KR20090123838A - Composition of mixed microorganism growing in super highly acidic condition - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 초산성 유산균 및 초산성 효모를 함유하는 미생물제제에 관한 것으로, 초산성에서 생장이 가능하여 강한 위산에 의해 사멸되지 않고 장내에 도달이 가능하여, 장내에서 살면서 발효를 통해 그의 고유 소화 효소, 고유 유기산 및 고유 박테리오신으로 구성된 천연 "칵테일"의 조성물을 제공하여 동물의 생장을 촉진할 수 있는 혼합 미생물제제에 관한 것이다. The present invention relates to a microbial preparation containing acetic acid lactic acid bacteria and acetic acid yeast, which is capable of growing in acetic acid and is not killed by strong gastric acid and can be reached in the intestine. It provides a composition of natural "cocktail" consisting of, intrinsic organic acid and intrinsic bacteriocin, to a mixed microbial agent that can promote the growth of the animal.
돼지 뿐만 아니라 닭, 가금 및 새우와 같은 동물의 위 및 장 내에서의 병원성 세균 감염은 농부들뿐만 아니라 소비자에게도 커다란 문제 거리이다. 농부가 사육지에서 매우 엄격한 위생 기준을 지킨다 하더라도, 이러한 감염을 방지하는 것이 매우 어렵다. 젖을 뗀 새끼 돼지의 심한 설사증 발병은 장 내 천연 대장균과 젖산의 관계에 있어서의 면역학적 인자에 따라 좌우된다. 감염에 대항하기 위해 항생물질을 자주 사용하는 것은 생물농축 현상에 의해 상기 가축들을 식용으로 이용하는 인간에게 농축된 항생물질의 공급을 가져오고, 지속적인 항생제의 노출은 항생제 저항성 균주의 생존을 도와서 항생제 내성 균주가 발생되는 큰 문제가 된다. 이러 한 몇몇의 세균이 다수의 항생물질에 대해 내성을 갖게 되어, 그 결과 항생물질로 처치할지라도 동물이 죽게 된다. 일단 병원성 세균으로 인해 장내 균총의 불균형이 야기되면, 음식물의 소화능이 감소하므로 정상적인 방식으로는 동물의 체중을 늘일 수가 없다. 이러한 명백한 사육자의 경제적인 손실 외에도, 고기의 질이 저하되는 경우가 허다하고, 이 고기의 소비자가 감염될 수 있다는 위험도 존재한다. 세균 감염에 매우 민감한 일군의 동물들은 새끼 돼지로, 암퇘지로부터 빈번하게 감염되게 된다. 새끼 돼지들을 젖 뗄 무렵 암퇘지로부터 격리하여 고형 사료를 먹이기 시작하면, 이들은 장에서 심각한 문제를 보이게 된다. 이 문제는 새끼 돼지들이 죽을 정도로 심한 경우가 흔하다. 또한, 이러한 감염은, 몇몇 새끼 돼지들이 죽는 것뿐만 아니라 감염된 동물들의 사육 기간이 과도하게 길어지므로, 농부들에게 커다란 경제적인 문제를 야기하게 된다. 조류에 있어서 살모넬라 및 캄필로박터 감염은 매우 흔하며, 농부들에게 지대한 경제적인 손실을 야기하고 닭의 소비자에게 중증 감염 내지 치명적인 감염을 야기한다. 닭의 사육에 있어서 살모넬라 감염은 살모넬라 세균이 모든 종류의 항생물질에 대해 고도의 내성을 나타내게 됨에 따라, 전세계에 걸쳐 구제불능의 상태로 진전하고 있다.Pathogenic bacterial infections in the stomach and intestines of animals such as chicken, poultry and shrimp, as well as pigs, are a major problem for consumers as well as farmers. Even if farmers adhere to very strict hygiene standards in their homes, it is very difficult to prevent these infections. The onset of severe diarrhea in suckling piglets depends on the immunological factors in the relationship between natural E. coli and lactic acid in the intestine. Frequent use of antibiotics to fight infection results in a supply of concentrated antibiotics to humans using the livestock for food by bioaccumulation, and continued exposure of antibiotics aids the survival of antibiotic resistant strains. This is a big problem that occurs. Some of these bacteria become resistant to many antibiotics, resulting in the death of animals even if treated with antibiotics. Once pathogenic bacteria cause intestinal flora to be imbalanced, food digestibility is reduced, so normal animal weight gain cannot be achieved. In addition to the obvious economic loss of these breeders, there are many cases where the quality of meat is degraded, and there is a risk that consumers of this meat may be infected. A group of animals that are very susceptible to bacterial infection are piglets, which frequently get infected from sows. When piglets are isolated from sows by weaning and begin to feed solids, they present a serious problem in their intestines. This problem is often severe enough for piglets to die. In addition, these infections cause large economic problems for farmers, as well as the death of several piglets as well as the excessively long breeding period of infected animals. Salmonella and campylobacter infections in birds are very common, causing significant economic losses for farmers and severe or fatal infections for chicken consumers. Salmonella infections in chicken rearing are developing around the world in an incurable state as Salmonella bacteria become highly resistant to all kinds of antibiotics.
이론적으로 상기 문제들을 해결하는 가장 좋은 방법은 아마도, 병원성 세균이 점액질 막 표면으로 부착되는 것을 막는 방법을 찾거나, 또는 세균총의 불균형으로 이미 고통을 받고 있는 동물들에 대해서는, 정상 세균총을 회복시키는 방법을 찾아내는 것이다. Theoretically, the best way to solve these problems is perhaps to find a way to prevent pathogenic bacteria from adhering to the mucous membrane surface, or, for animals already suffering from imbalance of the bacterial flora, to restore normal flora. To find out.
락토바실러스 속(Lactobacillus sp.) 미생물은 동형 또는 이형발효를 하는 젖산간균으로 사람을 포함한 동물의 장관 및 유제품이나 채소의 발효과정에서 흔히 볼 수 있다. 락토바실러스 속 미생물은 장내 pH를 산성으로 유지시켜 대장균(E. coli)이나 클로스트리디움(Clostridium)과 같은 유해균의 번식을 억제하고 설사와 변비를 개선할 뿐만 아니라 면역기능, 비타민 합성, 항암작용, 혈청콜레스테롤 저하 등의 역할을 한다. 젖산 간균에 의해 생산되는 아시도필린(acidophillin)은 이질균, 살모넬라균, 포도상구균, 대장균등의 성장을 저해한다고 알려져 있다. 또한, 설사 원인균의 증식을 억제하고 장내 균총을 정상화함으로 설사를 멈추게 하는 작용을 한다. Lactobacillus sp. Microorganisms are lactic acid bacilli that are homozygous or heterozygous and are commonly found in the intestines of animals including humans and in the fermentation of dairy products or vegetables. Microorganisms of the genus Lactobacillus maintain the acidity of the intestinal pH to inhibit the reproduction of harmful bacteria such as E. coli and Clostridium , improve diarrhea and constipation, as well as improve immune function, vitamin synthesis, anticancer activity, Serum cholesterol lowers. Acidophillin produced by lactic acid bacilli is known to inhibit the growth of dysentery, Salmonella, Staphylococcus and Escherichia coli. It also acts to stop diarrhea by inhibiting the growth of diarrhea causative bacteria and normalizing the intestinal flora.
가축의 세균성 설사병은 증체율 감소와 폐사를 유발한다. 따라서, 이를 예방하여 가축의 생산성을 높이고자, 사료에 항생물질을 첨가하는 것이 일반적으로 널리 행해져 왔다. 그러나 항생물질에 대한 내성균의 출현과 축산물 내 잔류 항생물질 등의 문제 때문에 사료 내 항생물질의 사용을 규제하는 방향으로 정책이 추진되고 있으며 유기적인 가축 사육법이 강조되고 있다. 현재 항생물질 사용의 대체방법으로는 생균제(Probiotics)의 사용이 적극 권장되고 있다. 최근에 락토바실러스 속 미생물의 상기와 같은 특성을 이용하여 생균제 및 가축사료로 개발하고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다. Bacterial diarrhea in livestock causes reduced weight gain and mortality. Therefore, in order to prevent this and increase the productivity of livestock, the addition of antibiotics to the feed has generally been widely practiced. However, because of the emergence of resistant bacteria against antibiotics and the remaining antibiotics in livestock products, policies are being pushed towards regulating the use of antibiotics in feeds, and the organic livestock breeding law is emphasized. Currently, the use of probiotics is highly recommended as an alternative to antibiotic use. Recently, researches to develop probiotics and livestock feeds have been actively conducted using the above characteristics of Lactobacillus microorganisms.
유럽특허 제0861905호에는 신규한 락토바실러스 속 균주 및 이를 포함하는 위장질환의 치료를 위한 약학적 조성물 및 유제품이 개시된 바 있으며, 국제특허 제99/29833호에는 식품에 적용될 수 있는 생균제 및 천연약제로서 유용한 균주인 락토바실러스 파라카제이가 개시된 바 있다.European Patent No. 0861905 discloses a novel Lactobacillus strain and pharmaceutical compositions and dairy products for the treatment of gastrointestinal diseases including the same, and International Patent No. 99/29833 describes probiotics and natural medicines applicable to foods. A useful strain, Lactobacillus paracasei, has been disclosed.
대한민국특허공개 제1998-78353호에는 유해미생물 억제 활성을 갖는 신규 내산성 락토바실러스 속 미생물 및 이를 함유하는 가축용 생균 활성제가 개시된 바 있다. Korean Patent Publication No. 1998-78353 discloses a novel acid-resistant Lactobacillus genus microorganism having harmful microbial inhibitory activity and a probiotic active agent for livestock containing the same.
대한민국특허출원 제10-2001-0085666호는 김치의 발효액으로부터 분리 동정된 신규한 락토바실러스 속 미생물인 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 및 이의 생균제, 사료제, 소취제 및 식품 첨가물로서의 용도를 개시하고 있다.Korean Patent Application No. 10-2001-0085666 discloses Lactobacillus paracasei , a novel Lactobacillus microorganism isolated from fermentation broth of Kimchi and its use as a probiotic, feed, deodorant and food additive. have.
우가르트(Ugarte MB) 등은 2006년 식품 단백질 잡지(J. Food Prot.) 69권 2983-91페이지에서 아르헨티나 치즈로부터 락토바실러스 퍼로런스(Lactobacillus perolens), 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei), 락토박실러스 플란타룸(Lactobacillus plantatum), 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus, 락토바실러스 쿠바투스(Lactobacillus qubatus) 및 락토바실러스 퍼멘툼(Lactobacillus permentum)을 분리하였고, 모든 종들이 25ppm의 리소자임에 저항성이 있었으며, 0.3% 담즙산에 저항성이 있었으며, pH 2.0의 위산용액에서도 3.2 내지 7의 로그(log) 단위가 감소하며, 병원성 세균에 항균작용을 보인다고 보고하였다.Wu Stuttgart (Ugarte MB), etc. in food proteins magazines (J. Food Prot.) Cheese from Argentina in 2983-91 Page 69 Lactobacillus a buffer Lawrence (Lactobacillus perolens), Lactobacillus casei (Lactobacillus 2006 casei ), Lactobacillus plantatum ), Lactobacillus rhamnosus , Lactobacillus qubatus ) and Lactobacillus permentum were isolated, and all species were resistant to 25 ppm lysozyme, 0.3% bile acid, and 3.2 to 7 log units in pH 2.0 gastric acid solution. It has been reported to have antimicrobial activity against pathogenic bacteria.
