, 다특이적 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 단쇄 Fvs(scFV), 단쇄 항체, Fab 단편, F(ab')단편, 다이설파이드-결합 Fvs(sdFV) 및 항-이디오타입(항-Id) 항체, 그리고 상기 항체들의 에피토프-결합 단편 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.Antibodies of the invention include monoclonal antibodies, multispecific antibodies, human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies, single chain Fvs (scFV), single chain antibodies, Fab fragments, F (ab ') fragments, disulfide-binding Fvs (sdFV) And anti-idiotype (anti-Id) antibodies, epitope-binding fragments of the antibodies, and the like.

T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 앱타머로 제작될 수 있다. 이러한 앱타머는 DNA 앱타머, RNA 앱타머 및 펩타이드 앱타머를 모두 포함한다(Bock LC et al., Nature 355(6360):5646(1992); Hoppe-Seyler F, Butz K "Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine". J Mol Med. 78(8):42630(2000); Cohen BA, Colas P, Brent R . "An artificial cell-cycle inhibitor isolated from a combinatorial library". Proc Natl Acad Sci USA. 95(24):142727(1998); Tuerk and Gold, Science, 249:505-510(1990)).T cell CD receptor-specific binding agents can be constructed with aptamers. Such aptamers include both DNA aptamers, RNA aptamers and peptide aptamers (Bock LC et al., Nature 355 (6360): 5646 (1992); Hoppe-Seyler F, Butz K "Peptide aptamers: powerful new tools for molecular medicine ". J Mol Med. 78 (8): 42630 (2000); Cohen BA, Colas P, Brent R." An artificial cell-cycle inhibitor isolated from a combinatorial library ". Proc Natl Acad Sci USA. 95 ( 24): 142727 (1998); Tuerk and Gold, Science , 249: 505-510 (1990)).

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 적합한 링커를 이용하여 생체적합성 폴이머에 결합(컨쥬게이션)된다. 본 발명에서 이용되는 링커는 당업계에서 링커로 이용되는 어떠한 화합물도 가능하며, 컨쥬게이션 시키고자 하는 작용기 종류에 따라 적합한 링커를 선택할 수 있다. 예를 들어, 링커는 N-숙시니미딜 요오도아세테이드 (N-succinimidyl iodoacetate), N-히드록시숙시니미딜 브로모아세테이트(N-Hydroxysuccinimidyl Bromoacetate), m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르 (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester), m-말레이미도벤조일-N-히드록시설포숙신이미드 에스테르 (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysulfosuccinimide ester), N-말레이미도부티릴옥시숙신아미드 에스테르 (N-Maleimidobutyryloxysuccinamide ester), (N-Maleimidobutyryloxysulfosuccinamide ester), E-말레이미도카프로산 히드라지드ㆍHCl (E-Maleimidocaproic acid hydrazideㆍHCl), [N-말레이디도카프로일옥시-숙신아미드] ([N-(E-maleimidocaproyloxy)-succinamide]), [N-말레이미도카프로일옥시)-설포숙신아미드] ([N-(E-maleimidocaproyloxy)-sulfosuccinamide]), 말레이미도프로피온산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (Maleimidopropionic Acid N-Hydroxysuccinimide Ester), 말레이미도프로피온산 N-히드록시설포숙신이미드 에스테르 (Maleimidopropionic Acid N-Hydroxysulfosuccinimide Ester), 말레이미도프로피온산 히드라지드ㆍHCl (Maleimidopropionic Acid HydrazideㆍHCl), N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트 (N-Succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate), N-숙시니미딜-4-(요오도아세틸)아미노벤조에이트 (N-Succinimidyl-(4-iodoacetyl) aminobenzoate), 숙시니미딜-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트 (Succinimidyl-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-l-carboxylate), 숙시니미딜-4-(말레이미도페닐)부틸레이트(Succinimidyl-4-(p-maleimidophenyl)butyrate), 설포숙시니미딜-(4-요오도아세틸)아미노벤조에이트 (Sulfosuccinimidyl-(4-iodoacetyl)aminobenzoate), 설포숙시니미딜-4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트 (Sulfosuccinimidyl-4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate), 설포숙시니미딜-4-(p-말레이미도페닐)부틸레이트 (Sulfosuccinimidyl-4-(p-maleimidophenyl)butyrate), m-말레이미도벤조산 히드라지드ㆍHCl (m-Maleimidobenzoic acid hydrazide HCl), 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실산 히드라지드ㆍHCl (4-(N-Maleimidomethyl)cyclohexane-l-carboxylic acid hydrazideㆍHCl), 4-(4-N-말레이미도페닐)부티르산 히드라지드ㆍHCl (4-(4-N-maleimidophenyl)butyric acid hydrazideㆍHCl), N-숙시니미딜 3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트 (N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio) propionate), 비스(설포숙시니미딜)수베레이트(Bis(sulfosuccinimidyl)suberate), 1,2-디[3’-(2’-피리딜디티오)프로피온아미도] 부탄(1,2-Di[3’-(2’pyridyldithio)propionamido] Butane), 디숙시니디밀 수베레이트(Dissuccinimidyl Suberate), 디숙시니미딜 타르타레이트(Dissuccinimidyl Tartarate), 디설포숙시니미딜 타르타레이트 (Disulfosuccinimdiyl Tartarate), 디티오-비스-(숙시니미딜 프로피오네이트) (Dithio-bis-(succinimidyl propionate)), 3,3‘-디티오-비스-(설포숙시니미딜-프로피오네이트)(3,3'-Dithio-bis-(sulfosuccinimidyl-propionate)), 에틸렌 글리콜 비스(숙시니미딜숙시네이트 (Ethylene Glycol bis(Succinimidylsuccinate)) 및 에틸렌 글리콜 비스(설포숙시니미딜숙시네이트)(Ethylene Glycol bis(Sulfosuccinimidylsuccinate))를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.According to a preferred embodiment of the invention, the T cell CD receptor-specific binding agent is bound (conjugated) to the biocompatible polymer using a suitable linker. The linker used in the present invention may be any compound used as a linker in the art, and a suitable linker may be selected according to the type of functional group to be conjugated. For example, the linker may be N-succinimidyl iodoacetate, N-hydroxysuccinimidyl bromoacetate, m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy M-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester, m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysulfosuccinimide ester, N-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester N-Maleimidobutyryloxysuccinamide ester, N-Maleimidobutyryloxysulfosuccinamide ester, E-maleimidocaproic acid hydrazide HCl, N-maleimidobutyryloxysuccinamide ester (N-maleimidobutyryloxysuccinamide ester) N- (E-maleimidocaproyloxy) -succinamide]), [N-maleimidocaproyloxy) -sulfosuccinamide] ([N- (E-maleimidocaproyloxy) -sulfosuccinamide]), maleimidopropionic acid N-hydroxysuccinate Mid ester (Maleimidopropionic Acid N-Hydroxys uccinimide Ester), maleimidopropionic acid N-Hydroxysulfosuccinimide Ester, maleimidopropionic acid hydrazide-HCl (Maleimidopropionic Acid HydrazideHCl), N-succinimidyl-3- (2 -Pyridyldithio) propionate (N-Succinimidyl-3- (2-pyridyldithio) propionate), N-succinimidyl-4- (iodoacetyl) aminobenzoate (N-Succinimidyl- (4-iodoacetyl) aminobenzoate), succinimidyl- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate (Succinimidyl- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-l-carboxylate), succinimidyl-4- (maleimidophenyl) butylate (Succinimidyl-4- (p-maleimidophenyl) butyrate), Sulfosuccinimidyl- (4-iodoacetyl) aminobenzoate (Sulfosuccinimidyl- (4-iodoacetyl) aminobenzoate), Sulfosuccinimidyl-4- (N Maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate (Sulfosuccinimidyl-4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate) Sulfosuccinimidyl-4- (p-maleimidophenyl) butyrate, m-maleimidobenzoic acid hydrazide HCl, 4- (p-maleimidophenyl) butyrate N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylic acid hydrazideHCl (4- (N-Maleimidomethyl) cyclohexane-l-carboxylic acid hydrazideHCl), 4- (4-N-maleimidophenyl) butyric acid hydra Zide-HCl (4- (4-N-maleimidophenyl) butyric acid hydrazideHCl), N-succinimidyl 3- (2-pyridyldithio) propionate (N-succinimidyl 3- (2-pyridyldithio) propionate ), Bis (sulfosuccinimidyl) suberate, 1,2-di [3 '-(2'-pyridyldithio) propionamido] butane (1,2-Di [ 3 '-(2'pyridyldithio) propionamido] Butane), dissuccinimidyl suberate, dissuccinimidyl tartarate, disulfosuccinimidyl tartarate, disulfosuccinimdiyl tartarate Dithio-bis- (succinimidyl propionate), 3,3'-dithio-bis- (sulfosuccinimidyl-propionate) (3,3'- Dithio-bis- (sulfosuccinimidyl-propionate)), ethylene glycol bis (Sthynimidylsuccinate) and ethylene glycol bis (sulfosuccinimidylsuccinate) (Sthnosuccinimidylsuccinate) Including but not limited to.

