KR20070022758A - 면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약 - Google Patents

면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약 Download PDF

Info

Publication number
KR20070022758A
KR20070022758A KR1020067026553A KR20067026553A KR20070022758A KR 20070022758 A KR20070022758 A KR 20070022758A KR 1020067026553 A KR1020067026553 A KR 1020067026553A KR 20067026553 A KR20067026553 A KR 20067026553A KR 20070022758 A KR20070022758 A KR 20070022758A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
pathway
signaling
activity
agent
signaling activity
Prior art date
Application number
KR1020067026553A
Other languages
English (en)
Inventor
팔라니얀디 마니바사캄
에드워드 로이든 조스트-프라이스
제인 스타운튼
커티스 케이트
Original Assignee
콤비네이토릭스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 콤비네이토릭스, 인코포레이티드 filed Critical 콤비네이토릭스, 인코포레이티드
Priority to KR1020067026553A priority Critical patent/KR20070022758A/ko
Publication of KR20070022758A publication Critical patent/KR20070022758A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics

Abstract

본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 (예컨대, 글루코코르티코이드 수용체 작용제) 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응, 이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제의 조합을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 및 감소에 관한 것이다. 또한, 스크리닝 방법은 상기 질환을 치료, 예방 또는 감소시키는데 유용한 후보 화합물 및 방법들을 동정하기 위해 제공된다.
신호전달 활성, 신호전달 경로, 면역염증성 질환, 후보 화합물

Description

면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약{METHODS AND REAGENTS FOR THE TREATMENT OF IMMUNOINFLAMMATORY DISORDERS}
일반적으로, 본 발명은 면역염증성 질환의 치료, 예방 및 감소를 포함한다. 또한, 그러한 이상들을 치료, 예방 또는 감소시키는데 유용한 후보 화합물(candidate compounds) 및 방법들을 동정하기 위해 스크리닝 방법(screening method)이 제공된다.
본 발명은 면역염증성 질환의 치료, 예방 및 감소에 관계한다.
면역염증성 질환은 신체의 면역 방어의 부적당한 활성화를 특징으로 한다. 면역 반응은 감염성 침입자(infectious invader)를 표적으로 하는 대신에, 신체 자체의 조직 또는 이식된 조직을 표적으로 삼아 손상시킨다. 면역계의 표적이 되는 조직은 질환에 따라 달라진다. 예를 들어, 면역 반응은 크론병에서는 소화관을 표적으로 하는 반면, 다발경화증에서는, 신경 조직을 표적으로 한다. 면역염증성 질환은 수백만의 사람들에게 영향을 미치며 천식, 알레르기성 안내 염증 질환, 관절염, 아토피 피부염, 아토피 습진, 당뇨병, 용혈빈혈, 염증성 피부병, 염증성 장(bowel) 또는 위장(gastrointestinal) 질환 (예컨대, 크론병 및 궤양성 대장염), 다발경화증, 중증근육무력증, 소양증/염증, 건선, 류마티스 관절염, 경화(cirrhosis) 및 전신홍반루푸스와 같은 이상들을 포함한다.
면역염증성 질환의 현재의 치료법은 전형적으로 면역억제제에 의존한다. 이들 약제의 효과는 다양할 수 있고 그 사용은 종종 해로운 부작용을 동반한다. 따라서, 면역염증성 질환의 치료를 위한 개선된 치료제 및 방법이 요구되고 있다.
[발명의 요약]
본 발명은 면역염증성 질환의 치료, 예방 및 감소를 위한 조성물, 방법 및 키트를 특징으로 한다.
하나의 양상에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성(signaling activity)을 증가시키는 약제 (예컨대, 프레드니솔론 및 덱사메타손과 같은 글루코코르티코이드 수용체 작용제) 및 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응 (예컨대, 케모카인 생성, 세포 표면 마커(cell surface markers)의 발현)이 감소되도록 후술하는 신호전달 경로(signaling pathways) 중 적어도 하나 (바람직하게는 2, 3 또는 그 이상)의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제(non-steroidal agent)를 포함하는 조성물을 특징으로 한다: NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로. 이러한 약제들은 포유동물에게 투여될 경우 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응을 감소시키기에 충분한 양으로 존재한다. 바람직한 경우, 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성을 증가시키는 약제 는 조성물 내에 저용량(low dosage)으로 존재한다. 상기 조성물은 국소 또는 전신 투여용으로 제형화될 수 있다.
본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 후술하는 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제의 조합을 포유동물에게 투여함으로써 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소 방법을 특징으로 한다: NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로. 제 1 약제 및 제 2 약제는 동시에 또는 서로 28일 이내에, 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소시키기에 충분한 양으로 투여된다. 상기 두 약제는 바람직하게 서로 14일 이내에, 더욱 바람직하게는 서로 7일 이내에 및 가장 바람직하게는 서로 24시간 이내에 또는 거의 동시에 (즉, 함께) 투여된다. 바람직한 경우, 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성을 증가시키는 약제는 저용량으로 투여된다.
또한 본 발명은 염증 세포 (예컨대, T 세포) 내의 염증성 사이토카인의 생성 및 염증성 사이토카인의 방출을 감소시키는 방법을 특징으로 한다. 이러한 방법은 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 후술하는 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제와 접촉시키는 단계를 포함한다: NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로.
본 발명의 상기 모든 양상에 있어서, 비스테로이드성 약제는 1 이상의 신호 전달 경로 (예컨대, NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로)의 1 이상의 신호전달 활성이 조절 (예컨대, 증가 또는 감소)되도록 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성 (예컨대, 효소 활성, 인산화 상태(phosphorylation state) 또는 결합 활성)을 증가 또는 감소시키는 약제일 수 있다. 예를 들어, 상기 비스테로이드성 약제는 NF-κB 경로 조절제, NFAT 경로 조절제, AP-1 경로 조절제 또는 Elk-1 경로 조절제일 수 있다. 비스테로이드성 약제는 또한 1 이상의 신호전달 경로 (예컨대, NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로)의 신호전달 활성이 조절되도록, 신호전달 분자의 발현 레벨을 감소시키는 안티센스 화합물(antisense compound) 또는 RNAi 화합물일 수 있다. 대안으로, 비스테로이드성 약제는 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 또는 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 우성 음성형(dominant negative form) 또는 우성 음성(dominant negative)을 인코딩(encoding)하는 발현 벡터(expression vector)일 수 있다. 비스테로이드성 약제는 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 또는 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자와 결합하여 상기 신호전달 분자의 생물학적 활성을 감소시키는 항체일 수 있다. 또한, 비스테로이드성 약제는 히스톤 디아세틸레이즈(histone de아세틸ase: HDAC) 또는 히스톤 아세틸 트랜스퍼레이즈(histone acetyl transferase)의 조절제와 같은 염색질 형태(chromatin conformation)에 영향을 주는 약제일 수 있다. 비스테로이드성 약제는 전염증성 사이토카인 mRNA 안정화 착물 (예컨대, TIA-1, TIAR, TTP) 또는 이러한 착물들의 활성화로 이르는 경로의 저해제일 수 있다.
바람직한 경우, 추가적인 치료 화합물이 제형화될 수 있거나 또는 본 발명의 조합과 함께 투여될 수 있다. 이 추가적인 치료 화합물은, 예를 들어 NSAID, 저분자 면역조절제(small molecule immunomodulator), COX-2 저해제, DMARD, 생물학적 제제, 크산틴, 항콜린성 화합물, 베타 수용체 작용제(beta receptor agonist), 기관지 확장제, 비스테로이드 칼시뉴린 저해제(non-steroidal 칼시뉴린 inhibitor), 비타민 D 유사체, 소랄렌(psoralen), 레티노이드(retinoid) 또는 5-아미노 살리실산일 수 있다.
본 발명은 면역염증성 이상을 치료, 예방 또는 감소시키는 후보 화합물 및 전략을 동정하기 위한 다양한 스크리닝 방법을 특징으로 한다. 예를 들어, 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 조합을 동정하는 하나의 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 시험관 내(in vitro)에서 염증 세포 (예컨대, T 세포)를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 후보 화합물을 접촉시키는 단계; 및 (b) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지만 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에서의 전염증성 사이토카인 생성 또는 방출에 비하여, 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 후보 화합물의 조합이 이러한 세포들에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계. 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타낸다.
면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 후보 화합물을 동정하는 다른 스크리닝 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성을 감소시킨 염증 세포를 제공하는 단계; (b) 이러한 세포들을 후보 화합물과 접촉시키는 단계; 및 (c) 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에 비하여, 후보 화합물이 상기 세포들에서의 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계. 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 후보 화합물이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타낸다.
본 발명은 다음의 단계를 포함하는, 면역염증성 질환의 치료에 유용할 수 있는 조합을 동정하는 방법을 특징으로 한다: (a) 시험관 내에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 후보 화합물과 접촉시키는 단계; 및 (b) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지만 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에서의 사이토카인 방출 또는 생성에 비하여, 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 후보 화합물의 조합이 이러한 세포들에서의 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계. 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타낸다.
본 발명은 다음의 단계를 포함하는, 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 화합물을 동정하는 방법을 특징으로 한다: (a) NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상에서 신호전달 활성이 감소되게 처리된(engineered) 염증 세포를 제공하는 단계; (b) 이러한 세포들을 후보 화합물과 접촉시키는 단계; 및 (c) 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에 비하여, 후보 화합 물이 세포에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계. 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 후보 화합물이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 화합물임을 나타낸다.
본 발명은 다음의 단계를 포함하는, 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합을 동정하는 방법을 특징으로 한다: (a) NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 화합물을 동정하는 단계; (b) 시험관 내에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉시키는 단계; 및 (c) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제와 접촉하지만 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지 않거나 또는 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지만 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제와 접촉하지 않는 세포에 비하여, 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a)에서 동정된 화합물의 조합이 상기 세포들에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계. 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타낸다.
