KR20090014674A

KR20090014674A - Multiple target small interfering rna (sirna) having a partially single-stranded sequence

Info

Publication number: KR20090014674A
Application number: KR1020070078783A
Authority: KR
Inventors: 이동기; 장찬일
Original assignee: 이동기
Priority date: 2007-08-06
Filing date: 2007-08-06
Publication date: 2009-02-11
Also published as: KR100929700B1

Abstract

A multiple small interfering RNA(siRNA) having a partially single-stranded sequence is provided to control a plurality of target sequences, reduce the production costs by forming the siRNA with reduced number of nucleotide sequences, and facilitate the clinical application in manufacturing of siRNA, so that it is useful as therapeutic agent of various cancers or viral diseases. The multiple small interfering RNAs(siRNAs) for controlling a plurality of target sequences have at least one siRNA comprised of single-stranded sequence, wherein each of multiple siRNAs has 15-19 nucleotide sequences. A therapeutic agent of gene-control associated disease comprises the multiple small interfering RNAs in which at least one siRNA is comprised of single-stranded sequence.

Description

Multiple target small interfering RNA (SIRNA) having a partially single-stranded sequence}

본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 제어하는 다중 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; 이하, "siRNA"라고 약칭함)에 있어서, 상기 siRNA들 중 적어도 하나 이상이 단일가닥으로 이루어진 다중 간섭 유도 RNA 및 이를 유효성분으로 하는 각종 유전자-제어 관련 질환의 치료제에 관한 것이다.The present invention relates to a multiple interfering RNA (hereinafter referred to as "siRNA") for controlling the expression of a plurality of target genes, wherein at least one of the siRNA is a single strand of multiple interference inducing RNA and The present invention relates to a therapeutic agent for a variety of gene-control related diseases.

본 발명의 다중 간섭 유도 RNA는 다수의 표적 서열들을 동시에 제어할 수 있을 뿐만 아니라 적은 수의 염기서열로 구성되어 생산 단가가 저렴하고, 다중-표적 간섭 유도 RNA의 제조 시 임상적 적용도 용이하므로, 종래의 간섭 유도 RNA를 기반으로 하는 의약품들을 대체하는 각종 암 또는 바이러스성 질환의 치료제 등에 널리 사용될 수 있다.Since the multi-interference inducing RNA of the present invention can not only control a plurality of target sequences at the same time, but also consists of a small number of nucleotide sequences, the production cost is low, and the clinical application in the preparation of the multi-target interfering RNA is easy. It can be widely used in the treatment of various cancers or viral diseases and the like replacing the conventional medicines based on interference-induced RNA.

간섭 유도 RNA (small interferencing RNA; siRNA)는 19 내지 21 bp 크기의 이중 나선 구조를 가지는 짧은 RNA 분자로서, 세포 내로 도입되어 상보적인 염기 서열을 가지는 세포 내 메신저 RNA (mRNA)를 절단하고 그 유전자의 발현을 억제하는 기능을 수행한다. 이 간섭 유도 RNA (siRNA)는 짧은 길이의 헤어핀 RNA (short hairpin RNA; shRNA)와 함께 생체 내에 존재하는 RNA 간섭 유도 경로 (RNA interference (RNAi) pathway)를 경유하여 표적 mRNA를 매우 효율적이고 선택적으로 절단하게 된다 [1]. 이러한 RNA 간섭 유도를 이용하는 유전자 제어 기술은 기존의 유전자를 이용한 다양한 조절 방법들과 비교하여 그 성공률과 효율성이 월등히 높다. 따라서, 이것은 기능 유전체학의 연구 도구로서 또한 각종 암들 및 바이러스성 질환에 대한 항암제 또는 항바이러스제 등의 후보 치료 물질로서 각광받고 있다 [2]. Small interferencing RNA (siRNA) is a short RNA molecule with a double helix structure of 19-21 bp in size, which is introduced into a cell to cleave intracellular messenger RNA (mRNA) having complementary base sequences and Functions to inhibit expression. This interference inducing RNA (siRNA), along with short hairpin RNA (shRNA), is highly efficient and selectively cleaves the target mRNA via the RNA interference (RNAi) pathway in vivo. [1]. Genetic control technology using such RNA interference induction is much higher success rate and efficiency compared to the various control methods using the existing gene. Therefore, it is in the spotlight as a research tool of functional genomics and also as a candidate therapeutic substance such as anticancer agent or antiviral agent against various cancers and viral diseases [2].

터슬 (Tuschl) 그룹은 2001년에 최초로 19 bp 크기의 이중체 (duplex)의 3'-부위에 2개의 염기 서열 (3'-two-nucleotide overhang)을 포함하는 19 + 2 구조의 간섭 유도 RNA를 제작하였다. 또한, 이 간섭 유도 RNA 가 포유동물 세포에서 비특이적인 유전자 발현 억제 (non-specific gene repression)를 배제하면서, 동시에 특이적인 억제 (specific gene suppression)를 유발할 수 있는 것을 확인하였다 [3]. 따라서, 이후부터는 간섭 유도 RNA에 관한 기반 실험들이 대부분 상기 19 + 2 구조를 가지는 siRNA를 이용하여 이루어져 왔다. The Tuschel group first introduced interference-induced RNA of 19 + 2 structure in 2001, which contains two 3'-two-nucleotide overhangs at the 3'-site of a 19 bp duplex. Produced. In addition, it was confirmed that the interference-inducing RNA can induce specific gene suppression while excluding non-specific gene repression in mammalian cells [3]. Therefore, from now on, most of the experiments on interference-inducing RNA have been carried out using siRNA having the 19 + 2 structure.

최근 들어서는, 이러한 19 + 2 구조의 siRNA로부터 변형된 구조를 가지는 si RNAs가 개발 시도되고 있다. 구체적으로, 27 bp 크기의 이중체와 같이 긴 길이의 siRNA 또는 29 bp 크기의 shRNA 등이 개발된 바 있었다. 또한 이 간섭 유도 RNA 들은 19 bp 크기의 이중가닥으로 된 siRNA에 의해 기존에는 유전자 발현이 저해되지 않던 표적 mRNA의 발현을 효율적으로 억제시킬 수 있는 것도 확인되었다 [4, 5]. Recently, si RNAs having a structure modified from these 19 + 2 siRNAs have been developed. Specifically, a long siRNA or a 29 bp shRNA, such as a 27 bp duplex, has been developed. In addition, these interference-induced RNAs were confirmed to be able to efficiently suppress the expression of target mRNA which was not previously inhibited by gene expression by 19 bp double stranded siRNA [4, 5].

따라서, 현재 이러한 간섭 유도 RNAi를 이용하여 각종 항바이러스 치료제들이 연구 개발되고 있는 과정에 있다. 그러나 바이러스 게놈의 한 부분만을 표적으로 하는 siRNA 또는 shRNA는 돌연변이율이 높은 바이러스의 표적 염기서열에 돌연변이를 유도하여 궁극적으로 내성을 가지는 바이러스 돌연변이체를 생성시킬 수 있다. 실제로도 이와 같이 바이러스의 돌연변이가 유발된 사례들이 보고된 바 있다 [6]. 그러므로, 이러한 돌연변이에 의한 약물 내성이 생기는 것을 낮출 수 있는 간섭 유도 RNA를 개발하는 것이 절실히 필요한 실정이다. Therefore, various antiviral therapeutics are currently being researched and developed using such interference-induced RNAi. However, siRNAs or shRNAs that target only a portion of the viral genome can induce mutations in the target sequences of viruses with high mutation rates, resulting in viral mutants that are ultimately resistant. Indeed, there have been reported cases of viral mutations [6]. Therefore, there is an urgent need to develop interference-inducing RNA that can lower the drug resistance caused by these mutations.

최근에는 상기 간섭 유도 RNA의 단점을 극복하기 위하여, 복수의 표적 유전자들을 동시에 발현 억제할 수 있는 다중-표적 간섭 유도 RNA (multi-target RNAi) 기술이 개발 시도되고 있다 [7]. 이러한 다중-표적 RNAi는 항바이러스 치료제뿐만 아니라 암과 같은 다양한 질병들에 대한 치료제의 개발에도 유용하게 사용될 수 있다. 실제로 다중-표적 RNAi는 세포 내의 다수 암화 관련 경로들을 제어하여 상호 상승적 (synergistic)으로 암세포의 성장을 조절할 수 있다. 이와 같이 RNAi를 통한 세포 내 복수 개 유전자들의 발현 제어에서 기본 개념은 "조합 RNAi (combinatorial RNAi)"라고 불리며, 이와 관련된 많은 연구들이 현재 진행 중에 있다 [7]. Recently, in order to overcome the disadvantage of the interference-induced RNA, a multi-target interference-induced RNA (multi-target RNAi) technology that can suppress the expression of a plurality of target genes at the same time has been attempted to develop [7]. Such multi-target RNAi can be usefully used not only for antiviral therapeutics but also for the development of therapeutics for various diseases such as cancer. Indeed, multi-target RNAi can control the growth of cancer cells synergistically by controlling multiple cancer-related pathways in the cell. As such, the basic concept in the control of expression of a plurality of genes in a cell through RNAi is called "combinatorial RNAi", and a lot of researches on this are in progress [7].

