KR20100056238A - Diagnostic method for american foulbood(panibacillus larvae) and primer for performing the same - Google Patents

Diagnostic method for american foulbood(panibacillus larvae) and primer for performing the same Download PDF

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Abstract

PURPOSE: A method for diagnosing American foulbood and a primer for diagnosing American foulbood for the same are provided to reduce require time and cost and to improve accuracy of infection diagnosis. CONSTITUTION: A method for diagnosing American foulbood comprises: a step of extracting a first genome DNA from Panibacillus larvae of an experimental group; a step of extracting a second genome DNA from a control group; a step of amplifying the first and second DNAs fragment using a primer containing a first and second sequences; and a step of comparing amplified DNAs and determining infection. The first sequence contains 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3 and second sequence contains 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3.

Description

미국부저병 진단방법 및 이를 수행하기 위한 미국부저병 진단용 프라이머{Diagnostic method for American Foulbood(Panibacillus larvae) and Primer for performing the same}Diagnostic method for American Foulbood (Panibacillus larvae) and Primer for performing the same}

본 발명은 미국부저병 진단방법 및 이를 수행하기 위한 미국부저병 진단용 프라이머에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 미국부저병에 감염여부를 정확하고 신속하게 진단할 수 있는 미국부저병 진단방법 및 이를 수행하기 위한 미국부저병 진단용 프라이머에 관한 것이다.The present invention relates to a method for diagnosing US buzz disease and a primer for diagnosing US buzz disease for performing the same, and more specifically, a method for diagnosing U. b. The present invention relates to a primer for diagnosing US buzz disease.

미국부저병(American Foulblood disease: AFB)은 유충에 감염되는 세균성 질병으로서 그 원인균은 페니바실러스 라바(Paenibacillus larvae)이다. 꿀벌 부저병은 세균에 의한 꿀벌의 질병 중 가장 많이 발생되고 가장 심각한 피해를 입히는 질병이기에 국내에서는 현재 법률 제6379호에 의거 제 2종 가축전염병으로 분류 관리되고 있다. 이러한 꿀벌 부저병에는 미국부저병과 유럽부저병의 2종류가 있다.American Foulblood disease (AFB) is a bacterial disease that infects larvae. The causative agent is Penaibacillus larvae. Bee buzzer is the most common and most serious disease among honey bee diseases caused by bacteria. Currently, it is classified and managed in Korea as the second type of animal infectious disease under Law No. 6379. There are two types of bee buzzers: American buzzers and European buzzers.

현재 상기 미국부저병의 진단은 유충의 육안관찰, 즉 유충의 색(고동색에서 흑색) 또는 특유의 냄새(썩은 냄새)등에 주로 의존하고 있으며, 이러한 진단방법은 중요한 질병에서 조기 치료시기를 놓치게 하고, 또한 오진에 의한 항생제 과다사용 등의 문제를 야기하고 있다.At present, the diagnosis of the American buzzer disease mainly depends on the macroscopic observation of the larvae, that is, the color of the larvae (amorous to black) or the peculiar smell (rot). It also causes problems such as overuse of antibiotics caused by misdiagnoses.

최근, 미국부저병을 진단하기 위한 페니바실러스 라바(Panibacillus larvae)의 진단방법은 면역학적 방법을 이용한 진단방법이 개발되고 있으나 이러한 방법은 상당한 시간과 비용이 요구되는 문제점이 있다.Recently, the diagnosis method of Penibacillus larvae for diagnosing US buzz disease (Danibacillus larvae) has been developed a diagnostic method using an immunological method, but this method has a problem that requires a considerable time and cost.

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 보다 신속하고 정확하게 미국부저병을 검출할 수 있는 미국부저병 진단방법을 제공하는 것이다.The problem to be solved by the present invention is to provide a US buzz diagnosis method that can detect the US buzz disease more quickly and accurately.