덱케라 브루셀렌시스 효모를 이용한 발명으로서는 일본 특허공보 3084348호(1995.06.2 출원)에서는 단시간에 위생적으로 홍차 키노코 음료를 공업적으로 생 산하는 방법에 관한 것으로 아세토박터 파스테우리아누스(Acetobacter pasteurianus) 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti), 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomycesce cerevisiae), 브렛타노마이세스 브루셀렌시스(Brettanomyces bruxellensis), 및 자이고사카로마세스 바일이(Zygosaccharomycesce bailii)로 부터 선택된 1종 또는 2종 이상을 선택하는 것을 특징으로 하는 홍차 버섯 음료 생산균 및 홍차버섯 음료의 생산방법이 기재되어 있다.Japanese Patent Publication No. 3084348 (filed on January 1, 1999) discloses a method for industrially producing black tea kinoko beverages in a short period of time. Acetobacter pasteurianus Acetobacter aceti ), Saccharomycesce cerevisiae ), Brettanomyces bruxellensis , and Zygosaccharomycesce bailii selected from one or two or more selected from black tea mushroom beverage production bacteria and black tea mushrooms A method for producing a beverage is described.
미국특허공보 5512465호(출원일 1994.05.23일 출원)에서는 광학적으로 활성의 1.3-부탄에디올을 생산하는 방법으로서 덱케라 브루셀렌시스(Dekkera bruxellensis)를 사용한 바 있다.U.S. Patent Publication No. 5512465 filed May 23, 1994 filed Dekkera bruxellensis as a method for producing optically active 1.3-butanediol.
2006년 콘테르노(L. Conterno) 등은 브렛타로마세스 브루셀렌시스( Brettanomyces bruxellensis ) 균주의 유전적 및 생리적 특징에 대해서 미국 포도주 및 포도재배방법 잡지(Am. J. Enol. Vitic 57(2):139-147)에서 발표하면서 비. 브루셀렌시스(B. bruxellensis) 의 47 균주 모두가 10% 알코올 농도에 내성이 있었으며, 균주 모두가 pH 2.5(이들중 94%는 pH 2.0에서 생존가능)에서 생장이 가능했고, 균주의 1/3는 10℃에서 성장이 가능했고, 다른 1/3은 37℃에서 생존할 수 있었다고 보고하였다.2006 Renault Conte (L. Conterno) such other Rome Brett Brewer selenium access system (Brettanomyces bruxellensis) genetic and physiological characteristics. US wine and grape growing methods magazines (Am. J. Enol Vitic about 57 strains (2) Rain, while presenting in 139-147. All 47 strains of B. bruxellensis were resistant to 10% alcohol concentrations, and all strains were able to grow at pH 2.5 (94% of them viable at pH 2.0), one third of the strains. Reported that they were able to grow at 10 ° C and the other 1/3 survived at 37 ° C.
또한, PCT/SE1997/00252호(1997.2.14일 출원)에서는 페디오코커스 펜토사세우스, 페디오코커스 아시딜락티시, 피키아 패리노사, 덱케라 브루셀렌시스, 바실러스, 스트렙토코커스, 스타필로코커스의 미생물 중 3 종 이상을 포함하는 비반추 동물 사료 첨가제에 대한 보고가 있었다. 상기 문헌에서는 상기 미생물이 위산에 내 성을 보이고, 인간에 무독하며, 살균효과 및 면역성 향상 효과를 보인다고 하였다.In addition, PCT / SE1997 / 00252 filed Feb. 4, 1997, Pediococcus pentosaceus, Pediococcus acidylactici, Pichia parinosa, Deckera brucellensis, Bacillus, Streptococcus, Staphylo There have been reports of non-ruminant feed additives comprising three or more of the microorganisms of the Caucasus. In the literature, the microorganisms are resistant to gastric acid, are toxic to humans, and have a bactericidal effect and an immunity improving effect.
그러나 덱케라 브루셀렌시스와 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 페론런스의 혼합물이 항균효과, 동물 생장 촉진 효과, 악취제거효과가 있다는 보고는 없었다. 본 발명자는 초저산성에서 생장이 가능한 덱케라 브루셀렌시스와 초저산성에서 생장 가능한 유산균의 혼합물이 항균효과, 동물생장촉진 및 악취제거 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.However, there have been no reports on the antimicrobial, animal growth, and odor removal effects of a mixture of Deckera brucellensis, Lactobacillus casei, and Lactobacillus peronance. The present inventors have confirmed that the mixture of Dec. Brusselenssis that can grow at ultra low acidity and lactic acid bacteria that can grow at ultra low acid has an antibacterial effect, promotes animal growth, and removes odor, and has completed the present invention.
본 발명은 항균효과, 동물 생장 촉진 효과, 악취제거효과가 있는 덱케라 브루셀렌시스와 락토바실러스 카제이, 락토바실러스 페론런스을 포함하는 미생물제제를 제공하는 것을 목적으로 한다. It is an object of the present invention to provide a microbial preparation comprising Deckera brucellenssis and Lactobacillus casei, Lactobacillus peronence, which has an antibacterial effect, an animal growth promoting effect, and an odor removing effect.
락토바실러스 카제이 WS-1(KCCM10896P), 락토바실러스 카제이 W-1(KCCM10897P), 락토바실러스 페로런스 W-3(KCCM10898P), 락토바실러스 카제이 W-4(KCCM10899P) 및 락토바실러스 카제이 W-6(KCCM10900P) 및 데케라 브루셀렌시스 WY-1 (KCCM10901P)로 이루어진 미생물제제를 제공한다.Lactobacillus casei WS-1 (KCCM10896P), Lactobacillus casei W-1 (KCCM10897P), Lactobacillus ferrence W-3 (KCCM10898P), Lactobacillus casei W-4 (KCCM10899P) and Lactobacillus casei W- 6 (KCCM10900P) and Decera Brucelensis WY-1 (KCCM10901P) are provided.
본 발명은 초산성 생장 혼합 미생물 조성물은 유산균 및 효모로 이루어져 있으며 초산성 조건에서 생장이 가능하다. 본 발명에 따른 미생물을 사료로 첨가하였을 때 위산에 의해 사멸되지 않고 장내까지 잘 도착하며, 장내 세균에 항균효과가 있어 병원성 미생물로부터 동물의 감염을 막아 동물의 생장을 촉진한다. 또한 상기 혼합미생물은 음식물 쓰레기 또는 가축 분뇨 등에서 나오는 냄새를 효과적으로 제거한다. 따라서 동물사료에 첨가되는 항생제를 대체할 수 있어 인류의 건강에 기여할 수 있으며, 악취 제거 등에 효과적이어서 인간 생활 환경 개선에 효과적으로 사용될 수 있다.The present invention acetic acid growth mixed microbial composition is composed of lactic acid bacteria and yeast and can be grown under acetic acid conditions. When the microorganism according to the present invention is added to the feed, it is not killed by gastric acid and arrives well in the intestine. In addition, the mixed microorganism effectively removes odor from food waste or livestock manure. Therefore, it is possible to replace antibiotics added to animal feed and contribute to human health, and effective in removing odors, and thus can be effectively used to improve the human living environment.
본 발명은 락토바실러스 카제이 WS-1(KCCM10896P), 락토바실러스 카제이 W-1(KCCM10897P), 락토바실러스 페로런스 W-3(KCCM10898P), 락토바실러스 카제이 W-4(KCCM10899P) 및 락토바실러스 카제이 W-6(KCCM10900P) 및 데케라 브루셀렌시스 WY-1 (KCCM10901P)을 포함하는 것을 특징으로 하는 항균제 미생물 조성물을 제공한다. 상기 미생물 조성물에는 박테리오신 및 유기산 등과 같은 부가적인 물질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 유기산은 젖산, 수산, 초성포도산, 호박산, 주석산, 말레익산, 사과산 및 구연산으로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 조합을 포함할 수 있다.The present invention is Lactobacillus casei WS-1 (KCCM10896P), Lactobacillus casei W-1 (KCCM10897P), Lactobacillus ferrence W-3 (KCCM10898P), Lactobacillus casei W-4 (KCCM10899P) and Lactobacillus ka It provides an antimicrobial microbial composition comprising J-W-6 (KCCM10900P) and Decera Brucelensis WY-1 (KCCM10901P). The microbial composition may further include additional materials such as bacteriocin and organic acids. The organic acid may include one or more combinations selected from the group consisting of lactic acid, fish acid, vinegar acid, succinic acid, tartaric acid, maleic acid, malic acid and citric acid.
한편, 본 발명에 따른 항균제 조성물에는 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 산제 및 과립제로 제형화될 수 있다. 예컨대 경구용 액제의 경우는 약제학적으로 허용 가능한 담체로서 증류수, 올레인산 에칠, 에탄올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등; 항산화제로서 아스코르빈산, 아황산수소나트륨, 피로아황산나트륨, 토코페롤 등; 보존제로서 질산페닐수은, 치메로살, 염화벤잘코늄, 페놀, 크레솔, 파라옥시안식향산메칠, 벤질알코올 등을 이용하여 제조된다. 동물용 산제 및 과립제는 통상적으로 사용되는 비타민류, 글루코스, 락토스 등의 당류, 전분, 말분, 질석 또는 각종 분말 및 액상효소를 사용량 범위로 함유시켜 제조된다.On the other hand, the antimicrobial composition according to the present invention can be formulated into powders and granules according to methods that can be easily carried out by those skilled in the art. For example, in the case of an oral solution, pharmaceutically acceptable carriers include distilled water, oleic acid ethyl, ethanol, propylene glycol, glycerin, and the like; Ascorbic acid, sodium hydrogen sulfite, sodium pyrosulfite, tocopherol, etc .; Phenyl mercury nitrate is prepared using chimerosal, benzalkonium chloride, phenol, cresol, paraoxybenzoic acid methyl, benzyl alcohol, and the like as a preservative. Animal powders and granules are prepared by containing commonly used sugars such as vitamins, glucose, lactose, starch, powder, vermiculite or various powders and liquid enzymes in the range of usage.
또한, 본 발명에 따른 복합항균제의 투여는 액제는 직접 경구 또는 음수에 혼합하여 투여하고 산제 및 과립제는 음수 및 사료에 혼합하여 투여한다.In addition, the administration of the complex antimicrobial agent according to the present invention is directly administered orally or mixed with negative water, and the powder and granules are administered mixed with negative and feed.
본 발명의 제 2 태양은 락토바실러스 카제이 WS-1(KCCM10896P), 락토바실러스 카제이 W-1(KCCM10897P), 락토바실러스 페로런스 W-3(KCCM10898P), 락토바실러스 카제이 W-4(KCCM10899P) 및 락토바실러스 카제이 W-6(KCCM10900P) 및 데케라 브루셀렌시스 WY-1(KCCM10901P)을 포함하는 것을 특징으로 하는 동물 사료용 미생물 조성물을 제공한다. 이에 제한되는 것은 아니나, 바람직하게는 상기 동물은 돼지 또는 닭이다.The second aspect of the present invention is Lactobacillus casei WS-1 (KCCM10896P), Lactobacillus casei W-1 (KCCM10897P), Lactobacillus ferrence W-3 (KCCM10898P), Lactobacillus casei W-4 (KCCM10899P) And Lactobacillus casei W-6 (KCCM10900P) and Decera Brucelensis WY-1 (KCCM10901P) provides a microbial composition for animal feed comprising a. Although not limited thereto, preferably the animal is a pig or a chicken.
