KR20110108933A - Composition comprising the extract of colpomenia sinuosa with ppar agonist activity - Google Patents
Composition comprising the extract of colpomenia sinuosa with ppar agonist activity Download PDFInfo
- Publication number
- KR20110108933A KR20110108933A KR1020100028430A KR20100028430A KR20110108933A KR 20110108933 A KR20110108933 A KR 20110108933A KR 1020100028430 A KR1020100028430 A KR 1020100028430A KR 20100028430 A KR20100028430 A KR 20100028430A KR 20110108933 A KR20110108933 A KR 20110108933A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- composition
- extract
- present
- activity
- ppar
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/02—Algae
- A61K36/03—Phaeophycota or phaeophyta (brown algae), e.g. Fucus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
본 발명은 당뇨, 고지혈증, 비만 등 대사조절에 핵심적인 작용을 하는 핵수용체인 PPARs(peroxisome proliferator-activated receptors) 활성을 지닌 자생 불레기말 메탄올 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. 상기 본 발명에 의한 불레기말 추출물은 상대적으로 부작용 및 독성 발현율이 적고 생체 친화적이며 지질대사 및 당 대사 개선 효과가 있어 동맥경화증, 고지혈증, 당뇨병 등의 예방 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다. The present invention relates to a composition containing autologous end-of-terminal methanol extract having peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs) activity, which is a key receptor for metabolic regulation such as diabetes, hyperlipidemia and obesity. The end of the extract extract according to the present invention has a relatively low side effects and toxic expression rate, bio-friendly and has an effect of improving lipid metabolism and glucose metabolism can be useful for the prevention or treatment of atherosclerosis, hyperlipidemia, diabetes.
Description
본 발명은 PPAR 활성을 지닌 자생 불레기말 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 당뇨, 고지혈증, 비만 등 대사조절에 핵심적인 작용을 하는 핵수용체인 PPARs(peroxisome proliferator-activated receptors) 활성을 지닌 자생 불레기말 메탄올 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition containing a native Bulgarae extract with PPAR activity, and more particularly, to the activity of peroxisome proliferator-activated receptors (PPARs), a nuclear receptor that plays a key role in metabolic regulation such as diabetes, hyperlipidemia, and obesity. The present invention relates to a composition containing native autologous methanol extract.
혈액 지질 프로파일은 동맥경화와 심장 질환 발생에 영향을 미친다. 콜레스테롤은 동맥에 플라크 축적을 유발하며, 고농도의 중성지방은 특히 당뇨환자의 동맥경화위험 요소이다. 해조류는 피를 맑게 만든다고 하여 동맥경화증 환자에게 추천되는 음식이다. 콜레스테롤을 먹여서 혈중 수치가 높아진 랫에게 해조류를 먹여 그 수치를 낮추었다는 실험 결과가 있으며[1], 적조류와 갈조류의 다당류도 지질을 낮추는 효과를 가지고 있다[2]. Blood lipid profiles affect the development of atherosclerosis and heart disease. Cholesterol causes plaque buildup in the arteries, and high levels of triglycerides are a risk factor for atherosclerosis, especially in diabetics. Seaweed is recommended for atherosclerosis because it clears blood. Experiments have shown that rats whose blood levels are elevated by feeding cholesterol lowered the levels by feeding algae [1]. Polysaccharides of red and brown algae have the effect of lowering lipids [2].
갈조류의 일종인 불레기말(Colpomenia sinuosa)은 고리매과 고리매목에 속하며 극한지를 제외하고 세계적으로 널리 분포되고 국내에도 전국 각지에 널리 분포한다. 몸은 엷은 막질의 불레기 모양이며 직경 4∼10 cm 정도이다. 어릴 때에는 속에 물이 차 있으며 구상 또는 불규칙한 모양이다. 두께는 250∼350μm이며 몸 구조는 피층은 1∼2층의 정방형 또는 다각형 세포로 되어있고 내층은 2∼5층의 좀 큰 다소 둥근 세포로 되었다. 조간대 하부의 암상이나 해조(주로 Sargassum)에 착생한다[3].
The brown algae ( Colpomenia sinuosa ) is a kind of hookberry and hookberry . It is widely distributed all over the world except for the extreme regions, and it is widely distributed all over the country. The body is pale membranous, 4-10 cm in diameter. When young, it is filled with water and is spherical or irregular in shape. Its thickness is 250-350μm, its body structure has 1 ~ 2 layers of square or polygonal cells, and its inner layer has 2 ~ 5 layers of slightly larger rounded cells. Underlying rocks or seaweeds (mainly Sargassum) in the lower intertidal zone [3].
한편, PPAR는 지질 대사와 에너지 항상성에 관련된 유전자들의 전사를 조절하는 핵수용체이다. PPARγ, PPARα, PPARδ의 세 가지 서브타입을 가지고 있으며 리간드 (ligand)와 결합하면 프로모터 안의 특정 장소인 PPRE(response elements)에 붙어서 다른 유전자의 발현을 조절한다. 세 가지 수용체는 다른 핵수용체인 retinoid X receptor(RXR)과 헤테로다이머 (heterodimer)를 형성하여 PPRE(response elements)에 결합한다. 애고니스트 (Agonist)와의 결합은 PPAR의 구조를 변형시켜서 전사 보조인자 (coactivator)가 붙을 수 있게 되고 이는 유전자의 전사 속도를 빨라지게 한다. 전사 속도 증가는 프로모터에 PPRE를 가진 유전자들의 mRNA 발현 증가로 이어지므로 지질 대사도 촉진된다.PPARs, on the other hand, are nuclear receptors that regulate the transcription of genes involved in lipid metabolism and energy homeostasis. It has three subtypes of PPARγ, PPARα, and PPARδ. When combined with a ligand, it attaches to PPRE (response elements), a specific place in a promoter, to regulate the expression of other genes. The three receptors form heteronumeric and retinoid X receptors (RXRs), which bind to PPRE (response elements). Coupling with Agonist alters the structure of the PPARs, allowing them to attach transcriptional coactivators, which speed up the transcription of genes. Increased transcription rate leads to increased mRNA expression of genes with PPRE in the promoter, thus promoting lipid metabolism.
세 가지 PPAR의 서브타입(subtype)의 생리적 효과를 살펴보면, PPARγ 리간드 (ligand)는 지방 세포의 인슐린 신호 작용과 지방의 흡수 및 이화 작용을 촉진시키며 지방 분해와 유리지방산의 세포 밖 방출을 약화시킨다. 지방은 간과 근육에서 지방 세포로 이동하게 되므로 그 결과 체내 지방 분포가 변하게 되고 인슐린 저항이 완화되어 고지혈증이 개선될 수 있다. 지방 축적 장소를 변화시키는 외에 PPARγ 애고니스트는 간과 말초 조직에서 인슐린 신호에 영향을 주는 지방 세포 단백질(adipokines)의 합성을 조절한다.Looking at the physiological effects of the three subtypes of PPAR, PPARγ ligands promote insulin signaling, fat absorption and catabolic activity of fat cells, and attenuate lipolysis and extracellular release of free fatty acids. As fat moves from the liver and muscle to fat cells, the result is a change in the distribution of fat in the body, which can alleviate insulin resistance and improve hyperlipidemia. In addition to changing the place of fat accumulation, PPARγ agonists also regulate the synthesis of adipocyte proteins (adipokines) that affect insulin signals in the liver and peripheral tissues.