또한, 본 발명의 또 다른 과제는 상기 미국부저병 진단방법을 수행하는데 적합한 미국부저병 진단용 프라이머를 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention is to provide a primer for diagnosing US buzz disease suitable for performing the US buzz diagnosis method.

본 발명의 예시적인 일 실시예에 의한 미국부저병 진단방법은 실험군의 미국부저병원균으로부터 제1 게놈 DNA를 추출하는 단계, 대조군으로부터 제2 게놈 DNA를 추출하는 단계 및 제1 서열과 제2 서열을 포함하는 프라이머를 이용하여 상기 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 PCR증폭하는 단계 및 상기 PCR증폭된 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편들을 서로 비교하여, 상기 대조군이 상기 미국부저병에 감염되었는지 여부를 진단하는 단계를 포함한다. US buzz diagnosis method according to an embodiment of the present invention comprises the steps of extracting the first genomic DNA from the US Buzzer pathogen of the experimental group, the second genomic DNA extraction from the control and the first sequence and the second sequence PCR amplifying the fragments of the first and second genomic DNA using primers comprising and comparing the fragments of the PCR-amplified first and second genomic DNA with each other to determine whether the control group is infected with Diagnosing whether or not.

상기 제1 서열은 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3을 포함하고 상기 제2 서열은 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3을 포함한다.The first sequence comprises 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3 and the second sequence comprises 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3.

본 발명의 예시적인 일 실시예에 의한 미국부저병 진단용 프라이머는 실험군의 미국부저병원균 또는 대조군으로부터 추출된 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 한정하여 증폭시키기 위한 제1 및 제2 서열들을 포함한다.US buzz diagnostic primer according to an exemplary embodiment of the present invention includes first and second sequences for confining and amplifying fragments of the first and second genomic DNAs extracted from a US B. pathogen or a control group of the experimental group. .

상기 제1 서열은 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3을 포함하고 상기 제2 서열은 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3을 포함한다.The first sequence comprises 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3 and the second sequence comprises 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3.

본 발명에 의한 미국부저병 진단방법 및 이를 수행하기 위한 미국부저병 진단용 프라이머는 미국부저병 진단에 필요한 시간과 비용을 절감하고 진단의 정확성을 높일 수 있어 미국부저병으로 인한 위험부담과 경제적 손실을 줄일 수 있다.US buzz diagnosis method and US buzz diagnosis primer for performing the same according to the present invention can reduce the time and cost required for the diagnosis of US buzz disease and increase the accuracy of the diagnosis to reduce the risk and economic loss caused by the US buzz disease Can be reduced.

본 발명은 다양한 변경을 가할 수 있고 여러 가지 형태를 가질 수 있는 바, 특정 실시예들을 도면에 예시하고 본문에 상세하게 설명하고자 한다.　 그러나, 이는 본 발명을 특정한 개시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변경, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.As the inventive concept allows for various changes and numerous embodiments, particular embodiments will be illustrated in the drawings and described in detail in the text. However, this is not intended to limit the present invention to the specific disclosed form, it should be understood to include all modifications, equivalents, and substitutes included in the spirit and scope of the present invention.

제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성 요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성 요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안된다.　 상기 용어들은 하나의 구성 요소를 다른 구성 요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.　 예를 들어, 본 발명의 권리 범위를 벗어나지 않으면서 제1 구성 요소는 제2 구성 요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성 요소도 제1 구성 요소로 명명될 수 있다. The terms first, second, etc. may be used to describe various elements, but the elements should not be limited by the terms. The terms are used only for the purpose of distinguishing one component from another. For example, without departing from the scope of the present invention, the first component may be referred to as a second component, and similarly, the second component may also be referred to as a first component.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예들을 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다.　 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성 요소, 부분품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성 요소, 부분품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다. The terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments only and is not intended to be limiting of the invention. Singular expressions include plural expressions unless the context clearly indicates otherwise. In this application, the terms "comprise" or "having" are intended to indicate that there is a feature, number, step, action, component, part, or combination thereof described in the specification, and that one or more other features It should be understood that it does not exclude in advance the possibility of the presence or addition of numbers, steps, actions, components, parts or combinations thereof.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art.