상기 미생물 조성물에는 박테리오신 및 유기산등과 같은 부가적인 물질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 유기산은 젖산, 수산, 초성포도산, 호박산, 주석산, 말레익산, 사과산 및 구연산으로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 조합을 포함할 수 있다.The microbial composition may further include additional materials such as bacteriocin and organic acids. The organic acid may include one or more combinations selected from the group consisting of lactic acid, fish acid, vinegar acid, succinic acid, tartaric acid, maleic acid, malic acid and citric acid.
상기 사료로는 옥수수, 소맥, 밀, 대두밀, 콩, 쌀, 등의 어느 하나 또는 이들의 혼합물을 분쇄하여 얻어지는 분쇄물과, 이들을 가공하는 과정에서 얻어지는 쌀겨, 밀겨, 보리겨와 같은 가공 부산물이 사용될 수 있다.The feed includes a pulverized product obtained by pulverizing any one or a mixture of corn, wheat, wheat, soybean wheat, soybean, rice, and the like, and processed by-products such as rice bran, wheat bran, and barley bran obtained during the processing thereof. Can be used.
본 발명의 제 3의 태양은 락토바실러스 카제이 WS-1(KCCM10896P), 락토바실러스 카제이 W-1(KCCM10897P), 락토바실러스 페로런스 W-3(KCCM10898P), 락토바실러스 카제이 W-4(KCCM10899P) 및 락토바실러스 카제이 W-6(KCCM10900P) 및 데케라 브루셀렌시스 WY-1(KCCM10901P)을 포함하는 것을 특징으로 하는 식품 미생물 조성물을 제공한다.The third aspect of the present invention is Lactobacillus casei WS-1 (KCCM10896P), Lactobacillus casei W-1 (KCCM10897P), Lactobacillus ferrence W-3 (KCCM10898P), Lactobacillus casei W-4 (KCCM10899P ) And Lactobacillus casei W-6 (KCCM10900P) and Decera Brucelensis WY-1 (KCCM10901P).
상기 미생물 조성물에는 박테리오신 및 유기산등과 같은 부가적인 물질을 추 가로 포함할 수 있다. 상기 유기산은 젖산, 수산, 초성포도산, 호박산, 주석산, 말레익산, 사과산 및 구연산으로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 조합을 포함할 수 있다. The microbial composition may further include additional substances such as bacteriocin and organic acids. The organic acid may include one or more combinations selected from the group consisting of lactic acid, fish acid, vinegar acid, succinic acid, tartaric acid, maleic acid, malic acid and citric acid.
본 발명의 식품 조성물은 통상적인 방법에 따라 분말, 캅셀, 환, 정제 및 드링크제 등의 섭취하기에 간편한 형태로 제형화될 수 있다.The food composition of the present invention may be formulated in a convenient form for ingestion of powders, capsules, pills, tablets and drinks according to conventional methods.
상기 조성물들은 또한 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 식품용 개발을 위하여 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 육류, 음료수, 초코렛, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올음료류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.The compositions can also be added to food or beverages. Foods that can be added for food development include, for example, various foods, meats, drinks, chocolates, snacks, sweets, pizzas, ramen noodles, other noodles, gums, ice creams, alcoholic beverages, vitamin complexes, and health supplements. Etc.
본 발명의 제 4 태양은 락토바실러스 카제이 WS-1(KCCM10896P), 락토바실러스 카제이 W-1(KCCM10897P), 락토바실러스 페로런스 W-3(KCCM10898P), 락토바실러스 카제이 W-4(KCCM10899P) 및 락토바실러스 카제이 W-6(KCCM10900P) 및 데케라 브루셀렌시스 WY-1(KCCM10901P)을 포함하는 것을 특징으로 하는 소취제 미생물 조성물을 제공한다.The fourth aspect of the present invention is Lactobacillus casei WS-1 (KCCM10896P), Lactobacillus casei W-1 (KCCM10897P), Lactobacillus ferrence W-3 (KCCM10898P), Lactobacillus casei W-4 (KCCM10899P) And Lactobacillus casei W-6 (KCCM10900P) and Decera Brucelensis WY-1 (KCCM10901P) provides a deodorant microbial composition comprising.
상기 미생물 조성물에는 박테리오신 및 유기산등과 같은 부가적인 물질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 유기산은 젖산, 수산, 초성포도산, 호박산, 주석산, 말레익산, 사과산 및 구연산으로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상의 조합을 포함할 수 있다.The microbial composition may further include additional materials such as bacteriocin and organic acids. The organic acid may include one or more combinations selected from the group consisting of lactic acid, fish acid, vinegar acid, succinic acid, tartaric acid, maleic acid, malic acid and citric acid.
상기 소취제 조성물을 위한 담체로는 분말상의 점토류, 활성탄, 코크스, 제 철소 폐슬래그, 화산재, 연소재로 구성되는 그룹으로부터 선택된 1종 이상의 담지물질을 사용할 수 있으며, 점토류로는 제올라이트, 질석, 규조토, 고령토, 옹기토, 장석, 차지토, 활석 등을 사용할 수 있다.As the carrier for the deodorant composition, one or more supported materials selected from the group consisting of powdered clay, activated carbon, coke, steel mill slag, volcanic ash, and combustion materials may be used. As clays, zeolite, vermiculite, Diatomaceous earth, kaolin, onggi, feldspar, charge clay, talc can be used.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
< < 실시예Example 1 > 미생물 제제 1> microbial agent 피드프리Feed free ™ 내 미생물의 종류 분석™ Microbial Type Analysis
1. 실험방법1. Experimental method
1) 락토바실러스 균주의 분리1) Isolation of Lactobacillus Strains
운석식품(주)의 피드프리™ 미생물제제로부터 유산균을 분리하기 위하여, MRS 평판배지에 형성된 균주 중 흰색 콜로니를 선택하여 분리하였다.In order to separate lactic acid bacteria from Meteorite Food Co., Ltd.'s FeedFree ™ microbial agent, white colonies were selected and isolated from strains formed on MRS plate medium.
(1) 분리균주의 콜로니 형태 관찰 (1) Colony form observation of isolate
미생물제제로부터 분리된 균주을 0.002%의 브로모페놀 블루(bromophenol blue; BPB)가 첨가된 MRS 배지에 접종하고 37℃에서 24시간 배양 후, 콜로니의 색과 형태를 해부현미경(Zoom 2000, Leica) 하에서 관찰하였다. Strains isolated from the microbial agent were inoculated in MRS medium containing 0.002% bromophenol blue ( BPB ) and incubated at 37 ° C for 24 hours, and then the color and shape of the colonies were analyzed under a dissection microscope (Zoom 2000, Leica). Observed.
(2) 분리균주의 그람염색(2) Gram dyeing of isolated strain
① 슬라이드에 세균을 도말하고 열 고정 후, 크리스탈 바이올렛(crystal violet) 용액으로 1분 동안 염색한다.① Blot the bacteria on the slide and heat fix, and then stain them with crystal violet solution for 1 minute.
② 아이오다인(Iodine) 용액으로 1분 동안 염색처리한다.② Stain for 1 minute with Iodine solution.
③ 에탄올에 30초 동안 탈색시킨다.③ Bleach for 30 seconds in ethanol.
④ 광학현미경(Nikon, Eclipse 80i)으로 관찰하여 그람염색성을 판정한다.④ Gram dyeability is determined by observing with an optical microscope (Nikon, Eclipse 80i).
(3) 주사형 전자현미경(SEM)을 이용한 형태 관찰(3) Morphology observation using scanning electron microscope (SEM)
① 균주의 배양① Cultivation of strains
: 유산균 선택배지 MRS에 배양한다: Incubate in Lactobacillus selective medium MRS
② 글루타알데하이드(Glutaraldehyde고정) ② Glutaraldehyde (fixed glutaraldehyde)
: 배양된 유산균을 2.5%의 Glutaraldehyde에서 24시간 동안 고정한다.: Fix cultured lactic acid bacteria in 2.5% Glutaraldehyde for 24 hours.
③ 탈수③ Dehydration
: 50% 및 70%, 80%, 90% 및 100% 농도의 에탄올을 순차적으로 처리한다.: 50% and 70%, 80%, 90% and 100% concentration of ethanol is treated sequentially.
④ 건조④ dry
: 50% 및 100%의 이소아밀 아세테이트(Isoamyl acetate)를 처리한다. Treat with 50% and 100% isoamyl acetate.
⑤ 금 코팅(Gold coating)을 한다.⑤ Apply gold coating.
⑥ 주사형전자현미경(XL30ESEM, philips)으로 관찰한다.⑥ Observe with a scanning electron microscope (XL30ESEM, philips).
2) 효모 균주의 분리2) Isolation of Yeast Strains
피드프리™ 속의 효모는 효모전용배지 PDA(Potato Dextrose Agar, Difco) 배지에서 3일간 28℃에서 3일간 배양한 후 주사형전자현미경(XL30ESEM, philips)으로 형태를 관찰하였다. Yeast in Feedfree ™ genus was cultured for 3 days at 28 ° C. in yeast broth PDA (Potato Dextrose Agar, Difco) medium, and then observed with a scanning electron microscope (XL30ESEM, philips).
3) 미생물 제제로부터 분리된 분리균주의 염기서열 분석3) Sequence analysis of isolated strains isolated from microbial preparations
(1) 세균의 염기서열 분석(1) Sequence analysis of bacteria
순수 분리된 분리균주를 트립티카아제 대두 한천배지(Trypticase Soy Brith Agar; TSA, Difco)에서 150rpm으로 진탕배양하였다. DNA는 QIAamp DNA 미니 키트(QIAamp DNA Mini Kit, QIAGEN)를 사용하여 추출하였다. 16S rDNA의 PCR 증폭에 사용된 프라이머는 표 1과 같다. PCR 증폭은 95℃에서 2분 동안 반응시킨 후, 94℃에서 30초, 58℃에서 30초, 72℃에서 45초로 30 사이클 반응시키고 72℃에서 5분 동안 반응시켰다. Purely isolated isolates were shaken at 150 rpm in trypticase Soy Brith Agar ( TSA , Difco). DNA was extracted using the QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN). Primers used for PCR amplification of 16S rDNA are shown in Table 1. PCR amplification was performed at 95 ° C. for 2 minutes, 30 cycles at 94 ° C., 30 seconds at 58 ° C., 45 cycles at 72 ° C., and reaction at 72 ° C. for 5 minutes.
이렇게 증폭된 16S rDNA의 산물은 PCR 산물 분리 키트(product purification kit, Qiagen)를 사용하여 정제하였다. 염기서열 분석은 제네틱 어날라이저(Genetic analyzer 310A, Applied Biosystems)를 사용하였고, 데이터 해석은 DDBJ/NCBI/진뱅크(Genebank)의 데이타베이스를 이용하여 상동성 검색을 수행하였고, 계통수 작성은 CLUSTAL X 프로그램(Thompson et al., 1994) 및 PHYLIP 프로그램 (Felsenstein, 1993)을 이용하여 계통학적 위치를 확인하였다.The amplified product of 16S rDNA was purified using a PCR product purification kit (Qiagen). Genetic analysis was performed using Genetic Analyzer (Genetic analyzer 310A, Applied Biosystems). Data analysis was performed using the database of DDBJ / NCBI / Genebank. (Thompson et al ., 1994) and the PHYLIP program (Felsenstein, 1993) to confirm the systematic location.