현재까지는 대부분의 다중-표적 RNAi가 주로 짧은 길이의 헤어핀 RNA (shRNA)를 기반으로 하여 개발되고 있다. 실제로 이러한 shRNA가 하나 이상의 헤어핀 구조를 포함하는 재조합 발현 벡터를 이용하여 다중-표적 RNAi로 구현된 것이 보고되었다 [8]. 그러나 siRNA는 세포 내에 도입되어 유전자 발현 과정에서 작용 하는 shRNA와 달리, 화학적인 합성법에 따라 제작된 다음 생체 내에 도입되어야 한다. 따라서 siRNA는 특히 구조적인 변형 과정을 거쳐 다중-표적 siRNA로 개발될 것이 요구된다. To date, most multi-target RNAi have been developed based primarily on short lengths of hairpin RNA (shRNA). Indeed, it has been reported that such shRNAs have been implemented with multi-target RNAi using recombinant expression vectors comprising one or more hairpin structures [8]. However, unlike shRNAs that are introduced into cells and function during gene expression, siRNAs must be manufactured according to chemical synthesis and then introduced into a living body. Therefore, siRNAs are required to be developed into multi-target siRNAs, in particular, through a process of structural modification.

최근에 구오 (Guo) 그룹은 Phi29 RNA 라고 불리는 박테리오파지 (bacteriophage)를 기반으로 하는 RNA 나노 구조체를 이용하여 복수 개의 siRNA를 세포 내로 도입하는 방법을 제시한 바 있었다 [9]. 그러나 이 방법은 해당 RNA 구조체의 전체 크기가 너무 커서 화학적인 합성이 용이하지 않으므로, 실제 치료제로 개발되기에는 한계점을 가지고 있다. 또한, 터슬 그룹은 siRNA의 센스 가닥 (sense strand) 및 안티센스 가닥 (antisense strand)이 각각 서로 다른 표적 유전자를 억제하여 두 개의 표적 유전자들을 동시에 제어할 수 있는 일부 상보적인 siRNA (partially complementary siRNA)를 개발하여 보고한 바 있었다 [10]. 그러나 이 방법 또한 표적 유전자의 제어 효율이 낮고 siRNA 이중가닥이 구조적으로 불안정한 문제점을 가진다. Recently, the Guo group has proposed a method of introducing a plurality of siRNAs into cells using a bacteriophage-based RNA nanostructure called Phi29 RNA [9]. However, this method has a limitation in that it can be developed as a real therapeutic agent because the total size of the RNA structure is too large to facilitate chemical synthesis. In addition, the Tussell Group has developed some complementary siRNAs (sense complement) and sisense (antisense strand) of siRNA, each of which can control two target genes simultaneously by inhibiting different target genes. [10]. However, this method also has a problem that the control efficiency of the target gene is low and the siRNA double strands are structurally unstable.

본 발명자들도 다양한 간섭 유도 RNA들을 화학적으로 합성하고 그 구조를 다양하게 변화시키는 연구를 진행하여 상기 구조 변화에 따른 간섭 유도 RNAi의 저해 활성에 관한 다양한 실험들을 이미 보고한 바 있었다 [11]. The present inventors have also reported various experiments on the inhibitory activity of interference-induced RNAi according to the structural change by conducting a study of chemically synthesizing various interference-inducing RNAs and varying their structures [11].

이에 본 발명자들은 다양한 간섭 유도 RNA들을 이용한 효과적인 항암제 또는 항바이러스 치료제를 개발하기 위하여 노력을 계속한 결과, 종래에 사용되던 이중가닥으로 된 siRNA와는 달리 일부 단일가닥으로 이루어진 간섭 유도 RNA들을 고안하여 합성하고 이들이 단독 또는 다중-표적 나노 구조 형태로 세포 내에서 표적 유 전자들의 발현을 효과적으로 제어하여 종래의 간섭 유도 RNA에 의한 의약품을 대체할 수 있는 것을 확인함으로써 본 발명을 성공적으로 완성하였다. Accordingly, the present inventors have continued to develop an effective anticancer or antiviral therapeutic agent using various interference inducing RNAs. Unlike the conventional double stranded siRNAs, the inventors have designed and synthesized some single stranded interference inducing RNAs. The present invention has been successfully completed by confirming that they can effectively replace the expression of target genes in cells in the form of single or multi-target nanostructures to replace drugs by conventional interference-inducing RNA.

본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 제어하는 다중 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; 이하, "siRNA"라고 약칭함)에 있어서, 상기 다중간섭 유도 RNA를 이루는 siRNA들 중 적어도 하나 이상이 단일가닥으로 이루어진 다중 간섭 유도 RNA 및 이를 유효성분으로 하는 각종 유전자-제어 관련 질환의 치료제를 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention relates to a small interfering RNA (hereinafter referred to as "siRNA") for controlling the expression of a plurality of target genes, wherein at least one or more of the siRNAs constituting the multi-interference inducing RNA are single stranded. An object of the present invention is to provide a therapeutic agent for multiple interference-induced RNAs and various gene-control-related diseases using the same.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는 다중 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; siRNA)에 있어서, 상기 표적 유전자들의 발현을 제어하는 간섭 유도 RNA (siRNA) 중 적어도 하나 이상이 단일가닥의 염기서열로 이루어진 다중 간섭 유도 RNA (siRNA)를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a small interfering RNA (siRNA) that can control the expression of a plurality of target genes at the same time, interference-inducing RNA (siRNA) for controlling the expression of the target genes At least one of the provided multiple interference inducing RNA (siRNA) consisting of a single strand of nucleotide sequence.

본 발명에 있어서, 상기 일부 단일가닥 다중-표적 간섭 유도 RNA는 각각의 siRNA가 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 15개 내지 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하다. In the present invention, the single-stranded multi-target interference inducing RNA, each siRNA is preferably composed of 19 base sequences, preferably 15 to less than 19 base sequences, and also at least 9 or more It is preferred that the base sequence.

본 발명은 상기 단일가닥의 간섭 유도 RNA가 하나 이상의 표적 유전자들의 발현을 제어하는 다중-표적 간섭 유도 RNA를 제조하는데 사용하는 용도를 제공한다.The present invention provides the use of the single-stranded interference inducing RNA to prepare a multi-target interference inducing RNA to control the expression of one or more target genes.

또한, 본 발명은 상기 적어도 하나 이상이 단일가닥의 염기서열로 이루어진 다중 간섭 유도 RNA (siRNA)를 유효성분으로 하는 항암제 및/또는 항바이러스 치료제를 포함하는 유전자-제어 관련 질환의 치료제를 제공한다.The present invention also provides a therapeutic agent for a gene-controlled related disease, including an anticancer agent and / or an antiviral therapeutic agent, wherein the at least one or more multi-interference inducing RNA (siRNA) consists of a single strand of nucleotide sequences as an active ingredient.

상기와 같이, 본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 제어하는 다중 간섭 유도 RNA들 (small interfering RNAs; siRNAs)에 있어서, 상기 siRNA가 적어도 하나 이상이 단일가닥으로 이루어진 다중 간섭 유도 RNA들 및 이를 유효성분으로 하는 각종 유전자-제어 관련 질환의 치료제에 관한 것이다.As described above, the present invention provides a multi-interfering RNAs (siRNAs) for controlling the expression of a plurality of target genes, wherein the siRNA is at least one or more single-stranded multiple interference inducing RNAs and effective The present invention relates to a therapeutic agent for various gene-control-related diseases.

본 발명의 간섭 유도 RNA들은 다수의 표적 서열들을 동시에 제어할 수 있을 뿐만 아니라 적은 수의 염기서열로 구성되어 생산 단가가 저렴하고, 다중-표적 간섭 유도 RNA의 제조 시 임상적 적용도 용이하므로, 종래의 간섭 유도 RNA를 기반으로 하는 의약품들을 대체하는 각종 암 또는 바이러스성 질환의 치료제 등에 널리 사용될 수 있다.Since the interference inducing RNAs of the present invention can not only control a plurality of target sequences at the same time, but also consist of a small number of nucleotide sequences, the production cost is low, and the clinical application of the multi-target interference inducing RNA is easy. It can be widely used in the treatment of various cancers or viral diseases to replace drugs based on interference-induced RNA of.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 복수 개의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어할 수 있는 다중 간섭 유도 RNA들에 있어서, 상기 표적 유전자들의 발현을 제어하는 간섭 유도 RNA 중 적어도 하나 이상이 단일가닥의 염기서열로 이루어진 간섭 유도 RNA (small interfering RNA; siRNA)들을 제공한다. The present invention provides multiple interference inducing RNAs capable of simultaneously controlling the expression of a plurality of target genes, wherein at least one of the interference inducing RNAs controlling the expression of the target genes comprises a single strand of interference inducing RNA ( small interfering RNA (siRNA).

본 발명에 있어서, 상기 다중-표적 간섭 유도 RNA는 각각의 siRNA가 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 15개 내지 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 또한 적어도 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하다. In the present invention, the multi-target interference inducing RNA, each siRNA is preferably composed of 19 base sequences, preferably 15 to less than 19 base sequences, and at least 9 or more base sequences It is preferable to make.