PPARα 애고니스트 (agonist)는 지방의 흡수와 이화작용에 관련된 유전자들의 전사를 변화시켜서 혈중 지방 농도를 낮춘다. 예를 들어 PPARα는 세포의 지방산 흡수에 관여하는 단백질인 FATP와 FAT의 발현을 유도한다. 또한 간에서 HDL 콜레스테롤의 주요 구성 요소인 아포리포프로테인 (apolipoprotein) A-I와 A-II를 만들어 HDL 콜레스테롤 농도를 높인다. PPARα 애고니스트 (agonist)는 동맥의 지방침착으로부터 혈관 보호 효과를 가지고 있다. 혈관 세포에서 발현되는 PPARα는 사이토카인에 의한 혈관 부착 생성 물질을 억제하고, 혈관 확장 효과를 가지는 산화 질소 생성도 증가시킨다. PPARα 애고니스트 (agonist)가 혈중 지방 프로파일을 바꾸고 혈관 세포에 미치는 영향은 결국 동맥경화와 심장병 발생률 감소로 이어진다.최근 연구에서는 PPARγ와 PPARα의 리간드가 항염증 작용을 통해 혈관을 보호하는 기능도 가지고 있음이 증명되었다[7]. PPARα agonists lower blood fat levels by altering the transcription of genes involved in fat uptake and catabolism. For example, PPARα induces the expression of FATP and FAT, proteins involved in fatty acid uptake of cells. It also raises HDL cholesterol levels by making apolipoproteins A-I and A-II, the major components of HDL cholesterol in the liver. PPARα agonists have a protective effect on blood vessels from arterial attachment. PPARα expressed in vascular cells inhibits cytokine-induced vascular adhesion substances and also increases nitric oxide production with vasodilation effects. The effects of PPARα agonists on blood fat profiles and on vascular cells eventually lead to atherosclerosis and reduced incidence of heart disease. Recent studies have shown that PPARγ and PPARα ligands also function to protect blood vessels through anti-inflammatory action. This was proved [7].
PPARδ는 PPAR 서브타입 중에서 가장 연구가 덜 진행된 핵수용체이지만 PPARδ 애고니스트 (agonist)는 HDL 콜레스테롤 농도를 높이고 중성지방과 인슐린 농도를 낮추며 또한 골격근에서 지질 이화작용을 한다. 이는 체중 증가의 억제와 인슐린 저항 완화로 이어진다. 그리고 마우스 지방 세포에 과발현된 PPARδ는 고지혈증, 지방간, 비만에 저항성을 갖게 하고, 지방산을 분해하는 과정에 관여하는 유전자들의 발현을 증가시킨다. 동물 실험을 통한 PPARδ의 기능에 대한 연구도 증가하고 있으며 PPARδ의 활성의 결과는 골격근에서 지방을 소화시켜서 대사 교란과 비만을 완화시키는 것으로 보여 진다[8]. PPARδ is the least studied nuclear receptor in the PPAR subtype, but PPARδ agonists raise HDL cholesterol levels, lower triglycerides and insulin levels, and also catalyze lipid catabolism in skeletal muscle. This leads to suppression of weight gain and alleviation of insulin resistance. PPARδ overexpressed in mouse fat cells makes hyperlipidemia, fatty liver and obesity resistant, and increases the expression of genes involved in the process of fatty acid degradation. Increasingly, studies on the function of PPARδ in animal experiments are increasing, and the results of PPARδ activity have been shown to reduce metabolism and obesity by digesting fat in skeletal muscle [8].
1990년대 초의 발견 후, PPAR과 각 서브타입의 애고니스트들은 의학적으로 많은 관심을 받아왔다. 항당뇨제인 티아졸리디네디온 (thiazolidinedione, TZD) 계통의 로시글리타존 (rosiglitazone)과 피오글라타존 (pioglitazone)은 PPARγ 애고니스트이며 지방세포에서 여러 가지 인슐린 감지 작용을 한다. 항동맥경화제이자 고지혈증 치료제인 파이브레이트 (fibrate) 계통의 페노파이브레이트 (fenofibrate)와 젬피브로질 (gemfibrozil)은 PPARα의 애고니스트이다. 이들은 주로 간에서 지방 흡수와 이화작용을 통해 혈중 지질 농도를 낮춘다. Since the discovery of the early 1990s, agonists of PPARs and each subtype have received a lot of medical attention. The anti-diabetic thiazolidinedione (TZD) line of rosiglitazone and pioglitazone are PPARγ agonists and act as an insulin-sensing agent in adipocytes. The fenofibrate and gemfibrozil of the fibrate strain, an anti-arteriosclerosis and antihyperlipidemic agent, are agonists of PPARα. They lower blood lipid levels, mainly through fat absorption and catabolism in the liver.
상기와 같이 지질 대사 질환 등에 관련된 PPAR의 기능이 밝혀짐에 따라 의약품으로 사용할 수 있는 새로운 PPAR 리간드 (ligand)를 찾는 연구도 진행되고 있다. TZD 계통의 로시글리타존 (rosiglitazone)과 피오글리타존 (pioglitazone)은 당뇨 환자 대상 임상 실험에서 뛰어난 효능을 보이지만 혈압 상승, 부종, 지방 과다증, 체중 증가 등의 부작용을 가지고 있다. 게다가 TZD 계통은 동물 실험에서 심장 비대증도 유발하였다. 이러한 부작용 및 울혈성 심부전의 발생 가능성 때문에 TZD 계통은 심장 질환을 가진 당뇨 환자에게는 그 사용이 제한되었다. 따라서 치료 대상의 폭을 넓힐 수 있는 새로운 PPARγ 애고니스트 (agonist)의 필요성이 대두되고 있다. PPARα도 이상지질혈증 환자의 중성지방을 낮추는 효과는 탁월하지만 소화기장애 및 담석이 생길 수 있다.
As the function of PPAR related to lipid metabolic disease is revealed as described above, researches to find a new PPAR ligand (ligand) that can be used as a medicine are also in progress. Rosiglitazone and pioglitazone of the TZD strain show excellent efficacy in clinical trials of diabetic patients, but have side effects such as elevated blood pressure, edema, hyperlipidemia, and weight gain. In addition, the TZD strain also induced cardiac hypertrophy in animal experiments. These side effects and the potential for congestive heart failure have limited the use of the TZD strain in diabetic patients with heart disease. Therefore, there is a need for a new PPARγ agonist that can broaden the range of treatment targets. PPARα is also effective in lowering triglycerides in patients with dyslipidemia, but can cause digestive problems and gallstones.
