KR20080045401A - Method for extracting catechin from green tea - Google Patents

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Abstract

A method for extracting catechin from green tea leaves is provided to separate the catechin in high yield under proper conditions of pH, temperature, extraction time, and a distribution solvent. A method for extracting catechin from green tea leaves comprises the steps of: (a) soaking green tea leaves in a neutral solvent including water or distilled water at 80°C or above; (b) performing extraction for 60min or more; and (c) separating catechin from the green tea leaf extract obtained in the step (b). The step (c) is performed by using a chromatography column filled with a filler material selected from the group consisting of silica gel, Sephadex, RP-18, polyamide, toyopearl, and XAD. After the step (b), the method further comprises the steps of: (i) filtering the green tea leaf extract, mixing the filtrate to chloroform in the same volume ratio, and stirring/settling the mixture to distribute it into a chloroform layer and an extraction solvent layer; (ii) mixing the distributed extraction solvent layer to chloroform in the same volume ratio, and stirring/settling the mixture to secondly distribute it into a chloroform layer and an extraction solvent layer; and (iii) mixing the secondly-distributed extraction solvent layer to ethylacetate in the same volume ratio, and stirring/settling the mixture to obtain an ethylacetate layer containing catechin.

Description

녹차로부터의 카테킨의 추출방법{Method for Extracting Catechin from Green Tea}Method for Extracting Catechin from Green Tea

도 1은 녹차를 열수추출하였을 때 pH별 녹차 추출액의 총 카테킨 함량을 그래프로 도시한 것이다. 1 is a graph showing the total catechin content of green tea extract by pH when the green tea is extracted with hot water.

도 2는 녹차를 열수추출하였을 때 온도별 녹차 추출액의 총 카테킨 함량을 그래프로 도시한 것이다. Figure 2 is a graph showing the total catechin content of the green tea extract according to temperature when the green tea is extracted with hot water.

도 3은 온도별 녹차의 열수추출액 사진이다(A는 추출온도가 50℃에서의 녹차 추출액이고 B는 추출온도가 80℃에서의 녹차 추출액 사진이고 C는 추출온도가 100℃ 에서의 녹차 추출액 사진이다). Figure 3 is a hot water extract picture of green tea by temperature (A is a green tea extract at 50 ℃ extraction temperature, B is a green tea extract picture at 80 ℃ extraction temperature and C is a green tea extract picture at 100 ℃ extraction temperature ).

도 4는 추출온도 100℃에서 얻어진 녹차 추출액의 HPLC 분석 결과 그래프이다(원으로 표시된 부분이 불순물을 나타낸다).FIG. 4 is a graph of HPLC analysis results of green tea extract obtained at an extraction temperature of 100 ° C. (parts indicated by circles represent impurities).

도 5는 녹차를 열수추출하였을 때 시간별 녹차 추출액의 총 카테킨 함량을 그래프로 도시한 것이다. Figure 5 is a graph showing the total catechin content of the green tea extract over time when the green tea is extracted with hot water.

도 6은 녹차를 열수추출한 후 그 녹차 추출액을 분매 용매로 분배시켰을 때 분매 용매별 카테킨 함량을 그래프로 도시한 것이다.6 is a graph showing the catechin content of each solvent when the green tea is extracted with hot water and then the green tea extract is dispensed with a solvent.

본 발명은 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for separating catechin from green tea.

수천년 전부터 음용되어온 녹차는 카페인, 카테킨, 테아닌, 아미노산 등 여러 기능성 물질을 함유하고 있어 혈액 순환, 항암, 항산화, 노화억제, 항당뇨, 항균, 인체 독성 제거 등에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며(문제학 등, 차의 기능성 성분과 생리활성, 한국자학회지, 1(1), 175-191(1995)), 현재도 그 효능에 대한 연구가 계속하여 이루어지고 있다.Green tea, which has been drinking for thousands of years, contains many functional substances such as caffeine, catechin, theanine, and amino acids. , Functional ingredients and physiological activity of tea, Journal of the Korean Magnetics Society, 1 (1), 175-191 (1995)).

최근 연구에 따르면 녹차가 여러 생리활성을 발휘하는 데 가장 중요한 역할을 하는 성분이 카테킨이라는 사실을 보여준다.(A review of the latest research findings on the healthpromotion properties of tea, Christiane J. Dufresne, Edward R. Farnworth, J. Nutr. Bichem, 2001. 12, 404~421)Recent studies show that catechin is the most important ingredient in green tea's physiological activity (A review of the latest research findings on the healthpromotion properties of tea, Christiane J. Dufresne, Edward R. Farnworth , J. Nutr.Bichem, Dec. 2001, 404-421)

녹차의 카테킨 성분은 6 가지가 알려져 있는데, 카테킨(catechin), 갈로카테킨(gallocatechin: GC), 에피카테킨(epicatechin: EC), 에피카테킨 갈레이트(epicatechingalate: ECG), 에피갈로카테킨(epigalocatechin: EGC), 그리고 에피갈로카테킨갈레이트(epigalocatechingalate: EGCG)가 그것이다. There are six known catechin components of green tea, including catechin, gallocatechin (GC), epicatechin (EC), epicatechin galate (ECG), epigallocatechin (EGC), And epigallocatechingalate (EGCG).