일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 갖는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다. Terms such as those defined in commonly used dictionaries are to be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the relevant art and are to be interpreted as ideal or overly formal in meaning unless explicitly defined in the present application Do not.

이하, 첨부한 도면들을 참조하여, 본 발명의 일 실시예인 미국부저병 진단방법 및 이를 수행하기 위한 미국부저병 진단용 프라이머를 자세하게 설명하겠다.Hereinafter, with reference to the accompanying drawings, it will be described in detail an American buzzer diagnosis method and a primer for diagnosing a US buzzer for performing the same.

제1 단계: 실험군 미국부저병 병원균으로부터 제1 게놈 DNA를 추출하는 단계 First step: extracting the first genomic DNA from the experimental group US S. pathogen

본 단계는 상기 실험군의 미국부저병원균의 핵으로부터 유전자의 본체인 DNA를 뽑아내는 과정이다. 상기 미국부저병 병원균의 핵으로 부터 DNA를 추출하는 방법은 Qiamp tissue kit, Genomic DNA extraction kit 등 본 발명에 다양하게 적용될 수 있다.This step is to extract the DNA of the main body of the gene from the nucleus of the US B. pathogen of the experimental group. The method of extracting DNA from the nucleus of the US BP pathogen may be variously applied to the present invention, such as a Qiamp tissue kit and a genomic DNA extraction kit.

제2 단계: 대조군으로부터 제2 게놈 DNA를 추출하는 단계Step 2: Extracting the Second Genomic DNA from the Control

본 단계는 미국부저병원균에 감염되었는지 여부를 진단하고자 하는 대조군으 로부터 제2 게놈 DNA를 추출하는 단계이다. 제1 단계에서와 같이 대조군의 미생물로부터 DNA를 추출하는 방법은 Qiamp tissue kit, Genomic DNA extraction kit 등 본 발명에 다양하게 적용될 수 있다.This step is to extract the second genomic DNA from the control group to diagnose whether or not infected with the US B. pathogen. As in the first step, a method of extracting DNA from the microorganism of the control group may be variously applied to the present invention, such as a Qiamp tissue kit and a Genomic DNA extraction kit.

제3 단계: Third step: 프라이머를Primer 이용하여 제1 및 제2 게놈  Using the first and second genomes DNADNA 의 단편들을 증폭하는 단계Amplifying fragments of

DNA단편 증폭은 동일한 DNA 단편을 다수로 만드는 것이다. 여기서 복제 및 증폭하고자 하는 DNA단편을 한정하는 역활을 하는 것이 프라이머이다.　 DNA의 단편을 증폭하는 방법은 PCR(유전자증폭기술) 또는 '중합 효소 연쇄 반응법'이라고도 하며, 인위적으로 유전자를 증폭하는 방법이다.　 예컨대, DNA증폭하는 방법은 ELISA-PCR, IMMUNO-PCR, SANDWICH-PCR, NESTED-PCR 방법등 본 발명에 다양하게 적용될 수 있다. DNA fragmentation amplifies multiple DNA fragments. Here, the primer is used to define the DNA fragment to be replicated and amplified. The method of amplifying a fragment of DNA is also called PCR (gene amplification technology) or 'polymerase chain reaction method', and is an artificial amplification method. For example, the DNA amplification method can be variously applied to the present invention, such as ELISA-PCR, IMMUNO-PCR, SANDWICH-PCR, NESTED-PCR method.