상기 불레기말과 관련된 특허는 대한민국 특허 등록 제10-0826560호의 고리매과 해조류 추출물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 개선제 조성물(Composition for Improving Diabetes)이 있으나, 이는 고리매과 해조류인 미역쇠, 고리매, 개미역쇠, 긴불레기말, 그물바구니, 및 불레기말 추출물로 구성된 군에서 선택된 추출물과 분획물의 혈당 강하 효과, 3T3-L1 지방전구세포의 지방세포로의 분화 유도 효과 등을 검토하였고, 그 결과 상기 고리매과 해조류의 추출물이 혈당 강하 효과, 3T3-L1 지방전구세포의 지방세포로의 분화 유도 등을 확인하고 인슐린 유사 효과를 가지는 것으로 개시하였다. 또한, 최형주 등 (Journal of life science 2006 Vol. 16. No. 7. 1080~1086)은 불레기말이 돌연변이 억제 효과가 있음을 보고한 적이 있다. 그러나, 현재까지 불레기말 추출물의 PPAR 활성에 대해 보고된 바는 없다.
The patent related to the end of the fire is Korean Patent Registration No. 10-0826560 There is a composition for Improving Diabetes comprising an extract of Gojimae and seaweed as an active ingredient, but it is composed of seaweed, seaweed, anthill, seaweed, net basket, and fireweed extract. The hypoglycemic effect of the extracts and fractions selected from the group, the effect of inducing the differentiation of 3T3-L1 adipocytes into adipocytes, and the results were as follows. Induction of differentiation of captives, etc. was confirmed and disclosed as having an insulin-like effect. In addition, Choi Hyung-Ju et al. (Journal of life science 2006 Vol. 16. No. 7. 1080 ~ 1086) have reported that the end of fire has the effect of suppressing mutations. However, to date no reports have been made on the PPAR activity of endless extracts.
본 발명에서는 세포에 PPRE와 PPRE의 활성을 감지할 수 있는 리포터 유전자 (reporter gene)가 들어있는 벡터를 형질전환 (transfection) 방법으로 삽입하여, 농도별 불레기말 추출물 처리에 따른 PPARs 활성에 의해 PPRE와 PPAR의 결합정도를 루시페라아제 에세이 (luciferase assay) 방법으로 측정하여 불레기말 추출물의 PPAR 활성을 확인하고 본 발명을 완성하였다(도 1 참조). In the present invention, by inserting a vector containing a reporter gene (reporter gene) that can detect the activity of PPRE and PPRE in the cell by a transfection method, PPRE and PREs by the activity of the end of extract extracts The degree of binding of PPAR was measured by a luciferase assay method to confirm the PPAR activity of the end of Bulgaria extract and completed the present invention (see FIG. 1).
따라서, 본 발명의 목적은 PPAR 활성을 지닌 불레기말 추출물을 함유하는 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition containing a fire end extract with PPAR activity.
본 발명의 다른 목적은 상기 불레기말 추출물을 함유하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물 제공에 있다.Another object of the present invention to provide a composition for preventing or treating diabetes containing the end of the extract.
본 발명의 다른 목적은 상기 불레기말 추출물을 함유하는 동맥경화 및 고지혈증 예방 또는 치료용 조성물 제공에 있다.Another object of the present invention to provide a composition for preventing or treating atherosclerosis and hyperlipidemia containing the end of the fire extract.
본 발명의 다른 목적은 상기 불레기말 추출물을 함유하는 항염증 및 혈관 보호 효능을 가진 조성물 제공에 있다.Another object of the present invention is to provide a composition having an anti-inflammatory and vascular protective effect containing the fire end extract.
본 발명의 다른 목적은 상기 불레기말 추출물을 함유하는 비만 예방 혹은 비만 치료 효능을 가진 조성물 제공에 있다.Another object of the present invention is to provide a composition having an obesity prevention or obesity treatment containing the end of the extract.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 더욱 명확하게 된다.
Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.
본 발명의 일 양태에 따르면, PPAR 활성을 지닌 불레기말 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제공한다. According to one aspect of the present invention, there is provided a composition containing an extract of Bulgaria as an active ingredient having PPAR activity.
본 발명에 있어서, 상기 조성물을 CHO-K1 (Chinese hamster ovary) 세포에 처리하여 PPARs의 활성정도를 양성 대조군 (positive control)과 비교 평가하였다. PPARs의 활성평가를 위해서 PPRE와 PPRE의 활성을 감지할 수 있는 리포터 유전자(reporter gene)가 삽입되어있는 벡터 (vector)를 형질전환 (transfection) 방법을 사용하여 CHO-K1 세포내로 유입시켰으며, 이후 불레기말 추출물을 농도별로 처리하고 PPRE 활성정도를 측정하는 방법으로 지질대사 관여 유전자를 조정하는 것으로 알려진 PPARs의 활성변화를 관찰하여 불레기말의 지질대사개선 효능의 원인을 규명하여 본 발명을 완성하였다.In the present invention, the composition was treated to CHO-K1 (Chinese hamster ovary) cells to evaluate the activity of PPARs compared to the positive control (positive control). To evaluate the activity of PPARs, a vector containing a reporter gene capable of detecting PPRE and PPRE activity was introduced into CHO-K1 cells using a transfection method. The present invention was completed by observing the change in activity of PPARs known to regulate lipid metabolism-related genes by treating the extracts by concentration and measuring the degree of PPRE activity.
상기에서 리포터 유전자는 프로모터 사이트 (pormoter site)에 위치하고 있는 PPRE의 활성을 알려줄 수 있는 기능을 가진 유전자이다. 형질전환이 완료된 세포에 불레기말 추출물을 처리하면 추출물에 의해 활성이 생긴 PPAR가 RXR과 이량체를 형성하여 루시페라아제 유전자 (luciferase gene)의 PPRE 위치에 결합하게 된다. PPRE가 활성화되면 루시페라아제 유전자는 루시페라아제의 생산을 시작하고, 기질을 추가로 첨가하면 효소와 기질이 반응하여 빛을 내게 되는데, 이 빛을 감지하여 정량함으로써 PPAR의 활성정도를 평가하였다(도 1 참조). 본 발명에서는 목표 유전자로 PPRE를 선정하였는데, PPRE는 PPARs가 결합할 수 있는 사이트 (site)로, 결합이 이루어졌을 경우 리포터 유전자 (reporter gene)의 발현에 의해 감지되며 따라서 PPRE 유전자 한가지의 활성평가만으로, 세 가지 종류의 PPAR(α, γ, δ) 활성을 복합적으로 평가하는 것이 가능하였다. The reporter gene is a gene having a function of informing the activity of the PPRE located at the promoter site (pormoter site). When the transformed cells are treated with end-of-bullet extracts, PPARs activated by the extracts form dimers with RXR to bind to the PPRE position of the luciferase gene. When PPRE is activated, the luciferase gene starts the production of luciferase, and when an additional substrate is added, the enzyme reacts with the substrate and emits light. By detecting and quantifying the light, the activity of PPAR is evaluated (see FIG. 1). . In the present invention, PPRE was selected as a target gene. PPRE is a site to which PPARs can bind. When PPRE is bound, it is detected by the expression of a reporter gene. Therefore, only one activity of PPRE gene is evaluated. It was possible to evaluate three kinds of PPAR (α, γ, δ) activity in combination.