또한, 본 발명의 단일가닥의 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 라민 (Lamin)을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다. In addition, siRNAs that control the target genes constituting the single-stranded interference inducing RNA of the present invention are SEQ ID NO: 1 having a lamin (Lamin) as the target gene and SEQ ID NO: siLamin and TIG3 of the SEQ ID NO: 2 as the target gene It is preferable to select from siTIG3 of 3, SEQ ID NO: 4, and SEQO 5 of DBP as a target gene, siDBP of SEQ ID NO: 6 and siOASIS of SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 8 of OASIS as target genes. In addition to the target genes, any gene associated with anticancer or antiviral action may be selected and used as the target gene, and further, all genes required for the preparation of interference-inducing RNA may be selected and used as the target gene.

또한, 본 발명의 단일가닥의 간섭 유도 RNA는 복수 개의 표적 유전자들을 제어하도록 조합(결합)한 다중 간섭 유도 RNA를 제조하는데 사용하는 것이 바람직하다.In addition, the single-stranded interference-inducing RNA of the present invention is preferably used to prepare multiple interference-inducing RNAs combined (bound) to control a plurality of target genes.

본 발명은 두 개의 표적 유전자들을 제어하도록 조합한 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA를 제공한다.The present invention provides some single stranded multiple interference inducing RNAs combined to control two target genes.

상기 표적 유전자들을 제어하는 각각의 siRNA는 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 15개 내지 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하 며, 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것도 바람직하다. Each siRNA controlling the target genes is preferably composed of 19 base sequences, preferably 15 to less than 19 base sequences, and preferably 9 or more base sequences.

또한, 본 발명의 일부 단일가닥의 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 라민 (Lamin)을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다.In addition, siRNAs that control the target genes, which constitute the single-stranded interference inducing RNA of the present invention, have a sequence of siLamin and TIG3 of SEQ ID NO: 1 and Lag (SEQ ID NO: 2) as target genes. It is preferable to select from siTIG3 of SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, and SEQ ID NO: 5 having DBP as the target gene, siDBP of SEQ ID NO: 6, and siOASIS of SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 8 having OASIS as the target gene. In addition to the target genes, any gene associated with anticancer or antiviral action may be selected and used as the target gene, and further, all genes required for the preparation of interference-inducing RNA may be selected and used as the target gene.

구체적으로, 본 발명은 상기 Lamin 유전자 및 TIG3 유전자를 제어하고, 서열번호 29과 서열번호 30의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, dis0.5Lamin(19)-TIG3(19)를 제공한다.Specifically, the present invention controls the Lamin gene and TIG3 gene, and some single-stranded multi-interference inducing RNA, including the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 30, dis0.5Lamin (19) -TIG3 (19) to provide.

또한, 본 발명은 상기 Lamin 유전자 및 TIG3 유전자를 제어하고, 서열번호 31과 서열번호 32의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, disLamin(19)-0.5TIG3(19)를 제공한다.The present invention also controls the Lamin gene and TIG3 gene, and provides some single-stranded multi-interference inducing RNA, disLamin (19) -0.5TIG3 (19), including the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32. .

또한, 본 발명은 상기 Lamin 유전자 및 TIG3 유전자를 제어하고, 서열번호 33과 서열번호 34의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, dis0.5Lamin(3' 17)-TIG3(5' 15)를 제공한다.In addition, the present invention controls the Lamin gene and TIG3 gene, and some single-stranded multiple interference inducing RNA, including the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 34, dis0.5Lamin (3 '17) -TIG3 (5' 15).

또한, 본 발명은 상기 DBP 유전자 및 TIG3 유전자를 제어하고, 서열번호 35 와 서열번호 36의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, dsiDBP(19)-0.5TIG3(19)를 제공한다.In addition, the present invention controls the DBP gene and TIG3 gene, and provides some single-stranded multiple interference induction RNA, dsiDBP (19) -0.5TIG3 (19) comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 35 and SEQ ID NO: 36 .

또한, 본 발명은 상기 DBP 유전자 및 TIG3 유전자를 제어하고, 서열번호 37과 서열번호 38의 염기서열을 포함하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, dsi0.5DBP(19)-TIG3(19)를 제공한다.In addition, the present invention controls the DBP gene and TIG3 gene, and provides some single-stranded multiple interference induced RNA, dsi0.5DBP (19) -TIG3 (19) comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 37 and SEQ ID NO: 38 do.

본 발명은 세 개의 표적 유전자들을 제어하도록 조합한 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA를 제공한다.The present invention provides some single stranded multiple interference inducing RNAs combined to control three target genes.

상기 표적 유전자들을 제어하는 각각의 siRNA는 19개의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하고, 15개 내지 19개 미만의 염기서열로 이루어지는 것이 바람직하며, 9개 이상의 염기서열로 이루어지는 것도 바람직하다. Each siRNA for controlling the target genes is preferably composed of 19 base sequences, preferably 15 to less than 19 base sequences, and preferably 9 or more base sequences.

구체적으로, 본 발명은 도 19 (a)에서 보는 바와 같이 상기 Lamin 유전자, DBP 유전자 및 TIG3 유전자를 동시에 제어하는 일부 짧은 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-0.5TIG3(19)를 제공한다.Specifically, the present invention is a short single-stranded multiple interference induction RNA, tsiLamin (19) -DBP (19) -0.5TIG3 to simultaneously control the Lamin gene, DBP gene and TIG3 gene as shown in Figure 19 (a) Provide 19.

또한, 본 발명은 도 19 (b)에서 보는 바와 같이 일부 짧은 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, tsiLamin(19)-DBP(19)-0.5TIG3(17)을 제공한다.In addition, the present invention provides some short single stranded multiple interference induced RNA, tsiLamin (19) -DBP (19) -0.5TIG3 (17), as shown in FIG. 19 (b).

또한, 본 발명은 도 20에서 보는 바와 같이 상기 Lamin 유전자, DBP 유전자 및 TIG3 유전자를 동시에 제어하는 일부 짧은 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, tsi0.5Lamim(17)-DBP(19)-TIG3(19)를 제공한다.In addition, the present invention, as shown in Figure 20, some short single-stranded multiple interference induction RNA, tsi0.5Lamim (17) -DBP (19) -TIG3 (19) to simultaneously control the Lamin gene, DBP gene and TIG3 gene To provide.

또한, 본 발명은 도 21 (a)에서 보는 바와 같이 상기 Lamin 유전자, DBP 유전자 및 TIG3 유전자를 동시에 제어하는 일부 짧은 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP(19)-TIG3(17)를 제공한다. In addition, the present invention is a short single-stranded multiple interference induction RNA, tsi0.5Lamin (17) -DBP (19) -TIG3 to simultaneously control the Lamin gene, DBP gene and TIG3 gene as shown in Figure 21 (a) Provide 17.

또한, 본 발명은 도 21 (b)에서 보는 바와 같이 일부 짧은 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP(19)-TIG3(15)를 제공한다. In addition, the present invention provides some short single stranded multiple interference induced RNA, tsi0.5Lamin (17) -DBP (19) -TIG3 (15), as shown in FIG. 21 (b).

본 발명은 네 개 이상의 표적 유전자를 제어하도록 조합한 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA를 제공한다.The present invention provides some single stranded multiple interference inducing RNAs combined to control four or more target genes.

또한, 본 발명의 일부 단일가닥의 간섭 유도 RNA를 구성하는, 상기 표적 유전자들을 제어하는 siRNA들은 라민 (Lamin)을 표적 유전자로 하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, DBP를 표적 유전자로 하는 서열번호 5와 서열번호 6의 siDBP 및 OASIS를 표적 유전자로 하는 서열 번호 7과 서열번호 8의 siOASIS 중에서 선택되는 것이 바 람직하다. 상기 표적 유전자들 이외에도 항암 또는 항바이러스 작용과 연관되는 유전자라면 모두 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있고, 더 나아가 간섭 유도 RNA 제조 시 필요한 모든 유전자가 상기 표적 유전자로 선택되어 사용될 수 있다.In addition, siRNAs that control the target genes, which constitute the single-stranded interference inducing RNA of the present invention, have a sequence of siLamin and TIG3 of SEQ ID NO: 1 and Lag (SEQ ID NO: 2) as target genes. It is preferable to select from siTIG3 of SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 with DBP as the target gene, siDBP of SEQ ID NO: 6, and siOASIS with SEQ ID NO: 7 with SEQ ID NO: 8 with OASIS as the target gene. In addition to the target genes, any gene associated with anticancer or antiviral action may be selected and used as the target gene, and further, all genes required for the preparation of interference-inducing RNA may be selected and used as the target gene.

구체적으로, 본 발명은 도 25에서 보는 바와 같이, 상기 Lamin 유전자, DBP 유전자, TIG3 및 OASIS 유전자를 동시에 제어하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-0.5TIG3(19)-Lamin(19)를 제공한다. Specifically, as shown in FIG. 25, the present invention provides some single-stranded multi-interference induced RNA, qsiDBP (19) -OASIS (19) -0.5TIG3 (, which simultaneously controls the Lamin gene, DBP gene, TIG3 and OASIS gene. 19) -Lamin 19 is provided.

