KR20090059569A - 베타-아밀로이드 생성의 억제를 위한 화합물 및 화합물의식별 방법 - Google Patents

베타-아밀로이드 생성의 억제를 위한 화합물 및 화합물의식별 방법 Download PDF

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Abstract

알츠하이머병과 같이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료에 유용한 화합물이 제공된다. 또한, 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 측정함으로써 이러한 화합물을 스크리닝하기 위한 방법이 제공된다. 또한, 세포에서 β-아밀로이드 생성 및 축전식 칼슘 진입을 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 투여함으로써, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함) 및 소교세포증의 진행 위험을 치료하거나 감소시키는 방법이 제공된다. 추가적으로, 세포에서 축전식 칼슘 진입을 억제하는 화합물의 진단적 유효량을 투여함으로써, 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병을 진단하기 위한 방법이 제공된다.
Figure P1020070126496
알츠하이머병, β-아밀로이드, CCE, 치료, 진단, 칼슘, 진입

Description

베타-아밀로이드 생성의 억제를 위한 화합물 및 화합물의 식별 방법{COMPOUND FOR INHIBITING BETA-AMYLOID PRODUCTION AND METHODS OF IDENTIFYING THE COMPOUNDS}
본 발명은 2005년 1월 7일에 출원된 미국 가출원 60/642,268호 및 2005년 4월 7일에 출원된 미국 가출원 60/669,055호의 우선권을 주장한다.
본 발명은 알츠하이머병과 같은 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료를 위한 화합물, 화합물의 식별을 위한 스크리닝 방법, 및 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및 진단을 위한 화합물의 사용 방법과 관련된 것이다.
알츠하이머병 (AD)은 65세 이상 인구의 대략 1 %를 괴롭히는 가장 일반적인 신경퇴행 장애이다. 질병의 특징적인 특색에는 비정상적인 타우(tau) 단백질로 구성되는 신경섬유의 엉킴, 쌍을 이룬 나선형 필라멘트, 뉴런 손실, 및 다중 신경전달물질 시스템의 변형이 포함된다. 마이크로튜뷸-관련 타우 단백질의 과인산화는 AD 뇌에서의 병원성 뉴런 예비-엉킴 단계의 알려진 징표(marker)이다 (문헌 [Tan et al., "Microglial Activation Resulting from CD40R/CD40L Interaction after Beta-Amyloid Stimulation," Science (1999) 286:2352-55]).
AD의 심각한 병원성 특징은 뇌 변연계와 관련된 광범위하고 밀집된 노인성 플라크(plaque)의 과잉이다. 이러한 플라크가 다중의 단백질을 함유하고 있다 할지라도, 그 핵(core)은 일차적으로 막상 글리코단백질인 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)로부터 단백질분해적으로 유도되는 39-43 아미노산의 단백질분해 단편인 β-아밀로이드 단백질이다. 또한, APP의 C-말단 단편 (CTF)은 AD에서 뉴런 내에 축적되는 것으로 알려져 있다.
β-아밀로이드는 590 내지 680 아미노산의 세포외 아미노 말단 도메인(domain)과 대략 55 아미노산의 세포질측 테일(tail)을 가지는 단일-막상 단백질인 APP로부터 유도된다. 크로모좀 21 상 APP 유전자로부터의 메신저 RNA는 호환 스플라이싱(alternative splicing)에 의해 8개의 가능한 등형(isoform)을 만들며, 뇌에서는 이중 3개 (695, 751 및 770 아미노산 등형)가 주종이다. APP는 α-, β- 및 γ-세크레타아제로 명명된 3종의 효소적 활성을 통한 단백질분해적 프로세싱(processing)을 받는다. 알파-세크레타아제는 β-아밀로이드 도메인의 아미노산 17에서 APP를 분열시킴으로써 분비를 위한 커다란 용해성의 아미노-말단 단편 α-APP를 방출한다. α-세크레타아제는 β-아밀로이드 도메인의 내부를 분열시키므로, 이 분열은 β-아밀로이드의 형성을 방해한다. 이와 달리, APP는 β-세크레타아제에 의해 β-아밀로이드의 아미노 말단으로 한정되도록 분열되어 용해성 아미노-말단 단편 β-APP를 생성시킬 수 있다. γ-세크레타아제에 의해 이어지는 APP 세포내 카르복시-말단 도메인의 분열은 다중 펩타이드의 생성을 초래하며, 이중 가장 보편적인 2가지는 40 아미노산 β-아밀로이드 (Aβ1-40) 및 42 아미노산 β-아밀로이드 (Aβ1-42)이다. Aβ1-40은 분비된 β-아밀로이드의 90-95 %를 구성하며, 뇌척수액(cerebrospinal fluid)으로부터 회수되는 주요 종이다 (문헌 [Seubert et al., Nature, 359:325-7, 1992]). 반대로, 분비된 β-아밀로이드의 10 % 미만이 Aβ1-42이다. Aβ1-42 생성의 상대적인 부족함에도 불구하고, Aβ1-42가 플라크에서 발견되는 주요 종으로서, 아마도 Aβ1-40에 비해 더 빠르게 불용성 아밀로이드 응집체를 형성하는 그의 능력으로 인하여 우선적으로 침착된다 (문헌 [Jarrett et al. Biochemistry, 32:4693-7, 1993]). 뇌에서의 β-아밀로이드의 비정상적인 축적은 뇌로부터 말단까지의 β-아밀로이드 제거의 감소 또는 β-아밀로이드의 과도한 생성에 기인하는 것으로 여겨진다. 다양한 연구에 의하면, β-아밀로이드의 과도한 생성은 APP의 과발현이나 APP의 변형된 프로세싱, 또는 β-아밀로이드 형성의 원인이 되는 γ-세크레타아제 또는 APP에서의 돌연변이에 기인하는 것으로 제안되고 있다.
따라서, β-아밀로이드 펩타이드는 AD의 병원생물학에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 여겨지고 있는데, AD의 가족성 형태(familial form)와 관련된 모든 돌연변이가 APP로부터의 이 펩타이드의 변형된 프로세싱을 초래하기 때문이다. 실제로, 뇌에서의 불용성의 또는 응집된 β-아밀로이드 섬유의 침착(deposit)은 대상의 유전적 소인에 관계없이 모든 형태 AD의 두드러진 신경병원학적 특징이다. AD 발병이 β-아밀로이드의 신경독성적 특성에 기인하는 것이라는 제안도 있다. β-아밀로이드의 세포독성은 설치류 뇌의 1차 세포 배양(primary cell culture)에서 먼 저 확립된 후 사람의 세포 배양에서 확립되었다. 매트슨(Mattcon) 등의 연구 (문헌 [J. Neurosci., 12:376-389, 1992])는 자극성 신경전달물질 글루타메이트의 존재 하에 β-아밀로이드가 세포내 칼슘의 즉각적인 병적인 증가를 초래한다는 것을 나타내고 있는데, 이것은 그의 크게 증가된 2차 메신저 활성으로 인하여 세포에 매우 유독한 것으로 여겨진다.
β-아밀로이드 생성 및 β-아밀로이드 침착과 동시에, β-아밀로이드 침착물내 및 주위에서의 전-염증성 사이토카인 및 급성기 반응물질(acute-phase reactant)의 생성을 포함하여 AD 뇌 내 염증성 경로의 강한 활성이 존재한다 (문헌 [McGeer et al., J. Leukocyte Biol., 65:409-15, 1999]). 뇌 고유의 선천성 면역 세포인 소교세포(microglia)의 활성이 이러한 염증성 단계와 긴밀하게 관련되어 있는 것으로 생각되고 있다. 반응성 소교세포가 염증성 단백질과 같은 전-염증성 사이토카인, 및 알파-1-항키모트립신, 변형 성장 인자 β, 아포지방단백 E 및 보체 인자와 같은 급성기 반응물질을 생성한다는 것이 증명된 바 있으며, 이들 모두가 β-아밀로이드 플라크에 집중되어 β-아밀로이드 플라크의 "응축" 또는 성숙을 촉진하고 (문헌 [Nilsson et al., J. Neurosci. 21:1444-5, 2001]), 높은 농도에서는 신경퇴행을 촉진하는 것으로 나타났다. 역학적 연구에 따르면 비-스테로이드 항-염증 약물 (NSAIDS)을 사용하는 환자는 50 % 만큼 감소된 AD 위험도를 가지는 것으로 나타났으며 (문헌 [Rogers et al., Neurobiol. Aging 17:681-6, 1996]), NSAIDS 치료를 받는 AD 환자의 사-후 평가에 따르면 위험도 감소는 활성화된 소교세포(microglia) 수의 감소와 관련된 것으로 증명되었다 (문헌 [Mackenzie et al., Neurology 50:986-90, 1998]. 또한, 알츠하이머병의 쥐 모델인 Tg APPsw 쥐에 NSAID (이부프로펜)가 주어졌을 때, 이 동물은 소교세포 활성의 감소와 관련된 β-아밀로이드 침착, 성상세포증(astrocytosis), 및 이영양성 신경돌기의 감소를 나타내었다 (문헌 [Lim et al., J. Neurosci. 20:5709-14, 2000]).
현재 AD의 치료는 제한적이다. 그러나, 아리셉트®(Aricept®) (도네페질), 엑셀론®(Exelon®) (리바스티그민), 레미닐®(Reminyl®) (갈란타민), 코그넥스®(Cognex®) (타크린) 및 나멘다®(Namenda®) (메만틴)를 포함하여 AD의 증상을 개선 또는 안정화하는 것으로 FDA에 의해 승인된 (Alzheimer's Disease Medications Fact Sheet: (July 2004) U.S. Department of Health and Human Services) 몇 가지 약물들이 있다. 현재 사용되고 있는 많은 약물들의 효과는 작다 (문헌 [Tariot et al., JAMA (2004), 291 : 317-24]). AD 치료는 임상적인 요구의 많은 부분을 충족하지 못한 채 남아 있다.
미국 특허 출원 2005009885호 (2005년 1월 13일) (뮬란(Mullan) 등)는 니발디핀을 사용하여 베타-아밀로이드 침착을 감소시키는 방법은 물론 니발디핀을 사용하여 뇌의 아밀로이드성 질병을 진단하는 방법을 개시하고 있다. 니모디핀은 치매의 치료를 위하여 연구된 바 있다 (문헌 [Fritze et al., J. Neural Transm . (1995) 46: 439- 453]; 및 [Forette et al. Lancet (1998) 352: 1347-1351]).
CCE를 중개하는 원형질막 저장-작용 칼슘 채널 작용제(agonist)의 식별을 통한 축전식 칼슘 진입(capacitative calcium entry) (CCE)의 확대가 AD 치료로 제안된 바 있다 (문헌 [Tanzi et al. Neuron (2000) 27: 561-572]). 미국 특허 출원 공개 20020015941호 (2002년 2월 7일)는 CCE를 강화할 수 있는 제제의 투여를 수반하는 AD 등 신경퇴행성 질병의 치료 방법을 개시하고 있다.
AD 환자에서 볼 수 있는 β-아밀로이드 생성 및 동시의 β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함), 소교세포-활성화 염증, 및 APP의 변형 또는 과발현에 치료의 촛점이 맞추어진, AD의 특질인 뇌 퇴행의 냉혹한 진행을 치료할 수 있는 화합물 식별의 필요성이 계속되고 있다.
<발명의 개요>
놀랍게도, 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)를 과발현하는 포유류 세포에서 축전식 칼슘 진입을 감소시키는 화합물이 세포 내 β-아밀로이드 생성을 감소시킬 수 있다는 것이 발견되었다. 이러한 화합물이 β-아밀로이드의 축적과 관련된 질병의 치료 방법에 사용될 수 있다는 것 역시 발견되었다.
세포외 공간으로부터의 Ca2 +의 진입은 하기 3 종류의 Ca2 + 투과성 게이트(gate)를 통하여 발생한다: 전압-의존 Ca2+ 채널, 리간드-게이트화(ligand-gated) Ca2+-투과성 양이온 채널, 및 소위 축전식 칼슘 진입 채널 (문헌 [Birabaumer, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 24; 93(26): 15195-15202 (1996)]). 축전식 칼슘 진입 (CCE)은 세포 Ca2 + 신호의 가장 보편적인 메카니즘 중 하나이며, 다른 칼슘 채널들과는 달리 세포 도처에 존재한다. 축전식 칼슘 진입은 가장 일반적으로는 소포체의 구성요소인 Ca2 + 저장 세포기관 내강(lumen) 내의 Ca2 + 농도가 떨어지는 것에 반응하여 세포외 칼슘의 유입을 초래하는 원형질막 칼슘 채널의 활성화를 수반 한다. 소포체는 축전식 칼슘 진입의 과정에서 원형질막 칼슘 채널에 신호를 주는 것으로 여겨진다. 축전식 칼슘 진입은 세포의 Ca2 + 저장량을, 예컨대 신경전달물질에 의한 일시적 수용체 활성화에 따라 필요한 만큼 빠른 속도로, 재충전한다 (문헌 [J. W. Putney, Jr., Molecular Inventions, 1:84, June, 2001]). APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포가 놀랍게도 CCE 억제제에 반응하여 β-아밀로이드 생성을 감소시킬 수 있었다. 이러한 CCE 억제제는 β-아밀로이드 생성의 감소 및 β-아밀로이드 축적 관련 질병의 치료에 유용하다.
배양된 포유류 세포, 예컨대 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을, 예컨대 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 22 %, 25 %, 28 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 또는 그 이상 감소시키는 화합물이 제공되며, 임의로 화합물은 또한 β-아밀로이드 생성을 감소시킨다. 이러한 화합물은 여기에서 개시되는 방법들에 사용될 수 있다.
또한, 세포를 시험 화합물에 노출시키는 것; 세포의 축전식 칼슘 진입 (CCE)을 측정하는 것 (여기서 세포는 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현한다); 및 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 화합물의 치료적 유용성의 징표로서, 노출되지 않은 세포와 비교하여 측정하였을 때, 세포에서 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 % 또는 그 이상의 CCE의 감소를 검출하는 것을 포함하는, 알츠하이머병 (AD)과 같이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료에 사용하기 위한 화합물의 시험관내 스크리닝 방법도 제공된다. 그 CCE 억제 능력이 시험되는 화합물은, 예컨대 약 1 nM 내지 10 mM, 약 500 nM 내지 50 μM, 또는 약 5 μM 내지 30 μM의 농도에서 스크리닝된다. 배양된 세포는, 예컨대 적어도 약 15분, 30분, 60분 또는 그 이상 동안 시험 화합물에 노출된다. CCE 분석시험에 사용될 수 있는 세포는 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포, 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)를 포함하여, 포유류 또는 비-포유류 세포에서 선택될 수 있다.
임의로 또는 추가적으로, β-아밀로이드 축적과 관련된 질병의 치료에 유용한 화합물을 식별하는 시험관내 분석시험 방법에서는, β-아밀로이드 생성을 감소시키는 화합물의 능력을 확인하는 분석시험이 수행된다. 예를 들어, 시험 화합물은 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에 노출되며; 세포 내 β-아밀로이드 생성이 측정되고; 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 화합물의 치료적 유용성의 징표로서, APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 예컨대 적어도 약 20 % 이상의 β-아밀로이드 생성 감소를 검출한다. 분석시험은 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포와 같이 업계에서 구입가능한, APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포를 사용하여 수행된다. 측정된 β-아밀로이드는 Aβ1-40, Aβ1-42, 또는 총 Aβ1-40 + Aβ1-42이다. 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 %, 또는 그 이상의 Aβ1-40 및/또는 Aβ1-42, 특히 총 Aβ1-40 + Aβ1-42의 생성 감소는 알츠하이머 아밀 로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료함에 있어서의 화합물의 치료적 효과를 나타내준다. β-아밀로이드 농도는 예컨대 세포내적으로 또는 예컨대 배양 배지에서 세포외적으로 측정될 수 있다.
그의 CCE를 억제하는 능력은 물론 Aβ 생성을 감소시키는 능력이 시험되는 화합물은 예컨대 약 1 nM 내지 10 mM, 약 500 nM 내지 50 μM, 또는 약 5 μM 내지 30 μM의 농도 범위에서 스크리닝된다.
또한, 예컨대 해당 세포를 포함하는 배양 배지에서 측정될 수 있을 경우, 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 또는 그 이상으로 CCE를 감소시키고, 및/또는 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 %, 또는 그 이상으로 β-아밀로이드 생성을 감소시키는 하나 이상 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것에 의한, AD와 같은 해당 질병으로 고통받는 동물 또는 인간에서의 β-아밀로이드 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 방법은 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함) 및 소교세포증(micorgliosis)을 감소시키는 것 중 하나 이상을 포함한다. AD와 같이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적을 가지는 대부분의 질병은 만성이고, 진행성이며, 난치성인 뇌의 치매이므로, 하나 이상의 활성 제제를 사용한 치료 기간은 임의로 동물 또는 인간의 일생까지 지속될 수 있을 것으로 생각된다.
또한, 동물 또는 인간에서 AD와 같은 알츠하이머 아밀로이드 뇌 축적과 관련 된 질병의 진단하거나, 또는 동물 또는 인간이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적을 진행시킬 위험이 있는지의 여부를 확인하기 위한 방법이 제공되며, 방법은 하기를 포함한다: 동물 또는 인간의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF)과 같은 체액에서 β-아밀로이드 농도의 제1 측정을 수행하는 것; 예컨대 해당 세포를 포함하는 배양 배지에서 측정되었을 때, 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 또는 그 이상으로 CCE를 감소시키고, 및/또는 임의로 예컨대 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 % 이상으로 β-아밀로이드 생성을 감소시키는 화합물 단위 투여량 형태의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것; 나중에, 동물 또는 인간의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF)에서 β-아밀로이드 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및 제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것. 제1 측정과 비교한 제2 측정에서의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF) 내 β-아밀로이드 또는 그의 단편 농도의 변화, 특히 농도의 증가는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진행 또는 가능성이 진단될 위험성이 있음을 나타내준다.
또한, 외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간에서 두부 손상을 치료하는 방법, 및 임의로 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함) 또는 소교세포증의 위험을 감소시키는 방법이 제공되며, 방법은 예컨대 해당 세포를 포함하는 배양 배지에서 측정되었을 때, 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 또는 그 이상으로 CCE를 감소시키고, 및/또는 임의로 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 % 이상으로 β-아밀로이드 생성을 감소시키는 화합물 단위 투여량 형태의 치료적 유효량을 두부 손상 직후 동물 또는 인간에 투여하는 것, 및 다음에 임의로 이후의 처방된 시간 기간 동안 해당 화합물로 치료를 계속하는 것을 포함한다.
여기에 개시된 방법에 따라 사용될 수 있는 APP 또는 그의 단편 과발현 세포에는 비제한적으로 7W WT APP751 중국 햄스터 난소 세포를 포함하는 포유류 또는 비-포유류 세포가 포함된다. 과발현되는 APP에는 비제한적으로 APP751이 포함될 수 있다. CCE 변화의 측정에 사용될 수 있는 세포에는 상피 또는 내피 세포와 같은 비-포유류 및 포유류 세포가 포함된다.
다양한 화합물들 뿐만 아니라, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및 진단에서의 그의 사용 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 화합물은 임의로 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀이 아닌 다른 디하이드로피리딘이다. 다른 구현예에서, 화합물은 이미다졸 화합물이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 이소퀴놀린 알칼로이드 화합물이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 칼모듈린-매개 효소 활성화 억제제이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF) 수용체의 키나아제 활성 억제제이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 NF-kB 활성화 억제제이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 디테르펜 또는 트리테르펜 화합물이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 퀴나졸린 화합물이다. 일 구현예에서, 화합물은 세스퀴테르펜 락톤이다. 다른 구현예에서, 화합물은 IKK-2 억제제이다. 바람직한 일 구현예에서, 상기 화합물은 예를 들어, 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포의 배지에서 적어도 약 10 %, 또는 그 이상으로 CCE를 감소시키며, 및/또는 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 적어도 약 20 %, 또는 그 이상으로 β-아밀로이드 생성을 감소시킨다. 또한, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병을 포함하여 여기에서 개시된 질병 치료용 약제 제조에서의, 여기에서 개시된 화합물의 용도가 제공된다.
