KR20080003177A - Ap-grr peptide or peptide chain containing ap-grr peptide, and drug-delivery carrier comprising the same - Google Patents

Ap-grr peptide or peptide chain containing ap-grr peptide, and drug-delivery carrier comprising the same Download PDF

Info

Publication number
KR20080003177A
KR20080003177A KR1020060119415A KR20060119415A KR20080003177A KR 20080003177 A KR20080003177 A KR 20080003177A KR 1020060119415 A KR1020060119415 A KR 1020060119415A KR 20060119415 A KR20060119415 A KR 20060119415A KR 20080003177 A KR20080003177 A KR 20080003177A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
peptide
drug delivery
delivery carrier
grr
poly
Prior art date
Application number
KR1020060119415A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR100857389B1 (en
Inventor
박주영
류주희
김용진
임형준
김준오
Original Assignee
(주)아모레퍼시픽
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)아모레퍼시픽 filed Critical (주)아모레퍼시픽
Publication of KR20080003177A publication Critical patent/KR20080003177A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR100857389B1 publication Critical patent/KR100857389B1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6905—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion
    • A61K47/6911—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a colloid or an emulsion the form being a liposome

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

A physiologically active effective ingredient or a drug delivery carrier comprising an AP-GRR peptide is provided to exert the cell permeation property of the AP-GRR peptide effectively by exposing the AP-GRR peptide portion on the surface thereof, thereby increasing the bioavailability of the physiologically active effective ingredient. An AP-GRR peptide as a cell permeation peptide includes a sequence of Gly(Arg)n Gly Tyr Lys Cys(n is 1 to 20). A drug delivery carrier comprises a lipid structure or a polymeric particle which is covalently bonded to the peptide or a peptide chain including the peptide. The carrier further comprises a stabilizer. A pharmaceutical composition comprises the drug delivery carrier with 0.01-30 wt.% of a physiologically active effective ingredient regarding the total weight of the polymeric particle of liposome dispersion or an emulsion.

Description

ＡＰ-ＧＲＲ 펩티드 또는 ＡＰ-ＧＲＲ 펩티드를 포함하는 펩티드사슬 및 이를 포함하는 약물전달담체 {AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and drug-delivery carrier comprising the same}A peptide chain comprising an APT-JR peptide or an APT-JR peptide and a drug delivery carrier comprising the same {AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and drug-delivery carrier comprising the same}

도 1은 AP-GRR 펩티드를 표면 도입시킨 약물전달담체가 세포막과 상호작용하여 세포 내에 물질을 방출하는 현상을 개략적으로 나타낸 모식도이다.Figure 1 is a schematic diagram showing the phenomenon that the drug delivery carrier surface-introduced AP-GRR peptide interacts with the cell membrane to release the substance into the cell.

도 2는 AP-GRR 펩티드를 표면 도입시킨 약물전달담체를 투과전자현미경으로 관찰하여 얻은 이미지를 나타낸 그림이다.Figure 2 is a diagram showing the image obtained by observing the drug carrier carrier surface AP-GRR peptide introduced into the transmission electron microscope.

도 3은 AP-GRR 펩티드를 표면 도입시킨 약물전달담체에 칼세인을 봉입하여 전달하였을 경우 세포 내 이입된 칼세인의 양을 FACS로 분석한 결과를 나타낸 그림이다.Figure 3 is a diagram showing the result of analyzing the amount of calcein introduced into the cell when the case of delivery to the drug carrier carrier surface-incorporated AP-GRR peptide in the case of FACS.

도 4는 AP-GRR 펩티드를 표면 도입시킨 약물전달담체에 RITC를 봉입하여, 생체 외 실험에서 피부 투과 전달 정도를 분석하기 위하여 공초점 레이저 주사현미경으로 관찰하여 얻은 이미지를 나타낸 그림이다. Figure 4 is a diagram showing the image obtained by observing with a confocal laser scanning microscope in order to analyze the degree of skin permeation delivery in the in vitro experiments by RITC in the drug delivery carrier surface-applied AP-GRR peptide.

도 5는 AP-GRR 펩티드를 단순 혼합시키지 않고 약물전달담체의 표면에 도입시킨 것의 효과를 평가하기 위한 실험에서 세포 내 칼세인의 형광 세기 정도를 마이크로플레이트 리더(Microplate reader)를 이용하여 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.5 is a result of analyzing the fluorescence intensity of intracellular calcein using a microplate reader in an experiment for evaluating the effect of introducing AP-GRR peptide on the surface of the drug carrier without simple mixing. Is a graph.

도 6은 다른 생체막 투과 펩티드에 대한 AP-GRR 펩티드의 우수성을 확인하기 위한 실험에서 세포 내 칼세인의 형광 세기 정도를 마이크로플레이트 리더를 이용하여 분석한 결과를 나타낸 그래프이다.Figure 6 is a graph showing the results of analysis of the fluorescence intensity of the calcein in the cell using a microplate reader in the experiment for confirming the superiority of the AP-GRR peptide to other biomembrane penetrating peptides.

도 7은 AP-GRR 펩티드를 표면 도입시킨 약물전달담체의 동물피부 투과능에 대한 생체 내(in vivo) 평가를 위하여, AP-GRR 펩티드를 표면 도입시킨 약물전달담체에 담지된 RITC의 경우(a) 및 약물전달담체에 담지되지 않은 RITC의 경우(b)의 기니아 피그 피부를 공초점 레이저주사현미경으로 관찰하여 얻은 이미지를 나타낸 그림이다. Figure 7 shows the RITC supported on the drug carrier carrier surface-incorporated AP-GRR peptide for in vivo evaluation of the animal skin permeability of the drug carrier carrier surface-introduced AP-GRR peptide (a) And the image obtained by observing the guinea pig skin of (b) in the case of RITC not supported by the drug delivery carrier by confocal laser scanning microscope.

본 발명은 새로운 세포 투과 펩티드인 AP-GRR 펩티드(서열번호 1) 또는 상기 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 생리활성유효성분이 공유결합된 공유결합체 상기 펩티드 또는 상기 펩티드를 포함하는 펩티드사슬로 변형된 지질 구조체 또는 고분자 입자를 포함하는 약물전달담체에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 약물전달담체에 안정화제가 더 포함된 약물전달담체에 관한 것이다.The present invention provides a novel cell-penetrating peptide, the AP-GRR peptide (SEQ ID NO: 1) or a covalent conjugate in which a peptide chain comprising the peptide and a physiologically active ingredient are covalently bonded to the peptide or a peptide chain comprising the peptide. Or it relates to a drug delivery carrier comprising a polymer particle. In addition, the present invention relates to a drug delivery carrier further comprises a stabilizer in the drug delivery carrier.

최근 나노입자를 이용한 약물전달담체의 유용성이 대두되면서, 생체 내 치료 부위에 약물 혹은 생물학적 활성 분자를 전달하기 위하여 다양한 인지질 소재 및 고분자의 합성을 통해 리포좀, 나노캡슐, 나노입자, 나노 에멀젼 등과 같은 보다 효과적인 나노구조체를 제조하려는 연구들이 주목 받고 있다. 특히, 고분자 나노입 자가 생체세포에 점착하는 효율을 향상시키기 위하여 나노입자의 표면에 세포를 인식할 수 있는 점착분자를 접목시키고자 하는 연구가 활발히 이루어지고 있다. 예를 들어, 난용성 약물을 가용화시킨 뒤 그 생체이용율을 증진시키기 위한 것이나, 단백질이나 유전자와 같은 거대 분자량의 약물의 생체내 흡수를 용이하게 하기 위한 것이나, 암 등의 난치성 질환에 사용하는 약물을 표적 세포에 특이적으로 전달하기 위해 세포인식 또는 세포점착 분자가 도입된 고분자 나노입자 혹은 리포좀에 대한 연구가 진행되고 있다.Recently, as drug delivery carriers using nanoparticles have emerged, the synthesis of various phospholipid materials and polymers to deliver drugs or biologically active molecules to therapeutic sites in vivo has resulted in more effective methods such as liposomes, nanocapsules, nanoparticles, nanoemulsions, and the like. Research into the production of effective nanostructures is attracting attention. In particular, in order to improve the efficiency of the adhesion of the polymer nanoparticles to the living cells, studies are actively being made to combine the adhesive molecules that can recognize the cells on the surface of the nanoparticles. For example, to solubilize poorly soluble drugs and to enhance their bioavailability, to facilitate the absorption of large molecular weight drugs such as proteins and genes in vivo, or to be used for intractable diseases such as cancer. Research into polymer nanoparticles or liposomes into which cell recognition or cell adhesion molecules have been introduced for specific delivery to target cells is underway.

상기 세포인식 또는 세포점착 분자로는 당쇄, 항체, 펩티드 등을 들 수 있으며, 이를 약물전달에 응용하려는 시도로서 고분자 약물전구체의 개념이 많이 활용되고 있다. 1977년 링스도르프(Ringsdorf)는 수용성 약물과 세포인식 분자 등을 하나의 고분자 사슬에 도입시킨 기능성 고분자를 약물전달에 사용하였으며(H. Ringsdorf, J. Polymer Science(1977) 51, 155), 코페첵(Kopecek) 등은 N-(2-하이드록시프로필)메타크릴아미드(N-(2-hydroxypropyl)methacrylamide)(HPMA)의 측쇄에 단일클론 항체나 간세포 특이성을 지닌 당쇄 등을 도입시킨 뒤, 리소좀(lysosome) 안에 있는 효소에 의해 특이적으로 절단되는 펩티드 결합을 이용하여 약물을 고분자 사슬에 공유결합시킨 바 있다(R. Duncan et al., Biochem. Biophys. Acta.(1983) 755, 518; P. A. Flanagan et al. Biochem. Biophys. Acta.(1989) 39, 1125; D. Putnam and J. Kopecek, J. Adv. Polymn. Sci.(1995) 122, 55).Examples of the cell recognition or cell adhesion molecule include a sugar chain, an antibody, a peptide, and the like, and the concept of a polymer drug precursor has been widely used as an attempt to apply it to drug delivery. In 1977, Ringsdorf used functional polymers that introduced water-soluble drugs and cell recognition molecules into one polymer chain for drug delivery (H. Ringsdorf, J. Polymer Science (1977) 51, 155). Kopecek et al. Introduced a monoclonal antibody or a sugar chain having hepatocyte specificity into the side chain of N- (2-hydroxypropyl) methacrylamide (HPMA), followed by lysosome ( Drugs have been covalently linked to polymer chains using peptide bonds specifically cleaved by enzymes in lysosomes (R. Duncan et al., Biochem. Biophys. Acta. (1983) 755, 518; PA Flanagan et al. Biochem. Biophys. Acta. (1989) 39, 1125; D. Putnam and J. Kopecek, J. Adv. Polymn. Sci. (1995) 122, 55).

특히 1990년대 이후에는 세포점착 분자를 고분자 나노입자에 도입하는 연구들이 활발히 이루어지고 있다. 티. 아카이케(T. Akaike) 등은 간실질세포(肝實質細 胞)인 헤파토사이트(hepatocyte)의 세포표면에 존재하는 아시알로글리코프로테인(asialoglycoprotein) 수용체와 강한 결합력을 지니는 것으로 알려진 갈락토스(galactose) 분자를 소수성 고분자 사슬에 도입시킨 N-p-비닐벤질-O-베타-D-갈락토피라노실-(1,4)-D-글루콘아미드(N-p-Vinylbenzyl-O-beta-D-galactopyranosyl-(1,4)-D-gluconamide)를 새로이 합성한 후, 수용액 상에서 소수성 고분자와 친수성 갈락토스의 상분리 현상을 이용하여 나노입자를 제조하였다. 이들 나노입자에 대한 생체 외(in vitro) 세포실험과 생체 내(in vivo) 세포실험의 결과, 상기의 나노입자는 간 조직을 구성하는 세포 중 쿠퍼(Kupper) 세포와 같은 비실질세포에는 흡수되지 않고, 헤파토사이트에만 선택적으로 흡수된다는 사실이 관찰되었다(S. Tobe et al., Biochem. Biophys. Res. Commun.(1992) 184, 225; K. Kobayashi et al., Macromolecules(1997) 30, 2016). 한편, 엠. 하시다(M. Hashida) 등은 대식세포(macrophage)에 대한 결합력을 가지는 C-타입의 렉틴계에 속하는 만노스(mannose) 수용체를 도입하여 콜레스테롤 유도체인 콜레스텐-5-일옥시-N-(4-((1-이미노-2-베타-D-티오만노실에틸)아미노)부틸)포름아미드(cholesten-5-yloxy-N-(4-((1-imino-2-beta-D-thiomannosylethyl)amino)butyl)formamide)(Man-C4-Chol)를 합성하였고, 이를 리포좀에 삽입시켜 대식세포로의 표적지향성을 향상시켰다(P. Opanasopit et al., Biochem. Biophys. Acta.(2001) 1511, 134). In particular, since the 1990s, research into introducing cell adhesion molecules into polymer nanoparticles has been actively conducted. tea. T. Akaike et al., Galactose, known to have strong binding to the asialoglycoprotein receptors present on the cell surface of hepatocytes, hepatic parenchymal cells. Np-vinylbenzyl-O-beta-D-galactopyranosyl- (1,4) -D-gluconamide (Np-Vinylbenzyl-O-beta-D-galactopyranosyl- (1) incorporating molecules into the hydrophobic polymer chain , 4) -D-gluconamide) was newly synthesized, and nanoparticles were prepared by using a phase separation of hydrophobic polymer and hydrophilic galactose in an aqueous solution. As a result of in vitro and in vivo cell experiments on these nanoparticles, the nanoparticles are not absorbed by non-parenchymal cells such as Kupper cells among the cells constituting liver tissue. It was observed that only hepatosite was selectively absorbed (S. Tobe et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. (1992) 184, 225; K. Kobayashi et al., Macromolecules (1997) 30, 2016). Meanwhile, M. M. Hashida et al. Introduced a mannose receptor belonging to the C-type lectin family which has a binding ability to macrophage and introduced cholesterol derivative, cholesten-5-yloxy- N- (4- ((1-Imino-2-beta-D-thiomannosylethyl) amino) butyl) formamide (cholesten-5-yloxy- N- (4-((1-imino-2-beta-D-thiomannosylethyl) amino) butyl) formamide) (Man-C4-Chol) was synthesized and inserted into liposomes to improve target targeting to macrophages (P. Opanasopit et al., Biochem. Biophys. Acta. (2001) 1511, 134).