녹차에 함유된 카테킨의 함량은 일반적으로 차 재배지역의 기후, 토양 등의 재배 환경과 채취 시기에 따라 성분의 함량과 조성 비율이 다르게 나타나지만, 카테킨 함량은 평균적으로 차 잎의 총 건중량 대비 10~15%이며, 가장 활성이 뛰어난 것으로 알려진 에피갈로카테킨갈레이트가 카테킨 성분 중 50 ~ 60%를 차지한다고 알려져 있다(지리산 야생녹차의 화학성분, 신미경, 한국차문화 협회지, 2000년 3~4월호, 30~33).Although the content of catechin in green tea generally varies according to the cultivation environment and harvesting time of the tea growing region, and the harvesting time, the catechin content is, on average, 10 to 15 of the total dry weight of tea leaves. %, And epigallocatechin gallate, which is said to be the most active, accounts for 50 to 60% of catechin components (chemical composition of wild green tea of Jiri, Shin Mi-kyung, Korean Tea Culture Association, March-April 2000, 30-33).

따라서 현재까지 녹차로부터 기능성 물질을 분리하기 위한 기술은 크게 녹차로부터 카테킨을 분리하는 기술과 그 카테킨 중에서 가장 생리활성이 높은 것으로 알려진 에피갈로카테킨갈레이트를 분리하기 위한 기술로 대별할 수 있다. Therefore, the technology for separating functional substances from green tea to date can be roughly classified into a technique for separating catechin from green tea and a technique for separating epigallocatechin gallate known to have the highest physiological activity among the catechins.

발명의 명칭이 "폴리페놀 함량이 높은 녹차 추출물의 제조방법"인 대한민국 공개특허 제2000-0046079호와 발명의 명칭이 "카테킨류의 신규한 추출방법 및 이를 이용한 음료"인 대한민국 공개특허 제2001-0035410호 그리고 발명의 명칭이 카테킨의 생산 방법(process for producing catechins)인 미국특허 제4248789호 등은 녹차로부터 총카테킨를 분리하는 기술에 대한 것이고, 발명의 명칭이 "에피갈로카테킨갈레이트의 분리정제방법"인 대한민국 공개특허 제2006-0058356호"나 에피갈로카테친갈레이트의 제조방법"인 대한민국 공개특허 제2001-0050080호, 발명의 명칭이 "녹차 추출물 유래의 고순도 EGCG 분리 방법"인 대한민국 특허 제418605호 등이 카테킨 중 생리활성이 가장 높은 것으로 알려진 에피갈로카테킨갈레이트의 분리 방법에 대한 기술이다.Korean Unexamined Patent Publication No. 2000-0046079 entitled "Production Method of Green Tea Extract with High Polyphenol Content" and Korean New Patent Publication No. 2001- titled "Novel Extraction Method of Catechins and Drinks Using the Same". 0035410 and US Pat. No. 4248789, titled Process for producing catechins, relates to a technique for separating total catechins from green tea, and the invention is titled "Isolation of Epigallocatechin gallate." Republic of Korea Patent Publication No. 2006-0058356 "Method of manufacturing epigallocatechin gallate" Republic of Korea Patent Publication No. 2001-0050080, Republic of Korea Patent of the invention "high purity EGCG separation method derived from green tea extract" No. 418605 and the like describe a method for separating epigallocatechin gallate, which is known to have the highest physiological activity among catechins.

본 발명은 녹차로부터 카테킨을 분리하는 기술을 개시한다.The present invention discloses a technique for separating catechins from green tea.

본 발명의 목적은 녹차로부터 카테킨을 보다 높은 수율로 분리할 수 있는 카 테킨의 분리 방법을 제공하는 데 있다.It is an object of the present invention to provide a method for separating catechins which can separate catechin from green tea in higher yield.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 양태 등은 이하에서 제시될 것이다.Other objects, specific embodiments, and the like of the present invention will be presented below.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명자는 먼저 녹차로부터 카테킨 분리에서 있어 pH, 온도, 추출시간 그리고 분배 용매에 따라 카테킨의 함량이 변화하는가를 실험하였다.In order to achieve the above object, the present inventor first tested whether the content of catechin is changed according to pH, temperature, extraction time and dispensing solvent in catechin separation from green tea.