DNA증폭은 프라이머 부분이 출발점이 되어 DNA가 복제되기 때문에 미국부저병 진단을 수행하기 위해서는 진단용 프라이머가 필요하다.　 따라서 미국부저병 진단을 수행하기 위한 진단용 프라이머의 개발과정을 설명하고 구체적인 DNA증폭하는 방법을 설명한다. DNA amplification requires a primer for diagnosis in order to carry out a diagnosis of US buzz since DNA is duplicated as a primer. Therefore, it describes the development process of diagnostic primers for performing the diagnosis of US buzz and describes a specific DNA amplification method.

도 1은 본 발명의 실시예에 의한 꿀벌의 유충이 미국부저병에 감염여부를 진단하는 제1 서열, 제2 서열을 갖는 프라이머의 위치를 나타내는 모식도이다.1 is a schematic diagram showing the position of a primer having a first sequence, a second sequence for diagnosing whether or not the bee larvae infected with US buzz disease according to an embodiment of the present invention.

도 1을 참조하면, 미국부저병원균의 라이보조멀 RNA(ribosomal RNA) 유전자로부터 1140bp 크기의 유전자 단편을 증폭할 것으로 예상되는 제1 서열 (5'- ACCGGGATAACTTGCGG-3') (PalR3: 17mer)와 제2 서열(5'-AATTCCGACTTCATGCAG-3') (PalR4: 18mer) 프라이머는 GenBank 등록된 (등록번호: AY530294) 16S ribosomal RNA 유전자의 서열정보를 blastn 프로그램을 통해 상기 프라이머를 제작할 수 있다.Referring to Figure 1, the first sequence (5'- ACCGGGATAACTTGCGG-3 ') (PalR3: 17mer) expected to amplify a 1140bp gene fragment from the ribosomal RNA gene of the US B. pathogen 2 sequence (5'-AATTCCGACTTCATGCAG-3 ') (PalR4: 18mer) primers can be prepared by the blastn program sequence information of GenBank registered (Registration No .: AY530294) 16S ribosomal RNA gene.

한편, DNA증폭하는 방법은 ELISA-PCR, IMMUNO-PCR, SANDWICH-PCR, NESTED-PCR 방법등이 있으며, 본 발명에 다양하게 적용될 수 있다. On the other hand, DNA amplification methods include ELISA-PCR, IMMUNO-PCR, SANDWICH-PCR, NESTED-PCR method, etc., can be variously applied to the present invention.

예컨대, PCR 반응조건은 주형이 되는 상기 제1 및 제2 게놈 DNA를 1본쇄로 변성시키기 위하여 95℃에서 5분간 열처리한 후, 95℃에서 30초간 상기 제1 및 제2 게놈 DNA를 변성시키는 단계(denaturation), 50℃에서 30초간 상기 제1 및 제2 서열을 갖는 프라이머와 접촉시키는 단계(annealing), 72℃에서 1분간 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 합성하는 단계(extension)의 3단계를 반응주기로 35회 반복하여 PCR증폭을 실시할 수 있다. For example, the PCR reaction conditions may be performed by heat-treating at 95 ° C. for 5 minutes to denature the first and second genomic DNAs as templates, and then denature the first and second genomic DNAs at 95 ° C. for 30 seconds. denaturation, annealing with primers having the first and second sequences at 50 ° C. for 30 seconds, and synthesizing fragments of the first and second genomic DNA for 1 minute at 72 ° C. The steps can be repeated 35 times in the reaction cycle to perform PCR amplification.

마지막으로 72℃에서 10분간 반응시켜 PCR반응을 종료하면 상기 프라이머에 특이 반응하는 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 다수 얻을 수 있다.Finally, when the PCR reaction is terminated by reacting at 72 ° C. for 10 minutes, a large number of fragments of the first and second genomic DNAs specific to the primers can be obtained.

다만, 상기 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 증폭하는 단계는 상기와 같이 서로 동시에 수행할 수 있으며 또한 상기 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 증폭하는 단계는 서로 분리하여 수행할 수 있다.However, amplifying the fragments of the first and second genomic DNA may be performed simultaneously with each other as described above, and amplifying the fragments of the first and second genomic DNA may be performed separately from each other.