그 평가 결과 CHO K-1 세포에 PPRE를 형질전환 (transfection) 시킨 후 불레기말 추출물을 처리하면 PPRE의 활성이 증가하는 것으로 밝혀졌다(표 1, 도 2). 불레기말의 활성은 대조군인 DR-1에 비해 그 활성이 0.4mg/mL에서 2.79, 2mg/mL에서 2.28, 10mg/mL에서 3.5배 증가하였다. 세 가지 농도 구간이 모두 PPAR-α의 애고니스트인 페노파이브레이트 (fenofibrate) 보다 높은 활성을 보였으며 PPAR-γ 애고니스트인 트로글리타존 (troglitazone)보다는 낮았다 (각각 대조군 대비 2.11와 4.88배). 동물 세포는 자체적인 발광이 거의 없기 때문에 음성 대조군인 DMSO의 활성은 0.03배로 극히 미미하였다.As a result of the evaluation, PPRE activity was increased after transfection of CHO K-1 cells with PPRE and then treatment with the end of extract (Table 1, FIG. 2). The end of activity was increased by 2.79 at 0.4 mg / mL, 2.28 at 2 mg / mL, and 3.5 times at 10 mg / mL compared to DR-1, the control group. All three concentration ranges showed higher activity than fenofibrate, an agonist of PPAR-α, and lower than troglitazone, a PPAR-γ agonist (2.11 and 4.88 times, respectively). Since animal cells had little luminescence of itself, the activity of DMSO, a negative control, was only 0.03 fold.
본 발명에 이용된 루시페라아제 에세이 (luciferase assay)의 원리는 다음과 같다. 반딧불이 루시페라아제 (Firefly luciferase)는 유전자의 조절(regulation)이나 기능(function) 또는 신약 스크리닝을 위해 널리 사용되는 리포터 유전자 (reporter gene)이다[9, 10]. 단량체로서 활성을 가지는 62,000Da 크기의 단백질이며 활성을 띄기 위한 부수적인 과정은 필요 없다. 이 효소는 ATP 의존적으로 산소를 이용하여 기질인 D-루시페린 (D-luciferin)을 산화 반응을 일으켜서 옥시루시페린 (oxyluciferin)으로 바꾸는 촉매 역할을 한다. 이때 560nm에서 빛이 발생하므로 발광량을 측정하여 루시페라아제 (luciferase) 효소 분자수를 계산할 수 있다. 동물 세포는 루시페라아제 효소를 거의 가지고 있지 않으므로 유전자의 발현량을 민감하게 측정할 수 있는 장점이 있다.The principle of the luciferase assay used in the present invention is as follows. Firefly luciferase is a reporter gene that is widely used for regulation, function or drug screening of genes [9, 10]. It is a 62,000 Da size protein that is active as a monomer and does not require an additional process to become active. The enzyme acts as an ATP-dependent catalyst to convert D-luciferin, a substrate, into oxygen, to oxyluciferin. In this case, since light is generated at 560 nm, the number of luciferase enzyme molecules can be calculated by measuring the amount of emitted light. Animal cells have very little luciferase enzyme, so there is an advantage in that the expression level of the gene can be sensitively measured.
본 발명자들은 프로모터 내 PPRE를 이용해 PPAR을 활성화시키는 리간드 (ligand)인 불레기말 추출물 조성물을 발명함으로써 PPAR의 긍정적 효과를 얻을 수 있을 것으로 기대한다. 보다 구체적으로 본 발명자들은 상기 루시페라아제 에세이를 이용한 PPAR 활성 정도를 측정하여, 불레기말이 혈당 강하와 인슐린 촉진제 역할을 하는 PPAR을 활성화함을 확인하였다. PPAR은 유전자의 프로모터에 위치한 PPRE에 결합하므로 유전자들의 전사 속도를 조절한다. PPRE를 가지고 있는 유전자는 지질 대사에 연관된 것들이 많으며 PPAR이 콜레스테롤과 혈당 강하, 인슐린 분비 촉진과 비만 개선에도 도움을 주는 것은 이미 여러 연구 결과를 통해 밝혀진 사실이다. 따라서 본 발명자들은 불레기말 추출물이 당뇨 개선 효과를 넘어서 PPAR 활성에 따른 상기 여러 가지 지질 대사 관련 질환에도 도움을 줄 수 있다는 것을 밝혀냈다.The present inventors expect that the positive effect of PPAR can be obtained by inventing a flame extract extract composition, which is a ligand that activates PPAR by using PPRE in a promoter. More specifically, the present inventors measured the degree of PPAR activity using the luciferase assay, and confirmed that the end of fire activates PPAR, which acts as a blood sugar lowering and insulin promoter. PPAR binds to the PPRE located at the promoter of a gene, thus regulating the rate of transcription of the genes. Genes with PPRE are involved in lipid metabolism, and PPARs have also been shown to be effective in lowering cholesterol and blood sugar, promoting insulin secretion and improving obesity. Therefore, the present inventors have found that the end of the extract may be useful for the various lipid metabolism-related diseases caused by PPAR activity beyond the diabetic improvement effect.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 불레기말 추출물은 종래 천연물 추출에 널리 알려진 추출용매인 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출될 수 있으나, 바람직하게는 불레기말의 메탄올 추출물인 것을 특징으로 한다. 메탄올 추출물은 에탄올 추출물에 비해 미량 성분들까지 폭 넓게 추출할 수 있는 이점이 있어 주로 약물의 원료로 사용하고자 할 때 이용하는 방법이다. 상기 메탄올의 농도는 특별히 제한이 있는 것은 아니나, 80% 이상의 메탄올인 경우 추출 효율을 높일 수 있다. 상기 메탄올 추출물은 극성이 다른 유기용매를 이용하여 더욱 분획할 수 있으며, 각종 크로마토그래피를 이용하여 더욱 정제할 수도 있다.In the composition of the present invention, the firewood extract may be extracted using water, an organic solvent or a mixed solvent thereof, which is a well-known extraction solvent for conventional natural product extraction, preferably characterized in that the methanol extract of the fireweed end do. Methanol extract is a method that is mainly used when you want to use as a raw material of the drug because there is an advantage that can be widely extracted to trace components compared to ethanol extract. The concentration of methanol is not particularly limited, but in the case of methanol of 80% or more, extraction efficiency may be increased. The methanol extract may be further fractionated using an organic solvent having a different polarity, and may be further purified using various chromatography.