또한, 본 발명은 도 26 (a)에서 보는 바와 같이, 상기 Lamin 유전자, DBP 유전자, TIG3 및 OASIS 유전자를 동시에 제어하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-0.5TIG3(17)-Lamin(19)를 제공한다. In addition, the present invention, as shown in Figure 26 (a), some single-stranded multiple interference induction RNA, qsiDBP (19) -OASIS (19) -0.5 to simultaneously control the Lamin gene, DBP gene, TIG3 and OASIS gene TIG3 (17) -Lamin (19) is provided.

또한, 본 발명은 도 26 (b)에서 보는 바와 같이, 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, qsi0.5Lamin(17)-TIG3(19)-OASIS(19)-DBP(19)를 제공한다. In addition, the present invention provides some single stranded multiple interference induced RNA, qsi0.5Lamin (17) -TIG3 (19) -OASIS (19) -DBP (19), as shown in FIG. 26 (b).

또한, 본 발명은 도 27 (a)에서 보는 바와 같이, 상기 Lamin 유전자, DBP 유전자, TIG3 및 OASIS 유전자를 동시에 제어하는 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, qsiDBP(19)-OASIS(19)-TIG3(15)-0.5Lamin(17)를 제공한다. In addition, the present invention, as shown in Figure 27 (a), some single-stranded multi-interference induction RNA, qsiDBP (19) -OASIS (19) -TIG3 to simultaneously control the Lamin gene, DBP gene, TIG3 and OASIS gene (15) -0.5 Lamin (17).

또한, 본 발명은 27 (b)에서 보는 바와 같이, 일부 단일가닥의 다중 간섭 유도 RNA, qsiLamin(17)-0.5TIG3(15)-OASIS(19)-DBP(19)를 제공한다. The present invention also provides some single stranded multiple interference inducing RNA, qsiLamin (17) -0.5TIG3 (15) -OASIS (19) -DBP (19), as seen in 27 (b).

또한, 본 발명은 상기 짧은 길이의 간섭 유도 RNA (siRNA)를 항암제 및/또는 항바이러스 치료제를 포함하는 각종 유전자-제어 관련 질환의 치료제로서 사용하는 용도를 제공한다.The present invention also provides the use of such short length interference inducing RNA (siRNA) as a therapeutic agent for various gene-control related diseases, including anticancer and / or antiviral therapies.

또한, 상기 일부 단일가닥의 siRNA들을 결합시킨 다중 간섭 유도 RNA (Multi-silencing siRNA)는 항암제 또는 항바이러스제 등의 유효성분으로 사용되는 이외에도, 하나 이상의 표적 유전자들의 발현을 동시에 제어하는 것이 더욱 효과적인 모든 질환들을 예방하고 치료하는데 널리 사용될 수 있다. In addition, in addition to being used as an active ingredient such as an anticancer agent or an antiviral agent, the multi-silencing siRNA combining the single-stranded siRNAs is more effective in controlling all the expressions of one or more target genes simultaneously. It can be widely used to prevent and treat them.

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1. 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작Example 1 Construction of Double-Target Interference Inducing RNAs

본 발명자들은 이미 선행 연구를 통하여 [11], 간섭 유도 siRNA의 안티센스 가닥 (guide strand; antisense strand)의 3'-부위 쪽에 다른 염기서열을 가지는 이중체 (duplex)가 부착되는 경우에도 siRNA의 유전자 발현 억제 효율이 유지되는 것을 확인하였다. 이러한 사실을 기초로 하여, 두 개의 19 bp siRNA들을 서로 부착한 경우에 형성된 새로운 siRNA 구조체가 부착하기 이전의 유전자 제어 효율을 유지할 수 있을 것이라고 본 발명자들은 예상하였다. The inventors have already conducted previous studies [11] to express gene expression of siRNA even when a duplex having a different sequence is attached to the 3'-side of the antisense strand of the interference-inducing siRNA. It was confirmed that the inhibition efficiency was maintained. Based on this fact, the inventors predicted that when two 19 bp siRNAs were attached to each other, the gene control efficiency before attachment of the new siRNA construct formed could be maintained.

도 1에 나타낸 바와 같이, 라민 (Lamin)을 표적 유전자로 하는 siLamin 및 TIG3를 표적 유전자로 하는 siTIG3를 조합하여 이중 구조를 형성하는 서열번호 9와 서열번호 10의 염기서열을 포함하는 간섭 유도 RNA dsiLamin(19)-TIG3(19) [dual silencing siRNA Lamin(19)-TIG3(19)]를 제작하였다. As shown in FIG. 1, an interference inducing RNA dsiLamin comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 10, which forms a double structure by combining siLamin, which is a lamin as a target gene, and siTIG3, which is a TIG3 target gene, is formed. (19) -TIG3 (19) [dual silencing siRNA Lamin (19) -TIG3 (19)].

실시예 2. 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사 IExample 2 Investigation of Gene Expression Inhibition of Double-Target Interference Inducing RNAs I

본 발명에서는 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도를 조사하기 위하여, Lamin 유전자만을 포함하는 서열번호 1과 서열번호 2의 siLamin, TIG3 유전자만을 포함하는 서열번호 3과 서열번호 4의 siTIG3, 상기 siLamin 과 siTIG3의 혼합물, 그리고 본 발명의 이중 표적 간섭 유도 RNA인 서열번호 9와 서열번호 10의 dsiLamin(19)-TIG3(19)를 HeLa 세포에 각각 농도 100 nM 또는 10 nM 의 농도로 리포펙타민 2000 (lipofectamine 2000)을 사용하여 형질전환 (transfection)시켰다. 또한 상기 표적 유전자 Lamin 및 TIG3의 mRNA 수준을 실시간 역전사효소 중합효소 연쇄반응 (real-time RT-PCR)을 수행하여 정량하였다. 더 나아가 상기 mRNA 양을 환산하여 각 siRNA들이 표적 유전자들을 발현 억제하는 효율을 산정, 비교하였다. In the present invention, in order to investigate the gene expression inhibition of the dual-target interference inducing RNA, siLamin of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 including only the Lamin gene, siTIG3 of SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4 including only the TIG3 gene, A mixture of siLamin and siTIG3, and dsiLamin (19) -TIG3 (19) of SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 10, which are the dual target interference inducing RNAs of the present invention, were administered to HeLa cells at a concentration of 100 nM or 10 nM, respectively. Transfection was performed using 2000 (lipofectamine 2000). In addition, mRNA levels of the target genes Lamin and TIG3 were quantified by real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (real-time RT-PCR). Furthermore, the efficiency of inhibiting the expression of target genes was calculated and compared by converting the mRNA amount.

그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이, 본 발명의 이중-표적 간섭 유도 RNA dsiLamin(19)-TIG3(19)가 단일 표적 유전자 siLamin과 siTIG3들을 단순히 혼합한 대조군과 비교하여 세포 형질전환 후 유전자 발현의 저해도가 동등한 것을 확인하였다.As a result, as shown in Figure 2, the dual-target interference-induced RNA dsiLamin (19) -TIG3 (19) of the present invention compared to a control group that simply mixed a single target gene siLamin and siTIG3, The inhibition was confirmed to be equivalent.

실시예 3. 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사 ⅡExample 3 Investigation of Gene Expression Inhibition of Double-Target Interference Inducing RNAs II

본 발명에서는 상기 실시예 2 에서 살펴본 바와 같이, 이중-표적 siRNA 구조가 일반 표적 유전자에서도 보편적으로 발현 억제 활성을 가지는지 여부를 다음과 같이 조사하였다. 구체적으로 서열번호 11과 서열번호 12의 간섭 유도 RNA dsiDBP(19)-TIG3(19), 서열번호 13과 서열번호 14의 dsiLamin(19)-DBP(19) 및 서열 번호 15와 서열번호 16의 dsiOASIS(19)-TIG3(19)를 포함하여 서로 다른 표적 유전자들을 포함하는 다양한 간섭 유도 RNA의 조합 (combination)을 제작하였다 (도 3, 도 5 및 도 7 참조). In the present invention, as shown in Example 2, whether the double-target siRNA structure has a universal expression inhibitory activity even in the general target gene was investigated as follows. Specifically, interference-inducing RNA dsiDBP (19) -TIG3 (19) of SEQ ID NO: 11 and SEQ ID NO: 12, dsiLamin (19) -DBP (19) of SEQ ID NO: 13 and SEQ ID NO: 14, and dsiOASIS of SEQ ID NO: 15 and SEQ ID NO: 16 Combinations of various interference inducing RNAs including different target genes were prepared, including (19) -TIG3 (19) (see FIGS. 3, 5 and 7).

그 결과, 도 4, 도 6 및 도 8에서 각각 나타난 바와 같이 상기 이중-표적 (dual silencing) siRNA들이 약간의 정도의 차이는 있지만 두 가지 표적 유전자들의 발현을 모두 효과적으로 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 19 bp 크기를 가지는 두 개의 siRNA들을 연결시킨 이중-표적 siRNA들은 두 개의 단일-표적 19 bp siRNA들을 혼합한 대조군과 비교하여 세포 형질전환 후 유전자 발현의 저해도가 동등한 것을 알 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 4, FIG. 6 and FIG. 8, the dual silencing siRNAs were found to effectively suppress the expression of both target genes although there was a slight difference. Therefore, the dual-target siRNAs linking two siRNAs having a size of 19 bp were found to have the same level of inhibition of gene expression after cell transformation compared to the control mixed with two single-target 19 bp siRNAs.