제4 단계: 증폭된 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편들을 비교하여 감염여부 진단하는 단계Fourth step: comparing the fragments of the amplified first and second genomic DNA to diagnose the infection

도 2는 도1 의 프라이머를 이용하여 제1 및 제2 게놈의 단편을 증폭한 후의 전기 영동 사진이다.FIG. 2 is an electrophoretic photograph after amplifying fragments of the first and second genomes using the primer of FIG. 1.

도 2를 참조하면, 본 발명의 실시예에 의한 상기 제1 서열과 제2 서열을 갖는 프라이머가 꿀벌의 미국부저병을 진단하는데 효과적으로 적용될 수 있는지의 여부를 PCR 기법을 이용하여 확인할 수 있다. Referring to Figure 2, it can be confirmed using a PCR technique whether the primer having the first sequence and the second sequence according to an embodiment of the present invention can be effectively applied for diagnosing American buzz disease of honey bees.

예컨대, 3종의 미국부저병원균 〔Paenibacillus larvae KCTC3744 (시료번호 1), Paenibacillus larvae KCTC 3563 (시료번호 2), Paenibacillus larvae KCTC 3310 (시료번호 3)〕및 6종의 꿀벌 병원균　 〔Melissococcus pluton ATTC 35311 (시료번호 4), Melissococcus pluton (시료번호 5),　 Nosema apis (시료번호 6), Nosema cerana (시료번호 7), Ascophaera apis (시료번호 8), Aspergillus sp. (시료번호 9)〕로부터 DNA를 분리한 다음 상기 프라이머를 사용하여 PCR 증폭실험을 수행한다. For example, three US B. pathogens ( Paenibacillus larvae KCTC3744 (Sample No. 1), Paenibacillus larvae KCTC 3563 (Sample No. 2), Paenibacillus larvae KCTC 3310 (Sample No. 3)] and six bee pathogens ( Melissococcus pluton ATTC 35311 (Sample No. 4), Melissococcus pluton (Sample No. 5), Nosema apis (Sample No. 6), Nosema apis ) cerana (sample no. 7), Ascophaera apis (sample no. 8), Aspergillus sp. (Sample No. 9)] and then DNA amplification experiment using the primers.

상기 프라이머를 사용하여 PCR를 수행 후, 전기영동한 결과 다른 꿀벌 병원균에서는 반응산물이 생성되지 않았으나 3종의 미국부저병원균에서는 예상했던 대로 1140bp 길이의 반응산물이 생성되었다.After PCR using the primers, electrophoresis did not produce a reaction product in other bee pathogens, but produced a reaction product having a length of 1140 bp as expected in three US B. germs.

본 발명에 의한 미국부저병 진단방법 및 이를 수행하기 위한 미국부저병 진단용 프라이머는 유충감염 진단에 필요한 시간과 비용을 절감하고 진단의 정확성을 높일 수 있어 미국부저병으로 인한 위험부담과 경제적 손실을 줄일 수 있다.US buzz diagnosis method and the US buzz diagnosis primer for performing the same according to the present invention can reduce the time and cost required for the diagnosis of larvae infection and increase the accuracy of the diagnosis to reduce the risk and economic loss caused by the US buzz disease Can be.

더하여 미국부저병원균의 감염경로를 추적하거나, 사양액, 및 화분등에 미국부저병원균 감염여부를 진단하는데 매우 유용하게 이용할 수 있으므로 미국부저병 을 예방하고 방제하는데 기여할 수 있다. 또한 현미경을 이용한 진단 방법보다 1,000배 이상 검출 감도가 높기 때문에 수입농산물에 대한 정밀진단이 가능하여 향후 수출입 농산물에 대한 오염여부 확인에도 활용이 가능하다.In addition, it can be very useful for tracking the path of infection of US BP, or for diagnosing the US BP infection in feeding fluids and pollen, thus contributing to the prevention and control of US BP. In addition, since the detection sensitivity is more than 1,000 times higher than that of a diagnostic method using a microscope, it is possible to accurately diagnose imported agricultural products and to use it to check whether there is contamination on imported and imported agricultural products in the future.