본 발명에 의한 불레기말 추출물을 함유하는 조성물은 당뇨, 고지혈증, 비만, 염증 등 대사조절에 핵심적인 작용을 하는 핵수용체인 PPAR 활성을 가지므로 지질대사 및 당대사 개선 효과가 있다. 따라서, 본 발명에 의한 조성물은 당뇨병 또는 동맥경화 및 고지혈증의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.The composition containing the end of the extract according to the present invention has a PPAR activity which is a nuclear receptor that plays a key role in metabolic control such as diabetes, hyperlipidemia, obesity, inflammation, and thus has an effect of improving lipid metabolism and glucose metabolism. Therefore, the composition according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of diabetes or arteriosclerosis and hyperlipidemia.
나아가, 본 발명에 의한 불레기말 추출물을 함유하는 조성물은 항염증 및 혈관 보호용 약제학적 조성물 또는 비만 예방 또는 치료용 약제학적 조성물로 이용될 수 있다. 특히, PPAR-γ 리간드가 NF-kB의 활성화를 억제함으로써 염증반응을 억제하므로, 본 발명에 의한 불레기말 추출물 조성물은 항염증 및 혈관 보호용 약제학적 조성물로 이용될 수 있다.Furthermore, the composition containing the end of fire extract according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition for anti-inflammatory and vascular protection or a pharmaceutical composition for preventing or treating obesity. In particular, since the PPAR- [gamma] ligand inhibits the inflammatory response by inhibiting the activation of NF-kB, the end of fire extract composition according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition for anti-inflammatory and vascular protection.
본 발명에 있어서, 추출물에는, 추출, 분획 및 정제 처리의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그 희석액 또는 농축액, 또는 그 건조물 중 어느 하나라도 포함하는 것으로 한다.In the present invention, the extract should include any of the extracts, fractions and purified products obtained in each step of extraction, fractionation and purification, any dilution or concentrate thereof, or dried products thereof.
본 발명의 원료인 불레기말 추출물은 당업계에 알려진 통상의 방법에 의해 과립, 정제, 캡슐 또는 드링크제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 또한, 보존이나 취급을 용이하게 하기 위하여 덱스트린, 사이클로덱스트린 등의 통상 제제화에 사용되는 캐리어, 그 밖의 임의의 조제를 부가하여도 좋다.Fireweed extract, which is a raw material of the present invention, may be formulated in the form of granules, tablets, capsules, or drinks by conventional methods known in the art. Moreover, in order to make storage and handling easy, you may add the carrier used for normal formulation, such as dextrin and cyclodextrin, and other arbitrary preparations.
본 발명의 조성물에서, 바람직하게는 조성물 총중량에 대하여 상기 불레기말 추출물은 0.0001 내지 90 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물에서, 바람직하게는 상기 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 주사제, 크림, 젤, 패취, 분무제 또는 연고제 제형 제형을 가질 수 있다. 본 발명의 불레기말 추출물을 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물은, 약제학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. In the composition of the present invention, preferably, the bulgari extract may comprise 0.0001 to 90% by weight based on the total weight of the composition. In the composition of the present invention, preferably the composition may have a powder, granule, tablet, capsule, injection, cream, gel, patch, spray or ointment formulation formulation. The pharmaceutical composition containing the endless extract of the present invention as an active ingredient may further include appropriate carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
상기 불레기말 추출물을 유효성분으로 함유하는 약제학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 제형 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. Pharmaceutical compositions containing the endless extract as an active ingredient, respectively, in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols or the like in the form of sterile injectable solutions according to a conventional method Can be used.
또한, 상기 불레기말 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. In addition, carriers, excipients and diluents that may be included in the composition containing the firewood extract as an active ingredient are lactose, dextrose, sucrose, oligosaccharide, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber , Alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil have. When formulated, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, and surfactants are usually used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and the solid preparations may include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, or the like in the extract. Or lactose, gelatin, or the like is mixed. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used. Examples of the liquid preparation for oral use include suspensions, solutions, emulsions, and syrups. In addition to water and liquid paraffin, simple diluents commonly used, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. As the non-aqueous solvent and suspending agent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate and the like can be used. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 l50 mg/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. Preferred dosages of the extracts of the present invention vary depending on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art. However, for the desired effect, the extract of the present invention is preferably administered at 0.0001 to l50 mg / kg per day. Administration may be administered once a day or may be divided several times. The dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.
본 발명의 추출물은 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
Extracts of the invention can be administered by a variety of routes. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine or intracerebroventricular injections.
본 발명에 의한 다른 양태에 따르면, 본 발명은 PPAR 활성을 지닌 불레기말의 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a food composition containing a methanol extract of the end of fireball having PPAR activity as an active ingredient.
상기 조성물은 지질대사 또는 당 대사 개선 효과 또는 항염증 및 혈관 보호 효과가 있는 것을 특징으로 한다. The composition is characterized in that it has an effect of improving lipid metabolism or sugar metabolism or anti-inflammatory and vascular protection.
따라서, 본 발명에 의한 불레기말의 메탄올 추출물을 함유하는 식품 조성물은, 당뇨병 또는 동맥경화 및 고지혈증의 예방 또는 개선용 식품 조성물로 이용될 수 있다.Therefore, the food composition containing the end-of-bullet methanol extract of this invention can be used as a food composition for the prevention or improvement of diabetes or arteriosclerosis, and hyperlipidemia.
또한, 본 발명에 의한 불레기말의 메탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물은 항염증 및 혈관 보호용 또는 비만 예방 또는 개선용 식품 조성물로 이용될 수 있다.In addition, the food composition containing the methanol extract of the end of the fire according to the invention as an active ingredient can be used as a food composition for anti-inflammatory and vascular protection or obesity prevention or improvement.
본 명세서에서 식품이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함한다. In the present specification, the term "food" means a natural product or processed product containing one or more nutrients, and preferably means a state in which it can be directly eaten through some processing process. Includes food, food additives, nutraceuticals and beverages.
본 발명의 식품 조성물에서, 바람직하게는 상기 추출물은 조성물 총중량에 대하여 0.0001 내지 90 중량%로 포함될 수 있다. 본 발명의 식품은, 식품학적으로 허용 가능한 식품보조첨가제를 더 포함할 수도 있으며, 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 음료 형태로 제제화될 수 있다. In the food composition of the present invention, preferably the extract may be included in 0.0001 to 90% by weight relative to the total weight of the composition. The food of the present invention may further comprise a food acceptable food supplement, and may be formulated in the form of pills, powders, granules, acupuncture, tablets, capsules or beverages.
또한, 본 발명의 조성물은, 관련 질환의 예방을 위한 건강보조식품의 식품보조첨가제로서 사용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있으며, 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다. In addition, the composition of the present invention can be used as a food supplement of health supplements for the prevention of related diseases. Foods to which the extract of the present invention may be added include various foods, for example, beverages, gums, teas, vitamin complexes, dietary supplements, and the like, which are pills, powders, granules, tablets, tablets, capsules or beverages. Available in form.
이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은, 일반적으로 본 발명의 식품 조성물의 경우 전체식품 중량의 0.0001 내지 90 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물의 경우 100㎖를 기준으로 0.0001 내지 20 중량%로 가할 수 있다. At this time, the amount of the extract in the food or beverage, in general, can be added to 0.0001 to 90% by weight of the total food weight of the food composition of the present invention, 0.0001 to 20% by weight based on 100ml for the health beverage composition Can be added.