실시예 4. 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작Example 4 Construction of Short Length Dual-Target Interference Inducing RNAs

본 발명에서는 상기 실시예 3에서 기술한 이중-표적 간섭 유도 siRNA들이 38 bp 염기서열로 구성되기 때문에 원활하게 표적 유전자들의 발현을 억제하더라도 종래의 19 bp 또는 27 bp 의 염기서열로 구성되는 siRNA에 비해 상대적으로 길이가 긴 문제점을 가지는 것으로 판단하였다. 따라서, 상기 38 bp 보다 길이가 짧은 이중-표적 siRNA도 유전자 발현을 효과적으로 억제할 수 있는지 여부를 다음과 같이 조사하였다. In the present invention, since the dual-target interference-inducing siRNAs described in Example 3 are composed of 38 bp sequences, even when the expression of target genes is smoothly inhibited, compared to the conventional siRNAs consisting of 19 bp or 27 bp sequences. It was determined to have a relatively long problem. Therefore, it was investigated whether the dual-target siRNA shorter than 38 bp could effectively inhibit gene expression as follows.

도 9에서 나타낸 바와 같이, 상기 이중-표적 dsiLamin-TIG3 siRNA 구조체로부터 각 siRNA의 길이를 각각 17 bp + 17 bp, 17 bp + 15 bp 및 15 bp + 15 bp 로 줄이는 과정으로 짧은 길이를 가지는 이중-표적 siRNA (dual silencing siRNA)를 합성하였다. 구체적으로, 상기 서열번호 17과 서열번호 18의 상기 Lamin(3'17)은 안티센스 서열 중 3'쪽으로부터 17 bp 크기의 이중체를 사용한 것이고, 서열번호 19와 서열번호 20의 Lamin(5'17)은 19 bp 크기의 siLamin의 안티센스 (19 mer antisense) 서열 중 5’쪽으로부터 17 bp 크기의 이중체를 사용한 것이다. 또한, 상기 서열번호 21과 서열번호 22의 Lamin(5'15)는 19 bp 크기의 siLamin의 안티센스 서열 중에서 5'쪽으로부터 15 bp 크기의 이중체를 사용한 것이고, 서열번호 25와 서열번호 26의 상기 Lamin(3'15)는 안티센스 서열 중 3'쪽으로부터 15 bp 크기의 이중체를 사용한 것이며, 서열번호 27과 서열번호 28의 Lamin(M15)는 19 bp 크기의 siLamin의 안티센스 서열 중 가운데 부분 15 bp 크기의 이중체를 사용한 것이다. 또한, 상기 TIG3 유전자를 억제하는 siRNA들은 모두 5'쪽 안티센스 말단 (antisense end)을 유지시키면서 길이만 17 bp 및 15 bp 가 되도록 줄였다. TIG3(5'17)은 siTIG3의 안티센스 서열 중 5'쪽으로 부터 17bp 크기의 이중체를 사용한 것이고, TIG3(5'15)는 siTIG3의 안티센스 서열 중 5'쪽으로 부터 15bp 크기의 이중체를 사용한 것이다. 상기에서 제작한 짧은 길이의 dual silencing siRNA 구조체들에 의한 세포 내 표적 유전자의 발현 저해도들을 각각 측정하여 도 10에 요약하여 나타내었다. As shown in FIG. 9, the shortened double-strengthened process was performed by reducing the length of each siRNA from the dual-target dsiLamin-TIG3 siRNA construct to 17 bp + 17 bp, 17 bp + 15 bp and 15 bp + 15 bp, respectively. Target siRNA (dual silencing siRNA) was synthesized. Specifically, Lamin (3'17) of SEQ ID NO: 17 and SEQ ID NO: 18 is a duplex having a size of 17 bp from the 3 'side of the antisense sequence, Lamin (5'17 of SEQ ID NO: 19 and SEQ ID NO: 20 ) Is a duplex of 17 bp from the 5 'side of the 19 mer antisense sequence of siLamin of 19 bp. In addition, Lamin (5'15) of SEQ ID NO: 21 and SEQ ID NO: 22 is a duplex of 15 bp from the 5 'side of the antisense sequence of siLamin of 19 bp size, the above of SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 26 Lamin (3'15) is a duplex of 15 bp from the 3 'side of the antisense sequence, Lamin (M15) of SEQ ID NO: 27 and SEQ ID NO: 28 is the 15 bp middle portion of the antisense sequence of siLamin 19 bp The duplex of size was used. In addition, siRNAs that inhibit the TIG3 gene were reduced to only 17 bp and 15 bp in length while maintaining the 5 'side antisense end. TIG3 (5'17) uses duplexes of 17 bp size from the 5 'side of the antisense sequence of siTIG3, and TIG3 (5'15) uses duplexes of 15 bp size from the 5' side of the antisense sequence of siTIG3. Inhibition of expression of target genes in cells by the short length dual silencing siRNA constructs prepared above was measured and shown in FIG. 10.

실시예 5. 짧은 길이의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사 Example 5 Investigation of Gene Expression Inhibition of Short-length Double-Target Interference Inducing RNAs

본 발명에서는 길이가 짧은 이중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도를 상기 실시예 2에서 기술한 바와 동일한 과정으로 측정하였다. 그 결과, 상기 이중-표적 siRNA 들중에서 TIG3 유전자는 19 bp 크기의 이중체보다 길이가 짧은 안티센스 가닥의 5'쪽으로부터 15 bp 또는 17 bp 이중체만으로도 TIG3 유전자의 mRNA 수준을 충분히 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, Lamin 유전자는 17 bp 크기의 이중체를 사용하는 경우에 안티센스 가닥의 3'쪽으로부터 17 bp 이중체는 Lamin 유전자의 mRNA 수준을 감소시키는 데 탁월한 활성을 보이는 반면, 5'쪽으로부터 17 bp 이중체는 거의 저해 활성을 나타내지 않는 것을 알 수 있었다 (도 10 참조). 따라서, 두 개의 siRNA 단위체를 조합한 본 발명의 이중-표적 siRNA 구조체들은 서열-의존적으로 (sequence-dependent) 종래의 19 bp 보다 길이가 짧은 siRNA 조합으로도 특정 유전자 발현을 충분히 저해할 수 있는 것을 확인하였다. In the present invention, the gene expression inhibition of interference-inducing RNAs including a short-length dual target gene was measured by the same procedure as described in Example 2 above. As a result, the TIG3 gene in the double-target siRNA can be confirmed that the mRNA level of the TIG3 gene sufficiently reduced by 15 bp or 17 bp duplex from the 5 'side of the antisense strand, which is shorter than the 19 bp duplex. there was. In addition, when the Lamin gene uses a 17 bp duplex, the 17 bp duplex from the 3 'side of the antisense strand shows excellent activity in reducing the mRNA level of the Lamin gene, while the 17 bp duplex from the 5' side. It was found that the sieve showed almost no inhibitory activity (see FIG. 10). Thus, the dual-target siRNA constructs of the present invention incorporating two siRNA units have been shown to be able to sufficiently inhibit specific gene expression even with sequence-dependent siRNA combinations shorter than the conventional 19 bp. It was.

이와 같이, 길이가 짧은 이중-표적 siRNA 구조체들은 두 개의 19 bp siRNA 조합을 가지는 구조체와 비교하여 적은 염기 수, 즉 17 bp + 15 bp 이중체의 경우 64 mer 범위까지 염기 수를 감소시키더라도 표적 유전자들의 발현을 효과적으로 억제할 수 있는 장점을 가진다. 따라서, 향후 본 발명의 siRNA를 유효성분으로 하는 신약을 개발하는 경우 생산 단가를 효율적으로 절감시킬 수 있다. As such, short-length dual-target siRNA constructs target genes even though they reduce the number of bases to a lower base number, i.e. up to 64 mer for the 17 bp + 15 bp duplex, compared to a construct with two 19 bp siRNA combinations. It has the advantage of being able to effectively suppress their expression. Therefore, in the future, when developing a new drug using the siRNA of the present invention as an active ingredient, the production cost can be reduced efficiently.

실시예 6. 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작Example 6 Construction of Some Single Strand Double-Target Interference Inducing RNAs

본 발명에서는 일부 단일가닥으로 이루어진 이중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA들을 다음과 같이 제작하였다. 참고로 종래의 선행 연구를 통하여, siRNA들은 이중가닥이 아닌 단일가닥 형태로 RNAi를 유도하여 표적 유전자의 발현을 저해시킬 수 있다고 이미 알려져 있다 [12]. 본 발명에서는 도 11에서 나타낸 바와 같이, 이중-표적 siRNA 구조체로부터 한쪽 siRNA 단위체의 센스 가닥 (sense strand)을 제거하여 (도 11에서 '0.5'라고 표시함) 단일가닥으로 만들어 이중가닥 부분을 함께 포함하는 혼합 형태의 이중-표적 dsiRNA를 제작하였다. In the present invention, interference-inducing RNAs including a dual-target gene consisting of some single strands were prepared as follows. For reference, through conventional prior studies, siRNAs are known to be capable of inhibiting expression of target genes by inducing RNAi in the form of a single strand rather than a double strand [12]. In the present invention, as shown in Figure 11, by removing the sense strand (sense strand) of one siRNA unit from the double-target siRNA structure (denoted '0.5' in Figure 11) to make a single strand including the double stranded portion together A dual-target dsiRNA was prepared in mixed form.