일 구현예에서, 여기에 개시된 구현예의 알츠하이머 아밀로이드 뇌 축적 관련 질병의 치료 및 진단을 위하여 사용될 수 있는 화합물이 제공되며, 비제한적으로 하기를 포함한다:
SKF96365 (1-[베타-[3-(4-메톡시페닐)프로폭시]-4-메톡시페네틸]-1H-이미다졸 하이드로클로라이드), 에코나졸, 클로트리마졸;
SR 33805 (3,4-디메톡시-N-메틸-N-[3-[4-[[1-메틸-3-(1-메틸에틸)-1H-인-돌-2-일]설포닐]페녹시]프로필]벤젠에탄아민 옥살레이트);
로페르아미드;
테트란드린;
R24571 (1-[비스(p-클로로페닐)메틸]-3-[2-(2,4-디-클로로-β-(2,4-디클로로벤질-옥시)페네틸)]-이미다졸륨 클로라이드);
암로디핀;
니트렌디핀;
MRS 1845 (N-프로파르길니트렌디핀);
티르포스틴 A9;
BTB 14328 (디에틸 4-(4-클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
CD 04170 (디에틸 4-{5-[3,5-디(트리플루오로메틸)페닐]-2-퓨릴}-2,6-디메틸-1,4-디하이드로-피리딘-3,5-디카르복실레이트);
HTS 01512 (1-싸이클로헥실-5-페닐-1,6-디하이드로-2,3-피리딘디온);
HTS 07578 (4-(1,3-디페닐-1H-피라졸-4-일)-2-옥소-6-페닐-1,2-디하이드로-3-피리딘카르보니트릴);
HTS 10306 (2-옥소-6-페닐-4-(2-티에닐)-1,2-디하이드로-3-피리딘카르보니트릴);
JFD 01209 (디에틸 4-(4-브로모페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03266 (디에틸 2,6-디메틸-4-(4-니트로페닐)-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03274 (디에틸 4-(3-클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03282 (디에틸 2.6-디메틸-4-(4-메틸페닐)-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03292 (4-(3,4-디클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르보니트릴);
JFD 03293 (디메틸 4-(3,4-디클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘- 3,5-디카르복실레이트);
JFD 03294 (디에틸 4-(3,4-디클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03305 (디에틸 4-(2-클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03311 (디에틸 2,6-디메틸-4-(2-니트로페닐)-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
JFD 03318 (디에틸 4-(4-플루오로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
PD 00463 (1-[4-(4-클로로페녹시)페닐]-4-페닐디하이드로피리딘-2,6(1H,3H)-디온);
RJC 03403 (디에틸 4-(2,4-디클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로-3,5-피리딘디카르복실레이트);
RJC 03405 (디에틸 2,6-디메틸-4-{5-[2-(트리플루오로메틸)페닐]-2-퓨릴}-1,4-디하이드로-3,5-피리딘디카르복실레이트);
RJC 03413 (디에틸 4-(2-클로로-4-메톡시페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로-3,5-피리딘디카르복실레이트);
RJC 03423 (디메틸 4-(2,4-디클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로-3,5-피리딘디카르복실레이트);
SEW 02070 (디메틸 4-{5-[2-(메톡시카르보닐)-3-티에닐]-2-퓨릴}-2,6-디메틸 -1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
XBX 00343 (디에틸 2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트);
R-니굴디핀,
(S)-(+)-니굴디핀
아르테미시닌;
셀라스트롤;
6-아미노-4-(4-페녹시페닐에틸아미노)퀴나졸린;
이소헬레닌;
카메바카우린;
파르테놀라이드; 및
IKK-2 억제제 IV;
또는 그의 염, 에스테르, 전구약물, 입체이성질체, 또는 유도체.
바람직한 것은 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 예를 들어 10 % 이상 CCE를 감소시키고, 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 적어도 약 20 % 이상 β-아밀로이드 생성, 예컨대 총 Aβ1-40 및 Aβ1-42의 생성을 감소시키는 화합물들이다.
일 구현예에서, 화합물은 하기 화합물들 중 하나이다:
HTS 01512 (1-싸이클로헥실-5-페닐-1,6-디하이드로-2,3-피리딘디온):
Figure 112007088061992-PAT00001
;
BTB 14328 (디에틸 4-(4-클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르복실레이트):
Figure 112007088061992-PAT00002
;
CD 04170 (디에틸 4-{5-[3,5-디(트리플루오로메틸)페닐]-2-퓨릴}-2,6-디메틸-1,4-디하이드로-피리딘-3,5-디카르복실레이트):
Figure 112007088061992-PAT00003
;
JFD 03292 (4-(3,4-디클로로페닐)-2,6-디메틸-1,4-디하이드로피리딘-3,5-디카르보니트릴):
Figure 112007088061992-PAT00004
;
PD 00463 (1-[4-(4-클로로페녹시)페닐]-4-페닐디하이드로피리딘-2,6(1H,3H)-디온):
Figure 112007088061992-PAT00005
다른 구현예에서, 화합물은 하기 화합물들 중 하나이다:
디에틸 4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00006
디에틸 4-(2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00007
디-터트-부틸 4-(2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00008
디에틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(2-니트로페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00009
디-터트-부틸 4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00010
디-터트-부틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(2-니트로페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00011
디-터트-부틸 4-(4-브로모-2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00012
비스(2-메톡시에틸) 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘- 3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00013
디에틸 4-(5-브로모-2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트:
Figure 112007088061992-PAT00014
다른 구현예에서, SKF96365, 에코나졸, 클로트리마졸, SR 33805, 로페르아미드, 테트란드린, R24571, 암로디핀, 니트렌디핀, MRS 1845, 티르포스틴 A9, BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03266, JFD 03274, JFD 03282, JFD 03292, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305, JFD 03311, JFD 03318, PD 00463, RJC 03403, RJC 03405, RJC 03413, RJC 03423, SEW 02070, XBX 00343, R-니굴디핀, (S)-(+)-니굴디핀, 아르테미시닌, 셀라스트롤, 6-아미노-4-(4-페녹시페닐에틸아미노)퀴나졸린, 이소헬레닌, 카메바카우린, 파르테놀라이드, IKK- 2 억제제 IV, 2-23, 2-27, 2-28, 2-29, 2-32, 2-33, 3-34, 3-38, 3-41, 여기의 표 1, 2 또는 3에 기재된 바와 같은 화합물, 또는 화학식 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, 또는 XI의 화합물, 또는 여기에서 개시된 다른 화합물, 또는 그의 염, 전구약물 또는 유도체와 같은 하나 이상 활성 제제의 치료적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함하는, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료를 위한 방법이 제공된다. 바람직하게는, 활성제는 알츠하이머 아밀로이드 뇌 축적의 병태생리학적 효과를 저지하여, 예컨대 해당 질병으로 고통받는 동물 또는 인간에서 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 및/또는 소교세포증을 감소시킬 수 있다.
다른 구현예에서는, 동물 또는 인간에서의 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 방법이 제공되는 바: 동물 또는 인간의 말초 순환(peripheral circulation)에서 β-아밀로이드의 혈장, 소변, 혈청, 전혈, 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제1 측정을 수행하는 것; SKF96365, 에코나졸, 클로트리마졸, SR 33805, 로페르아미드, 테트란드린, R24571, 암로디핀, 니트렌디핀, MRS 1845, 티르포스틴 A9, BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03266, JFD 03274, JFD 03282, JFD 03292, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305, JFD 03311, JFD 03318, PD 00463, RJC 03403, RJC 03405, RJC 03413, RJC 03423, SEW 02070, XBX 00343, R-니굴디핀, (S)-(+)-니굴디핀, 아르테미시닌, 셀라스트롤, 6-아미노-4-(4-페녹시페닐에틸아미노)퀴나졸린, 이소헬레닌, 카메바카우린, 파르테놀라이드, IKK-2 억제제 IV, 2-23, 2-27, 2-28, 2-29, 2-32, 2-33, 3- 34, 3-38, 3-41, 여기의 표 1, 2 또는 3에 기재된 바와 같은 화합물, 또는 화학식 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, 또는 XI의 화합물, 또는 여기에서 개시된 다른 화합물, 또는 그의 염, 전구약물 또는 유도체로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상 활성 제제 단위 투여량 형태의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것; 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및 제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것을 포함하고, 여기서 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 변화, 특히 농도의 증가는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 가능성을 나타내준다.
추가적인 구현예에서, SKF96365, 에코나졸, 클로트리마졸, SR 33805, 로페르아미드, 테트란드린, R24571, 암로디핀, 니트렌디핀, MRS 1845, 티르포스틴 A9, BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03266, JFD 03274, JFD 03282, JFD 03292, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305, JFD 03311, JFD 03318, PD 00463, RJC 03403, RJC 03405, RJC 03413, RJC 03423, SEW 02070, XBX 00343, R-니굴디핀, (S)-(+)-니굴디핀, 아르테미시닌, 셀라스트롤, 6-아미노-4-(4-페녹시페닐에틸아미노)퀴나졸린, 이소헬레닌, 카메바카우린, 파르테놀라이드, IKK-2 억제제 IV, 2-23, 2-27, 2-28, 2-29, 2-32, 2-33, 3-34, 3-38, 3-41, 여기의 표 1, 2 또는 3에 기재된 바와 같은 화합물, 또는 화학식 I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII, IX, X, 또는 XI의 화합물, 또는 여기에서 개시된 다른 화합물, 또는 그 의 염, 전구약물 또는 유도체로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상 활성 제제 단위 투여량 형태의 치료적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함하는, 외상성 뇌 손상을 치료하기 위한 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 활성 제제의 투여는 손상에 이어서 즉시 시작된다. 일 구현예에서, 화합물은 β-아밀로이드 생성, Aβ 침착, β-아밀로이드 신경독성 및/또는 소교세포증의 위험을 감소시킨다.
본 발명의 방법에 따라 뇌 아밀로이드성 질병으로 고통받거나 또는 외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간에게 예컨대 단위 투여량 형태로 투여되는 것은 물론, 동물 또는 인간에서 뇌 아밀로이드성 질병의 진행 및/또는 진단 위험성을 확인하기 위한 목적으로 투여되는 화합물의 치료적 유효량은, 예를 들어 일당 약 0.05 mg 내지 20 mg, 일당 약 2 mg 내지 15 mg, 일당 약 4 mg 내지 12 mg, 또는 일당 약 8 mg의 범위일 수 있다. 일 구현예에서 1일 투여량은 단일의 단위 투여량 또는 일당 2, 3 또는 4 단위 투여량으로 나누어서 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 적어도 약 10 % 이상으로 축전식 칼슘 진입을 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 동물 또는 사람에 투여하는 것을 포함하는, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 방법이 제공된다. 임의로, 세포는 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포이거나, 또는 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 선택된다. 일 구현예에서, 화합물은 단위 투여량당 약 0.02 내지 1000 mg; 또는 단위 투여량당 약 0.5 내지 500 mg의 양으로 투여된다. 일 구현예 에서, 화합물은 니발디핀 또는 그의 유리 염기 또는 약학적으로 허용가능한 염이 아닌 다른 것이다. 일 구현예에서, 화합물은 2005년 1월 13일에 공개된 미국 특허 공개 번호 2005/0009885호에 개시된 것이 아닌 다른 것이다. 다른 구현예에서, 화합물은 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀이 아닌 다른 것이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염 또는 유리 염기가 아닌 다른 것이다. 또 다른 구현예에서, 화합물은 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀 또는 그의 전구약물이 아닌 다른 것이다.
또 다른 구현예에서는,동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 방법이 제공되는 바: 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 소변, 혈청, 전혈, 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제1 측정을 수행하는 것; 세포에서 적어도 약 10 % 또는 그 이상으로 축전식 칼슘 진입을 감소시키는 화합물의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것; 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및 제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것을 포함하며, 여기서 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 변화는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 가능성을 나타내준다. 세포는 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포로부터 선택되거나, 또는 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 선택될 수 있다. 일 구현예에서, 화합물은 니발디핀 또는 그의 유리 염기 또는 약학적으로 허용가능한 염이 아닌 다른 것이다. 일 구현예에서, 화합물은 2005년 1월 13일에 공개된 미국 특허 공개 번호 2005/0009885호에 개시된 것이 아닌 다른 것이다.
또 다른 구현예에서, APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포; 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)과 같은 세포에서 적어도 약 10 % 또는 그 이상으로 축전식 칼슘 진입을 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료 방법이 제공된다. 일 구현예에서, 화합물은 니발디핀 또는 그의 유리 염기 또는 약학적으로 허용가능한 염이 아닌 다른 것이다. 일 구현예에서, 화합물은 2005년 1월 13일에 공개된 미국 특허 공개 번호 2005/0009885호에 개시된 것이 아닌 다른 것이다. 화합물을 사용하는 치료 기간은, 예컨대 약 1시간 내지 1주; 약 1주 내지 6개월; 또는 약 6개월 내지 2년간 지속된다.
알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병은, 예컨대 알츠하이머병, 뇌 아밀로이드 혈관병, 아밀로이드성 유전성 뇌 출혈 더치-유형(Dutch-type), 다른 유형의 가족성 알츠하이머병 및 가족성 뇌 알츠하이머 아밀로이드 혈관병이다. 치료되거나 진단될 수 있는 뇌 아밀로이드성 질병에는 전염성 해면상뇌증, 스크래피, 외상성 뇌 손상, 뇌 아밀로이드 혈관병, 및 게르츠만-스트라우슬러-쉐잉커(Gerstmann-Straussler-Scheinker) 증후군이 포함된다.
본 발명에 따라 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료를 위한 화합물, 화합물의 스크리닝 방법, 및 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및 진단을 위한 화합물의 사용 방법이 제공될 수 있게 되었다.
놀랍게도, 포유류 세포, 예컨대 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 감소시키는 화합물이 포유류 세포 내 β-아밀로이드 생성 역시 감소시킬 수 있으며, 개체에서 β-아밀로이드의 축적과 관련된 질병의 진단 및 치료에 사용될 수 있다는 것이 발견되었다. 화합물 및 화합물을 포함하는 약학적 조성물이 제공되는 바, 동물 및 인간에서 알츠하이머병 (AD)과 같은 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 소정 질병의 특질인 뇌 퇴행의 필연적인 진행을 치료하기 위해 일 구현예에서 사용될 수 있다.
정의
여기에서 사용되는 "알츠하이머 아밀로이드"라는 용어는, 예컨대 아밀로이드 전구체 단백질 (APP)로부터 단백질분해적으로 유도되는 β-아밀로이드 아미노산 단편으로 규정된다. β-아밀로이드 아미노산 단편에는, β-아밀로이드 서열의 예컨대 약 5 내지 43 또는 5 내지 47의 연속적인 아미노산이 포함될 수 있다. 여기에서 사용되는 "β-아밀로이드", "β-아밀로이드 단백질" 및 "Aβ"라는 용어는 동물 또는 인간의 뇌에 축적되는 알츠하이머 아밀로이드와 호환적으로 사용된다.
여기에서 사용되는 "APP 또는 그의 단편을 과발현하는" 세포라는 어구는 아밀로이드 전구체 단백질, 또는 그의 단편을 과발현하는 세포를 말하며, 바람직한 일 구현예에서는 β-아밀로이드 서열 및 β 및 γ 세크레타아제 분열좌(cleavage site)를 포함한다. APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포는 바람직하게는 그것이 발현되는 세포에서 β-아밀로이드를 생성하는 APP 또는 그의 단편을 발현한다.
여기에서 사용되는 "아밀로이드성 질병"이라는 용어는 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병을 포함한다.
여기에서 사용되는 "알킬"이라는 용어는, 다르게 특정되지 않는 한, C1 -22의 포화된 선형, 분지형, 또는 싸이클릭, 1차, 2차, 또는 3차 탄화수소를 포함하며, 구체적으로는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 싸이클로프로필, 부틸, 이소부틸, 세크부틸, t-부틸, 펜틸, 싸이클로펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실, 이소헥실, 싸이클로헥실, 싸이클로헥실메틸, 헵틸, 싸이클로헵틸, 옥틸, 싸이클로-옥틸, 도데실, 트리데실, 펜타데실, 이코실, 헤미코실, 및 데코실을 포함한다. 알킬 기는, 예를 들어 여기에 참조로써 개재되어 있는 문헌 [Greene, et at, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시되어 있는 바와 같이 필요에 따라 보호되지 않거나 또는 보호된, 예컨대 할로겐 (플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도), 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 헤테로싸이클, 페닐, 아릴, 포스폰산, 포스페이트, 또는 포스포네이트로 임의로 치환될 수 있다.
여기에서 사용되는 "저급 알킬"이라는 용어는, 다르게 특정되지 않는 한, C1 내지 C4의 포화된 선형, 분지형, 또는 적당할 경우 싸이클릭 (예컨대 싸이클로프로 필)의 알킬 기를 포함하며, 이들은 임의로 치환된다.
여기에서 사용되는 "아랄킬"이라는 용어는 다르게 특정되지 않는 한 알킬 기를 통하여 분자에 연결된 아릴 기를 포함한다.
여기에서 사용되는 "알카릴"이라는 용어는 다르게 특정되지 않는 한 아릴 기를 통하여 분자에 연결된 알킬 기를 포함한다.
여기에서 사용된 "아릴 에테르"라는 용어는 다르게 특정되지 않는 한 에테르 기를 통하여 분자에 연결된 아릴 기를 포함한다.
여기에서 사용된 "알킬 에테르"라는 용어는 다르게 특정되지 않는 한 에테르 기를 통하여 분자에 연결된 알킬 기를 포함한다.
여기에서 사용된 "아릴 티오에테르"라는 용어는 다르게 특장되지 않는 한 황을 통하여 분자에 연결된 아릴 기를 포함한다.
여기에서 사용된 "알킬 티오에테르"라는 용어는 다르게 특정되지 않는 한 황을 통하여 분자에 연결된 알킬 기를 포함한다.
"아미노"라는 용어는 "-N(R)2" 기를 포함하며, 1차 아민, 및 예컨대 알킬, 아릴, 헤테로싸이클, 및 또는 설포닐 기로 임의로 치환된 2차 및 3차 아민을 포함한다. 따라서, (R)2는 2개의 수소, 하나의 수소와 하나의 알킬, 하나의 수소와 하나의 아릴, 하나의 수소와 하나의 알케닐, 2개의 알킬, 2개의 아릴, 2개의 알케닐, 하나의 알킬과 하나의 알케닐, 하나의 알킬과 하나의 아릴, 또는 하나의 아릴과 하나의 알케닐을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
탄소 원자 범위가 언급되는 경우, 그것은 언제나 범위의 모든 구성요소를 각각 개별적으로 포함한다. 비제한적인 예로서, "C1-C10 알킬"이라는 용어는 예컨대 C1-C10 알킬이 선형, 분지형 및 적당할 경우 싸이클릭 C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9 및 C10 알킬 작용기를 포함하는 것과 같이, 개별적으로 군의 각 구성요소를 포함하는 것으로 간주된다.
"아미도"라는 용어는 "-C(O)N(R)2"의 구조에 의해 표시되는 성분을 포함하며, 여기서 R은 임의로 치환된 H, 알킬, 알케닐 및 아릴을 포함할 수 있다.
여기에서 사용되는 "보호된"이라는 용어는, 다르게 규정되지 않는 한, 그의 추가적인 반응을 방지하기 위하여 또는 다른 목적으로 산소, 질소, 또는 인 원자와 같은 원자에 첨가되는 기를 포함한다. 매우 다양한 산소 및 질소 보호 기가 유기 합성 업계의 숙련자에게 알려져 있다.
여기에서 사용되는 "아릴"이라는 용어는, 다르게 특정되지 않는 한, 각 고리에 8개 까지의 구성요소를 가지며 하나 이상의 고리는 방향족인, 안정한 모노싸이클릭, 비싸이클릭, 또는 트리싸이클릭 탄소 고리를 포함한다. 예에는 비제한적으로 벤질, 페닐, 비페닐, 또는 나프틸이 포함된다. 아릴 기는 예를 들어 문헌 [Greene, et at, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, Second Edition, 1991]에 교시되어 있는 바와 같이 업계 숙련자에 알려져 있으며 필요에 따라 보호되지 않거나 또는 보호된, 할로겐 (플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도), 하이드록시, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니 트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트, 또는 포스포네이트를 포함하는 하나 이상의 성분으로 치환될 수 있다.
여기에서 사용되는 "할로"라는 용어는 클로로, 브로모, 요오도, 및 플루오로를 포함한다.
"알케닐"이라는 용어는 하나 이상의 이중 결합을 가지는 C2 -22의 선형, 분지형, 또는 싸이클릭 탄화수소를 포함한다. 예에는 비제한적으로 비닐, 알릴, 및 메틸-비닐이 포함된다. 알케닐 기는 알킬 기에 대하여 상기한 바와 동일한 방식으로 임의 치환될 수 있다.
"알키닐"이라는 용어는 하나 이상의 삼중 결합을 가지는 C2 -22의 선형 또는 분지형 탄화수소를 포함한다. 알키닐 기는 알킬 기에 대하여 상기한 바와 동일한 방식으로 임의 치환될 수 있다.
"알콕시"라는 용어는 -O-알킬 구조의 성분을 포함한다.
"헤테로싸이클" 또는 "헤테로싸이클릭"이라는 용어는 탄소 원자, 및 비제한적으로 O, S, N 및 P를 포함하는 1 내지 3 헤테로원자로 구성되는, 포화, 불포화, 또는 방향족의 안정한, 5 내지 7 구성요소의 모노싸이클릭 또는 8 내지 11 구성요소의 비싸이클릭 헤테로싸이클릭 고리를 포함하며; 여기서 질소 및 황 헤테로원자가 임의로 산화될 수 있거나, 및/또는 질소 원자가 4차화되고 상기 규정된 헤테로사이클릭 고리 중 어느 것이 벤젠 고리에 융합된 모든 비싸이클릭 기를 포함한다. 헤테로싸이클릭 고리는 어떠한 헤테로원자 또는 탄소 원자에도 결합될 수 있으며, 이것은 안정한 구조의 생성으로 귀결된다. 헤테로싸이클릭 기의 비제한적인 예에는 피롤릴, 피리미딜, 피리디닐, 이미다졸릴, 피리딜, 퓨라닐, 피라졸, 옥사졸릴, 옥시란, 이소옥사졸릴, 인돌릴, 이소인돌릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 퀴놀릴, 테트라졸릴, 본조퓨라닐, 티오프렌, 피페라진, 및 피롤리딘이 포함된다.
"아실"이라는 용어는 식 R'C(O)의 기를 포함하며, 여기서 R'는 H, 또는 선형, 분지형, 또는 싸이클릭 치환 또는 비치환의 알킬 또는 아릴이다.
여기에서 사용되는 "숙주"라는 용어는, 다르게 특정되지 않는 한, 여기에서 개시되는 방법을 사용하여 모두 치료 또는 진단될 수 있는, 치료를 필요로 하는 포유류 (예컨대 고양이, 개, 말, 쥐 등), 인간, 또는 다른 생물체를 포함한다.