한편, 상기의 세포 내이입(endocytosis) 이외에도, 임포트 세포 신호(import cell signaling) 역할을 감당하는 펩티드에 의해 거대분자가 에너지 비의존적으로 진핵 세포의 세포 막을 투과하여 효율적으로 세포 내로 도입된다는 것이 밝혀지게 되면서, 최근 바이러스의 표면에 존재하는 막투과성 단백질 내지 펩티드를 이용하여 단백질과 같은 거대분자나 리포좀, 나노입자 등의 세포 내 투과성을 향상시키고자 하는 연구가 활발히 진행되고 있다(M. Lindgren et al., Trends in Pharmacological Sciences(2000) 21, 99). 이는 낮은 생체막 투과성과 비교적 빠른 생체 내 반감기로 인하여, 약물로서의 사용에 있어서 많은 한계가 있었던 치료용 단백질이나 유전자와 같은 거대 분자들의 약제학적 가치를 높일 수 있다는 점에서 높게 평가된다. 에스. 알. 슈바르츠(S. R. Schwarze) 등은 세포막 투과성 펩티드가 내피세포(endothelial cells)의 단일막(monolayer)으로 구성된 뇌혈관장벽(blood-brain barrier)을 통한 큰 분자량의 약물전달에도 사용될 수 있을 것임을 보고하였고(S. R. Schwarze et al., Science(1999) 285, 1569), 씨. 루젤(C. Rousselle) 등은 항암제인 독소루비신(doxorubicin)에 서열번호 2의 아미노산 서열을 가지는 D-페네트라틴(D-penetratin, 모든 아미노산이 D-형태로 구성됨)과 서열번호 3의 아미노산 서열을 가지는 SynB1이라는 막투과성 펩티드를 결합하여 뇌혈관장벽을 통과시키는 연구를 수행한 바 있다(C. Rousselle et al., Molecular Pharmacology(2000) 57, 679).On the other hand, in addition to the endocytosis, it is revealed that macromolecules are efficiently introduced into cells through the cell membrane of eukaryotic cells in an energy-independent manner by peptides that play a role of import cell signaling. Recently, studies are being actively conducted to improve intracellular permeability of macromolecules such as proteins, liposomes, and nanoparticles using membrane permeable proteins or peptides present on the surface of viruses (M. Lindgren et al. , Trends in Pharmacological Sciences (2000) 21, 99). This is highly appreciated in that the low biomembrane permeability and relatively fast in vivo half-life can increase the pharmaceutical value of macromolecules such as therapeutic proteins or genes that have had many limitations in their use as drugs. s. egg. SR Schwarze et al. Reported that membrane permeable peptides could also be used for large molecular weight drug delivery through the blood-brain barrier, which consists of a monolayer of endothelial cells (SR). Schwarze et al., Science (1999) 285, 1569). C. Rousselle et al. Described the amino acid sequence of D-penetratin (all amino acids consisting of D-form) and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 in doxorubicin, an anticancer agent. Eggplants have been studied to bind a membrane-penetrating peptide called SynB1 to cross a cerebrovascular barrier (C. Rousselle et al., Molecular Pharmacology (2000) 57, 679).

이러한 세포막 투과기능을 지닌 펩티드는 주로 단백질에서 유도된 막투과성 펩티드인데, 크게 세 가지 종류로 분류될 수 있다. 첫째는 호메오도메인(homeodomain)에서 유래된 펩티드인 페네트라틴(penetratin)으로, 서열번호 2의 아미노산 서열을 가진다. 이는 초파리(Drosophila)의 호메오단백질(homeoprotein)인 안테나페디아(Antennapedia)의 호메오도메인에서 발견되었으며(A. Joliot et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.,(1991) 88, 1864), 여기서 호메오단백질이란 일종의 전사인자로서 호메오도메인이라고 불리우는 DNA와 결합할 수 있는 60개 정도의 아미노산 구조를 지니고 있다. 둘째는 후천성 면역결핍증후군(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)을 발생시키는 균주인 인간 면역결핍 바이러스 타입-1(human immunodeficiency virus, HIV-1)의 전사관련 단백질인 Tat 단백질의 49-57 번째 사이에 존재하는 Tat49-57 펩티드로서, 서열번호 4의 아미노산 서열을 지닌다(P. A. Wender et al., PNAS(2000) 97, 24, 13003-13008). 셋째는 생체막 전위사슬(membrane translocating sequence, 이하 MTS로 명명함) 또는 신호사슬(signal sequences)에 기반한 펩티드로서, RNA에 의해 새로이 합성된 단백질을 생체 내의 적합한 소기관(organelle)들의 막으로 위치시켜주는 것을 돕는 수용체 단백질(acceptor protein)에 의해 인식되며, 핵 국소화 신호(nuclear localization signal, 이하 NLS로 명명함)와 결합된 MTS는 몇 가지 종류의 세포에서 세포막을 통과하여 세포 핵에 축적된다는 것이 밝혀졌다. 예를 들면, 핵 전사 요소 카파 B(nuclear transcription factor kappa B(NF-κB)), 원숭이바이러스 40 T 항원(Simian virus 40(SV40) T-antige) 또는 카포시육종 섬유아세포 성장 인자1(Kaposi sarcoma fibroblast growth factor 1(이하, K-FGF로 명명함))로부터 유래된 NLS 펩티드와 결합된 K-FGF, 인간 베타3 인테그린(human beta3 integrin), HIV-1 gp41 등의 신호 사슬의 소수성 영역으로부터 유래된 MTS들에 있어서 상기의 사실이 확인된 바 있다(Y. Lin et al., J. Biol. Chem.(1996) 271, 5305; X. Lin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.(1996) 93, 11819; M. C. Morris et al. Nucleic Acids Res.(1997) 25, 2730; L. Zhang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.(1998) 95, 9184; Chaloin et al., Biochiem. Biochim. Res. Commun.(1998) 243, 601; Y. Lin et al., J. Biol. Chem. (1995) 270, 14255).Peptides with cell membrane permeation function are mainly protein-induced membrane permeable peptides, which can be broadly classified into three types. The first is penetratin, a peptide derived from homeodomain, and has the amino acid sequence of SEQ ID NO. It was found in the homeodomain of Antennapedia, the homeoprotein of Drosophila (A. Joliot et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (1991) 88, 1864). Here, homeoprotein is a kind of transcription factor and has about 60 amino acid structures that can bind to DNA called homeodomain. Second is between 49-57th of the Tat protein, a transcriptional protein of human immunodeficiency virus (HIV-1), a strain that causes acquired immune deficiency syndrome (AIDS). Tat 49-57 peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 (PA Wender et al., PNAS (2000) 97, 24, 13003-13008). Third is a peptide based on the membrane translocating sequence (hereinafter referred to as MTS) or signal sequences, which locates a newly synthesized protein by RNA into a membrane of suitable organelles in vivo. It has been found that MTS, which is recognized by a helper protein and combined with a nuclear localization signal (hereinafter referred to as NLS), accumulates in the cell nucleus across cell membranes in several types of cells. For example, nuclear transcription factor kappa B (NF-κB), Simian virus 40 (SV40) T-antige, or Kaposi sarcoma fibroblast growth factor 1 (Kaposi sarcoma fibroblast). derived from hydrophobic regions of the signal chain, such as K-FGF, human beta3 integrin, HIV-1 gp41, bound to NLS peptides derived from growth factor 1 (hereinafter referred to as K-FGF). This has been confirmed in MTS (Y. Lin et al., J. Biol. Chem. (1996) 271, 5305; X. Lin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA ( 1996) 93, 11819; MC Morris et al. Nucleic Acids Res. (1997) 25, 2730; L. Zhang et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1998) 95, 9184; Chaloin et al., Biochiem Biochim Res Commun. (1998) 243, 601; Y. Lin et al., J. Biol. Chem. (1995) 270, 14255).

이러한 펩티드들은 전달하고자 하는 약물, 올리고 펩티드, 유전자 혹은 단백질 등과 결합하여 세포에 근접하였을 경우에 임포트 신호(import signal)로 작용하고, 전달하고자 하는 생리활성 효능 물질을 세포 내로 유입되도록 유도한다. 엠. 로하스(M. Rojas) 등은 Grb2SH2 도메인을 포함하고 있는 융합 단백질의 표피성장인자 자극 신호(EGF-stimulated signaling) 경로에 대한 세포 내 효과를 연구하기 위해, 수송 펩티드인 서열번호 5의 아미노산 서열을 가지는 신호사슬 펩티드가 접목된 글루타티온-S-트란스페라제-Grb2SH2(Glutathione-S-transferase-Grb2SH2) 융합 단백질(41 kDa)에 대한 연구를 수행한 바 있고(M. Rojas et al., Nature Biotech(1998) 16, 370), 에스. 파웰(S. Fawell) 등은 내재화(internalization) 효율을 조절하는 것으로서 단백질 합성을 저해하는 연구에 의한 세포 독성을 검출하기 위해 Tat 단백질의 32-72 번째 사슬을 RNase A에 접목시키는 연구를 수행한 바 있다(S. Fawell et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.(1994) 91, 664). 또한엠. 로하스(M. Rojas) 등은 SAA 세포에서 펩티드에 붙어있는 Grb2SH2의 세포 내 전달에 의한 Grb2 단백질의 인산화 효과를 연구하기 위해 서열번호 5의 아미노산 서열을 가지는 신호사슬 펩티드를 SHC Tyr 317 영역(12 residues)에 접목시키는 연구를 수행한 바 있고(M. Rojas et al., Biochiem. Biochim. Res. Commun.(1997) 234, 675), 제이. 욀케(J. Oehlke) 등은 양친수성 모델 펩티드의 세포로의 이동력을 시험하기 위해 양친수성 모델 펩티드인 서열번호 5의 아미노산 서열을 가지는 펩티드를 SV40 large T 항원에 접목시키는 연구를 수행한 바 있으며(J. Oehlke et al., Biochim. Biophys. Acta(1998) 1414, 127), 엘. 테오도르(L. Theodore) 등은 살아있는 신경세포의 PKC 활성을 억제하기 위해 페네트라틴을PKC 가성-기질(pseudo-substrate)(14 residues)에 접목시키는 연구를 수행한 바 있다(T. Theodore et al., J. Neurosci.(1995) 15, 7158). 에스. 칼벳(S. Calvet) 등은 살아있는 신경세포의 섬유아세포 성장인자(fibroblast growth factor, 이하 FGF라 명명함) 수용체 신호계를 억제하기 위해 페네트라틴을FGF 수용체 포스포펩티드(FGF receptor phosphopetide)(9 residues)에 접목시키는 연구를 수행한 바 있고(S. Calvet et al., J. Neurosci.(1998) 18, 9751), 엠. 씨. 모리스(M. C. Morris) 등은 벡터 펩티드에 의한 세포 내 전달을 검출하기 위해 신호사슬의 일종인 MPG를 HIV 자연 프라이머 결합부위(natural primer binding site)(36-mer)에 접목시키는 연구를 수행한 바 있다(M. C. Morris et al., Nucleic Acid Res.(1997) 25, 2730). 비. 알린퀀트(B. Allinquant) 등은 신경돌기 생장에 대한 효과를 연구하기 위한 아밀로이드 전구 단백질을 감소 조정하기 위해 페네트라틴을 APP 안티센스(antisense)(25-mer)에 접목시키는 연구를 수행한 바 있고(B. Allinquant et al., J. Cell Biol.(1995) 128, 919), 에스. 도카(S. Dokka) 등은 합성된 임포트 신호에 결합을 시킴으로써 올리고 핵산염의 전달 가능성을 설명하기 위해 신호사슬 펩티드인 서열번호 5의 아미노산 서열을 가지는 펩티드를 10개의 올리고 핵산염에 접목시키는 연구를 수행한 바 있으며(S. Dokka et al., Pharm. Res.(1997) 14, 1759), 엠. 푸가(M. Pooga) 등은 갈라닌(galanin) 수용체 수준을 조정하고 통증 전달(pain transmission)을 변경하기 위해 페네트라틴과 트랜스포탄(transportan)을 갈라닌 수용체 안티센스(galanin receptor antisense, 21-mer)에 접목시키는 연구를 수행한 바 있다(M. Pooga et al., Nature Biotech.(1998) 16, 857).These peptides bind to drugs, oligopeptides, genes or proteins to be delivered and act as an import signal when they are in close proximity to the cell, and induce a bioactive substance to be delivered into the cell. M. M. Rojas et al. Have the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, a transport peptide, to study the intracellular effects on the EGF-stimulated signaling pathway of fusion proteins containing the Grb2SH2 domain. Glutathione- S -transferase-Grb2SH2 (Glutathione- S- transferase-Grb2SH2) fusion protein (41 kDa) grafted with signal chain peptide has been studied (M. Rojas et al., Nature Biotech (1998) 16, 370). S. Fawell et al. Investigated the incorporation of the Tat protein's 32-72th chain into RNase A to detect cytotoxicity caused by studies that inhibit protein synthesis as modulating internalization efficiency. (S. Fawell et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1994) 91, 664). Also M. M. Rojas et al. Have described a signal chain peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 in the SHC Tyr 317 region (12 residues) to study the phosphorylation effect of Grb2 protein by intracellular delivery of Grb2SH2 attached to the peptide in SAA cells. (M. Rojas et al., Biochiem. Biochim. Res. Commun. (1997) 234, 675). J. Oehlke et al. Conducted a study in which a peptide having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, an amphiphilic model peptide, was incorporated into an SV40 large T antigen to test the mobility of the amphiphilic model peptide to cells. (J. Oehlke et al., Biochim. Biophys. Acta (1998) 1414, 127), L. L. Theodore et al. Have conducted studies of grafting penetratin to PKC pseudo-substrate (14 residues) to inhibit PKC activity in living neurons (T. Theodore et al. , J. Neurosci. (1995) 15, 7158). s. S. Calvet et al. Have identified penetratin as an FGF receptor phosphopetide (9 residues) to inhibit fibroblast growth factor (FGF) receptor signaling in living neurons. (S. Calvet et al., J. Neurosci. (1998) 18, 9751), M. et al. Seed. MC Morris et al. Have studied the use of a signal chain, MPG, to HIV natural primer binding site (36-mer) to detect intracellular delivery by vector peptides. (MC Morris et al., Nucleic Acid Res. (1997) 25, 2730). ratio. B. Allinquant et al. Have studied penetratin in conjunction with APP antisense (25-mer) to reduce and modulate amyloid precursor proteins to study the effects on neurite outgrowth. (B. Allinquant et al., J. Cell Biol. (1995) 128, 919), S. a. S. Dokka et al. Conducted a study in which a peptide having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 5, a signal chain peptide, was incorporated into 10 oligonucleotide salts to explain the possibility of transferring oligonucleotide salts by binding to a synthesized import signal. S. Dokka et al., Pharm. Res. (1997) 14, 1759). M. Pooga et al. Have described galanin receptor antisense (21-mer) as a penetratin and transportan to modulate galanin receptor levels and alter pain transmission. (M. Pooga et al., Nature Biotech. (1998) 16, 857).