본 발명은 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합을 동정하는 방법을 특징으로 하고, 이 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 화합 물을 동정하는 단계; (b) 시험관 내에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉시키는 단계; 및 (c) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지만 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지 않거나 또는 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지만 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지 않는 세포에서의 사이토카인 방출 또는 생성에 비하여, 이러한 약제들의 조합이 상기 세포에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계. 전염증성 사이토카인 방출의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타낸다.
본 발명은 (i) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제를 포함하는 조성물; 및 (ii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 이러한 조성물의 투여 설명서를 포함하는 키트를 특징으로 한다.
본 발명은 (i) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제; (ii) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제; 및 (iii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 비스테 로이드성 약제의 투여 설명서를 포함하는 키트를 특징으로 한다.
본 발명에 제공된 다른 키트는 (i) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제; 및 (ii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 상기 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NF-κB, NFAT, AP-1 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제의 투여 설명서를 포함한다.
대안으로, 본 발명은 (i) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제; 및 (ii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 상기 약제 및 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제의 투여 설명서를 포함하는 키트를 제공한다.
"면역염증성 질환을 치료, 감소 또는 예방한다(treating, reducing or preventing an immuinflammatory disorder)" 함은 질환의 발병 이전 또는 이후의 그러한 이상을 개선하는 것을 의미한다. 균등한 치료되지 않은 대조군과 비교할 경우, 그러한 감소 또는 예방의 정도는 임의이 표준 기술에 의해 측정된 바와 같이 적어도 5%, 10%, 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, 95% 또는 100%이다. 면역염증성 질환데 대한 치료를 받는 환다는 전문의가 그러한 이상을 갖는다고 진단했던 사람이다. 진단은 임의의 적절한 수단으로 행해질 수 있다. 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 이러한 환자들은 표준 시험(standard test)으로 검사되었거나 또는 검사를 하지 않고, 가족력과 같은 1 이상의 위험 인자의 존재로 고위험에 처한 것 으로 확인될 수 있었음을 이해할 것이다.
"환자(patient)"라 함은 임의의 동물 (예컨대, 사람)을 의미한다. 본 발명의 방법, 조성물 및 키트를 이용하여 치료될 수 있는 다른 동물들은 말, 개, 고양이, 돼지, 염소, 토끼, 햄스터, 원숭이, 기니픽(guinea pigs), 쥐(rats), 생쥐(mice), 도마뱀, 뱀, 양, 소, 물고기 및 새를 포함한다.
"신호전달 경로(signaling pathway)"라 함은 외부의 세포 자극의 결과로서 생성된 세포내 분자 신호 시리즈(series)이고, 궁극적으로 세포 또는 생물학적 효과 (예컨대, 염증)를 유발하는 특정 이펙터 단백질(effector protein)의 발현으로 이끈다. 예를 들어, 리간드는 세포 표면에서 수용체와 결합하여, 다양한 세포 단백질 (예컨대, 단백질 키나제)의 동원(recruitment) 및 활성화를 초래한다. 일단 이러한 초기 세포내 단백질이 활성화되면, 외부 신호가 다른 세포내 단백질에 의해 더욱 전파(propagate)되고 증폭되어, 생물학적 또는 세포 표현형 (예컨대, 염증)을 유발할 수 있는 이펙터 단백질 (예컨대, 전염증성 사이토카인)의 전사(transcription) 및 발현에 이른다. 외부 자극은 외부 자극에 노출되지 않은 세포에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 세포내의 이펙터 단백질의 발현을 증가시킬 수 있다. 개시 자극(initiating stimuli)에 따라, 신호전달 경로 내에서 세포내 신호전달 분자의 생물학적 활성 또는 발현 레벨이 대조군 세포에서의 그러한 활성 또는 발현에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 증가 또는 감소될 수 있다.
"글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시킨다(increasing the signaling activity of a glucocorticoid receptor)"함은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 경로에 관여하는 임의의 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성을 증가 또는 감소시키는 것을 의미한다. 그 결과, 이 분자의 신호전달 경로 다운스트림(downstream)이 증폭되고 궁극적으로, 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 경로의 총괄 출력(overall output)이 증가된다. 그러한 신호전달 활성의 증가는 처리되지 않은 대조군에 비하여 신호전달 경로에서의 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성을 적어도 10%, 20%, 30%, 0%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 증가 또는 감소시킨 결과일 수 있고, 이 결과는 본 발명이 속하는 기술분야에 공지되거나 또는 본 명세서에 개시된 임의의 표준 기술에 의해 측정된 바와 같다.
"신호전달 경로의 신호전달 활성을 감소시킨다(reducing the signaling activity of a signaling pathway)"함은 신호전달 경로에서의 임의의 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성을 감소시키는 것을 의미하고, 이로 인해 그러한 분자의 신호전달 경로 다운스트림의 전파, 궁극적으로 신호전달 경로의 총괄 출력을 방해한다. 그러한 감소는 처리되지 않은 대조군에 비하여 신호전달 경로에서의 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성을 적어도 10%, 20%, 30%, 0%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 증가 또는 감소시킨 결과일 수 있고, 이 결과는 본 발명이 속하는 기술분야에 공지되거나 또는 본 명세서에 개시된 임의의 표준 기술에 의해 측정된 바와 같다. 궁극적으로, 신호전달 경로 (예컨대, NFκB, NFAT, AP-1 또는 Elk-1 경로 중 1 이상)의 신호전달 활성을 감소시킴으로써, 이펙터 단백질 (예컨대, 전염증성 사이토카인)의 발현이 대조군 세포에 비하여 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 감소된다. 대안으로, 신호전달 경로의 생물학적 출력(biological output), 전염증성 사이토카인의 방출 또는 생성과 같은, 이 대조군에 비해 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 만큼 감소된다.
본 발명에 따른 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소는 글루코코르티코이드 수용체 경로의 신호전달 활성을 증가시킴으로써 그리고 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 후술하는 이펙터 단백질 또는 전사 인자들의 생성에 관여하는 1 이상의 신호전달 경로의 신호전달 활성을 조절함으로써 수득된다: NFκB, NFAT, AP-1 및 Elk-1. 그러한 조절은 그러한 경로 (도 1에 도시된 바와 같이)에 관여하는 임의의 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성의 증가 또는 감소로부터 기인되거나 또는 도 1에 개시된 임의의 신호전달 활성의 조절에 의한 결과일 수 있다. 예를 들어, NFAT 신호전달 경로의 신호전달 활성은 1 이상의 후술하는 활성을 방해하거나 또는 감소시킴으로써 감소될 수 있다: 칼슘 플럭스(calcium flux), 칼모듈린 활성, 칼시뉴린 활성, NFAT 탈인산화, NFAT 전좌(translocation) 또는 NFAT 전사 활성. NFκB 경로의 신호전달 활성은 PKC 활성, NIK 활성, IKK 활성, IκB 인산화 및 파괴, NFκB 전좌, NFκB DNA 결합, NFκB 인산화 (p65) 및 NFκB 전사 활성. AP-1의 신호전달 활성은 후술하는 활성 중 1 이상을 감소시킴으로써 감소될 수 있다: PKC 활성, MLK 인산화, MAP 키 나제 인산화 및 활성 (예컨대, MMKK3/6 인산화, JNK1/2 인산화, MEKK4 인산화, MKK4/7 인산화, p38 인산화, Raf 인산화, MEK1/2 인산화, ERK1/2 인산화 및 cJun 인산화), AP-1 DNA 결합 및 AP-1 전사 활성. NFAT, NFκB, AP-1 및 Elk-1 경로 중 1 이상이 감소되도록 조절될 수 있는 신호전달 사건(signaling event) 또는 신호전달 분자는 예를 들어, 도 1에 도시된다. NFκB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로가 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 증가시킬 수 있기 때문에, 1 이상의 이러한 경로의 조절은 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소로 이어진다.
"충분한 양(an amount sufficient)"이라 함은 본 발명의 조합에서, 임상 관련 방식으로 면역염증성 질병을 치료 또는 예방하는데 요구되는 화합물의 양을 의미한다. 면역염증성 질병에 의해 야기되거나 그로 인한 이상들의 치료용 처치를 위한 본 발명의 실시에 사용된 활성 화합물의 충분한 양은 투여의 방식, 포유동물 또는 환자의 나이, 몸무게 및 전반적인 건강상태에 따라 달라진다. 결국, 처방자들이 적당한 양 및 용량 요법을 결정할 것이다. 추가하여, 유효량(effective amount)은 규제 당국(regulatory authority) (미국 식품의약청(Food and Drug Administration)에 의해 판단되고 승인된 각각의 약제에 대한 면역염증성 질병을 갖는 환자의 치료에서 안전하고 효능이 있는 본 발명의 조합에서의 화합물의 양을 의미할 수 있다.
"보다 효과적(more effective)"이라 함은 치료가 비교되는 다른 치료 보다 뛰어난 효능을 나타내거나 또는 독성이 적고, 안전하며, 보다 편리하고 또는 저렴 하다는 것을 의미한다. 효능은 주어진 표식(indication)에 적절한 임의의 표준 방법을 이용하여 전문의가 측정할 수 있다.