본 발명의 T 세포 특이적 HDAC 억제제 운반체는 하기의 실시예에 기재된 바와 같이 잠복한 HIV의 재활성화를 유도할 수 있다. 또한, 본 발명의 T 세포 특이적 HDAC 억제제 운반체는 HDAC 억제가 요구되는 질환, 질병 또는 상태의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 T 세포 특이적 HDAC 억제제 운반체에 의해 예방 또는 치료될 수 있는 질환, 질병 또는 상태는 암, 염증성 질환, 건선, 섬유성증식 질환(예컨대, 간 섬유증), 자가면역질환, 바이러스 감염, 곰팡이 감염, 박테리아 감염 및 과도한 혈관신생을 포함한다.
T cell specific HDAC inhibitor carriers of the invention can induce reactivation of latent HIV as described in the Examples below. In addition, the T cell specific HDAC inhibitor carriers of the present invention can be used for the prevention or treatment of diseases, diseases or conditions in which HDAC inhibition is required. For example, diseases, diseases or conditions that can be prevented or treated by the T cell specific HDAC inhibitor carriers of the invention include cancer, inflammatory diseases, psoriasis, fibrotic disease (eg, liver fibrosis), autoimmune diseases, Viral infections, fungal infections, bacterial infections and excessive angiogenesis.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 T 세포 특이적 HDAC(Histone deacetylase) 억제제 운반체를 포함하는 HIV(Human immunodeficiency virus) 재활성화용 조성물을 제공하는 데 있다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a composition for reactivating HIV (Human immunodeficiency virus) comprising the T cell-specific HDAC (Histone deacetylase) inhibitor carrier of the present invention described above.

본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 본 발명의 T 세포 특이적 HDAC 억제제 운반체를 포함하는 HIV 감염 치료 약물 운반체를 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a drug carrier for HIV infection comprising the above-described T cell specific HDAC inhibitor carrier of the present invention.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상술한 본 발명의 본 발명의 T 세포 특이적 HDAC 억제제 운반체를를 포함하는 HIV 감염 치료 보조용(adjuvant) 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a composition for adjuvant treatment of HIV infection comprising the above-described T cell specific HDAC inhibitor carrier of the present invention.

본 발명의 HIV 재활성화용 조성물, 약물운반체 및 HIV 감염 치료 보조 조성물은 상술한 본 발명의 HIV 재활성화용 조성물을 이용하기 때문에, 이 둘 사이의 공통된 내용은 중복 기재에 따른 본 명세서의 과도한 복잡성을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.Since the composition for HIV reactivation, the drug carrier and the HIV infection treatment composition of the present invention utilize the composition for HIV reactivation of the present invention described above, the common content between the two is the excessive complexity of the present specification according to the overlapping description. The description is omitted to avoid.

상술한 HIV 감염 치료 약물 운반체 및 HIV 감염 치료 보조용(adjuvant) 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물로 제공될 수 있다.The above-described HIV infection treatment drug carrier and HIV infection treatment adjuvant composition may be provided in a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier.

본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.Pharmaceutically acceptable carriers included in the pharmaceutical compositions of the present invention are those commonly used in the preparation, such as lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, starch, acacia rubber, calcium phosphate, alginate, gelatin, Calcium silicate, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose, water, syrup, methyl cellulose, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, and the like It doesn't happen. In addition to the above components, the pharmaceutical composition of the present invention may further include a lubricant, a humectant, a sweetener, a flavoring agent, an emulsifier, a suspending agent, a preservative, and the like. Suitable pharmaceutically acceptable carriers and formulations are described in detail in Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995).

