KR20110071507A - Pharmaceutical composition for the prevention of restenosis comprising 4-o-methylhonokiol as active ingredient - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 4-O-메틸호노키올(4-O-methylhonokiol)을 유효성분으로 포함하는 혈관 재협착 예방제에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 스텐트 시술후에 발생하는 혈관 재협착을 방지할 수 있는, 4-O-메틸호노키올을 유효성분으로 하고 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 혈관 재협착 예방제에 관한 것이다.The present invention relates to a vascular restenosis preventive agent comprising 4-O-methylhonokiol (4-O-methylhonokiol) as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to a vascular restenosis preventive agent comprising 4-O-methylhonokiol as an active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier, which can prevent vascular restenosis occurring after a stent procedure. .
심부전, 관상동맥질환, 고혈압성 심장질환, 부정맥, 선천성 심장질환, 심근경색증, 협심증 등의 심장질환과 뇌졸중, 말초혈관 질환 등의 심혈관계 질환은 다양한 연령층에서 발생하며, 적기에 치료하지 않으면 심각한 후유증과 더불어 사망에 이르게 할 수도 있다. 특히, 최근에는 서구화된 식생활로 인하여 관상동맥질환의 발병율이 급격히 증가되고 있는 바, 관상동맥질환을 효과적으로 치료하려는 노력이 계속되고 있다.Heart diseases such as heart failure, coronary artery disease, hypertensive heart disease, arrhythmia, congenital heart disease, myocardial infarction, and angina pectoris and cardiovascular diseases such as stroke and peripheral vascular disease occur in various age groups. In addition, it can lead to death. In particular, the recent incidence of coronary artery disease is rapidly increasing due to westernized diet, and efforts to effectively treat coronary artery disease continue.
현재까지 개발된 관상동맥질환에 대한 치료법으로는, 약물요법, 유전자 치료법, 경피적 관동맥 성형술 및 스텐트 삽입술(PTCA: percutaneous transluminal coronary angioplasty and stenting), 외과적으로 수술하는 관동맥 우회술(CABG: coronary artery bypass graft)의 재관류요법(revascularization therapy) 등이 알려져 있다.Treatments for coronary artery disease developed to date include drug therapy, gene therapy, percutaneous transluminal coronary angioplasty and stenting (PTCA), and coronary artery bypass graft (CABG). Revascularization therapy) is known.
최근에는, 경피적 관동맥 성형술 및 스텐트 삽입술이 많이 사용되고 있으나, 3 내지 6개월이 경과한 후에는 약 40%가량의 환자들에 있어서 혈관 재협착(restenosis)이 일어난다는 문제점이 있는 것으로 보고되고 있다(참조: Ryan et al., J. Am. Coll. Cardiol., 22. 2033-2054, 1993). 이러한 혈관 재협착은 풍선도자에 의해 손상된 혈관내피 세포, 활성화된 혈소판 또는 대식세포로부터 여러 가지의 사이토카인이 생성, 분비되면서 혈관 평활근 세포의 유주(migration) 및 증식이 촉진되고, 이에 따라 세포외 간질(ECM: extracellular matrix)의 생성 및 분비가 촉진되어 혈관내막의 비후를 일으켜, 발생되는 것으로 알려져 있다(참조: Godfried et al, Am. Heart J., 129, 203-210, 1995).Recently, percutaneous coronary angioplasty and stent implantation have been widely used, but it has been reported that vascular restenosis occurs in about 40% of patients after 3 to 6 months (see reference). Ryan et al., J. Am. Coll. Cardiol., 22. 2033-2054, 1993). The vascular restenosis promotes the migration and proliferation of vascular smooth muscle cells by producing and secreting various cytokines from vascular endothelial cells, activated platelets or macrophages damaged by balloon ware, thereby promoting extracellular epilepsy. It is known that the production and secretion of the extracellular matrix (ECM) are promoted, which causes thickening of the vascular endothelium and is caused (Godfried et al, Am. Heart J., 129, 203-210, 1995).
한편, 정상적인 상태의 혈관 평활근 세포는 증식을 하지 않지만, 스텐트 시술 등을 통하여 내피세포의 중막이 손상되면서 여러 단계의 신호전달을 거쳐 혈관 평활근 세포의 분열, 이동 및 증식이 유발된다. 혈관 평활근 세포 증식의 기전으로는 정상적인 내피세포의 손상에 의한 증식억제인자의 제거와 증식유발인자의 활성화, 혈관 평활근 세포 표면의 수용체를 통한 증식유발신호의 전달, 혈관 평활근 세포의 핵 내로 전달된 증식유발신호에 의한 세포 주기의 변화 등을 들 수 있다. 정상적인 내피세포는 혈관 평활근 세포의 증식을 억제하는 물질을 분비하는데, 내피세포가 손상되면 이들의 분비가 억제되고, 활성화된 혈소판에서 분비되는 혈소판 유래 성장인자(platelet derived growth factor), 혈장 중에 포함되어 있는 여러 사이토카인(cytokine) 등에 의해 혈관 평활근 세포의 증식이 유발된다.On the other hand, vascular smooth muscle cells in a normal state does not proliferate, but the stroma of the endothelial cells through the damage, etc. through the various stages of signal transduction, vascular smooth muscle cell division, migration and proliferation is induced. The mechanisms of vascular smooth muscle cell proliferation include the removal of proliferation inhibitory factor due to normal endothelial cell damage and the activation of proliferative inducers, the transmission of proliferative signals through receptors on the surface of vascular smooth muscle cells, and the proliferation delivered into the nucleus of vascular smooth muscle cells. And a change in the cell cycle caused by the trigger signal. Normal endothelial cells secrete substances that inhibit the proliferation of vascular smooth muscle cells.When endothelial cells are damaged, their secretion is suppressed, and platelet derived growth factor, which is released from activated platelets, is contained in plasma. Proliferation of vascular smooth muscle cells is caused by various cytokines.