현재까지 연구되어 오고 있는 막투과성 펩티드 중에서 상대적으로 전달 효율이 가장 뛰어나며 연구가 가장 활발히 이루어진 펩티드는 Tat 단백질의 49-57 번째 아미노산 사슬로(서열번호 4) 이 아미노산 사슬에 여러 가지 종류의 전달하고자 하는 물질을 결합 시켜 세포 내 전달을 시도하고자 한 연구가 진행되어 왔는데, 그 세포 내로의 전달대상이 된 분자들로는 인간 파필로마바이러스-16 억제제(Inhibitor of human papillomavirus type 16(HPV-16)), Cdk 억제제 p27Kip1, p16INK4a, 카파제-3(capase-3) 단백질, 주조직적합복합체 class I 경로(MHC class I pathway)로의 오브알부민(ovalbumin), 및 베타-갈락토시다제(beta-galactosidase) 등이 있다. 이외에도 아르기닌이 풍부한 Tat 단백질의 48-60 번째 아미노산 사슬을 이용하여 세포 내로의 유입이 필요한 분자의 전달을 모색하는 연구들이 활발하게 진행되고 있는 바, DNA, 거대 분자, 단백질, 약물, 항원, 항체 등을 세포 내로 유입시키고자 하는 연구가 있었다.Among the membrane-penetrating peptides that have been studied so far, the most efficient peptides have been delivered and the most active peptides are the 49-57 amino acid chain of Tat protein (SEQ ID NO: 4). There have been studies to try intracellular delivery by incorporating substances. Inhibitors of human papillomavirus type 16 (HPV-16), Cdk inhibitors p27 Kip1 , p16 INK4a , capase-3 protein, ovalbumin to MHC class I pathway, and beta-galactosidase There is this. In addition, researches on the delivery of molecules that require influx into cells using the 48-60th amino acid chain of arginine-rich Tat protein have been actively conducted, such as DNA, macromolecules, proteins, drugs, antigens, antibodies, etc. There has been a study to inject into the cells.

한편, 더욱 높은 전달 효율을 위해 안정화된 약물전달담체에 대한 연구가 있었다.Meanwhile, there has been a study on stabilized drug delivery carriers for higher delivery efficiency.

본 발명은 상기의 문제점을 해결하기 위하여 세포 투과 기능을 가지는 새로운 펩티드 또는 그 펩티드를 포함하는 펩티드 사슬을 약물이나 약물전달담체에 결합시켜, 이를 이용하여 세포 내로의 침투가 용이한 약물 혹은 약물전달담체를 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한, 본 발명은 약물전달담체에 pH-민감 안정화제를 삽입시켜 더욱효율적으로 전달되고 효과적으로 약물을 방출하는 약물전달담체를 제공하는 것을또 다른 목적으로 한다. In order to solve the above problems, a new peptide having a cell permeation function or a peptide chain comprising the peptide is bound to a drug or a drug carrier, and the drug or drug carrier is easy to penetrate into a cell by using the same. The purpose is to provide. It is another object of the present invention to provide a drug delivery carrier which is more efficiently delivered and effectively releases a drug by inserting a pH-sensitive stabilizer into the drug delivery carrier.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세포 투과 펩티드로서, Gly(Arg)n Gly Tyr Lys Cys의 서열(n = 1 내지 20)을 가지는 것을 특징으로 하는 AP-GRR 펩티드를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides an AP-GRR peptide, which has a sequence (n = 1 to 20) of Gly (Arg) n Gly Tyr Lys Cys as a cell penetrating peptide.

상기 본 발명의 AP-GRR 펩티드에 있어서, 상기 n은 3 내지 9임을 특징으로 한다. In the AP-GRR peptide of the present invention, the n is characterized in that 3 to 9.

상기 본 발명의 AP-GRR 펩티드에 있어서, 상기 서열은 서열번호 1의 서열인 것을 특징으로 한다.In the AP-GRR peptide of the present invention, the sequence is characterized in that the sequence of SEQ ID NO: 1.

본 발명은 약물전달을 위한 공유결합체로서, 상기 AP-GRR 펩티드 또는AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 생리활성유효성분이 공유결합된 것을 특징으로 하는 공유결합체를 제공한다.The present invention provides a covalent conjugate for drug delivery, wherein the peptide chain comprising the AP-GRR peptide or the AP-GRR peptide and a physiologically active ingredient are covalently bonded.

본 발명은 약물전달담체로서, AP-GRR 펩티드 또는AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 공유결합된 지질 구조체 또는 고분자 입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 약물전달담체를 제공한다.The present invention provides a drug delivery carrier comprising a lipid construct or a polymer particle covalently bonded to a peptide chain including an AP-GRR peptide or an AP-GRR peptide.

상기 본 발명의 약물전달담체는 안정화제를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.The drug delivery carrier of the present invention is characterized in that it further comprises a stabilizer.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 안정화제는 pH-민감성 안정화제인 것을특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the stabilizer is characterized in that the pH-sensitive stabilizer.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 안정화제는 스티그마스테릴 헤미숙시네이트, 콜레스테롤 또는 콜레스테릴 헤미숙시네이트인 것을 특징으로 한다. In the drug delivery carrier of the present invention, the stabilizing agent is characterized in that stigmasteryl hemisuccinate, cholesterol or cholesteryl hemisuccinate.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 지질 구조체는 리포좀 또는 에멀젼인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the lipid construct is characterized in that liposomes or emulsions.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 리포좀 또는 에멀젼의 지질성분은 탄소수 12 내지 24의 지방산 사슬을 갖는 인지질류 또는 질소지질인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the lipid component of the liposome or emulsion is characterized in that the phospholipids or nitrogen lipids having a fatty acid chain of 12 to 24 carbon atoms.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 인지질류는 난황레시틴(포스파티딜콜린), 대두 레시틴, 리조레시틴(lysolecithin), 스핑고마이엘린(sphingomyelin), 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 디포스파티딜글리세롤, 카르디오리핀(cardiolipin), 플라즈마로겐의 천연인지질 이들 인지질로부터 통상의 방법에 의해 수득할 수 있는 수소첨가 생성물 디세틸포스페이트, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜세린, 엘레오스테아로일포스파티딜콜린, 엘레오스테아로일포스파티딜에탄올아민, 엘레오스테아로일포스파티딜세린의 합성 지질 및 이들의 가수분해에 의해 수득할 수 있는 지방산 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the phospholipids are egg yolk lecithin (phosphatidylcholine), soybean lecithin, lysolecithin, sphingomyelin, phosphatidine acid, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidyl inositol, Phosphatidylethanolamine, diphosphatidylglycerol, cardiolipin, natural phospholipids of plasmalogen From these phospholipids hydrogenated products dicetylphosphate, distearoylphosphatidylcholine, dioleoylphosphatidyl obtainable by conventional methods Ethanolamine, dipalmitoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, eleostaroylphosphatidylcholine, eleostaroylphosphatidylethanolamine, synthetic lipids of eleostaroylphosphatidylserine and their hydrolysis Obtainable by Characterized in that at least one member selected from the group consisting of the mixture dissipated.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 인지질류의 조합은 포스파티딜콜린과 포스파티딜에탄올아민의 조합, 포스파티딜콜린과 포스파티딜글리세롤의 조합, 포스파티딜콜린과 포스파티딜이노시톨의 조합, 포스파티딜콜린과 포스파티딘산의 조합, 포스파티딜콜린과 디올레오일포스파티딜에탄올아민의 조합, 또는 포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딜세린의 조합인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the combination of the phospholipids is a combination of phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine, a combination of phosphatidylcholine and phosphatidylglycerol, a combination of phosphatidylcholine and phosphatidyl inositol, a combination of phosphatidylcholine and phosphatidic acid, and a phosphatidylcholine and dioleo Or a combination of phosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylethanolamine and phosphatidylserine.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 조합비는 최소성분에 대한 최대 성분의 혼합비율이 1:5 이하인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the combination ratio is characterized in that the mixing ratio of the maximum component to the minimum component is 1: 5 or less.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딜세린의 조합의 조합비는 1~4 : 1~2 : 1~2 인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the combination ratio of the phosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylethanolamine and phosphatidylserine is characterized in that 1 to 4: 1 to 2: 1 to 2.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 지질성분은 전체 리포좀 분산액 또는 에멀젼 총 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량%인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the lipid component is characterized in that 0.001 to 20% by weight relative to the total weight of the liposome dispersion or emulsion.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 고분자 입자는 생체에 적합하고 염증이나 면역반응을 유발하지 않으며 생체 내에서 분해되고 그 분해산물 역시 생체 내에서 무해한 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the polymer particles are suitable for a living body, do not cause inflammation or an immune response, and are degraded in a living body, and their degradation products are also harmless in a living body.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 고분자 입자는 생분해성 지방 족 폴리에스테르계 고분자를 포함하는 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the polymer particles are characterized in that it comprises a biodegradable aliphatic polyester-based polymer.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 고분자 입자는 락트산과 글리콜산을 기초로 하는 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자를 포함하는 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the polymer particles are characterized in that it comprises a biodegradable aliphatic polyester-based polymer based on lactic acid and glycolic acid.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자는 하기 화학식 1의 폴리(D,L-락트산)(poly(D,L-lactic acid)), 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산) 하기 화학식 2의 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)(poly(D,L-lactic acid-co-glycolic acid)), 폴리(D-락트산-co-글리콜산), 폴리(L-락트산-co-글리콜산) 폴리(카프로락톤)(poly(caprolactone)), 폴리(발레로락톤)(poly(valerolactone)), 폴리(히드록시 부티레이트)(poly(hydroxy butyrate)), 폴리(히드록시 발러레이트)(poly(hydroxy valerate)), 폴리(1,4-디옥산-2-온)(poly(1,4-dioxane-2-one)), 폴리(오르토 에스테르)(poly(ortho ester)) 및 이들의 단량체로부터 제조된 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the biodegradable aliphatic polyester-based polymer is a poly (D, L-lactic acid) of the general formula (1), poly (L-lactic acid), Poly (D-Lactic Acid) Poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) of Formula 2, poly (D-lactic acid-co-glycolic acid), poly (D-lactic acid-co-glycolic acid) ), Poly (L-lactic acid-co-glycolic acid) poly (caprolactone), poly (valerolactone), poly (hydroxy butyrate) ), Poly (hydroxy valerate), poly (1,4-dioxane-2-one), poly (ortho ester) (poly (ortho ester)) and copolymers prepared from monomers thereof, characterized in that at least one member selected from the group consisting of.

Figure 112006088752819-PAT00001
Figure 112006088752819-PAT00001

(상기 식에서 n은 2이상의 정수이다.)(Where n is an integer of 2 or more)

Figure 112006088752819-PAT00002
Figure 112006088752819-PAT00002

(상기 식에서 m과 n은 서로 같거나 다른 2이상의 정수이다.)(Where m and n are integers of two or more equal to or different from each other)

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자의 분자량은 평균 500 내지 100,000인 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the biodegradable aliphatic polyester-based polymer has an average molecular weight of 500 to 100,000.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 AP-GRR 펩티드(A)와 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자(B)는 A-B형 또는 A-B-A형으로 공유결합되어 구성되는 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the AP-GRR peptide (A) and the biodegradable aliphatic polyester-based polymer (B) are characterized in that they are covalently bonded in A-B type or A-B-A type.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 공유결합은 AP-GRR 펩티드 또는 AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 상기 리포좀, 에멀젼 또는 고분자 입자 사이에 염기, 링커 또는 멀티리간드 화합물을 첨가하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the covalent bond is formed by adding a base, a linker or a multiligand compound between a peptide chain including an AP-GRR peptide or an AP-GRR peptide and the liposome, emulsion or polymer particles. It features.

상기 본 발명의 약물전달담체에 있어서, 상기 약물전달담체의 평균입자직경은 1,000nm 이하인 것을특징으로 한다.In the drug delivery carrier of the present invention, the drug delivery carrier has an average particle diameter of 1,000 nm or less.