구체적으로 본 발명자는 하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이 추출용매의 pH는 4.0, 5.5, 7.0 및 10.0으로 조정하고, 추출온도는 50℃, 80℃ 및 100℃ 하고, 또 추출시간은 30분, 60분, 90분, 120분, 150분, 180분, 240분 및 300분으로 하여 녹차로부터의 카테킨의 분리 수율을 보았을 때, pH는 7.0에서, 추출온도는 80℃에서 그리고 추출시간은 60분 이상에서 불순물이 가장 적으면서 최대의 카테킨 분리 효율을 보임을 확인할 수 있었다(다만, 추출온도의 경우는 100℃에서 최대의 카테킨 분리 효율을 보였으나(추출온도가 80℃인 경우보다 1.4%가 높음) 추출온도를 100℃로 하였을 경우는 녹차추출물 중에 불순물이 많이 섞여 있음이 확인되어 최적 온도로 부적당하였다). Specifically, the inventors adjusted the pH of the extraction solvent to 4.0, 5.5, 7.0 and 10.0 as can be seen in the following examples, the extraction temperature is 50 ℃, 80 ℃ and 100 ℃, and the extraction time is 30 minutes, When separation yields of catechin from green tea were observed at 60, 90, 120, 150, 180, 240 and 300 minutes, the pH was 7.0, the extraction temperature was 80 ° C, and the extraction time was 60 minutes. As described above, it was confirmed that the highest catechin separation efficiency was obtained with the least impurity (However, the extraction temperature showed maximum catechin separation efficiency at 100 ° C (1.4% higher than the extraction temperature at 80 ° C). When the extraction temperature was set at 100 ° C, it was found that a lot of impurities were mixed in the green tea extract, which was inappropriate for the optimum temperature).

또한 본 발명자는 상기 최적 조건에 따라 녹차 추출액을 얻고, 이를 동일 부피의 클로로포름과 혼합시키고 교반·정치시켜 분배시켰을 때와, 그리고 녹차 추출액을 동일 부피의 클로로포름과 혼합시키고 교반·정치시켜 분배시킨 후 얻어진 추출용매층(즉 물층)을 다시 동일 부피의 클로로포름과 혼합시키고 교반·정치시켜 분배시켰을 때와, 그리고 마지막으로 2회 클로로포름으로 분배시켜 얻어진 추출용매층(즉 물층)을 동일 부피의 에틸아세테이트와 혼합하여 분배시켰을 때의 카테킨의 함량을 분석한 결과, 카페인 등의 불순물은 제거되면서 카테킨 분리 효율은 최대로 됨(약 80%)을 확인할 수 있었다.In addition, the inventors obtained the green tea extract according to the above optimum conditions, and when it was mixed with the same volume of chloroform, stirred and fixed, and distributed, and the green tea extract was mixed with the same volume of chloroform, stirred and fixed, and then distributed. The extraction solvent layer (i.e. water layer) was again mixed with the same volume of chloroform, stirred and placed, and distributed, and finally the extraction solvent layer (i.e. water layer) obtained by dividing twice with chloroform was mixed with the same volume of ethyl acetate. As a result of analyzing the content of catechin at the time of dispensing, it was confirmed that the catechin separation efficiency was maximized (about 80%) while impurities such as caffeine were removed.

본 발명은 전술한 바의 실험 결과에 기초한 것으로서, 일 측면에 있어서, 본 발명은 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법을 제공한다.The present invention is based on the experimental results as described above, in one aspect, the present invention provides a method for separating catechin from green tea.

본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법은 (a) 녹차를 80℃ 이상의 중성용매에 침지시키는 단계, (b) 추출 시간을 60분 이상 지속시키는 단계, 및 (c) (b) 단계 후에 얻어진 녹차 추출물로부터 카테킨을 분리하는 단계를 포함하여 구성됨을 특징으로 한다.The method for separating catechin from green tea of the present invention comprises (a) immersing green tea in a neutral solvent of 80 ° C. or higher, (b) maintaining the extraction time for at least 60 minutes, and (c) green tea obtained after step (b). It characterized in that it comprises a step of separating the catechin from the extract.

본 발명의 녹차로부터의 카테킨 추출 방법은 전술한 바의 구성을 지님으로써 불순물은 적으면서도 높은 수율로 카테킨을 분리할 수 있게 된다.The catechin extraction method from the green tea of the present invention has the above-described constitution so that the catechin can be separated with high yield while containing little impurities.

본 명세서에서, "녹차"는 시중에 판매되는 가루녹차, 티백 녹차, 잎 녹차, 수확되어 건조된 녹차잎을 포함하는 의미이다. In the present specification, "green tea" is meant to include commercially available powdered green tea, tea bag green tea, leaf green tea, harvested and dried green tea leaves.

또한 본 명세서에서, "중성용매"는 예컨대 물, 증류수를 포함하는 pH 7.0인 추출용매를 의미하는데, pH 7.0인 한, 알콜(바람직하게는 탄소수가 5 이하의 저급 알콜), 에틸아세테이트, 아세톤, 클로로포름 및 메틸렌클로라이드 중 둘 이상이 혼합된 용매로서 pH가 7.0으로 조정된 용매를 포함하는 의미이다.In addition, in the present specification, "neutral solvent" means an extraction solvent having a pH of 7.0, including, for example, water and distilled water, as long as pH 7.0, alcohol (preferably lower alcohol having 5 or less carbon atoms), ethyl acetate, acetone, It is meant to include a solvent whose pH is adjusted to 7.0 as a solvent in which two or more of chloroform and methylene chloride are mixed.