(2) 효모균주의 동정(2) Identification of Yeast Strains
벤질 클로라이드 방법에 의거하여 DNA를 추출하고, 26S rDNA 영역을 PCR을 하여 증폭하였다. 증폭에 사용된 프라이머는 YF (5'-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3'-서열번호 1), YR (5'-GGTCCGTGTTTCAAGACG-3'-서열번호 2)을 이용하였다. PCR 조건은 95℃ 에서 2분; 94℃ 에서 30초, 55℃ 에서 30초, 72℃에서 45초를 30회 반복하였고, 75℃에서 5분간 유지한 후 16℃로 유지하였다. 증폭된 26S rDNA의 부분 염기서열은 PCR 산물 정제키트(Qiagen 사)을 이용하여 정제하였으며, PCR 정제산물은 제네틱 어날라이저 310A(Applied Biosystems)을 이용하여 염기서열을 분석하였다.DNA was extracted according to the benzyl chloride method, and the 26S rDNA region was amplified by PCR. Primers used for amplification were YF (5'-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3'-SEQ ID NO: 1), YR (5'-GGTCCGTGTTTCAAGACG-3'-SEQ ID NO: 2). PCR conditions were 2 minutes at 95 ° C; 30 seconds at 94 ℃, 30 seconds at 55 ℃, 45 seconds at 72 ℃ was repeated 30 times, held at 75
4) RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)를 이용한 동정4) Identification using Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD)
(1) 락토바실러스의 세밀한 동정(1) Fine identification of Lactobacillus
종, 아종 혹은 돌연변이 균주들 간의 유전적 유연관계를 16 rRNA 분석과 DNA-DNA 상동성 실험을 통하여 확인이 어려울 경우 Random Amplified Polymorphic DNA(RAPD)을 이용한다. RAPD 방법은 유전자 염기서열이 매우 유사한 균주에 대해서 무작위적인 프라이머를 사용하여 DNA를 증폭하여 증폭된 DNA 밴드패턴을 비교 조사함으로서 균주간 유전적 유연관계를 확인할 수 있다. 사용되어진 균주는 rDNA 분석만으로 효과적으로 종 확인이 되지 않았던, 락토바실러스 종 WS-1, W-1, W-4, W-6의 균주를 사용하였으며, 표준균주로는 락토바실러스 카제이 아종 톨러란스 ATCC 25599, 락토바실러스 카제이 ATCC 393, 락토바실러스 파라카제이 아종 파라카제이 ATCC 27216 및 락토바실러스 파라카제이 아종 파라카제이 ATCC 25302를 사용하였다.Random amplified polymorphic DNA (RAPD) is used when genetic flexibility between species, subspecies, or mutant strains is difficult to identify through 16 rRNA analysis and DNA-DNA homology experiments. In the RAPD method, genetic variation between strains can be confirmed by comparing and amplifying DNA band patterns by amplifying DNA using random primers for strains having very similar gene sequences. The strains used were strains of Lactobacillus sp. WS-1, W-1, W-4, and W-6, which were not effectively identified by rDNA analysis alone. As a standard strain, Lactobacillus cassia subtype Tolerance ATCC was used. 25599,
사용되어진 프라이머는 OPL-05 (ACGCAGGCAC-서열번호 3), OPL-06 (CCCGTCAGCA-서열번호 4)을 이용하였고, PCR 조건은 94℃ 에서 5분; 94℃에서 1분, 32℃에서 2분, 72℃ 2분을 35번 순환한 후; 72℃에서 5분 동안 유지한 후 4℃로 유지하였다Primers used were OPL-05 (ACGCAGGCAC-SEQ ID NO: 3), OPL-06 (CCCGTCAGCA-SEQ ID NO: 4), PCR conditions were 5 minutes at 94 ℃; After 35 cycles of 1 min at 94 ° C., 2 min at 32 ° C., and 2 min at 72 ° C .; Hold at 72 ° C. for 5 minutes and then at 4 ° C.
2. 2. 결 과result
(1) (One) 분리균주Isolated strain WSWS -1의 -1's 콜로니Colony 형태 특징 Shape feature
분리균주 WS-1 콜로니는 브로모페놀 블루(bromophenol blue; BPB)가 첨가된 MRS배지에서 둥근형태(circular, convex)를 나타내었으며, 콜로니 중앙에 진한 청색의 핵이 관찰되어 유산균 콜로니의 형태학적인 특징을 나타냈다. 분리균주 WS-1을 그람 염색하여 광학현미경(Nikon, Eclipse 80i× 1,000)으로 관찰한 결과, 분리균주 WS-1은 그람양성으로서 짧은 간균의 형태를 나타내었다. 주사형전자현미경(SEM)을 이용하여 분리균주 WS-1의 세포형태를 관찰한 결과, 0.8× 1.0㎛ ~ 1.0× 2.0㎛ 크기의 간균 형태를 나타내었다(도 1).The isolated strain WS-1 colony showed circular and convex in MRS medium supplemented with bromophenol blue ( BPB ), and a dark blue nucleus was observed in the center of the colony. Indicated. As a result of gram staining of the isolated strain WS-1 and observation with an optical microscope (Nikon, Eclipse 80i × 1,000), the isolated strain WS-1 showed a gram-positive form of short bacilli. As a result of observing the cell morphology of the isolated strain WS-1 using a scanning electron microscope (SEM), it showed a bacilli of the size of 0.8 × 1.0 ㎛ ~ 1.0 × 2.0 ㎛ ( Fig. 1 ).
(2) (2) 분리균주Isolated strain W-1의 W-1 콜로니Colony 형태 특징 Shape feature
분리균주 W-1의 콜로니는 브로모페놀 블루(bromophenol blue; BPB)가 첨가된 MRS배지에서 둥근형태(circular, convex)를 나타내었으며, 전체적으로 청색을 띄었다. 또한 콜로니 중앙에 진한 청색의 핵이 관찰되어 유산균 콜로니의 형태학적인 특징을 나타냈다. 분리균주 W-1을 그람 염색하여 광학현미경(Nikon, Eclipse 80i×1,000)으로 관찰한 결과, 분리균주 W-1은 그람양성으로 짧은 간균의 형태를 나타내었다. 주사형전자현미경(SEM)을 이용하여 분리균주 W-1의 세포형태를 관찰한 결과, 0.7×1.7㎛ ~ 0.7×3.3㎛ 크기의 간균 형태를 나타내었다(도 1).Colonies of the isolated strain W-1 showed a rounded shape (circular, convex) in the MRS medium to which bromophenol blue ( BPB ) was added. In addition, a dark blue nucleus was observed in the center of the colony, indicating the morphological characteristics of the lactic acid bacteria colony. Gram staining of the isolated strain W-1 was observed with an optical microscope (Nikon, Eclipse 80i × 1,000). As a result, the isolated strain W-1 showed a gram-positive form of short bacilli. As a result of observing the cell morphology of the isolated strain W-1 using a scanning electron microscope (SEM), it showed a bacillus form of 0.7 × 1.7 ㎛ ~ 0.7 × 3.3 ㎛ size ( Fig. 1 ).
(3) (3) 분리균주Isolated strain W-3의 W-3 콜로니Colony 형태 특징 Shape feature
분리균주 W-3의 콜로니는 브로모페놀 블루(bromophenol blue; BPB)가 첨가된 MRS배지에서 불규칙한 형태(irregular, umbonate)를 나타내었으며, 전체적으로 청색을 띄었고 유산균 콜로니의 형태학적인 특징을 나타냈다. 분리균주 W-3을 그람 염색하여 광학현미경(Nikon, Eclipse 80i×1,000)으로 관찰한 결과, 분리균주 W-3은 그람양성으로 짧은 간균의 형태를 나타내었다. 주사형전자현미경(SEM)을 이용하여 분리균주 W-3의 세포형태를 관찰한 결과, 0.7×1.3㎛ ~ 0.7×2.0㎛ 크기의 간균 형태를 나타내었다(도 1).Colonies of the isolated strain W-3 showed irregular morphology (irregular, umbonate) in MRS medium to which bromophenol blue ( BPB ) was added. The colonies of lactic acid bacteria colonies showed morphological characteristics. The isolated strain W-3 was gram stained and observed with an optical microscope (Nikon, Eclipse 80i × 1,000). As a result, the isolated strain W-3 showed a gram-positive form of short bacilli. As a result of observing the cell morphology of the isolated strain W-3 using a scanning electron microscope (SEM), it showed a bacilli of the size of 0.7 × 1.3 ㎛ ~ 0.7 × 2.0 ㎛ ( Fig. 1 ).
(4) (4) 분리균주Isolated strain W-4의 W-4 콜로니Colony 형태 특징 Shape feature
분리균주 W-4의 콜로니는 브로모페놀 블루(bromophenol blue; BPB)가 첨가된 MRS배지에서 둥근형태(circular, convex)를 나타내었으며, 전체적으로 청색을 띄었다. 또한 콜로니 중앙에 진한 청색의 핵이 관찰되어 유산균 콜로니의 형태학적인 특징을 나타냈다. 분리균주 W-4를 그람 염색하여 광학현미경(Nikon, Eclipse 80i×1,000)으로 관찰한 결과, 분리균주 W-4는 그람양성으로 짧은 간균의 형태를 나타내었다. 주사형전자현미경(SEM)을 이용하여 분리균주 W-4의 세포형태를 관찰한 결과, 0.6×0.8㎛ ~ 0.5×1.0㎛ 크기의 간균 형태를 나타내었다(도 1).Colonies of the isolated strain W-4 showed a circular shape (circular, convex) in the MRS medium to which bromophenol blue ( BPB ) was added. In addition, a dark blue nucleus was observed in the center of the colony, indicating the morphological characteristics of the lactic acid bacteria colony. The isolated strain W-4 was gram stained and observed with an optical microscope (Nikon, Eclipse 80i × 1,000). As a result, the isolated strain W-4 showed a gram-positive form of short bacilli. As a result of observing the cell morphology of the isolated strain W-4 using a scanning electron microscope (SEM), it showed a bacilli of the size of 0.6 × 0.8 ㎛ ~ 0.5 × 1.0 ㎛ ( Fig. 1 ).
(5) (5) 분리균주Isolated strain W-6의 W-6 콜로니Colony 형태 특징 Shape feature
분리균주 W-6의 콜로니는 브로모페놀 블루(bromophenol blue; BPB)가 첨가된 MRS배지에서 둥근형태(circular, convex)를 나타내었으며, 전체적으로 청색을 띄었다. 또한 콜로니 중앙에 진한 청색의 핵이 관찰되어 유산균 콜로니의 형태학적인 특징을 나타냈다. 분리균주 W-6을 그람 염색하여 광학현미경(Nikon, Eclipse 80i×1,000)으로 관찰한 결과, 분리균주 W-6은 그람양성으로 짧은 간균의 형태를 나타내었다. 주사형전자현미경(SEM)을 이용하여 분리균주 W-6의 세포형태를 관찰한 결과, 0.5×1.0㎛ ~ 0.8×2.9㎛ 크기의 간균 형태를 나타내었다(도 1).Colonies of the isolated strain W-6 showed a circular (convex, convex) in the MRS medium added with bromophenol blue ( BPB ), and was generally blue. In addition, a dark blue nucleus was observed in the center of the colony, indicating the morphological characteristics of the lactic acid bacteria colony. Gram staining of the isolated strain W-6 was observed with an optical microscope (Nikon, Eclipse 80i × 1,000). As a result, the isolated strain W-6 showed a gram-positive form of short bacilli. As a result of observing the cell morphology of the isolated strain W-6 by using a scanning electron microscope (SEM), it showed a bacilli of the size of 0.5 × 1.0 ㎛ ~ 0.8 × 2.9 ㎛ ( Fig. 1 ).