도 11에서 보는 바와 같이, 일부 단일가닥의 이중-표적 siRNA들 중에서 서열번호 29와 서열번호 30의 dsi0.5Lamin(19)-TIG3(19)는 TIG3 siRNA 이중체 뒤쪽에 19 bp 크기의 단일 siLamin 안티센스 가닥을 결합시킨 것이고, 서열번호 31과 서열번호 32의 dsiLamin(19)-0.5TIG3(19)는 Lamin siRNA 이중체 뒤쪽에 19 bp 크기의 단일 siTIG3 안티센스 가닥을 결합시킨 것이다. 또한, 서열번호 33과 서열번호 34의 dsi0.5Lamin(3'17)-TIG3(5'15)는 15 bp 크기의 siTIG3 이중가닥 뒤쪽에 Lamin 유전자의 안티센스 3'방향으로 17 mer 크기의 단일가닥을 결합한 것이다.As shown in FIG. 11, among some single stranded double-target siRNAs, dsi0.5Lamin (19) -TIG3 (19) of SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 30 is a single siLamin antisense of 19 bp size behind the TIG3 siRNA duplex. The strands were joined, and dsiLamin (19) -0.5TIG3 (19) of SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32 bound a single siTIG3 antisense strand of 19 bp to the back of the Lamin siRNA duplex. In addition, dsi0.5Lamin (3'17) -TIG3 (5'15) of SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 34 was formed with a single strand of 17 mer in the antisense 3 'direction of the Lamin gene behind the double-stranded siTIG3 strand of 15 bp. Combined.

구체적으로, 상기 dsi0.5Lamin(19)-TIG3(19)는 Lamin의 안티센스 3'에 TIG3의 센스를 조합하여 38 mer의 단일가닥을 합성한 다음, 여기에 TIG3의 안티센스를 어닐링 하여 일부 단일 가닥 구조를 형성하였으며, 상기 dsi0.5Lamin(3'17)-TIG3(5'15)는 Lamin의 17 mer 안티센스 뒤에 TIG3 센스 15 mer를 조합하여 32 mer의 단일가닥을 형성한 다음, 이것과 TIG3 15 mer 안티센스를 어닐링 하여 짧은 일부 단일가닥 구조를 형성하도록 제작하였다. 나머지 일부 단일가닥 siRNA들도 이와 유사한 방법으로 합성하였다.Specifically, dsi0.5Lamin (19) -TIG3 (19) synthesizes 38 mer single strands by combining the sense of TIG3 with Lamin's antisense 3 ', and then anneals the antisense of TIG3 to some single stranded structure. Dsi0.5Lamin (3'17) -TIG3 (5'15) forms 32 mer single strands by combining Lamin's 17 mer antisense followed by TIG3 sense 15 mer, followed by TIG3 15 mer antisense. Was annealed to form some short single-stranded structure. The rest of the single stranded siRNAs were also synthesized in a similar manner.

실시예 7. 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA들의 유전자 발현 저해도 조사Example 7 Investigation of Gene Expression Inhibition of Some Single Strand Double-Target Interference Inducing RNAs

본 발명에서는 일부 단일가닥으로 이루어진 이중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA 들의 유전자 발현 저해도를 상기 실시예 2에서 기술한 바와 동일한 과정으로 측정하였다. In the present invention, the gene expression inhibition of interference-inducing RNAs including a double-target gene consisting of some single strands was measured by the same procedure as described in Example 2 above.

그 결과 도 12에서 보는 바와 같이, Lamin siRNA 이중가닥의 뒤쪽에 19 mer의 단일 siTIG3 안티센스 가닥을 결합시킨 서열번호 31과 서열번호 32의 dsiLamin(19)-0.5TIG3(19)의 경우 Lamin 유전자 및 TIG3 유전자의 mRNA 발현을 모두 효과적으로 억제시키는 것을 확인할 수 있었다. 그러나 TIG3 siRNA 이중가닥 뒤쪽에 19 mer의 단일 siLamin 안티센스 가닥을 결합시킨 서열번호 29와 서열번호 30의 dsi0.5Lamin(19)-TIG3(19)의 경우에는 TIG3 유전자 발현만을 억제할 수 있는 것을 확인하였다. 그러나, 15 bp 크기의 siTIG3 이중가닥 뒤쪽에 Lamin 유전자의 안티센스 3'방향으로부터 17 mer의 단일가닥을 결합한 서열번호 33과 서열번호 34의 dsi0.5Lamin(3'17)-TIG3(5'15) 경우에는 TIG3 유전자 및 Lamin 유전자 모두의 발현이 효율적으로 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 일부 단일가닥의 이중-표적 간섭 유도 RNA 들은 두 개의 19 bp siRNA (총 76 mer)와 비교하여 훨씬 적은 염기 수, 즉 47 mer 이하로도 두 개의 표적 유전자를 동시에 억제할 수 있어 신약 제조 시 생산 단가를 획기적으로 낮출 수 있는 장점을 가진다. As a result, as shown in Figure 12, the lamin gene and TIG3 in the case of dsiLamin (19) -0.5TIG3 (19) of SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32 which binds 19 mer single siTIG3 antisense strands to the back of the lamin siRNA double strand It was confirmed that the mRNA expression of all genes can be effectively suppressed. However, in the case of dsi0.5Lamin (19) -TIG3 (19) of SEQ ID NO: 29 and SEQ ID NO: 30, which binds a 19 mer single siLamin antisense strand behind the TIG3 siRNA double strand, it was confirmed that only TIG3 gene expression could be suppressed. . However, in the case of dsi0.5Lamin (3'17) -TIG3 (5'15) of SEQ ID NO: 33 and SEQ ID NO: 34 which binds 17 mer single strands from the antisense 3 'direction of the Lamin gene behind the 15 bp siTIG3 double strand. It was confirmed that the expression of both the TIG3 gene and the Lamin gene was efficiently suppressed. Thus, some single stranded dual-target interference RNAs of the present invention can simultaneously inhibit two target genes with much fewer bases, ie less than 47 mer, compared to two 19 bp siRNAs (total 76 mer). When manufacturing a new drug, it has the advantage of significantly lowering the production cost.

실시예 8. 삼중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작 및 유전자 발현 저해도 조사Example 8. Fabrication of Triple-Target Interference Inducing RNAs and Investigation of Gene Expression Inhibition

본 발명에서는 삼중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA 들을 다음과 같이 제작하여 유전자 발현 저해도를 조사하였다. 구체적으로, 세 개의 19 bp 크기의 siRNA를 조합 연결시키는 과정으로 도 17에서 나타낸 바와 같이 삼중-표적 유전자를 포함하는 간섭 유도 RNA (triple silencing siRNA; tsiRNA)를 화학적인 합성법으로 제작하였다. 또한, 이러한 삼중-표적 siRNA가 19 bp 크기의 siRNA 세 개를 단순히 혼합하여 세포 내로 형질전환 (transfection)시킨 경우와 유사하게 세 개의 표적 유전자의 발현을 효율적으로 억제하는 것도 확인하였다 (도 15 참조). 따라서, 하나의 RNA 구조체로 세 개 이상의 표적 유전자들의 발현을 동시에 효과적으로 저해할 수 있는 것을 알 수 있었다. 또한 본 발명의 삼중-표적 tsiRNA도 역시 상기 이중-표적 dsiRNA와 동일하게 간섭 유도 RNA 이중가닥의 길이를 줄이거나 일부를 단일가닥 형태로 변형할 수 있었고, 그 경우에도 상기 표적 유전자들을 효과적으로 발현 저해하였다. In the present invention, interference-inducing RNAs containing triple-target genes were prepared as follows to investigate gene expression inhibition. Specifically, as a process of combining three 19 bp siRNAs as shown in FIG. 17, an interference inducing RNA (triple silencing siRNA; tsiRNA) including a triple-target gene was prepared by chemical synthesis. It was also confirmed that this triple-target siRNA effectively inhibited the expression of three target genes similarly to the case of simply mixing and transfecting three 19 bp siRNAs into cells (see FIG. 15). . Therefore, it was found that one RNA construct can effectively inhibit the expression of three or more target genes simultaneously. In addition, the triple-target tsiRNA of the present invention was also able to reduce the length of the interference-inducing RNA double strands or to modify some of them into single-stranded form, in the same manner as the double-target dsiRNA, and even in this case effectively inhibited the expression of the target genes. .