이러한 스텐트 시술후의 혈관 재협착을 방지하기 위하여 다양한 방법이 고려되고 있다. 예를 들어, 헤르데(Herdeg) 등은 택솔이 스텐트 시술후에 발생하는 혈관 재협착의 발생을 억제시킬 수 있음을 보고하였고(참조: Herdeg et al., Zeischrift fur Kardiologie, 89, 390-397, 2000), 대한민국 특허등록 제 478671호에는 클로트리마졸(clotrimazole)을 유효성분으로 포함하는 혈관 재협착 예방 및 치료용 약학 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허등록 제 516026호에는 3'-디옥시아데노신(3'-deoxyadenosine)을 유효성분으로 하는 혈관 재협착 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 특허공개 제 2001-110793호에는 Rho 키나아제 저해활성을 갖는 화합물을 유효성분으로 하는 혈관협착증의 예방 및 치료제가 개시되어 있으며, 대한민국 특허공개 제 2003-46314호에는 항트롬빈을 유효성분으로 하는 이식 혈관병, 재협착증, 인-스텐트 재협착증(in-stent restenosis) 및 폐 고혈압과 같은 혈관 증식성 질환의 예방 및 치료용 조성물이 개시되어 있고, 대한민국 특허공개 제 2005-23249호에는 레티노이드 및 레티노이드 작용 조절제를 유효성분으로 하는 혈관내 스텐트를 사용한 경피적 관상동맥 혈관형성술 후의 혈관 재협착 및/또는 재폐색 등 혈관성 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 의약 조성물이 개시되어 있으며, 대한민국 특허공개 제 2005-43183호에는 커쿠민(curcumin)을 포 함하는 혈관 재협착 예방 및 치료용 약학조성물이 개시되어 있다.Various methods have been considered to prevent vascular restenosis after such a stent procedure. For example, Herdeg et al. Reported that Taxol may inhibit the development of vascular restenosis that occurs after stent implantation (Herdeg et al., Zeischrift fur Kardiologie, 89, 390-397, 2000). ), Korean Patent Registration No. 478671 discloses a pharmaceutical composition for preventing and treating vascular restenosis comprising clotrimazole as an active ingredient, and Korean Patent Registration No. 516026 discloses 3'-dioxyadenosine (3 A composition for preventing and treating vascular restenosis using '-deoxyadenosine) as an active ingredient is disclosed, and Korean Patent Publication No. 2001-110793 discloses an agent for preventing and treating vascular stenosis using a compound having Rho kinase inhibitory activity as an active ingredient. Korean Patent Laid-Open Publication No. 2003-46314 discloses graft vascular disease, restenosis, in-stent restenosis and pulmonary hypertension with antithrombin as an active ingredient. A composition for preventing and treating vascular proliferative diseases such as pressure is disclosed, and Korean Patent Laid-Open Publication No. 2005-23249 discloses revascularization after percutaneous coronary angioplasty using an endovascular stent containing retinoid and a retinoid action modifier. A pharmaceutical composition for preventing and / or treating vascular diseases such as stenosis and / or reclosure is disclosed, and Korean Patent Publication No. 2005-43183 discloses a pharmaceutical for preventing and treating vascular restenosis including curcumin. A composition is disclosed.
그러나, 상술한 혈관 재협착 억제제는 혈관 재협착을 방지하는 것 이외의, 상처재생억제, 혈관손상, 간독성, 신장손상, 혈소판응집억제에 의한 출혈량 증가 등의 다양한 부작용을 나타내기 때문에, 사람에 대하여 안전성이 입증된 다양한 천연물로부터 유래된 혈관 재협착을 억제할 수 있는 물질을 개발하려는 연구가 진행되고 있으나, 아직까지 별다른 연구성과가 보고 되지 않고 있는 실정이다.However, the above-described vascular restenosis inhibitors exhibit various side effects other than preventing vascular restenosis and exhibit various side effects such as wound regeneration inhibition, vascular injury, hepatotoxicity, kidney damage, and increased blood loss due to platelet aggregation inhibition. Research into the development of a material that can suppress vascular restenosis derived from a variety of natural products that have been proven safe, but the research results have not been reported yet.
따라서, 안전하면서도 효과적으로 혈관 재협착을 억제할 수 있는 물질 특히, 인체에 무해한 천연물질을 개발하여야 할 필요성이 끊임없이 대두되었다.Therefore, there is a constant need to develop materials that can safely and effectively inhibit vascular restenosis, particularly natural materials that are harmless to the human body.
현재 국내에서 염료 또는 위한, 곽란, 구토, 설사 등의 치료를 위한 한약재로 사용되고 있는 후박은, 목련과(Magnoliaceae)에 속하는 중국산 후박(Magnolia officinalis Rehd. et Wils., Magnolia officinalis var. biloba)과 역시 목련과에 속하는 낙엽 교목인 일본산 후박(Magnolia obovata), 그리고 녹나무과(Lauraceae)에 속하는 상록 교목인 한국산 후박(Machilus thunbergii, Machilus thunbergii var. obovata)이 있으며, 이것은 각각 산지에 따라 후박 또는 후박의 대용품으로 사용되고 있다(참조: Lee S. R. et al., Kor. J. Pharmacogn., 17, p199, 1986). Currently used as a medicinal herb for the treatment of dyes or for the treatment of nausea, vomiting, vomiting and diarrhea, the Chinese pepper is also known as Magnolia officinalis Rehd. Et Wils., Magnolia officinalis var. Biloba belonging to Magnoliaceae. Magnolia obovata, a deciduous tree belonging to the Magnolia family, and Korean evergreen tree (Machilus thunbergii, Machilus thunbergii var. Obovata) belonging to the tree family Lauraceae, which are substitutes for the planting or the planting plant, respectively. (Lee Lee et al., Kor. J. Pharmacogn., 17, p199, 1986).
최근에는 국내에서 후박의 추출물을 포함하는 당뇨합병증의 예방 및 치료제를 개발하려는 연구가 진행되어, 마그놀올(magnolol) 성분의 효능을 활용한 당뇨억제제(참조: 특허등록 제 550934호)와 오보바톨(obovatol) 성분을 활용한 항불안 억제제(참조: 특허등록 제 695781호) 등이 개발된 바 있다.Recently, studies to develop a prophylactic and therapeutic agent for diabetic complications including extracts of groceries have been conducted in Korea, and anti-diabetic agents utilizing the efficacy of magnool (refer to Patent No. 550934) and obovatol ( anti-anxiety inhibitors (see Patent Registration No. 695781) utilizing obovatol) have been developed.