또한 본 명세서에서 "카테킨"은 현재까지 녹차의 카테킨 성분으로 알려진 카테킨(catechin), 갈로카테킨(gallocatechin: GC), 에피카테킨(epicatechin: EC), 에피카테킨갈레이트(epicatechin gallate: ECG),에피갈로카테킨(epigallocatechin: EGC), 및 에피갈로카테킨갈레이트(epigalocatechingalate; EGCG)를 포함하는 의미이다. In the present specification, "catechin" refers to catechin (catechin), gallocatechin (GC), epicatechin (EC), epicatechin gallate (ECG), epigallocatechin, which are known to date as catechin components of green tea. (epigallocatechin: EGC), and epigallocatechingalate (EGCG).

한편, 본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법에 있어서, 상기 단계 (a)는 앞서 설명한 바와 같이 그리고 하기 실시예에서 확인되는 바와 같이 추출용매의 온도가 80℃ 이상에서 고온으로 갈수록 추출 수율이 증가하지만 불순물이 증가하므로 추출용매의 온도를 80℃로 하는 것이 바람직하다.On the other hand, in the separation method of catechin from the green tea of the present invention, the step (a) is as described above and as confirmed in the following examples, the extraction yield increases as the temperature of the extraction solvent from 80 ℃ or higher to higher temperature However, since impurities increase, it is preferable to set the temperature of the extraction solvent to 80 ° C.

또한 본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법에 있어서, 상기 단계 (b)는 앞서 설명한 바와 같이 그리고 하기 실시예에서 확인되는 바와 같이 추출시간이 60분 이상이 되면 300분까지 추출 수율에 큰 변화가 없음을 알 수 있는데(60분부터 300분까지는 총카테킨 함량이 3.0% 내지 3.3%임; 도 5 참조), 열효율적 면을 고려하였을 때는 60분 내지 90분 정도가 적절하며, 가장 바람직하게는 추출시간을 60분으로 하는 경우이다. In addition, in the method for separating catechin from green tea of the present invention, the step (b) has a large change in extraction yield up to 300 minutes when the extraction time is 60 minutes or more as described above and as confirmed in the following examples. It can be seen that (from 60 minutes to 300 minutes total catechin content is 3.0% to 3.3%; see Fig. 5), considering the thermal efficiency, 60 to 90 minutes is appropriate, most preferably extraction This is the case with 60 minutes.

또한 본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법에 있어서, 상기 단계 (c)의 녹차 추출물로부터 카테킨을 분리하는 단계는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 분리할 수 있는데, 예컨대 충진제로서 실리카겔, 세파덱스, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(toyopearl), XAD 등으로 충진된 칼럼크로마토그래피를 이용하여 수행될 수 있다.Also in the method for separating catechin from green tea of the present invention, the step of separating the catechin from the green tea extract of step (c) can be separated using any method known in the art, for example, silica gel, cepha as a filler. It can be performed using column chromatography packed with dex, RP-18, polyamide, toyopearl, XAD and the like.

바람직한 양태에 있어, 본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법은 가테킨의 분리 수율을 높이기 위해서 상기 단계 (b) 후에 분배 용매로 적절히 분배하는 단계를 추가로 포함하는 것이 바람직한데, 구체적으로 분배 용매로 분배시키는 단계는 단계 (b) 후에 얻어진 녹차 추출물을 여과지로 여과시켜 추출 잔사를 제거한 후에 그 여과액을 동일 부피의 클로로포름과 혼합하여 교반·정치시켜 클로로포름층과 추출용매층으로 분배시키는 단계, 그 분배된 추출용매층을 다시 동일 부피의 클로로포름과 혼합하여 교반·정치시켜 클로로포름층과 추출용매층으로 2차 분배시키는 단계, 그리고 나서 그 추출용매층을 동일 부피의 에틸아세테이트와 혼합하여 교반·정치시켜 카테킨 성분이 포함된 에틸아세테이트층을 얻는 단계를 포함하여 이루어진다.In a preferred embodiment, the method of separating catechin from green tea of the present invention preferably further comprises the step of properly dispensing with a dispensing solvent after step (b) to increase the separation yield of catechin, specifically, dispensing solvent. The step of distributing the mixture was carried out by filtering the green tea extract obtained after step (b) with a filter paper to remove the extraction residue, and then mixing the filtrate with an equal volume of chloroform and stirring and distributing the mixture into a chloroform layer and an extraction solvent layer. The partitioned extraction solvent layer was again mixed with the same volume of chloroform, stirred and fixed, and then secondly partitioned into the chloroform layer and the extraction solvent layer, and then the extracted solvent layer was mixed with the same volume of ethyl acetate and stirred and fixed. It comprises the step of obtaining an ethyl acetate layer containing the catechin component.