본 발명의 약제학적 조성물은 비경구 투여가 바람직하고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 국소 주입, 복강 주입 등으로 투여할 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention is preferably parenteral administration, and when parenteral administration can be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, intramuscular injection, topical injection, intraperitoneal injection and the like.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.0001-100 ㎎/㎏이다.Suitable dosages of the pharmaceutical compositions of the invention vary depending on factors such as the formulation method, mode of administration, age, weight, sex, morbidity, condition of food, time of administration, route of administration, rate of excretion and response to reaction, Usually a skilled practitioner can easily determine and prescribe a dosage effective for the desired treatment or prophylaxis. According to a preferred embodiment of the present invention, the daily dose of the pharmaceutical composition of the present invention is 0.0001-100 mg / kg.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
The pharmaceutical compositions of the present invention may be prepared in unit dosage form by formulating with a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient according to methods which can be easily carried out by those skilled in the art. Or may be prepared by incorporation into a multi-dose container. The formulations may be in the form of solutions, suspensions or emulsions in oils or aqueous media, or in the form of excipients, powders, granules, tablets or capsules, and may additionally contain dispersing or stabilizing agents.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:The features and advantages of the present invention are summarized as follows:

(a) 하기의 실시예에 기재된 본 발명의 구체적인 일 실시예에 따르면, 대체적으로 물에 대한 친화력이 적은 HDAC 억제제를 oil in water emulsion 방식으로 PLGA 나노입자 안에 넣어줌으로써 지속적인 약물 방출이 가능하게 하였고, T 세포 표면의 수용체와 특이적으로 결합하는 CD7 항체를 결합시킴으로써 목표로 하는 T 세포로만 나노입자의 전달이 가능하다.(a) According to a specific embodiment of the present invention described in the following Examples, the HDAC inhibitor having a relatively low affinity for water was introduced into the PLGA nanoparticles in an oil in water emulsion method to enable sustained drug release. By binding CD7 antibodies that specifically bind to receptors on the surface of T cells, nanoparticles can be delivered only to target T cells.

(b) T 세포 CD 수용체, 예를 들어 CD7 결합 항체를 이용하여 목표로 하는 T 세포로만 HDAC 억제제의 전달이 가능하므로 다른 세포에 의해 발생될 수 있는 면역 반응이나 부작용 등을 최소화 할 수 있을 뿐만 아니라, 이를 통해 세포로의 효율적인 전달이 가능하기 때문에 HDAC 억제 약물의 사용량을 현저히 줄여 세포 독성을 줄이고 제작 비용 또한 절감할 수 있다.
(b) It is possible to deliver the HDAC inhibitor only to the target T cells using a T cell CD receptor, for example a CD7 binding antibody, thereby minimizing the immune response or side effects that may be caused by other cells. This allows for efficient delivery to cells, significantly reducing the use of HDAC inhibitors, reducing cytotoxicity and lowering manufacturing costs.

도 1은 본 발명에서 이용한 oil in water (O/W) 에멀젼 방법의 모식도이다.
도 2는 에멀젼 생성 앰플리튜드 의존적 PLGA 나노입자의 크기 변화를 보여준다(분자량: 10 kDa; 유기용매 내 PLGA 부피비: 10%)
도 3은 분자량 의존적 PLGA 나노입자의 크기 변화를 보여준다(유기용매 내 PLGA 부피비: 10%, 소니케이션을 이용한 에멀젼 생성).
도 4는 유기용매 내 PLGA 부피비에 의존적 의존적 PLGA 나노입자의 크기 변화를 보여준다(분자량: 10 kDa; 소니케이션을 이용한 에멀젼 생성).
도 5는 발프로산-로딩된 PLGA 나노구의 SEM 이미지이다.
도 6은 발프로산(VPA)에 대한 HPLC 분석 결과이다(파장: 210 nm; 보유시간: 3.4 min)).
도 7에서 (a)는 VPA -로딩된 PLGA 나노입자의 로딩 효율이고 (b)는 축적 방출 패턴이다(VPA 대 PLGA의 상대적 부피 비율, A: VPA:PLGA=4.5μl:1mg, B: VPA:PLGA=2.25μl:1mg, C: VPA:PLGA=1.13μl:1mg)).
도 8은 나노입자의 표면 변형에 대한 모식도이다.
도 9는 scFvCD7의 정제 확인을 위한 SDS-PAGE 결과이다.
도 10은 scFvCD7의 T 세포 특이적 결합을 보여준다.
도 11은 아세트산 무수물 또는 Alexa488이 컨쥬게이션된 scFvCD7에 대한 모식도이다.
도 12는 N-블록킹된 scFvCD7가 결합된 VPA-로딩된 나노입자에 대한 모식도이다.
도 13은 Alexa488 피크 방출 스펙트럼이다.
도 14는 Alexa488-scFvCD7-PLGA는 A3.01 세포에 결합하는 것을 분석한 결과이다.
도 15는 ACH2의 양 의존적 바이러스 재활성화 분석 결과이다.
도 16은 VPA로 처리되거나 또는 scFvCD7-VPA-PLGA 나노입자로 처리된 재활성화 세포의 수에 대한 히스토그램이다.
도 17은 PMA 1 nM (양성 대조군), VPA 0.1 μM, scFvCD7-VPA-PLGA 나노입자 0.1 μM 또는 scFvCD16-VPA-PLGA 나노입자 0.1 μM로 처리되거나 또는 처리되지 않은(Mock) ACH2 세포에서 활성화된 HIV의 증가를 보여주는 실험 결과이다.
도 18은 Alexa488-scFvCD7-PLGA 또는 Alexa488-scFvCD7-PLGA으로 처리된 PE-conjugated CD3 항체로 염색된 PBMC에 대한 결과이다.1 is a schematic diagram of the oil in water (O / W) emulsion method used in the present invention.
Figure 2 shows the change in the size of the emulsion-generating amplifier dependent PLGA nanoparticles (molecular weight: 10 kDa; PLGA volume ratio in the organic solvent: 10%)
Figure 3 shows the change in size of molecular weight dependent PLGA nanoparticles (PLGA volume ratio in organic solvent: 10%, emulsion production using sonication).
4 shows the change in size of PLGA nanoparticles dependent on the PLGA volume ratio in the organic solvent (molecular weight: 10 kDa; emulsion generation using sonication).
5 is an SEM image of valproic acid-loaded PLGA nanospheres.
6 shows the results of HPLC analysis for valproic acid (VPA) (wavelength: 210 nm; retention time: 3.4 min).
In Figure 7 (a) is the loading efficiency of VPA-loaded PLGA nanoparticles and (b) is the cumulative release pattern (relative volume ratio of VPA to PLGA, A: VPA: PLGA = 4.5 μl: 1 mg, B: VPA: PLGA = 2.25 μl: 1 mg, C: VPA: PLGA = 1.13 μl: 1 mg).
8 is a schematic diagram of surface modification of nanoparticles.
9 shows SDS-PAGE results for confirmation of purification of scFvCD7.
10 shows T cell specific binding of scFvCD7.
11 is a schematic diagram of scFvCD7 conjugated with acetic anhydride or Alexa488.
12 is a schematic of VPA-loaded nanoparticles bound to N-blocked scFvCD7.
13 is Alexa488 peak emission spectrum.
Figure 14 shows the result of analyzing that Alexa488-scFvCD7-PLGA binds to A3.01 cells.
15 shows the results of the amount dependent virus reactivation analysis of ACH2.
16 is a histogram of the number of reactivated cells treated with VPA or treated with scFvCD7-VPA-PLGA nanoparticles.
FIG. 17 shows HIV activated or untreated in Mock ACH2 cells with or without PMA 1 nM (positive control), VPA 0.1 μM, scFvCD7-VPA-PLGA nanoparticles 0.1 μM or scFvCD16-VPA-PLGA nanoparticles 0.1 μM. Experimental results showing an increase in.
18 shows results for PBMCs stained with PE-conjugated CD3 antibody treated with Alexa488-scFvCD7-PLGA or Alexa488-scFvCD7-PLGA.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention. .