여기에서 사용되는 "치료"라는 용어는 질병 또는 장애의 증상 하나 이상이 개선되거나 또는 다르게 유익하게 변화되는 방식을 포함한다.
여기에서 사용되는 "약학적으로 허용가능한 염"이라는 용어는, 다르게 특정되지 않는 한, 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 등이 없이 숙주의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며, 합리적인 이익/위험 비율에 부합하고, 의도한 용도에 효과적인 염을 포함한다. 염은 조성물 중 하나 이상 화합물의 최종 분리 및 정제 동안에 그대로, 또는 유리 염기 작용물(function)을 적합한 유기산과 반응시킴으로써 개별적으로 제조될 수 있다. 여기에서는 예컨대 원하는 화합물의 합성 및/또는 정제에서와 같이, 약학적으로 비-허용가능 산 및 염기 역시 쓸모가 있다. 그러한 염의 비제한적인 예는 (a) 무기염 (예컨대 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산 등)을 사용하여 형성된 산 부가염, 및 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 숙신산, 아스코르브산, 벤조산, 탠산 등과 같은 유기염을 사용하여 형성된 염; (b) 아연, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄, 구리, 니켈 등과 같은 금속 양이온을 사용하여 형성된 염기 부가염; (c) (a)와 (b)의 조합이다.
여기에서 사용되는 "약학적으로 허용가능한 에스테르"라는 용어는, 다르게 특정되지 않는 한, 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 등이 없이 숙주의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며, 합리적인 이익/위험 비율에 부합하고, 그의 의도한 용도에 효과적인 하나 이상 화합물의 에스테르를 포함한다.
여기에서 사용되는 "약학적으로 허용가능한 전구약물"은, 다르게 특정되지 않는 한, 건전한 의학적 판단의 범위로, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 등이 없이 숙주의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며, 합리적인 이익/위험 비율에 부합하고, 의도한 용도에 효과적인, 조성물 중 하나 이상 화합물의 전구약물을 포함한다. 약학적으로 허용가능한 전구약물은, 가능한 경우, 조성물 중 하나 이상 화합물의 양쪽성이온 형태도 포함한다. "전구약물"이라는 용어는, 예컨대 혈액에서의 가수분해에 의해 생체내에서 빠르게 변환되어 모화합물(parent compound)을 생성하는 화합물을 포함한다.
여기에서 사용되는 "거울이성질적으로 보강된"이라는 용어는 하나의 거울이성질체가 과량으로 존재하는 것으로서, 바람직하게는 100 %를 포함하여 95 % 이상의 범위까지, 및 더 바람직하게는 98 % 이상 존재하는 거울이성질 혼합물인 화합물 을 말한다.
여기에서 사용되는 "임의로 치환된"이라는 용어는 치환되거나 비치환되는 것을 포함한다. 하나의 기가 "임으로 치환되는" 것으로 언급될 경우, 해당 기는 예컨대 할로겐, 하이드록실, 아미노, 알킬에스테르, 아릴에스테르, 실릴에스테르, 알킬아미노, 아릴아미노, 알킬아미도, 아릴아미도, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 알케닐, 알키닐, 헤테로싸이클, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트, 보론산, 또는 보레이트로 임의로 치환될 수 있다.
시험관내 분석시험 방법
일 구현예에서, β-아밀로이드 축적과 관련된 질병의 치료 및 진단 방법에 유용한 화합물의 스크리닝을 위한 방법이 제공되며, 여기서 방법은 화합물이 배제된 CCE 측정과 비교하여 시험 화합물에 노출된 세포에서의 CCE 측정의 감소를 검출하는 것을 포함한다. CCE를 감소시키는 이러한 화합물이 β-아밀로이드를 과발현하는 포유류 세포에서 그 단백질의 생성을 감소시키는 데에 유용하며, 알츠하이머병과 같이 β-아밀로이드 생성과 관련된 질병의 치료에서 치료적으로 및 진단적으로 유용하다는 것이 발견되었다.
일 구현예에서, 방법은 세포를 시험 화합물에 노출시키는 것; 세포에서 축전식 칼슘 진입 (CCE)을 측정하는 것; 및 β-아밀로이드의 축적과 관련된 질병의 치료 또는 진단에서의 화합물의 유효성의 징표로서, 화합물에 노출되지 않은 대조구 세포와 비교하여 CCE의 감소를 식별하는 것을 포함한다. 배양된 세포는 임의로 아밀로이드 전구체 단백질 (APP) 또는 그의 단편을 과발현하는 세포이다. 분석시험 에서, 노출된 것과 노출되지 않은 세포의 CCE 측정 비교를 가능케 하기 위하여, 화합물에 노출되지 않은 세포에서의 CCE 측정이 대조구로서 얻어질 수 있다. 예를 들어, 화합물에 노출되지 않은 세포와 비교하여 노출된 배양 세포에서의 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 % 이상의 CCE 감소는 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 화합물의 잠재적인 치료적 효과를 나타내 준다.
화합물에 대한 CCE 분석시험은 그것이 속성의 분석시험이기 때문에 유리하다. 다수의 샘플을 사용하여 고부피 분석시험이 수행될 수 있다. 적당한 샘플 공급 장치와 검출기를 사용하여 1000, 10,000 또는 그 이상 샘플의 마이크로어레이(microarray)를 사용하는 것과 같이, 업계에 알려진 속성의 조합형 방법이 사용될 수 있다. 유리하게도, 분석시험은, 예컨대 약 1시간 안에 완료될 수 있다.
예를 들어, 일 구현예에서는 96개 웰(well)의 플레이트가 사용된다. 세포는 칼슘 이온을 제거하기 위하여, 예컨대 EDTA로 세척되고, 오레건 유진(Eugene, OR)의 몰큘라 프로브즈(Molecular Probes) 사로부터 구입가능한 플루오르퓨어(FlourPure)와 같은 형광성 Ca2 + 표지자로 배양된다. 세포는 바람직하게는 세척되어 HBSS (행크 평형염액(Hank's balanced salt solution)와 같이 칼슘 이온이 없는 배양 배지에 넣어진다. 배양 배지 내 세포 샘플과 예컨대 90개의 서로 다른 화합물이 플레이트 상의 96개의 웰에서 조합되며, 대조구 웰이 플레이트 상에 포함된다. 대조구는 예컨대 화합물 샘플에 사용된 것과 같은 동일 단위 부피의 버퍼 또 는 물과 조합된 배양 내 세포의 샘플이다. 화합물은 통상적인 시험에서 결정될 수 있는 시간량 동안 세포와 함께 배양된다. 일반덕으로, 약 15분이면 충분하다. 바탕(baseline) 형광 측정이 수행된다. 세포내 Ca2 +를 고갈시키기 위하여 탑시가르긴(thapsigargin)이 투여 사용된다. CaCl2가 HBSS에 첨가된 다음, 실시예에 기재된 바와 같이 형광이 측정된다. 화합물 처리된 세포와 대조구 사이의 차이로서 CCE 억제 백분율이 계산된다.
개별적으로 또는 상기한 바와 같은 CCE 측정과 조합되어 세포는 또한 시험 화합물에 노출된 세포에서의 β-아밀로이드 생성 감소에 대해 시험될 수 있다. 방법에서는, 화합물에 노출된 세포에서의 β-아밀로이드 (예컨대 Aβ1-40 및/또는 Aβ1-42) 농도가 측정될 수 있으며, 예컨대 동시에 수행되는 대조구 시험에서의 노출되지 않은 세포 내 β-아밀로이드 측정과 비교될 수 있다. 노출된 세포에서의 예컨대 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 % 또는 그 이상의 단독이거나 조합된 β-아밀로이드 생성의 감소는 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 화합물의 잠재적인 치료적 유효성을 나타낸다. 바람직하게는, 총 β-아밀로이드 농도 (Aβ1-40 + Aβ1-42)가 측정된다. β-아밀로이드는, 예컨대 세포를 포함하는 배양 배지에서 또는 세포내에서 측정된다.
β-아밀로이드 측정 방법은 예컨대 96개의 웰 플레이트에서 다수의 화합물은 물론 하나 이상의 대조구 샘플을 시험하는 것을 포함할 수 있다. 분석시험에서, 종종 화합물은 약 4-48 시간, 또는 예컨대 18-36시간 동안 세포와 함께 배양될 필요가 있다. β-아밀로이드는 실시예에 기재된 바와 같은 시중에서 구입가능한 다량의 (양고추냉이 페록시다아제로) 효소적으로 표지된 Aβ1-40 및 Aβ1-42 항체를 사용하는 ELISA 샌드위치 분석시험을 사용하여 검출될 수 있다. 표지된 항체 ELISA 분석시험 또한 완료까지 24 가량의 시간을 필요로 할 수 있다. 따라서, CCE 분석시험이 유리하게도 β-아밀로이드 분석시험에 비해 시간 소비가 덜하고 시약을 적게 필요로 한다.
저장-작동 칼슘 유입이라고도 불리우는 CCE는 뉴런과 같이 전기적으로 비-여기가능하거나 여기가능한 세포 모두에서 중요한 칼슘-재충전 메카니즘으로 작용한다. 구체적으로, 칼슘이 소포체 내 그 저장 위치로부터 방출되는 경우, 세포기질(cytosol) 내에서 칼슘 농도가 상승하고, 이것은 보통 세포기질을 재충전하는 세포외 공간으로부터의 칼슘 유입으로 이어지며, 다음에는 소포체에 저장된다.
배양 세포에서의 CCE 측정은 여기에서 개시되는 CCE 분석시험 방법 또는 업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 수행된다. 배양 세포에서의 CCE 측정을 위한 모든 적당한 방법이 사용될 수 있다. 숙련된 기술자라면, 일반적으로 업계 숙련자에게 통상적으로 알려져 있는 표준화 기술에 의해 보정되는 다양한 시험 프로토콜과 관련된 시험적 다양성을 인식할 것이다. 예컨대 문헌 [Putney J.W., Jr., Sci STKE, (243):37 (2004)]; 및 문헌 [Putney J.W., Jr., Mol. Interv., 1(2):84-94 (2001)]를 참조하라.
그 CCE 억제 능력 (및 임의로 Aβ 생성의 감소)이 시험되는 화합물은, 예컨 대 약 1 nM 내지 10 mM, 약 500 nM 내지 50 μM, 또는 약 5 μM 내지 30 μM의 농도 범위에서 스크리닝된다.
β-아밀로이드 생성의 감소를 측정하기 위하여 여기에서 개시되는 분석시험에 사용될 수 있는 세포에는 비제한적으로 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 예컨대 7W WT APP751 CHO 세포를 포함하는, APP 또는 그의 단편을 과발현하는 포유류 또는 비-포유류 세포가 포함된다. 예를 들어, 문헌 [Koo and Squazzo, J. Biol. Chem., Vol. 269, Issue 26, 17386-17389, Jul, 1994]를 참조하라. APP 전이된(transfected) 세포주는 업계에 개시되어 있으며, 7W (wt APP751); 7W△C (거의 대부분의 원형질측 테일 (잔기 710-751)이 삭제된 APP751); 7WSW ("스웨덴형" KM651/652NL 이중-돌연변이를 가지는 APP751); 및 7WVF (V698F 돌연변이를 가지는 APP751)가 포함된다. 예를 들어, 문헌 [Xia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 94, pp. 8208-8213, July 1997]; 및 [Perez, R. & Koo, E. (1997) in Processing of the β- Amyloid Precursor Protein : Effects of C- Terminal Mutations on Amyloid Production, eds. Iqbal, K., Winblad, B., Nishimura, T., Takeda, M. & Wisniewski, H. M. (J. Wiley & Sons, London), pp. 407-416]를 참조하라. 과발현되는 APP에는 비제한적으로 APP751과 같은 APP의 전사물이 포함될 수 있다.
CCE 변화의 측정을 위하여 사용될 수 있는 세포에는 상피 세포, CHO 세포, 및 일 구현예에서의 7W WT APP751 CHO 세포와 같은 대부분의 비-포유류 및 포유류 세포가 포함된다. APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포가 사용될 수 있으나, 정상적인 APP 발현의 세포 역시 사용될 수 있다. 따라서, 특별한 세포 유형 또는 APP 과발현에 대한 요구가 없기 때문에, CCE 분석시험이 매우 유리하다. 다른 예시적인 세포에는 예컨대 QBM 셀 사이언스(Cell Science) 사 (캐나다)로부터 시중에서 구입가능한 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC)와 같은 배양 뉴런; 인간 성상세포의 1차 배양; 예컨대 ATCC 사로부터 구입가능한 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양과 같은 내피 세포; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)가 포함된다.
치료 방법
다른 구현예에서, 여기에서 개시되는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 알츠하이머병 (AD)과 같이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 방법이 제공된다. 일 구현예에서의 화합물의 투여는 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함) 또는 소교세포증, 또는 그의 조합의 감소 중 하나 이상으로 귀결된다. 일 구현예에서, 화합물은 세포에서 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 또는 그 이상으로 CCE를 감소시키는 특성을 가지는 것이다. 화합물은 바람직하게는 일 구현예에서 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 CHO 세포와 같은 세포에서 측정하였을 때 CCE를 감소시키는 특성을 가진다. 다르게는, 또는 추가적으로, 화합물은, 예컨대 해당 세포를 포함하는 배양 배지에서 측정되었을 때 또는 세포내에서 측정되었을 때, APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 예컨대 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 %, 또는 그 이상으 로 β-아밀로이드 생성을 감소시키는 것을 특징으로 한다.
여기에서 사용될 경우, 세포에서 CCE를 감소시키는 것으로 언급되는 화합물은 APP를 과발현하는 7W WT APP751 CHO 세포일 수 있거나, 또는 예컨대 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC)와 같은 배양 뉴런; 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양과 같은 내피 세포; 및 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 선택될 수 있는 세포에서 CCE를 감소시키는 화합물을 말한다.
여기에서 사용될 경우, β-아밀로이드 생성을 감소시키는 것으로 언급되는 화합물은 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 감소시키는 화합물을 말하며, 세포는 예를 들어 APP를 과발현 하는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 예컨대 7W WT APP751 CHO 세포; 7W (wt APP751) 세포; 7W△C 세포; 7WSW 세포; 또는 7WVF 세포일 수 있다.
여기에서 개시되는 구현예에서 APP를 과발현하는 세포에서의 β-아밀로이드의 감소가 언급되는 경우, 한편으로는 αCTF (CTF-α로도 알려져 있는 αC-말단 APP 단편) 및/또는 APPSα 용해성 단편의 증가가 예컨대 세포 배양에서 또는 세포내에서 (화합물이 β-아밀로이드의 생성을 감소시키면서 이들이 APP로부터 증가된 양으로 생성될 경우) 측정될 수 있다는 것에 유의해야 한다.
여기에서 개시되는 구현예에서 APP를 과발현하는 세포에서의 β-아밀로이드의 감소가 언급되는 경우, 한편으로는 βCTF (CTF-β로도 알려져 있는 βC-말단 APP 단편) 또는 APPSβ 용해성 단편의 감소가 예컨대 세포 배양 배지에서 또는 세 포내에서 (화합물이 β-아밀로이드의 생성을 감소시키면서 이들이 APP로부터 감소된 양으로 생성될 경우) 측정될 수 있다는 것에도 유의해야 한다.
추가적인 구현예에서, 외상성 뇌 손상 (TBI)으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 방법이 제공된다. 일 구현예에서는 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함) 및/또는 소교세포증이 감소된다. 방법은 예를 들어 여기에서 개시되는 화합물의 치료적 유효량을 TBI 직후에 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 화합물은 예컨대 배양 세포에서 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 또는 그 이상으로 CCE를 감소시키는 것이다. 배양 세포는 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 포유류 또는 비-포유류 세포이다. 방법은 그 이후 처방된 시간 기간 동안 화합물로 치료를 계속하는 것을 포함할 수 있다. TBI는 AD의 진행에 대한 감수성을 증가시키는 것으로 나타났으며, 이에 따라, 이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, TBI가 뇌의 β-아밀로이드 축적 및 산화적 스트레스를 촉진하며, 이것이 AD 진행의 개시 또는 가동을 촉진하는 데에 상승적으로 작용하는 것으로 여겨진다. 세포에서의 CCE 감소와는 다르게 또는 이에 추가적으로, 화합물은 또한 여기에서 개시되는 바와 같이 β-아밀로이드의 생성을 감소시킬 수 있다. TBI로 고통받는 동물 또는 인간을 화합물로 치료하는 것은 예컨대 약 1시간, 24시간, 1주, 2주, 1-6개월, 1년, 2년 또는 3년 동안 계속될 수 있다.
본 발명에 따라 치료될 수 있는 아밀로이드성 질병에는 비제한적으로 알츠하이머병, 뇌 아밀로이드 혈관병, 아밀로이드성 유전성 뇌 출혈 더치-유형, 다른 유 형의 가족성 AD 및 가족성 뇌 알츠하이머 아밀로이드 혈관병이다.
본 발명의 방법은 비제한적으로 PDAPP 및 TgAPPsw 쥐 모델과 같은 AD용 유전자이전 동물 모델에 사용될 수 있는데, 이들은 해당 동물 또는 인간의 중추신경계에서의 β-아밀로이드 생성, β-아밀로이드 침착, β-아밀로이드 신경독성 (타우의 비정상적인 과인산화 포함) 및 소교세포증과 관련된 이상의 치료, 방지 및/또는 억제에 유용할 수 있다. AD용 유전자이전 동물 모델은 예컨대 비제한적으로 미국 특허 번호 5,487,992호; 5,464,764호; 5,387,742호; 5,360,735호; 5,347,075호; 5,298,422호; 5,288,846호; 5,221,778호; 5,175,385호; 5,175,384호; 5,175,383호; 및 4,736,866호에서 제시된 바와 같이 업계에 알려진 표준의 방법을 사용하여 구성될 수 있다.
화합물의 투여될 수 있는 예시적인 투여량에는 0.001-1.0 mg/kg체중 이 포함된다. 화합물의 예시적인 투여량은 일당 약 1 내지 50 mg/kg체중, 일당 1 내지 20 mg/kg체중, 또는 일당 피투여자 체중 킬로그램당 0.1 내지 약 100 mg이다. 일당 킬로그램 체중당 0.5-100 mg, 0.5-50 mg, 0.5-10 mg, 또는 0.5-5 mg, 또는 예컨대 일당 체중 킬로그램당 0.01-0.5 mg의 투여량과 같이, 낮은 투여량이 바람직할 수 있다. 유효 투여량 범위는 화합물의 활성 및 약리학 업계에 알려진 다른 요인에 기초하여 계산될 수 있다.
화합물은 비제한적으로 단위 투여량 형태당 1 내지 3000 mg, 또는 10 내지 1000 mg의 활성 성분을 함유하는 것을 포함하여, 모든 적합한 투여량 형태로 손쉽게 투여된다. 50-1000 mg의 경구 투여량이 가능하다. 예를 들어, 10-100 또는 1- 50 mg, 또는 0.1-50 mg, 또는 0.1-20 mg 또는 0.01-10.0 mg과 같이 낮은 투여량이 바람직할 수 있다. 또한, 예컨대 주사 또는 흡입에 의한 것과 같이 비-경구 경로에 의한 투여의 경우, 낮은 투여량이 사용될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 투여량은 일당 약 0.05 mg 내지 20 mg, 일당 약 2 mg 내지 15 mg, 일당 약 4 mg 내지 12 mg, 및/또는 일당 약 8 mg의 범위일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 투여는 예컨대 약 1일 내지 12개월, 약 1주 내지 6개월, 또는 약 2주 내지 4주 범위이다.
AD와 같이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적을 가지는 대부분의 질병이 만성이고, 진행성이며, 난치성인 뇌의 치매이므로, 여기에서 개시되는 화합물을 사용한 치료 기간은 동물 또는 인간의 일생까지 지속될 수 있을 것으로 생각된다.
진단 방법
또 다른 구현예에서, 동물 또는 인간의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 뇌척수액 (CSF)과 같은 말초 체액으로부터 β-아밀로이드 농도의 제1 측정을 수행함으로써, 동물 또는 인간에서 AD와 같이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진행 위험성을 진단 또는 확인하기 위한 방법이 제공된다. 이어서, 방법은 여기에서 개시되는 화합물의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 화합물은 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 % 또는 그 이상으로 셀에서 CCE를 감소시키는 것이다. 다르게는, 또는 CCE를 감소시키는 것에 더하여, 화합물은 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포의 배지에서 측정하였을 때, 또는 세포내에서 측정하였을 때, 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 50 %, 또는 그 이상으로 β-아밀로이드 생성을 감소시킨다. 이후, 동물 또는 인간의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF로부터 β-아밀로이드 농도의 제2 (선택된 종말점에서) 측정이 수행되고, 제1 측정과 제2 측정 사이의 차이가 확인된다. 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 내 β-아밀로이드 농도의 변화는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진행 또는 가능성 진단의 위험을 나타낸다. 특히, 말초 β-아밀로이드의 증가는 뇌 β-아밀로이드의 축적의 존재, 및 이에 따른 질병의 위험성 또는 질병의 존재를 나타낸다.
이론에 얽매이고자 하는 것은 아니나, 화합물은 이미 생성된 β-아밀로이드의 중추신경계로부터 말초로의 제거를 촉진함으로써 혈장, 소변, 혈청, 전혈 또는 CSF의 β-아밀로이드 농도 증가를 야기할 수 있으며, 이에 따라 말초액에서 β-아밀로이드 농도의 증가가 검출되는 것으로 여겨진다.