본 발명은 상기 약물전달담체를 리포좀 분산액 또는에멀젼, 고분자 입자 총 중량에 대하여 0.01~30중량%의 생리활성유효성분과 함께 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition comprising the drug delivery carrier with a bioactive active ingredient of 0.01 to 30% by weight relative to the total weight of liposome dispersion or emulsion, polymer particles.

상기 본 발명의 약제학적 조성물에 있어서, 상기 조성물은 피부외용제, 경구용 제제 및 주사제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가지는 것을 특징으로 한다.In the pharmaceutical composition of the present invention, the composition is characterized in that it has a formulation selected from the group consisting of external skin preparations, oral preparations and injections.

이하 본 발명에 대하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 새롭게 고안된 뛰어난 생체막 투과성을 가진 GRR 펩티드로서 아르기닌이 풍부하고 양 말단에 각각 Glycine(Gly) 아미노산과Glycine(Gly)- Tyrosine(Tyr)- Lysine(Lys)- Cystein(Cys) 아미노산 사슬을 포함하는 펩티드를, 약물, 유전자, 올리고 펩티드, 단백질 등의 생리활성 유효성분 등에 결합된 형태나 리포좀, 고분자 나노입자, 인지질-고분자 복합체, 에멀젼 등 약물을 담지 할 수 있는 전달담체 표면에 개질화하여, 전달하고자 하는 물질을 경피, 경구, 주사제 등의 다양한 경로로 전달하였을 경우의 생체이용률(bioavailability)을 높이기 위한 것이다. AP-GRR 펩티드에 있어서 Gly(Arg)n Gly Tyr Lys Cys의 서열에서 Arg의 개수는 1 내지 20개, 바람직하게는, 3 내지 9개를 포함한다. 이는 높은 전달 효율을 가지면서 동시에 약물전달담체와 결합하여 제조하기에 용이하기 때문이다. The present invention is a newly designed GRR peptide with excellent biomembrane permeability, which is rich in arginine and includes Glycine (Gly) amino acid and Glycine (Gly) -Tyrosine (Tyr)-Lysine (Lys) -Cystein (Cys) amino acid chain at both ends. The peptide to be modified is modified on the surface of a carrier which can carry drugs such as liposomes, polymer nanoparticles, phospholipid-polymer complexes, emulsions, or the like bound to physiologically active ingredients such as drugs, genes, oligopeptides, proteins, etc. In order to increase bioavailability when a substance to be delivered is delivered by various routes such as transdermal, oral, or injection. The number of Arg in the sequence of Gly (Arg) n Gly Tyr Lys Cys for the AP-GRR peptide includes 1-20, preferably 3-9. This is because it has a high delivery efficiency and at the same time is easy to manufacture in combination with the drug delivery carrier.

상기 AP-GRR 펩티드 또는 AP-GRR을 포함하는 펩티드사슬은 특별히 제한되지는 않지만, 예를 들어, 아미드 4-메틸벤지드릴아민 하이드로클로라이드(MBHA) 수지와 ABI 433 합성기기를 이용하여 Fmoc(N-(9-플루레닐)메톡시카르보닐)/t-부틸 방법을 따라 고체상 펩티드 합성법(solid phase peptide synthesis; SPPS)으로 합성할 수도 있다(M. Bodansky, A. Bodansky, The Practice of Peptide Synthesis; Springer:Berlin, Heidelberg, 1984, J.M. Stewart, J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed; Pierce Chemical Co: Rockford. IL, 1984).The peptide chain including the AP-GRR peptide or AP-GRR is not particularly limited, for example, Fmoc (N-) using an amide 4-methylbenzidylamine hydrochloride (MBHA) resin and an ABI 433 synthesizer. It can also be synthesized by solid phase peptide synthesis (SPPS) according to the (9-flurenyl) methoxycarbonyl) / t-butyl method (M. Bodansky, A. Bodansky, The Practice of Peptide Synthesis; Springer). :. Berlin, Heidelberg, 1984, JM Stewart, JD Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2 nd ed; Pierce Chemical Co: Rockford IL, 1984).

본 발명의 약물전달담체는 리포좀 또는 에멀젼, 고분자 입자 등의 구조체를 이용할 수 있다. 리포좀 또는 에멀젼을 제조함에 있어서, 지질 구조체의 지질성분으로는 탄소수가 12~24개의 지방산 사슬을 갖는인지질류나 질소지질이 사용될 수 있다. 이는 피부외용제, 경구용 제제, 주사제 등의 약제학적 조성물에 사용할 수 있는 지질 기반 약물전달담체의 구성성분으로 활용하기에 용이하기 때문이다. The drug delivery carrier of the present invention may be used a structure such as liposomes or emulsions, polymer particles. In preparing liposomes or emulsions, phospholipids or nitrogenous lipids having 12 to 24 carbon chains may be used as lipid components of the lipid construct. This is because it is easy to use as a component of a lipid-based drug delivery carrier that can be used in pharmaceutical compositions such as external skin preparations, oral preparations, injections and the like.

일반적으로는 인지질이 더 바람직한데, 예를 들면, 난황 레시틴(포스파티딜콜린), 대두 레시틴, 리조레시틴(lysolecithin), 스핑고마이엘린(sphingomyelin), 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 디포스파티딜글리세롤, 카르디오리핀(cardiolipin), 플라즈마로겐 등의 천연 인지질 이들 인지질로부터 통상의 방법에 의해 수득할 수 있는 수소첨가 생성물 및 디세틸포스페이트, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜세린, 엘레오스테아로일포스파티딜콜린, 엘레오스테아로일포스파티딜에탄올아민, 엘레오스테아로일포스파티딜세린 등의 합성 지질 및 이들의 가수분해에 의해 수득할 수 있는 지방산 혼합물이 바람직하다. Phospholipids are generally preferred, for example, egg yolk lecithin (phosphatidylcholine), soybean lecithin, lysolecithin, sphingomyelin, phosphatidic acid, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, phosphatidyldil Natural phospholipids such as ethanolamine, diphosphatidylglycerol, cardiolipin, and plasmalogen Hydrogenated products and disetylphosphate, distearoylphosphatidylcholine, and dioleoyl obtainable by conventional methods from these phospholipids Synthetic lipids such as phosphatidylethanolamine, dipalmitoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, dipalmitoylphosphatidylserine, eleostearoylphosphatidylcholine, eleostaroylphosphatidylethanolamine, eleostaroylphosphatidylserine Obtainable by decomposition This fatty acid mixture is preferred.

지질은 단독으로 사용할 수도있고, 2종 이상을 병용할 수도 있다. 2종의 인지질류를 혼합하여 사용하는 경우, 바람직하게는 예를 들어, 하기의 조합들 포스파티딜콜린:포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜콜린:포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린:포스파티딜이노시톨, 포스파티딜콜린:포스파티딘산, 포스파티딜콜린:디올레오일포스파티딜에탄올아민 등을 사용할 수 있다. 혼합 비율은 혼합되는 성분 구성에 따라 차이가 있는데, 최소 성분에 대한 최대 성분의 혼합비율은 1:5 이하인 것이 바람직하다. 이 경우 2종 이상의 인지질류를 혼합하여 지질기반 약물전달담체 제조시 용이하기 때문이다. 예를 들어, 포스파티딜콜린:디올레오일포스파티딜에탄올아민의 경우 각각 1:1 혹은 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2 등의 몰비율로 다양하게 하여 제조할 수 있다. 또한, 3종의 인지질류를 혼합하여 사용하는 경우도, 예를 들어, 포스파티딜콜린:디올레오일포스파티딜에탄올아민:포스파티딜세린을 각각 1:1:1 혹은 2:1:1, 3:1:2, 3:2:1. 3:2:2. 4:1:1, 4:2:1 등의 몰비율로 다양한 혼합비로 제조할 수 있다.Lipids may be used alone or in combination of two or more. When two kinds of phospholipids are used in combination, preferably, for example, the following combinations phosphatidylcholine: phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine: phosphatidylglycerol, phosphatidylcholine: phosphatidyl inositol, phosphatidylcholine: phosphatidic acid, phosphatidylcholine: dioleoyl Phosphatidylethanolamine and the like can be used. The mixing ratio is different depending on the component composition to be mixed, and the mixing ratio of the maximum component to the minimum component is preferably 1: 5 or less. In this case, it is easy to prepare a lipid-based drug delivery carrier by mixing two or more phospholipids. For example, for phosphatidylcholine: dioleoylphosphatidylethanolamine 1: 1 or 2: 1, 3: 1, 4: 1, 5: 1, 1: 5, 1: 4, 1: 3, 1: 2 It can manufacture by various in molar ratios, such as these. In the case where three kinds of phospholipids are mixed and used, for example, phosphatidylcholine: dioleoylphosphatidylethanolamine: phosphatidylserine is 1: 1: 1 or 2: 1: 1, 3: 1: 2, 3: 2: 1. 3: 2: 2. It can be produced in various mixing ratios in molar ratios such as 4: 1: 1, 4: 2: 1.

상기한 약물전달담체의 지질성분은 전체 리포좀 분산액 또는 에멀젼 총 중량에 대하여 0.001~20 중량%, 바람직하게는 0.2~10 중량%의 양으로 사용한다. 이는 상기 함량의 경우 약물전달담체 제조에 용이하기 때문이다. The lipid component of the drug delivery carrier is used in an amount of 0.001 to 20% by weight, preferably 0.2 to 10% by weight, based on the total weight of the liposome dispersion or emulsion. This is because the content of the drug carrier is easy to manufacture.

또한, 고분자 입자를 제조함에 있어서, 이는 생체에 적합하고, 염증이나 면역반응 등을 유발하지 않으면서 생체 내에서 분해될 뿐더러 그 분해산물 역시 생체 내에서 무해한 고분자이어야 한다. 이러한 조건을 만족하는 고분자로서 락트산과 글리콜산을 기본단위로 하는 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자가 미국식품의약국(FDA)에 의해 승인을 받은 고분자로서 가장 널리 이용되고 있다. 그 대표적인 예로서 상기 화학식 1의 폴리(D,L-락트산)(poly(D,L-lactic acid)), 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산)과 상기 화학식 2의 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)(poly(D,L-lactic acid-co-glycolic acid)), 폴리(D-락트산-co-글리콜산), 폴리(L-락트산-co-글리콜산), 및 폴리(카프로락톤)(poly(caprolactone)), 폴리(발레로락 톤)(poly(valerolactone)), 폴리(히드록시 부티레이트)(poly(hydroxy butyrate)), 폴리(히드록시 발러레이트)(poly(hydroxy valerate)), 폴리(1,4-디옥산-2-온)(poly(1,4-dioxane-2-one)), 폴리(오르토 에스테르)(poly(ortho ester)), 및 이들의 단량체로부터 제조된 공중합체 등을 들 수 있다. In addition, in the preparation of the polymer particles, it is suitable for the living body, it is not only to be degraded in vivo without causing inflammation or immune response, and also the degradation product should be a harmless polymer in vivo. Biodegradable aliphatic polyester-based polymers based on lactic acid and glycolic acid as the polymers satisfying these conditions are the most widely used polymers approved by the US Food and Drug Administration (FDA). Representative examples thereof include poly (D, L-lactic acid), poly (L-lactic acid), poly (D-lactic acid) of Formula 1 and poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) (poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid)), poly (D-lactic acid-co-glycolic acid), poly (L-lactic acid-co-glycolic acid), And poly (caprolactone), poly (valerolactone), poly (hydroxy butyrate), poly (hydroxy valerate) (hydroxy valerate), poly (1,4-dioxane-2-one), poly (ortho ester), and their The copolymer manufactured from the monomer, etc. are mentioned.

상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자의 분자량은 특별히 제한되지 않으나, 500 미만이거나 100,000 초과시 약물전달담체로서의 구조 불안정성이 증가될 것으로 우려되므로, 중량 평균 분자량이 500 내지 100,000, 바람직하게는 5,000 내지 50,000인 것이 바람직하다.Although the molecular weight of the biodegradable aliphatic polyester-based polymer is not particularly limited, it is feared that the structural instability as the drug delivery carrier will increase when less than 500 or more than 100,000, so that the weight average molecular weight is 500 to 100,000, preferably 5,000 to 50,000. desirable.

상기 화학식 2의 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)의 경우에는 락트산과 글리콜산 단량체의 비율을 조절하거나, 고분자 합성과정을 변경시킴으로써 다양한 분해수명을 갖는 생분해성 고분자를 얻을수 있다. 이와 같은 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자는 약물전달담체 또는 수술용 봉합사로 오랫동안 사용되어 왔고, 그 생체적합성이 이미 증명된 바 있다. In the case of poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) of Chemical Formula 2, biodegradable polymers having various decomposition lifetimes can be obtained by adjusting the ratio of lactic acid and glycolic acid monomers or by changing the polymer synthesis process. Such biodegradable aliphatic polyester-based polymers have been used for a long time as drug delivery carriers or surgical sutures, and their biocompatibility has already been demonstrated.