"면역염증성 질환"이라는 용어는, 자가면역질환, 증식성 피부병 및 염증 피부병을 포함하는 다양한 이상들을 내포한다. 면역염증성 질환은 염증 진행, 면역계의 조절곤란(dysregulation) 및 불필요한 세포증식에 의해 건강한 조직의 파괴를 초래한다. 면역염증성 질환의 예는 심상성 좌창; 급성 호흡곤란증후군; 에디슨병(Addison's disease); 알레르기성 비염; 알레르기성 안내 염증, ANCA-연합 작은-혈관 혈관염; 강직 척추염; 관절염, 천식; 죽상동맥경화증; 아토피 피부염; 자가면역성 간염; 자가면역 용혈성 빈혈; 자가면역성 간염; 베체트병(Becet's disease); 벨안면신경마비(Bell's palsy); 수포성 유천포창; 대뇌 허혈(cerebral ischaemia); 만성폐쇄폐병; 경화; 코간증후군(Cogan's syndrome); 알레르기접촉피부염; 만성폐쇄폐병(COPD); 크론병(Crohn's disease); 쿠싱증후군(Cushing's syndrome); 피부근육염; 당뇨병; 원판양 홍반성 루푸스; 호산구성근막염; 결절홍반; 탈락피부염; 섬유근육통; 국소 사구체경화증; 국소분절사구체경화증; 거대세포 동맥염; 통풍; 통풍관절염; 이식편대숙주병; 손습진; 헤노호쉔라인자색반(Henoch-Schonlein purpura); 임신포진; 다모증; 특발성 세라토-공막염; 특발성 폐섬유증; 특발성 혈소판감소자색반; 면역혈소판감소자색반; 염증성 장 또는 위장 질환, 염증 피부병; 편평태선; 루푸스신장염; 림프종성 기관기관지염; 황반부종; 다발경화증; 중증근육무력증; 근육염; 비특이성 섬유화 폐질환(nonspecific fibrosing lung disease); 골관절염; 췌장염; 유사천포창 임신; 보통천포창; 치주염; 결절다발동맥염; 류마티 스성 다발성 근육통; 음낭 가려움증; 소양증/염증, 건선; 건선 관절염; 폐 히스토플라스마증(pulmonary histoplasmosis); 류마티스 관절염; 재발성 다발신경병증; 사르코이드증에 의해 야기된 장미증; 공피증에 의해 야기된 장미증; 스위트 증후군(Sweet's syndrome)에 의해 야기된 장미증; 전신홍반루푸스에 의해 야기된 장미증; 두드러기에 의해 야기된 장미증; 대상포진-관련 통증에 의해 야기된 장미증; 사르코이드증; 공피증; 분절성사구체경화증; 패혈쇼크 증후군; 어깨 건염 또는 윤활낭염; 쇼그렌증후군(Sjogren's syndrome); 스틸씨병(Still's disease); 뇌졸증-유발 뇌세포사; 스위트병; 전신홍반루푸스; 전신경화증; 타카야수동맥염(Takayasu's arteritis); 측두동맥염; 독성표피괴사용해; 이식거부 및 이식거부-관련 증후군; 결핵; 제1형 당뇨병; 궤양성 대장염; 포도막염; 혈관염; 및 베게너육아종증(Wegener's granulomatosis)이다.
"비-피부 염증 질환(Non-dermal inflammatory disorders)"은, 예를 들어 류마티스 관절염, 염증성 장질환, 천식 및 만성폐쇄폐병을 포함한다.
"피부 염증 질환(Dermal inflammatory disorders)" 또는 "염증 피부병(inflammatory dermatoses)"은, 예를 들어 건선, 급성 유열 호중구성 피부증, 습진 (예컨대, 건조습진, 땀흘림이상습진, 수포성 손,발바닥 습진), 국한성 형질세포 귀두염, 귀두포피염, 베체트병, 중심원심성 윤상홍반, 지속색소이상홍반, 다형홍반, 고리육아종, 광택태선, 편평태선, 경피성 위축성 태선, 만성 단순성 태선, 극상태선, 화폐상피부염, 괴저농피증, 사르코이드증, 괴저농피증, 두드러기 및 일과성가시세포해리피부병을 포함한다.
"증식성 피부병(proliferative skin disease)"이라 함은 표피 또는 진피에서 가속화된 세포 분열로 특징되는 양성 또는 악성 질병을 의미한다. 증식성 피부병의 예들은 건선, 아토피 피부염, 비-특이성 피부염, 원발자극접촉피부염, 알레르기접촉피부염, 피부의 바닥 및 편평세포암종, 판상어린선, 표피박리각화과다증, 악성전구 각화증, 여드름 및 지루성피부염이다.
본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에 의하여 이해될 수 있는 바와 같이, 개개의 질병, 질환 또는 이상은 증식성 피부병 및 염증 피부병 양자인 것으로 특징될 수 있다. 그러한 질병의 예가 건선이다.
"저용량(low dosage)"이라 함은 임의의 인간 질병 또는 이상의 치료를 위해 주어진 투여경로에 따라 제형화된 개개의 화합물의 최저 표준 권장 용량보다 적어도 5% (예컨대, 적어도 10%, 20%, 50%, 80%, 90% 또는 심지어 95%) 적은 것을 의미한다. 예를 들어, 흡입투여용으로 제형화된 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제의 저용량은 경구 투여용으로 제형화된 동일한 약제의 저용량과 차이가 있을 것이다.
"고용량(high dosage)"이라 함은 임의의 인간 질병 또는 이상을 치료하는 개개의 화합물의 최고 표준 권장 용량보다 적어도 5% (예컨대, 적어도 10%, 20%, 50%, 100%호, 200% 또는 심지어 300%) 많은 것을 의미한다.
"후보 화합물(candidate compound)" 자연발생적(naturally-occurring) 또는 인공적으로 유도된(artificially-derived) 화학이다. 후보 화합물은, 예를 들어 펩티드, 폴리펩티드, 합성 유기 분자, 자연발생적 유기 분자, 핵산 분자, 펩티드 핵산 분자 및 그의 구성요소 및 유사체를 포함할 수 있다.
본 발명에 유용한 화합물은 본 명세서에 기술된 화합물의 라세믹(racemic) 혼합물 및 순이성질체(pure isomer) 뿐만 아니라 부분이성질체 및 에난티오머(enatiomer) 같은 이성질체, 염, 에스터, 용매화합물(solvate) 및 그의 다형체(polymorph)를 포함하는 본 명세서에 개시된 화합물의 모든 제약학상 허용가능한 형태를 포함한다.
"코르티코스테로이드(corticosteroid)"라 함은 수소화된 사이클로펜타노퍼하이드로페난트렌(cyclopentanoperhydrophenanthrene) 고리 시스템을 특징으로 하고 면역억제 및/또는 소염 활성을 갖는 천연 또는 합성 화합물을 의미한다. 천연 코르티코스테로이드는 일반적으로 부신피질에 의하여 생성된다. 합성 코르티코스테로이드는 할로겐화될 수 있다. 코르티코스테로이드의 예들은 본 명세서에서 개시된다.
"비스테로이드 이뮤노필린-의존성 면역억제제(non-steroidal immunophilin-dependent immunosuppressant)", 즉 "NsIDI"라 함은 전염증성 사이토카인 생성 또는 분비를 감소시키거나, 이뮤노필린에 결합하거나, 전염증 반응의 하향 조절을 야기하는 임의의 비스테로이드성 약제를 의미한다. NsIDI는 칼시뉴린의 포스파타제(phosphatase) 활성을 저해하는 다른 약제 (펩티드, 펩티드 분절, 화학적 변형 펩티드 또는 펩티드 유사물질(mimetics)) 뿐만 아니라 사이클로스포린, 타크롤리무스, 아스코마이신, 피메크롤리무스와 같은 칼시뉴린 저해제를 포함한다. 또한 NsIDI는 라파마이신(시롤리무스) 및 에버롤리무스를 포함하는데, 이것은 FK506-결 합단백질, FKBP-12에 결합하여, 항원-유발 백혈구의 증식 및 사이토카인 분비를 차단한다.
"저분자 면역조절제(small molecule immunomodulator)"이라 함은 전염증성 사이토카인 생성 또는 분비를 감소시키고, 전염증 반응의 하향 조절을 야기하거나, 그밖에 이뮤노필린-독립 방식으로 면역계를 조절하는 비스테로이드성, 비-NsIDI 화합물을 의미한다. 전형적인 저분자 면역조절제은 VX 702 (Vertex Pharmaceuticals), SCIO 469 (Scios), 도라마피모드(doramAP1mod)(Boehringer Ingelheim), RO 30201195 (Roche) 및 SCIO 323 (Scios)과 같은 p38 MAP 키나제 저해제, DPC 333 (Bristol Myers Squibb)과 같은 TACE 저해제, 프라날카산(pranalcasan)(Vertex Pharmaceuticals)과 같은 ICE 저해제 및 마이코페놀레이트 (Roche)와 메리메포딥 (merimepodib)(Vertex Pharamceuticals)과 같은 IMPDH 저해제이다.
본 발명의 다른 특징 및 장점은 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백할 것이다.
그들의 효능에도 불구하고, 면역염증성 질환에 대해 글루코코르티코이드를 만성적으로 사용하는 것은 종종 심각한 전신 부작용과 연관된다. 광범위한 효과가 스테로이드 분자의 구조적 변형을 통해 스테로이드 치료 윈도우(window)를 넓혔지만, 이러한 접근은 뒤섞인 비평을 받았다. 이에, 본 발명자들은 허약한 부작용을 최소화하고 치료 효과를 증진하기 위해 시너지효과를 발휘하도록 상호작용하는 화합물의 조합을 포함하는 '혼합(syncretic)' 치료제의 발견을 위한 고속성능 플랫폼(high-throughput platform)을 처음으로 개발하였다.