제1 말초 체액 측정 후 제2 (선택된 종말점에서) 말초 체액 측정까지의 화합물 투여 시간 기간은 예를 들어 약 1-12시간, 약 1-7일, 약 1-4주; 약 2-6개월 또는 그 이상과 같은 임의의 적합한 시간 기간이다. 시간 길이는 예컨대 질병의 진행 및 환자에 따라 필요한 만큼 조정될 수 있다. 화합물의 적합한 주기적 (예컨대 1일) 투여량이 예컨대 경구적으로 또는 정맥주사로 투여되며, 개체 내 β-아밀로이드 농도가 종말점까지 주기적으로 모니터링된다. 바람직한 일 구현예에서, 화합물은 투여 개시로부터 종말점 측정가지 약 3일 내지 4주 동안 매일 투여된다. β-아밀로이드 축적과 관련된 질병의 위험 또는 존재를 나타내주는 농도의 변화는 예컨 대 제1 및 종말점 측정 사이 약 10-20 % 또는 그 이상이다.
투여될 수 있는 화합물의 예시적인 투여량은 예컨대 매일 0.001-1.0 mg/kg체중 을 포함한다. 화합물의 예시적인 투여량은 일당 약 1 내지 50 mg/kg체중, 일당 1 내지 20 mg/kg체중, 또는 일당 피투여자 체중 킬로그램당 0.1 내지 약 100 mg이다. 일당 킬로그램 체중당 0.5-100 mg, 0.5-50 mg, 0.5-10 mg, 또는 0.5-5 mg, 또는 예컨대 일당 체중 킬로그램당 0.01-0.5 mg의 투여량과 같이 낮은 투여량이 바람직할 수 있다. 유효 투여량 범위는 화합물의 활성 및 약리학 업계에 알려진 다른 요인에 기초하여 계산될 수 있다.
화합물은 비제한적으로 단위 투여량 형태당 1 내지 3000 mg, 또는 10 내지 1000 mg의 활성 성분을 함유하는 것을 포함하여, 모든 적합한 투여량 형태로 손쉽게 투여된다. 50-1000 mg의 경구 투여량이 가능하다. 예를 들어, 10-100 또는 1-50 mg, 또는 0.1-50 mg, 또는 0.1-20 mg 또는 0.01-10.0 mg과 같이 낮은 투여량이 바람직할 수 있다. 또한, 예컨대 주사 또는 흡입에 의한 것과 같이 비-경구 경로에 의한 투여의 경우, 낮은 투여량이 사용될 수 있다.
화합물
다양한 화합물들이 여기에 하기하여 개시되는 바, 이들은 일 구현예에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 또는 진단을 포함하여 여기에 개시되는 방법에 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 화합물은 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 % 또는 20 % 감소시킨다. 추가적으로, 또는 다르게는, 선택된 화합물은 APP 또는 그 의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 또는 그 이상 감소시킨다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련되 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 일 구현예에서 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 이미다졸 화합물이다. 일 구현예에서, CCE를 감소시키는 것과 다르게 또는 추가적으로, 화합물은 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시킨다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 이소퀴놀린 알칼로이드 화합물이다. 이소퀴놀린 화합물은 일 구현예에서 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시킨다. 일 구현예에서, CCE를 감소시키는 것과 다르게는 또는 추가적으로, 화합물은 세포내에서 또는 세포외에서 측정하였을 때 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서의 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시킨다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 일 구현예에서 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시키는 칼모듈린-매개 효소 활성화 억제제이다. 일 구현예 에서, CCE를 감소시키는 것과 다르게는 또는 추가적으로, 화합물은 세포내에서 또는 세포외에서 측정하였을 때 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서의 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시킨다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF) 수용체의 키나아제 활성 억제제이며, 여기서 일 구현예의 화합물은 일 구현예에서 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시킨다. 임의로, 화합물은 추가적으로 또는 다르게는 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시키는 것이다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 일 구현예에서 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시키는 NF-kB 활성화 억제제이다. 추가적으로 또는 다르게는, 임의로 화합물은 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시킨다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 일 구현예의 화합물은 일 구현예에서 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시키는 디테르펜 또는 트리테르펜 화합물이다. 임의로, 화합물은 추가적으로 또는 다르게는 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시킨다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 퀴나졸린 화합물이며, 여기서 일 구현예의 화합물은 일 구현예에서 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시킨다. 임의로, 화합물은 추가적으로 또는 다르게는 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시키는 것이다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 일 구현예의 화합물은 일 구현예에서 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시키는 세스퀴테르펜 락톤이다. 임의로, 화합물은 추가적으로 또는 다르게는 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시키는 것이다.
일 구현예에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 및/또는 진단을 위한 화합물이 제공되는 바, 여기서 화합물은 IkappaB 키나아제 2 (IKK-2) 억제제이며, 여기서 일 구현예의 화합물은 일 구현예에서 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포인 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시킨다. 임의로 화합물은, CCE를 감소시키는 것에 추가적으로 또는 그와 다르게는, APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨 대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시키는 화합물이다.
일 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
[화학식 I]
Figure 112007088061992-PAT00015
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 분지형 및 싸이클릭 알킬 포함), 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
R3 및 R5는 개별적으로 임의로 치환된 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치 환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R4'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
다르게는, R2' 및 R3'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
다르게는, R3' 및 R4'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
다르게는, R4' 및 R5'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
다르게는, R5' 및 R6'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있다.
일 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
<화학식 I>
Figure 112007088061992-PAT00016
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 분지형 및 싸이클릭 알킬 포함), 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이다.
일 구현예에서, 화합물은 2 이상의 니트로 치환체를 포함한다.
일 구현예에서, R3 = R5이며, R3 = 알킬 에스테르이고, 여기서 알킬은 알콕실이 아닌 다른 기로 임의로 치환된다.
일 구현예에서, R3 = R5이며, R3 = 알킬 에스테르이고, 여기서 알킬은 임의로 치환된다.
일 구현예에서, R3 = R5이며, R3는 치환되지 않은 알킬 에스테르이다.
그의 R 또는 S 이성질체를 포함하여, 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물의 또 다른 구현예에서:
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 분지형 및 싸이클릭 알킬 포함), 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고; 및
R4'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이다.
그의 R 또는 S 이성질체를 포함하여, 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물의 또 다른 구현예에서:
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 분지형 및 싸이클릭 알킬 포함), 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 또는 알킬이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고; 및
R4'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로 겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H, 선형 사슬형, 예컨대 메틸을 포함하는 알킬; 분지형 알킬, 예컨대 이소프로필; 싸이클릭 알킬, 예컨대 싸이클로헥실; 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 치환된 헤테로싸이클, 예컨대 2-메틸 퓨릴; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 또는 아릴 에테르, 예컨대 페녹시이고;
R2 = R6이며, 각각 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 에톡시; 또는 할로겐, 예컨대 F이고;
R3 = R5이며, 각각 알킬 에스테르, 예컨대 에틸 에스테르; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 실릴 에스테르; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 시아노; 또는 니트로이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 에톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 니트로; 또는 헤테로싸이클, 예컨대 2-메틸 퓨릴이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 에톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 니트로; 또는 헤테로싸이클, 예컨대 2-메틸 퓨릴이고; 및
R4'는 H, 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 에톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 니트로; 또는 헤테로싸이클, 예컨대 2-메틸 퓨릴이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 예컨대 메틸 또는 에틸이고;
R3 및 R5는 개별적으로 시아노 또는 알킬 에스테르이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 할로, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르이며, 여기서, R2 및 R3 중 하나 이상에 서 알킬 에스테르의 알킬은 10, 20 또는 30 탄소 원자 이상, 예컨대 10 내지 30 탄소 원자를 포함하고;
R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6 각각은 알킬, 예컨대 메틸이고;
R3 및 R5는 개별적으로 C(O)OCH2CH2O알킬이고, 여기서 알킬은 예컨대 메틸이며 임의로 치환되고;
R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6 각각은 알킬, 예컨대 메틸이고;
R3 및 R5는 개별적으로 C(O)O알킬이며, 여기서 알킬은 알케닐 또는 알키닐로 치환되어, 예컨대 R3 및 R5는 C(O)OCH2CHCH2이고;
R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6 각각은 CH2O알킬, 예컨대 CH2OCH3이고;
R3 및 R5는 개별적으로 C(O)O알킬, 예컨대 C(O)OCH3이고;
R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6 각각은 알킬, 예컨대 메틸이고;
R3 및 R5는 개별적으로 C(O)O알킬, 예컨대 C(O)OCH2CH3, 또는 C(O)OCH2C(CH3)3이고;
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, F, Br, 또는 니트로이고;
R3' 및 R5' 각각은 H이고;
R4'는 H 또는 할로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 및 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H이고;
R2 및 R6 각각은 알킬, 예컨대 메틸이고;
R3 및 R5는 개별적으로 C(O)O알킬, 예컨대 C(O)OCH2CH3, 또는 C(O)OCH2C(CH3)3이고;
R2' 및 R6' 각각은 H 또는 F이며, 동일하지 않고;
R3', R4', R5'는 개별적으로 H, 또는 Br이다.
또 다른 구현예에서, 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물은 화학식 II의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
[화학식 II]
Figure 112007088061992-PAT00017
R1은 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 알킬아릴, 아릴알킬, 할로겐, 하이드록시, 임의로 치환된 알킬 에스테르, 임의로 치환된 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 또는 니트로 중 하나 이상으로 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R2 및 R6는 개별적으로 임의로 치환된 알킬, 헤테로알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 시아노, 또는 헤테로싸이클이고;
R3 및 R5는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 헤테로싸이클이고;
R4는 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 시아노, 또는 헤테로싸이클이고;
여기서, 일 구현예에서 R1, R2, R3, R4, R5 및 R6 중 2 이상은 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 II의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 알킬아릴, 아릴알킬, 할로겐, 하이드록시, 임의로 치환된 알킬 에스테르, 임의로 치환된 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드 중 하나 이상으로 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R2 및 R6는 개별적으로 임의로 치환된 알킬, 헤테로알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 시아노, 또는 헤테로싸이클이고;
R3 및 R5는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 또는 헤테로싸이클이고;
R4는 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 시아노, 또는 헤테로싸이클이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 II의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 치환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 퓨릴이거나, 또는 임의로 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸 에스테르; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 니트로; 또는 시아노로 치환된 헤테로싸이클이고;
R2 = R6이며, 각각 H, 임의로 치환된 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 니트로; 시아노; 또는 헤테로싸이클, 예컨대 피라졸이고;
R3 = R5이며, 각각 H, 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 니트로; 시아노; 또는 헤테로싸이클, 예컨대 피라졸이고;
R4는 H, 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 니트로; 시아노; 또는 헤테로싸이클, 예컨대 피라졸이다.
또 다른 구현예에서, 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물은 화학식 III의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
[화학식 III]
Figure 112007088061992-PAT00018
R1은 선형 사슬형, 분지형, 또는 싸이클릭 알킬을 포함하는 알킬; 임의로 치환된 아릴; 임의로 치환된 헤테로싸이클; 알킬; 아릴 에테르; 또는 아릴-O-(임의로 치환된 아릴)이고;
R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
R4'는 예컨대 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 또는 니트로 중 하나 이상으로 임의로 치환된 알킬 (선형 사슬형, 분지형, 및 싸이클릭 포함) 또는 헤테로싸이클이다.
그의 R 또는 S 이성질체를 포함하여, 화학식 III의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물의 또 다른 구현예에서:
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 예컨대 메틸; 분지형, 예컨대 이소프로필; 싸이클릭, 예컨대 싸이클로헥실 포함); 임의로 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 치환된 헤테로싸이클 (알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 니트로; 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환된 것); 치환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 퓨릴; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 또는 아릴 에테르, 예컨대 페녹시이고;
R2 = R6이며, 각각은 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 에톡시; 할로겐, 예컨대 F; 또는 하이드록시이고;
R3 = R5이며, 각각은 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 실릴 에스테르; 알킬 아미드, 예컨대 메틸; 아릴 아미드, 예컨대 페 닐; 시아노; 또는 니트로이고; 및
R4'는 알킬 (선형 사슬형, 예컨대 메틸; 분지형, 예컨대 이소프로필; 싸이클릭, 예컨대 싸이클로헥실 포함); 임의로 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 치환된 헤테로싸이클 (알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸 에스테르; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 니트로; 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환된 것); 또는 치환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 퓨릴이다.
또 다른 구현예에서, 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물은 화학식 IV의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
[화학식 IV]
Figure 112007088061992-PAT00019
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 분지형, 및 싸이클릭 포함); 임의로 치환된 아릴; 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
R3는 시아노, 니트로, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 또는 아릴 아미드이고;
R4는 알킬, 할로알킬, 시아노, 치환되지 않은 아릴, 치환된 아릴 (예컨대 시아노, 니트로, 할로, 에스테르, 카르복실 또는 카르보닐에 의해 하나 이상의 위치에서 치환된 것); 치환되지 않은 헤테로싸이클, 치환된 헤테로싸이클 (예컨대 알킬, 알킬 에테르, 아릴, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 에스테르, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 니트로, 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환된 것)이고; 및
R5 및 R6 각각은 개별적으로 H, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 니트로, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 알킬 (선형 사슬형, 분지형, 및 싸이클릭 포함), 또는 임의로 치환된 아릴이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 IV의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 H, 알킬 (선형 사슬형, 예컨대 메틸; 분지형, 예컨대 이소프로필; 싸이클릭, 예컨대 싸이클로헥실; 임의로 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐 포함); 치환된 헤테로싸이클 (알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸; 아릴 아미드, 예컨대 페닐; 니트로; 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환된 것); 또는 치 환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 퓨릴이고;
R3 = R5 = R6이며, H, 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 실릴 에스테르; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 시아노; 니트로; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 (선형 사슬형, 예컨대 메틸; 분지형, 예컨대 이소프로필; 및 싸이클릭, 예컨대 싸이클로헥실 포함); 임의로 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 또는 치환되지 않은 아릴, 예컨대 나프틸이고; 및
R4'는 치환된 헤테로싸이클 (알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸 에스테르; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 니트로; 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환된 것); 또는 치환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 퓨릴이다.
또 다른 구현예에서, 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물은 화학식 V의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
[화학식 V]
Figure 112007088061992-PAT00020
R1은 치환되거나 또는 치환되지 않은 아릴, 알킬, 알킬 에테르, 치환되거나 또는 치환되지 않은 아릴 에테르 (예컨대 4(4-클로로페녹시)페닐), 치환된 헤테로싸이클 (알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 니트로, 또는 시아노에 의해 서로 다른 위치에서 치환된 것), 치환되지 않은 헤테로싸이클, 또는 할로겐이고;
R3, R4 및 R5는 개별적으로 H, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 니트로, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 알킬 (선형 사슬형, 분지형, 또는 싸이클릭 포함), 치환된 아릴, 치환되지 않은 아릴, 또는 헤테로싸이클이고;
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 V의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1은 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 치환되지 않은 아릴, 예컨대 나프틸; 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 치환된 아릴 에테르, 예컨대 4(4-클로로페녹시)페닐; 치환되지 않은 아릴 에테르, 예컨대 페녹시페닐; 치환된 (알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 니트로; 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서) 또는 치환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 피페리딘이고;
R3 = R4 = R5이며, 각각 H, 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 실릴 에스테르; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 시아노; 니트로; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 (선형 사슬형, 예컨대 메틸; 분지형, 예컨대 이소프로필; 및 싸이클릭, 예컨대 싸이클로헥실 포함); 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 또는 치환되지 않은 아릴, 예컨대 페닐이다.
식 V 화합물의 또 다른 구현예에서;
R1은 할로 치환된 페녹시페닐이고;
R3 = R5 = H이고; 및
R4는 임의로 치환된 페닐, 예컨대 OH 또는 할로로 치환된 것이다.
또 다른 구현예에서, 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물은 화학식 VI의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
[화학식 VI]
Figure 112007088061992-PAT00021
R1 및 R3은 개별적으로 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 알킬 (선형 사슬형, 분지형, 또는 싸이클릭 포함), 치환된 아릴 또는 치환되지 않은 아릴이고; 및
R2 및 R4는 개별적으로 H, 알킬 에테르, 치환 및 치환되지 않은 아릴 에테르, 치환된 헤테로싸이클 (예컨대 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 니트로, 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환), 치환되지 않은 헤테로싸이클, 할로겐, 하이드록시, 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 VI의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이며, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하고, 여기서:
R1 = R3이며, 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 치환된 아릴 에테르, 예컨대 4(4-클로로페녹시)페닐; 치환되지 않은 아릴 에테르, 예컨대 메톡시 페닐; 할로겐, 예턴대 F; 하이드록시; 알킬 (선형 사슬형, 예컨대 메틸; 분지형, 예컨대 이소프로 필; 또는 싸이클릭, 예컨대 싸이클로헥실 포함); 치환된 아릴, 예컨대 o-클로로페닐; 또는 치환되지 않은 아릴, 예컨대 페닐이고; 및
R2 = R4이며, H, 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 치환된 아릴 에테르, 예컨대 4(4-클로로페녹시)페닐; 치환되지 않은 아릴 에테르, 예컨대 메톡시 페닐; 치환된 헤테로싸이클 (예컨대 알킬, 예컨대 메틸; 알킬 에테르, 예컨대 메톡시; 아릴 에테르, 예컨대 페녹시; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 알킬 아미드, 예컨대 메틸; 아릴 아미드, 예컨대 페닐; 니트로; 또는 시아노에 의해 하나 이상의 위치에서 치환); 치환되지 않은 헤테로싸이클, 예컨대 피라졸; 할로겐, 예컨대 F; 하이드록시; 알킬 에스테르, 예컨대 에틸; 아릴 에스테르, 예컨대 벤조에이트; 실릴 에스테르; 알킬 아미드, 예컨대 메틸 아미드; 아릴 아미드, 예컨대 페닐 아미드; 시아노; 또는 니트로이다.
그의 R 또는 S 이성질체를 포함하여, 화학식 VI의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물의 또 다른 구현예에서:
R1은 일 구현예에서 싸이클로헥실 또는 싸이클로펜틸을 포함하여 C3-12 알킬, 예컨대 싸이클로알킬인 알킬이고;
R2 및 R4는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
R3는 치환되지 않은 또는 치환된 아릴, 예컨대 할로로 치환된 페닐이다.
또 다른 구현예에서, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하여, 화학식 VII의 화 합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이 제공되며:
[화학식 VII]
Figure 112007088061992-PAT00022
여기서:
R4'는 H, 할로, 알킬, 또는 아릴이고;
R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 할로, 알킬옥시, 하이드록시, 또는 아릴이고; 및
R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 알킬, 또는 아릴이다.
또 다른 구현예에서, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하여, 화학식 VIII의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이 제공되며:
[화학식 VIII]
Figure 112007088061992-PAT00023
여기서:
R4는 임의로 치환된 아릴, 예컨대 임의로 할로로 치환된 페닐이고; 및
R1은 알킬, 예컨대 싸이클로알킬이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 IX의 화합물, 또는 그의 전구약물, 또는 염이며, R 또는 S 이성질체를 포함하고:
[화학식 IX]
Figure 112007088061992-PAT00024
여기서:
R1은 알킬, 수소, 치환된 아릴 (예컨대 할로겐, 에테르, 알킬, 할로알킬, 또는 하이드록시로) 또는 치환되지 않은 아릴이고;
R2, R3 및 R4는 개별적으로 알킬, 할로알킬, 티오알킬, 하이드록시, 수소, 치환된 아릴 (예컨대 할로겐, 에테르, 할로에테르, 알킬, 할로알킬, 또는 하이드록시로 치환), 치환되지 않은 아릴, 치환된 헤테로싸이클 (예컨대 알킬, 할로겐, 할로알킬, 또는 아미드로 치환), 또는 치환되지 않은 헤테로싸이클릭이고;
R5는 알킬, 할로알킬, 하이드록시, 수소, 에테르, 할로에테르이고;
R6는 니트로, 시아노, 수소, 에스테르, 아미드, 카르복실, 또는 카르보닐이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 X의 화합물, 또는 그의 전구약물, 또는 염이며, R 또는 S 이성질체를 포함하고:
[화학식 X]
Figure 112007088061992-PAT00025
여기서, R1, R3, R5, R6, R7, R8, R9, R10, 및 R11은 개별적으로 알킬, 할로알킬, 하이드록시, 수소, 에테르, 할로에테르, 티오알킬, 할로겐이고; 및
R2 및 R4는 개별적으로 아미드, 에스테르, 카르복실, 또는 니트로이다.
또 다른 구현예에서, 화합물은 화학식 XI의 화합물, 또는 그의 전구약물, 또는 염이며, R 또는 S 이성질체를 포함하고:
[화학식 XI]
Figure 112007088061992-PAT00026
식 XI
여기서, R2는 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 수소, 카르복실, 니트로, 또는 시아노이고; 및
R3, R1, R4, R5, R6, R7, R8은 개별적으로 알킬, 할로알킬, 하이드록시, H, 에테르, 할로에테르, 티오알킬, 또는 할로겐이다.
여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물의 다른 예를 하기에 열거한다. 일 구현예에서, 화합물은 예를 들어 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 예건대 적어도 약 10 % 또는 그 이상으로 CCE를 감소시킬 수 있으며, 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 예건대 적어도 약 20 % 또는 그 이상으로 β-아밀로이드 생성을 감소시킨다.