상기 AP-GRR 펩티드와(A)과 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자(B)는 특별히 제한되지는 않지만, A-B형 또는 A-B-A 형으로 구성될 수 있다. 이는 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자의 양말단에 존재하는 카르복실기 및 수산화기를 공유결합에 용이하도록 다른 기능성 그룹(functional group)으로 치환시키고, 고분자의 치환된 말단을 이와 반응이 용이한 그룹을 가진 AP-GRR 펩티드의 말단기 또는 AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬의 말단기와 반응시켜 얻을 수 있다. 예를 들어, 상기 AP-GRR 펩티드 또는 AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬 과 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)과의 공유결합체는 말레이미드로 치환된 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)과 말단기를 티올로 치환한 AP-GRR 펩티드와의 공유결합을 통하여 합성될 수 있다.The AP-GRR peptide (A) and the biodegradable aliphatic polyester-based polymer (B) are not particularly limited, but may be composed of A-B type or A-B-A type. This is to replace the carboxyl group and the hydroxyl group in the sock end of the biodegradable aliphatic polyester-based polymer with another functional group to facilitate covalent bonding, and the AP having a group that easily reacts with the substituted end of the polymer. It can be obtained by reacting the terminal group of the -GRR peptide or the terminal group of the peptide chain including the AP-GRR peptide. For example, the covalent conjugate of poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) with a peptide chain comprising the AP-GRR peptide or AP-GRR peptide is poly (D, L-lactic acid substituted with maleimide. -co-glycolic acid) and an AP-GRR peptide in which a terminal group is substituted with a thiol.

본 발명에 있어서, 상기 공유결합은 특별히 제한되는 것은 아니지만, AP-GRR 펩티드 또는 AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 상기 리포좀, 에멀젼, 고분자 사이에 별도의 염기, 링커 또는 멀티리간드 화합물을 첨가하여 이루어질 수 있다.In the present invention, the covalent bond is not particularly limited, but a separate base, linker or multiligand compound is added between the peptide chain including the AP-GRR peptide or the AP-GRR peptide and the liposome, emulsion, and polymer. Can be done.

본 발명에 있어서, 안정화제는 pH-민감한 리포좀을 고안하기 위하여 pH-민감성 안정화제를 삽입하는 것이 바람직하다. pH-민감한 리포좀은 리소좀이 접근하여 분해가 일어나기 전에 세포질 또는 핵 내 목표 위치에 약물이 방출되도록 하기 위해 고안된 것이다. pH-민감한 리포좀은, 삽입된 pH-민감성 안정화제가 엔도좀 내부와 같은 산성 환경에서 프로톤화되어 더 이상 리포좀 안정성을 유지할 수 없게 되면 초기 엔도좀 단계에서 약물을 효과적으로 방출하게 된다. 현재까지 연구된 양친매성(amphiphile)의 pH-민감성 안정화제로는 팔미토일호모시스테인(palmytoylhomocyteine), 올레산, 콜레스테릴 헤미숙시네이트(cholesteryl hemisuccinate), 및 디올레오일숙시닐글리세롤(dioleoylsuccinylglycerol) 등이 있다. 본 발명에서는 새로운 pH-민감성 안정화제인 스티그마스테릴 헤미숙시네이트를 포함한다.In the present invention, it is preferable to insert a pH-sensitive stabilizer in order to devise a pH-sensitive liposome. pH-sensitive liposomes are designed to allow the drug to be released to a target location in the cytoplasm or nucleus before the lysosomal approach and degradation occurs. pH-sensitive liposomes effectively release the drug at an early endosomal stage when the inserted pH-sensitive stabilizer is protonated in an acidic environment, such as inside the endosome, and can no longer maintain liposome stability. Amphiphile pH-sensitive stabilizers studied to date include palmitoylhomocyteine, oleic acid, cholesteryl hemisuccinate, and dioleoylsuccinylglycerol. . The present invention includes stigmasteryl hemisuccinate, a novel pH-sensitive stabilizer.

스티그마스테릴 헤미숙시네이트 합성 방법은 하기 반응식 1과 같다. 숙신 무수물을 0 ℃에서 메틸렌 클로라이드에 용해된 스티그마스테롤에 TEA 및 DMAP와 함께 첨가하고, 상기 혼합물을 리플럭스 하에서 4시간동안 교반한다. 이후 1N HCl, 물 및 식염수로 세척한 후, 상기 유기상을 재결정화시키고 진공상태에서 건조하면 스티그마스테릴 헤미숙시네이트가 합성된다.The stigmasteryl hemisuccinate synthesis method is shown in Scheme 1 below. Succinic anhydride is added with TEA and DMAP to stigmasterol dissolved in methylene chloride at 0 ° C. and the mixture is stirred for 4 h under reflux. After washing with 1N HCl, water and brine, the organic phase is recrystallized and dried in vacuo to synthesize stigmasteryl hemisuccinate.

Figure 112006088752819-PAT00003
Figure 112006088752819-PAT00003

또한, 본 발명에서 리포좀 제제의 안정성이나 조작성을 고려하여 스티그마스테릴 헤미숙시네이트, 콜레스테롤, 콜레스테릴 헤미숙시네이트 이외의 다양한 부형제 또는 안정화제와 같은 첨가제를 사용할 수도 있다.In addition, in the present invention, additives such as various excipients or stabilizers other than stigmasteryl hemisuccinate, cholesterol, and cholesteryl hemisuccinate may be used in consideration of the stability or operability of the liposome preparation.

본 발명의 약물전달담체 내상에 함입되는 생리활성성분은 생체에 적용할 수 있는 것이라면 수용성 또는 수불용성 등 그 종류에 제한이 없다. 예를 들어, 단일성분이나 동물 또는 식물이나 균주 추출물, 및 이들의 2종 이상이 포함된 혼합물일 수 있으며, 이는 목적과 경우에 따라 조절하여 사용할 수 있다. 미백 증진 또는 주름 및 노화 방지와 치료의 효능을 가진 성분 등이 사용될 수 있다. 이들 생리활성성분은 리포좀 분산액 또는 에멀젼, 고분자 입자 총 중량에 대하여 0.01~30중량%, 바람직하게는 0.1~20중량%의 양으로 함입될 수 있다. 이는 조성물의 피부외용제, 경구용 제제, 주사제 등 제형화에 용이한 함량이기 때문이다. The biologically active ingredient incorporated into the drug delivery carrier inner phase of the present invention is not limited in its kind such as water solubility or water insolubility as long as it can be applied to a living body. For example, it may be a single component or an animal or plant or strain extract, and a mixture containing two or more thereof, which may be used to adjust according to the purpose and case. Ingredients with whitening enhancement or wrinkles and anti-aging and therapeutic efficacy may be used. These bioactive components may be incorporated in amounts of 0.01 to 30% by weight, preferably 0.1 to 20% by weight, based on the total weight of the liposome dispersion or emulsion, the polymer particles. This is because the content of the composition is easy to formulate such as external preparations for skin, oral preparations, injections and the like.

본 발명의 AP-GRR 펩티드를 이용하여 제조된 약물전달담체의 평균입자직경은 작을수록 바람직하며, 콜로이드의 안정성을 고려할 때, 최소한 1,000 nm 이하, 바람직하게는 500 nm 이하이다.The smaller the average particle diameter of the drug delivery carrier prepared using the AP-GRR peptide of the present invention is preferable, and considering the stability of the colloid, it is at least 1,000 nm or less, preferably 500 nm or less.

본 발명에서 제시하는 리포좀, 에멀젼, 고분자 등을제조하는 방법은 특별히 제한되지는 않지만, 예를 들어 다음과 같은 방법에 의해 제조될 수 있다. The method for producing liposomes, emulsions, polymers and the like presented in the present invention is not particularly limited, but can be prepared, for example, by the following method.

본 발명에서 제시하는 지질 성분을 이용하여 생리활성성분이 함입된 약물전달담체를 형성하는 방법으로서는, 상기 인지질류와 안정화제를 유기용매에 용해시킨 뒤 용매를 증발, 감압시키며 지질 필름을 형성시키고 수용액을 가한 뒤 초음파를 가하는 방법 유기용매에 녹은 인지질류와 안정화제를 수용액에 분산시킨 뒤 초음파를 가하는 방법 인지질류와 안정화제를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 과량의 물로 유기용매를 추출 또는 증발시키는 방법 인지질류와 안정화제를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 균질기 또는 고압유화기를 이용하여 강하게 교반하고 용매를 증발시키는 방법 인지질류와 안정화제를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 과량의 물로 투석하는 방법 인지질류와 안정화제를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 서서히 물을 첨가하는 방법 등이 있다.As a method of forming a drug delivery carrier containing a physiologically active component by using the lipid component of the present invention, the phospholipids and stabilizers are dissolved in an organic solvent, the solvent is evaporated and reduced in pressure to form a lipid film, and an aqueous solution. Method of applying ultrasonic wave after adding phosphate and stabilizer dissolved in organic solvent in aqueous solution and then applying ultrasonic wave After dispersing or dissolving phospholipid and stabilizer in organic solvent, extracting or evaporating organic solvent with excess water Method Dispersing or dissolving phospholipids and stabilizers in organic solvent, stirring vigorously using homogenizer or high pressure emulsifier and evaporating solvent Dispersing or dissolving phospholipids and stabilizers in organic solvent and dialysis with excess water Method Disperse or dissolve phospholipids and stabilizers in organic solvents, and then slowly There is a method of adding.

상기의 제조방법과 관련하여, 인지질류와 안정화제를 유기 용매에 용해시키기 위해서, 기계적 힘을 가하거나 20~100℃ 바람직하게는 70℃이하로 가열할 수 있다. In relation to the above production method, in order to dissolve the phospholipids and stabilizers in an organic solvent, mechanical force may be applied or heated to 20 to 100 ° C, preferably 70 ° C or less.

생리활성성분이 수용성인 경우, 생리활성성분을 물에녹이거나 수용액에 녹여서 상기 수용액 또는 물을 첨가하는 단계에서 함께 투여된다. 생리활성성분이 수불 용성인 경우에는, 생리활성성분을 유기 용매에 용해시킨 후 지질 성분이 있는 유기 용매상에 포함시켜 상기와 같은 방법으로 제조할 수 있다. When the bioactive component is water-soluble, it is administered together in the step of adding the aqueous solution or water by dissolving the bioactive component in water or in an aqueous solution. When the bioactive component is water insoluble, the bioactive component may be prepared by dissolving the bioactive component in an organic solvent and then incorporating it into an organic solvent having a lipid component.

상기한 방법에서 인지질류와 안정화제 또는 수불용성 생리활성성분을 용해시키기 위해사용할 수 있는 유기 용매로는, 아세톤, 디메틸설폭시드, 디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 디옥산, 테트라히드로퓨란, 아세트산, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, 메틸에틸케톤, 염화메틸렌, 클로로포름, 메탄올, 에탄올, 에틸에테르, 디에틸에테르, 헥산 및 석유에테르 중에서 선택된 1종 또는 이들을 혼합한 용매를 사용할 수 있다.Organic solvents that can be used to dissolve phospholipids, stabilizers or water-insoluble bioactive components in the above-described methods include acetone, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, dioxane and tetrahydrofuran Or a solvent selected from acetic acid, ethyl acetate, acetonitrile, methyl ethyl ketone, methylene chloride, chloroform, methanol, ethanol, ethyl ether, diethyl ether, hexane and petroleum ether, or a mixture thereof.

또한, 본 발명에서 제시하는 고분자 입자의 제조방법으로서는 고분자를 바로수용액에 분산시킨 뒤 초음파를 가하는 방법, 고분자를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 과량의 물로 유기용매를 추출 또는 증발시키는 방법, 고분자를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 균질기 또는 고압유화기를 이용하여 강하게 교반하고 용매를 증발시키는 방법, 고분자를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 과량의 물로 투석하는 방법, 고분자를 유기용매에 분산 또는 용해시킨 뒤 서서히 물을 첨가하는 방법, 초임계 유체를 이용하여 제조하는 방법 등을 들 수 있다(T. Niwa et al., J. Pharm. Sci.(1994) 83, 5, 727-732; C. S. Cho et al., Biomaterials(1997) 18,323-326; T. Govender et al., J. Control. Rel.(1999) 57, 171-185; M. F. Zambaux et al., J. Control. Rel.(1998) 50, 31-40).In addition, the method for preparing the polymer particles according to the present invention may be a method of dispersing a polymer in an aqueous solution immediately followed by ultrasonic waves, a method of dispersing or dissolving a polymer in an organic solvent and then extracting or evaporating the organic solvent with an excess of water. Dispersing or dissolving in organic solvent, stirring vigorously using homogenizer or high pressure emulsifier, evaporating solvent, dispersing or dissolving polymer in organic solvent and dialysis with excess water, dispersing or dissolving polymer in organic solvent And a method of slowly adding water, or preparing using a supercritical fluid (T. Niwa et al., J. Pharm. Sci. (1994) 83, 5, 727-732; CS Cho). et al., Biomaterials (1997) 18,323-326; T. Govender et al., J. Control.Rel. (1999) 57, 171-185; MF Zambaux et al., J. Control.Rel. (1998) 50 , 31-40).

본 발명의 고분자 입자의 제조에 사용될 수 있는 유기용매로서는 아세톤, 디메틸설폭사이드, 디메틸포름아미드, N-메틸피롤리돈, 디옥산, 테트라히드로푸란, 에틸아세테이트, 아세토니트릴, 메틸에틸케톤, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 메탄올, 에탄올, 에틸에테르, 디에틸에테르, 헥산, 또는 페트롤리움 에테르를 포함한다. 이때 상기의 용매를 단독으로 사용하거나 또는 2 이상의 용매를 혼합하여 사용할 수 있다.Organic solvents that may be used in the preparation of the polymer particles of the present invention include acetone, dimethyl sulfoxide, dimethylformamide, N-methylpyrrolidone, dioxane, tetrahydrofuran, ethyl acetate, acetonitrile, methyl ethyl ketone, methylene chloride , Chloroform, methanol, ethanol, ethyl ether, diethyl ether, hexane, or petroleum ether. In this case, the above solvents may be used alone, or two or more solvents may be mixed and used.

이하 실시예, 비교예 및 실험예를 기재하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다. 이하의 예에 나타나는 재료, 시약, 비용, 조작 등은 본 발명의 취지를 일탈하지 않는 한 적절히 변경할 수 있다. 따라서, 본 발명의 범위는 이하에 나타내는 구체예에 의해 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, Comparative Examples, and Experimental Examples. Materials, reagents, costs, operations, and the like shown in the following examples can be appropriately changed without departing from the spirit of the present invention. Therefore, the scope of the present invention is not limited by the specific example shown below.