본 발명에서 정의되는 추출물 이외의 식품보조첨가제는 당업계에 통상적인 식품첨가제, 예를 들어 향미제, 풍미제, 착색제, 충진제, 안정화제 등을 포함하며 하기에 예시한다. Food additives other than the extracts defined in the present invention include food additives customary in the art, such as flavors, flavors, colorants, fillers, stabilizers and the like, and are exemplified below.
상기 음료 조성물의 경우, 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물 이외 함유하는 액체 성분에는 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 예를 들어, 포도당, 과당 등의 모노사카라이드 예를 들어, 말토오스, 수크로오스 등의 디사카라이드 예를 들어, 덱스트린, 사이클로 덱스트린 등의 폴리사카라이드 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.In the case of the beverage composition, there are no particular limitations on the liquid components contained in the indicated ratios other than the extract as essential components, and may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional components, as in general beverages. Examples of the natural carbohydrates include, for example, monosaccharides such as glucose and fructose, for example, disaccharides such as maltose and sucrose, for example, conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and xylitol. Sugar alcohols such as sorbitol and erythritol. As flavoring agents other than those mentioned above, natural flavoring agents (tauumatin, stevia extract (e.g., Rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agents (saccharin, aspartame, etc.) can be advantageously used. The proportion of natural carbohydrates is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 ml of the composition of the present invention.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.001 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition to the above, the composition of the present invention includes various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese and chocolate), pectic acid and salts thereof, alginic acid and its Salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated drinks, and the like. In addition, the compositions of the present invention may contain flesh for the production of natural fruit juices and fruit juice drinks and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is generally selected in the range of 0.001 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 불레기말의 메탄올 추출물은 혈당과 콜레스테롤 강하로 이어지는 당뇨와 비만 개선 기작을 조절하는 PPAR를 활성화시키므로 대사증후군의 예방 및 치료에 효과적으로 이용될 수 있다. 또한, 본 발명에 의한 불레기말의 메타올 추출물은 천연물 추출물로서 상대적으로 부작용 및 독성 발현율이 낮고 생체 친화적으로 지질대사 및 당대사를 개선할 수 있는 효과를 도모할 수 있다. 따라서 본 발명에 의한 불레기말의 메탄올 추출물은 PPAR 애고니스트 (agonist) 개발에 유용하게 이용될 수 있다. As described above, the end-of-bullet methanol extract according to the present invention can be effectively used for the prevention and treatment of metabolic syndrome because it activates PPAR to control the mechanism of diabetic and obesity, leading to lowering blood sugar and cholesterol. In addition, the metaol extract of the end of the bulge according to the present invention as a natural extract is relatively low side effects and toxic expression rate and can achieve the effect of improving lipid metabolism and sugar metabolism biocompatible. Therefore, the methanol extract of the end of fire according to the present invention can be usefully used for the development of PPAR agonists.
흔히 심장질환 및 동맥경화증 환자에게 좋다고 알려진 해조류인 미역, 김, 다시마, 톳 등에 비해, 불레기말 시장은 상대적으로 덜 알려져 있고 상업적으로 활성화되어 있지 않으므로, 불레기말의 기능성 식품소재 개발은 어촌의 수익 증대에 도움이 될 것이다.Compared to seaweed, seaweed, seaweed, seaweed, and seaweed, which are often known to be good for patients with heart disease and atherosclerosis, the end of the market is less well known and commercially active. Will help.
또한, 본 발명에 의해 불레기말의 활용범위를 단순한 식품에서 예방용 혹은 치료용 약물로까지 확대시킴으로써 국내 해조류의 가치를 높이고 관련 업종 종사자의 수입증대로 까지 이어질 것으로 예상된다.
In addition, the present invention is expected to increase the value of domestic algae and to increase the income of workers in related industries by expanding the range of application of the end of the fire from simple foods to preventive or therapeutic drugs.
도 1은 본 발명에 의한 불레기말 추출물의 PPAR 활성을 확인하기 위한 실험 방법을 개략적으로 나타내는 도면임.
도 2는 본 발명에 의한 불레기말 추출물을 CHO-K1 세포에 처리하였을 때 PPRE 활성을 측정한 결과를 나타낸 그래프로, ‘DMSO’는 형질전환을 시키지 않았으며, 물질처리도 하지 않은 음성 대조군, ‘DR-1’은 PPRE가 삽입되어있는 벡터를 세포에 형질전환시킨 대조군, 'fenofibrate’는 형질전환 후 PPAR-α의 애고니스트 (agonist)인 페노파이브레이트 (fenofibrate)를 처리해준 그룹, ‘Troglitazone’은 형질전환 후 PPAR-γ의 애고니스트인 트로글리타존 (troglitazone)을 처리해준 그룹, ‘불레기말’은 세 가지 농도 (0.4, 2, 10mg/mL)의 불레기말 추출물을 형질전환 후 세포에 처리한 그룹임.1 is a view schematically showing an experimental method for confirming the PPAR activity of the endless extract according to the present invention.
Figure 2 is a graph showing the results of measuring the PPRE activity when treated with the end of the extract according to the invention CHO-K1 cells, 'DMSO' was not transformed, the negative control without material treatment, ' DR-1 'is a control group that transformed a vector containing PPRE into cells, and' fenofibrate 'is a group that treated fenofibrate, an agonist of PPAR-α after transformation,' Troglitazone ' Is the group treated with troglitazone, an agonist of PPAR-γ after transformation, and the group called 'bulletol' is a group treated with cells treated with endothelial extract of three concentrations (0.4, 2, 10mg / mL). being.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the accompanying drawings. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention. .
실시예Example 1. One. 불레기말End of fire 추출물 방법 Extract Method
시료의 추출은 건조시료 100g에 80% 메탄올을 300mL 첨가하여 60℃에서 3시간 환류냉각을 3회 반복하여 추출한 다음 매회 여과한 용액을 혼합하고 회전진공농축기로 농축한 후, 냉동건조한 시료를 실험에 사용하였다.
Extract the sample by adding 300 mL of 80% methanol to 100 g of the dry sample, extract the reflux cooling three times at 60 ° C. three times, mix the filtered solution each time, concentrate with a rotary vacuum concentrator, and then freeze-dried the sample to experiment. Used.
실시예Example 2. 세포주 배양 2. Cell line culture
햄스터의 난소 (ovary)로부터 분리된 세포주인 CHO-K1은 한국 세포주 은행 (Korea Cell Line Bank, KCLB)으로부터 분양 받아 사용하였다. 이 세포는 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)/F-12 (Join Bio-Innovation, Korea) 배지에 10% 비활성화 우태아 혈청 (Join Bio-innovation, Korea), 1% 페니실린-스트렙토마이신 용액을 첨가하여 37℃ 및 5% 이산화탄소 조건에서 배양하였다. 충분한 세포를 얻기 위해 T75 플라스크에서 세포를 배양하였고, 2-3일에 한 번씩 배지를 80% 교체하였다. 충분히 자랐을 때 trypsin-EDTA (ethyllene diamine tetraacetic acid) 용액을 사용하여 부착된 세포를 떼어낸 후 성장 배지에 세포수를 3×104 cell/mL로 조정하여 96-웰 팔콘 (96-well Falcon) 배양판에 100 μL씩 분주하였다.