한편, 1978년 후박으로부터 4-O-메틸호노키올(4-O-methylhonokiol)이 처음으 로 분리되었다(참조: El-Feraly, F. S. et al., Lloydia, 41, p493, 1978). 4-O-메틸호노키올은 마그놀올(magnolol)과 함께 항균효과가 있고, 모기 유충 및 브라인 슈림프(brine shrimp)에 살충효과가 있는 것으로 알려져 있으며(참조: Nitao J. K. et al., Phytochemistry, 30, p2193, 1991), 신경보호 효과 및 신경영양 효과(neurotrophic effect)가 있는 것으로도 알려져 있다(참조: Tomoyuki E. et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14, p2621, 2004). Meanwhile, 4-O-methylhonokiol was first isolated from Hupak in 1978 (El-Feraly, F. S. et al., Lloydia, 41, p493, 1978). 4-O-methylhonokiol, along with magnool, is known to have antimicrobial and pesticidal effects on mosquito larvae and brine shrimp (Nitao JK et al., Phytochemistry, 30, p2193, 1991), also known to have neuroprotective and neurotrophic effects (Tomoyuki E. et al., Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 14, p2621, 2004).
그러나, 아직까지 후박나무에서 분리된 4-O-메틸호노키올에 의한 혈관 평활근 세포(vascular smooth muscle cell)의 항증식 효과에 대해서는 보고된 바 없다.However, no antiproliferative effect of vascular smooth muscle cells by 4-O-methyl-honokiol isolated from Hak tree has been reported.
이에, 본 발명자들은 안전하면서도 효과적으로 혈관 재협착을 억제할 수 있는 물질을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 후박으로부터 분리된 4-O-메틸호노키올(4-O-methylhonokiol)이 혈관 평활근 세포의 증식을 억제하여, 결과적으로는 스텐트 시술 후에 발생하는 혈관 재협착의 발생을 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors have diligently researched to develop a material that can safely and effectively inhibit vascular restenosis, and as a result, 4-O-methylhonokiol isolated from the posterior tissues prevented the proliferation of vascular smooth muscle cells. As a result, it was confirmed that the generation of vascular restenosis occurring after the stent procedure can be effectively suppressed, and the present invention has been completed.
결국, 본 발명의 목적은 4-O-메틸호노키올을 유효성분으로하는 혈관 재협착 예방제를 제공하는 것이다.After all, it is an object of the present invention to provide an agent for preventing vascular restenosis, which comprises 4-O-methylhonokiol as an active ingredient.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 혈관 재협착 예방제는 하기 일반식 1로 표시되는 4-O-메틸호노키올을 유효성분으로 함유하고 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.In order to achieve the above object, the vascular restenosis preventive agent of the present invention contains 4-O-methylhonokiol represented by the following general formula (1) as an active ingredient and includes a pharmaceutically acceptable carrier.
[일반식 1] [Formula 1]
본 발명의 혈관 재협착 예방제는 부작용없이 스텐트 시술후에 발생하는 혈관 재협착을 예방할 수 있으므로, 보다 안전한 관상동맥질환의 예방 및 치료에 널리 활용될 수 있을 것이다.The vascular restenosis preventive agent of the present invention may prevent vascular restenosis occurring after stent surgery without side effects, and thus may be widely used for the prevention and treatment of safer coronary artery disease.
본 발명의 혈관 재협착 예방제는 후박 추출물로부터 분리된 4-O-메틸호노키올(4-O-methyl honokiol)을 유효성분으로 하고 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다.The vascular restenosis preventive agent of the present invention is a 4-O-methyl honokiol isolated from the extract of bakbak as an active ingredient and includes a pharmaceutically acceptable carrier.
본 발명에 사용되는 4-O-메틸호노키올은 상업적으로 입수하거나, 또는 건조된 후박의 잎 또는 줄기껍질로부터 조추출물을 수득하고, 상기 조추출물을 다시 비극성 용매로 추출하여 가용 추출물을 수득한 다음, 상기 비극성 용매 가용 추출물을 유기용매에 용해시키고, 이를 C18 컬럼, 실리카겔 컬럼 및 심팍 프렙-ODS(Shim-Pak prep-ODS) 컬럼을 이용한 컬럼 크로마토그래피에 순차적으로 적용하여 수득할 수 있다.4-O-methyl-honokiol used in the present invention is obtained commercially, or the crude extract is obtained from dried leaf or stem bark, and the crude extract is extracted again with a non-polar solvent to obtain a soluble extract. By dissolving the non-polar solvent soluble extract in an organic solvent, it can be obtained by applying sequentially to column chromatography using a C 18 column, silica gel column and Shim-Pak prep-ODS (Shim-Pak prep-ODS) column.
이때, 후박은 특별히 이에 제한되지 않으나, 중국산 후박(Magnolia officinalis Rehd. et Wils., Magnolia officinalis var. biloba), 일본산 후박(Magnolia obovata), 한국산 후박(Machilus thunbergii, Machilus thunbergii var. obovata) 등을 사용할 수 있고, 중국산 후박을 사용하는 것이 특히 바람직하다. 또한, 상기 조추출물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 건조된 후박의 잎 또는 줄기껍질을, 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매를 이용한 열수추출 방법, 환류냉각추출 방법 또는 초음파추출 방법에 적용하여 얻어진 액상성분을 20 내지 100℃, 바람직하게는 약 50 내지 70℃에서 감압농축하여 수득하고, 바람직하게는 건조된 후박의 잎 또는 줄기껍질에, 중량대비 200 내지 2,000%(v/w)의 물을 가하고 0 내지 100℃의 추출온도에서 약 1시간 내지 15일동안 열수추출하여 수득하거나 또는 건조된 후박의 잎 또는 줄기껍질에, 중량대비 200 내지 2,000%(v/w)의 75 내지 100% 에탄올을 가하고, 10 내지 30℃의 추출온도에서 용매추출하여 수득할 수 있다.At this time, the hummus is not particularly limited, but Chinese humbac (Magnolia officinalis Rehd. Et Wils., Magnolia officinalis var.biloba), Japanese humbac (Magnolia obovata), Korean humbac (Machilus thunbergii, Machilus thunbergii var. Obovata), etc. It is possible to use, and it is particularly preferable to use Chinese thick foil. In addition, the crude extract is not particularly limited thereto, but the dried leaf or stem bark of dried thick gourd, hot water extraction method using a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, reflux cooling extraction method or ultrasonic extraction method The liquid component obtained by applying to is obtained by concentrating under reduced pressure at 20 to 100 ° C, preferably about 50 to 70 ° C, and preferably 200 to 2,000% (v / w) by weight of dried leaf or stem bark. ) Water is added by extraction and hot water extraction at an extraction temperature of 0 to 100 ° C. for about 1 hour to 15 days, or dried to the leaf or stem bark of the dried gourd, 200 to 2,000% (v / w) by weight of 75 to It can be obtained by adding 100% ethanol, and solvent extraction at an extraction temperature of 10 to 30 ℃.