<실시예 1> AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체 제조Example 1 Preparation of Drug Delivery Carrier Containing AP-GRR Peptide

AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬은 아미드 4-메틸벤지드릴아민 하이드로클로라이드(MBHA) 수지와 ABI 433 합성기기를 이용하여 Fmoc(N-(9-플루레닐)메톡시카르보닐)/t-부틸 방법을 따라 고체상 펩티드 합성법(solid phase peptide synthesis; SPPS)으로 합성하였으며, 역상 고성능 액체 크로마토그래피(Reverse High Performance Liquid Chromatography)를 이용하여 순도 90% 이상으로 정제하였다. 이를 질량 분석기(Agilent 1100 시리즈)로 분석한 결과 분자량을 측정함으로 성공적 합성 여부가 확인되었다. 이로써, AP-GRR 서열번호 1의 아미노산 서열을 가지는 펩티드가 합성되었음을 확인하였다. 상기 AP-GRR를 표면에 도입한 지질 구조체 제조 과정은 아래와 같다.Peptide chains comprising AP-GRR peptides were prepared using Fmoc (N- (9-fluorenyl) methoxycarbonyl) / t-butyl using an amide 4-methylbenzidylamine hydrochloride (MBHA) resin and an ABI 433 synthesizer. It was synthesized by solid phase peptide synthesis (SPPS) according to the method, and purified by 90% or more purity using Reverse High Performance Liquid Chromatography. This was analyzed by mass spectrometer (Agilent 1100 series) and the molecular weight was measured to confirm the successful synthesis. This confirmed that the peptide having the amino acid sequence of AP-GRR SEQ ID NO: 1 was synthesized. The manufacturing process of the lipid construct in which the AP-GRR is introduced to the surface is as follows.

포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜에탄올아민-말레이미드(1:1)(인지질)과 스 티그마스테릴 헤미숙시네이트 안정화제를 몰비율 3:2로 섞어 클로로포름:메탄올(95:5,부피/부피) 혼합 유기용매에 녹인 후, 감압하며 용매를 증발시켜 필름을 형성하였다. 유기용매가 제거된 필름에 생리활성성분으로서 정제수에 녹인 형광표지물질인 칼세인(Calcein)을 가한 후, 초음파를 가하여 리포좀 지질 분산액을 제조하였다. AP-GRR의 티올(thiol)기와 지질 기반 약물전달담체 표면에 도출된 말레이미드(maleimide) 기능기와 수분 동안 반응 시키어 AP-GRR 도입된 약물전달담체를 제조하였다.Chloroform: methanol (95: 5, volume / volume) by mixing phosphatidylethanolamine, phosphatidylethanolamine-maleimide (1: 1) (phospholipid) and stagmasteryl hemisuccinate stabilizer in a molar ratio 3: 2 After dissolving in a mixed organic solvent, the solvent was evaporated under reduced pressure to form a film. After adding calcein (Calcein), a fluorescent label dissolved in purified water, as a physiologically active ingredient to the organic solvent-free film, liposome lipid dispersions were prepared by adding ultrasonic waves. The AP-GRR-introduced drug carrier was prepared by reacting the thiol group of AP-GRR with a maleimide functional group derived on the surface of the lipid-based drug carrier for several minutes.

제조된 AP-GRR 도입된 지질 기반 약물전달담체를 관찰하기 위하여 크라이요-투과전자현미경(Cyro-TEM)을 이용하여 약물전달담체의 형상을 관찰하고 얻은 이미지를 도 2에 나타내었다. In order to observe the prepared AP-GRR introduced lipid-based drug delivery carrier, the image obtained by observing the shape of the drug delivery carrier using CRYRO-TUM (Cyro-TEM) is shown in FIG.

본 실시예 에서는 먼저, 형광표지물질로써 칼세인을 사용하여 상기약물전달담체를 제조하였으나, 로다민-비-이소시안네이트(Rhodamine-B-Isothiocyanate, 이하 RITC)를 담지 하기도 하였다. 하기 실시예 제조시 지질 분산액 중 지질 성분비는 각각 0.2, 2, 5, 10 중량%의 양으로 제조되었다. 하기 시험예에서 이용된 지질-기반 전달담체는 모두 0.2 중량%의 지질 성분비로 제조하여 이용되었다.In the present embodiment, first, the drug carrier was prepared using calcein as a fluorescent label, but Rhodamine-B-Isothiocyanate (RITC) was also supported. In preparing the following examples, the lipid component ratios in the lipid dispersions were prepared in amounts of 0.2, 2, 5, and 10% by weight, respectively. The lipid-based delivery carriers used in the following test examples were all prepared using a lipid component ratio of 0.2% by weight.

<시험예 1> AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 세포 내 전달능 평가Test Example 1 Evaluation of Intracellular Delivery Capability of Drug Delivery Carrier Containing AP-GRR Peptide

상기 실시예 1에서 제조된 칼세인 봉입된 AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 세포 내 전달능을 비교 평가하기 위하여, 대조군으로서 같은 농도의 칼세인 봉입된 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2)과 포스파티딜에탄올아민:스티그 마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2)의 지질 구성으로 제조된 리포좀 2종을 준비하였다. 대조군 리포좀 2종을 포함한 총 준비된 3종 리포좀 시스템을 미리 배양된 COS-7 세포에 첨가하여 섭씨 37에서 4시간 동안 배양한 후 각 샘플군의 세포를 수거하여 PBS 액에 분산시킨 뒤, FACS 분석을 실시하였다. 분석 결과는 도 3에 나타내었다. 각각 도 3a는 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2), 도3b는 포스파티딜에탄올아민:스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2), 도 3c는(포스파티딜에탄올아민:포스파티딜에탄올아민-말레이미드):스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2)에AP-GRR 펩티드가 표면 도입된 약물전달담체로 인해 전달된 칼세인의 세포 내 전달량을 나타내는 것으로 AP-GRR 펩티드가 표면 도입된 약물전달담체의 경우 AP-GRR이 도입되지 않은 포스파티딜에탄올아민:스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2)의 전달시스템 보다 월등히 칼세인 전달량이 많은 것을 알 수 있으며, 전형적인 리포좀 구성인 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2) 리포좀의 전달량보다 월등히 뛰어남을 알 수 있다. In order to evaluate the intracellular delivery ability of the drug delivery carrier comprising the calcein-encapsulated AP-GRR peptide prepared in Example 1, the same concentration of calcein-containing phosphatidylcholine: cholesterol (molar ratio 3: 2) as a control ) And two liposomes prepared with a lipid composition of phosphatidylethanolamine: stigg masteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2). A total of three prepared liposome systems, including two control liposomes, were added to pre-cultured COS-7 cells, incubated for 4 hours at 37 degrees Celsius, and the cells of each sample group were collected and dispersed in PBS solution, followed by FACS analysis. Was carried out. The analysis results are shown in FIG. 3. 3a shows phosphatidylcholine: cholesterol (molar ratio 3: 2), FIG. 3b shows phosphatidylethanolamine: stigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2), and FIG. 3c shows (phosphatidylethanolamine: phosphatidylethanolamine-maleic). Mead): Sigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2) shows the intracellular delivery of calcein delivered by the drug carrier with the AP-GRR peptide surface-introduced. In the case of drug delivery carriers, the amount of calcein delivered is much higher than that of phosphatidylethanolamine: stigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2) without AP-GRR, and phosphatidylcholine, a typical liposome composition : Cholesterol (molar ratio 3: 2) It can be seen that far superior to the delivery amount of liposomes.

<시험예 2> AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 피부 투과 전달능 평가<Test Example 2> Evaluation of skin permeation delivery capacity of drug delivery carrier containing AP-GRR peptide

상기 실시예 1에서 제조된 RITC 봉입된 AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 세포 내 전달능을 비교 평가하기 위하여 대조군으로서 같은 농도의 RITC 봉입된 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2)와 포스파티딜에탄올아민:스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2)의 지질 구성으로 제조된 리포좀 2종을 준비하였 다. 대조군 리포좀 2종을 포함한 총 준비된 3종 리포좀 시스템 분산액을 미리 준비된 프란츠 디퓨젼 셀(Franz Diffusion Cell) 위에 올려진 절편된 기니아 피그 피부 위에 동일량 도포하고 18 시간 동안 프란츠 디퓨젼 셀 내부에 인산 완충 용액(PBS)를 와류 시킨다. 18 시간 이후 피부를 수거하여 DI 워터로 4회 이상 씻어 준비 O.C.T. 화합물을 이용하여 섭씨 -26 이하로 동결 시킨 뒤 두께 10~18 마이크로미터로 잘라 슬라이드 글라스에 조직을 올려 놓는다. 남은 O.C.T. 화합물을 씻어 준 뒤, 커버 글라스를 덮고 바로 공초점 레이저 주사 현미경(CLSM)으로 관찰한다. 관찰하여 얻은 이미지는 도 4에 나타내었다. 각각 도 4a는 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2), 도 4b는 포스파티딜에탄올아민:스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2), 도 4c는(포스파티딜에탄올아민:포스파티딜에탄올아민-말레이미드):스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2)에AP-GRR 펩티드가 표면 도입된 약물전달담체로 인해 피부내 전달된 RITC의 세포 내 전달량을 나타내는 것으로 AP-GRR 펩티드가 표면 도입된 약물전달담체의 경우 AP-GRR이 도입되지 않은 포스파티딜에탄올아민:스티그마스테릴 헤미숙시네이트(몰비율 3:2)의 전달시스템 보다 월등히 RITC의 피부내 전달량이 많은 것을 알 수 있으며, 또한, 전형적인 리포좀 구성인 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2) 리포좀의 전달량 보다더 월등히 뛰어남을 알 수 있다. 특히, pH-둔감 리포좀인 포스파티딜콜린:콜레스테롤(몰비율 3:2) 리포좀의 경우, 다른 두 pH-민감 리포좀이 기저막까지 또는 표피세포 안으로 깊숙이 RITC를 전달하는 것과는 달리 형광강도가 거의 나타나지 않았다.RITC-encapsulated phosphatidylcholine: cholesterol (molar ratio 3: 2) and phosphatidyl at the same concentration as a control group in order to evaluate the intracellular delivery ability of the drug delivery carrier comprising the RITC-encapsulated AP-GRR peptide prepared in Example 1 Two liposomes prepared with a lipid composition of ethanolamine: stigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2) were prepared. A total of three prepared liposome system dispersions, including two control liposomes, were applied in equal amounts onto the sliced guinea pig skin loaded on a previously prepared Franz Diffusion Cell and phosphate buffered solution inside the Franz Diffusion cell for 18 hours. Vortex (PBS). After 18 hours, the skin is collected and washed 4 times or more with DI water. Using the compound, freeze below -26 degrees Celsius, cut into 10-18 micrometers thick, and place the tissue on the slide glass. Remaining O.C.T. After washing the compound, the cover glass is covered and immediately observed with a confocal laser scanning microscope (CLSM). The observed image is shown in FIG. 4. Fig. 4A shows phosphatidylcholine: cholesterol (molar ratio 3: 2), Fig. 4B shows phosphatidylethanolamine: stigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2), and Fig. 4C shows (phosphatidylethanolamine: phosphatidylethanolamine-maleic). Mead): Sigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2) shows the intracellular delivery of RITC delivered in the skin due to the drug delivery carrier with the AP-GRR peptide surface-introduced. In the case of the drug delivery carriers, the intradermal delivery of RITC is much higher than that of the phosphatidylethanolamine: stigmasteryl hemisuccinate (molar ratio 3: 2) without AP-GRR. It can be seen that the liposomal composition of phosphatidylcholine: cholesterol (molar ratio 3: 2) is far superior to that of liposomes. In particular, in the case of phosphatidylcholine: cholesterol (molar ratio 3: 2) liposomes, which are pH-sensitive liposomes, fluorescence intensity was hardly exhibited unlike the other two pH-sensitive liposomes delivering RITC to the basement membrane or deep into epidermal cells.

<시험예 3> AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 표면도입 효과 평가<Test Example 3> Evaluation of the surface introduction effect of the drug delivery carrier containing the AP-GRR peptide

AP-GRR 펩티드를 단순 혼합시키지 않고 약물전달담체의 표면에 도입시킨 효과를 평가하기 위하여, 상기 실시예 1에서 제조된 Calcein 봉입된 AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체 (AP-GRR conjugated), 다른 제조 방법은 동일하되 AP-GRR 펩티드를 포함하지 않은 약물전달담체 (Non-CPP), 및 AP-GRR 펩티드를 화학적으로 공유 결합시키지 않고 약물전달담체와 단순히 혼합시킨 (AP-GRR mix) 경우에 있어서 각각의 제조된 약물전달담체 분산액을 적당량 COS-7 (African Green Monkey Kidney Fibroblasts cell line)과HaCaT (Human keratinocyte cell line) 세포에 4시간 처리하였다. 이후, 약물전달담체에 담지되어있다가 세포 내 전달된 칼세인을 정량 분석하기 위하여, 세포를 떼어 내고 여러 번 씻은 후 세포막을 분해하여 96 웰로 옮겼다. 칼세인의 형광 세기 정도를 형광 멀티레이블 카운터 (fluorescent multilabel counter (Wallac victor, Ex/Em=488/535))를 이용하여 각각 비교, 분석한 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타난 바와 같이, AP-GRR 펩티드가 공유결합된 약물전달담체에 의하여 세포 내 전달된 칼세인양이 다른 경우에 비해 월등히 많고, AP-GRR 펩티드를 약물전달담체와 단순히 혼합한 경우에는 AP-GRR 펩티드를 포함하지 않은 약물전달담체에 의한 칼세인 전달량과 비슷하게 나타났기 때문에, 이를 통하여 AP-GRR 펩티드에 의해 약물의 전달능을 높이기 위해서는 반드시 약물전달담체에 화학적 공유결합방법 등으로 표면 개질 되어야 그 기능을 제대로 발휘할 수 있음을 알 수 있었다. In order to evaluate the effect of introducing the AP-GRR peptide onto the surface of the drug carrier without simple mixing, the drug delivery carrier (AP-GRR conjugated) comprising the Calcein-encapsulated AP-GRR peptide prepared in Example 1, Other methods of preparation are the same, but do not include AP-GRR peptides (Non-CPP), and when AP-GRR peptides are simply mixed with drug carriers without chemically covalently binding (AP-GRR mix) Each prepared drug delivery carrier dispersion was treated with appropriate amounts of COS-7 (African Green Monkey Kidney Fibroblasts cell line) and HaCaT (Human keratinocyte cell line) cells for 4 hours. Subsequently, in order to quantitatively analyze calcein delivered in the cell after being carried in the drug carrier, the cells were removed and washed several times, and then the cell membrane was decomposed and transferred to 96 wells. The fluorescence intensity of calcein was compared and analyzed using a fluorescence multilabel counter (Wallac victor, Ex / Em = 488/535), respectively. As shown in FIG. 5, the amount of calcein delivered in the cell by the AP-GRR peptide covalently coupled drug carrier is significantly higher than in the other cases, and AP-GRR peptide is simply mixed with the drug carrier. Since it was similar to the amount of calcein delivered by the drug carrier without the GRR peptide, in order to enhance the drug delivery ability by the AP-GRR peptide, it must be surface-modified to the drug carrier by chemical covalent bonding method. I was able to demonstrate that properly.