실시예Example

실시예 1: 에멀젼(Emulsion) 방법을 통한 PLGA 전달체 제조Example 1 Preparation of PLGA Carrier by Emulsion Method

고분자 나노입자 제조를 위한 대표적인 방법으로 에멀젼 기법이 있으며, 이 중 oil in water (O/W) 에멀젼 방법을 사용할 경우 나노입자 내 소수성 약물을 효과적으로 로딩 시킬 수 있다(도 1). 소수성 약물과 고분자를 지용성 용매에 녹인 다음 큰 부피의 수용성 용매에 넣어 분산시키면 나노입자 크기를 갖는 고분자 안에 소수성 약물이 함유되는 형태를 띤다. 이후 지용성 용매를 공기 중으로 증발시키고 일련의 세척 과정을 거쳐 동결 건조 하여 보관한다.Representative method for the preparation of polymer nanoparticles is an emulsion technique, the oil in water (O / W) of the emulsion method can be used to effectively load the hydrophobic drug in the nanoparticles (Fig. 1). Hydrophobic drugs and polymers are dissolved in a fat-soluble solvent and dispersed in a large volume of water-soluble solvent to form a hydrophobic drug in a polymer having a nanoparticle size. Thereafter, the fat-soluble solvent is evaporated into the air, stored in a freeze-dried process through a series of washing processes.

에멀젼 방법을 이용하여 나노입자 제조 시 고분자 분자량 및 농도, 에멀젼 생성 강도, 유/수상의 부피비, 온도 등이 입자 크기에 영향을 주기 때문에 최적화된 나노입자 제조를 위한 각각의 조건 확립이 요구 된다. 조건 확립을 위해 나머지 요소들은 고정시키고 오직 한 가지 요소만을 변화시킴으로써 나노입자 제조에 효과적인 각각의 조건을 찾을 수 있다. When the nanoparticles are prepared using the emulsion method, the molecular weight and concentration of the polymer, the strength of the emulsion formation, the volume ratio of the oil / water phase, and the temperature affect the particle size. By fixing the remaining elements and changing only one element to establish conditions, each condition can be found to be effective for nanoparticle fabrication.

첫 번째로 에멀젼 생성 강도에 변화를 주어 입자 크기를 비교해 본 결과, 가장 강한 에멀젼 생성 강도를 가진 Sonicator 이용 시 다른 방법에 비해 작고 균일한 크기의 입자를 얻어낼 수 있었다(도 2).As a result of comparing the particle size by changing the emulsion generation strength, when using the Sonicator having the strongest emulsion generation strength, it was possible to obtain small and uniform sized particles compared to other methods (FIG. 2).

고분자의 분자량 및 농도는 유상의 점성도에 밀접한 영향을 준다고 알려져 있으며, 이를 토대로 실험해 본 결과 분자량이 작아질수록 고분자 나노입자의 크기가 작아지는 것을 확인하였고(도 3), 마찬가지로 지용성 용매와의 부피비를 적게 할수록 나노입자의 크기가 작아지는 것을 확인하였다(도 4).The molecular weight and concentration of the polymer is known to have a close effect on the viscosity of the oil phase, and based on the experiments, it was confirmed that the smaller the molecular weight, the smaller the size of the polymer nanoparticles (Fig. 3), the volume ratio with the fat-soluble solvent It was confirmed that the smaller the smaller the size of the nanoparticles (Fig. 4).

결론적으로 10 kDa의 분자량을 가진 PLGA[poly(lactic-co-glycolic acid)]를 5% 부피비로 지용성 용매에 녹여 Sonicator를 이용하여 수용성 용매상에서 에멀젼을 생성시킬 때 약물 전달에 가장 효과적인 나노입자가 제조됨을 알 수 있다.In conclusion, nanoparticles prepared by dissolving PLGA [poly (lactic-co-glycolic acid)] with a molecular weight of 10 kDa in 5% by volume in fat-soluble solvents were used to produce emulsions in aqueous solvents using Sonicator. It can be seen that.

실험을 통해 도출한 최적화된 고분자 나노입자 제조 방법을 이용하여 지름이 약 200 nm 정도의 구형을 띄는 VPA(Valproic acid) 함유 고분자 나노입자를 제조하였다(도 5). Zeta sizer를 통해 약 215 nm의 크기를 갖고 표면에 -28 mV의 음전하를 띄는 고분자 나노입자가 만들어졌음을 확인하였다(표 1). HPLC 검량을 통해 약 50%의 VPA가 나노입자 내에 함유되어 있는 것을 확인하였다(도 6).Using the optimized polymer nanoparticle manufacturing method derived through the experiment to prepare a VPA (Valproic acid) containing polymer nanoparticles having a spherical diameter of about 200 nm (Fig. 5). Zeta sizer confirmed that polymer nanoparticles having a size of about 215 nm and a negative charge of -28 mV were formed on the surface (Table 1). HPLC calibration confirmed that about 50% of VPA was contained in the nanoparticles (FIG. 6).