CHO-K1, a cell line isolated from the hamster's ovary, was used for distribution from the Korea Cell Line Bank (KCLB). The cells were prepared by adding 10% inactivated fetal bovine serum (Join Bio-innovation, Korea), 1% penicillin-streptomycin solution to Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) / F-12 (Join Bio-Innovation, Korea) medium. Incubations were made at 5 ° C. and 5% carbon dioxide conditions. Cells were incubated in T75 flasks to obtain sufficient cells and 80% media replacement every 2-3 days. When fully grown, trypsin-EDTA (ethyllene diamine tetraacetic acid) solution is used to detach the attached cells and incubate 96-well falcon by adjusting the cell number to 3 × 10 4 cells / mL in growth medium. Dispense 100 μL into plates.
실시예Example 3. 형질전환 ( 3. Transformation ( transfectiontransfection )을 통한 )through PPREPPRE 내포 벡터의 Of nesting vector 세포내Intracellular 삽입 insertion
96-웰 플레이트 (96-well plate)에 세포를 분주하고 24시간 후, 형질전환 (transfection) 시약인 HyliMax (Dojindo, Korea)를 이용하여 CHO-K1 세포에 PPRE 플라스미드 DNA를 형질전환 (transfection) 시켰다. 배양판의 한 웰 (well) 당 pCMV-DR-1-Luc 벡터를 각각 100 ng씩, HyliMax 0.6 μL가 들어가도록 DNA-HyliMax complex 용액을 만들어 코-트랜스펙션 (co-transfection)한 후 상온에서 약 15분간 배양 (incubation)한 뒤 기존의 배지를 제거하고 DNA-HyliMax complex를 웰 (well) 당 150 μL씩 처리한 후 24시간 배양하였다.
After 24 hours of dispensing the cells in a 96-well plate, the PPRE plasmid DNA was transfected into CHO-K1 cells using HyliMax (Dojindo, Korea), a transfection reagent. . 100 ng of each pCMV-DR-1-Luc vector per well of the culture plate and a DNA-HyliMax complex solution were prepared so that 0.6 μL of HyliMax was added and co-transfected at room temperature. After incubation for about 15 minutes, the existing medium was removed, and the DNA-HyliMax complex was treated with 150 μL per well, followed by incubation for 24 hours.
실시예Example 4. 4. 불레기말End of fire 추출물의 세포 처리 Cell treatment of extracts
형질감염 (transfection)시킨 지 24시간이 지난 후, 배지를 제거하고 난 뒤 불레기말 추출물을 세 가지 농도 구간에서 각 농도별로 3반복 실험을 하였다. 1% DMSO의 DMEM/F-12 배지를 음성 대조군 (negative control)으로 사용하였고, 각 PPAR isoform (PPAR-α, -γ)의 애고니스트 (fenofibrate, troglitazone)를 0.01mM로 처리한 군을 양성 대조군 (positive control)으로 하였다. 불레기말 추출물은 DMSO에 희석하여 DMEM/F-12와 섞어 최종 농도가 각각 10 mg/mL, 2 mg/mL, 0.4 mg/mL이 되도록 24시간 처리하였다.
After 24 hours of transfection, the medium was removed and three repeated experiments were performed for each concentration at three concentration intervals. DMEM / F-12 medium of 1% DMSO was used as a negative control, and the group treated with agonist (fenofibrate, troglitazone) of each PPAR isoform (PPAR-α, -γ) with 0.01 mM was positive control. (positive control). The endless extract was diluted in DMSO and mixed with DMEM / F-12 and treated for 24 hours until the final concentration was 10 mg / mL, 2 mg / mL, and 0.4 mg / mL, respectively.
실시예Example 5. 추출물에 의한 5. By extract 세포내Intracellular PPREPPRE 활성정도의Activity 측정 Measure
시료를 24시간 처리한 후 배지를 제거하고 4℃의 PBS로 세척 (washing)을 해 준 뒤, 20 μL의 Firefly Luciferase assay lysis buffer를 이용하여 세포를 용해시키고 상온에서 15분간 방치하였다. 96 웰 플레이트 (well plate)의 각 웰 (well)당 20μL의 cell lysate를 넣고 100 μL/well의 Firefly Luciferase assay solution을 첨가하고 luminometer를 이용하여 PPRE의 발현정도를 측정하였다.After the sample was treated for 24 hours, the medium was removed and washed with PBS at 4 ° C., and the cells were lysed using 20 μL of Firefly Luciferase assay lysis buffer and allowed to stand at room temperature for 15 minutes. 20 μL of cell lysate was added to each well of a 96 well plate, 100 μL / well of Firefly Luciferase assay solution was added, and the expression level of PPRE was measured using a luminometer.
그 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다. 표 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, CHO K-1 세포에 PPRE를 형질전환 시킨 후 불레기말 추출물을 처리한 결과 PPRE의 활성이 증가하였다. 불레기말의 활성은 대조군인 DR-1에 비해 그 활성이 0.4mg/mL에서 2.79, 2mg/mL에서 2.28, 10mg/mL에서 3.5배 증가하였다. 세 가지 농도 구간이 모두 PPAR-α의 애고니스트인 페노파이브레이트 (fenofibrate)보다 높은 활성을 보였으며 PPAR-γ 애고니스트인 트로글리타존 (troglitazone)보다는 낮았다 (각각 대조군 대비 2.11와 4.88배). 동물 세포는 자체적인 발광이 거의 없기 때문에 음성 대조군인 DMSO의 활성은 0.03배로 극히 미미하였다.The results are shown in Table 1 and FIG. As shown in Table 1 and Figure 2, after the PPRE transformed into CHO K-1 cells treated with the end of the extract, the activity of PPRE increased. The end of activity was increased by 2.79 at 0.4 mg / mL, 2.28 at 2 mg / mL, and 3.5 times at 10 mg / mL compared to DR-1, the control group. All three concentration ranges showed higher activity than fenofibrate, an agonist of PPAR-α, and lower than troglitazone, a PPAR-γ agonist (2.11 and 4.88 times, respectively). Since animal cells had little luminescence of itself, the activity of DMSO, a negative control, was only 0.03 fold.