SKF96365 1-[베타-[3-(4-메톡시페닐)프로폭시]-4-메톡시페네틸]-1H-이미다졸 하이드로클로라이드:
Figure 112007088061992-PAT00027
에코나졸, (R,S)-1-[2,4-디클로로-베타-(p-클로로벤질-옥시)펜-에틸]이미다졸 니트레이트:
Figure 112007088061992-PAT00028
클로트리마졸, 1-[(2-클로로페닐)디페닐메틸]-1H-이미다졸 (및 칼슘-배제 용액에 노출되는 것에 의한 것과 같이 세포내 칼슘 저장고의 고갈에 의해 유도되는 세포내 저장분의 고갈에 의해 매개되는 2가 양이온 섭취의, 다른 이미다졸-기반 시토크롬 p-450 억제제)
Figure 112007088061992-PAT00029
SR 33805 3,4-디메톡시-N-메틸-N-[3-[4-[[1-메틸-3-(1-메틸에틸)-1H-인-돌- 2-일]설포닐]페녹시]프로필]벤젠에탄아민 옥살레이트, 및 L-유형 칼슘 채널의 α1-소단위체에 알로스테리(allosterically) 결합되는 다른 잠재적 칼슘 길항제:
Figure 112007088061992-PAT00030
로페르아미드, 4-(4-클로로페닐)-4-하이드록시-N,N-디메틸-α,α-디페닐-1-페페리딘부탄아미드, (낮은 미세몰 농도에서) 말초 및 중추 아편유사제(opioid) 수용체에 대해 높은 친화성을 가지는 칼슘 채널 차단제임은 물론 지사제로서, 로페르아미드는 광범위한 스펙트럼의 뉴런 고전압-활성화 (HVA) 칼슘 채널을 차단하며, 높은 농도에서는 N-메틸-D-아스파테이트 (NMDA) 수용체 작동 채널을 통하여 칼슘 유동(flux)을 감소시킴:
Figure 112007088061992-PAT00031
테트란드린 (Tet), 중국 약초-뿌리인 Stephania tetrandra로부터 분리된 비스-벤질이소퀴놀린 알칼로이드:
Figure 112007088061992-PAT00032
칼미다졸륨 클로라이드 (R24571), 1-[비스(p-클로로페닐)메틸]-3-[2-(2,4-디 -클로로-β-(2,4-디클로로벤질-옥시)페네틸)]-이미다졸륨 클로라이드, 이것은 가역적으로 칼모듈린에 결합함으로써 칼모듈린-매개 효소 활성화를 억제함, 및 다른 칼모듈린-매개 효소 활성화 억제제 (R24571은 또한, 나트륨 채널 및 전압-게이트화 칼슘 채널을 차단하며, 미오신 광 사슬 키나아제의 칼슘/칼모듈린-유도 활성화를 농도 의존 방식으로 억제하고, 칼로듈린 N-메틸트랜스퍼라아제를 억제함):
Figure 112007088061992-PAT00033
암로디핀, (R,S) 3-에틸-5-메틸-2-(2-아미노에톡시메틸)-4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-6-메틸-3,5-피리딘디카르복실레이트 벤젠설포네이트, 혈관평활근 및 심근으로의 칼슘의 막횡단 유입을 억제하는 디하이드로피리딘 칼슘 길항제 (암로디핀은 디하이드로피리딘 및 비디하이드로피리딘 결합좌 모두에 결합하며, 세포막을 횡단하는 칼슘 이온의 유입을 선택적으로 억제하며, 심근 세포보다는 혈관 평활근 세포에 더 큰 효과를 가짐)
Figure 112007088061992-PAT00034
니트렌디핀, (1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(메타-니트로페닐)-3,5-피리딘-디카르복실산, 에틸 메틸 에스테르 (에틸 메틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(메타-니트로페닐)-3,5-피리딘 디카르복실레이트), 및 다른 디하이드로피리딘 칼슘 채널 차단제:
Figure 112007088061992-PAT00035
N-프로파르길니트렌디핀 (MRS 1845), 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(3-니트로-페닐)-1-(2-프로피닐)-3,5-피리딘디카르복실산, 에틸, 메틸 에스테르, 디하이드로피리딘 화합물 칼슘 채널 차단제:
Figure 112007088061992-PAT00036
티르포스틴 A9 ([[3,5-비스(1,1-디메틸에틸)-4-하이드록시-페닐]메틸-엔]프로판-디니트릴), 및 혈소판-유도 성장인자 (PDGF) 수용체의 키나아제 활성의 다른 선택적 억제제, 또는 그의 유도체:
Figure 112007088061992-PAT00037
여기의 치료 및 진단 방법에 따라 다양한 다른 디하이드로피리딘 화합물이 사용될 수 있으며, 비제한적으로 하기의 화합물 및 그의 유도체, 염 및 전구약물을 포함한다. 특히 바람직한 것은 β-아밀로이드를 과발현하는 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상으로 감소시킬 수 있고, 임의로 상기 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상으로 감소시킬 수 있는 화합물이다.
화합물의 예를 표 1에 제공하는 바, 이들은 Maybridge (영국)로부터 얻을 수 있다:
표 1
Figure 112007088061992-PAT00038
Figure 112007088061992-PAT00039
Figure 112007088061992-PAT00040
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Figure 112007088061992-PAT00047
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또 다른 구현예에서는, 표 2에 열거된 하기의 화합물이 제공되며, 이들은 여기에 개시되는 방법에 사용될 수 있다:
표 2
Figure 112007088061992-PAT00049
Figure 112007088061992-PAT00050
Figure 112007088061992-PAT00051
Figure 112007088061992-PAT00052
Figure 112007088061992-PAT00053
또 다른 구현예에서는, 표 3에 열거된 하기의 화합물이 제공되며, 이들은 여기에 개시되는 방법에 사용될 수 있다:
표 3
Figure 112007088061992-PAT00054
Figure 112007088061992-PAT00055
Figure 112007088061992-PAT00056
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Figure 112007088061992-PAT00060
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Figure 112007088061992-PAT00078
Figure 112007088061992-PAT00079
또 다른 구현예에서, 하기의 화합물이 여기에 개시되는 방법에 사용될 수 있다:
(S)-(+)-니굴디핀 ((S)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-3,5-피리딘디카르복실산, 3-(4,4-디페닐-1-피페리디닐)프로필 메틸 에스테르 하이드로클로라이드), 디하이드로피리딘 L-유형 Ca2 + 채널 차단제 및 α1A-아드레날린수용체 길항제로서, (R) 거울이성질체보다 더 활성이다.
Figure 112007088061992-PAT00080
R-니굴디핀 ((R)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(3-니트로페닐)-3,5-피리딘디카르복실산, 3-(4,4-디페닐-1-피페리디닐)프로필 메틸 에스테르 하이드로클로라이 드), 디하이드로피리딘 L-유형 Ca2+ 채널 차단제 및 α1A-아드레날린수용체 길항제로서, (S) 거울이성질체보다 덜 활성이다.
Figure 112007088061992-PAT00081
또한, 본 발명의 치료 및 진단 방법에 따라 다양한 NF-kB 활성화 억제제 화합물이 투여될 수 있으며, 여기에는 비제한적으로 하기의 화합물은 물론 그의 전구약물, 유도체 및 염이 포함된다. 바람직한 것은 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 5 %, 10 %, 15 %, 20 % 또는 그 이상 감소시키는 화합물이다.
화합물 예시:
아르테미시닌, 중국 약초 Artemsisia annua (칭하오수(qinghaosu) 또는 개똥쑥(sweet wormwood))의 건조 잎으로부터 추출되는 항말라리아제:
Figure 112007088061992-PAT00082
셀라스트롤 (3-하이드록시-24-노르-2-옥소-1(10),3,5,7-프리에델라테트라엔-29-오산 (트립테린), 항산화 및 항-염증성 특성을 나타내는 중국 뇌송등(Chinese Thunder of God vine) (T. wilfordii)로부터 분리된 세포-투과성 디엔온-페놀계 트리테르펜 화합물:
Figure 112007088061992-PAT00083
NF-kb 활성화 억제제 (6-아미노-4-(4-페녹시페닐에틸아미노)퀴나졸린) (퀴나졸린), NF-kB 전사 활성화 및 LPS-유도 TNF-α 생성의 강력한 억제제로서 작용하는 세포-투과성 퀴나졸린 화합물:
Figure 112007088061992-PAT00084
이소알란토락톤, 이소헬레닌으로도 불리우며, I-kBa 분해를 방지함으로써 특이성이 높고 강력하며 가역적인 NF-kB 활성화 억제제로서 작용하는, 항-염증성 특성을 가지는 세포-투과성 세스퀴테르펜 락톤:
Figure 112007088061992-PAT00085
카메바카우린, 항-염증성 특성을 나타내며 강력하고 가역적인 NF-kB 활성화 억제제로서 작용하는, 메틸렌-락톤 관능성을 함유하는 세포-투과성 카우란 디테르펜 유사물:
Figure 112007088061992-PAT00086
IKK-2 억제제 IV (5-(p-플루오로페닐)-2-우레이도]티오펜-3-카르복스아미드), 세포-투과성 (티에노티에닐)아미노-아세트아미드 화합물로서, 항-염증성 특성을 나타내며, 강력하고 가역적이며 ATP-길항적이고 높은 선택성의 IKK-2 억제제로서 작용하며, 자극된 윤활 섬유모세포에서의 NF-kB-의존 유전자 발현을 특이적으로 차단하는 것으로 나타남:
Figure 112007088061992-PAT00087
여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 다른 NF-kb 억제제에는 하기가 포함된다:
캡사이신:
Figure 112007088061992-PAT00088
NF-kB SN50:
H-Ala-Ala-Val-Ala-Leu-Leu-Pro-Ala-Val-Leu-Leu-Ala-Leu-Leu-Ala-Pro-Val-Gln-Arg-Lys-Arg-Gln-Lys-Leu-Met-Pro-OH
파르테놀라이드, 타나세툼 파르테니움(Tanacetum parthenium):
Figure 112007088061992-PAT00089
안드로그라폴라이드:
Figure 112007088061992-PAT00090
카페산 페네틸 에스테르 (CAPE):
Figure 112007088061992-PAT00091
하이포에스톡사이드:
Figure 112007088061992-PAT00092
다른 유용한 화합물에는 하기가 포함된다:
플루페나진-N-2-클로로에탄, 디하이드로클로라이드 (칼모듈린 길항제):
Figure 112007088061992-PAT00093
또 다른 구현예에서, 화합물은 하기 화합물들 중 하나이다:
1,2-비스(2-아미노페녹시)에탄 N,N,N',N'-테트라아세트산 아세톡시메틸 에스테르 (RN: 139890-68-9); "Bapta-AM"으로도 불리움: 또는: N-(2-((아세틸옥시)메톡시)-2-옥소에틸)-N-(2-(2-(2-(비스(카르복시메틸)아미노)페녹시)에톡시)페닐)글리신:
Figure 112007088061992-PAT00094
;
딜티아젬:
Figure 112007088061992-PAT00095
;
이스라디핀:
Figure 112007088061992-PAT00096
; 또는
펠로디핀:
Figure 112007088061992-PAT00097
.
예시적인 화합물들을 또한 도 9, 10 및 11에 나타내었다. 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물의 추가적인 구현예들을 도 16-21에 나타내었다. 일 구현예에서, 화합물은 예컨대 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시킬 수 있으며, 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 배양 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시킬 수 있다.
여기에서 개시되는 화합물들이 키랄 중심(chiral center)을 함유할 수 있다는 것이 이해되어야 할 것이다. 이러한 키랄 중심은 (R) 또는 (S) 배열 중 어느 것일 수 있으며, 또는 그의 혼합물일 수 있다. 따라서, 여기에서 제공되는 화합물들은 거울이성질적으로 순수하거나, 또는 입체이성질 또는 부분입체이성질 혼합물일 수 있다. 여기에서의 화합물의 개시는, 바람직하게는 여기에서 개시되는 유용한 특성들을 가지는 모든 라세미체이거나 광학적으로 활성이거나 다형이거나 또는 입체이성질인 형태 또는 그의 혼합물을 포함한다는 것이 이해되는 바, 광학적으로 활성인 형태를 제조하는 방법 및 여기에서 개시되는 표준 시험을 사용하여 또는 업계에 잘 알려진 다른 유사한 시험을 사용하여 활성을 확인하는 방법은 업계에 잘 알려져 있다. 화합물의 광학적 이성질체를 얻기 위하여 사용될 수 있는 방법의 예에는 하기가 포함된다:
i) 결정의 물리적 분리 - 개별적 거울이성질체의 거시적 결정이 수공으로 분리되는 기술. 이 기술은 분리된 거울이성질체 결정이 존재하고, 즉 물질이 콩글로머레이트(conglomerate)이고, 결정이 시각적으로 구분되는 경우에 사용될 수 있다;
ii) 동시 결정화 - 라세미체 용액으로부터 개별적인 거울이성질체가 개별적으로 결정화되는 기술로서, 라세미체가 고형 상태의 공글로머레이트일 경우에만 가능하다;
iii) 효소적 분별 - 거울이성질체의 효소와의 구별되는 반응 속도에 의하여 라세미체를 부분적으로 또는 완전히 분리하는 기술;
iv) 효소적 비대칭 합성으로서, 원하는 거울이성질체의 거울이성질적으로 순수하거나 또는 보강된 합성 전구체를 얻기 위하여 하나 이상의 합성 단계에서 효소적 반응을 사용하는 기술;
v) 화합적 비대칭 합성 - 생성물에 비대칭 (즉, 키랄성)을 생성시킬 수 있는 조건 하에서 비키랄 전구체로부터 원하는 거울이성질체를 합성하는 기술로서, 키랄성 촉매 또는 키랄성 보조물을 사용하여 성취될 수 있다;
vi) 부분입체이성질체 분리 - 개별적인 거울이성질체를 부분입체이성질체로 전환하는 거울이성질적으로 순수한 반응물 (키랄성 보조물)과 라세미 화합물이 반응되는 기술. 생성되는 부분입체이성질체는 다음에 그들의 더 구분되는 구조적 차이를 이용하는 크로마토그래피 또는 결정화에 의해 분리되며, 원하는 거울이성질체를 얻기 위하여 키랄성 보조물은 나중에 제거된다;
vii) 제1 및 제2-차수 비대칭 변형, 라세미체의 부분입체이성질체가 원하는 거울이성질체의 부분입체이성질체 용액이 우세하게 생성되도록 평형화되거나, 또는 여기서 원하는 거울질체의 부분입체이성질체를 선택적으로 결정화하여 결과적으로 거의 모든 물질이 원하는 거울이성질체의 결정질 부분입체이성질체로 전환되도록 평형을 교란하는 기술. 원하는 거울이성질체는 다음에 부분입체이성질체로부터 방출된다;
viii) 동역학적 분별 - 이 기술은 동역학적 조건 하에서 거울이성질체의 키랄성, 비-라세미 시약 또는 촉매와의 동일하지 않은 반응 속도를 이용하는 라세미체의 부분적이거나 또는 완전한 분별 (또는 부분적으로 분별된 화합물의 추가적인 분별)을 말한다;
ix) 비-라세미 전구체로부터의 거울이성질특이적 합성 - 비-키랄성 개시 물질로부터 원하는 거울이성질체가 얻어지는 합성 기술로서, 여기서는 입체이성질화학적 완전성이 합성 과정에 걸쳐 손상되지 않거나 최소한으로만 손상된다;
x) 키랄성 액체 크로마토그래피, 라세미체의 거울이성질체가 그의 고정상(stationary phase)과의 구별되는 상호작용을 이용하여 액체 이동상(mobile phase)에서 분리되는 기술. 고정상이 키랄성 물질로 구성될 수 있거나 또는 이동상이 구별되는 상호작용을 일으키는 추가적인 키랄성 물질을 함유할 수 있다.
xi) 키랄성 기체 크로마토그래피, 라세미체가 휘발되고 거울이성질체는 고정된 비-라세미 키랄성 흡착제상을 함유하는 컬럼과의 기체 이동상에서의 그의 구별되는 상호작용을 이용하여 분리되는 기술;
xii) 키랄성 용매를 이용한 추출 - 특정 키랄성 용매로의 일 거울이성질체의 선택적인 용해를 이용하여 거울이성질체가 분리되는 기술; 및
xiii) 키랄성 막을 횡단하는 수송 - 라세미체를 박막 장벽과 접촉시켜 위치시키는 기술. 장벽은 통상적으로 그 중 하나는 라세미체를 함유하는 2종의 혼화가 능한 유체를 분리하며, 농도 또는 압력 차이와 같은 구동력이 막 장벽을 횡단하는 선택적 수송을 야기시킨다. 분리는 막의 비-라세미 키랄성 특성이 라세미체 중 하나의 거울이성질체만을 통과하도록 하는 것의 결과로 발생한다.
화합물의 합성
여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물은 일 구현예에서 영국 콘월(Cornwall)의 메이브릿지(Maybridge) 사 또는 캘리포니아 샌디에고의 EMD 칼바이오켐(Calbiochem) 사로와 같은 공급원으로부터 시중에서 구입가능하다.
일 구현예에서, 알킬아세토아세테이트 또는 다른 β-케토에스테르 또는 β-케토케톤 2 당량과 에탄올 (~4 당량) 및 NH4OH (~3 당량)에 용해된 아릴알데하이드 1 당량의 주변 온도에서의 반응에 의해, 3,5 2치환 대칭성 디하이드로피리딘 화합물이 제조된다. 합성에 사용되는 아릴알데하이드 화합물은 원하는 대로 임의로 치환될 수 있다. 알킬아세토아세테이트 시약의 알킬 기는 포화 또는 불포화이거나, 또는 원하는 대로 치환되어 알콕시와 같은 치환체를 포함할 수 있다. 이 혼합물을 예컨대 주변 온도에서 1시간 동안, 이어서 80-100 ℃에서 2-3시간 교반한다. 다음에, 반응 혼합물은 주변 온도로 냉각되고, 톨루엔과 같은 용매와 공비될(azeotroped) 수 있으며, 생성물은 고온 헥산과 같은 용매 또는 에틸 아세테이트와 헥산과같은 용매 조합으로부터 결정화될 수 있다. 하기의 반응에서, R은 알킬 또는 치환된 알킬과 같은 원하는 기이며; R6는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알콕사이드, 또는 아릴옥사이드와 같은 원하는 기이고; R1, R2, R3, R4, R5는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이다.
Figure 112007088061992-PAT00098
또 다른 구현예에서, 알킬아세토아세테이트 또는 다른 β-케토에스테르 또는 β-케토케톤 1 당량, 아릴알데하이드 1 당량 및 에탄올 (~4 당량) 및 AcOH (~0.6 당량)에 용해된 메틸-3-아미노크로토네이트 1 당량의 반응에 의해, 3,5 2치환 비대칭성 디하이드로피리딘 화합물이 제조된다. 합성에 사용되는 아릴알데하이드 화합물은 원하는 대로 임의로 치환될 수 있다. 이 혼합물을 예컨대 95 ℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 주변 온도로 냉각하고, 에틸 아세테이트와 같은 용매로 희석한 후, Na2SO4와 같은 건조제로 건조하고, 생성물은 에틸 아세테이트와 헥산의 혼합물 (1:9)과 같은 용매 또는 용매 조합으로부터 결정화될 수 있다. 하기의 반응에서, R은 알킬 또는 치환된 알킬과 같은 원하는 기이며; R7은 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알콕사이드, 또는 아릴옥사이드와 같은 원하는 기이고; R1, R2, R3, R4, R5는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이다.
Figure 112007088061992-PAT00099
또 다른 구현예에서, 예컨대 디메틸포름아미드 (DMF)와 같은 용매 내 수소화 나트륨과 같은 금속 수소화물 1.5 당량의 교반 현탁액에 디하이드로피리딘 1 당량을 첨가함으로써, 피리딘 N에서 치환된 3,5 2치환 대칭성 또는 비대칭성 디하이드로피리딘 화합물이 제조된다. 반응 혼합물은 예컨대 불활성의, 예를 들어 N2 대기하 주변 온도에서 30분 동안 교반된다. 다음에, 알킬 클로라이드가 예컨대 N2 하 실온에서 적가될 수 있다. 예컨대 18시간의 교반 후, 반응 혼합물은 예컨대 추출에 의해 분리 및 정제될 수 있다. 예를 들어, 반응 혼합물은 50 % 수성 NH4Cl과 함께 분리기(separatory)에 첨가될 수 있으며, 수성 현탁액은 에틸 아세테이트로 추출될 수 있다. 다음에, 유기 추출물은 물로 세척되고, 예컨대 Na2SO4로 건조되고, 예컨대 여과에 의해 분리되고, 감압하에서 농축될 수 있다. 정제는, 예를 들어 컬럼 크로마토그래피, 예컨대 0-10 % 에틸 아세테이트와 헥산 (1:9)과 같은 용매 또는 용매 혼합물로 용리되는 실리카 겔 컬럼에 의해 성취될 수 있다. 하기의 반응 에서, R은 알킬 또는 치환된 알킬과 같은 원하는 기이며; R6는 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알콕사이드, 또는 아릴옥사이드와 같은 원하는 기이고; R7은 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알콕사이드, 또는 아릴옥사이드와 같은 원하는 기이며; R8은 임의로 치환된 알킬, 아릴, 알콕사이드, 또는 아릴옥사이드와 같은 원하는 기이고; R9은 임의로 치환된 알킬과 같은 원하는 기이며; R1, R2, R3, R4, R5는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이다.