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또한 에멀젼 방법으로 고분자 나노 입자를 만들 때, 다양한 비율의 PLGA와 VPA를 사용하여 로딩효율(도 7a)과 방출량(도 7b)을 확인하였다. VPA의 양이 많아질수록 로딩효율은 감소하는 것과 결과적으로는 거의 비슷한 로딩양을 보이는 것을 보아 PLGA 나노입자에는 일정한 양의 VPA만이 함유될 수 있음을 확인하였다. 또한 약물 방출량을 측정해보았을 때 6시간동안 거의 80%의 약물이 나노입자로부터 방출됨을 확인하였다.In addition, when preparing the polymer nanoparticles by the emulsion method, the loading efficiency (Fig. 7a) and the release amount (Fig. 7b) using the PLGA and VPA of various ratios were confirmed. As the amount of VPA increases, the loading efficiency decreases, and as a result, the loading amount is almost similar. Therefore, the PLGA nanoparticles can contain only a certain amount of VPA. In addition, when the drug release was measured, it was confirmed that almost 80% of the drug was released from the nanoparticles in 6 hours.

확립된 고분자 나노입자 제조기술을 토대로 표면 개질을 통해 특정 세포 특이적 전달 효율을 극대화시키고자 하였다. PLGA 나노입자와 ethylene diamine을 균일하게 혼합한 후, EDC/NHS 반응을 통해 표면의 카르복실기 작용기를 모두 아민 작용기로 바꿔줌으로써 세포 특이적인 리간드나 항체의 말단 카르복실기 그룹과 반응이 가능한 표면 개질된 나노입자를 제조하였다(도 8).
Based on the established polymer nanoparticle manufacturing technology, the surface modification was intended to maximize the specific cell-specific delivery efficiency. After uniformly mixing PLGA nanoparticles with ethylene diamine, the surface-modified nanoparticles capable of reacting with cell-specific ligands or terminal carboxyl groups of the antibody by converting all of the surface carboxyl functional groups into amine functional groups by EDC / NHS reaction. Prepared (FIG. 8).

실시예 2: 항-CD7 single chain antibody (scFvCD7)의 제조 및 정제Example 2: Preparation and Purification of Anti-CD7 Single Chain Antibody (scFvCD7)

T 세포 표면에 존재하며 항체와 결합 후 세포 내로 이동하는 CD7 단백질에 결합하는 항 CD7 항체 발현 플라스미드로부터 VL-VH 부위만을 클로닝 하였다. 박테리아에서 단백질을 발현할 수 있는 시스템을 갖춘 pET26b(+) 플라스미드 벡터내에 결합시켜 항체 발현 벡터를 확립하였다. 형질변환을 통해 벡터를 박테리아로 주입하고 IPTG를 이용하여 단백질 발현을 유도한 후 일련의 정제 과정을 통해 얻어진 박테리아 추출물로부터 NI-NTA column을 이용한 친화성 크로마토그래피를 통하여 순수한 항체만 정제하였다. SDS gel 상에서 여러 크기의 단백질을 함유하고 있는 마커와 함께 전기 영동하여 27 kDa 근처에서 하나의 밴드만이 나타나는 것을 통해 일차적으로 하나의 단백질만이 순수하게 정제가 되었다는 것을 확인함(도 9).
Only the VL-VH site was cloned from an anti-CD7 antibody expression plasmid that is present on the T cell surface and binds to the CD7 protein that migrates into the cell after binding to the antibody. Antibody expression vectors were established by binding into pET26b (+) plasmid vectors with systems capable of expressing proteins in bacteria. After transformation, the vector was injected into bacteria, protein expression was induced using IPTG, and only pure antibodies were purified through affinity chromatography using NI-NTA columns from bacterial extracts obtained through a series of purification procedures. Electrophoresis with markers containing proteins of different sizes on the SDS gel showed that only one band was purely purified, primarily by only one band near 27 kDa (FIG. 9).

실시예 3: T 세포 특이적 전달체인 CD7 단일조각항체와 개발된 HDAC 억제제를 이용한 면역 나노입자 제조와 T 세포 특이적 약물전달방법 확립Example 3 Preparation of Immune Nanoparticles and Establishment of T Cell Specific Drug Delivery Using CD7 Monoclonal Antibody, a T Cell Specific Carrier, and HDAC Inhibitor

정제된 CD7 단일조각항체(scFvCD7)가 T 세포의 CD7 리간드에 효율적으로 결합할 수 있는지 알아보기 위해, 에이즈바이러스가 유도되기 전의 정상 상태의 T 세포인 A3.01 세포에서 scFvCD7의 결합능력을 확인함(도 10).To determine whether the purified CD7 fragment fragment (scFvCD7) can efficiently bind to the CD7 ligand of T cells, we confirmed the ability of scFvCD7 to bind to A3.01 cells, which are normal T cells before HIV virus is induced. (FIG. 10).

scFvCD7과 나노입자의 결합을 최대화 하기위해 scFvCD7의 아미노 말단을 acetic anhydride 또는 Alexa488-SDP ester를 화학적으로 결합시킴(도 11). PLGA 나노입자의 아민 작용기와 scFvCD7의 카르복실기를 NHS/EDC 반응을 통해 화학적으로 결합시킴(도 12).The amino terminus of scFvCD7 was chemically bound to acetic anhydride or Alexa488-SDP ester to maximize scFvCD7 and nanoparticle binding (FIG. 11). The amine functional group of the PLGA nanoparticles and the carboxyl group of scFvCD7 are chemically bound via NHS / EDC reaction (FIG. 12).

zeta-sizer를 통해 아민 작용기 도입 후와 scFvCD7의 결합 후의 size와 zeta전위를 측정(표 2). 아민 작용기 도입 후 zeta 전위가 거의 0에 가깝게 증가한 것으로 보아 PLGA 나노입자의 표면에 나와 음전하를 띄게 하던 카르복실기가 양전하를 띄는 아민 작용기로 바뀐 것을 확인함. scFvCD7을 결합한 후에 크기가 눈에 띄게 증가하고 zeta 전위는 다시 음전하로 바뀐 것을 보아 PLGA 나노 입자 표면의 아민 작용기가 scFvCD7으로 바뀐 것을 확인함. 하기 표는 PLGA 나노입자, PLGA-NH2 나노입자 및 PLGA-scFvCD7 나노입자의 크기 및 제타 포텐셜을 나타냄.The zeta-sizer was used to measure the size and zeta potential after the introduction of an amine group and the binding of scFvCD7 (Table 2). The zeta potential increased nearly to zero after the introduction of the amine function, confirming that the carboxyl group, which appeared on the surface of the PLGA nanoparticles, became a negatively charged amine group. After binding scFvCD7, the size increased noticeably and the zeta potential changed back to negative charge, confirming that the amine functionality on the surface of the PLGA nanoparticles changed to scFvCD7. The table below shows the size and zeta potential of PLGA nanoparticles, PLGA-NH 2 nanoparticles and PLGA-scFvCD7 nanoparticles.