본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법이 상기 분배 용매로 분배시키는 단계를 포함할 경우에 카테킨을 보다 더 높은 수율로 분리해 낼 수 있는데, 이 때 카테킨의 분리는 카테킨 성분이 포함된 에틸아세테이트층을 가지고 당업계에 공지된 방법 예컨대 전술한 바의 칼럼크로마토그래피를 사용하여 이루어질 수 있다.When the method for separating catechin from green tea of the present invention includes dispensing with the dispensing solvent, the catechin can be separated at a higher yield, wherein the separation of catechin is an ethyl acetate layer containing the catechin component. And can be accomplished using methods known in the art such as column chromatography as described above.

본 발명은 다른 측면에 있어, 카테킨 함유량이 높은 녹차 추출물의 제조방법에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to a method for producing green tea extract having a high catechin content.

본 발명의 카테킨 함유량이 높은 녹차 추출물의 제조방법은 (a) 녹차를 80℃ 이상의 중성용매에 침지시키는 단계, (b) 추출 시간을 60분 이상 지속시키는 단계, (c) (b) 단계 후에 얻어진 녹차 추출물로부터 카테킨을 분리하는 단계를 포함하여 구성됨을 특징으로 한다.The method for producing a green tea extract having a high catechin content of the present invention is obtained by (a) immersing green tea in a neutral solvent of 80 ° C. or higher, (b) maintaining the extraction time for at least 60 minutes, (c) (b) It characterized in that it comprises a step of separating the catechin from the green tea extract.

본 발명의 카테킨 함유량이 높은 녹차 추출물의 제조방법에 있어서, "녹차", "중성용매" 및 "카테킨"의 의미, 그리고 바람직한 양태와 관련하여서는 상기 본 발 명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법에 대한 전술한 바의 설명이 그대로 유효하다.In the method for producing green tea extract having a high catechin content of the present invention, the meaning of "green tea", "neutral solvent" and "catechin", and the preferred embodiment, the above-described method for separating catechin from green tea of the present invention The statement is valid as it is.

이하 본 발명을 실시예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples. However, the scope of the present invention is not limited to these examples.

<실시예> 녹차로부터의 카테킨 추출 최적 조건의 확립 EXAMPLES Establishment of Optimum Catechin Extraction from Green Tea

<실시예 1> 녹차로부터의 카테킨 추출의 최적 pH의 확립 Example 1 Establishment of Optimum pH for Catechin Extraction from Green Tea

제주도 제주다원(제주도 서귀포시 색달동 소재)에서 시판하는 티백 녹차 3.0g에 순수한 물 100㎖를 넣고 여기에 소량의 HCl 또는 NaOH를 가하여 추출용매의 pH를 pH 4.0, pH 5.5, pH 7.0 및 pH 10.0으로 조정하였다. 추출온도를 80℃로 하여 1시간 동안 추출하여 교반기에서 교반하면서 녹차추출물을 얻고 여과지(Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.)를 이용하여 추출잔사를 제거하고 감압여과 및 농축하여 녹차추출물을 얻었다. 100 ml of pure water is added to 3.0 g of tea bag green tea sold in Jeju Dawon, Seogwipo-si, Jeju Island, and a small amount of HCl or NaOH is added to adjust the pH of the extraction solvent to pH 4.0, pH 5.5, pH 7.0 and pH 10.0. It was. Extract the extraction temperature for 1 hour at 80 ℃ to obtain a green tea extract while stirring in a stirrer, using a filter paper (Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.) to remove the extraction residue, filtered under reduced pressure and concentrated Green tea extract was obtained.

상기 녹차추출물의 총 카테킨 함량을 식품첨가물 공전에 기재된 가테킨 정량 분석법에 따라 측정하였다. 구체적으로 상기에서 얻어진 녹차추출물에 물을 가하여 1/10로 희석시킨 희석액 1㎖에 인산완충액(pH 7.5) 3㎖와 주석산철시액 1㎖를 가하여 시험용액으로 하고, 물을 대조액으로 하여 파장 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 별도로 물 100㎖ 당 몰식자산에틸(표준폼) 각각 5, 10, 15, 20, 25mg씩 함유하도록 한 액을 표준용액으로 하고 이 표준용액 5㎖를 사용하여 시험용액과 동 일하게 조작하여 발색시킨 후 파장 540nm에서 흡광도를 측정하여 표준곡선을 구하였다. 시험용액의 흡광도와 표준곡선으로부터 시험용액 1㎖ 중의 총 카테킨 함량을 구하였다.The total catechin content of the green tea extract was measured according to the catechin quantitative analysis described in the food additive revolution. Specifically, 3 ml of phosphate buffer solution (pH 7.5) and 1 ml of iron stannate solution were added to 1 ml of the diluted green tea extract diluted with 1/10 by adding water to the green tea extract, which was used as a test solution. Water was used as a reference solution at a wavelength of 540 nm. Absorbance was measured. In this case, prepare 5 ml, 10, 15, 20, and 25 mg of ethyl acetate (standard foam) per 100 ml of water separately as standard solution, and use 5 ml of this standard solution in the same manner as the test solution. After absorbance was measured at a wavelength of 540 nm, a standard curve was obtained. Total catechin content in 1 ml of the test solution was determined from the absorbance and standard curve of the test solution.