본 발명은 유효량의 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 (예컨대, 글루코코르티코이드 수용체 작용제)와 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 약제의 투여를 위한 방법, 조성물 및 키트를 특징으로 한다. 본 발명을 기초로, 이 조합의 투여로 TNF-α와 같은 전염증성 케모카인 또는 사이토카인의 생성 또는 방출을 감소시킴으로써 염증이 감소되고, 면역염증성 질환의 치료, 예방 및 감소로 이어진다. 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제가 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NFκB, NFAT, AP-1 및 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 약제 (예컨대, NFκB 및 NFAT 신호전달 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제)와 함께 제형화되거나 또는 투여되는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물, 방법 및 키트는 면역염증성 질환, 증식성 피부병, 장기 이식거부 또는 이식편대숙주병의 치료, 예방 또는 감소에 유용하다. 다중 약물의 조합 역시 바람직하다. 예를 들어, 메토트렉세이트, 하이드록시클로로퀸 및 설파살라진은 류마티스 관절염의 치료에 일반적으로 투여되고 따라서 본 명세서에 개시된 조합들과 투여될 수 있다.
이하에서 더욱 상세하게 본 발명을 설명한다.
글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성을 증가시키는 약제
글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제는 후술하는 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 약제와 함께 사용된다: 본 발명의 방법, 조성물 및 키트에서의 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로. 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제는 궁극적으로 글루코코르티코이드 수용체-유도 전사를 증가시킨다. 그러한 활성의 증가는 예를 들어 후술하는 활성 중 1 이상을 증가시킴으로써 수득할 수 있다: 수용체 결합, 수용체/GC 전좌, 수용체/GC DNA 결합, 수용체/GC 전사 활성 또는 수용체/GC 트랜스리프레션(transrepression). 본 발명의 방법, 조성물 및 키트에 사용될 수 있는 약제들의 예시는 미국특허 제 6,380,207호, 6,380,223호, 6,448,405호, 6,506,766호 및 6,570,020호, 미국특허출원공개 제 20030176478호, 20030171585호, 20030120081호, 20030073703호, 2002015631호, 20020147336호, 20020107235호, 20020103217호 및 20010041802호, 및 PCT공개 제 WO00/66522호에 개시된 화합물을 포함하고, 이들 각각은 참조로서 본 명세서에 편입된다. 본 발명의 방법, 조성물 및 키트에 사용될 수 있는 다른 약제들은 미국특허 제 6,093,821호, 6,121,450호, 5,994,544호, 5,696,133호, 5,696,127호, 5,693,647호, 5,693,646호, 5,688,810호, 5,688,808호 및 5,696,130호에 개시되고, 이들 각각은 참조로서 본 명세서에 편입된다.
NF -κB 경로, NFAT 경로, AP -1 경로 및 Elk -1 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제
글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제는 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NFκB, NFAT, Elk-1 및 AP-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제와 함께 제형화되거나 또는 투여된다. 상기 비스테로이드성 약제는 이러한 경로들에서의 1 이상의 신호전달 분자들의 발현 레벨 또는 생물학적 활성을 증가 또는 감소시킬 수 있는데, 최종결과(end-result)가 NFκB, NFAT, Elk-1 및 AP-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성의 조절에 되도록 하기 위함이다. 유용한 약제들은, 예를 들어 Palanki, Curr. Med. Chem. 9:219-27 (2002)에 개시된다.
NF κB 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제
NFκB 신호전달 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제는, 예를 들어 후술하는 활성 중 1 이상을 조절할 수 있다: PKC 활성, NIK 활성, IKK 활성, IκB 인산화 및 파괴, NFκB 전좌, NFκB DNA 결합, NFκB 인산화 (p65) 또는 NFκB 전사 활성. 이러한 화합물들은, 예를 들어 미국특허출원공개 제 20040092430호, 20040058930호 및 20030013170호, 20030078246호 및 20030078246호, 및 2003년 9월 24일에 출원된 U.S.S.N. 10/670,488호에 개시되고, 이들 모두는 참조로서 본 명세서에 편입된다. 그러한 약제는 α-리포산, α-토코페롤, 아네톨다이티올티온(anetholdithiolthione: ADT), 아스타크산틴, 비스-유진올(bis-eugenol), 부틸레이티드 하이드록시아니솔(부틸ated 하이드록시anisole: BHA), 세파란틴 카페산 펜에틸 에스터 (3,4-다이하이드록시신남산, CAPE), 카르노스올(carnosol), 카베딜올(carvedilol), 카테콜 유도체(catechol 유도체), 두르쿠민(durcumin) (다이퍼울올일메테인(diferulolylmethane)), 다이벤질부티로락톤 리간드(dibenzylbutyrolactone lignans), 다이에틸다이티오카바메이트(diethyldithiocarbamate: DDC), 이페록스아민(iferoxamine), 다이하이드로리포산(dihydrolipoic Acid), 페노피브르산을 포함한 딜라제프(dilazep with fenofibric acid), 다이메틸다이티오카바메이트(dimethyldithiocarbamates: DMDTC), 쿠르쿠민(curcumin) (다이퍼울올일메티인), 다이설피람(disulfiram), 에브셀렌(ebselen), EPC-Kl (비타민 E 및 비타민 C의 포그포다이에스터 화합물), 에피갈로카테킨-3-갈레이느 (EGCG; 녹차 폴리페놀), 에르고티오닌(ergothioneine), 에틸 파이루베이트, 에틸렌 글라이콜 테트라아세트산(ethylene glycol tetraacetic acid: EGTA), gamma-글루탐일시스테인 합성효소 (gamma-GCS), 가노더마 루시둠 폴리사카라이드(ganoderma lucidum polysaccharides), 은행잎 추출물(ginkgo biloba extract), 글루타티온(glutathione), 헤마테인, IRFI 042 (비타민 E-유사 화합물), 론 테트라키스(ron tetrakis), 라시디핀(lacidipine), 라자로이드(lazaroids), 루페올(lupeol), 마그놀올(magnolol), 망간 과산소 항돌연변이 효소(manganese superoxide dismutase: Mn-SOD), N-아세틸-L-시스테인 (NAC), 나시셀린(nacyselyn: NAL), 노르다이하이드로구아이아리트산(nordihydroguaiaritic acid: NDGA), 오르쏘페난트롤린(orthophenanthroline), 페놀계 산화방지제(phenolic antioxidants) (예컨대, 하이드로퀴논 및 터트-부틸 하이드로퀴논), 페닐라진 옥사이드(PAO, 티로신포스파타제 저해제), 피롤린다이티오카바메이트 (PDTC), 쿠에르세틴(quercetin), Rg(3) (인삼 유도체), 로테논, S-알릴-시스테인 (SAC), 사우킨온(sauchinone), 테프옥살린(tepoxaline) (5-(4-클로로페닐)-N-하이드록시-(4-메톡시페닐)-N-메틸-lH-피라졸-3-프로판아미드), α-토프릴 석시네이트, α-토프릴 ㅇ아세테이트, PMC (2,2,5,7,8-펜타메틸-6-하이드록시크로만) 및 야쿠키논(yakuchinone) A 및 B를 포함한다. 또한 NFκB 저해제는 펩티드 알데하이드 (ALLnL(N-아세틸-루신일-루시닐(leucynil)-노르루신알, MGlOl), LLM (N-아세틸-루신일-루시닐-메티온알), Z-LLnV, (카보벤즈옥실-루신일-루시닐-노르발린알,MGl l5), Z-LLL (카보벤즈옥실-루신일-루시닐-루신알, MG 132), 락트시스틴, b-락톤, 보론산 펩티드, 유비퀴틴 리가제 저해제(ubiquitin ligase inhibitors), PS-341, 사이클로스포린 A, FK506 (타크롤리무스), 데옥시스퍼구알린(deoxyspergualin), APNE (N-아세틸-DL-페닐알라닌-b-나프틸에스터), BTEE (N-벤조일 L-티로신-에틸에스터), DCIC (3,4-다이클로로아이소코우마린(dichloroisocoumarin)), DFP (다이아이소프로필 플루오로포스페이트), TPCK (N-a-토스일-L-페닐 알라닌 클로로메틸 케톤), 칼라구알린(calagualine) (페른 유도체(fern derivative)), LY29 및 LY30, 페파블록(pefabloc) (세린 프로테아제 저해제), 로카글아마이드(rocaglamides) (아글라이아(aglaia) 유도체), 겔다나마이신(geldanamycin), BMS-345541 (4(2'-아미노에틸)아미노-1,8- 다이메틸이미다조(dimethylimidazo)(l,2-a) 퀴녹살린(quinoxaline)), 2-아미노-3-사이아노-4-아릴-6-(2-하이드록시-페닐)프리리딘 유사체(pryridine analog) (화합물 26), 아난드아마이드(anandamide), AS602868, BMS-345541, 플라보피리돌(flavopiridol), 제스터온 다이머(jesterone dimer), 에이피제닌(apigenin), HB-EGF (헤파린-결합 에피더말 성장인자-유사 성장인자, LF-15-0195 (15-데옥시스퍼구알린의 유사체), MX781 (레티노이드 길항제), 이트로실코발라민(itrosylcobalamin) (비타민 