<시험예 4> AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체와 다른 생체막 투과 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 세포 내 전달능 비교 평가Test Example 4 Comparative Evaluation of Intracellular Delivery Capability of Drug Delivery Carrier Containing AP-GRR Peptide and Drug Delivery Carrier Containing Other Biomembrane Penetrating Peptides

다른 생체막 투과 펩티드에 대한 AP-GRR 펩티드의 우수성을 확인하기 위하여, 상기 실시예 1에서 제조된 칼세인 봉입된 AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체 외에 AP-GRR 펩티드가 아닌 Tat 펩티드, 5R 펩티드, 9R 펩티드 및9r 펩티드를 각각 표면 도입시킨 약물전달담체, 그리고 펩티드를 표면 도입하지 않은 약물전달담체 (Non-CPP)를 제조하여 세포 내 전달량을 비교하였다. 상기 제조된 약물전달담체 분산액을 COS-7과 HaCaT 세포에 4 시간 처리하고, 약물전달담체를 처리하지 않은 COS-7 및 HaCaT 세포 (Non-treated)도 두었다. 각각의 경우 세포 내 전달된 칼세인을 정량 분석하기 위하여 세포를 떼어 내고 여러 번 씻은 후, 세포막을 분해하여 96 웰로 옮기고 칼세인의 형광 세기 정도를 형광 멀티레이블 카운터 (fluorescent multilabel counter (Wallac victor, Ex/Em=488/535))를 이용하여 비교, 분석하였다. 그 결과로서 도 6에 나타난 바와 같이, 생체막 투과성이 뛰어나다고 알려진 Tat 펩티드(RKKRRQRRR), 5R (RRRRR), 9R (RRRRRRRRR) 및 9r (rrrrrrrrr; r은 아르기닌 (R)의 D-form 이성질체를 나타냄.) 펩티드가 표면 도입된 약물전달담체에 의해서도 칼세인 전달능이 증진되었으나, AP-GRR 펩티드가 표면 도입된 약물전달담체에 의한 칼세인 전달능이 보다 월등히 뛰어남을 확인할 수 있었다. In order to confirm the superiority of the AP-GRR peptide over other biomembrane permeable peptides, in addition to the drug delivery carrier comprising the calcein-encapsulated AP-GRR peptide prepared in Example 1, a Tat peptide and a 5R peptide other than the AP-GRR peptide Drug delivery carriers surface-introduced, 9R peptides and 9r peptides, and drug delivery carriers (Non-CPP) without surface-introduced peptides were prepared to compare intracellular delivery. The prepared drug delivery carrier dispersion was treated with COS-7 and HaCaT cells for 4 hours, and COS-7 and HaCaT cells (Non-treated) without drug delivery carriers were also placed. In each case, the cells were removed and washed several times to quantify the intracellular delivery of calcein, and then the cell membranes were dissociated and transferred to 96 wells, and the fluorescence intensity of calcein was measured using a fluorescent multilabel counter (Wallac victor, Ex). / Em = 488/535)). As a result, as shown in FIG. 6, Tat peptides (RKKRRQRRR), 5R (RRRRR), 9R (RRRRRRRRR) and 9r (rrrrrrrrr; r represent D-form isomers of arginine (R), which are known to be excellent in biomembrane permeability. ) The drug-carrier with the surface-incorporated peptide enhanced calcein delivery ability, but the calcein-delivery capacity with the AP-GRR peptide-introduced drug-carrier was superior.

<시험예 5> AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체의 동물 피부 투과능에 대한 생체 내(in vivo) 평가Test Example 5 In Vivo Evaluation of Animal Skin Penetration Capacity of Drug Delivery Carrier Containing AP-GRR Peptide

상기 실시예 1에서 제조된 RITC 봉입된 AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체 분산액:PG를 8:2로 혼합한 것, 및 염이 없는 인산완충용액 (PBS):PG를 8:2로 혼합한 혼합액에 RITC를 녹인 것을 각각 거즈에 묻혀 in vivo로 기니아 피그 양쪽 등 피부에 첩포로 붙여 놓았다. 하루 지난 뒤 첩포를 떼어내고 피부를 DI 워터로 4회 이상 씻고 생체검사(biopsy)하였다. O.C.T. 화합물을 이용하여 -26℃ 이하로 동결 시킨 뒤 두께 10~18 마이크로미터로 잘라 슬라이드 글라스에 조직을 올려 놓고, 남은 O.C.T. 화합물을 씻어 준 뒤 커버 글라스를 덮고 바로 공초점 레이저 주사 현미경(CLSM)으로 관찰하였다. 관찰하여 얻은 이미지는 도 7에 나타내었다. AP-GRR 펩티드가 도입된 약물전달담체에 의해 전달된 RITC는 기저막 (basal membrane) 전까지 골고루 전달된 것으로 관찰되었으나, 약물전달담체에 담지되지 않은 RITC는 피부의 각질에만 축적된 것을 관찰할 수 있었다. 따라서 AP-GRR 펩티드에 의해 담지된 물질 RITC의 전달능은 in vivo 피부에서도 그 효과가 뛰어나다는 것을 관찰할 수가 있었다.Drug delivery carrier dispersion comprising the RITC-encapsulated AP-GRR peptide prepared in Example 1: PG is mixed at 8: 2, and salt-free phosphate buffer solution (PBS): PG is mixed at 8: 2 Each of the RITC dissolved in one mixture was buried in gauze, and then applied in vivo to the skin of both guinea pigs. One day later, the patch was removed and the skin washed four times or more with biopsy. O.C.T. After freezing to below -26 ℃ using the compound and cut to 10 ~ 18 micrometers thick, the tissue is placed on the slide glass, the remaining O.C.T. The compound was washed and then covered with a cover glass and immediately observed with a confocal laser scanning microscope (CLSM). The observed image is shown in FIG. RITC delivered by the drug delivery carrier with AP-GRR peptide was observed to be evenly distributed until the basal membrane, but RITC not supported by the drug delivery carrier accumulated only in the keratin of the skin. Therefore, it was observed that the delivery ability of the substance RITC supported by the AP-GRR peptide was excellent even in in vivo skin.

본 발명은 새롭게 고안된 뛰어난 생체막 투과성을 가진 AP-GRR 펩티드를 포함하는 생리활성유효성분 혹은 AP-GRR 펩티드를 포함하는 약물전달담체에 관한 것으로, 막투과성 기능을 효과적으로 발휘하는 AP-GRR 펩티드를 도입함으로써 전달하고자 하는 물질의 세포 내 혹은 피부 투과적 전달량을 크게 증진 시킬 수 있는 약물전달담체에 관한 것이다. 그러므로 본 발명에서 제안하는 약물전달담체는 기존의 리포좀, 에멀젼과 같은 지질 구조체나 고분자 입자 혹은 약물, 단백질과 같은 거대 생리활성유효성분이 세포 내로 잘 유입되지 못하는 단점을, 생체막 투과증진 기능을 지닌 AP-GRR 펩티드 또는 AP-GRR 펩티드를 포함하는 펩티드사슬을 도입하는 방법을 통해 극복하였다는 특징이 있다. 또한, pH-적정가능한 안정화제를 지질 구조체 또는 고분자 입자에 삽입하여 더욱 효과적인 전달 및 방출을 가능하게 하였다. 이러한 약물전달담체 안에 약물을 봉입하면, 전달하고자 하는 생리활성유효성분의 생체이용률(bioavailability)을 증진시킬 수 있는 효과적인 약물전달담체로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.The present invention relates to a physiologically active ingredient comprising a newly designed AP-GRR peptide having excellent biomembrane permeability or a drug carrier comprising an AP-GRR peptide, by introducing an AP-GRR peptide that effectively exerts a membrane-permeable function. It relates to a drug delivery carrier that can greatly enhance the intracellular or skin permeable delivery amount of the substance to be delivered. Therefore, the drug delivery carrier proposed in the present invention has a disadvantage in that lipid structures such as liposomes and emulsions, macromolecule particles, or large bioactive active ingredients such as drugs and proteins are not easily introduced into cells. GRR Peptide or AP-GRR It is characterized by overcoming the method by introducing a peptide chain comprising a peptide. In addition, pH-adjustable stabilizers have been incorporated into the lipid construct or polymer particles to allow for more effective delivery and release. If the drug is encapsulated in the drug delivery carrier, it is expected to be used as an effective drug delivery carrier that can enhance the bioavailability (bioavailability) of the active ingredient to be delivered.

<110> Amorepacific Corporation <120> AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and drug-delivery carrier comprising the same <160> 5 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 1 Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Tyr Lys Cys 1 5 10 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Drosophila melanogaster <400> 2 Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys 1 5 10 15 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 3 Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr 1 5 10 15 Gly Arg <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus type 1 <400> 4 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg 1 5 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 5 Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro 1 5 10 15 <110> Amorepacific Corporation <120> AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and          drug-delivery carrier comprising the same <160> 5 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 1 Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Gly Tyr Lys Cys   1 5 10 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Drosophila melanogaster <400> 2 Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys   1 5 10 15 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 3 Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr   1 5 10 15 Gly arg         <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus type 1 <400> 4 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg   1 5 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 5 Ala Ala Val Ala Leu Leu Pro Ala Val Leu Leu Ala Leu Leu Ala Pro   1 5 10 15  

Claims (25)