총 카테킨 함량(%) = C X 1.5 X 100/검체의채취량(mg)X(100-W) X 100Total catechin content (%) = C X 1.5 X 100 / sample taken (mg) X (100-W) X 100

pH 별 녹차의 총 카테킨 함량을 <도 1>에 그래프로 나타내었다. <도 1>에서 보여지듯이, pH 4.0에서는 8.0%의 카테킨을 얻을 수 있었고, pH 5.5, 7.0, 및 10.0에서는 각각 8.4%, 8.7% 및 6.3%의 카테킨 함량을 얻을 수 있었다.The total catechin content of green tea by pH is shown graphically in <Figure 1>. As shown in FIG. 1, 8.0% of catechins were obtained at pH 4.0, and 8.4%, 8.7%, and 6.3% of catechins at pH 5.5, 7.0, and 10.0, respectively.

위 결과는 pH 7.0이 녹차로부터 카테킨 추출의 최적 pH임을 보여준다. The above results show that pH 7.0 is the optimal pH for catechin extraction from green tea.

<실시예 2> 녹차로부터의 카테킨 추출의 최적 온도 확립 Example 2 Establishment of Optimal Temperature for Catechin Extraction from Green Tea

제주도 제주다원(제주도 서귀포시 색달동 소재)에서 시판하는 티백 녹차 3.0g에 순수한 물 100㎖를 넣고 추출 시간을 1시간으로 하고 추출온도를 50℃, 80℃ 및 100℃로 하여 교반기에서 교반하면서 녹차추출물을 얻고 여과지(Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.)를 이용하여 추출잔사를 제거하고 감압여과 및 농축하여 녹차추출물을 얻었다. Put 100ml of pure water into 3.0g of tea bag green tea sold in Jeju Dawon (Seogwi-dong, Seogwipo-si, Jeju-do), extract time was 1 hour, and the extraction temperature was set at 50 ℃, 80 ℃ and 100 ℃, The extract was removed using filter paper (Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.), filtered under reduced pressure, and concentrated to obtain green tea extract.

이렇게 얻어진 녹차추출물의 카테킨 함량 측정은 상기 <실시예 1>과 동일한 방법으로 실시하였다.The catechin content of the green tea extract thus obtained was measured in the same manner as in <Example 1>.

그 결과를 도 2에 그래프로 나타내었는데, 추출온도 50℃에서의 카테킨 함량을 보면 약 5%로 매우 낮은 반면, 추출온도 80℃ 및 100℃에서 카테킨 함량이 각각 15.8%, 17.4%로 추출온도 50℃보다 높게 나타났다. 그런데 추출온도 100℃에서의 녹차추출액은 도 3(A는 추출온도 50℃에서의 추출액이고 B는 추출온도 80℃에서의 추출액이고 C는 추출온도 100℃에서의 추출액임)에서 보여지는 바와 같이 거품이 많이 발생하고 불투명하여 고성능액체크로마토그래피(HPLC)를 통해 분석해 본 결과, 도 4에서 보여지는 바와 같이 불순물(원으로 표시된 부분)이 많이 섞여 있음을 확인할 있었다. 한편, 추출온도 80℃의 경우는 도 3에서 확인할 있는 바와 같이 추출액이 투명하여 불순물이 거의 없음을 알 수 있다.The results are shown graphically in Figure 2, while the catechin content at the extraction temperature of 50 ℃ is very low as about 5%, while the catechin content of 15.8% and 17.4% at the extraction temperature of 80 ℃ and 100 ℃, respectively, extraction temperature 50 It was higher than ℃. By the way, the green tea extract at the extraction temperature of 100 ℃ is foamed as shown in Figure 3 (A is the extract at the extraction temperature 50 ℃, B is the extract at the extraction temperature 80 ℃ and C is the extract at the extraction temperature 100 ℃) This occurred a lot and opaque and analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC), as shown in Figure 4 it was confirmed that a lot of impurities (parts shown as circles) are mixed. On the other hand, in the case of the extraction temperature 80 ℃ as shown in Figure 3 it can be seen that the extract is transparent and almost no impurities.

결론적으로 카테킨 추출의 최적 온도를 80℃로 결정하였다. In conclusion, the optimum temperature for catechin extraction was determined to be 80 ° C.