End of fire
2.79
2.28
3.5
제조예Manufacturing example 1. 건강기능성 식품의 제조 1. Preparation of health functional food
불레기말 추출물 분말 500 ㎎ Black Horse Extract Powder 500 mg
비타민 혼합물 적량 Vitamin mixture proper amount
비타민 A 아세테이트 70 ㎍ 70 μg of Vitamin A Acetate
비타민 E 1.0 ㎎ Vitamin E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 ㎎ Vitamin B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 ㎎ Vitamin B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 ㎎ Vitamin B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 ㎍ 0.2 μg of vitamin B12
비타민 C 10 ㎎ Vitamin C 10 mg
비오틴 10 ㎍ 10 μg biotin
니코틴산아미드 1.7 ㎎ Nicotinic Acid 1.7 mg
엽산 50 ㎍ 50 μg folic acid
판토텐산 칼슘 0.5 ㎎ Calcium Pantothenate 0.5mg
무기질 혼합물 적량 Mineral mixture
황산제1철 1.75 ㎎ Ferrous Sulfate 1.75 mg
산화아연 0.82 ㎎ Zinc Oxide 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 ㎎ Magnesium carbonate 25.3 mg
제1인산칼륨 15 ㎎ Potassium monophosphate 15 mg
제2인산칼슘 55 ㎎ Dibasic calcium phosphate 55 mg
구연산칼륨 90 ㎎ Potassium Citrate 90 mg
탄산칼슘 100 ㎎
염화마그네슘 24.8 ㎎ Magnesium chloride 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강기능성 식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강기능성 식품 조성물 제조에 사용할 수 있다. 이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였으나, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며,이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 균등물에 의하여 정의된다고 할 것이다.Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixtures is mixed with a component suitable for a health food in a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients may be mixed according to a general health functional food manufacturing method. Next, the granules may be prepared and used for preparing the health functional food composition according to a conventional method. Although specific portions of the present invention have been described in detail above, it will be apparent to those skilled in the art that these specific techniques are merely preferred embodiments, and the scope of the present invention is not limited thereto. It is therefore intended that the scope of the present invention be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (8)
The food composition of claim 6, wherein the composition has an anti-inflammatory and vascular protective effect.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100028430A KR101193730B1 (en) | 2010-03-30 | 2010-03-30 | Composition comprising the extract of Colpomenia sinuosa with PPAR agonist activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020100028430A KR101193730B1 (en) | 2010-03-30 | 2010-03-30 | Composition comprising the extract of Colpomenia sinuosa with PPAR agonist activity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20110108933A true KR20110108933A (en) | 2011-10-06 |
| KR101193730B1 KR101193730B1 (en) | 2012-10-22 |
Family
ID=45026327
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020100028430A KR101193730B1 (en) | 2010-03-30 | 2010-03-30 | Composition comprising the extract of Colpomenia sinuosa with PPAR agonist activity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101193730B1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101999916B1 (en) * | 2018-01-19 | 2019-07-12 | 강릉원주대학교산학협력단 | Composition for enhancement of muscular strength and preventing or treating of sarcopenia comprising Colpomenia bullosa extract |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101995946B1 (en) | 2017-11-07 | 2019-07-04 | 지 환 황 | Enzyme composition for glucose metabolic regulation |
| KR102093247B1 (en) | 2018-03-09 | 2020-03-25 | 부산대학교 산학협력단 | Novel Meroterpene Compound, and Composition for Preventing or Treating PPAR-gamma Associated Diseases Comprising the Same |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100826560B1 (en) * | 2007-07-04 | 2008-04-30 | 제주대학교 산학협력단 | Composition for improving diabetes |
-
2010
- 2010-03-30 KR KR1020100028430A patent/KR101193730B1/en active IP Right Grant
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101999916B1 (en) * | 2018-01-19 | 2019-07-12 | 강릉원주대학교산학협력단 | Composition for enhancement of muscular strength and preventing or treating of sarcopenia comprising Colpomenia bullosa extract |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR101193730B1 (en) | 2012-10-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jiang et al. | The target cells of anthocyanins in metabolic syndrome | |
| KR101809172B1 (en) | Composition for preventing, improving or treating metabolic disease comprising Akkermansia muciniphila strain or its culture broth cultivated in medium without mucin as effective component | |
| Salamone et al. | Moro orange juice prevents fatty liver in mice | |
| Wu et al. | Pomegranate husk extract, punicalagin and ellagic acid inhibit fatty acid synthase and adipogenesis of 3T3-L1 adipocyte | |
| US20100210722A1 (en) | Composition for preventing or treating lipid metabolic disorders comprising fucoxanthin or marine plant extract containing same | |
| CN102292093A (en) | Composition from sphaeranthus indicus and garcinia mangostana for the control of metabolic syndrome | |
| KR20060132970A (en) | Adiponectin increasing agent | |
| JP2019513382A (en) | Composition for the prevention, amelioration or treatment of hyperuricemia or hyperuricemia-related metabolic disorders, which comprises the extract of Yuchichi as an active ingredient | |
| KR101193730B1 (en) | Composition comprising the extract of Colpomenia sinuosa with PPAR agonist activity | |
| KR20110108916A (en) | Composition comprising the extract of codium fragile with ppar agonist activity | |
| CA2544781A1 (en) | Plant-derived .beta.3-adrenergic receptor agonist substances and uses thereof | |
| JP2013216686A (en) | Peroxisome proliferator-activated receptor activator and composition | |
| KR20160132611A (en) | Composition for increasing amount of low density lipoprotein receptor by inhibition of PCSK9 gene expression comprising Rubi fructus extract as effective component and uses thereof | |
| Cao et al. | Cyclocarya paliurus triterpenoids suppress hepatic gluconeogenesis via AMPK-mediated cAMP/PKA/CREB pathway | |
| KR101388634B1 (en) | Composition and health food comprising handelin isolated from the extract of Chrysanthemum boreale Makino for prevention and treatment of inflammatory-involved disease | |
| KR101316044B1 (en) | Pharmaceutical Composition and Functional Food for Inhibiting Obesity Caused by Infection from Mulberry | |
| KR20130104132A (en) | Composition for suppressing elevation of blood sugar level comprising onion coat extract and manufacturing method of onion coat extract | |
| KR101358197B1 (en) | Composition for promoting leptin secretion comprising specific compounds as effective component | |
| JP2010059113A (en) | Peroxisome proliferation agent responsive receptor activator, and composition of the same | |
| KR20080076599A (en) | Composition for preventing or improving the metabolic syndrome containing extract of solanum tuberosum | |
| KR100842054B1 (en) | Composition containing extracts of Glycyrrhizin Radix Praepara or compounds isolated therefrom for the Blood Glucose-Lowering effect | |
| JP6306634B2 (en) | Composition for food | |
| KR101881146B1 (en) | Composition for increasing amount of low density lipoprotein receptor by inhibition of PCSK9 gene expression comprising Rubi fructus extract as effective component and uses thereof | |
| KR20140048601A (en) | Pharmaceutical composition containing cedrela fissilis extract or fractions for prevention or treatment of metabolic disease | |
| Lee et al. | Anti-diabetic activities of ethanol extracts from persimmon leaves |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| AMND | Amendment | ||
| X701 | Decision to grant (after re-examination) | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20151013 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160928 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20181008 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20191014 Year of fee payment: 8 |