실시예 9. 압타머 서열을 포함하는 다중-표적 간섭 유도 RNA들의 제작 및 유전자 발현 저해도 조사Example 9 Construction of Multi-Target Interference Inducing RNAs Including Aptamer Sequences and Investigation of Gene Expression Inhibition

본 발명에서는 압타머 (aptamer) 서열을 포함하는 다중-표적 간섭 유도 RNA 들을 제작하여 표적 유전자들의 발현 저해도를 다음과 같이 조사하였다. 구체적으로, 상기 삼중-표적 tsiRNA의 한 쪽 이중체 부분을 세포 특이적인 인지가 가능한 압타머 (aptamer) 서열로 대체시키고, 두 종류 이상의 siRNA를 특정 세포 내로 선택적으로 도입할 수 있는 작은 RNA 나노 구조체를 제작하였다 (도 28 참조). 또 한, 상기 실시예 1에 기술한 바와 동일한 과정으로 상기 다중-표적 간섭 유도 RNA가 표적 유전자들을 효과적으로 발현 저해하는 것을 확인하였다. In the present invention, multi-target interference inducing RNAs including an aptamer sequence were prepared to investigate expression inhibition of target genes as follows. Specifically, a small RNA nanostructure capable of replacing a duplex portion of one of the triple-target tsiRNAs with a cell-specific aptamer sequence and selectively introducing two or more siRNAs into a specific cell Was made (see FIG. 28). In addition, the same procedure as described in Example 1 confirmed that the multi-target interference induced RNA effectively inhibits the expression of target genes.

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도 1은 본 발명의 두 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)를 조합한 이중-표적 siRNA (dual silencing siRNA), dsiLamin(19)-TIG3(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다.1 shows the sequence structure of a dual-target siRNA, dsiLamin (19) -TIG3 (19), which combines two interference inducing RNAs (siRNAs) of the present invention.

도 2는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiLamin(19)-TIG3(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 2 shows the expression inhibition of the target genes of the double-target siRNA, dsiLamin (19) -TIG3 (19) of the present invention.

도 3은 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiDBP(19)-TIG3(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다. Figure 3 shows the sequence structure of the dual-target siRNA of the present invention, dsiDBP (19) -TIG3 (19).

도 4는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiDBP(19)-TIG3(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 4 shows the expression inhibition of the target genes of the dual-target siRNA, dsiDBP (19) -TIG3 (19) of the present invention.

도 5는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiLamin(19)-DBP(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다. Figure 5 shows the sequence structure of the dual-target siRNA, dsiLamin (19) -DBP (19) of the present invention.

도 6는 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiLamin(19)-DBP(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 6 shows the expression inhibition of the target genes of the double-target siRNA, dsiLamin (19) -DBP (19) of the present invention.

도 7은 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiOASIS(19)-TIG3(19)의 서열 구조를 나타낸 것이다.Figure 7 shows the sequence structure of the dual-target siRNA, dsiOASIS (19) -TIG3 (19) of the present invention.

도 8은 본 발명의 이중-표적 siRNA, dsiOASIS(19)-TIG3(19)의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다. Figure 8 shows the expression inhibition of the target genes of the dual-target siRNA, dsiOASIS (19) -TIG3 (19) of the present invention.

도 9는 본 발명의 19개 미만의 염기서열로 이루어진 짧은 길이의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs의 다양한 서열 구조를 나타낸 것이다.9 shows various sequence structures of dual-target siRNAs combining short length siRNAs consisting of less than 19 nucleotide sequences of the present invention.

도 10은 본 발명의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs의 상기 표 적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 10 shows the expression inhibition of the target genes of the dual-target siRNAs in combination with the short length siRNA of the present invention.

도 11은 본 발명의 일부 단일가닥의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs (Lamin-TIG3)의 다양한 서열 구조를 나타낸 것이다.FIG. 11 shows various sequence structures of dual-target siRNAs (Lamin-TIG3) combining some single stranded siRNAs of the present invention.

도 12는 본 발명의 일부 단일가닥의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 12 shows the expression inhibition of the target genes of double-target siRNAs combining some single stranded siRNAs of the present invention.

도 13은 본 발명의 일부 단일가닥의 siRNA를 조합한 이중-표적 siRNAs (DBP-TIG3)의 다양한 서열 구조를 나타낸 것이다.FIG. 13 shows various sequence structures of dual-target siRNAs (DBP-TIG3) combining some single stranded siRNAs of the present invention. FIG.

도 14는 본 발명의 일부 단일가닥의 이중-표적 siRNAs의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 14 shows the expression inhibition of the target genes of some single stranded dual-target siRNAs of the present invention.

도 15는 본 발명의 세 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)들을 조합한 삼중-표적 siRNA (triple silencing siRNA)의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin-DBP-TIG3의 서열 구조이고, (b)는 tsiTIG3-DBP-Lamin의 서열 구조이다. FIG. 15 shows the sequence structure of triple silencing siRNA (triple silencing siRNA) combining three interference inducing RNAs (siRNAs) of the present invention, (a) is the sequence structure of tsiLamin-DBP-TIG3, and (b) Is the sequence structure of tsiTIG3-DBP-Lamin.

도 16은 본 발명의 삼중-표적 siRNAs, tsiLamin-DBP-TIG3 및 tsiTIG3-DBP-Lamin의 상기 표적 유전자들에 대한 발현 저해도를 나타낸 것이다.Figure 16 shows the expression inhibition of the target genes of the triple-target siRNAs, tsiLamin-DBP-TIG3 and tsiTIG3-DBP-Lamin of the present invention.

도 17은 본 발명의 하나의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin-DBP-TIG3(17)의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin-DBP-TIG3(15)의 서열 구조이다.Figure 17 shows the sequence structure of the triple-target siRNA combining one short length siRNA of the present invention, (a) is the sequence structure of tsiLamin-DBP-TIG3 (17), (b) is tsiLamin-DBP -Sequence structure of TIG3 (15).

도 18은 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG3(17)의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG3(15)의 서열 구조이다.FIG. 18 shows the sequence structure of triple-target siRNA combining one or more short length siRNAs of the present invention, (a) is the sequence structure of tsiLamin (17) -DBP-TIG3 (17), and (b) The sequence structure of tsiLamin (17) -DBP-TIG3 (15).

도 19는 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일 가닥의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin-DBP-0.5TIG3의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin-DBP-0.5TIG3(17)의 서열 구조이다. FIG. 19 shows the sequence structure of a triple-target siRNA combining one or more short length siRNAs of the invention with some or all short lengths of single stranded siRNAs, (a) shows the sequence structure of tsiLamin-DBP-0.5TIG3 And (b) is the sequence structure of tsiLamin-DBP-0.5TIG3 (17).

도 20은 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일 가닥의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA, tsi0.5Lamin(17)-DBP-TIG3의 서열 구조를 나타낸 것이다.FIG. 20 shows the sequence structure of the triple-target siRNA, tsi0.5Lamin (17) -DBP-TIG3, which combines one or more short length siRNAs of the present invention with some or all short lengths of single stranded siRNAs.

도 21은 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일 가닥의 siRNA를 조합한 삼중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG3(17)의 서열 구조이고, (b)는 tsiLamin(17)-DBP-TIG(15)의 서열 구조이다.FIG. 21 shows the sequence structure of triple-target siRNA combining one or more short length siRNAs of the invention with some or all short lengths of single stranded siRNAs, (a) being tsiLamin (17) -DBP-TIG3 ( 17), and (b) is the sequence structure of tsiLamin (17) -DBP-TIG (15).

도 22는 본 발명의 네 개의 간섭 유도 RNA (siRNA)를 조합한 사중-표적 siRNA (quadruple silencing siRNA)의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-TIG3-Lamin의 서열 구조이고, (b)는 qsiLamin-TIG3-OASIS-DBP의 서열 구조이다.Figure 22 shows the sequence structure of quadruple silencing siRNA (quadruple silencing siRNA) combining four interference inducing RNA (siRNA) of the present invention, (a) is the sequence structure of qsiDBP-OASIS-TIG3-Lamin, ( b) is the sequence structure of qsiLamin-TIG3-OASIS-DBP.

도 23은 본 발명의 하나의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-TIG3(17)-Lamin의 서열 구조이고, (b)는 qsiDBP-OASIS-TIG3(15)-Lamin의 서열구조이다.Figure 23 shows the sequence structure of the quadruple-target siRNA combining one short length siRNA of the present invention, (a) is the sequence structure of qsiDBP-OASIS-TIG3 (17) -Lamin, (b) is qsiDBP The sequence structure of -OASIS-TIG3 (15) -Lamin.

도 24는 본 발명의 하나 이상의 짧은 길이의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA, qsiLamin(17)-TIG3(15)-OASIS-DBP의 서열 구조를 나타낸 것이다.FIG. 24 shows the sequence structure of a quad-target siRNA, qsiLamin (17) -TIG3 (15) -OASIS-DBP, combining one or more short length siRNAs of the present invention.

도 25는 본 발명의 일부 단일 가닥의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA, qsiDBP-OASIS-0.5TIG3-Lamin의 서열 구조를 나타낸 것이다.FIG. 25 shows the sequence structure of the quadruple-target siRNA, qsiDBP-OASIS-0.5TIG3-Lamin, combining some single stranded siRNAs of the present invention.

도 26은 본 발명의 일부 짧은 길이의 단일가닥의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-0.5TIG3(17)-Lamin의 서열 구조이고, (b)는 qsi0.5Lamin(17)-TIG3-OASIS-DBP의 서열 구조를 나타낸 것이다.Figure 26 shows the sequence structure of a quadruple-target siRNA combining some short-length single stranded siRNA of the present invention, (a) is the sequence structure of qsiDBP-OASIS-0.5TIG3 (17) -Lamin, (b ) Shows the sequence structure of qsi0.5Lamin (17) -TIG3-OASIS-DBP.