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Alexa488이 결합되어 있는 scFvCD7을 PLGA 나노입자와 화학적으로 결합시킴으로써 Alexa488의 peak emission을 spectrophotometer를 통해 확인함(도 13). scFvCD7의 결합 반응이 끝난 후 세 번의 세척 과정을 거치는데, 한 번의 세척이 끝날 때마다 그 상층액의 일부를 따냄 (1st, 2nd, 3rd supernatant). 마지막 세척이 끝난 후 나노입자를 PBS 상에 분산 시킨 용액의 일부를 따냄(NP). PLGA에 결합하지 않은 Alexa488-scFvCD7은 컨트롤로 사용함(Alexa488-scFvCD7). 모든 샘플이 Alexa488의 peak emission 양상과 같은 것으로 보아 상층액 상에 PLGA와 결합하지 않은 Alexa-scFvCD7이 존재하고 있음을 알 수 있고, PLGA 나노입자에도 scFvCD7이 잘 결합되어 있음을 확인함.The peak emission of Alexa488 was confirmed through a spectrophotometer by chemically bonding scFvCD7 with Alexa488 to PLGA nanoparticles (FIG. 13). After the completion of the scFvCD7 binding reaction, three washes are performed, each time a portion of the supernatant is removed (1st, 2nd, 3rd supernatant). After the last wash, a portion of the solution in which the nanoparticles were dispersed on PBS was extracted (NP). Alexa488-scFvCD7 without PLGA binding is used as a control (Alexa488-scFvCD7). All samples were the same as the peak emission pattern of Alexa488, indicating that Alexa-scFvCD7 was not present in the supernatant solution, and scFvCD7 was well bound to the PLGA nanoparticles.

Alexa488이 결합되어 있는 scFvCD7을 PLGA 나노입자와 화학적으로 결합 시키고 A3.01 세포에 전달시켜 형광 발현을 확인함(도 14). 숙주잠복 에이즈 함유 ACH2 T 세포에서 효과적으로 바이러스의 재발현을 유도할 수 있는 HDAC 억제제의 양을 확인하기 위해 여러 농도의 HDAC 억제제를 처리한 후 24시간 뒤 에이즈바이러스의 gag 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 처리하여 숙주잠복 에이즈바이러스의 재발현을 평가함(도 15). VPA가 로딩되어 있고, scFvCD7과 결합되어 있는 PLGA 나노입자를 VPA의 적정 농도에 맞추어 ACH2 T 세포에 처리하고 약 1시간 뒤에 PBS로 wash 하여 세포 표면에 결합하지 않고 배지 상에 떠있는 PLGA 나노입자를 제거한 후 24시간 뒤에 숙주잠복 에이즈바이러스의 재발현을 평가함. Alexa488이 결합되어 있는 PLGA 나노입자를 PBMC에 처리하여 실제 나노입자의 T 세포 특이적인 전달을 확인함.
Alexa488 bound scFvCD7 chemically coupled to PLGA nanoparticles and delivered to A3.01 cells to confirm fluorescence expression (FIG. 14). Antibodies that specifically bind to the gag protein of HIV virus 24 hours after treatment with different concentrations of HDAC inhibitors to determine the amount of HDAC inhibitors that can effectively induce virus re-expression in hostlated HIV-containing ACH2 T cells To evaluate the re-expression of host latency HIV virus (FIG. 15). PLGA nanoparticles loaded with VPA and bound with scFvCD7 were treated with ACH2 T cells at the appropriate concentration of VPA and washed with PBS after about 1 hour to remove PLGA nanoparticles floating on the medium without binding to the cell surface. Evaluate re-expression of host latency HIV virus 24 hours after removal. PLGA nanoparticles bound to Alexa488 were treated with PBMC to confirm T cell specific delivery of actual nanoparticles.

실시예 4: CD7 단일조각항체와 HDAC 억제제를 이용한 면역나노입자의 바이러스 재발현 효능 평가Example 4 Evaluation of Virus Reexpression Efficacy of Immunized Nanoparticles Using CD7 Monoclonal Antibody and HDAC Inhibitor

VPA가 로딩되어 있고, scFvCD7과 결합되어 있는 PLGA 나노입자를 VPA의 적정 농도라고 생각되는 2 μM에 맞추어 ACH2 T 세포에 처리한 후 24시간 뒤, 에이즈바이러스의 gag 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 처리하여 숙주 잠복 에이즈 바이러스의 재발현을 평가함(도 16). 면역나노입자와 VPA를 각각 2 μM씩 처리한 세포에서 비슷한 MFI(Mean Florescent Intensity)값을 갖는 것으로 미루어, 서로 비슷한 양의 바이러스의 재발현 효능을 나타내는 것처럼 보임. 그러나 조금 더 높은 농도의 VPA를 처리한 세포에서는 면역나노입자를 처리한 세포에서는 나타나지 않는 심각한 세포 사멸이 일어나는 것을 알 수 있음.After 24 hours of treatment with ACH2 T cells loaded with VPA and PLGA nanoparticles bound to scFvCD7 at an appropriate concentration of 2 μM, the antibody specifically binding to the gag protein of HIV virus Treatment to evaluate re-expression of host latent AIDS virus (FIG. 16). Similar MFI (Mean Florescent Intensity) values in cells treated with 2 μM each of immunonanoparticles and VPA appear to indicate the effect of re-expressing similar amounts of virus. However, it can be seen that severe cell death occurs in cells treated with a slightly higher concentration of VPA, which does not occur in cells treated with immunonanoparticles.

VPA가 로딩되어 있고, scFvCD7과 결합되어 있는 PLGA 나노입자를 VPA의 적정 농도라고 생각되는 2 μM에 맞추어 ACH2 T 세포에 처리하고 약 30분 뒤에 PBS로 wash 하여 세포 표면에 결합하지 않고 배지 상에 떠있는 VPA 및 PLGA 나노입자를 제거한 후 24시간 뒤에 에이즈바이러스의 gag 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 처리하여 숙주 잠복 에이즈바이러스의 재발현을 평가함(도 17). 세포 활성화에 사용되는 화합물 PMA는 100% 이상의 바이러스 재발현 효과를 보였고, 면역 나노입자는 약 33% 이상의 HIV 재발현 효능을 나타내는 반면에, VPA를 처리한 세포에서는 8%만이 HIV 재발현 효능을 나타내는 것을 확인함.PLGA nanoparticles loaded with VPA and bound with scFvCD7 were treated with ACH2 T cells at 2 μM, which is considered to be the proper concentration of VPA, washed with PBS after about 30 minutes, and floated on the medium without binding to the cell surface. Twenty four hours after removal of the present VPA and PLGA nanoparticles, treatment with antibodies specifically binding to the gag protein of the HIV virus was used to evaluate the re-expression of the host latency HIV virus (FIG. 17). Compound PMA used for cell activation showed at least 100% viral reexpression effect and immune nanoparticles exhibited at least 33% HIV reexpression efficacy, whereas only 8% of VPA treated cells exhibited HIV reexpression efficacy. Confirm.