Figure 112007088061992-PAT00100
또 다른 구현예에서는, 예컨대 케토에스테르로부터 3,5 2치환 비대칭성 디하이드로피리딘 화합물이 제조된다. 멜드럼(Meldrum's) 산 경로를 사용하여, 보호되어 시중에 유통되지 않는 다양한 β-케토에스테르가 합성될 수 있다. 케토에스테르 및 알데하이드로부터의 벤질리딘의 합성은 알콜성 용매 내 촉매성 (5-10 %) 피페리디늄 아세테이트와 같은 촉매를 사용하여 실온에서, 또는 벤젠을 사용하여 딘- 스타크(Dean-Stark) 조건 하에서 예컨대 70 %의 수율로 이루어진다. 예컨대 암모니아 (THF, 30-50 ℃, 분자체 4A) 또는 암모늄 아세테이트 (에탄올, 환류, 30분)를 사용하여 그대로, 중간물 엔아미드가 합성될 수 있다. 알콜성 용매 내에서의 벤질리딘 및 엔아미드와의 한츠쉬(Hantzsch) 반응은 이중으로 보호된 C3,5-디에스테르로 귀결될 수 있다. 보호해제 후, 예컨대 하기한 바와 같은 암로디핀의 합성을 위하여, 산 기가 요구되는 서로 다른 아민과 결합되는 데에 사용된다.
Figure 112007088061992-PAT00101
일 구현예는 왕(Wang) 수지와 같은 적당한 수지를 사용하는 고체상 방법이다. 이 방법에서는, 카르보닐디이미다졸을 사용하여 치환된 하이드록시아민이 왕 수지에 결합되어 1을 제공한다. 자일렌과 같은 불활성 용매 내 140 ℃에서 2,2-디메틸-6-알킬-1,3-디옥산온으로 1을 처리하여 β-케토에스테르 수지 2를 제공한다. 수지 2는 치환된 아미노크로토네이트, 및 DMF 내 알데하이드로 처리되어 수지 결합 DHP 3을 형성한다. 다음에, 수지는 하이드라진 (예컨대 1:1 EtOH:THF 내 0.5 N)로 세척된다. TFA (예컨대 DCM 내 25 %)를 사용하여 수지로부터 분열시킴으로써 생성물 5가 미량의 부산물과 함께 수득되며, 부산물은 예컨대 하기한 바와 같은 플래시 크로마토그래피를 사용하여 분리된다.
Figure 112007088061992-PAT00102
또 다른 구현예는 2-옥소-1,2-디하이드로피리딘의 합성으로서, 여기에서는 벤젠과 같은 불활성 용매 내에서 n-싸이클로펜타디에닐트리페닐포스파인-2,5-디페닐-3,4-비스-(메톡시카르보닐)코발트아싸이클로펜타디엔 등의 코발트 촉매와 같은 촉매의 존재 하에, 서로 다르게 치환된 아세틸렌들이 치환된 이소시아네이트와 반 응되며, 용액은 예컨대 135 ℃에서 약 1-2-시간 동안 환류되고, 하기한 바와 같은 플래시 크로마토그래피와 같은 분리 단계가 이어진다.
Figure 112007088061992-PAT00103
적당한 치환체를 제공하기 위하여 변형될 수 있는 합성 경로의 다른 예는 실시예 6-59에 개시되어 있다.
약학적 제제 및 투여 방법
여기에서 개시되는 방법은 알츠하이머병, 뇌 아밀로이드 혈관병, 아밀로이드성 유전성 뇌 출혈 더치-유형, 다른 유형의 가족성 알츠하이머병 및 가족성 뇌 알츠하이머 아밀로이드 혈관병과 같이 β-아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료를 위하여 유효량 투여될 수 있다. 이러한 화합물은 또한 여기에서 "활성제"로 칭하여진다. 투여량 및 약학적 제제화는 업계에 알려진 방법에 의해 선택될 수 있다. 화합물은 비경구, 경구 또는 복강 투여를 포함하여 업계에 알려진 모든 경로에 의해 투여될 수 있다.
동물 또는 인간에게 투여되는 여기에서 개시되는 화합물은 표준의 의학적 경험 및 업계 숙련자의 일반 지식에 따라 투여된다. 구체적으로, 화합물의 치료적 유효량 또는 그 이상이 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받거나 또는 외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간에게 단위 투여량 형태로 투여됨은 물론, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진행 및/또는 진단 위험성을 확인하기 위한 목적으로 진단적으로 투여될 수 있다. 바람직한 일 구현예에서, 화합물은 배양 세포에서 CCE를 예컨대 적어도 약 10 % 또는 그 이상 감소시키며, 임의로 APP를 과발현하는 배양 세포에서 β-아밀로이드 생성을 예컨대 적어도 약 20 % 또는 그 이상 감소시키는 화합물이다.
비경구 투여에는 하기의 경로가 포함된다: 정맥내; 근육내; 사이질내; 동맥내; 피하; 안내; 두개내; 뇌실내; 윤활막내; 경피를 포함하는 경상피내; 흡입, 안용, 설하 및 구강을 통한 폐내; 안용, 진피, 안구, 직장을 포함하는 국소; 또는 흡입 또는 분무를 통한 비강 흡입. 비강 흡입은, 예컨대 에어로졸, 분무기 또는 호흡보조기(nebulizer)를 사용하여 수행된다.
적합한 투여량의 예는, 예컨대 단위 투여량당 약 0.02 mg 내지 1000 mg, 단위 투여량당 약 0.5 mg 내지 500 mg, 또는 단위 투여량당 약 20 mg 내지 100 mg이다. 1일 투여량은 단일의 단위 투여량 또는 일당 2, 3 또는 4 단위 투여량으로 나누어서 투여될 수 있다. 활성제의 치료 기간은, 예컨대 시간, 주, 월, 년 또는 일생의 수준이다. 치료는 예컨대 1-7일, 1-4주, 1-6개월, 6-12개월, 또는 그 이상의 기간을 가질 수 있다.
화합물은 비경구적으로 또는 복강으로 CNS에 투여될 수 있다. 예를 들어 유리 염기 또는 약학적으로 허용가능한 염으로서의 화합물 용액이 하이드록시프로필셀룰로스와 같은 적합한 계면활성제와 혼합된 물에서 제조될 수 있다. 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 및 그의 혼합물에서 분산액이 제조될 수도 있다. 통상적인 저장 및 사용 조건 하에서, 이러한 제조물은 미생물의 성장 또는 화학적 변질을 방지하기 위하여 보존제 및/또는 항산화제를 함유할 수 있다.
경구적으로 투여되는 화합물은 경질 또는 연질의 셸(shell) 젤라틴 캡슐에 내장되거나 정제로 압축될 수 있다. 화합물은 또한 첨가제와 함께 혼입되어 섭취가능한 정제, 구강 정제, 트로키, 캡슐, 샤셰, 로젠지, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다. 또한, 화합물은 분말 또는 그래뉼, 수성 또는 비-수성 액체 내 용액 또는 현탁액, 또는 수중유 또는 유중수 에멀젼의 형태일 수 있다.
정제, 트로키, 필, 캡슐 등은 또한, 예컨대 트라가칸스 고무, 아카시아, 옥수수 전분과 같은 바인더; 디칼슘 포스페이트와 같은 겔화 첨가제; 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산 등과 같은 분해제; 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제; 슈크로스, 락토스 또는 사카린과 같은 감미제; 또는 향미제를 함유할 수 있다. 투여량 단위 형태가 캡슐일 경우, 이것은 상기한 물질들에 더하여, 액체 담체를 함유할 수 있다. 다양한 다른 물질들이 코팅으로서, 또는 투여량 단위의 물리적 형태를 다르게 변형시키기 위하여 존재할 수 있다. 예를 들어, 정제, 필, 또는 캡슐은 셸락(shellac), 설탕 또는 이들 모두로 코팅될 수 있다. 시럽 또는 엘릭시르는 여기에서 개시되는 화합물, 감미제로서의 슈크로스, 보존제로서의 메틸 및 프로필파라벤, 염료 및 향미제를 함유할 수 있다. 추가적으로, 화합물은 지속-방출 제조물 및 제제로 혼입될 수 있다.
하기 비-제한적인 실시예를 보게 되면 본 발명이 더 상세하게 이해될 것이 다.
실시예 1 - Aβ1-40 및 Aβ1-42의 측정
1. 재료 및 방법
인간 APP751이 안정하게 전이된 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 (7W WT APP751 CHO 세포)를 사용하였다. 예를 들어 문헌 [Koo and Squazzo, J. Biol. Chem., Vol. 269, Issue 26, 17386-17389, Jul, 1994]를 참조하라. 75 cm2 세포 배양 플라스크에서 제네티신을 선택제로 하여, 10 % 소 태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신/펑기존(fungizone)/글루타민 혼합물 (캠브렉스(Cambrex), MD)의 1X 혼합물이 보강된 DMEM 배지에서 세포가 유지되었다.
7W WT APP751 CHO 세포를 1ml의 배양 배지를 함유하는 24-웰 세포 배양 플레이트에 4반복으로 도말하고(plated), 37 ℃ 및 5 % CO2에서 다양한 칼슘 채널 차단제 화합물로 4시간, 24시간 또는 48시간 동안 처리하였다. 모든 시험 화합물을 디메틸 설폭사이드 (DMSO)에 희석한 후, 배양되는 융합성(confluent) 7W WT APP751 CHO 세포에 첨가하였다. 배양 배지를 수집하여 4시간 분석시험을 위하여 5배 및 24시간 분석시험을 위하여 50배 희석한 후, ELISA를 사용하여 Aβ1-40 및 Aβ1-42를 각각 분석시험하였다. 시중에서 구입가능한 ELISA (CA의 바이오소스(Biosource) 사)를 사용하여, 분광광도적으로 검출되는 표지 항체를 사용하는 열량측정 분석시험으로 pg/ml로 표시되는 Aβ1-40 및 Aβ1-42 농도를 확인하였다.
G-sec Inhib XIX, SKF 96365, 2-APB, 펠로디핀, FPL, 클로트리마졸, 테트란 드린, R24571 및 에코나졸은 캘리포니아 라 졸라의 EMD 바이오사이언스, 인크.(Bioscience, Inc.) 사로부터 칼바이오켐(Calbiochem) 제품으로 구입가능하며; 니발디핀, 니트렌디핀 및 암로디핀 (암로디핀 베실레이트)은 예컨대 일본 오사카의 후지사와(Fujisawa) 사로부터 구입가능하고; 탑시가르긴, BAPTA-AM 및 TA9 (티르포스틴 A9)은 미주리 세인트루이스의 시그마-알드리치 코프.(Sigma-Aldrich Corp.) 사로부터 시그마 제품으로 구입가능하며; 펠로디핀, 딜티아젬, S(-)Bay K8644, R(+)Bay K8644, MRS 1845, SR 33805, 로페르아미드, 및 이스라디핀은 미주리 엘리스빌의 토크리스 쿡선 인크.(Tocris Cookson Inc.) 사로부터 구입가능하다.
2. 결과
30 μM의 암로디핀을 사용한 4시간 동안의 세포 처리는 대조구에 비하여 Aβ1-40의 농도를 현저하게 감소시켰다 (도 1A). 도 1A에서, 2-APB는 2-아미노에톡시디페닐보레이트를 말하며, BAPTA-AM은 1,2-비스(2-아미노페녹시)에탄 N,N,N',N'-테트라아세트산 아세톡시메틸 에스테르를 말한다. 30 μM의 니발디핀, 30 μM의 암로디핀, 또는 15 또는 30 μM의 SKF 96365를 사용한 24시간 동안의 세포 처리는 대조구에 비하여 Aβ1-40의 농도를 현저하게 감소시켰다 (도 1B). 30 μM의 니발디핀 또는 30 μM의 니트렌디핀을 사용한 저밀도로 도말된 세포의 24시간 동안의 처리는 대조구에 비하여 Aβ1-40의 농도를 현저하게 감소시켰다 (도 1C). 30 μM의 니발디핀, 5 또는 30 μM의 암로디핀, 또는 30 μM의 니트렌디핀을 사용한 저밀도로 도말된 세포의 48시간 동안의 처리는 대조구에 비하여 Aβ1-40의 농도를 현저하게 감소시켰다 (도 1D). 도 2에 나타난 바와 같이, 30 μM의 SKF 96365, 30 μM의 에코나졸 또는 20 μM의 티르포스틴 A9 (도면의 "TA9")은 대조구에 비하여 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드의 농도를 현저하게 감소시켰다. 도 3에 나타난 바와 같이, 30 μM의 니발디핀, 30 μM의 니트렌디핀 또는 30 μM의 MRS 1845는 대조구에 비하여 Aβ1-40 및 총 β-아밀로이드의 농도를 현저하게 감소시켰다. 도 4에 나타난 바와 같이, 10 또는 30 μM의 SR 33805 또는 30 μM의 로페르아미드는 대조구에 비하여 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드의 농도를 현저하게 감소시켰으며, 20 μM의 클로트리마졸, 5, 10, 20 또는 30 μM의 테트란딘, 또는 5 μM의 R24571은 대조구에 비하여 Aβ1-40 및 총 β-아밀로이드의 농도를 현저하게 감소시켰다. 도 4에서, S(-)-Bay는 S(-)-BayK8644를 말하며; R(+)-Bay는 R(+)-Bay K8644를 말하고; MRS는 MRS 1845를 말하며; FPL은 플루페나진 머스타드(mustard)를 말한다 (도 21 참조).
실시예 2 - 디하이드로피리딘 화합물의 스크리닝
1. 재료 및 방법
메이브릿지 사 (영국)로부터 디하이드로피리딘 화합물을 입수하였다. 각 화합물을 DMSO에 용해시켰다. APP를 과발현하는 7W WT APP751 CHO 세포를 200 μL의 배양 배지로 96-웰 배양 플레이트에 도말하였다. 라이브러리(library)로부터의 각 화합물을 30 μM의 최종 농도로 융합성 세포에 첨가하였다. 처리 24시간 후, 배양 배지를 수집하여 각각 Aβ1-40 및 Aβ1-42의 농도를 측정하기 위하여 10배 및 2배로 용해시켰다. 시중에서 구입가능한 ELISA (CA의 바이오소스 사)를 제조자의 추천에 따라 사용하여 Aβ1-40 및 Aβ1-42를 확인하였다.
2. 결과
도 5A에 나타난 바와 같이, 30 μM의 BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03282, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305 또는 JFD 03318을 사용한 24시간 동안의 7W WT APP751 CHO 세포의 처리는, 대조구에 비하여 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드 (Aβ1-40 + Aβ1-42)의 농도를 현저하게 감소시켰다. 30 μM의 JFD 03266, JFD 03274, JFD 03292 또는 JFD 03311을 사용한 24시간 동안의 7W WT APP751 CHO 세포의 처리는, 대조구에 비하여 Aβ1-40 및 총 β-아밀로이드 (Aβ1-40 + Aβ1-42)의 농도를 현저하게 감소시켰다. 도 5B에 나타난 바와 같이, 30 μM의 PD 00463, RJC 03403 또는 RJC 03423을 사용한 24시간 동안의 7W WT APP751 CHO 세포의 처리는, 대조구에 비하여 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드의 농도를 현저하게 감소시켰다. 30 μM의 RJC 03405, RJC 03413, SEW 02070 또는 XBX 00343을 사용한 24시간 동안의 7W WT APP751 CHO 세포의 처리는, 대조구에 비하여 Aβ1-40 및 총 β-아밀로이드 (Aβ1-40 + Aβ1-42)의 농도를 현저하게 감소시켰다.
실시예 3 - NF - kB 활성화 억제제의 스크리닝
1. 재료 및 방법
스크리닝되는 대부분의 화합물은 캘리포니아 라 졸라의 EMD 바이오사이언스, 인크. 사로부터 칼바이오켐 제품으로 입수할 수 있다. R- 및 S- 니굴디핀은 예컨대 미주리 엘리스빌의 토크리스 쿡선 인크. 사로부터 구입가능하다. CAPE 및 아르테미시닌은 예컨대 미주리 세인트루이스의 시그마-알드리치 코프. 사로부터 시그마 제품으로 구입가능하다.
각 화합물을 DMSO에 용해시켰다. APP를 과발현하는 7W WT APP751 CHO 세포를 200 μL의 배양 배지로 96-웰 배양 플레이트에 도말하였다. 라이브러리(library)로부터의 각 화합물을 500 nM, 1 μM, 5 μM, 10 μM 및/또는 30 μM의 최종 농도로 융합성 세포에 첨가하였다. 처리 24시간 후, 배양 배지를 수집하여 각각 Aβ1-40 및 Aβ1-42의 농도를 측정하기 위하여 10배 및 2배로 용해시켰다. 시중에서 구입가능한 ELISA (CA의 바이오소스 사)를 제조자의 추천에 따라 사용하여 Aβ1-40 및 Aβ1-42를 확인하였다.
2. 결과
도 6에 나타난 바와 같이, 1, 5 또는 30 μM의 R-니굴디핀, 1, 5 또는 30 μM의 (S)-(+)-니굴디핀, 1 또는 30 μM의 아르테미시닌, 500 nM 또는 5 μM의 셀라스트롤, 500 nM 또는 5 μM의 도 5에서 "퀴나졸린"이라 불리우는 NF-kb 활성화 억제제 6-아미노-4-(4-페녹시페닐에틸아미노)퀴나졸린, 5 또는 10 μM의 이소헬레닌, 10 또는 30 μM의 카메바카우린, 또는 500 nM 또는 5 μM의 IKK-2 억제제 IV를 사용한 24시간 동안의 7W WT APP751 CHO 세포의 처리는, 대조구에 비하여 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드의 농도를 현저하게 감소시켰다. 추가적인 화합물을 사용하는 추가적인 시도의 추가적인 결과는 도 12-15에 나타내었다.
실시예 4 - 축전식 칼슘 진입 분석시험
미세플레이트(microplate)를 사용하는 칼슘 형광분석 측정에 의해 CCE 활성이 분석시험되었다. 구체적으로, APP를 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포 (7W WT APP751 CHO 세포)를 96 웰 분석시험 플레이트 (멸균 흑색 플레이트, 뚜껑이 구비된 투명 바닥, 조직 배양 처리, 코스타(Costar) 사 ref# 3603) 상에서 10 % 혈청을 함유하는 DMEM 배지 (기브코, 인비트로젠 코포레이션(Gibco, Invitrogen corporation) 사)로 24시간 동안 성장시켰다. 플루오-4 아세톡시메틸 에스테르 (Fluo-4/AM 에스테르; > 98 %의 HPLC 순도 제원을 가지는 특별 플루오로퓨어TM(FluoroPureTM) 등급, 오레건의 몰큘라 프로브즈(Molecular Probes) 사, ref# F-23917)를 DMSO에 용해시키고 DMEM 배지에서 10 μM의 농도까지 더 용해시켰다. 다음에, 융합성 CHO 세포를 신선한 DMEM으로 세척하고 200 μL의 Fluo-4/AM (DMEM에 용해시킨)으로 27 ℃에서 30분 동안 배양하였다. 이 배양 기간 후, 세포를 500 μM의 EGTA를 함유하는 200 μL의 HBSS (145 mM의 NaCl, 2.5 mM의 KCl, 1 mM의 MgCl2, 20 mM의 HEPES, 10 mM의 글루코스)로 세척하고, 다-채널 마이크로피펫을 사용하여 즉시 200 μL의 HBSS로 3회 세척하였다. 다음에, 세포를 100 μL의 HBSS (칼슘 없음)에서 27 ℃로 30분 동안 배양 (광으로부터 보호)하였다.
이 배양 기간 후, 세포를 함유하는 미세플레이트에 서로 다른 시험할 화합물들을 적재하고, 즉시 컴퓨터 인터페이스가 구비되고 27 ℃에서 온도조절되며 2개의 미세주입기가 장착된 분광형광측정기 (시너지(Synergy) HTTR (미국 버몬트의 바이오-텍(Bio-Tek) 사))로 삽입하였다. 분광형광측정기의 제1 미세주입기에 4.5 μM의 탑시가르긴 (TG)을 함유하는 HBSS를 적재하는 한편, 제2 미세주입기에는 8 mM의 CaCl2를 함유하는 HBSS를 적재하였다. 동역학적 모드를 사용하여 플레이트 각 웰을 해독하도록 분광형광측정기를 프로그램하였다. 하기의 파라미터들을 사용함으로써 각 해독을 수행하였다: 485 nm에서 여기하고 516 nm에서 방출. 먼저, 바탕 형광도를 확인하기 위하여 각 해독 사이에 1분 25초 간격으로 11회의 해독이 수행되었다. 다음에, 4.5 μM의 TG를 함유하는 50 μL의 HBSS (300 μL/초의 속도로 방출)를 미세플레이트의 모든 웰에 첨가하였다 (TG의 최종 농도: 1.5 μM). TG 첨가 1분 25초 후, 11회 (각 해독 사이에 1분 25초의 간격으로)의 해독이 수행되었고, 다음에 각 웰에 8 mM의 CaCl2를 함유하는 50 μL의 HBSS를 첨가하고 (2 mM의 최종 칼슘 농도), 11회 (각 해독 사이에 1분 25초의 간격으로)의 해독이 수행되었다. CCE의 피크 진폭은 해독 번호 23 동안 수득된 형광 값으로부터 해독 번호 22 동안 수득된 형광 값을 차감함으로써 확인되었다.
시험되는 각 화합물에 있어서 실험은 8회 반복되었으며, 각 화합물에 대하여 CCE의 평균 피크 진폭이 계산되었다. 처리되지 않은 세포에서의 CCE 평균 피크 진폭을 확인하기 위하여 각 플레이트에서 8개의 웰이 대조구로 사용되었다. CCE 억제 백분율은 하기의 식에 따라 계산되었다: 100*(A-B)/A, 여기서 A는 처리되지 않은 세포 (대조구)에서의 CCE 평균 피크 진폭을 표시하며, B는 처리된 세포에서의 CCE 평균 피크 진폭을 표시한다.