<실시예 3> 녹차로부터의 카테킨 추출의 최적 시간 확립 Example 3 Establishment of Optimal Time for Catechin Extraction from Green Tea

앞서 확인된 최적 pH 및 최적 온도를 적용하여 카테킨 추출의 최적 시간을 확인하였다. 먼저 제주도 제주다원(제주도 서귀포시 색달동 소재)에서 시판하는 티백 녹차 3.0g에 순수한 물 100㎖를 넣고 pH 7.0에서 추출온도를 80℃로 하고 추출시간을 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300분으로 하여 교반기에서 교반하면서 녹차추출물을 얻고 여과지(Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.)를 이용하여 추출잔사를 제거하고 감압여과 및 농축하여 녹차추출물을 얻었다. The optimal time of catechin extraction was confirmed by applying the optimum pH and optimum temperature identified above. First, 100ml of pure water is added to 3.0g of tea bag green tea sold in Jeju Dawon (Seogwi-dong, Seogwipo-si, Jeju-do), and the extraction temperature is 80 ℃ at pH 7.0 and the extraction time is 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180 , 240, 300 minutes to obtain a green tea extract while stirring in a stirrer and filter paper (Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.) to remove the extraction residue, filtered under reduced pressure and concentrated to obtain a green tea extract.

이렇게 얻어진 녹차추출물의 카테킨 함량 측정은 상기 <실시예 1>과 동일한 방법으로 실시하였다.The catechin content of the green tea extract thus obtained was measured in the same manner as in <Example 1>.

결과를 도 5에 나타내었는데, 도 5를 참조하여 보면 60분까지 녹차추출물의 카테킨 함량이 빠르게 증가하지만, 60분 이후에는 천천히 증가하거나 거의 증가하지 않음을 알 수 있다(60분 이후 카테킨 함량은 약 3.0%~3.3%임). 이 결과를 토대로 추출효율과 열효율 측면을 고려하여 최적의 추출 시간을 60~90분으로 결정하였 다. 5 shows that the catechin content of green tea extract rapidly increases to 60 minutes, but after 60 minutes, it slowly increases or hardly increases (the catechin content is about 60 minutes). 3.0% to 3.3%). Based on these results, the optimal extraction time was determined to be 60 ~ 90 minutes in consideration of extraction efficiency and thermal efficiency.

<실시예 4> 녹차로부터의 카테킨 추출의 최적 분배 방법 확립 Example 4 Establishment of Optimal Distribution Method for Catechin Extraction from Green Tea

앞서 확인된 최적 pH, 최적 온도 및 최적 시간을 적용하여 녹차 추출액을 얻고 카테킨 추출의 최적 분배 방법을 확인하였다.Green tea extract was obtained by applying the optimum pH, optimum temperature, and optimal time identified above, and the optimal distribution method of catechin extraction was confirmed.

먼저 제주도 제주다원(제주도 서귀포시 색달동 소재)에서 시판하는 티백 녹차 3.0g에 순수한 물 100㎖를 넣고 pH 7.0에서 추출온도를 80℃로 하고 추출시간을 60분으로 하여 교반기에서 교반하면서 녹차추출물을 얻고 여과지(Fifter papers whatman, 90mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.)를 이용하여 추출잔사를 제거하였다.First, 100 ml of pure water is added to 3.0 g of tea bag green tea sold in Jeju Dawon (Seogwi-dong, Seogwipo-si, Jeju Island), and the extraction temperature is 80 ° C and the extraction time is 60 minutes at pH 7.0. Extraction residue was removed using (Fifter papers whatman, 90 mm Dia, 2.5 μm, Whatman international Ltd.).

상기 여과된 녹차추출액을 같은 부피의 클로로포름과 혼합하여 교반기에서 30분간 교반하여 층 분리를 실시하였다(1차 클로로포름 분배). 여기서 층 분리된 물층을 다시 같은 부피의 클로로포름과 혼합하여 층 분리를 실시하였고(2차 클로로포름 분배), 여기서 얻어진 물층에 다시 같은 부피의 에틸아세테이트를 혼합하여 층 분리를 실시하였다. 여기에서 클로로포름으로 2회 분배를 시도한 이유는 카페인 등의 불순물을 제거하기 위해서이다.The filtered green tea extract was mixed with the same volume of chloroform and stirred for 30 minutes in a stirrer to separate layers (primary chloroform distribution). Here, the separated water layer was mixed with the same volume of chloroform again to perform layer separation (secondary chloroform distribution), and the same volume of ethyl acetate was again mixed with the obtained water layer to perform layer separation. The reason why two distributions have been attempted with chloroform is to remove impurities such as caffeine.

상기에서 각 분배 후에는 각 층의 카테킨 함량을 측정하였다. 카테킨 함량의 측정은 상기 <실시예 1>과 동일한 방법으로 측정하였다.After each distribution above, the catechin content of each layer was measured. The catechin content was measured in the same manner as in <Example 1>.