HIV 숙주 잠복 세포인 ACH2 세포에 VPA 또는 VPA를 함유하고 있는 면역 나노입자를 각각 처리하고 24시간 후에 HIV의 재발현을 평가하였을 때, 면역나노입자와 VPA를 각각 2 μM씩 처리한 세포에서는 비슷한 바이러스 재발현 효능을 나타내는 것처럼 보였으나, VPA를 4 μM 처리한 세포에서 심각한 세포 사멸이 일어나는 것으로 보아 세포 독성을 나타내는 것을 알 수 있었음. 같은 농도의 면역 나노입자를 처리한 세포에서는 안정적인 바이러스 재발현이 관찰되는데, 이는 CD7 수용체에 특이적인 결합으로 인해 세포로 유입되는 양이 조절되어 독성을 나타내지 않는 정도까지의 유효한 VPA가 전달되었다고 생각됨. ACH2 세포에 VPA 또는 VPA를 함유하고 있는 면역 나노입자를 각각 처리하고 30분 후에 PBS로 세척하여 세포안으로 유입되지 않고 배지 상에 남아있는 약물을 제거한 뒤 24시간 후에 HIV의 재발현을 평가하였을 때, 0.1uM의 농도에서 면역 나노입자가 약 33% 이상의 HIV 재발현 효능을 나타내는 반면에, VPA를 처리한 세포에서는 8%만이 HIV 재발현 효능을 나타내는 것을 확인함. 이러한 두 실험군의 차이는 PLGA 나노입자에 결합되어 있는 scFvCD7의 T 세포 특이적인 결합에 의한 것으로 생각됨. VPA를 처리한 경우, 처음에 배지 내 분산을 통해 세포 안으로 유입된 적은양의 VPA만이 HIV의 재발현에 영향을 주었을 것이고, 면역 나노입자의 경우 T 세포에 표면에 존재하는 CD7 수용체와 결합하여 세포안으로 들어가기 때문에, VPA만 처리해 주었을 때보다 훨씬 더 많은 양의 약물이 세포 안으로 유입되어 HIV 재발현에 영향을 주었을 것이라고 생각됨.
When ACH2 cells, which are HIV host incubation cells, were treated with immune nanoparticles containing VPA or VPA, respectively, and after 24 hours of evaluation of re-expression of HIV, similar cells were treated in cells treated with 2 μM of immunonanoparticles and VPA. It seemed to show the effect of re-expression, but acute cell death occurred in cells treated with 4 μM of VPA, indicating cytotoxicity. Stable virus re-expression was observed in cells treated with the same concentration of immune nanoparticles, suggesting that effective VPA was delivered to a level that was not toxic due to a controlled influx of cells due to specific binding to CD7 receptors. When ACH2 cells were treated with VPA or immune nanoparticles containing VPA, respectively, and washed 30 minutes later with PBS to remove drug remaining on the medium without entering the cells, the re-expression of HIV was evaluated 24 hours later. It was found that at concentrations of 0.1 uM, immune nanoparticles showed at least about 33% HIV reexpression efficacy, whereas only 8% of VPA treated cells exhibited HIV reexpression efficacy. The difference between these two groups is thought to be due to the T cell specific binding of scFvCD7 bound to PLGA nanoparticles. When treated with VPA, only a small amount of VPA initially introduced into the cell through dispersion in the medium would have influenced the re-expression of HIV, and in the case of immune nanoparticles, cells bound to CD7 receptors present on the surface of T cells As it enters, it is thought that a much larger amount of drug would enter the cell and affect HIV re-expression than when only VPA was treated.

실시예 4: CD7 단일조각항체와 HDACi 억제제를 이용한 면역나노입자의 T 세포 특이적 전달 평가Example 4 Evaluation of T Cell Specific Delivery of Immune Nanoparticles Using CD7 Monoclonal Antibody and HDACi Inhibitor

Alexa488이 결합되어 있는 scFvCD7이 화학적으로 결합되어 있는 PLGA 나노입자를 PBMC 에 처리한 후, T 세포 특이적인 표지인 CD3를 항체로 염색하여 Alexa488 형광과 동시에 관찰됨을 확인함으로써 나노입자의 실제적인 T 세포 특이적 전달을 확인함(도 18). 사람의 혈액에서 추출한 PBMC에 Alexa488-scFvCD7와 결합되어 있는 PLGA 나노입자를 처리하고 T 세포 특이적 표지인 CD3-PE로 염색하였을 때, PE와 Alexa488이 동시에 발현되는 것으로 보아 면역 나노입자가 특이적으로 T 세포와 결합하는 것을 확인하였음. 대식세포의 세포 표면에 발현되는 CD16 수용체에 특이적으로 결합하는 scFvCD16을 이용하여 같은 실험을 하였을 때, Alexa488이 발현되지 않는 것으로 보아 특이적으로 결합하는 항체를 이용하지 않는 경우에는 T 세포에 아무런 영향을 주지 않는 것을 확인하였음.After treating the PLGA nanoparticles to which scFvCD7 to which Alexa488 is bound is chemically bound to PBMC, the T cell specific marker CD3 is stained with an antibody to confirm that it is observed simultaneously with Alexa488 fluorescence. Confirm delivery (FIG. 18). PBMC extracted from human blood was treated with PLGA nanoparticles bound to Alexa488-scFvCD7 and stained with CD3-PE, a T cell-specific marker, indicating that PE and Alexa488 were simultaneously expressed. Confirmed binding to T cells. In the same experiment using scFvCD16 that specifically binds to the CD16 receptor expressed on the cell surface of macrophages, Alexa488 is not expressed. Therefore, it does not affect T cells when no specific binding antibody is used. It was confirmed that it does not give.