도 27은 본 발명의 하나의 짧은 길이의 siRNA와 일부 또는 전부 짧은 길이의 단일가닥의 siRNA를 조합한 사중-표적 siRNA의 서열 구조를 나타낸 것으로, (a)는 qsiDBP-OASIS-TIG3(15)-0.5Lamin(17)의 서열 구조이고, (b)는 qsiLamin(17)-0.5TIG3(15)-OASIS-DBP의 서열 구조이다. FIG. 27 shows the sequence structure of a quadruple-target siRNA combining one short-length siRNA and some or all short-length siRNA of the present invention, (a) is qsiDBP-OASIS-TIG3 (15)- The sequence structure of 0.5 Lamin (17), (b) is the sequence structure of qsi Lamin (17) -0.5TIG3 (15) -OASIS-DBP.

도 28은 본 발명의 간섭 유도 RNA (siRNA)들과 함께 세포 특이적 인지서열(aptamer)을 조합한 압타머-다중 표적 간섭 유도 RNA (siRNA)의 구조를 모식적으로 나타낸 것으로, (a)는 이중-표적 siRNA와 압타머를 조합한 압타머-tsiRNA 구조이며, (b)는 삼중-표적 siRNA와 압타머를 조합한 압타머-qsiRNA 구조이다.FIG. 28 schematically shows the structure of an aptamer-multiple target interference inducing RNA (siRNA) combining a cell specific aptamer with interference inducing RNAs (siRNAs) of the present invention. Aptamer-tsiRNA structure combining a dual-target siRNA and aptamer, (b) is aptamer-qsiRNA structure combining a triple-target siRNA and aptamer.

<110> Postech Academy-Industry Foundation <120> Multiple small Interfering RNA(siRNA) having a partially single-stranded sequence <130> P07-E303 <160> 38 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 1 uguucuucug gaaguccag 19 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 2 acaagaagac cuucagguc 19 <210> 3 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 3 uagagaacgc cugagacag 19 <210> 4 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 4 aucucuugcg gacucuguc 19 <210> 5 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 5 ugagaagcga ugucuucga 19 <210> 6 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 6 acucuucgcu acagaagcu 19 <210> 7 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 7 ucguagaaua ggaggcuuc 19 <210> 8 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 8 agcaucuuau ccuccgaag 19 <210> 9 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 9 uguucuucug gaaguccagc ugucucaggc guucucua 38 <210> 10 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 10 acaagaagac cuucaggucg acagaguccg caagagau 38 <210> 11 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 11 ugagaagcga ugucuucgac ugucucaggc guucucua 38 <210> 12 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 12 acucuucgcu acagaagcug acagaguccg caagagau 38 <210> 13 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 13 uguucuucug gaaguccagu cgaagacauc gcuucuca 38 <210> 14 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 14 acaagaagac cuucagguca gcuucuguag cgaagagu 38 <210> 15 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 15 ucguagaaua ggaggcuucc ugucucaggc guucucua 38 <210> 16 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 16 agcaucuuau ccuccgaagg acagaguccg caagagau 38 <210> 17 <211> 34 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 17 uucuucugga aguccagguc ucaggcguuc ucua 34 <210> 18 <211> 34 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 18 aagaagaccu ucagguccag aguccgcaag agau 34 <210> 19 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 19 uguucuucug gaagucccuc aggcguucuc ua 32 <210> 20 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 20 acaagaagac cuucagggag uccgcaagag au 32 <210> 21 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 21 uucuucugga aguccagcuc aggcguucuc ua 32 <210> 22 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 22 aagaagaccu ucaggucgag uccgcaagag au 32 <210> 23 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 23 uguucuucug gaagucucag gcguucucua 30 <210> 24 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 24 acaagaagac cuucagaguc cgcaagagau 30 <210> 25 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 25 cuucuggaag uccagcucag gcguucucua 30 <210> 26 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 26 gaagaccuuc aggucgaguc cgcaagagau 30 <210> 27 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 27 uucuucugga agucccucag gcguucucua 30 <210> 28 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 28 aagaagaccu ucagggaguc cgcaagagau 30 <210> 29 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 29 uguucuucug gaaguccagc ugucucaggc guucucua 38 <210> 30 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 30 gacagagucc gcaagagau 19 <210> 31 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 31 uguucuucug gaaguccag 19 <210> 32 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 32 acaagaagac cuucaggucg acagaguccg caagagau 38 <210> 33 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 33 uucuucugga aguccagcuc aggcguucuc ua 32 <210> 34 <211> 15 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 34 gaguccgcaa gagau 15 <210> 35 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 35 ugagaagcga ugucuucga 19 <210> 36 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 36 acucuucgcu acagaagcug acagaguccg caagagau 38 <210> 37 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 37 ugagaagcga ugucuucgac ugucucaggc guucucua 38 <210> 38 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 38 gacagagucc gcaagagau 19 <110> Postech Academy-Industry Foundation <120> Multiple small Interfering RNA (siRNA) having a partially single-stranded sequence <130> P07-E303 <160> 38 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 1 uguucuucug gaaguccag 19 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 2 acaagaagac cuucagguc 19 <210> 3 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 3 uagagaacgc cugagacag 19 <210> 4 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 4 aucucuugcg gacucuguc 19 <210> 5 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 5 ugagaagcga ugucuucga 19 <210> 6 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 6 acucuucgcu acagaagcu 19 <210> 7 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 7 ucguagaaua ggaggcuuc 19 <210> 8 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> siRNA <400> 8 agcaucuuau ccuccgaag 19 <210> 9 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 9 uguucuucug gaaguccagc ugucucaggc guucucua 38 <210> 10 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 10 acaagaagac cuucaggucg acagaguccg caagagau 38 <210> 11 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 11 ugagaagcga ugucuucgac ugucucaggc guucucua 38 <210> 12 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 12 acucuucgcu acagaagcug acagaguccg caagagau 38 <210> 13 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 13 uguucuucug gaaguccagu cgaagacauc gcuucuca 38 <210> 14 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 14 acaagaagac cuucagguca gcuucuguag cgaagagu 38 <210> 15 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 15 ucguagaaua ggaggcuucc ugucucaggc guucucua 38 <210> 16 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 16 agcaucuuau ccuccgaagg acagaguccg caagagau 38 <210> 17 <211> 34 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 17 uucuucugga aguccagguc ucaggcguuc ucua 34 <210> 18 <211> 34 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 18 aagaagaccu ucagguccag aguccgcaag agau 34 <210> 19 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 19 uguucuucug gaagucccuc aggcguucuc ua 32 <210> 20 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 20 acaagaagac cuucagggag uccgcaagag au 32 <210> 21 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 21 uucuucugga aguccagcuc aggcguucuc ua 32 <210> 22 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 22 aagaagaccu ucaggucgag uccgcaagag au 32 <210> 23 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 23 uguucuucug gaagucucag gcguucucua 30 <210> 24 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 24 acaagaagac cuucagaguc cgcaagagau 30 <210> 25 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 25 cuucuggaag uccagcucag gcguucucua 30 <210> 26 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 26 gaagaccuuc aggucgaguc cgcaagagau 30 <210> 27 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 27 uucuucugga agucccucag gcguucucua 30 <210> 28 <211> 30 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 28 aagaagaccu ucagggaguc cgcaagagau 30 <210> 29 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 29 uguucuucug gaaguccagc ugucucaggc guucucua 38 <210> 30 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 30 gacagagucc gcaagagau 19 <210> 31 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 31 uguucuucug gaaguccag 19 <210> 32 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 32 acaagaagac cuucaggucg acagaguccg caagagau 38 <210> 33 <211> 32 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 33 uucuucugga aguccagcuc aggcguucuc ua 32 <210> 34 <211> 15 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 34 gaguccgcaa gagau 15 <210> 35 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 35 ugagaagcga ugucuucga 19 <210> 36 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 36 acucuucgcu acagaagcug acagaguccg caagagau 38 <210> 37 <211> 38 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 37 ugagaagcga ugucuucgac ugucucaggc guucucua 38 <210> 38 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> dsiRNA <400> 38 gacagagucc gcaagagau 19

Claims

In small interfering RNA (siRNA) that controls a plurality of target genes,

Multiple interference-inducing RNA, characterized in that at least one or more of the siRNAs for controlling the target genes consisting of a nucleotide sequence consisting of a single strand.

The method of claim 1,

Each of the siRNAs that control the target genes is composed of 19 nucleotide sequences of some single stranded multiple interference induced RNA.

The method of claim 1,

Each of the siRNAs that control the target genes are some single stranded multiple interference induced RNA, characterized in that consisting of less than 15 to 19 base sequences.

The method of claim 1,

Each of the siRNAs that control the target genes is composed of at least nine or more nucleotide sequences of some single stranded multiple interference induced RNA.

A therapeutic agent for a gene-controlled related disease, wherein at least one or more of the interference-inducing RNAs (siRNAs) of at least one of the above-mentioned combinations are combined.

The method of claim 5,

The gene-controlling related disease comprises a cancer or a viral disease.