(6) (6) 분리균주Isolated strain WYWY -1의 -1's 콜로니Colony 형태 특징 Shape feature
주사형전자현미경(SEM)을 이용하여 분리균주 WY-1의 세포형태를 관찰한 결과, 0.8×1.0㎛ ~ 1.2×1.0㎛ 크기의 단간균 형태를 나타내었다(도 2).As a result of observing the cell morphology of the isolated strain WY-1 using a scanning electron microscope (SEM), it showed a monobacterium form of the size of 0.8 × 1.0 ㎛ ~ 1.2 × 1.0 ㎛ ( Fig. 2 ).
(7) 염기서열 분석 결과(7) Sequence analysis result
① 분리균주 WS-1균주는 16S rDNA 염기서열(1,417bp, 서열번호 5)에 기초한 분자계통학적 분석결과 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 종을 포함하는 계통그룹에 속하는 균주로서, 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 균주 (Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No.= CP000423.1)와 99.99% (identities = 1415/1417, Gaps=1/1415)의 유연관계를 나타내었고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 균주(Lactobacillus paracasei strain DJ1; Accession No.= DQ462440)와 99.99% (identities = 1415/1417, Gaps=1/1415)의 유연관계를 나타내는 것으로 확인되었다. 다른 락토바실러스 균주와의 계통분류를 수행해 본 결과 락토바실러스 파라카제이 또는 락토바실러스 카제이와 유연관계가 높았다(도 4).① The isolated strain WS-1 strain is a strain belonging to a lineage group including a species of the genus Lactobacillus as a result of molecular analysis based on the 16S rDNA nucleotide sequence (1,417bp, SEQ ID NO: 5), Lactobacillus casei ) Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No. = CP000423.1) and 99.99% (identities = 1415/1417, Gaps = 1/1415) showed a flexible relationship, Lactobacillus paracaze ( Lactobacillus paracasei ) strain ( Lactobacillus ) paracasei strain DJ1; Accession No. = DQ462440) and 99.99% (identities = 1415/1417, Gaps = 1/1415). As a result of phylogeny with other Lactobacillus strains, the Lactobacillus paracase or Lactobacillus casei had a high degree of flexibility ( FIG. 4 ).
② 분리균주 W-1 균주는 16S rDNA 전 염기서열(1,410bp, 서열번호 6)에 기초한 분자계통학적 분석결과 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 종을 포함하는 계통그룹에 속하는 균주로서, 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 균주 (Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No.= CP000423.1)와 99.36% (identities = 1407/1416, Gaps=9/1416)의 유연관계를 나타내었고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 균주(Lactobacillus paracasei strain DJ1; Accession No.= DQ462440)와 99.36% (identities = 1407/1417, Gaps=9/1416)의 유연관계를 나타내는 것으로 확인되었다. 다른 락토바실러스 균주와의 계통분류를 수행해 본 결과 락토바실러스 카제이 및 락토바실러스 파라카제이와 유연관계가 높았다(도 5). ② The isolated strain W-1 strain is a strain belonging to a lineage group including a species of the genus Lactobacillus as a result of molecular analysis based on the entire sequence of 16S rDNA (1,410bp, SEQ ID NO: 6). Lactobacillus casei ) Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No. = CP000423.1) and 99.36% (identities = 1407/1416, Gaps = 9/1416) showed a flexible relationship, Lactobacillus paracaze ( Lactobacillus paracasei ) strain ( Lactobacillus ) paracasei strain DJ1; Accession No. = DQ462440) and 99.36% (identities = 1407/1417, Gaps = 9/1416) was confirmed to show a flexible relationship. As a result of phylogeny with other Lactobacillus strains, Lactobacillus casei and Lactobacillus paracasei had a high degree of flexibility ( FIG. 5 ).
③ 분리균주 W-3 균주는 16S rDNA 전 염기서열(1,417bp, 서열번호 7)에 기초한 분자계통학적 분석결과 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 종을 포함하는 계통그룹에 속하는 균주로서, 락토바실러스 퍼로런스(Lactobacillus perolens) 균주 (Lactobacillus perolens L534; Accession No.= Y19168.1)와 99.07% (identities = 1397/1410, Gaps=8/1410)의 유연관계를 나타내었고, 다른 락토바실러스 균주와의 계통분류를 수행해 본 결과 락토바실러스 퍼로런스와 유연관계가 높았다(도 6).③ The isolated strain W-3 strain is a strain belonging to a lineage group including a species of the genus Lactobacillus as a result of molecular analysis based on the entire sequence of 16S rDNA (1,417bp, SEQ ID NO: 7). Lactobacillus perolens ) strain ( Lactobacillus perolens L534; Accession No. = Y19168.1) and 99.07% (identities = 1397/1410, Gaps = 8/1410) showed a flexible relationship, and the phylogeny of other Lactobacillus strains was performed. As a result, the Lactobacillus perforation was highly flexible ( FIG. 6 ).
④ 분리균주 W-4 균주는 16S rDNA 전 염기서열(1,390bp,서열번호 8)에 기초한 분자계통학적 분석결과 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 종을 포함하는 계통그룹에 속하는 균주로서, 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 균주 (Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No.= CP000423.1)와 98.91% (identities = 1378/1393, Gaps=13/1393)의 유연관계를 나타내었고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 균주 (Lactobacillus paracasei ; Accession No.=DQ462440.1)와 98.91% (identities = 1378/1393, Gaps=13/1393)의 유연관계를 나타내었다. 다른 락토바실러스 균주와의 계통분류를 수행해 본 결과 락토바실러스 카제이 및 락토바실러스 파라카제이에 유연관계가 높았다(도 7).④ The isolated strain W-4 strain was found to be lactobacillus based on molecular analysis based on the entire sequence of 16S rDNA (1,390bp, SEQ ID NO: 8).LactobacillusAs a strain belonging to a lineage group including a species of the genus), Lactobacillus casei (Lactobacillus casei) Strains (Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No. = CP000423.1) and 98.91% (identities = 1378/1393, Gaps = 13/1393) showed a flexible relationship.Lactobacillus paracasei) Strains (Lactobacillus paracasei ; Accession No. = DQ462440.1) and 98.91% (identities = 1378/1393, Gaps = 13/1393). Phylogenetic classification with other Lactobacillus strains showed a high degree of flexibility in Lactobacillus casei and Lactobacillus paracasei (7).
⑤ 분리균주 W-6 균주는 16S rDNA 전 염기서열(1,414bp, 서열번호 9)에 기초한 분자계통학적 분석결과 락토바실러스(Lactobacillus) 속의 종을 포함하는 계통그룹에 속하는 균주로서, 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) 균주 (Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No.= CP000423.1)와 99.43% (identities = 1409/1417, Gaps=8/1417)의 유연관계를 나타내었고, 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 균주 (Lactobacillus paracasei ; Accession No.=DQ462440.1)와 99.43% (identities = 1409/1417, Gaps=8/1417)의 유연관계를 나타내었다. 다른 락토바실러스 균주와의 계통분류를 수행해 본 결과 락토바실러스 카제이 및 락토바실러스 파라카제이와 유연관계가 높았다(도 8). ⑤ The isolated strain W-6 strain is a strain belonging to the phylogenetic group including the species of the genus Lactobacillus as a result of molecular analysis based on the entire sequence of 16S rDNA (1,414bp, SEQ ID NO: 9). Lactobacillus casei ) Lactobacillus casei ATCC 334; Accession No. = CP000423.1) and 99.43% (identities = 1409/1417, Gaps = 8/1417) showed a flexible relationship, Lactobacillus paracaze ( Lactobacillus paracasei ) strain ( Lactobacillus ) paracasei ; Accession No. = DQ462440.1) and 99.43% (identities = 1409/1417, Gaps = 8/1417). As a result of phylogenetic classification with other Lactobacillus strains, the Lactobacillus casei and Lactobacillus paracasei had a high degree of flexibility ( FIG. 8 ).
(8) (8) RAPDRAPD (( RandomRandom AmplifiedAmplified PolymorphicPolymorphic DNADNA )를 이용한 동정 결과Identification result using
PCR을 통하여 증폭된 결과물을 1.5% 아가로스겔, 50V에서 전기영동한 후 확인하였다. OPL-5 프라이머로 RAPD 한 결과를 도 3에 나타내었다. 모든 분리균주(strain WS-1, W-1, W-4와 W-6는 Lactobacillus casei 그룹인 ATCC 25599와 ATCC 393에서 나타나는 대표적인 1A 2A, 3A와 4A의 밴드 형태와 동일한 DNA 밴드를 나타내어 락토바실러스 종 WS-1, W-1, W-4, W-6의 균주는 락토바실러스 카제이로 동정되었다.The result amplified by PCR was confirmed after electrophoresis at 1.5% agarose gel, 50V. The result of RAPD with OPL-5 primer is shown in FIG. 3 . All isolate strains (strain WS-1, W-1, W-4 and W-6 were Lactobacillus Lactobacillus strains WS-1, W-1, W-4, and W-6 showed the same DNA bands as those of the representative 1A 2A, 3A and 4A bands of the
따라서 분리균주 WS-1은 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) WS-1로 명명하였다. 분리균주 W-1은 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) W-1로 명명하였다. 분리균주 W-3은 락토바실러스 퍼로런스(Lactobacillus perolens) W-3로 명명하였다. 분리균주 W-4은 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) W-4로 명명하였다. 따라서 분리균주 W-6은 락토바실러스 카제이(Lactobacillus casei) W-6로 명명하였다.Therefore, isolated strain WS-1 is Lactobacillus casei ) is named WS-1. Isolate strain W-1 is Lactobacillus casei ) W-1. Isolated strain W-3 is Lactobacillus perolens ) W-3. The isolated strain W-4 is Lactobacillus casei ) was named W-4. Therefore, isolated strain W-6 is Lactobacillus casei ) W-6.
(9)(9) 효모 균주의 동정Identification of Yeast Strains
분석된 염기서열은 서열번호 10과 같다.The analyzed base sequence is shown in SEQ ID NO: 10.
염기서열은 DDBJ/NCBI/Genebank와 상동성 검색을 수행하고, 클러스털 X 프로그램(Thompson et al, 1994) 및 PHYLIP 프로그램 (Felsenstein)을 이용하여 계통학적 위치를 확인하였다. WY-1 균주의 26S rDNA 염기서열에 기초한 분자계통학적 분석에서 Dekkra 속의 종을 포함하는 계통학적 그룹에 속하는 균주로서, 데케라 브루셀렌시스(Dekkra bruxellensis) 균주와 99%의 유연관계를 나타내는 것으로 확인되었다. 따라서 효모 대표균주 WY-1는 데케라 브루셀렌시스(Dekkra bruxellensis)로 동정되었다(도 9). 데케라 브루셀렌시스(Dekkra bruxellensis) WY-1으로 명명되었다. The base sequence was searched for homology with DDBJ / NCBI / Genebank, and the phylogenetic location was confirmed using Cluster X program (Thompson et al, 1994) and PHYLIP program (Felsenstein). Molecular phylogenetic analysis based on the 26S rDNA sequence of the WY-1 strain, a strain belonging to the systematic group including the species of the genus Dekkra , Dekkra Brucelensis bruxellensis ) showed a 99% soft relationship with the strain. Thus, yeast representative strain WY-1 was identified as Dekkra bruxellensis ( Fig. 9 ). Dekkra Brusselsis bruxellensis ) was named WY-1.
따라서 락토바실러스 균주들 및 효모 균주 각각은 2007년 12월 7일자에 한국종균협회에 기탁번호 KCCM10896P, KCCM10897P, KCCM10898P, KCCM10899P, KCCM10900P, KCCM10901P로 각각 기탁되었다.Therefore, Lactobacillus strains and yeast strains were deposited on December 7, 2007, respectively, with the accession numbers KCCM10896P, KCCM10897P, KCCM10898P, KCCM10899P, KCCM10900P, and KCCM10901P, respectively, to the Korean spawn association.