또한, 상기 비극성 용매 가용 추출물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 상기 수득한 조추출물에 물을 가하여 분산시키고, 이에 상기 가한 물의 부피에 대하여 10 내지 50%(v/v)의 비극성 용매를 가한 다음, 분별추출하여 수득할 수 있는데, 이때 사용되는 비극성 용매는 특별히 이에 제한되지 않으나, 헥산, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 글리세린, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 에테르 등을 사용할 수 있다. 바람직하게는, 상기 조추출물에 중량대비 200 내지 2,000%(v/w)의 물을 가하여 분산시키고, 이에 상기 가한 물의 부피에 대하여 10 내지 50%(v/v)의 헥산을 가한 다음, 분별추출하여 수득한 헥산 분획을 비극성 용매 가용 추출물로 사용할 수 있다.In addition, the non-polar solvent soluble extract is not particularly limited thereto, but is dispersed by adding water to the crude extract obtained by adding a non-polar solvent of 10 to 50% (v / v) to the volume of the added water, and then fractionated It can be obtained by extraction, the non-polar solvent used at this time is not particularly limited, hexane, chloroform, methylene chloride, ethyl acetate, glycerin, propylene glycol, butylene glycol, ether and the like can be used. Preferably, 200 to 2,000% (v / w) of water is added to the crude extract to disperse it, and 10 to 50% (v / v) of hexane is added to the volume of the added water, followed by fractional extraction. The hexane fraction obtained can be used as a nonpolar solvent soluble extract.
상기 수득한 비극성 용매 가용 추출물을 용해시키는데 사용되는 유기용매는 특별히 이에 제한되지 않으나, 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올을 사용함이 바람직하다.The organic solvent used to dissolve the obtained non-polar solvent soluble extract is not particularly limited thereto, but preferably a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms is used.
상기 유기용매에 용해된 비극성 용매 가용 추출물은 C18 컬럼에 흡착시킨 후 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올, 바람직하게는 메탄올:물이 약 10:1 내지 4:1(부피비)이 되도록 혼합한 용출액으로 용출하여, 활성분획을 수득할 수 있다.The non-polar solvent soluble extract dissolved in the organic solvent is an eluate mixed with a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, preferably methanol: water, at about 10: 1 to 4: 1 (volume ratio) after adsorption on a C 18 column. By eluting, the active fraction can be obtained.
상기 C18 컬럼으로부터 수득한 활성분획을 다시 실리카겔 컬럼에 흡착시킨 다음, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 2회 내지 5회 수행하여 활성분획을 분리하고, 최종적으로 고성능액체크로마토그래피에 적용하여 4-O-메틸호노키올을 최종적으로 수득한다.The active fraction obtained from the C 18 column was again adsorbed onto a silica gel column, followed by silica
한편, 4-O-메틸호노키올이 혈관 재협착에 어떠한 영향을 나타내는지를 확인하기 위하여, 흰쥐의 대동맥 평활근 세포에 4-O-메틸호노키올을 처리한 결과, 4-O-메틸호노키올이 농도의존적으로 대동맥 평활근 세포의 증식을 억제하고, 상기 흰쥐의 대동맥 평활근 세포에서의 DNA 합성을 농도 의존적으로 억제함을 확인하였는 바, 4-O-메틸호노키올이 스텐트 시술후에 발생하는 혈관 평활근 세포의 증식을 억제하여, 혈관 재협착을 효과적으로 예방할 수 있음을 알 수 있었다.On the other hand, in order to confirm the effect of 4-O-methyl-honokkiol on vascular restenosis, the treatment of 4-O-methyl-honokinool in rat aortic smooth muscle cells, the concentration of 4-O-methyl-honokinool It was confirmed that the inhibition of aortic smooth muscle cell proliferation and the concentration-dependent inhibition of DNA synthesis in the aortic smooth muscle cell of rats, the proliferation of vascular smooth muscle cell that occurs after stent procedure Inhibition of the vascular restenosis can be effectively prevented.
본 발명의 혈관 재협착 예방제의 유효성분으로 함유되는 4-O-메틸호노키올은 약학적으로 허용되는 결합제(예, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필셀룰로오스), 붕해제(예, 카복시메틸셀룰로오스칼슘, 전분글리콜산나트륨), 희석제(예, 옥수수전분, 유당, 콩기름, 결정셀룰로오스, 만니톨), 활택제(예, 스테아린산 마그네슘, 탈크), 감미제(예, 백당, 과당, 솔비톨, 아스파탐), 안정제(예, 카복시메틸셀룰로오스나트륨, 알파 또는 베타 싸이클로덱스트린, 비타민 C, 구연산, 백납), 보존료(예, 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 안식향산나트륨) 및 향료(예, 에틸바니린, 마스킹후레바, 멘톨후라보노, 허브향)와 혼합하여 정제, 캅셀제, 액제, 연고제 또는 주사제와 같은 약학적 제제로 제조될 수 있다.4-O-methyl-honokiol contained as an active ingredient of the vascular restenosis prevention agent of the present invention is a pharmaceutically acceptable binder (eg polyvinylpyrrolidone, hydroxypropyl cellulose), disintegrant (eg carboxymethyl cellulose) Calcium, sodium starch glycolate), diluents (e.g. corn starch, lactose, soybean oil, crystalline cellulose, mannitol), glidants (e.g. magnesium stearate, talc), sweeteners (e.g. white sugar, fructose, sorbitol, aspartame), stabilizers (E.g. sodium carboxymethylcellulose, alpha or beta cyclodextrin, vitamin C, citric acid, white lead), preservatives (e.g. methyl paraoxybenzoate, propyl paraoxybenzoate, sodium benzoate) and flavorings (e.g. ethylvaninirin, after masking Leva, menthol flavono, herbal flavor) can be prepared into pharmaceutical preparations such as tablets, capsules, solutions, ointments or injections.