CHO 세포에서 CCE를 억제하는 화합물들은, 도 7A (CCE 억제와 총 β-아밀로이드 억제의 상관관계 그래프), 도 7B (도 7A에 나타낸 화합물의 목록), 도 8A (% CCE 억제와 % Aβ1-40 억제의 상관관계) 및 도 8B (도 8A에 나타낸 화합물의 목록) 에 나타난 바와 같이, 총 Aβ 생성 역시 억제, 즉 감소시켰다. 하기의 예외를 제외하고 도 8B에 나타낸 화합물은 모두 예컨대 영국 콘월의 메이브릿지 plc 사로부터 구입가능하다. SKF 96365 및 에코나졸은 예컨대 캘리포니아 라 졸라의 EMD 바이오사이언스, 인크. 사로부터 칼바이오켐 제품으로 구입가능하다. 니발디핀은 예컨대 일본 오사카의 후지사와 사로부터 구입가능하다. 티르포스틴 A9은 예컨대 미주리 세인트루이스의 시그마-알드리치 코프. 사로부터 시그마 제품으로 구입가능하다.
영국 콘월의 메이브릿지 plc 사로부터 입수한 화합물에 대하여 메이브릿지 화합물명이 사용된 도 16-20도 참조하라.
실시예 5 - 디하이드로피리딘 화합물의 스크리닝
1. 재료 및 방법
실시예 1에 기재된 절차에 따라 디하이드로피리딘 화합물의 스크리닝이 수행되었다. 표 2에 나타낸 화합물 2-19, 2-32, 2-23, 2-33, 2-27, 2-28, 및 2-29가 시험되었다. 각 화합물을 3, 10, 30 또는 100 μM의 최종 농도로 융합성 세포에 첨가하고 시험하였다. 표 2에 나타낸 화합물 3-42, 3-34, 3-23, 3-22, 3-38, 3- 37, 3-41, 및 3-33 역시 시험되었다. 이 화합물들 각각을 3 μM (도 24에서 "C"로 표시) 또는 10 μM (도 24에서 "B"로 표시)의 최종 농도로 융합성 세포에 첨가하였다.
2. 결과
2-19, 2-32, 2-23, 2-33, 2-27, 2-28, 및 2-29의 각 화합물 3, 10, 30 및 100 μM으로 7W WT APP751 CHO 세포를 24시간 동안 처리하였을 때의 Aβ1-40 및 Aβ1-42 생성에 대한 결과를 도 22A, 22B, 23A, 23B에 나타내었다. 화합물들은 대조구에 비해 Aβ1-40 또는 Aβ1-42의 농도를 감소시켰다.
3-42, 3-34, 3-23, 3-22, 3-38, 3- 37, 3-41, 및 3-33의 각 화합물 3 및 10 μM으로 7W WT APP751 CHO 세포를 24시간 동안 처리하였을 때의 Aβ1-40 생성에 대한 결과를 도 24에 나타내었다. 화합물들은 대조구에 비해 Aβ1-40의 농도를 감소시켰다.
실시예 6-59를 위한 일반 기술
무수 조건이 필요한 모든 반응은 오븐-건조된 장치에서 질소 대기 하에 수행되었다. 예비 크로마토그래피 분리는 이스코 인크.(Isco Inc.) 사의 콤비플래시 컴패니온(Combiflash Companion)에서 수행되었으며; 실리카 플레이트를 사용하여 형광 표지자 (254)로 TLC 분석에 의해 반응이 이어졌고, UV, 인몰리브덴산 또는 4-하이드록시-3-메톡시벤즈알데하이드로 가시화되었다. 시중에서 구입가능한 모든 시약들은 알드리치 사 및 아크로스(Acros) 사로부터 구입하였으며 보통 공급된 그대로 사용하였다.
융점은 반스테드(Barnstead) 융점 장치에서 개방형 모세관 튜브를 사용하여 기록되었으며, 보정되지 않았다. 1H 및 13C NMR 스펙트럼은 바리안(Varian) AS500 분광계에서 설정된 전계 강도에서 퓨리에 변환 모드로 기록되었다. 스펙트럼은 5 mm 직경 튜브 내 CDDl3 용액에서 수득되었으며, 화학 이동(chemical shift)은 클로 로포름 잔기 신호에 대비하여 ppm으로 구하였다 (δH 7.25 ppm, 또는 δC 77.0 ppm). 1H NMR 스펙트럼에서의 다중도는 하기와 같이 기재되었다: s = 단일(singlet), d = 이중(double), t = 삼중(triplet), q = 4중(quartet), m = 다중(multiplet), br = 광역(broad); 커플링 상수는 Hz로 기록되었다. 저 (MS) 해상도 질량 스펙트럼은 아드비온 바이오사이언스 나노메이트(Advion Bioscience Nanomate) 전자분사원을 이용하여 마이크로매스(Micromass) Q-Tof API-US 분광계에서 측정되었다. 이온 질량/전하 (m/z) 비는 원자 질량 단위의 값으로 기록되었다.
실시예 6 - 디에틸 4(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00104
실온 (rt)에서 에틸 아세토아세테이트 (25.3 mL, 99 %, 200 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (11.3 mL, 99 %, 100 mmol)를 EtOH (20 mL)에 취합하였다. NH4OH (10 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 100 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, 고온 헥산으로부터 결정화하여 9.63 g (26 %)의 디에틸 4(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하 였다:
Figure 112007088061992-PAT00105
실시예 7 - 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디(2- 에탄온 )
Figure 112007088061992-PAT00106
실온에서 2,4-펜탄디온 (1.03 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 100 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (2:3)으로부터 결정화하여 231 mg (15 %)의 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디(2-에탄온)을 담황색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00107
실시예 8 - 디메틸 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00108
실온에서 메틸 아세토아세테이트 (1.08 mL, 99+ %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 75 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (1:5)으로부터 결정화하여 760 mg (45 %)의 디메틸 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00109
실시예 9 - 디- 터트 -부틸 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00110
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 75 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (1:5)으로부터 결정화하여 662 mg (32 %)의 디-터트-부틸 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00111
실시예 10 - 비스 (2- 메톡시에틸 ) 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00112
실온에서 2-메톡시에틸 아세토아세테이트 (1.51 mL, 97 %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (1:5)으로부터 결정화하여 1.04 g (49 %)의 비스(2-메톡시에틸) 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00113
실시예 11 - 디에틸 4-(2- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00114
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-브로모벤즈알데하이드 (604 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 312 mg (15 %)의 디에틸 4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00115
실시예 12 - 디에틸 4-(2- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00116
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-플루오로벤즈알데하이드 (547 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.05 g (61 %)의 디에틸 4-(2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00117
실시예 13 - 디- 터트 -부틸 4-(2- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00118
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-플루오로벤즈알데하이드 (547 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 313 mg (16 %)의 디-터트-부틸 4-(2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00119
실시예 14 - 디에틸 1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸-4-(2- 니트로페닐 )피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00120
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-니트로벤즈알데하이드 (759 mg, 99+ %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 75 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, 톨루엔과 공비시킨 후, 감압하에서 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 (0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제하고, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 316 mg (17 %)의 디에틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(2-니트로페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트를 담황색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00121
실시예 14 - 디- 터트 -부틸 4-(2- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00122
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-브로모벤즈알데하이드 (604 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, Na2SO4 상에서 건조시켜 여과한 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 654 mg (28 %)의 디-터트-부틸 4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00123
실시예 15 - 디- 터트 -부틸 1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸-4-(2- 니트로페닐 )피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00124
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-니트로벤즈알데하이드 (759 mg, 99+ %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 80 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, Na2SO4 상에서 건조시켜 여과한 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 200 mg (9 %)의 디-터트-부틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(2-니트로페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트를 담황색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00125
실시예 16 - 디알릴 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00126
실온에서 알릴 아세토아세테이트 (1.40 mL, 98 %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 80 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, Na2SO4 상에서 건조시켜 여과한 후, 농축하였다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 (0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제하고, EtOAc/헥산 (1:20)으로부터 결정화하여 392 mg (20 %)의 디알릴 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00127
실시예 17 - 디메틸 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6- 비스(메톡시메틸)피리딘 -3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00128
실온에서 메틸 4-메톡시아세토아세테이트 (1.33 mL, 97 %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 80 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, Na2SO4 상에서 건조시켜 여과한 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 54 mg (3 %)의 디메틸 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-비스(메톡시메틸)피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00129
실시예 18 - 디에틸 1,4- 디하이드로 -4-(2- 요오도페닐 )-2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00130
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (511 μL, 99 %, 4.00 mmol) 및 2-요오도벤즈알데하이드 (478 mg, 97 %, 2.00 mmol)를 EtOH (400 μL)에 취합하였다. NH4OH (200 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하고, CH2Cl2로 희석하여 Na2SO4 상에서 건조시키고 여과하였다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 495 mg (54 %)의 디에틸 1,4-디하이드로-4-(2-요오도페닐)-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00131
Figure 112007088061992-PAT00132
실시예 19 - 디메틸 4-(2- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00133
실온에서 메틸 아세토아세테이트 (545 μL, 99+ %, 5.00 mmol), 2-브로모벤즈알데하이드 (604 μL, 97 %, 5.00 mmol) 및 메틸-3-아미노크로토네이트 (593 mg, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (3.25 mL)에 취합하였다. AcOH (217 μL)를 첨가하고, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 EtOAc (20 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켜 여과한 후, 농축하였다. EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 384 mg (20 %)의 디메틸 4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00134
실시예 20 - 디에틸 4-(3- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00135
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-클로로벤즈알데하이드 (572 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켜 여과한 후, 헥산 (90 mL)을 첨가하였다. 결정화하여 967 mg (53 %)의 디에틸 4-(3-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00136
실시예 21 - 디- 터트 -부틸 4-(3- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00137
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-클로로벤즈알데하이드 (572 μL, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 730 mg (35 %)의 디-터트-부틸 4-(3-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00138
실시예 22 - 디에틸 4-(4- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00139
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 4-클로로벤즈알데하이드 (714 mg, 98.5 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.24 g (68 %)의 디에틸 4-(4-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00140
실시예 23 - 디- 터트 -부틸 4-(4- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00141
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 4-클로로벤즈알데하이드 (714 mg, 98.5 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 956 mg (46 %)의 디-터트-부틸 4-(4-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00142
실시예 24 - 디에틸 4-(3- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00143
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모벤즈알데하이드 (964 mg, 96 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.46 g (71 %)의 디에틸 4-(3-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00144
실시예 25 - 디- 터트 -부틸 4-(3- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00145
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모벤즈알데하이드 (964 mg, 96 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.11 g (48 %)의 디-터트-부틸 4-(3-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00146
실시예 26 - 디에틸 4-(4- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00147
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 4-브로모벤즈알데하이드 (934 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (2 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.35 g (66 %)의 디에틸 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00148
실시예 27 - 디- 터트 -부틸 4-(4- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00149
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모벤즈알데하이드 (934 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (2 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 863 mg (37 %)의 디-터트-부틸 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00150
실시예 28 - 디- 터트 -부틸 1,4- 디하이드로 -4-(2- 요오도페닐 )-2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00151
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (659 μL, 99 %, 4.00 mmol) 및 2-요오도벤즈알데하이드 (478 mg, 99 %, 2.00 mmol)를 EtOH (400 μL)에 취합하였다. NH4OH (200 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 실리카 겔 컬럼 (용리액으로서 0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제한 후, CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 46 mg (4 %)의 디-터트-부틸 1,4-디하이드로-4-(2-요오도페닐)-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00152
실시예 29 - 디에틸 1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸-4- 페닐피리딘 -3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00153
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 벤즈알데하이드 (508 μL, 99.5 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.02 g (62 %)의 디에틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-페닐피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00154
실시예 30 - 디- 터트 -부틸 1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸-4- 페닐피리딘 -3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00155
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모벤즈알데하이드 (508 μL, 99.5 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 448 mg (23 %)의 디-터트-부틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-페닐피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00156
Figure 112007088061992-PAT00157
실시예 31 - 디에틸 4-(2,3- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00158
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2,3-디클로로벤즈알데하이드 (854 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (2 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 실리카 겔 컬럼 (용리액으로서 0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제한 후, CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 409 mg (21 %)의 디에틸 4-(2,3-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00159
실시예 32 - 디- 터트 -부틸 4-(2,3- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00160
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2,3-클로로벤즈알데하이드 (884 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (2 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 221 mg (10 %)의 디-터트-부틸 4-(2,3-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00161
실시예 33 - 디에틸 4-(2,4- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00162
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2,4-디클로로벤즈알데하이드 (893 mg, 98 %, 5.00 mmol)를 EtOH (2 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.01 g (51 %)의 디에틸 4-(2,4-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00163
실시예 34 - 디에틸 4-(2,5- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00164
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (640 μL, 99 %, 5.00 mmol) 및 2,5-디클로로벤즈알데하이드 (446 mg, 98 %, 2.50 mmol)를 EtOH (500 μL)에 취합하였다. NH4OH (250 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 546 mg (55 %)의 디에틸 4-(2,5-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00165
실시예 35 - 디- 터트 -부틸 4-(2,5- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00166
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (825 μL, 99 %, 5.00 mmol) 및 2,3-클로로벤즈알데하이드 (446 mg, 98 %, 2.50 mmol)를 EtOH (500 μL)에 취합하였다. NH4OH (250 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 조생성물을 CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 134 mg (12 %)의 디-터트-부틸 4-(2,5-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00167
실시예 36 - 디에틸 4-(2,6- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00168
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2,6-디클로로벤즈알데하이드 (884 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 실리카 겔 컬럼 (용리액으로서 0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제한 후, CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 89 mg (4 %)의 디에틸 4-(2,6-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00169
실시예 37 - 디에틸 4-(3,5- 디클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00170
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (640 μL, 99 %, 5.00 mmol) 및 3,5-디클로로벤즈알데하이드 (451 mg, 99.7 %, 2.50 mmol)를 EtOH (500 μL)에 취합하였다. NH4OH (250 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (5 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 275 mg (28 %)의 디에틸 4-(3,5-디클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00171
실시예 38 - 디에틸 4-(2,3- 디플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00172
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (766 μL, 99 %, 6.00 mmol) 및 2,3-디플루오로벤즈알데하이드 (335 μL, 98 %, 3.00 mmol)를 EtOH (600 μL)에 취합하였다. NH4OH (300 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 758 mg (69 %)의 디에틸 4-(2,3-디플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00173
실시예 39 - 디- 터트 -부틸 4-(2,3- 디플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00174
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (988 μL, 99 %, 6.00 mmol) 및 2,3-디플루오로벤즈알데하이드 (335 μL, 98 %, 3.00 mmol)를 EtOH (600 μL)에 취합하였다. NH4OH (300 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (5 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 644 mg (51 %)의 디-터트-부틸 4-(2,3-디플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00175
실시예 40 - 디알릴 4-(4- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00176
실온에서 알릴 아세토아세테이트 (1.40 mL, 98 %, 10.0 mmol) 및 4-브로모벤즈알데하이드 (934 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 주변 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 실리카 겔 컬럼 (용리액으로서 0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제한 후, CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 188 mg (9 %)의 디알릴 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00177
실시예 41 - 디에틸 4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00178
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모-4-플루오로벤즈알데하이드 (1.03 g, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 실리카 겔 컬럼 (용리액으로서 0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제한 후, CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 440 mg (21 %)의 디에틸 4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00179
실시예 42 - 디- 터트 -부틸 4-(3- 브로모 -4- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00180
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모-4-플루오로벤즈알데하이드 (1.03 g, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 830 mg (34 %)의 디-터트-부틸 4-(3-브로모-4-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00181
실시예 43 - 디에틸 4-(4- 브로모 -2- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00182
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-플루오로-4-브로모벤즈알데하이드 (1.06 g, 96 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.24 g (58 %)의 디에틸 4-(4-브로모-2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00183
실시예 44 - 디- 터트 -부틸 4-(4- 브로모 -2- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00184
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-플루오로-4-브로모벤즈알데하이드 (1.06 g, 96 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 672 mg (28 %)의 디-터트-부틸 4-(4-브로모-2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00185
실시예 45 - 비스 (2- 메톡시에틸 ) 4-(3- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00186
실온에서 2-메톡시에틸 아세토아세테이트 (1.51 mL, 97 %, 10.0 mmol) 및 3-브로모벤즈알데하이드 (610 μL, 96 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.79 g (76 %)의 비스(2-메톡시에틸) 4-(3-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00187
실시예 46 - 비스 (2- 메톡시에틸 ) 4-(4- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00188
실온에서 2-메톡시에틸 아세토아세테이트 (1.51 mL, 97 %, 10.0 mmol) 및 4-브로모벤즈알데하이드 (934 mg, 99 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.50 g (64 %)의 비스(2-메톡시에틸) 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00189
실시예 47 - 디에틸 4-(5- 브로모 -2- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00190
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-플루오로-5-브로모벤즈알데하이드 (615 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 80 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 1.5시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.01 g (47 %)의 디에틸 4-(5-브로모-2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00191
실시예 48 - 디- 터트 -부틸 4-(5- 브로모 -2- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00192
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 2-플루오로-5-브로모벤즈알데하이드 (615 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 80 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 2시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 51 mg (2 %)의 디-터트-부틸 4-(5-브로모-2-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00193
실시예 49 - 디에틸 4-(3- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00194
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-플루오로벤즈알데하이드 (542 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.22 g (70 %)의 디에틸 4-(3-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00195
Figure 112007088061992-PAT00196
실시예 50 - 디- 터트 -부틸 4-(3- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00197
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 3-플루오로벤즈알데하이드 (542 μL, 97 %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 368 mg (21 %)의 디-터트-부틸 4-(3-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
실시예 51 - 디에틸 4-(4- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5- 디카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00199
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (1.28 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 4-플루오로벤즈알데하이드 (551 μL, 98+ %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 1.21g (58 %)의 디에틸 4-(4-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00200
실시예 52 - 디- 터트 -부틸 4-(4- 플루오로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00201
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (1.65 mL, 99 %, 10.0 mmol) 및 4-플루오로벤즈알데하이드 (551 μL, 98+ %, 5.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (500 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 658 mg (38 %)의 디-터트-부틸 4-(4-플루오로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00202
실시예 53 - 디메틸 4-(4- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6- 비스(메톡시메틸)피리딘 -3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00203
실온에서 메틸 4-메톡시아세토아세테이트 (4.14 mL, 97 %, 30.0 mmol) 및 4-브로모벤즈알데하이드 (1.87 g, 99 %, 10.0 mmol)를 EtOH (5 mL)에 취합하였다. NH4OH (1.5 mL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 30분 동안, 50 ℃에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 24시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (20 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 2.32 g (53 %)의 디메틸 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-비스(메톡시메틸)피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00204
실시예 54 - 디에틸 1-벤질-4-(4- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00205
DMF (15 mL) 내 NaH (59 mg, 광유 내 60 % 분산액, 1.5 당량)의 교반 현탁액에 디에틸 4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트 [CML-3-1] (400 gm, 0.980 mmol)을 첨가하였다. N2 하 실온에서 30분 후, 주사기를 통하여 벤질 클로라이드 (567 mL, 5.98 mmol)를 적가하고, 혼합물을 N2 하 실온에서 교반하였다. 18시간 후, 전체 반응 혼합물을 50 % 수성 NH4Cl (25 mL)과 함께 분리기 깔대기에 첨가하였다. 수성 현탁액을 EtOAc (30 mL)로 추출하여 유기 추출물을 물 (2×20 mL)로 세척한 후, Na2SO4 상에서 건조하여 여과하고, 감압 하에서 농축하였다. 실리카 겔 컬럼 (용리액으로서 0-10 % EtOAc/헥산) 상에서 정제한 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 17 mg (4 %)의 디에틸 1-벤질-4-(4-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00206
실시예 55 - 디- 터트 -부틸 1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸-4-(2,4- 디메틸페닐 )피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00207
실온에서 터트-부틸 아세토아세테이트 (988 μL, 99 %, 6.00 mmol) 및 2,4-디메틸벤즈알데하이드 (271 mg, 99 %, 2.00 mmol)를 EtOH (1 mL)에 취합하였다. NH4OH (300 μL)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안, 50 ℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 16시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 CH2Cl2 (10 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. CH2Cl2/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 158 mg (19 %)의 디-터트-부틸 1,4-디하이드로-2,6-디메틸-4-(2,4-디메틸페닐)피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00208
실시예 56 - 3-에틸 5- 메틸 4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00209
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (638 μL, 99 %, 5.00 mmol), 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol) 및 메틸-3-아미노크로토네이트 (593 mg, 97 %, 5.00 mmol)을 EtOH (3.25 mL)에 취합하였다. AcOH (217 μL)를 첨가하고, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 EtOAc (20 mL)로 희석하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 451 mg (26 %)의 3-에틸 5-메틸 4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00210
실시예 57 - 메틸 5-아세틸-4-(2- 클로로페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3-카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00211
실온에서 2,4-펜탄디온 (519 μL, 99+ %, 5.00 mmol), 2-클로로벤즈알데하이드 (562 μL, 99 %, 5.00 mmol) 및 메틸-3-아미노크로토네이트 (593 mg, 97 %, 5.00 mmol)을 EtOH (3.25 mL)에 취합하였다. AcOH (217 μL)를 첨가하고, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 EtOAc (20 mL)에 취합하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 176 mg (11 %)의 메틸 5-아세틸-4-(2-클로로페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3-카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00212
실시예 58 - 3-에틸 5- 메틸 4-(2- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3,5-디 카르복실레 이트
Figure 112007088061992-PAT00213
실온에서 에틸 아세토아세테이트 (638 μL, 99 %, 5.00 mmol), 2-브로모벤즈알데하이드 (604 μL, 97 %, 5.00 mmol) 및 메틸-3-아미노크로토네이트 (593 mg, 97 %, 5.00 mmol)을 EtOH (3.25 mL)에 취합하였다. AcOH (217 μL)를 첨가하고, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 EtOAc (20 mL)에 취합하고, Na2SO4 상에서 건조시킨 후, EtOAc/헥산 (1:9)으로부터 결정화하여 584 mg (30 %)의 3-에틸 5-메틸 4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3,5-디카르복실레이트를 백색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00214
실시예 59 - 메틸 5-아세틸-4-(2- 브로모페닐 )-1,4- 디하이드로 -2,6-디메틸피리딘-3-카르복실레이트
Figure 112007088061992-PAT00215
실온에서 2,4-펜탄디온 (519 μL, 99+ %, 5.00 mmol), 2-브로모벤즈알데하이드 (604 μL, 97 %, 5.00 mmol) 및 메틸-3-아미노크로토네이트 (593 mg, 97 %, 5.00 mmol)을 EtOH (3.25 mL)에 취합하였다. AcOH (217 μL)를 첨가하고, 혼합물을 95 ℃로 가열하였다. 3시간 후, 반응 혼합물을 주변 온도로 냉각하여 EtOAc (20 mL)에 취합하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 (0-10 % MeOH/CH2Cl2) 상에서 정제하고, CH2Cl2/헥산 (1:20)으로부터 결정화하여 121 mg (7 %)의 메틸 5-아세틸-4-(2-브로모페닐)-1,4-디하이드로-2,6-디메틸피리딘-3-카르복 실레이트를 담황색의 고체로서 산출하였다:
Figure 112007088061992-PAT00216
여기에서 개시된 구현예들은 예시적 목적만을 위한 것이라는 것, 및 이러한 관점에서 업계 숙련자에게 다양한 변형 또는 변경이 제시될 수 있을 것이며, 이들이 본 출원의 기술사상 및 권한 내에 포함되어야 한다는 것이 이해되어야 한다.