따라서 T 세포 특이적인 scFvCD7과 VPA를 함유하는 PLGA 나노입자를 HIV 치료에 사용할 경우, 이들이 T세포외의 다른 세포에 전달되었을 때 나타날 수 있는 DNA 잠복 바이러스의 활성화, 세포 내 면역 반응을 매개하는 TGF-b와 같은 cytokine의 과발현 등과 같은 원하지 않는 부작용을 최소화 시킬 수 있으며, T 세포에 특이적이고 효율적인 전달을 통해 현재 사용되고 있는 약물의 투여량을 획기적으로 줄이면서도 바이러스의 재활성화를 통해 완전한 HIV의 치료의 가능성을 시사한다.
Thus, when PLGA nanoparticles containing T cell-specific scFvCD7 and VPA are used for HIV treatment, TGF-b mediates the activation of DNA latent viruses and intracellular immune responses that may occur when they are delivered to cells other than T cells. Undesirable side effects such as overexpression of cytokine, etc. can be minimized, and specific and efficient delivery to T cells can dramatically reduce the dose of currently used drugs, while reactivating the virus, thereby reducing the possibility of complete HIV treatment. Suggest.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.Having described the specific part of the present invention in detail, it is apparent to those skilled in the art that the specific technology is merely a preferred embodiment, and the scope of the present invention is not limited thereto. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and equivalents thereof.

Claims (14)

다음을 포함하는 T 세포 특이적 HDAC(Histone deacetylase) 억제제 운반체:
(a) 생체적합성 폴리머;
(b) 상기 생체적합성 폴리머 내에 포함되어 있는 HDAC(Histone deacetylase) 억제제; 및
(c) 상기 생체적합성 폴리머의 표면에 결합되어 있는 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제.
T cell specific Histone deacetylase (HDAC) inhibitor carriers comprising:
(a) biocompatible polymers;
(b) a Histone deacetylase (HDAC) inhibitor contained in the biocompatible polymer; And
(c) T cell CD receptor-specific binding agent bound to the surface of the biocompatible polymer.
제 1 항에 있어서, 상기 생체적합성 폴리머는 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)(PLGA), 폴리락트산, 폴리글리콜산, 폴리(카프로락톤), 폴리(발레로락톤), 폴리(하이드록시부틸레이트), 폴리(하이드록시발러레이트), 키토산, 덱스트란 또는 셀룰로오스인 것을 특징으로 하는 운반체.
The method of claim 1, wherein the biocompatible polymer is poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), polylactic acid, polyglycolic acid, poly (caprolactone), poly (valerolactone), poly ( Hydroxybutylate), poly (hydroxybalarate), chitosan, dextran or cellulose.
제 2 항에 있어서, 상기 생체적합성 폴리머는 PLGA인 것을 특징으로 하는 운반체.
3. The carrier of claim 2, wherein said biocompatible polymer is PLGA.
제 1 항에 있어서, 상기 생체적합성 폴리머 내에 포함되어 있는 HDAC 억제제는 하이드록삼 산 계열의 억제제, 단쇄 지방산 계열의 억제제, 환형 테트라펩타이드 계열의 억제제, 벤자미드 계열의 억제제 또는 전자친화성 케톤 계열의 억제제인 것을 특징으로 하는 운반체.
The method of claim 1, wherein the HDAC inhibitor included in the biocompatible polymer is a hydroxamic acid-based inhibitor, short-chain fatty acid-based inhibitors, cyclic tetrapeptide-based inhibitors, benzamide-based inhibitors or electron-affinity ketone-based inhibitors Carrier characterized in that.
제 4 항에 있어서, 상기 HDAC 억제제는 단쇄 지방산 계열의 억제제인 것을 특징으로 하는 운반체.
The carrier according to claim 4, wherein the HDAC inhibitor is a short chain fatty acid inhibitor.
제 5 항에 있어서, 상기 단쇄 지방산 계열의 HDAC 억제제는 발프로산인 것을 특징으로 하는 운반체.
6. The carrier of claim 5, wherein the short chain fatty acid based HDAC inhibitor is valproic acid.
제 1 항에 있어서, 상기 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e 및 CD2-CD244 수용체로 구성된 군으로부터 선택되는 CD 수용체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 운반체.
The carrier of claim 1, wherein the T cell CD receptor-specific binding agent specifically binds to a CD receptor selected from the group consisting of CD1a, CD1b, CD1c, CD1d, CD1e, and CD2-CD244 receptors.
제 7 항에 있어서, 상기 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 CD7 수용체에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 운반체.
8. The carrier of claim 7, wherein said T cell CD receptor-specific binding agent specifically binds to a CD7 receptor.
제 1 항에 있어서, 상기 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 항체, 펩타이드 또는 앱타머인 것을 특징으로 하는 운반체.
The carrier of claim 1, wherein the T cell CD receptor-specific binding agent is an antibody, peptide or aptamer.
제 9 항에 있어서, 상기 T 세포 CD 수용체-특이적 결합제는 항체인 것을 특징으로 하는 운반체.
10. The carrier of claim 9, wherein said T cell CD receptor-specific binding agent is an antibody.
제 1 항에 있어서, 상기 생체적합성 폴리머는 나노입자인 것을 특징으로 하는 운반체.
The carrier of claim 1, wherein the biocompatible polymer is nanoparticles.
상기 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 운반체를 포함하는 HIV(Human immunodeficiency virus) 재활성화용 조성물.
A composition for reactivating HIV (Human immunodeficiency virus) comprising the carrier of any one of claims 1 to 11.
상기 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 운반체를 포함하는 HIV(Human immunodeficiency virus) 감염 치료 약물 운반체.
A human immunodeficiency virus (HIV) infection therapeutic drug carrier comprising the carrier of any one of claims 1 to 11.
상기 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 운반체를 포함하는 HIV(Human immunodeficiency virus) 감염 치료 보조용(adjuvant) 조성물.A human immunodeficiency virus (HIV) infection adjuvant composition comprising the carrier of any one of claims 1 to 11.
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014098319A1 (en) * 2012-12-20 2014-06-26 한양대학교 산학협력단 T-cell-specific humanized single fragment antibody delivery vehicle
CN114126658A (en) * 2019-04-02 2022-03-01 细胞质基质有限公司 Compositions for delivery of bioactive agents and uses thereof

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2014098319A1 (en) * 2012-12-20 2014-06-26 한양대학교 산학협력단 T-cell-specific humanized single fragment antibody delivery vehicle
US9683042B2 (en) 2012-12-20 2017-06-20 Industry-University Cooperation Foundation, Hanyang University T-cell-specific humanized single fragment antibody delivery vehicle
CN114126658A (en) * 2019-04-02 2022-03-01 细胞质基质有限公司 Compositions for delivery of bioactive agents and uses thereof

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