유효량Effective amount
본 발명의 혈관 재협착 예방제의 유효성분인 4-O-메틸호노키올의 투여량은 환자의 연령, 성별, 증상, 투여방법 또는 예방목적에 따라, 체중 kg 당 0.0001 내지 100mg을 1일 1회 내지 3회 분복할 수 있고, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg으로 투여한다. 특이 증상을 나타내는 환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율, 질환의 중증도 등에 따라 당업자가 투여량을 변화시킬 수도 있다.The dosage of 4-O-methylhonokiol, which is an active ingredient of the vascular restenosis preventing agent of the present invention, is 0.0001 to 100 mg per kg of body weight per day, depending on the age, sex, symptoms, administration method or purpose of the patient. The dose may be divided three times, and is preferably administered at 0.001 to 10 mg / kg. Dosage levels for patients with specific symptoms may vary by those skilled in the art depending on the patient's weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, method of administration, rate of excretion, severity of disease, and the like.
급성 독성실험Acute Toxicity Test
6 내지 7주령된 비설치류 비글견(beagle)을 대상으로 4-O-메틸호노키올을 경구투여하여 24시간내의 개체사망율을 조사하였다. 이때, 암컷은 6 내지 8㎏인 개체를, 수컷은 7 내지 9㎏인 개체를 각각 8마리 사용하였다. 그 결과, 5g/kg 까지 죽은 개체가 발생하지 않아, 본 발명의 4-O-메틸호노키올은 kg당 5g까지도 급성독성을 관찰할 수 없을 만큼 안전하므로, 혈관 재협착 예방제로서 생체내에 안전하게 투여할 수 있다.Non-rodent beagles, 6-7 weeks old, were administered orally with 4-O-methylhonokiol and examined for mortality within 24 hours. At this time, the females used 6 individuals of 8 to 8 kg and the males used 8 individuals of 7 to 9 kg. As a result, the dead individuals do not occur up to 5 g / kg, the 4-O-methyl-honoquiol of the present invention is safe enough to observe acute toxicity even up to 5 g per kg, it can be safely administered in vivo as a vascular restenosis prevention agent Can be.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention more specifically, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention. .
실시예 1: 4-O-메틸호노키올 화합물의 분리 및 정제 Example 1 Separation and Purification of 4-O-Methyl Honokiol Compound
실시예 1-1: 후박나무의 줄기껍질 추출물의 제조 Example 1-1 Preparation of Stem Bark Extract
중국산 후박(Magnolia officinalis Rehd. et Wils.) 나무의 줄기껍질을 건조 및 세절하여 얻은 줄기껍질 3kg에 95% 에탄올 9L를 가하여 실온에서 3회 반복 추출한 후, 여과하여 얻은 여과액을 감압농축기(EYELA사, N-1000, 일본)로 감압농축하여 건조된 조추출물(이하, "hc-1"이라 함) 450g을 수득하였다.After extracting 95% ethanol 9L to 3 kg of the stem bark obtained from drying and cutting off the stem bark of Magnolia officinalis Rehd. Et Wils., Extracted three times at room temperature, the filtrate was filtered under reduced pressure (EYELA Co., Ltd.). , N-1000, Japan) was concentrated under reduced pressure to obtain 450 g of dried crude extract (hereinafter referred to as "hc-1").
이어, 상기 후박 조추출물 중 200g을 2L의 증류수에 현탁시키고, 500ml의 헥산을 가하여 용해한 후, 이를 분별 추출하는 과정을 2회 반복 수행하여 헥산층에 용해되는 부분을 모아 헥산층을 감압농축하여 후박 헥산 가용 추출물(이하, "hc-2"이라 함) 70g을 수득하였다.Subsequently, 200 g of the crude thin extract was suspended in 2 L of distilled water, and dissolved by adding 500 ml of hexane, followed by the fractional extraction process twice, collecting the portions dissolved in the hexane layer, and concentrating the hexane layer under reduced pressure. 70 g of hexane soluble extract (hereinafter referred to as "hc-2") was obtained.
실시예 1-2: 최종 화합물의 분리 및 정제 Example 1-2 Separation and Purification of the Final Compound
실시예 1-1에서 수득한 후박 헥산 가용 추출물 70g을 300ml의 메탄올에 용해시키고 300g의 C18 컬럼에 흡착시킨 후, 메탄올:물 = 4:1(v/v)의 혼합용매를 사용하여 분획물을 수득하고, 용리액을 감압농축하여 황갈색의 농축액 40g을 얻어, 메틸 렌클로라이드에 용해시켰다. 그런 다음, 헥산:초산에틸 = 9:1(v/v)의 혼합용매를 사용하여 컬럼(4.5 x 40cm)에 충진한 실리카겔(머크사, 상품명: 9385) 1kg에 분획물을 흡착시키고, 헥산과 초산에틸의 비율을 9:1(v/v)에서 6:4(v/v)로 변환시키면서 총 2회의 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여, 분획물을 분리하였다. 그런 다음, 최종적으로 하기 표 1에 기재된 조건의 고성능 액체크로마토그래피를 이용하여, 하기 물성치를 갖는 4-O-메틸호노키올 2g을 수득하고, 이하의 실시예에 사용하였다.70 g of the thick hexane soluble extract obtained in Example 1-1 was dissolved in 300 ml of methanol and adsorbed onto a 300 g of C 18 column, and then the fractions were separated using a mixed solvent of methanol: water = 4: 1 (v / v). The eluent was concentrated under reduced pressure to obtain 40 g of a yellowish brown concentrate, which was dissolved in methylene chloride. The fractions were then adsorbed onto 1 kg of silica gel (Merck, 9385) packed in a column (4.5 x 40 cm) using a mixed solvent of hexane: ethyl acetate = 9: 1 (v / v), hexane and acetic acid Fractions were separated by performing a total of two silica gel column chromatography conversion of the ratio of ethyl from 9: 1 (v / v) to 6: 4 (v / v). Then, finally, high performance liquid chromatography under the conditions shown in Table 1 below was used to obtain 2 g of 4-O-methylhonokiol having the following physical properties and used in the examples below.