< < 실시예Example 2 > 미생물제제 2> microbial agent 피드프리Feed free ™ 내의 유기산(Organic acids in the ™ OrganicOrganic acidacid ) 분석) analysis
운석식품 피드프리™ 미생물제제를 0.02㎛의 필터를 이용하여 침전물을 제거한 후, 접종하여 28℃에서 15일 동안 배양한다. 이온 크로마토그래피 DX-500(Ion Choromatograph DX-500, Dionex, USA)로 분석하고 이온 팩 ASII (Ion Pac ASII) 프로그램으로 정량한다.Meteorite Food Feed ™ microorganisms are removed by infiltration using a 0.02 μm filter, inoculated and incubated at 28 ° C. for 15 days. Analyze by ion chromatography DX-500 (Ion Choromatograph DX-500, Dionex, USA) and quantify with Ion Pac ASII program.
< < 결 과result > >
미생물제제 배양액에서 유기산 표준물질 10종류를 대상으로 유기산의 정성, 정량 분석결과, 미생물제제 내에서는 젖산(4940.074ppm)과 초산(2030.97ppm) 다량 검출 되었고, 그 외 수산(266.119ppm), 초성포도산(216.79ppm), 호박산(105.148ppm)과 주석산(49.831ppm)이 검출되었다. 또한 말레익산(0.604ppm), 사과산(21.125ppm), 구연산(2.214ppm)은 매우 적은 양이 분석되었으며, 개미산(formic aicd, FA)는 검출되지 않았다.As a result of qualitative and quantitative analysis of 10 types of organic acid standards in microbial cultures, large amounts of lactic acid (4940.074ppm) and acetic acid (2030.97ppm) were detected in microbial preparations. (216.79 ppm), succinic acid (105.148 ppm) and tartaric acid (49.831 ppm) were detected. In addition, maleic acid (0.604ppm), malic acid (21.125ppm) and citric acid (2.214ppm) were analyzed in very small amounts. Formic acid (formic aicd, FA) was not detected.
< < 실시예Example 3 > 3> 피드프리Feed free ™ 내 미생물의 산성 Acid in Microorganisms ™ pHpH 에서 in 생육능Growth 조사 Research
(1) 락토바실러스의 산성 pH에서 생육능 조사(1) Growth Performance at Acidic pH of Lactobacillus
유산균 선택배지인 락토바실라이 MRS 배지(Lactobacilli MRS Broth; MRS, Difco)의 pH를 pH 2.5, pH 3.0, pH 3.5, pH 4.0, pH 4.5, pH 5.0으로 조절하였다. pH가 조절된 MRS 배지에 미생물제제를 1㎖씩 접종하였다. 28℃에서 정치배양하며, 12시간 단위로 600nm에서 OD를 측정하였다.The pH of Lactobacilli MRS Broth ( MRS , Difco), a lactic acid bacteria selection medium, was adjusted to pH 2.5, pH 3.0, pH 3.5, pH 4.0, pH 4.5, pH 5.0. 1 ml of microbial agent was inoculated into the pH adjusted MRS medium. Stationary culture at 28 ℃, OD was measured at 600nm in 12 hours.
< < 결 과result > >
MRS 배지를 pH 2.5 ~ 5.0 까지 조절한 후, 미생물제제를 접종하여 각 pH 별 생육도를 측정한 결과, pH 4.0, pH 4.5 및 pH 5.0에서 48시간 배양 이후 OD가 급격하게 증가하는 것을 관찰할 수 있었다. 또한 pH 2.5, pH 3.0 및 pH 3.5에서는 72시간 배양 이후 증식이 더디게 진행되는 것처럼 보이지만 OD 값이 너무 낮아 증식의 유무를 확인할 수 없었다.After adjusting the MRS medium to pH 2.5 ~ 5.0, inoculation of microorganisms to measure the growth of each pH, the rapid increase in OD after 48 hours incubation at pH 4.0, pH 4.5 and pH 5.0 can be observed. there was. In addition, at pH 2.5, pH 3.0 and pH 3.5, the growth seemed to proceed slowly after 72 hours of incubation, but the OD value was too low to confirm the growth.
따라서 살아있는 생세포만을 선택적으로 염색하여 관찰할 수 있는 형광생체염색법을 사용하였다. 형광생체염색법은 형광색소인 카르복시 플루오르세인 디아세테이트(carboxy fluorescein diacetate; CFDA)를 사용하여 신속하고 정확하게 미생물을 계수할 수 있다.Therefore, fluorescence biostaining was used to selectively stain live cells only. The fluorescence biostaining method can count microorganisms quickly and accurately using fluoro fluorescein diacetate ( CFDA ), a fluorescent dye.
형광생체염색법에 의해 각 pH 별 배지에서 생균수를 측정한 결과, 초산성 조건인 pH 2.5 배지에서도 유산균과 효모가 관찰되었으며 유산균 수가 약 100배 증가함을 확인할 수 있었다(도 10).As a result of measuring the number of viable bacteria in each medium by fluorescence biostaining, lactic acid bacteria and yeast were observed even in pH 2.5 medium, which was acetic acid condition, and it was confirmed that the number of lactic acid bacteria increased about 100 times ( FIG. 10 ).
(2) 데케라 브루셀렌시스 WY-1(KCCM10901P)의 산성 pH에서 생육능 조사(2) Growth Performance at Acidic pH of Decera Brucelensis WY-1 (KCCM10901P)
순수분리된 데케라 브루셀렌시스 WY-1를 pH 2.0 ~ pH 4.5로 각각 조정한 PDA 평판배지에서 28℃에서 3일간 배양한 후 생균수를 측정한 결과는 다음과 같다. pH 2.0 PDA배지 : 8.8±4.8 × 104cfu/㎖; pH 2.5 PDA배지 : 1.14±9.7 × 105cfu/㎖; pH 3.0 PDA배지 : 7.0±7.5 × 104cfu/㎖; pH 3.5 PDA배지 : 4.6±4.3 × 104cfu/㎖; pH 4.0 PDA배지 : 1.2±2.2 × 104cfu/㎖; pH 4.5 PDA배지에서는 7.5±3.3 × 103cfu/㎖ 이었다. pH 2.0 ~ pH 4.5로 각각 조정한 PDB 액체배지에 접종한 후 카르복시 플루오르세인 디아세테이트(carboxy fluorescein diacetate; CFDA) 형광염색법을 이용한 효모의 생균수 측정한 결과는 다음과 같다. pH 2.0 PDA배지 : 1.06±0.2 × 107cells/㎖: pH 2.5 PDA배지 : 1.92±0.2 × 107cells/㎖; pH 3.0 PDA배지 : 9.52±0.2 × 106cells/㎖; pH 3.5 PDA배지 : 5.48±0.1 × 106cells/㎖; pH 4.0 PDA배지 : 4.0±0.1 × 106cells/㎖; pH 4.5 PDA배지 : 3.92±0.1 × 106cells/㎖ 이었다. 따라서 초산성 조건인 pH 2.0 배지에서도 데케라 브루셀렌시스 WY-1 (KCCM10901P)가 생육가능함을 보였다.After incubating for 3 days at 28 ℃ in the PDA plate medium purified purely separated Decera Brucelensis WY-1 to pH 2.0 ~ pH 4.5, and the number of viable cells is as follows. pH 2.0 PDA medium: 8.8 ± 4.8 × 10 4 cfu / ml; pH 2.5 PDA medium: 1.14 ± 9.7 × 10 5 cfu / ml; pH 3.0 PDA medium: 7.0 ± 7.5 × 10 4 cfu / ml; pH 3.5 PDA medium: 4.6 ± 4.3 × 10 4 cfu / ml; pH 4.0 PDA medium: 1.2 ± 2.2 × 10 4 cfu / ml; pH 4.5 PDA medium was 7.5 ± 3.3 × 10 3 cfu / ml. After inoculation into the PDB liquid medium adjusted to pH 2.0 ~ pH 4.5, the result of measuring the viable cell count of yeast using carboxy fluorescein diacetate ( CFDA ) fluorescence staining method is as follows. pH 2.0 PDA medium: 1.06 ± 0.2 × 10 7 cells / ml: pH 2.5 PDA medium: 1.92 ± 0.2 × 10 7 cells / ml; pH 3.0 PDA medium: 9.52 ± 0.2 × 10 6 cells / ml; pH 3.5 PDA medium: 5.48 ± 0.1 × 10 6 cells / ml; pH 4.0 PDA medium: 4.0 ± 0.1 × 10 6 cells / ml; pH 4.5 PDA medium: 3.92 ± 0.1 × 10 6 cells / ml. Therefore, it was shown that Decera brucellensis WY-1 (KCCM10901P) can be grown in pH 2.0 medium, which is acetic acid.
< < 실시예Example 4 > 4> 피드프리Feed free ™ 항균작용™ antibacterial activity
(1) 어병을 일으키는 미생물에 대한 항균작용(1) Antimicrobial activity against microorganisms causing fish disease
피드프리™의 항균력을 시험하기 위하여, 피드프리™를 0.45㎛ 막 여과기와 0.2㎛로 연속 2회 여과한 후 여과액을 냉장 보관하면서 시험에 사용하였다. 시험에 사용한 세균은 비브리오 오르다리(Vibro ordalii), 에드와르드시엘라 타르다(Edwardsiella tarda), 테나시바쿨럼 종(Tenacibaculum sp.)과 스트렙토코쿠스 인이애(Streptococcus iniae)를 사용하였다. 항균시험은 비브리오 오르다리(Vibro ordalii), 에드와르드시엘라 타르다(Edwardsiella tarda)과 스트렙토코쿠스 인이애(Streptococcus iniae)는 배양배지로 1.5% NaCl를 첨가한 트립틱 소이 아가(Tryptic soy agar; TSA)와 트립틱 소이 브로스(Tryptic soy broth)을 사용하였고, 테나시바쿨럼 종(Tenacibaculum sp.)은 1.5% NaCl 첨가 시토파가 아가(Cytophaga agar; CA)와 시토파가 브로스(Cytophaga broth; CB)를 사용하였다. 각각의 액체배지에서 진탕 배양한 균액을 비브리오 오르다리, 에드와르드시엘라 타르다와 그람 양성 세균인 스트렙토코쿠스 인이애는 약 107 CFU/ml로, 테나시바쿨럼 종(Tenacibaculum sp.)은 약 106 CFU/ml의 농도로 각각의 액체 배지에 현탁하여 배지 현탁시험균액을 준비하였다. 각 배지현탁시험균액을 교반기로 잘 섞은 후 각각 5ml씩 멸균시험관에 분주한 다음 피드프리™를 1%(v/v)되도록 첨가한 후 진탕배양하면서, 0, 3, 5, 10, 30분, 1시간째마다 세균 수를 540nm에서 흡광도 값으로 측정하였다. 대조구로는 피드프리™를 처리하지 않은 배지현탁균액에 각각의 배지를 1%(v/v)되게 첨가하여 같은 방법으로 측정하였다 흡광도 측정 결과는 흡광도 측정치이 1000배를 단위로 하여 나타내었으며, 시험은 3반복으로 실시되었다. 피드프리™의 항균력은 각각의 균종에 따라 차이가 났다. 스트렙토코쿠스 인이애균 시험구에서는 도 11에서 볼 수 있듯이 반응 개시 후 3분 유의적인 억제효과를 나타내기 시작하였으며, 그 효과가 시험 기간 동안 지속되는 것으로 나타났다. 따라서 여과액은 대조구에 비하여 유의적으로 높은 항균 효과를 나타내었다(도 11). To test the antimicrobial activity of FeedFree ™, Feedfree ™ was filtered twice with a 0.45 μm membrane filter at 0.2 μm and the filtrate was used for testing while refrigerated. The bacterium used for the test was Vibrio Ordari ( Vibro ordalii ), Edwardsiella tarda ), Tenacibaculum sp.) and Streptococcus iniae were used. Antimicrobial tests include Vibro ordalii , Edwardsiella tarda and Streptococcus iniae ) were Tryptic soy agar (TSA) and Tryptic soy broth added 1.5% NaCl as a culture medium, Tenacibaculum species sp.) used Cytophaga agar (CA) and Cytophaga broth (CB) with 1.5% NaCl. The bacterial cultures shaken and cultured in each liquid medium were Vibrio Ordari, Edward Siela Tarda, and Gram-positive bacteria Streptococcus inae at about 10 7 CFU / ml, Tenacibaculum sp.) was suspended in each liquid medium at a concentration of about 10 6 CFU / ml to prepare a medium suspension test bacteria. Mix each medium suspension test bacteria well with a stirrer and dispense 5ml each into a sterile test tube, add Feedfree ™ to 1% (v / v), and incubate for 0, 3, 5, 10, 30 minutes, The bacterial counts were measured as absorbance values at 540 nm every hour. As a control, 1% (v / v) of each medium was added to the culture medium without feedfree ™, and the measurement was performed in the same manner. Three repetitions were performed. The antimicrobial activity of FeedFree ™ was different for each species. In the Streptococcus erythrophilic test plot, as shown in FIG. 11, it showed a significant inhibitory effect for 3 minutes after the initiation of the reaction, and the effect was sustained during the test period. Therefore, the filtrate showed a significantly higher antimicrobial effect than the control ( FIG. 11 ).