B12 유사체), 수르반타(survanta), PTEN (종양 억제자), 실리비닌, 설파살라진, 피케아탄올(piceatannol), 쿠어세틴(quercetin), 스타우로스포린(staurosporine), 웨델로락톤(wedelolactone), 베툴린산, 우르솔산, 아네톨, 아스피니, 살리실산 나트륨, 아지도티미딘(azidothymidine: AZT), BAY-117083, (E3((4-t-부틸페닐)-설폰일)-2-프로펜나이트릴), 벤질 아이소티오사이아네이트, 카코스폰지오놀라이드 B(cacospongionolide B), 칼라구알린(calagualine), 카보플라틴(carboplatin), 코리오닉 고나도트로핀(chorionic gonadotropin), 사이클로에폭시돈(cycloepoxydon); l-하이드록시-2- 하이드록시메틸-3-펜트-l-엔일벤젠, 디지톡신(digitoxin), 4-하이드록시노넨알 (HNE), 가벡세이트 메실레이트(gabexate mesilate), 글로소진 테뉴이폴리아(glossogyne tenuifolia), 하이드로퀴논, 이부프로펜, 인디루빈-31-옥심, 엔터페론-알파(nterferon-alpha), 메토트렉세이트, 모노클로르아민(monochloramine), 나파모스타트 메실레이트(nafamostat mesilate), 올리안드린(oleandrin), 판두라틴 A(panduratin A), 페트로사스폰지올라이드 M(petrosaspongiolide M), 피트산(phytic acid) (이노시톨 헥사키스포스페이트(inositol hexakisphosphate)), 프로스파글라딘 Al, 20(S)-프로토파나사트라이올(protopanaxatriol) (진세노사이드 메타볼라이트(ginsenoside metabolite)), 생귀나린(sanguinarine) (슈도켈레리트린(pseudochelerythrine), 13-메틸-[l,3]-벤즈오다이옥솔로-[5,6-c]-l,3-다이옥솔로-4,5 페난트리디늄), 실라마린(silymarin), SOCSl, 설린닥, THI 52 (l- 나프틸에틸-6,7-다이하이드록시-l,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린), 베스나리논 (vesnarinone), YopJ (예르시니아 슈도투베르쿨로시스 (Yersinia pseudotuberculosis)에 의해 인코딩되는) 아세트아미노펜, α-멜라노사이트- 자극 호르몬 (α-MSH), 아멘토플라본(amentoflavone), 인진쑥 추출물(artemisia capillaris thunb extract), 아우큐빈(aucubin), beta-라파콘(lapachone), 카프사이신(capsaicin) (8-메틸-N-바닐릴-6-노넨아마이드), C형 간염(HCV)의 중심 단백질, 사이클로린테이논(cyclolinteinone) (스폰지 세스터터펜(sponge sesterterpene)), 다이아마이드 (티로신 포스파타제 저해제), E-73 (사이클로헥스이미드 유사체(cycloheximide analog)), 에카베트 나트륨(ecabet sodium), 에모딘(emodin) (3-메틸-l,6,8-트라이하이드록시안트라퀴논), 에르브스타틴(erbstatin) (티로신 키나제 저해제), 포스포마이신(fosfomycin), 진균성 글리오톡신, 메실산 가벡세이트(gabexate mesilate), 제니스테인(genistein) (티로신 키나제 저해제), 글리메피리드(glimepiride), 글루코사민 설페이트(glucosamine sulfate), gamma-글루타미시스테인 합성효소, 하이포클로라이트, 아이소말로토크로마놀(isomallotochromanol), 아이소말로토크로멘(isomallotochromene), KlL(백시니아 바이러스 단백질(Vaccinia virus protein)), 코키아 스코파리아 과일(Kochia scoparia fruit) (메탄올 추출물), 레플루노미드 메타볼라이트(레플루노미드 metabolite) (A77 1726), 로자르틴(losartin), LY294002 [2-(4-모폴린일)-8-페닐크로몬], 5'-메틸티오아데노신, U0126, 퍼바나데이트(pervanadate), 페닐알라신 옥사이드 (PAO, 티로신 포스파타제 저해제), 프로스타글란딘 15-데옥시-델타(12,14)-PGJ(2), 레진이페라톡신(resiniferatoxin), 세스퀴터펜 락톤(sesquiterpene lactones) (파르테놀라이드(parthenolide); 에르골라이드(ergolide); 구아이나놀라이드), 티오펜탈, TNP-470, 트라이글리세라이드-풍부한 리포단백질, 에폭시퀴논 A 모노머, Ro 106-9920, 코노필린(conophylline) MOL 294 (저분자), 레인(rhein), 에이피제닌(apigenin) (4',5,7-트라이하이드록시플라본), 다이옥신, 아스트라갈로사이드 IV(astragaloside IV), 아트로바스타틴, 데하이드록시메틸에폭시퀴노미신 (DHMEQ), 15-데옥시스퍼구알린, 뉴클링(nucling) o,o'-비스미리스토일 티아민 다이설파이드 (BMT), 니코틴아마이드(nicotinamide), 3-아미노벤즈아마이드, 7-아미노-4-메틸코우마린, 암리논(amrinone), 앤지오포이에팀(angiopoietin)-1, 아르테미시닌(artemisinin), 아트로바스타트, 바이칼레인(baicalein) (5,6,7-트라이하이드록시플라본), 벤포티아민 빌리버딘(benfotiamine biliverdin), 비스페놀 A, 캠프토테킨(campthothecin), 카르포핀(caprofin), 캅시에이트(capsiate), 카탈포시드(catalposide), 다이어리헵타노이드(diarylheptanoid) 7-(4'-하이드록시-3'-메톡시페닐)-1-페닐헵트-4-엔-3-온, DTD (4,10-다이클로로피리도[5,6:4,5]티에노[3,2- d':3,2-d]-l,2,3-다이트라이아진), E3330 (퀴논 유도체), 에폭시퀴놀 A, 플루닉신 메글루민(flunixin meglumine), 플루비프로펜, 펜톡시필린(pentoxifylline) (1 -(5'-옥소헥실) 3,7-다이메틸크산틴, PTX), 6(5H)-페난트리다이논 및 벤즈아마이드, 페닐-N-터트-부틸나이트론 (PBN), 피르페니돈(pirfenidone), 피리티온, 퀴나드릴 락소펠라스트(quinadril raxofelast), 레바미피드, 리바비린, 리파미드, 에올리프람(eolipram), 상게논 C(sanggenon C), SUN C8079, T-614, 타이르포스틴(tyrphostin) AG-126, APC0576, D609, 사이클로프로디지오신 하이드로클로라이드(cycloprodigiosin hycrochloride), 프란루카스트(pranlukast), 사이코사인(psychosine), 퀴나졸린, 레스베라트롤, RO31-8220, 사우세르네올 D(saucerneol D) 및 사우세르네올 E, 트라닐라스트(tranilast) [N-(3,4-다이메톡시신나모일) 안트라닐산], 3,4,5-트라이메톡시-4'-플루오로칼콘, 트라이프톨라이드(triptolide), 메살아민, 17-알릴아미노-17-데메톡시겔다나마이신, 6-아미노퀴나졸린 유도체, 루테올린, 테트라티오몰리브데이트, 트라이리놀레인(trilinolein), 트로글리타존(troglitazone), 워트마닌(wortmannin) 및 리파미신과 같은, 단백체(proteosome) 저해제를 포함한다. 임의의 MAP 키나제를 감소시키는 약제는 NFκB 신호전달 활성도 감소시킬 수 있고 이하에서 상술한다.
NFAT 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제
칼슘-민감성 포스파타제 칼시뉴린은 림프구 활성을 포함하는 다양한 생물학적 시스템에 포함된다. 칼시뉴린의 기질로서, 전사 factors of the NFAT 계열(family)의 전사인자는 림프구 활성에서 중요한 역할을 한다. NFAT 신호전달 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제는 두 클래스, 즉 단백질 저해제 및 저분자 저해제로 나뉠 수 있다. 몇몇 이러한 저해제들은 칼시뉴린과 결합하여 탈인산화 활성을 억제한다. 예를 들어, NFAT-유도 전사를 조절하는 약제는 임의의 후술하는 활성을 조절하는 약제를 포함한다: 칼슘 플럭스, 칼모듈린 활성, 칼시뉴린 활성, NFAT 탈인산화, NFAT 전좌 또는 NFAT 전사 활성 (도 1 참조). NFAT 핵 전좌를 예방하는 단백질 저해제는 칼시뉴린 기질 상호작용을 예방하는 AKAP79, 스캐폴드 단백질; 칼시뉴린 활성을 차단하는 CABIN 단백질; 칼시뉴린 B 상동체(homolog), CHP; 및 NFAT2 인산화 및 핵 임포트(nuclear import)를 예방하는 능력을 갖는 MCIPl, 2, 3 단백질을 포함한다. NFAT 저분자 저해제는 사이클로스포린 A 및 FK506을 포함한다. 기계론적으로, 사이클로스포린 A 및 FK506은 칼시뉴린 활성을 저해함으로써 간접적으로 NFAT를 억제한다. 이러한 약제들은 NFAT 특이적 경로를 타겟으로 하여동종반응성의(alloreactive) T 세포를 저해함으로써 면역억제제의 역할을 한다. 다른 약제들은 Th1 및 Th2 사이토카인 유전자 발현을 저해하여, NFAT의 핵 편재화(nuclear localization)를 간접적으로 저해하는 A-285222, D-43787 및 3,5-비스트라이플루오로메틸 피라졸 (BTP) 유도체를 포함한다. NFAT 신호전달을 감소시키는 다른 전형적인 약제들은 Martinez-Martinez 등, Current Medicinal Chemistry 11 : 997-1007, 미국특허출원공개 제 20040002117호 및 2002013230호 그리고 PCT WO03/0103647호에 개시된다. 임의의 MAP 키나제를 조절하는 약제는 NFAT 신호전달 활성도 조절할 수 있으며 이하에서 상세히 설명한다.
AP -1 및 Elk -1 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제
본 발명의 글루코코르티코이드 수용체 작용제는 AP-1 신호전달 경로, Elk-1 신호전달 경로 또는 양자의 신호전달 활성을 조절하는 약제와 함께 투여될 수 있다. 그러한 약제는 후술하는 활성 중 1 이상을 조절할 수 있다: PKC 활성, MLK 인산화, MAP 키나제 (예컨대, Raf, MEKl/2, Erkl/2, MEKK1-3, MEK4/7, JNK1/2, Takl, MEK3/6 또는 p38)의 활성 및/또는 인산화, DNA 결합 활성 또는 AP-1 전사 활성. 임의의 MAP 키나제를 조절하는 약제는 AP-1 및 Elk-1 신호전달 활성을 조절할 수 있으며 이하에서 상세히 설명한다.