구조분석을 위하여 1H-NMR(Varian, GEMINI, 400 MHz) 및 13C-NMR(Varian, GEMINI, 100 MHz)의 분광기기를 사용하였는데, 용매로는 CDCl3(Chloroform-d, Aldrich), 내부표준물질로는 트리메틸실란(TMS)을 사용하여 δ값(ppm)으로 나타내었는바, NMR 결과는 공지된 자료와 일치함을 확인할 수 있었다(참조: Shoji Y. et al., Chem. Pharm. Bull. 39, p2024, 1991).For structural analysis, spectrometers of 1 H-NMR (Varian, GEMINI, 400 MHz) and 13 C-NMR (Varian, GEMINI, 100 MHz) were used. As a solvent, CDCl 3 (Chloroform- d , Aldrich), internal standard As a substance, trimethylsilane (TMS) was used as the δ value (ppm). The NMR result was confirmed to be in agreement with known data (see Shoji Y. et al., Chem. Pharm. Bull. 39, p 2024, 1991).
1H-NMR(400MHz, CDCl3): δ ppm 3.45(2H, d, J=6.0Hz, H-7'), 3.45(2H, d, J=6.0Hz, H-7), 3.90(3H, s, OMe), 5.10(4H, m, H-9 and H-9'), 6.01(2H, m, H-8 and H-8'), 6.95(1H, dd, J=8, 1.5Hz, H-3'), 6.97(1H, dd, J=8.0, 1.5Hz, H-3), 7.05(2H, m, H-2 and H-6'), 7.23(1H, dd, J=8.5, 1.6Hz, H-6), 7.30(1H, dd, J=8.5, 1.6Hz, H-4'); 1 H-NMR (400 MHz, CDC l3 ): δ ppm 3.45 (2H, d, J = 6.0 Hz, H-7 ′), 3.45 (2H, d, J = 6.0 Hz, H-7), 3.90 (3H, s, OMe), 5.10 (4H, m, H-9 and H-9 '), 6.01 (2H, m, H-8 and H-8'), 6.95 (1H, dd, J = 8, 1.5 Hz, H-3 '), 6.97 (1H, dd, J = 8.0, 1.5 Hz, H-3), 7.05 (2H, m, H-2 and H-6'), 7.23 (1H, dd, J = 8.5, 1.6 Hz, H-6), 7.30 (1H, doublet of doublets, J = 8.5, 1.6 Hz, H-4 ′);
13C-NMR(100MHz, CDCl3): δ ppm 129.09(C-1), 130.67(C-2), 128.67(C-3), 156.94(<95> C-4), 115.53(C-5), 127.86(C-6), 34.22(C-7), 136.48(C-8), 115.47(C-9), 127.83(C-1'), 150.79(C-2'), 110.88(C-3'), 129.64(C-4'), 132.09(C-5'), 130.46(C-6'), 39.36(C-7'), 137.77(C-8'), 115.77(C-9'), 55.47(OMe). 13 C-NMR (100 MHz, CDC l3 ): δ ppm 129.09 (C-1), 130.67 (C-2), 128.67 (C-3), 156.94 (<95> C-4), 115.53 (C-5) , 127.86 (C-6), 34.22 (C-7), 136.48 (C-8), 115.47 (C-9), 127.83 (C-1 '), 150.79 (C-2'), 110.88 (C-3 '), 129.64 (C-4'), 132.09 (C-5 '), 130.46 (C-6'), 39.36 (C-7 '), 137.77 (C-8'), 115.77 (C-9 ') , 55.47 (OMe).
참고예 1: 순도 분석 Reference Example 1 : Purity Analysis
상기 실시예 1-2에서 수득한 4-O-메틸 호노키올의 순도를 하기 표 2에 기재된 조건의 고성능 액체 크로마토 그래피(HPLC)를 이용하여 분석하고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.The purity of 4-O-methyl honokiol obtained in Example 1-2 was analyzed using high performance liquid chromatography (HPLC) under the conditions described in Table 2 below, and the results are shown in Table 3 below.
상기 표 3에 기재한 바와 같이, 실시예 1에서 정제된 hc-2는 30.28%로 12.50%인 hc-1보다 4-O-메틸호노키올 함량이 훨씬 높은 것을 알 수 있었다.As shown in Table 3, the purified hc-2 in Example 1 was found to have a much higher content of 4-O-methyl honokiol than hc-1 of 12.50% to 30.28%.
실시예 2: 4-O-메틸호노키올의 대동맥 평활근 세포 증식억제 효과 Example 2 Aortic Smooth Muscle Cell Proliferation Inhibitory Effect of 4-O-Methyl Honokiol
4-O-메틸호노키올이 흰쥐의 대동맥 평활근 세포 성장을 억제하는지 알아보기 위하여, 3.0 x 104개의 대동맥 평활근 세포를 12웰 플레이트에서 0.5%(v/v)의 우태아혈청이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 24시간 동안 배양하였다. 그런 다음, 1, 2 또는 4uM의 4-O-메틸호노키올을 처리하고, 다시 24시간동안 배양하며, 25ng/ml의 농도로 혈소판 유래 성장인자(platelet-derived growth factor, PDGF-BB, Sigma Chem. Co., USA)로 처리하고, 다시 24, 48 또는 72시간 동안 배양하였다. 배양이 종료된 후, 각 배양세포에 트립신을 처리하여 배양된 세포를 분산시키고, 세포계수기로 세포의 수를 측정하였다.To determine whether 4-O-methylhonokiol inhibits aortic smooth muscle cell growth in rats, 3.0 x 10 4 aortic smooth muscle cells were added to DMEM medium containing 0.5% (v / v) fetal bovine serum in 12-well plates. Incubated for 24 hours. Subsequently, 1, 2 or 4 uM of 4-O-methylhonokiol was treated, incubated for another 24 hours, and platelet-derived growth factor (PDGF-BB, Sigma Chem) at a concentration of 25 ng / ml. Co., USA) and again incubated for 24, 48 or 72 hours. After the incubation was completed, trypsin treatment was applied to each cultured cell to disperse the cultured cells, and the number of cells was measured by a counter.