앞서 설명한 본 발명의 상세한 설명에서는 본 발명의 바람직한 실시예들을 참조하여 설명하였지만, 해당 기술분야의 숙련된 당업자 또는 해당 기술분야에 통상의 지식을 갖는 자라면 후술될 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 기술 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있을 것이다.　 따라서, 전술한 설명 및 아래의 도면은 본 발명의 기술사상을 한정하는 것이 아닌 본 발명을 예시하는 것으로 해석되어져야 한다. While the present invention has been described in connection with what is presently considered to be practical and exemplary embodiments, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed embodiments, but, on the contrary, It will be apparent to those skilled in the art that various modifications and variations can be made in the present invention without departing from the spirit and scope of the invention. Therefore, the above description and the drawings below should be construed as illustrating the present invention, not limiting the technical spirit of the present invention.

도 1은 본 발명의 실시예에 의한 꿀벌의 미국부저병원균을 진단하는 제1 서열 및 제2 서열을 포함하는 프라이머의 위치를 나타내는 모식도이다.1 is a schematic diagram showing the position of a primer comprising a first sequence and a second sequence for diagnosing US B. pathogen of honey bees according to an embodiment of the present invention.

도2 는 도1 의 프라이머를 이용하여 제1 및 제2 게놈의 단편을 증폭한 후의 전기 영동 사진이다.FIG. 2 is an electrophoretic photograph after amplifying fragments of the first and second genomes using the primers of FIG. 1.

Claims (4)

실험군의 미국부저병원균으로부터 제1 게놈 DNA를 추출하는 단계;Extracting a first genomic DNA from the US B. pathogen of the experimental group; 대조군으로부터 제2 게놈 DNA를 추출하는 단계;Extracting a second genomic DNA from the control; 제1 서열과 제2 서열을 포함하는 프라이머를 이용하여 상기 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편을 PCR(polymerase chain reaction)증폭하는 단계; 및Polymerase chain reaction (PCR) amplification of fragments of the first and second genomic DNAs using primers comprising a first sequence and a second sequence; And 상기 PCR증폭된 제1 및 제2 게놈 DNA의 단편들을 서로 비교하여, 상기 대조군이 상기 미국부저병원균에 감염되었는지 여부를 진단하는 단계를 포함하는 미국부저병 진단방법.Comparing the PCR-amplified fragments of the first and second genomic DNAs with each other, and diagnosing whether the control group is infected with the US B. pathogen. 제1항에 있어서, The method of claim 1, 상기 제1 서열은 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3을 포함하고Said first sequence comprises 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3 상기 제2 서열은 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3을 포함하는 것을 특징으로 하는 미국부저병 진단용 프라이머Said second sequence is a primer for diagnosing US BP, characterized in that it comprises 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3 실험군의 미국부저병원균 또는 대조군으로부터 추출된 게놈 DNA의 단편을 한정하여 증폭시키기 위한 제1 및 제2 서열들을 포함하는 미국부저병 진단용 프라이머.Primer for diagnosing U.S. disease, comprising first and second sequences for defining and amplifying fragments of genomic DNA extracted from the U.S. bacteriobacteria or control group of the experimental group. 제3항에 있어서, The method of claim 3, 상기 제1 서열은 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3을 포함하고Said first sequence comprises 5'-ACCGGGATAACTTGCGG'-3 상기 제2 서열은 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3을 포함하는 것을 특징으로 하는 미국부저병 진단용 프라이머.Said second sequence is a US primer for diagnosing the disease, characterized in that 5'-AATTCCGACTTCATGCAG'-3.
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