MAP 키나제 저해제
MAP 키나제 단백질 계열이 NFκB, NFAT, AP-1 및 Elk-1 신호전달 경로에 집중되어 있기 때문에, MAP 키나제 단백질의 인산화 상태, 활성 또는 양자를 조절하는 약제는 본 명세서에 개시된 임의의 조합에서 유용하다. 따라서, Raf, Mekl/2, ERKl/2, MEKK1/3, MEK4/7, JNK, p38, MEK3/6, Takl 단백질의 임의의 저해제는, 예를 들어 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 함께 사용될 수 있다. MAP 키나제 단백질의 신호전달 활성을 조절하는 약제는, 예를 들어, Ravingerova 등, MoI. Cell Biochem. 247:127-38 (2003) 및 Chang 등, Leukemia. 17:1263-93 (2003)에 개시된다. MEK 저해제는, 예를 들어, 미국특허출원공개 제 20040087583호에 개시된다. Erk 키나제 저해제는, 예를 들어 미국특허출원공개 제 20040082631호, 20040048861호, 20040029857호, 20030225151호, 20030195241호, 20030049820호, 20020151574호, 20030158238호, 20030092714호, 20030040536호 및 20020177618호에 개시된다. Erk 키나제 저해제는 Rubinfeld 등, Methods MoI. Biol. 250:1-28 (2004) 및 Kohno 등, Prog. Cell Cycle Res. 5:219-24 (2003)에 더욱 개시된다. Raf 신호전달 경로의 신호전달 활성을 조절하는 약제는, 예를 들어 Bollag 등, Curr. Opin. Invest. Drugs. 4:1436-41 (2003)에 개시된다.
P38 저해제
N-(3-터트-부틸-1-메틸-5-피라졸일)-N'-(4-(4-피리딘일메틸)페닐)유레아, RPR 200765A, SB203580, SB202190, UX-745, UX-702, UX-850 및 SC10-469은 전형적인 p38 저해제이다. 다른 p38 저해제는 미국특허 제 5,716,972호, 5,686,455호, 5,656,644호, 5,593,992호, 5,593,991호, 5,663,334호, 5,670,527호, 5,559,137호, 5,658,903호, 5,739,143호, 5,756,499호, 5,716,955호, WO 98/25619호, WO 97/25048호, WO 99/01452호, WO 97/25047호, WO 99/01131호, WO 99/01130호, WO 97/33883호, WO 97/35856호, WO 97/35855호, WO 98/06715호, WO 98/07425호, WO 98/28292호, WO 98/56377호, WO 98/07966호, WO 99/01136호, WO 99/17776호, WO 99/01131호, WO 99/01130호, WO 99/32121호, WO 00/26209호, WO 99/58502호, WO 99/58523호, WO 99/57101호, WO 99/61426호, WO 99/59960호, WO 99/59959호, WO 00/18738호, WO 00/17175호, WO 99/17204호, WO 00/20402호, WO 99/64400호, WO 00/01688호, WO 00/07980호, WO 00/07991 호, WO 00/06563호, WO 00/12074호, WO 00/12497호, WO 00/31072호, WO 00/31063호, WO 00/23072호, WO 00/31065호, WO 00/35911 호, WO 00/39116호, WO 00/43384호, WO 00/41698호, WO 97/36587호, WO 97/47618호, WO 97/16442호, WO 97/16441 호, WO 97/12876호, WO 98/7966호, WO 98/56377호, WO 98/22109호, WO 98/24782호, WO 98/24780호, WO 98/22457호, WO 98/52558호, WO 98/52941호, WO 98/52937호, WO 98/52940호, WO 98/56788호, WO 98/27098호, WO 99/00357호, WO 98/47892호, WO 98/47899호, WO 99/03837호, WO 99/01441호, WO 99/01449호, WO 99/03484호, WO 95/09853호, WO 95/09851호, WO 95/09847호, WO 95/09852호, WO 92/12154호, WO 94/19350호, WO 99/15164호, WO 98/50356, 독일(DE) 19842833호, 일본 2000 86657호 및 미국특허출원공개 제 20040092547호, 20040082551호, 20040077682호, 20040077647호, 20040053923호, 20040053958호, 20040053942호, 20040044044호, 20040023992호, 20030216446호, 20030203905호, 20030195355호, 20030149041호, 20030149037호, 20030144529호, 20030144520호, 20030139462호, 20030134888호, 20030130319호, 20030100756호, 20030100588호, 20030096817호, 20030092717호, 20030083327호, 20030078432호, 20030078275호, 20030078166호, 20030073687호, 20030064982호, 20030064981호, 20030055068호, 20030055044호, 20030036543호, 20030004164호, 20030004161호, 20020156114호, 20020156081호, 20020115671호, 20020103245호, 20020086869호, 20020019393호, 20020016477호, 20020013354호, 20020010170호, 20010025044호 및 20010044538호에 개시된다. p38 저해제는 Rupert 등, Bioorg Med Chem Lett. 13:347-50 (2003); Dumas 등, Bioorg Med Chem Lett. 12: 1559-1562 (2002); Dumas 등, Bioorg Med Chem Lett. 10:2051-2054 (2000); Redman 등, Bioorg Med Chem Lett. 11:9-12 (2001 ); Wan 등, Bioorg Med Chem Lett. 13:1191-4 (2003); Regan 등, J Med Chem. 45:2994-3008 (2002); Liverton 등, J Med Chem. 42:2180-90 (1999); Dumas, Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 5:718-27 (2002); Stelmach 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 13:277-80 (2003); Cirillo 등, Curr. Top. Med. Chem. 2:1021-35 (2002); Pargellis 등, Curr. Opin. Investig. Drugs. 4:566-71; Dumas 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:2047-50 (2000); Trejo 등, J. Med. Chem. 46:4702-13 (2003); Mclay 등, Bioorg. Med. Chem. 9:537-54 (2001); Lee 등, Immunopharmacology 47: 185-201 (2000); Adams 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 11 : 2867-70 (2001); Regan 등, J. Med. Chem. 46:4676-4686 (2003); Laufer 등, J. Med. Chem. 45:2733-40 (2002); Colletti 등, J. Med. Chem. 46:349-52 (2003), Branger 등, J. Immunol. 168:4070-7 (2002), Henry 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:3335-40 (1998); Adams 등 Prog. Med. Chem. 38:1-60 (2001), Revesz 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 10:1261-4 (2000), Ottosen 등, J. Med. Chem. 46:5651-62 (2003); Thurmond 등, Eur. J. Biochem. 268:5747-54 (2001), Jackson 등, Curr. Top. Med. Chem. 2:1011-20 (2002); Jeohn 등, Neuroscience 114:689-97 (2002); Revesz 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:2109-12 (2002); Orchard, Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 5:713- 7 (2002); Nishikori 등, Eur. J. Pharmacol. 451 :327-33 (2002); Foster 등, Drug News Perspect. 13:488-97 (2000); Boehm 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 11 : 1123-6 (2001); Hunt 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 13:467-70 (2003); de Laszlo 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:2689-94 (1998); Mclntyre 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 12:689-92 (2002); Haddad 등, Curr. Opin. Investig. Drugs. 2: 1070-6 (2002); Collis 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 11:693-6 (20001)에 개시된다.
JNK 키나제 저해제
NK 키나제 저해제는, 예를 들어 Bogoyevitch 등, Biochim. Biophys. Acta. 1697:89-101 (2004) 및 미국특허출원공개 제 20040092562호, 20040087642호, 20040087615호, 20040082509호, 20040077877호, 20040072888호, 20040063946호, 20040023963호, 20030220330호, 20030162794호, 20030153560호, 20030108539호, 20030100549호, 20030096816호, 20030087922호, 2003073732호, 20020111353호, 20020103229호, 20020119135호 및 20040077632호에 개시된다.
다른 치료제
바람직한 경우, 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성 또는 임의의 다른 염증 반응이 감소되도록 NFκB, NFAT, Elk-1 또는 AP-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제를 포함하는 본 발명의 조합은 추가적인 치료제와 함께 제형화되거나 또는 투여될 수 있다. 그러한 약제는, 예를 들어 코르티코스테로이드, NSAID, COX-2 저해제, DMARD, 생물학적 제제, 크산틴, 항콜린성 화합물, 베타 수용체 작용제, 기관지 확장제, 비스테로이드 칼시뉴린 저해제, 비타민 D 유사체, 소랄렌, 레티노이드 및 5-아미노 살리실산을 포함한다.