세포 투과 펩티드로서, Gly(Arg)n Gly Tyr Lys Cys의 서열(n = 1 내지 20)을 가지는 AP-GRR 펩티드. An AP-GRR peptide having a sequence of Gly (Arg) n Gly Tyr Lys Cys (n = 1 to 20) as a cell penetrating peptide. 제1항에 있어서, 상기 n은 3 내지 9임을 특징으로 하는 AP-GRR 펩티드. The AP-GRR peptide according to claim 1, wherein n is 3 to 9. 제1항에 있어서, 상기 서열은 서열번호 1의 서열인 것을 특징으로 하는 AP-GRR 펩티드.The AP-GRR peptide according to claim 1, wherein the sequence is a sequence of SEQ ID NO: 1. 약물전달을 위한 공유결합체로서, 제1항의 펩티드 또는 제1항의 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 생리활성유효성분이 공유결합된 것을 특징으로 하는 공유결합체.A covalent conjugate for drug delivery, wherein the peptide chain comprising the peptide of claim 1 or the peptide of claim 1 and a physiologically active ingredient are covalently bonded. 약물전달담체로서, 제1항의 펩티드 또는 제1항의 펩티드를 포함하는 펩티드사슬과 공유결합된 지질 구조체 또는 고분자 입자를 포함하는 것을 특징으로 하는 약물전달담체.A drug delivery carrier comprising a lipid construct or a polymer particle covalently bonded to a peptide of claim 1 or a peptide chain comprising the peptide of claim 1. 제5항에 있어서, 상기 약물전달담체는 안정화제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier of claim 5, wherein the drug delivery carrier further comprises a stabilizer. 제6항에 있어서, 상기 안정화제는 pH-민감성 안정화제인 것을 특징으로 하는 약물전달담체. The drug delivery carrier according to claim 6, wherein the stabilizer is a pH-sensitive stabilizer. 제6항에 있어서, 상기 안정화제는 스티그마스테릴 헤미숙시네이트, 콜레스테롤 또는 콜레스테릴 헤미숙시네이트인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.7. The drug delivery carrier according to claim 6, wherein the stabilizing agent is stigmasteryl hemisuccinate, cholesterol or cholesteryl hemisuccinate. 제5항에 있어서, 상기 지질 구조체는 리포좀 또는 에멀젼인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 5, wherein the lipid construct is a liposome or an emulsion. 제9항에 있어서, 상기 리포좀 또는 에멀젼의 지질성분은 탄소수 12 내지 24의 지방산 사슬을 갖는 인지질류 또는 질소지질인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 9, wherein the lipid component of the liposome or emulsion is a phospholipid or nitrogenous lipid having a fatty acid chain having 12 to 24 carbon atoms. 제10항에 있어서, 상기 인지질류는 난황 레시틴(포스파티딜콜린), 대두 레시틴, 리조레시틴(lysolecithin), 스핑고마이엘린(sphingomyelin), 포스파티딘산, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜에탄올아민, 디포스파티딜글리세롤, 카르디오리핀(cardiolipin), 플라즈마로겐의 천연인지질 이들 인지질로부터 통상의 방법에 의해 수득할 수 있는 수소첨가 생성물 디세틸포스페이트, 디스테아로일포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토 일포스파티딜콜린, 디팔미토일포스파티딜에탄올아민, 디팔미토일포스파티딜세린, 엘레오스테아로일포스파티딜콜린, 엘레오스테아로일포스파티딜에탄올아민, 엘레오스테아로일포스파티딜세린의 합성 지질 및 이들의 가수분해에 의해 수득할 수 있는 지방산 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The method of claim 10, wherein the phospholipids are egg yolk lecithin (phosphatidylcholine), soybean lecithin, lysolecithin, sphingomyelin, phosphatidine acid, phosphatidylserine, phosphatidylglycerol, phosphatidyl inositol, phosphatidylethanolamine, Diphosphatidylglycerol, cardiolipin, natural phospholipids of plasmalogen Hydrogenated product dicetylphosphate, distearoylphosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylethanolamine, dioleoyl obtainable by conventional methods from these phospholipids Palmitoylphosphatidylcholine, dipalmitoylphosphatidylethanolamine, dipalmitoylphosphatidylserine, eleostaroylphosphatidylcholine, eleostaroylphosphatidylethanolamine, synthetic lipids of eleostaroylphosphatidylethanolamine, and synthetic hydrolysates thereof to be obtained by hydrolysis thereof With fatty acid mixtures Drug delivery carrier, characterized in that at least one member selected from the group. 제11항에 있어서, 상기 인지질류의 조합은 포스파티딜콜린과 포스파티딜에탄올아민의 조합, 포스파티딜콜린과 포스파티딜글리세롤의 조합, 포스파티딜콜린과 포스파티딜이노시톨의 조합, 포스파티딜콜린과 포스파티딘산의 조합, 포스파티딜콜린과 디올레오일포스파티딜에탄올아민의 조합, 또는 포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딜세린의 조합인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.12. The combination of phospholipids according to claim 11, wherein the combination of phospholipids is a combination of phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine, a combination of phosphatidylcholine and phosphatidylglycerol, a combination of phosphatidylcholine and phosphatidyl inositol, a combination of phosphatidylcholine and phosphatidic acid, phosphatidylcholine and dioleoylphosphatidylethanolamine Or a combination of phosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylethanolamine and phosphatidylserine. 제12항에 있어서, 상기 조합비는 최소 성분에 대한 최대 성분의 혼합비율이 1:5 이하인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 12, wherein the combination ratio of the maximum component to the minimum component is 1: 5 or less. 제12항에 있어서, 상기 포스파티딜콜린, 디올레오일포스파티딜에탄올아민 및 포스파티딜세린의 조합의 조합비는 1~4 : 1~2 : 1~2 인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 12, wherein the combination ratio of the phosphatidylcholine, dioleoylphosphatidylethanolamine and phosphatidylserine is 1 to 4: 1 to 2: 1 to 2. 제10항에 있어서, 상기 지질성분은 전체 리포좀 분산액 또는 에멀젼 총 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량%인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 10, wherein the lipid component is 0.001 to 20% by weight based on the total weight of the total liposome dispersion or emulsion. 제5항에 있어서, 상기 고분자 입자는 생체에 적합하고 염증이나 면역반응을 유발하지 않으며 생체 내에서 분해되고 그 분해산물 역시 생체 내에서 무해한 것을 특징으로 하는 약물전달담체.6. The drug delivery carrier according to claim 5, wherein the polymer particles are biocompatible and do not cause inflammation or immune reactions and are degraded in vivo and their degradation products are also harmless in vivo. 제16항에 있어서, 상기 고분자 입자는 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 16, wherein the polymer particles are biodegradable aliphatic polyester-based polymers. 제17항에 있어서, 상기 고분자 입자는 락트산과 글리콜산을 기초로 하는 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to claim 17, wherein the polymer particles are biodegradable aliphatic polyester-based polymers based on lactic acid and glycolic acid. 제18항에 있어서, 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자는 하기 화학식 1의 폴리(D,L-락트산)(poly(D,L-lactic acid)), 폴리(L-락트산), 폴리(D-락트산) 하기 화학식 2의 폴리(D,L-락트산-co-글리콜산)(poly(D,L-lactic acid-co-glycolic acid)), 폴리(D-락트산-co-글리콜산), 폴리(L-락트산-co-글리콜산) 폴리(카프로락톤)(poly(caprolactone)), 폴리(발레로락톤)(poly(valerolactone)), 폴리(히드록시 부티레이트)(poly(hydroxy butyrate)), 폴리(히드록시 발러레이트)(poly(hydroxy valerate)), 폴리(1,4-디옥산-2-온)(poly(1,4-dioxane-2-one)), 폴리(오르토 에스테르)(poly(ortho ester)) 및 이들의 단량체로부터 제조된 공중합체로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약물전달담체. The method according to claim 18, wherein the biodegradable aliphatic polyester-based polymer is a poly (D, L-lactic acid), poly (L-lactic acid), poly (D- Lactic acid) poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid) (poly (D, L-lactic acid-co-glycolic acid)), poly (D-lactic acid-co-glycolic acid), poly ( L-lactic acid-co-glycolic acid) poly (caprolactone), poly (valerolactone), poly (hydroxy butyrate), poly ( Poly (hydroxy valerate), poly (1,4-dioxane-2-one), poly (ortho ester) (poly (ortho ester)) and a copolymer prepared from the monomers thereof, and at least one selected from the group consisting of drug delivery carriers. [화학식 1][Formula 1]
Figure 112006088752819-PAT00004
Figure 112006088752819-PAT00004
 (상기 식에서 n은 2이상의 정수이다.)(Where n is an integer of 2 or more) [화학식 2][Formula 2]
Figure 112006088752819-PAT00005
Figure 112006088752819-PAT00005
 (상기 식에서 m과 n은 서로 같거나 다른 2이상의 정수이다.)(Where m and n are integers of two or more equal to or different from each other) 제17항에 있어서, 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자의 분자량은 평균 500 내지 100,000인 것을 특징으로 하는 약물전달담체. 18. The drug delivery carrier according to claim 17, wherein the biodegradable aliphatic polyester polymer has an average molecular weight of 500 to 100,000. 제17항에 있어서, 상기 AP-GRR 펩티드(A)와 상기 생분해성 지방족 폴리에스테르계 고분자(B)는 A-B형 또는 A-B-A형으로 공유결합되어 구성되는 것을 특징으로 하는 약물전달담체.18. The drug delivery carrier according to claim 17, wherein the AP-GRR peptide (A) and the biodegradable aliphatic polyester-based polymer (B) are covalently bonded to A-B type or A-B-A type. 제5항에 있어서, 상기 공유결합은 AP-GRR 펩티드 또는 AP-GRR 펩티드를 포함 하는 펩티드사슬과 상기 리포좀, 에멀젼 또는 고분자 입자 사이에 염기, 링커 또는 멀티리간드 화합물을 첨가하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug according to claim 5, wherein the covalent bond is obtained by adding a base, a linker, or a multiligand compound between a peptide chain comprising an AP-GRR peptide or an AP-GRR peptide and the liposome, emulsion, or polymer particles. Delivery. 제5항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약물전달담체의 평균입자직경은 1,000nm 이하인 것을 특징으로 하는 약물전달담체.The drug delivery carrier according to any one of claims 5 to 22, wherein the mean particle diameter of the drug delivery carrier is 1,000 nm or less. 제5항 내지 제22항 중 어느 한 항에 따른 상기 약물전달담체를 리포좀 분산액 또는 에멀젼, 고분자 입자 총 중량에 대하여 0.01~30중량%의 생리활성유효성분과 함께 함유하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.A pharmaceutical composition comprising the drug delivery carrier according to any one of claims 5 to 22 together with a liposome dispersion or emulsion and a bioactive active ingredient of 0.01 to 30% by weight based on the total weight of the polymer particles. 제24항에 있어서, 상기 조성물은 피부외용제, 경구용 제제 및 주사제로 이루어진 군으로부터 선택되는 제형을 가지는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물. The pharmaceutical composition of claim 24, wherein the composition has a formulation selected from the group consisting of an external preparation for skin, an oral preparation, and an injection.
KR1020060119415A 2006-06-30 2006-11-30 AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and drug-delivery carrier comprising the same KR100857389B1 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR20060060209 2006-06-30
KR1020060060209 2006-06-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20080003177A true KR20080003177A (en) 2008-01-07
KR100857389B1 KR100857389B1 (en) 2008-09-11

Family

ID=39214571

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020060119415A KR100857389B1 (en) 2006-06-30 2006-11-30 AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and drug-delivery carrier comprising the same

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100857389B1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160106864A1 (en) * 2014-10-15 2016-04-21 Amorepacific Corporation Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
KR20160044408A (en) * 2014-10-15 2016-04-25 (주)아모레퍼시픽 Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
KR20190027933A (en) * 2011-03-30 2019-03-15 클레네 나노메디슨, 인크. Novel gold-platinum based bi-metallic nanocrystal suspensions, electrochemical manufacturing processes therefor and uses for the same

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103102403B (en) * 2011-11-10 2014-04-23 沈阳药科大学 Two mutants of analgesic bioactive peptide GRR, and preparation and application thereof

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2690276B2 (en) 1995-01-10 1997-12-10 科学技術振興事業団 Electrostatically bound polymeric micelle drug carrier and its drug
FR2730637B1 (en) 1995-02-17 1997-03-28 Rhone Poulenc Rorer Sa PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING NUCLEIC ACIDS, AND USES THEREOF
KR100441904B1 (en) * 2002-05-17 2004-07-27 주식회사 태평양 Conjugate of biodegradable aliphatic polyester with Tat49-57 peptide or peptide chain containing Tat49-57 peptide, and nanoparticle manufactured using the same

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190027933A (en) * 2011-03-30 2019-03-15 클레네 나노메디슨, 인크. Novel gold-platinum based bi-metallic nanocrystal suspensions, electrochemical manufacturing processes therefor and uses for the same
US20160106864A1 (en) * 2014-10-15 2016-04-21 Amorepacific Corporation Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
KR20160044408A (en) * 2014-10-15 2016-04-25 (주)아모레퍼시픽 Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
CN105521494A (en) * 2014-10-15 2016-04-27 株式会社爱茉莉太平洋 Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
CN105521494B (en) * 2014-10-15 2021-06-29 株式会社爱茉莉太平洋 Drug delivery vehicle containing macromolecule and introduced with cell penetrating peptide

Also Published As

Publication number Publication date
KR100857389B1 (en) 2008-09-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Shi et al. A survey on “Trojan Horse” peptides: opportunities, issues and controlled entry to “Troy”
Klein et al. Bioreducible polycations as shuttles for therapeutic nucleic acid and protein transfection
Torchilin Recent approaches to intracellular delivery of drugs and DNA and organelle targeting
Zhang et al. Enhanced cellular entry and efficacy of tat conjugates by rational design of the auxiliary segment
Sigg et al. Stimuli-responsive codelivery of oligonucleotides and drugs by self-assembled peptide nanoparticles
Missirlis et al. Mechanisms of peptide amphiphile internalization by SJSA-1 cells in vitro
US20160106864A1 (en) Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
Bartheldyova et al. Hyaluronic acid surface modified liposomes prepared via orthogonal aminoxy coupling: synthesis of nontoxic aminoxylipids based on symmetrically α-branched fatty acids, preparation of liposomes by microfluidic mixing, and targeting to cancer cells expressing CD44
CN106632695B (en) pH-sensitive polypeptide and application thereof
Dewa et al. Liposomal Polyamine− Dialkyl Phosphate Conjugates as Effective Gene Carriers: Chemical Structure, Morphology, and Gene Transfer Activity
Ding et al. Distinct mechanisms of membrane permeation induced by two polymalic acid copolymers
Lin et al. Structural effects and lipid membrane interactions of the pH-responsive GALA peptide with fatty acid acylation
KR100857389B1 (en) AP-GRR peptide or peptide chain containing AP-GRR peptide, and drug-delivery carrier comprising the same
Duan et al. Esterase-responsive polypeptide vesicles as fast-response and sustained-release nanocompartments for fibroblast-exempt drug delivery
KR102441380B1 (en) Cell penetrating peptide introduced drug-delivery carrier comprising macromolecule
B Lopes et al. Potential of peptide-based enhancers for transdermal delivery
Nam et al. Intracellular drug delivery using poly (d, l-lactide-co-glycolide) nano-particles derivatized with a peptide from a transcriptional activator protein of HIV-1
US7482018B2 (en) Use of oligomers and polymers for drug solubilization, stabilization, and delivery
WO2014005314A1 (en) Bone-targeted delivery system for osteogenesis treatment based on small nucleic acid medicine and preparation method thereof
Tomich et al. Nonviral gene therapy: Peptiplexes
KR100441904B1 (en) Conjugate of biodegradable aliphatic polyester with Tat49-57 peptide or peptide chain containing Tat49-57 peptide, and nanoparticle manufactured using the same
US8425900B2 (en) Method of delivering a protein into a cell
US20210038736A1 (en) Nanoparticles including a glatiramoid useful in polynucleotide delivery
Sun et al. New amphiphilic N-phosphoryl oligopeptides designed for gene delivery
WO2011074578A1 (en) Peptides imparting cell permeability to lipid membrane structure and/or enhancing cell permeability of lipid membrane structure, and lipid membrane structure comprising lipid bound to such peptide as constituent lipid and having cell permeability or showing enhanced cell permeability

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E90F Notification of reason for final refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20120824

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130813

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140829

Year of fee payment: 7

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150901

Year of fee payment: 8

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160624

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180702

Year of fee payment: 11

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190701

Year of fee payment: 12