(2) 장내 병원성 미생물에 대한 항균작용(2) Antimicrobial activity against intestinal pathogenic microorganisms
피드프리™가 병원성미생물에서도 살균력(억제력)이 있는가를 확인하기 위해서, 대표적 병원성균주인 세균을 대상으로 살균력 확인시험을 실시하였다.In order to confirm whether FeedFree ™ has bactericidal activity (inhibition ability) in pathogenic microorganisms, bactericidal test was performed on bacteria, a representative pathogenic strain.
시료조건 : 피드프리™( Feed - free ) 원액을 100배 희석한 액을 1%액을 시료로 하여 살균력을 시험하였다. Sample conditions: Feed-free ™ (Feed - free) for a 1% solution to a 100-fold diluted stock solution was tested by sterilizing the sample.
시험균주 : Escherichia coli ATCC 25922 Test strain : Esherichia coli ATCC 25922
Escherichia coli O157 ATCC 43895 Esherichia coli O157 ATCC 43895
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Staphylococcus aureus ATCC 25923
Vibrio parahaemolyticus KCTC 2471 Vibrio parahaemolyticus KCTC 2471
Salmonella typhi KCTC 2424 Salmonella typhi KCTC 2424
Pseudomonas aeruginosa KCTC 1636 Pseudomonas aeruginosa KCTC 1636
Candida albicans KCTC 7965 Candida albicans KCTC 7965
시험방법 : 대장균, 대장균O157, 포도상구균, 비브리오균, 녹농균, 살모렐라균을 액체배지(Brain l leart lnfusion Broth)에 증균시켜서 시험에 사용하였다. 칸디다균은 Sabouraud Dextrose Broth를 시용하였다. Test Method: Escherichia coli, Escherichia coli O157, Staphylococcus, Vibrio, Pseudomonas aeruginosa, and Salmoreella were enriched in the liquid medium (Brain l leart lnfusion Broth) and used for the test. Candida is Sabouraud Dexrose Broth was applied.
멸균된 생리식염수에 균을 접종하여 초기세균수를 측정한 후 시료를 1%되게 첨가하여 실온에 방치하였다. 30초 후, 2분 후, 5분 후, 24시간 후에 세균수를 측정하여 초기 세균에 대한 감소율을 알아보았다. After inoculating the bacteria in sterilized physiological saline to measure the initial bacterial count, the sample was added to 1% and left at room temperature. After 30 seconds, after 2 minutes, after 5 minutes, after 24 hours to determine the reduction rate for the initial bacteria by measuring the number of bacteria.
시험결과 : Test result :
표 3과 같이 원액을 100배 희석하여 만든 1%액의 조건에서도 세균의 살균력이 확인되었다. As shown in Table 3 , the bactericidal activity of bacteria was confirmed even under the condition of 1% solution prepared by diluting the
< < 실시예Example 5 > 5> 피드프리Feed free ™에 의한 닭 및 돼지의 생장 촉진™ promotes growth of chickens and pigs
1. One. 피드프리Feed free ™의 첨가 급여가 돼지의 생산성에 미치는 영향Effect of Dietary ™ Supplementation on Pig Productivity
표 4는 피드프리™를 첨가 자돈에 급여하여 생산성에 미치는 영향을 나타냈다. 처리 구는 피드프리™를 급여하지 않은 대조구와 음수로 0.1과 0.2% 급여구로서 처리구당 암수 각각 6두씩 12두를 배치하였다. 개시 시 체중은 약 7kg으로 처리구간에 차이가 없도록 하였으며, 조사항목은 증체량, 사료섭취량, 사료요구율, 장내미생물로서 4주 단위로 측정하였다. 피드프리™를 급여한 4주 후에 대조구와 비교시에 피드프리™ 0.1% 처리 구는 증체량이 대조 구에 비하여 0.59kg 높았으며 사료요율은 0.035가 개선되었다. 그러나 0.2% 음수 급여 구는 사료요구율 및 증체가 대조구에 비하여 개선되지 못하였으므로 적정 수준보다 높음을 시사한다.Table 4 shows the effect on feed productivity by feeding FeedFree ™ to piglets added. The treatments were negatively fed control and non-feedfree ™ 0.1 and 0.2% diets, with 12 males and 6 females per treatment. At the start, body weight was about 7kg and there was no difference between treatments. The survey items were weight gain, feed intake, feed requirement, and intestinal microorganisms. After four weeks of feeding Freefree ™, Feedfree ™ 0.1% treatment gained 0.59 kg higher than that of control and feed rate improved by 0.035. However, the 0.2% negative diet was higher than the optimum level because feed rate and weight gain were not improved compared to the control.
체중이 약 22-23kg에서 피드프리™를 첨가 급여 시에 0.1% -0.2%처리 구에서는 대조 구에 비하여 사료 요구율 및 증체량이 개선되는 경향을 보였다. 0.2% 급여구는 대조 구에 비하여 사료요구율이 높게 나타났다(표 5).Feed feed ™ supplemented at about 22-23 kg body weight tended to improve feed demand and weight gain in the 0.1% -0.2% treatment group compared to the control group. Feeding rate of 0.2% was higher than that of control (Table 5).
2. 사료에 2. feed 피드프리Feed free ™의 첨가/급여가 ™ Addition / Payment 이유자돈의Weaning 생산성에 미치는 영향 Productivity impact
본 실험은 피드프리™가 LHD 삼원교잡 비육돈이며, 체중이 약 11Kg의 어린돼지의 생산성에 미치는 영향을 구명하고자 시행하였다. 처리구는 피드프리™를 첨가하지 않은 무처리 구 즉 대조구, 시판용 항생제 0.1% 처리 구, 피드프리™ 0.1, 0.2, 0.4% 처리 구로 하였다. 시험기간은 2000년 6월 17일부터 8주간 시행하였으며, 물과 사료는 무제한으로 급여하였다. 이외에도 마지막 처리구인 시판용 사료에 피드프리™ 0.2% 첨가구는 7월 15일부터 처리구를 기존의 처리 구와 체중을 비슷하게 약 23Kg에서 배치하였으며 출하시까지 사양실험을 동일하게 시행하였다.This study was conducted to investigate the effect of FeedFree ™ on LHD ternary hogs and weight of young pigs weighing about 11 kg. The treatments were treated without feedfree ™, ie, control, commercial antibiotic 0.1% treatment, feedfree ™ 0.1, 0.2, 0.4% treatment. The trial period was eight weeks from June 17, 2000, with unlimited water and feed. In addition, feedfree ™ 0.2% added to the commercial feed, the last treatment, was placed at about 23Kg in weight similar to the existing treatments from July 15, and the same experiment was conducted until shipment.
약 11kg인 28일령부터 실험 개시 후 4주인 약 56일령에 증체량은 항생제와 피드프리™ 0.1과 0.2% 급여 구에서 대조구에 비하여 증가하는 경향을 나타냈으나 0.4% 급여 구에서는 대조구에 비하여 낮은 경향을 나타냈다. 사료섭취량은 전체적으로 피드프리™ 급여 구에서 증가하는 경향을 보였으나 첨가 수준이 증가함에 따라서 사료섭취량이 감소하는 경향을 보였다. 실험 개시 후 8주인 약 84일령에 증체량은 피드프리™ 0.1% 급여 구에서 다른 처리 구에 비하여 높았으며 사료요구율도 개선되는 경향을 보였다. 본 실험에서 피드프리™의 급여는 무 첨가 구인 대조 구에 비하여 사료 요구율을 개선하는 경향을 보였으나 0.2%보다 높은 수준의 급여구는 0.1% 급여 구에 비하여 증체량이 낮았으므로 약 11kg의 이유자돈부터 40kg까지의 비육돈에서는 0.1-0.2% 수준 사이의 첨가/급여가 필요함을 시사했다.Body weight gained from 28 days of age (approximately 11 kg) to about 56 days (4 weeks after initiation) showed an increase in antibiotics and Feedfree ™ 0.1 and 0.2% in the control group compared to the control group, but 0.4% in the control group compared to the control group. Indicated. Feed intake tended to increase overall in Feedfree ™ diets, but feed intake tended to decrease with increasing levels. At about 84 days of age, eight weeks after the start of the experiment, the gain was higher in the Feedfree ™ 0.1% diet compared to the other treatments, and the feed demand was also improved. In this experiment, Feed Free ™ showed a tendency to improve feed demand as compared to the control group, but the feed group higher than 0.2% had lower weight gain than the 0.1% group, so it was about 11kg weaning pig to 40kg. Swine pigs suggest that additions / payments between 0.1 and 0.2% are required.
표 6에서 실험 개시 후 8주령에 약 40Kg의 체중에서 0.1% 피드프리™ 처리 구는 증체 및 사료요구율이 대조구에 비하여 개선되는 경향을 보였다. In Table 6, at the weight of about 40 Kg at the start of the experiment, the 0.1% FeedFree ™ treatment group showed a tendency to increase the weight gain and feed requirement compared to the control group.
3. 3. 피드프리Feed free ™에 의한 육계의 생산성 증가™ increases broiler productivity
현지 부화장으로부터 부화 45일의 생산량이 높은 어린 수육계를 얻는다. 모든 육계는 부화장에서 뉴캐슬 및 브론키티스(New Castle and Bronchitis) 스프레이 예방접종을 하고 다른 예방접종은 하지 않았다. 각 우리에 Feather-sexed 육계 30마리씩, 총 15개 우리(1.5 x 4.3M)에 넣었다. 각 우리에는 콘크리트 바닥에 대팻밥(톱밥)을 깔고 한개 관으로 된 사료 공급 장치와 니플 음용수 공급라인을 설치하여 사료와 음용수 접근부에 ad libitum을 제공하였다. 인공부화기 램프가 제공하는 열과 사이트 커텐의 올림과 내림을 통해 실내 온도를 조절하였다. 육계에게 옥수수-콩 기본 사용사료를 Meth 방식으로 먹였다(표 7).From the local hatchery, a young broiler with a high yield of 45 days of hatching is obtained. All broilers were vaccinated with New Castle and Bronchitis sprays in the hatcheries and no other vaccinations were made. Each cage had 30 feather-sexed broilers, totaling 15 cages (1.5 x 4.3 M). Each cage was equipped with large rice (sawdust) on a concrete floor and a single tube feed and nipple drinking water supply line to provide ad libitum to feed and drinking water access. The room temperature was controlled by raising and lowering the heat provided by the incubator lamp and the site curtain. The broiler was fed with corn-bean feed using the Meth method (Table 7).