도 1에서 보듯이, 4-O-메틸호노키올의 처리농도가 증가할수록, 대동맥 평활근 세포의 혈소판 유래 성장인자에 의한 증식정도가 억제됨을 알 수 있었다. 또한, 4-O-메틸호노키올의 증식억제효과는 시간이 경과하더라도 지속적으로 유지됨을 알 수 있었다.As shown in Figure 1, it can be seen that as the treatment concentration of 4-O-methyl honokiol increases, the degree of proliferation by platelet-derived growth factor of aortic smooth muscle cells is suppressed. In addition, it was found that the growth inhibitory effect of 4-O-methyl honokiol was continuously maintained over time.
실시예 3: 4-O-메틸호노키올의 대동맥 평활근 세포의 DNA 합성억제 효과 Example 3 Inhibitory Effect of 4-O-Methyl Honokiol on DNA Synthesis of Aortic Smooth Muscle Cells
상기 실시예 2에서 확인된 4-O-메틸호노키올의 세포증식 억제효과가 DNA의 합성과 관련된 것인지를 알아보고자 하였다.The purpose of this study was to determine whether the cell proliferation inhibitory effect of 4-O-methylhonokiol identified in Example 2 is related to the synthesis of DNA.
즉, 혈소판 유래 성장인자를 처리하고, 20시간동안 배양한 후 1㎕의 [3H]티미딘을 배양액에 가하고 다시 4시간 동안 배양하는 것을 제외하고는, 상기 실시예 2와 동일한 방법으로 대동맥 평활근 세포를 배양하였다. 이어, 배양된 세포를 PBS로 세척하고, 500㎕의 TCA(trichloroacetic acid)를 가하여 30분동안 반응시켰다. 이어, TCA를 제거하고, 세척용액(ethanol/ether, 1:1(v/v))으로 세척한 다음, 500㎕의 NaOH를 가하여 세포를 용해시켰다. 그런 다음, 세포용해물에 5㎖의 섬광계수용 혼합액(scintillation cocktail)을 가하고, 방사선량을 측정하여 합성된 DNA의 상대적인 양을 비교하였다(참조: 도 2). That is, the aortic smooth muscle was treated in the same manner as in Example 2 except for treating platelet-derived growth factors, incubating for 20 hours, and then adding 1 μl of [ 3 H] thymidine to the culture solution and incubating for another 4 hours. Cells were cultured. Subsequently, the cultured cells were washed with PBS, and 500 μl of TCA (trichloroacetic acid) was added thereto and reacted for 30 minutes. Then, TCA was removed, washed with a washing solution (ethanol / ether, 1: 1 (v / v)), and 500 μl of NaOH was added to lyse the cells. Then, 5 ml of a scintillation cocktail was added to the cell lysate, and the radiation dose was measured to compare the relative amounts of the synthesized DNA (see FIG. 2).
도 2는 혈소판 유래 성장인자가 처리된 대동맥 평활근 세포의 DNA 합성에 대한, 4-O-메틸호노키올의 처리농도에 따른 DNA 합성 억제효과를 나타내는 그래프이다. 도 2에서 보듯이, 4-O-메틸호노키올의 처리량이 증가할수록 대동맥 평활근 세포의 DNA 합성량이 감소함을 알 수 있었다.Figure 2 is a graph showing the effect of inhibiting DNA synthesis according to the treatment concentration of 4-O-methyl honokiol on the DNA synthesis of platelet-derived growth factor treated aortic smooth muscle cells. As shown in Figure 2, it was found that the amount of DNA synthesis of aortic smooth muscle cells decreased as the throughput of 4-O-methyl-honokinool increased.
따라서, 실시예 2에서 나타난 4-O-메틸호노키올에 의한 대동맥 평활근 세포의 증식억제 효과는 4-O-메틸호노키올이 상기 세포의 DNA 합성을 억제하기 때문에 발생함을 알 수 있었다.Therefore, it was found that the proliferation inhibitory effect of aortic smooth muscle cells by 4-O-methyl-honokinool in Example 2 was caused by 4-O-methyl-honokinool inhibiting DNA synthesis of the cells.
실시예 4: 스텐트 시술후 발생하는 혈관 재협착의 발생에 대한 4-O-메틸호노키올의 효과 Example 4 Effect of 4-O-Methyl Honokiol on the Development of Vascular Restenosis After Stent
상기 실시예 2 및 3에서 확인된 4-O-메틸호노키올의 효과가 실제적인 스텐트 시술에 적용될 수 있는지의 여부를 알아보고자 하였다.The purpose of this study was to determine whether the effects of 4-O-methylhonokiol identified in Examples 2 and 3 can be applied to the actual stent procedure.
생후 3개월된 10마리 돼지의 관상동맥 혈관에 스텐트((주)휴메드, 대한민국)를 각각 4개소에 삽입한 대조군, 생후 3개월된 10마리 돼지의 관상동맥 혈관에 스텐트를 각각 4개소에 삽입하고, 4-O-메틸호노키올을 100㎎/체중kg/day의 투여량으로 투여한 실험군 1, 및 생후 3개월된 10마리 돼지의 관상동맥 혈관에 스텐트를 각각 4개소에 삽입하고 종래의 혈관 재협착 예방제로 사용된 택솔을 1㎎/체중kg/day의 투여량으로 투여한 실험군 2를 각각 4주동안 사육하였다. 그런 다음, 각 돼지의 평균 체중 변화량을 측정하고, 대조군 및 실험군의 돼지로부터 스텐트가 삽입된 관상동맥을 적출하여 혈관 재협착의 발생율을 측정하고, 이들을 상호 비교하였다(참조: 표 4). 이때, 평균 체중 변화량은 4주 경과한 돼지의 체중에서 스텐트 시술전 돼지의 체중을 뺀 값의 평균값으로 산출하였다.A stent (Humed, Korea) was inserted into four coronary vessels of 10 pigs 3 months old after birth, and a stent was inserted into 4 coronary vessels of 10 pigs 3 months after birth. Stents were inserted into each of the four coronary blood vessels of experimental group 1 and 10-month-old pigs, each administered 4-O-methyl-honokinool at a dose of 100 mg / kg body weight / day.