그 결과 도 6에서 보여지는 바와 같이 여과된 녹차추출물의 카테킨 함량은 31%로 나타났고(확인 바람), 1차 및 2차 클로로포름 층에서는 33%로 나타났으며, 에틸아세테이트 층에서는 80%로 나타났다.As shown in FIG. 6, the catechin content of the filtered green tea extract was 31% (confirmed), 33% in the primary and secondary chloroform layers, and 80% in the ethyl acetate layer. .

이는 녹차추출액을 클로로포름으로 2회 분배시킨 후에 에틸아세테이트로 분배시키는 것이 최적의 분배 방법임을 말해준다.This implies that the green tea extract is twice distributed with chloroform and then distributed with ethyl acetate.

전술한 바와 같이 본 발명에 따르면, 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법을 제공할 수 있다. As described above, according to the present invention, a method for separating catechin from green tea can be provided.

본 발명의 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법은 높은 수율로 다양한 생리활성을 가진 카테킨을 분리해 낼 수 있으며, 본 발명에 따라 분리된 카테킨을 가지고 당업자에게 공지된 칼럼크로마토그래피를 이용하거나 이와 더불어 HPLC 등을 이용함으로써 각 카테킨 성분으로 더 분리해 낼 수 있다.The method for separating catechin from green tea of the present invention can separate catechins having various physiological activities in high yield, and using column chromatography known to those skilled in the art with catechins separated according to the present invention or HPLC, etc. By using it can be further separated into each catechin component.

Claims (6)

(a) 녹차를 80℃ 이상의 중성용매에 침지시키는 단계, (b) 추출 시간을 60분 이상 지속시키는 단계, 및 (c) (b) 단계 후에 얻어진 녹차 추출물로부터 카테킨을 분리하는 단계를 포함하여 구성되는 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법.(a) immersing green tea in a neutral solvent of 80 ° C. or higher, (b) maintaining the extraction time for at least 60 minutes, and (c) separating catechin from the green tea extract obtained after step (b). Method for isolating catechins from green tea. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중성용매는 물 또는 증류수인 것을 특징을 하는 녹차로부터의 카테킨의 분리 방법.And said neutral solvent is water or distilled water. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중성용매의 온도는 80℃이고 추출 시간은 60분인 것을 특징으로 하는 녹차로부터의 카테킨의 분리방법.Separation method of catechin from green tea, characterized in that the temperature of the neutral solvent is 80 ℃ and extraction time is 60 minutes. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 단계 (c)의 녹차 추출물로부터 카테킨을 분리하는 단계는 충진제로서 실리카겔, 세파덱스, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(toyopearl) 및 XAD로 구성된 군에 서 선택되는 충진제로 충진된 칼럼 크로마토그래피를 이용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 카테킨의 분리방법.Separating the catechin from the green tea extract of step (c) is a column chromatography filled with a filler selected from the group consisting of silica gel, Sephadex, RP-18, polyamide, toyopearl and XAD as a filler Method for separating catechins, characterized in that carried out using. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 단계 (b) 후에, 단계 (b) 후에 얻어진 녹차 추출물을 여과지로 여과시켜 추출 잔사를 제거한 후에 그 여과액을 동일 부피의 클로로포름과 혼합하여 교반·정치시켜 클로로포름층과 추출용매층으로 분배시키는 단계, 그 분배된 추출용매층을 다시 동일 부피의 클로로포름과 혼합하여 교반·정치시켜 클로로포름층과 추출용매층으로 2차 분배시키는 단계, 그리고 나서 그 추출용매층을 동일 부피의 에틸아세테이트와 혼합하여 교반·정치시켜 카테킨 성분이 포함된 에틸아세테이트층을 얻는 단계가 추가로 포함되는 것을 특징으로 하는 녹차로부터의 카테킨의 분리방법.After the step (b), the green tea extract obtained after the step (b) is filtered through a filter paper to remove the extraction residue, and then the filtrate is mixed with an equal volume of chloroform and stirred and fixed to distribute the chloroform layer and the extraction solvent layer. The mixed extraction solvent layer is again mixed with the same volume of chloroform, stirred and fixed, and then secondly partitioned into the chloroform layer and the extraction solvent layer, and then the extraction solvent layer is mixed with the same volume of ethyl acetate and stirred. Separating the catechin from green tea, characterized in that it further comprises the step of obtaining an ethyl acetate layer containing the catechin component. (a) 녹차를 80℃ 이상의 중성용매에 침지시키는 단계, (b) 추출 시간을 60분 이상 지속시키는 단계, (c) (b) 단계 후에 얻어진 녹차 추출물로부터 카테킨을 분리하는 단계를 포함하여 구성되는 카테킨 함유량이 높은 녹차 추출물의 제조방법.(a) immersing green tea in a neutral solvent of 80 ° C. or higher, (b) maintaining the extraction time for at least 60 minutes, and (c) separating catechin from the green tea extract obtained after step (b). Method for producing green tea extract with high catechin content.
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