* 비타민 프리믹스는 사료 kg 당 비타민 A 6614 IU; 콜레칼시페롤 705 IU; 비타민 E, 13 IU; 리보플라빈, 6.6 mg; Ca panthothenate, 12 mg, 니코틴산 , 39mg, 비타민 B6, 1.9mg; 미나디온, 1.3mg; 엽산, 0.72mg; d-바이오틴, 0.055 mg; 티아민, 1.1 mg; 엑토시퀴인(ethoxyquin), 125 mg 을 포함한다.Vitamin premix contains vitamin A 6614 IU / kg feed; Cholecalciferol 705 IU; Vitamin E, 13 IU; Riboflavin, 6.6 mg; Ca panthothenate, 12 mg, nicotinic acid, 39 mg, vitamin B 6 , 1.9 mg; Minadione, 1.3 mg; Folic acid, 0.72 mg; d-biotin, 0.055 mg; Thiamine, 1.1 mg; Ethoxyquin, 125 mg.
* 미량 미너럴 프리믹스는 사료 kg 당 Mn 60mg, Zn 50mg, Fe 30mg, Cu 5 mg, I 1.5mg을 포함한다. Trace minor premixes include 60 mg of Mn, 50 mg of Zn, 30 mg of Fe, 5 mg of Cu, and 1.5 mg of I per kg of feed.
개시용(1일에서 21일) 및 성장용(22일에서 49일)의 요구조건을 만족하거나 그 이상으로 기본 사료를 배합한다. 어린 육계들은 무작위로 3종 사료 처리 중의 한가지를 지정한다. 사료의 조 구분은 다음과 같다. 750 g/mtons 의 coban60(구충억제제)가 들어 있는 기본 사료와 바시트라신(항생제)이 62.6 g/mton 함유한 기초사료(대조구), 또는 coban60(구충억제제)와 바시트라신(항생제)를 제외하고 피드프리™ 0.1 중량% 또는 0.2 중량% 보충한 사료로 구분된다. Formulate a basic feed that meets or exceeds the requirements for initiation (1 to 21 days) and growth (22 to 49 days). Young broilers randomly designate one of three feed treatments. The classification of feed is as follows. Excludes basic feed containing 750 g / mtons of coban60 (insecticide), and basic feed (control) containing 62.6 g / mton of bacitracin (antibiotic), or coban60 (insecticide) and bacitracin (antibiotic) And feed supplemented with 0.1% or 0.2% by weight of Feedfree ™.
실험 육계에 대하여 매일 2회 관찰하고 사망한 것은 제거하고 체중을 기록하였다. 다리에 심한 이상이 있는 비경제적인 것은 제거하고 체중을 기록하고 안락사 시켰다. 사망과 다리 이상이 발생하면 이를 기록하고 연구 마감시 사망율과 다리 이상이 있는 비율을 확인하였다. 육계에 대한 21일과 42일에 체중을 측정하고 체중 증가와 사료 변환을 계산하였다. 사료변환은 피더(feeder)에 투입된 중량과 21일 및 42일의 잔여 중량의 차를 통해 결정된다. 사망과 다리이상 육계의 체중 검량은 사료 소비를 조절하기 위해 사용되었다.The experimental broilers were observed twice daily and the dead were removed and the body weight was recorded. The uneconomics with severe abnormalities in the legs were removed, weight recorded and euthanized. Death and leg abnormalities were recorded and recorded at the end of the study to determine mortality and leg abnormalities. Body weights were measured on days 21 and 42 for broilers and weight gain and feed conversions were calculated. Feed conversion is determined by the difference between the weight put into the feeder and the remaining weight at 21 and 42 days. Body weight checks for mortality and mortality of broilers were used to control feed consumption.
1-42일의 체중과 체중증가, 사료섭취, 체중 증가 대 사료비율, 사망율, 육계, 다리이상율은 표 8(피드프리™의 어린 육계의 증체량에 대한 효과)에 나타낸 바와 같다.Body weight, weight gain, feed intake, weight gain to feed ratio, mortality, broiler and leg dysfunction rates from 1 to 42 days are shown in Table 8 (Feedfree ™ 's effect on weight gain in young broilers).
조사결과 1일 내지 42일에 0.1 중량% 또는 0.2 중량%의 생균을 보충한 사료를 먹인 육계의 체중이 대조군(구충제와 항생제를 먹인 군)과 비교하여 차이가 없는 것으로 나타났다(P > 0.05) 이와같은 결과를 통해, 피드프리™를 보충한 사료는 기초사료에 살충제 및 항생제를 보충한 것과 비교하여 육계의 성장에 효과적이라는 것을 보인다. 따라서 피드프리™는 항생제를 대체하여 닭의 생장을 촉진시켰다. The body weights of broilers fed feed supplemented with 0.1% or 0.2% by weight of live bacteria between 1 and 42 days showed no difference compared to the control (group fed with insecticide and antibiotics) (P> 0.05). The same results show that feed free ™ supplements are more effective for broiler chicken growth than supplemented with basic insecticides and antibiotics. Feedfree ™ therefore replaced antibiotics to promote chicken growth.
< < 실시예Example 6 > 6> 피드프리Feed free ™에 의한 악취제거 효과Odor removal effect by ™
축산폐수 및 축분, 인분, 산업 및 가정 유기성 폐기물, 오폐수 처리장, 하수종말처리장 등에서 발생하는 악취는 주로 지방산 계열의 악취와 암모니아 및 아민 등의 VOC류가 대부분이다. 공지의 실험방법(대한민국특허출원 제10-2001-0085666호 등 참조)과 동일한 방법으로 피드프리™가 악취를 제거하는지 확인하였고, 결과를 표 9에 보였다. Odors generated from livestock wastewater and livestock waste, phosphorus, industrial and household organic waste, wastewater treatment plant and sewage treatment plant are mainly fatty acid-based odors and VOCs such as ammonia and amines. It was confirmed whether FeedFree ™ removes odors in the same manner as a known test method (see Korean Patent Application No. 10-2001-0085666, etc.), and the results are shown in Table 9.
상기 표 9에서 보이듯이 피드프리™는 트리메틸아민을 6시간만에 95% 감소시켰으며, 암모니아는 97% 감소시켰다. As shown in Table 9, FeedFree ™ reduced trimethylamine by 95% in 6 hours and ammonia by 97%.
도 1은 브로모페놀 블루를 포함한 락토바실라이 MRS 배지(Lactobacilli MRS Broth; MRS, Difco) 평판배지에 형성된 분리된 락토바실러스 균주들의 콜로니 형태 및 주사형전자현미경(SEM) 세포 형태를 나타낸다. FIG. 1 shows colony and scanning electron microscopy (SEM) cell morphology of isolated Lactobacillus strains formed on Lactobacilli MRS Broth ( MRS , Difco) plates containing bromophenol blue.
도 2는 분리균주 WY-1(효모)의 주사형전자현미경(SEM) 세포 형태를 나타낸다. Figure 2 shows the scanning electron microscope (SEM) cell morphology of the isolate strain WY-1 (yeast).
도 3은 분리균주들을 랜덤 증폭 다형성 DNA(Random Amplified Polymorphic DNA; RAPD)를 이용한 동정 결과를 나타낸다. FIG. 3 shows the results of identification of the isolated strains using random amplified polymorphic DNA (RAPD).
도 4는 분리균주 WS-1의 16S rDNA 염기서열분석을 통한 계통도를 나타낸다. Figure 4 shows a schematic through 16S rDNA sequencing of the isolate strain WS-1.
도 5는 분리균주 W-1의 16S rDNA 염기서열분석을 통한 계통도를 나타낸다. Figure 5 shows a schematic diagram through 16S rDNA sequencing of the isolate strain W-1.
도 6은 분리균주 W-3의 16S rDNA 염기서열분석을 통한 계통도를 나타낸다. Figure 6 shows a schematic diagram through 16S rDNA sequencing of the isolate strain W-3.
도 7은 분리균주 W-4의 16S rDNA 염기서열분석을 통한 계통도를 나타낸다. Figure 7 shows a schematic diagram through 16S rDNA sequencing of the isolate strain W-4.
도 8은 분리균주 W-6의 16S rDNA 염기서열분석을 통한 계통도를 나타낸다. 8 shows a schematic diagram of 16S rDNA sequencing of the isolated strain W-6.
도 9는 분리균주 WY-1의 16S rDNA 염기서열분석을 통한 계통도를 나타낸다. 9 shows a schematic diagram of 16S rDNA sequencing of the isolated strain WY-1.
도 10은 형광생체염색법에 의해 각 pH 별 배지에서 피드프리™ 내 생균수를 측정한 결과를 나타낸다. Figure 10 shows the results of measuring the number of live bacteria in FeedFree ™ in the medium for each pH by fluorescence biostaining method.
도 11은 어병을 일으키는 미생물에 대한 피드프리™의 항균시험 결과를 나타낸다. 11 shows the results of the antimicrobial test of FeedFree ™ against microorganisms causing fish disease.
<110> WOONSUK FOOD CO.,LTD <120> Composition of mixed microorganism growing in super highly acidic condition <160> 10 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 gcatatcaat aagcggagga aaag 24 <210> 2 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 ggtccgtgtt tcaagacg 18 <210> 3 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 acgcaggcac 10 <210> 4 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 cccgtcagca 10 <210> 5 <211> 1417 <212> DNA <213> Lactobacillus casei <400> 5 acatggaacg agtggcggac gggtgagtaa cacgtgggta acctgccctt aagtggggga 60 taacatttgg aaacagatgc taataccgca tagatccaag aaccgcatgg ttcttggctg 120 aaagatggcg taagctatcg cttttggatg gacccgcggc gtattagcta gttggtgagg 180 taatggctca ccaaggcgat gatacgtagc cgaactgaga ggttgatcgg ccacattggg 240 cctgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc acaatggacg 300 caagtctgat ggagcaacgc cgcgtgagtg aagaaggctt 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SE510498C2 (en) * | 1996-02-14 | 1999-05-31 | Biofeed Thailand Co Ltd | Animal feed additive containing microorganisms |
KR100753012B1 (en) * | 1999-08-03 | 2007-08-30 | 가부시키가이샤 야쿠루트 혼샤 | Fermented milks and their production processes |
KR20020044046A (en) * | 2001-07-30 | 2002-06-14 | 비앤아이티(주) | A Nutraceuticals with various probiotics for treating intestinal disorders |
KR20040084167A (en) * | 2003-03-26 | 2004-10-06 | 주식회사 프로바이오닉 | Method and composition for preserving and cleaning food, such as meat-flesh products |
-
2009
- 2009-11-03 KR KR1020090105264A patent/KR100990768B1/en active IP Right Grant
-
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102320956B1 (en) * | 2020-06-12 | 2021-11-03 | 경희대학교 산학협력단 | Protein fermented composition with odor removed and method for preparing the same |
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