실험군 1
실험군 2Control
Experiment group 1
26%
53%72%
26%
53%
58
3262
58
32
상기 표 4에서 보듯이, 혈관 재협착 예방제를 전혀 투여하지 않은 대조군은 4주 경과후에 약 72%의 혈관 재협착율을 나타내었으나, 4-O-메틸호노키올을 투여한 실험군 1은 4주 경과후에 약 26%의 혈관 재협착율을 나타내었고, 종래의 혈관 재협착 예방제로 사용되어 온 택솔을 투여한 실험군 2는 4주 경과후에 약 53%의 혈관 재협착율을 나타내었다. 따라서, 4-O-메틸호노키올은 종래의 혈관 재협착 억제제보다 우수한 혈관 재협착 예방효과를 나타냄을 알 수 있었다.As shown in Table 4, the control group that was not administered the vascular restenosis preventive agent showed a vascular restenosis rate of about 72% after 4 weeks, but the experimental group 1, which received 4-O-methyl-honokinool, was about 4 weeks later. The vascular restenosis rate was 26%, and
뿐만 아니라, 성장기에 있는 돼지(생후 3개월)를 사용하였기 때문에 4주동안 사육할 경우에는 대조군과 같이 약 62kg의 체중이 증가되어야만 하는데, 4-O-메틸호노키올을 투여한 실험군 1은 대조군과 유사한 정도로 체중이 증가하였으나, 종래의 혈관 재협착 예방제로 사용되어 온 택솔을 투여한 실험군 2는 체중의 증가율이 현저하게 저하됨을 알 수 있었으며, 이는 택솔의 부작용 때문인 것으로 예측되었다.In addition, since pigs in the growing phase (3 months old) were used, the weight of about 62kg should be increased as in the case of 4 weeks of breeding. Although the body weight was increased to a similar degree, the
따라서, 4-O-메틸호노키올은 안전하면서도 효과적으로 혈관 재협착을 예방할 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, it was found that 4-O-methylhonokiol can safely and effectively prevent vascular restenosis.
실시예 5: 혈관 재협착 예방제의 제제화 Example 5 Formulation of Vascular Restenosis Preventive Agents
4-O-메틸호노키올을 통상의 부형제, 결합제, 윤활제, 붕해제, 희석재 등과 같은 담체와 혼합하여, 여러가지 약학적 제제를 제조하였다.4-O-methylhonokiol was mixed with carriers such as conventional excipients, binders, lubricants, disintegrants, diluents and the like to prepare various pharmaceutical formulations.
실시예 5-1: 정제의 제조 Example 5-1 Preparation of Tablets
4-O-메틸호노키올 10mg, 유당 20mg, 전분 20mg 및 스테아린산 마그네슘 적당량을 통상의 정제 제조방법에 따라서 50mg의 정제로 타정하여 정제를 제조하였다.Tablets were prepared by compressing 10 mg of 4-O-methylhonokiol, 20 mg of lactose, 20 mg of starch, and magnesium stearate into 50 mg of tablets according to a conventional tablet preparation method.
실시예 5-2: 캅셀제의 제조 Example 5-2 Preparation of Capsule
4-O-메틸호노키올 10mg, 유당 20mg, 전분 19mg, 탈크 1mg 및 스테아린산 마그네슘 적당량을 통상 캅셀제의 조제방법에 따라서, 50mg 용량의 캅셀에 충진하여 캅셀제를 제조하였다.10 mg of 4-O-methylhonokiol, 20 mg of lactose, 19 mg of starch, 1 mg of talc, and magnesium stearate were appropriately packed into a 50 mg capsule according to a method for preparing a capsule, thereby preparing a capsule.
실시예 5-3: 액제의 제조 Example 5-3 Preparation of Liquid
4-O-메틸호노키올 100mg, 이성화당 10g, 벌꿀 500mg, 티코틴산아마이드(약전) 20mg, 무수카페인(약전) 30mg 및 안식향산나트륨 70mg을 통상의 액제 제조방법에 따라서 제조하고, 100ml 용량의 갈색병에 충진한 다음, 밀전하여 저온 살균처리 함으로써 액제를 제조하였다.100 mg of 4-O-methylhonocyol, 10 g of isomerized sugar, 500 mg of honey, 20 mg of thycotinamide (pharmaceutical), 30 mg of anhydrous caffeine (pharmaceutical), and 70 mg of sodium benzoate were prepared according to a conventional method of preparing a liquid, and a brown bottle of 100 ml capacity. After filling in, and then tightly pasteurized to prepare a liquid.
실시예 5-4: 주사제의 제조 Example 5-4 Preparation of Injections
4-O-메틸호노키올 6mg 및 멸균정제수 적당량을 통상의 주사제 제조방법에 따라서 제조하고, 2ml의 앰플에 충진시킨 다음, 밀봉 및 멸균하여 주사제를 제조하였다.6 mg of 4-O-methylhonokiol and an appropriate amount of sterile purified water were prepared according to a conventional injection method, and filled into 2 ml of ampoules, and then sealed and sterilized to prepare an injection.
실시예 5-5: 과립제의 제조 Example 5-5 Preparation of Granules
4-O-메틸호노키올 10mg 및 유당25mg을 통상의 압출조립기로 압출시켜서 과립제를 제조하였다.A granule was prepared by extruding 10 mg of 4-O-methylhonocyol and 25 mg of lactose into a conventional extrusion granulator.
도 1은 혈소판 유래 성장인자에 의한 대동맥 평활근 세포의 이상증식에 대한, 4-O-메틸호노키올의 처리농도와 시간에 따른 세포 증식 억제효과를 나타내는 그래프이다.1 is a graph showing the treatment concentration of 4-O-methyl honokiol and the effect of inhibiting cell proliferation with time on aberrant proliferation of aortic smooth muscle cells by platelet-derived growth factors.
도 2는 혈소판 유래 성장인자가 처리된 대동맥 평활근 세포의 DNA 합성에 대한, 4-O-메틸호노키올의 처리 농도에 따른 DNA 합성 억제효과를 나타내는 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the effect of inhibiting DNA synthesis according to the treatment concentration of 4-O-methyl honokiol on the DNA synthesis of platelet-derived growth factor treated aortic smooth muscle cells.
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