도 1A-D는, SKF 96365, 니발디핀, 니트렌디핀 및 암로디핀과 같은 다양한 칼슘 채널 차단제의, 7W WT APP751 중국 햄스터 난소 (7W WT APP751 CHO) 세포의 Aβ1-40 생성에 대한 효과를 나타내는 막대 그래프이다. 도 1A는 4시간 후 칼슘 채널 차단제 처리의 효과를 나타낸다. 도 1B는 24시간 후 칼슘 채널 차단제 처리의 효과를 나타낸다. 도 1C는 24시간 후 저밀도로 도말되었을 때의 칼슘 채널 차단제 처리의 효과를 나타낸다. 도 1D는 48시간 후 저밀도로 도말되었을 때의 칼슘 채널 차단제 처리의 효과를 나타낸다.
도 2는 3종의 CCE 억제제인 SKF 96365, 에코나졸 및 티르포스틴 A9의, 7W WT APP751 CHO 세포의 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드 생성에 대한 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 3은 니발디핀, 니트렌디핀 및 MRS 1835와 같은 다양한 디하이드로피리딘 칼슘 채널 차단제의, 7W WT APP751 CHO 세포의 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드 생성에 대한 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 4는 SR 33805, MRS 1845, 로페르아미드, 클로트리마졸 및 테트란딘과 같은 다양한 비-디하이드로피리딘 및 디하이드로피리딘 칼슘 채널 차단제의, 7W WT APP751 CHO 세포의 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드 생성에 대한 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 5A-B는 다양한 디하이드로피리딘 화합물들 (영국; 메이브릿지 사로부터 입수한 것)로 7W WT APP751 CHO 세포를 24시간 동안 처리함에 따른, Aβ1-40, Aβ 1-42 및 총 β-아밀로이드 생성에 대한 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 6은 다양한 NF-kB 활성화 억제제의, 7W WT APP751 CHO 세포의 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 β-아밀로이드 생성에 대한 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 7A는 CHO 세포에서 CCE를 억제하며 또한 총 Aβ 생성을 억제하는 화합물을 나타내는 그래프이다.
도 7B는 도 7A에 표시된 화합물의 목록이다.
도 8A는 CHO 세포에서 CCE를 억제하며 또한 Aβ-40 생성을 억제하는 화합물을 나타내는 그래프이다.
도 8B는 도 8A에 표시된 화합물의 목록이다.
도 9-11은 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물을 나타낸다.
도 12-14는 Aβ1-40, Aβ1-42 및 총 (Aβ1-40 더하기 Aβ1-42) β-아밀로이드 생성에 대한 다양한 화합물의 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 15는 β-아밀로이드 생성에 대한 다양한 화합물의 효과를 나타내는 막대 그래프이다.
도 16-21은 여기에서 개시되는 방법 및 조성물에 유용한 화합물을 나타낸다.
도 22A, 22B, 23A 및 23B는 Aβ1-40 및 Aβ1-42 생성에 대한 다양한 화합물의 효과를 나타내는 그래프이다.
도 24는 Aβ1-40 생성에 대한 다양한 화합물의 효과를 나타내는 막대 그래프이다.

Claims (46)

  1. i) 세포를 시험 화합물에 노출시키는 것;
    ii) 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입 (CCE)을 측정하는 것; 및
    iii) 세포에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 화합물의 치료적 유용성의 지표로서, 노출되지 않은 세포와 비교하여 약 10 % 이상의 CCE 감소를 검출하는 것
    을 포함하는, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료에 유용한 화합물의 시험관내 스크리닝 방법.
  2. 제 1항에 있어서, 단계 i)은 단계 ii) 전에 배양된 세포를 약 15분 이상 동안 시험 화합물에 노출시키는 것을 포함하는 방법.
  3. 제 1항에 있어서, 세포는 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포이거나, 또는 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 선택되는 방법.
  4. 제 1항에 있어서,
    iv) APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에 시험 화합물을 노출시키는 것;
    v) APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 β-아밀로이드 생성을 측정하는 것;
    vi) APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병으로 고통받는 동물 또는 인간을 치료하기 위한 화합물의 치료적 유용성의 지표로서, 약 20 % 이상의 β-아밀로이드 생성 감소를 검출하는 것
    을 더 포함하는 방법.
  5. 제 4항에 있어서, 단계 v에서, β-아밀로이드는 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포를 포함하는 배양 배지에서 측정되거나, 또는 β-아밀로이드는 세포내에서 측정되는 방법.
  6. 제 4항에 있어서, β-아밀로이드 생성은 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포인 세포에서 측정되는 방법.
  7. 제 4항에 있어서, 과발현되는 β-아밀로이드는 Aβ1-40, Aβ1-42, 또는 그의 조합인 방법.
  8. 제 1항에 있어서, CCE는, β-아밀로이드 서열 및 임의로 β 및 γ 세크레타아제 분열좌의 서열을 포함하는 APP 단백질 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 측정되는 방법.
  9. 제 1항에 있어서, 세포와 접촉되는 화합물의 농도는 약 1 nM 내지 10 mM 또는 약 500 nM 내지 50 μM 사이의 범위인 방법.
  10. 제 1항에 있어서, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병은 알츠하이머병, 뇌 아밀로이드 혈관병, 아밀로이드성 유전성 뇌 출혈 더치-유형, 다른 형태의 가족성 알츠하이머병 및 가족성 뇌 알츠하이머 아밀로이드 혈관병으로 구성되는 군에서 선택되는 방법.
  11. SKF96365, 에코나졸, 클로트리마졸, SR 33805, 로페르아미드, 테트란드린, R24571, 암로디핀, MRS 1845, 티르포스틴 A9, BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03266, JFD 03274, JFD 03282, JFD 03292, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305, JFD 03311, JFD 03318, PD 00463, RJC 03403, RJC 03405, RJC 03413, RJC 03423, SEW 02070, XBX 00343, R-니굴디핀, (S)-(+)-니굴디핀, 아르테미시닌, 셀라스트롤, 퀴나졸린, 이소헬레닌, 카메바카우린, 파르테놀라이드, IKK-2 억제제 IV 및 그의 유도체, 염 또는 전구약물로 구성되는 군에서 선택되는 화합물의 치료적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함하는, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 방법.
  12. 제 11항에 있어서, 화합물은 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 세포는 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포이거나, 또는 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 선택되는 방법.
  14. 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 화합물은 임의로 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀 또는 그의 염 또는 유리 염기가 아닌 다른 디하이드로피리딘; 이미다졸 화합물; 이소퀴놀린 알칼로이드 화합물; 칼모듈린-매개 효소 활성화 억제제; 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF) 수용체의 키나아제 활성 억제제; NF-kB 활성화 억제제; 디테르펜 또는 트리테르펜 화합물; 퀴나졸린 화합물; 세스퀴테르펜 락톤; 또는 IKK-2 억제제인, 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 방법.
  15. 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함하고, 여기서 화합물은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물, 또는 그의 R 또는 S 이성질체이며:
    <화학식 I>
    Figure 112007088061992-PAT00217
    여기서:
    R1은 H, 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 임의로 치환된 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    또는, R2' 및 R3'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R3' 및 R4'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티 오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R4' 및 R5'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R5' 및 R6'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있는,
    알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 방법.
  16. 제 15항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H, 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클인,
    방법.
  17. 제 15항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 시아노 또는 알킬 에스테르이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 할로, 또는 니트로인,
    방법.
  18. 제 15항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르이며, 여기서, R2 및 R3 중 하나 이상에서 알킬 에스테르의 알킬은 10 내지 30 또는 15-30 탄소 원자를 포함하고;
    R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로인,
    방법.
  19. 제 15항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6 각각은 알킬이고;
    R3 및 R5 각각은 C(O)O알킬이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, F, Br, 또는 니트로이고;
    R3' 및 R5' 각각은 H이고;
    R4'는 H 또는 할로인,
    방법.
  20. 임의로 APP 또는 그의 단편을 과발현하는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것을 포함하며, 여기서 화합물은 하기 화학식 VI의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물, 또는 그의 R 또는 S 이성질체이고:
    <화학식 VI>
    Figure 112007088061992-PAT00218
    여기서:
    R1은 C3-12 알킬이며, 임의로 싸이클로알킬, 싸이클로헥실 또는 싸이클로펜틸이고;
    R2 및 R4는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
    R3는 치환되지 않은 페닐 또는 하나 이상의 할로 또는 하이드록시 기로 임의로 치환된 페닐인,
    알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 치료 방법.
  21. 제 11항, 14항, 15항 또는 20항에 있어서, 화합물의 치료적 유효량은 단위 투여량당 약 0.02 내지 1000 mg 사이인 방법.
  22. 제 11항, 14항, 15항 또는 20항에 있어서, 화합물의 치료적 유효량은 단위 투여량당 약 0.5 내지 500 mg 사이인 방법.
  23. 제 11항, 14항, 15항 또는 20항에 있어서, 화합물을 사용한 치료 기간은 동물 또는 인간의 일생까지 지속되는 방법.
  24. 제 11항, 14항, 15항 또는 20항에 있어서, 동물 또는 인간에 대한 화합물의 투여 경로는 비경구, 경구 또는 복강인 방법.
  25. 제 11항, 14항, 15항 또는 20항에 있어서, 화합물은 경질 또는 연질의 셸 젤라틴 캡슐, 정제, 트로키, 샤셰, 로젠지, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼, 분말, 그래뉼, 용액 및 에멀젼으로 구성되는 군에서 선택되는 단위 투여량 형태로 경구 투여되는 방법.
  26. 제 11항, 14항, 15항 또는 20항에 있어서, 화합물은 정맥내; 근육내; 사이질내; 동맥내; 피하; 안내; 두개내; 뇌실내; 윤활막내; 경피를 포함하는 경상피내; 흡입, 안용, 설하 및 구강을 통한 폐내; 안용, 진피, 안구, 직장을 포함하는 국소; 또는 흡입 또는 분무를 통한 비강 흡입으로 구성되는 군에서 선택되는 투여 경로에 의해 비경구 투여되는 방법.
  27. 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드 또는 그의 단편의 혈장, 소변, 혈청, 전혈, 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제1 측정을 수행하는 것;
    세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것;
    동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및
    제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것을 포함하고, 여기서 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 변화는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 가능성을 나타내주며;
    여기서, 화합물은 SKF96365, 에코나졸, 클로트리마졸, SR 33805, 로페르아미 드, 테트란드린, R24571, 암로디핀, 니트렌디핀, MRS 1845, 티르포스틴 A9, BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03266, JFD 03274, JFD 03282, JFD 03292, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305, JFD 03311, JFD 03318, PD 00463, RJC 03403, RJC 03405, RJC 03413, RJC 03423, SEW 02070, XBX 00343, R-니굴디핀, (S)-(+)-니굴디핀, 아르테미시닌, 셀라스트롤, 퀴나졸린, 이소헬레닌, 카메바카우린, 파르테놀라이드, IKK-2 억제제 IV 및 그의 유도체로 구성되는 군에서 선택되는,
    동물 또는 인간에서의 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 방법.
  28. 제 27항에 있어서, 화합물은 APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포에서 선택되거나, 또는 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 선택되는 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 방법.
  29. 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 소변, 혈청, 전혈, 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제1 측정을 수행하는 것;
    세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것;
    동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및
    제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것을 포함하고, 여기서 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 변화는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 가능성을 나타내주며;
    여기서, 화합물은 임의로 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀 또는 그의 염 또는 유리 염기가 아닌 다른 디하이드로피리딘; 이미다졸 화합물; 이소퀴놀린 알칼로이드 화합물; 칼모듈린-매개 효소 활성화 억제제; 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF) 수용체의 키나아제 활성 억제제; NF-kB 활성화 억제제; 디테르펜 또는 트리테르펜 화합물; 퀴나졸린 화합물; 세스퀴테르펜 락톤; 또는 IKK-2 억제제이고; 및
    여기서 화합물은 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는,
    동물 또는 인간에서의 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 방법.
  30. 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 소변, 혈청, 전혈, 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제1 측정을 수행하는 것;
    세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것;
    동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및
    제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것을 포함하며, 여기서 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 변화는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 가능성을 나타내주고;
    여기서 화합물은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물, 또는 그의 R 또는 S 이성질체이며:
    <화학식 I>
    Figure 112007088061992-PAT00219
    여기서:
    R1은 H, 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이 드록시이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 임의로 치환된 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    또는, R2' 및 R3'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보 론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R3' 및 R4'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R4' 및 R5'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R5' 및 R6'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티 오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있는,
    동물 또는 인간에서의 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 방법.
  31. 제 30항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H, 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클인,
    방법.
  32. 제 30항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 시아노 또는 알킬 에스테르이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 할로, 또는 니트로인,
    방법.
  33. 제 30항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르이며, 여기서, R2 및 R3 중 하나 이상에 서 알킬 에스테르의 알킬은 10-30 탄소 원자를 포함하고;
    R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로인,
    방법.
  34. 제 30항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6 각각은 알킬이고;
    R3 및 R5 각각은 C(O)O알킬이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, F, Br, 또는 니트로이고;
    R3' 및 R5' 각각은 H이고;
    R4'는 H 또는 할로인,
    방법.
  35. 동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 소변, 혈청, 전혈, 또는 뇌척수액 (CSF) 농도의 제1 측정을 수행하는 것;
    세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 진단적 유효량을 동물 또는 인간에 투여하는 것;
    동물 또는 인간의 말초 순환에서 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 제2 측정을 수행하는 것; 및
    제1 측정과 제2 측정 사이의 차이를 계산하는 것을 포함하며, 여기서 제1 측정과 비교하였을 때 제2 측정에서의 β-아밀로이드의 혈장, 혈청, 전혈, 소변 또는 CSF 농도의 변화는 동물 또는 인간에서 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 가능성을 나타내주고;
    여기서 화합물은 하기 화학식 VI의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물, 또는 그의 R 또는 S 이성질체이며:
    <화학식 VI>
    Figure 112007088061992-PAT00220
    여기서:
    R1은 C3-12 알킬이며, 임의로 싸이클로알킬, 싸이클로헥실 또는 싸이클로펜틸이고;
    R2 및 R4는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
    R3는 치환되지 않은 페닐 또는 하나 이상의 할로 또는 하이드록시 기로 임의로 치환된 페닐이며;
    여기서 화합물은 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는,
    동물 또는 인간에서의 알츠하이머 아밀로이드의 뇌 축적과 관련된 질병의 진단 방법.
  36. 제 27항, 29항, 30항 또는 35항에 있어서, 화합물 치료의 기간은 약 1일 내지 12개월인 방법.
  37. 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하며;
    여기서 화합물은 SKF96365, 에코나졸, 클로트리마졸, SR 33805, 로페르아미드, 테트란드린, R24571, 암로디핀, 니트렌디핀, MRS 1845, 티르포스틴 A9, BTB 14328, CD 04170, HTS 01512, HTS 07578, HTS 10306, JFD 01209, JFD 03266, JFD 03274, JFD 03282, JFD 03292, JFD 03293, JFD 03294, JFD 03305, JFD 03311, JFD 03318, PD 00463, RJC 03403, RJC 03405, RJC 03413, RJC 03423, SEW 02070, XBX 00343, R-니굴디핀, (S)-(+)-니굴디핀, 아르테미시닌, 셀라스트롤, 퀴나졸린, 이소헬레닌, 카메바카우린, 파르테놀라이드, IKK-2 억제제 IV 및 그의 유도체로 구성되는 군에서 선택되는,
    외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료 방법.
  38. 제 37항에 있어서, 화합물은, APP751을 과발현하는 중국 햄스터 난소 세포; 인간 뉴런 전구체 세포 (HNPC); 인간 성상세포의 1차 배양; 신경모세포종 세포; 인간 뇌 미세혈관 내피 1차 배양; 또는 인간 제대 내피 세포 (HUVEC)에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 방법.
  39. 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하며;
    여기서 화합물은 임의로 니발디핀, 니모디핀 또는 니트렌디핀 또는 그의 염 또는 유리 염기가 아닌 다른 디하이드로피리딘; 이미다졸 화합물; 이소퀴놀린 알칼로이드 화합물; 칼모듈린-매개 효소 활성화 억제제; 혈소판-유도 성장 인자 (PDGF) 수용체의 키나아제 활성 억제제; NF-kB 활성화 억제제; 디테르펜 또는 트리테르펜 화합물; 퀴나졸린 화합물; 세스퀴테르펜 락톤; 또는 IKK-2 억제제인,
    외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료 방법.
  40. 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하며;
    여기서 화합물은 하기 화학식 I의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이고, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하며:
    <화학식 I>
    Figure 112007088061992-PAT00221
    여기서:
    R1은 H, 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 임의로 치환된 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    또는, R2' 및 R3'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R3' 및 R4'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티 오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R4' 및 R5'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있고;
    또는, R5' 및 R6'는 함께 임의로 4, 5, 6 또는 7 구성요소의 1, 2 또는 3 헤테로원자를 함유하는 헤테로싸이클을 형성할 수 있으며, 알킬, 임의로 치환된 알킬 에테르, 임의로 치환된 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 카르복실산, 보론산, 할로알킬, 아민, 임의로 치환된 알킬 아민, 니트릴, 임의로 치환된 알킬 티오에테르, 임의로 치환된 아릴 티오에테르, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클로 임의로 치환될 수 있는,
    외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료 방법.
  41. 제 40항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H, 알킬, 임의로 치환된 아릴, 임의로 치환된 헤테로싸이클, 알킬 또는 아릴 에테르이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 또는 하이드록시이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르, 아릴 에스테르, 실릴 에스테르, 알킬 아미드, 아릴 아미드, 시아노, 또는 니트로이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H, 임의로 치환된 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클이고;
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 아릴 에테르, 할로겐, 하이드록시, 니트로, 또는 임의로 치환된 헤테로싸이클인,
    방법.
  42. 제 40항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 시아노 또는 알킬 에스테르이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로이고;
    R3' 및 R5'는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
    R4'는 개별적으로 H, 알킬, 알킬 에테르, 할로, 또는 니트로인,
    방법.
  43. 제 40항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6는 개별적으로 알킬이고;
    R3 및 R5는 개별적으로 알킬 에스테르이며, 여기서, R2 및 R3 중 하나 이상에서 알킬 에스테르의 알킬은 10 내지 30 탄소 원자를 포함하고;
    R2', R3', R4', R5' 및 R6'는 개별적으로 H, 할로, 또는 니트로인,
    방법.
  44. 제 40항에 있어서, 화학식 I의 화합물에서:
    R1은 H이고;
    R2 및 R6 각각은 알킬이고;
    R3 및 R5 각각은 C(O)O알킬이고;
    R2' 및 R6'는 개별적으로 H, F, Br, 또는 니트로이고;
    R3' 및 R5' 각각은 H이고;
    R4'는 H 또는 할로인,
    방법.
  45. 세포에서 축전식 칼슘 진입을 적어도 약 10 % 이상 감소시키는 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 것을 포함하며;
    여기서 화합물은 하기 화학식 VI의 화합물, 또는 그의 염, 에스테르 또는 전구약물이고, 그의 R 또는 S 이성질체를 포함하며:
    <화학식 VI>
    Figure 112007088061992-PAT00222
    여기서:
    R1은 C3-12 알킬이며, 임의로 싸이클로알킬, 싸이클로헥실 또는 싸이클로펜틸이고;
    R2 및 R4는 개별적으로 H 또는 할로이고; 및
    R3는 치환되지 않은 페닐 또는 하나 이상의 할로 또는 하이드록시 기로 임의로 치환된 페닐인,
    외상성 뇌 손상으로 고통받는 동물 또는 인간의 치료 방법.
  46. 제 37항, 39항, 40항 또는 45항에 있어서, 화합물을 사용한 치료 기간은 약 1시간 내지 1주; 약 1주 내지 6개월; 또는 약 6개월 내지 2년 사이 동안 지속되는 방법.
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