코르티코스테로이드
선택적으로, 코르티코스테로이드는 본 발명의 조성물 내에 제형화되거나 또는 본 발명에 따라 치료되는 포유동물에 투여될 수 있다. 적절한 코르티코스테로이드는 1l-알파,17-알파,21-트라이하이드록시프레즌-4-엔-3,20-다이온; 11-베타,16-알파,17,21-테트라하이드록시프레즌-4-엔-3,20-다이온; 11-베타,16-알파,17,21-테트라하이드록시프레즌-1,4-디엔-3,20-다이온; 11-베타,17-알파,21-트라이하이드록시-6-알파-메틸프레즌-4-엔-3,20-다이온; 11-데하이드로코르티코스테론; 11-데옥시코르티솔; 11-하이드록시-1,4-안드로스타디엔-3,17-다이온; 11-케토테스토스테론; 14-하이드록시안드로스트-4-엔-3,6,17-트라이온; 15,17-다이하이드록시프로게스테론; 16-메틸하이드로코르티손; 17,21-다이하이드록시-16-알파-메틸프레즈나-1,4,9(11)-트라이엔-3,20-다이온; 17-알파-하이드록시프레즌-4-엔-3,20-다이온; 17-알파-하이드록시프레그네놀론; 17-하이드록시-16-베타-메틸-5-베타-프레즌-9(11)-엔-3,20-다이온; 17-하이드록시-4,6,8(14)-프레즈나트라이엔-3,20-다이온; 17-하이드록시프레즈나-4,9(11)-디엔-3,20-다이온; 18-하이드록시코르티코스테론; 18-하이드록시코르티손; 18-옥소코르티솔; 21-데옥시알도스테론; 21-데옥시코르티손; 2-데옥시엑디손; 2-메틸코르티손; 3-데하이드로엑디손; 4-프레즈넨-17-알파,20-베타,21-트라이올-3,11-다이온; 6,17,20-트라이하이드록시프레즌-4-엔-3-온; 6-알파-하이드록시코르티솔; 6-알파-플루오르프레드니솔론, 6-알파-메틸프레드니솔론, 6-알파-메틸프레드니솔론 21-아세테이트, 6-알파-메틸프레드니솔론 21-헤미석시네이트 나트륨 염, 6-베타-하이드록시코르티솔, 6-알파, 9-알파-다이플루오르프레드니솔론 21-아세테이트 17-부티레이트, 6-하이드록시코르티코스테론; 6-하이드록시덱사메타손; 6-하이드록시프레드니솔론; 9-플루오르코르티손; 알클로메타손 디프로피오네이트; 알도스테론; 알게스톤; 알파덤; 아마디논; 암시노나이드; 아나게스톤; 안드로스텐다이온; 아네코르테이브 아세테이트; 베클로메타손; 다이프로피온산베클로메타손; 다이프로피온산베클로메타손 모노하이드레이트; 베타메타손 17-발러레이트; 베타메타손 소듐 아세테이트; 베타메타손 소듐 포스페이트; 베타메타손 발러레이트; 볼라스테론; 부데소니드; 칼루스테론; 클로르마디논; 클로로프레드니손; 클로로프레드니손 아세테이트; 콜레스테롤; 클로베타솔; 클로베타솔 프로피오네이트; 클로베타손; 클로코르톨론; 클로코르톨론 피발레이트; 클로게스톤; 클로프레드놀; 코르티코스테론; 코르티솔; 코르티솔 아세테이트; 코르티솔 부티레이트; 코르티솔 시피오네이트; 코르티솔 옥타노에이트; 코르티솔 소듐 포스페이트; 코르티솔 소듐 석시네이트; 코르티솔 발러레이트; 코르티손; 코르티손 아세테이트; 코르토독손; 다투라올론; 데플라자코르트, 21-데옥시코르티솔, 데하이드로에피안드로스테론; 델마디논; 데옥시코르티코스테론; 데프로돈; 데시놀론; 데소니드; 데스옥시메타손; 덱사펜; 덱사메타손; 덱사메타손 21-아세테이트; 덱사메타손 아세테이트; 덱사메타손 소듐 포스페이트; 다이클로리손; 다이플로라손; 다이플로라손 다이아세테이트; 다이플루코르톨론; 다이하이드로엘라터리신 a(dihydroelatericin a); 도모프레드네이트; 독시베타솔; 엑디손; 엑디스테론; 엔드리손; 엔녹솔론; 플루시놀론; 플루클로로니드; 플루드로코르티손; 플루드로코르티손 아세테이트; 플루게스톤; 플루메타손; 플루메타손 피발레이트; 플루목소니드; 플루니솔라이드; 플루오시놀론; 플루오시놀론 아세토니드; 플루오시노니드; 9-플루오르코르티손; 플루오코르톨론; 플루오르하이드록시안드로스텐다이온; 플루오르메톨론; 플루오르메톨론 아세테이트; 플루옥시메스테론; 플루프레드니덴; 플루프레드니솔론; 플루란드레놀리드; 플루티카손; 프로피온산플루티카손; 포르메볼론(formebolone); 포르메스탄(formestane); 포르모코르탈; 게스토노론; 글리데리닌; 할시노니드; 하이르카노시드; 할로메타손; 할로프레돈; 할로프로게스테론; 하이드로코르티손 시피오네이트; 하이드로코르티손; 하이드로코르티손 21-부티레이트; 하이드로코르티손 아세포네이트; 하이드로코르티손 아세테이트; 하이드로코르티손 부트프레이트; 하이드로코르티손 부티레이트; 하이드로코르티손 시피오네이트; 하이드로코르티손 헤미석시네이트; 하이드로코르티손 프로부테이트; 하이드로코르티손 소듐 포스페이트; 하이드로코르티손 소듐 석시네이트; 하이드로코르티손 발러레이트; 하이드록시프로게스테론; 이노코스테론; 아이소플루프레돈; 아이소플루프레돈 아세테이트; 아이소프레드니덴; 메클로리손; 메코르톨론; 메드로게스톤; 메드록시프로게스테론; 메드리손; 메게스트롤; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤; 메프레드니손; 메탄드로스테놀론; 메틸프레드니솔론; 메틸프레드니솔론 아세포네이트; 메틸프레드니솔론 아세테이트; 메틸프레드니솔론 헤미석시네이트; 메틸프레드니솔론 소듐 석시네이트; 메틸테스토스테론; 메트리볼론; 모메타손; 모메타손 푸로에이트; 모메타손 푸로에이트 모노하이드레이트; 니손; 노메게스트롤; 노르게스토메트; 노르비니스테론; 옥시메스테론; 파라메타손; 파라메타손 아세테이트; 포나스테론; 프레드니솔라메이트; 프레드니솔론; 프레드니솔론 21-헤미석시네이트; 프레드니솔론 아세테이트; 프레드니솔론 파르네실레이트; 프레드니솔론 헤미석시네이트; 프레드니솔론-21(베타-D-글루쿠로니드); 프레드니솔론 메타설포벤조에이트; 프레드니솔론 소듐 포스페이트; 프레드니솔론 스테아글레이트; 프레드니솔론 테부테이트; 프레드니솔론 테트라하이드로프탈레이트; 프레드니손; 프레드니발; 프레드닐리덴; 프레그네놀론; 프로시노니드; 트랄로니드; 프로게스테론; 프로메게스톤; 라폰티스테론; 리멕솔론; 록시볼론; 루브로스테론; 스티조필린; 틱소코르톨; 탑테론; 트리암시놀론; 트리암시놀론 아세토니드; 트리암시놀론 아세토니드 21-팔미테이트; 트리암시놀론 다이아세테이트; 트리암시놀론 헥사아세토니드; 트리메게스돈; 투르케스테론; 및 오르트마닌(wortmannin)을 포함한다.
다양한 스테로이드/질병 조합들의 표준 권장 용량들을 아래 표 1에 나타내었다.
Figure 112006093178457-PCT00001
코르티코스테로이드에 대한 다른 표준 권장 용량들은, 예를 들어 Merck Manual of Diagnosis & Therapy (17th Ed. MH Beers 등, Merck & Co.) 및 Physician's Desk Reference 2003 (57th Ed. Medical Economics Staff 등, Medical Economics Co., 2002)에 기재되어 있다. 한 구현예에서, 투여된 코르티코스테로이드의 용량은 본 명세서에서 정의된 프레드니솔론 용량과 동일한 용량이다. 예를 들어, 코르티코스테로이드의 저용량은 프레드니솔론의 저용량과 동일한 용량으로 생각될 수 있다..
본 발명의 방법, 조성물, 키트의 코르티코스테로이드 대신에 또는 그에 더하여 부가적으로 사용될 수 있는 다른 화합물들은 A-348441 (Karo Bio), 부신피질 추출물 (GlaxoSmithKline), 알삭티드 (Aventis), 아메부코르트 (Schering AG), 아멜로메타손 (Taisho), ATSA (Pfizer), 비톨테롤 (Elan), CBP-2011 (InKine Pharmaceutical), 세바락세탐 (Novartis) CGP-13774 (Kissei), 시클레소니드 (Altana), 시클로메타손 (Aventis), 클로베타손 부티레이트 (GlaxoSmithKline), 클로프레드놀 (Hoffmann-La Roche), 콜리스마이신 A (Kirin), 쿠쿠르비타신 E (NIH), 데플라자코르트 (Aventis), 데프로돈 프로피오네이트 (SSP), 덱사메타손 아세푸레이트 (Schering-Plough), 덱사메타손 리놀레이트 (GlaxoSmithKline), 덱사메타손 발러레이트 (Abbott), 디플루프레드네이트 (Pfizer), 도모프레드네이트 (Hoffmann-La Roche), 에비라티드 (Aventis), 에티프레드놀 디클로아세테이트 (IVAX), 플루아자코르트 (Vicuron), 플루목소니드 (Hoffmann-La Roche), 플루오코르딘 부틸 (Schering AG), 플루오코르톨론 모노하이드레이트 (Schering AG), GR-250495X (GlaxoSmithKline), 할로메타손 (Novartis), 할로프레돈 (Dainippon), HYC-141 (Fidia), 이코메타손 엔부테이트 (Hovione), 이트로시노니드 (AstraZeneca), L-6485 (Vicuron), 리포코르트 (Draxis Health), 로시코르톤 (Aventis), 메클로리손 (Schering-Plough), 나플로코르트 (Bristol-Myers Squibb), NCX-1015 (NicOx), NCX-1020 (NicOx), NCX-1022 (NicOx), 니코코르토니드 (Yamanouchi), NIK-236 (Nikken Chemicals), NS-126 (SSP), Org-2766 (Akzo Nobel), Org-6632 (Akzo Nobel), P16CM, 프로필메스테롤론 (Schering AG), RGH-1113 (Gedeon Richter), 로플레포니드 (AstraZeneca), 로플레포니드 팔미테이트 (AstraZeneca), RPR-106541 (Aventis), RU-26559 (Aventis), Sch-19457 (Schering-Plough), T25 (Matrix Therapeutics), TBI-PAB (Sigma-Tau), 티카베손 프로피오네이트 (Hoffmann-La Roche), 티플루아돔 (Solvay), 티모베손 (Hoffmann-La Roche), TSC-5 (Takeda) 및 ZK-73634 (Schering AG)이다.
질병-특이적 치료제( Disease - specific therapeutic agents )
만성폐쇄폐병
한 구현예에서, 본 발명의 방법, 조성물, 및 키트는 만성폐쇄폐병(COPD)의 치료에 이용된다. 필요한 경우, COPD를 치료하는데 전형적으로 이용되는 1 이상의 약제들이 본 발명의 방법, 조성물, 키트의 코르티코스테로이드 대신에 또는 그에 더하여 부가적으로 이용될 수 있다. 그러한 약제는 크산틴 (예컨대, 테오필린), 항콜린성 화합물 (예컨대, 이프라트로피움, 티오트로피움), 생물학적 제제, 저분자 면역조절제, 및 베타 수용체 작용제/기관지확장제 (예컨대, 이부테롤 설페이트, 비톨테롤 메실레이트, 에피네프린, 포르모테롤 푸마레이트, 이소프로테로놀, 레발부테롤 염산, 메타프로테레놀 설페이트, 피르부테롤 아세테이트, 살메테롤 크시나포에이트, 및 터부탈린)을 포함한다.
건선
본 발명의 방법, 조성물, 및 키트는 건선의 치료에 이용될 수 있다. 필요한 경우, 건선의 치료에 전형적으로 이용된 1 이상의 건선 치료제가 본 발명의 방법, 조성물, 키트의 코르티코스테로이드 대신에 또는 그에 더하여 부가적으로 이용될 수 있다. 그러한 약제는 생물학적 제제 (예컨대, 알레파셉트, 인플릭사맙, 아델리무맙, 에팔리주맙, 에타너셉트, 및 CDP-870), 저분자 면역조절제 (예컨대, VX 702, SCIO 469, 도라마피모드, RO 30201195, SCIO 323, DPC 333, 프라날카산, 마이코페놀레이트, 및 메리메포딥), 비스테로이드 이뮤노필린-의존성 면역억제제 (예컨대, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 피메크롤리무스, 및 ISAtx247), 비타민 D 유사체 (예컨대, 칼시포트리엔, 칼시포트리올), 소랄렌 (예컨대, 메톡살렌), 레티노이드 (예컨대, 아시트레틴, 타조레텐), DMARDs (예컨대, 메토트렉세이트), 및 안트랄린을 포함한다. 따라서, 한 구현예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제, NFκB, NFAT, AP-1, Elk-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제 및 건선치료제의 조합, 및 그에 의한 건선의 치료 방법을 특징으로 한다.
염증성 장질환
본 발명의 방법, 조성물, 및 키트는 염증성 장질환의 치료에 이용될 수 있다. 필요한 경우, 염증성 장질환의 치료에 전형적으로 이용되는 1 이상의 약제는 본 발명의 방법, 조성물, 키트의 코르티코스테로이드 대신에 또는 그에 더하여 부가적으로 이용될 수 있다. 그러한 약제는 생물학적 제제 (예컨대, 인플릭사맙, 아델리무맙, 및 CDP-870), 저분자 면역조절제 (예컨대, VX 702, SCIO 469, 도라마피모드, RO 30201195, SCIO 323, DPC 333, 프라날카산, 마이코페놀레이트, 및 메리메포딥), 비스테로이드 이뮤노필린-의존성 면역억제제 (예컨대, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 피메크롤리무스, 및 ISAtx247), 5-아미노 살리실산 (예컨대, 메살아민, 설파살라진, 발사라자이트 디소디움, 및 올살라진 나트륨), DMARDs (예컨대, 메토트렉세이트 및 아자티오프린) 및 알로세트론을 포함한다. 따라서, 한 구현예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제, NFκB, NFAT, AP-1, Elk-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제 및 임의의 상기 약제의 조합, 및 그에 의한 염증성 장질환의 치료 방법을 특징으로 한다.
류마티스 관절염
본 발명의 방법, 조성물, 및 키트는 류마티스 관절염의 치료에 이용될 수 있다. 필요한 경우, 류마티스 관절염의 치료에 전형적으로 이용되는 1 이상의 약제는 본 발명의 방법, 조성물, 키트의 코르티코스테로이드 대신에 또는 그에 더하여 부가적으로 이용될 수 있다. 그러한 약제는 NSAIDs (예컨대, 나프록센나트륨, 디클로페낙나트륨, 디클로페낙칼륨, 아스피린, 설린닥, 디플루니살, 피록시캄, 인도메타신, 이부프로펜, 나부메톤, 트리살리살산마그네슘콜린, 살리실산나트륨, 살리실살리실산(살살레이트), 페노프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 메클로페남산나트륨, 멜록시캄, 옥사프로진, 설린닥 및 톨메틴), COX-2 저해제 (예컨대, 로페콕시브, 셀레콕시브, 발데콕시브, 및 루미라콕시브), 생물학적 제제 (예컨대, 인플릭사맙, 아델리무맙, 에타너셉트, CDP-870, 리툭시맙, 및 아틀리주맙), 저분자 면역조절제 (예컨대, VX 702, SCIO 469, 도라마피모드, RO 30201195, SCIO 323, DPC 333, 프라날카산, 마이코페놀레이트, 및 메리메포딥), 비스테로이드 이뮤노필린-의존성 면역억제제 (예컨대, 사이클로스포린, 타크롤리무스, 피메크롤리무스, 및 ISAtx247), 5-아미노 살리실산 (예컨대, 메살아민, 설파살라진, 발사라자이트 디소디움, 및 올살라진 나트륨), DMARDs (예컨대, 메토트렉세이트, 레프루노미드, 미노사이클린, 오라노핀, 금 소듐 시오말레이트, 오로티오글루코스, 및 아자티오프린), 하이드록시클로로퀸 설페이트, 및 페니실라민을 포함한다. 따라서, 한 구현예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제, NFκB, NFAT, AP-1, Elk-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제 및 임의의 상기 약제의 조합, 및 그에 의한 류마티스 관절염의 치료 방법을 특징으로 한다.
천식
본 발명의 방법, 조성물, 및 키트는 천식의 치료에 이용될 수 있다. 필요한 경우, 천식의 치료에 전형적으로 이용되는 1 이상의 약제는 본 발명의 방법, 조성물, 키트의 코르티코스테로이드 대신에 또는 그에 더하여 부가적으로 이용될 수 있다. 그러한 약제는 베타 2 작용제/기관지확장제/류코트리엔 조절제 (예컨대, 자필루카스트, 몬테루카스트, 및 자일류톤), 생물학적 제제 (예컨대, 오말리주맙), 저분자 면역조절제, 항콜린성 화합물, 크산틴, 에페드린, 구아이페네신, 크로몰린 나트륨, 네도크로밀 나트륨, 및 요오드화칼륨을 포함한다. 따라서, 한 구현예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제, NFκB, NFAT, AP-1, Elk-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제 및 임의의 상기 약제의 조합, 그에 의한 천식의 치료 방법을 특징으로 한다.
비스테로이드 이뮤노필린 -의존성 면역억제제
한 구현예에서, 본 발명은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제, NFκB, NFAT, AP-1, Elk-1 신호전달 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제 및 비스테로이드 이뮤노필린-의존성 면역억제제(NsIDI)를 이용하는 방법, 조성물 및 키트를 특징으로 한다.
건강한 사람들에서 면역계는 정상 세포들은 그대로 둔 채 감염균(infectious microbes) 및 비정상 세포 유형을 표적으로 삼기 위하여, B-세포 및 T-세포와 같은, 세포작동기들(cellular effectors)을 사용한다. 자가면역질환 또는 이식된 장기를 지닌 사람에서, 활성화된 T-세포들은 건강한 조직들을 손상시킨다. 칼시뉴린 저해제 (예컨대, 사이클로스포린들, 타크롤리무스, 피메크롤리무스) 및 라파마이신은 T-세포를 포함하는 많은 종류의 면역조절 세포들을 표적으로 하여 장기 이식 및 자가면역질환에서 면역 반응을 억제한다.
사이클로스포린
사이클로스포린은 면역억제제 역할을 하는 사이클릭 올리고펩티드의 클래스를 포함하는 진균성 대사산물(fungal metabolites)이다. 사이클로스포린 A는 11개의 아미노산으로 이루어지는 소수성의 사이클릭 폴리펩티드이다. 그것은 세포내 수용체 사이클로필린과 결합하여 복합체를 형성한다. 사이클로스포린/사이클로필린 복합체는 Ca2 +-칼모듈린-의존성 세린-트레오닌-특이성 단백질 포스파타제인 칼시뉴린에 결합하여 칼시뉴린을 억제한다. 칼시뉴린은 T-세포 활성이 요구되는 신호전달 이벤트를 매개한다(Schreiber 등, Cell 70:365-368, 1991에서 검토됨). 사이클로스포린들 및 그들의 기능 및 구조 유사체는 항원-유발 신호전달(antigen-triggered signal 형질도입)을 저해함으로써 T 세포-의존성 면역 반응을 억제한다. 이러한 저해는 IL-2와 같은 전염증성 사이토카인의 발현을 감소시킨다.
많은 다른 사이클로스포린 (예컨대, 사이클로스포린 A, B, C, D, E, F, G, H, 및 I)은 곰팡이에 의해 생성된다. 사이클로스포린 A는 Novartis사의 NEORAL 상표로 시판되고 있다. 사이클로스포린 A 구조 및 기능 유사체는 1 이상의 불소화된 아미노산을 갖는 사이클로스포린 (예컨대, 미국 특허 제5,227,467호에 개시된); 변형된 아미노산을 갖는 사이클로스포린 (예컨대, 미국 특허 제5,122,511호 및 제4,798,823호에 개시된); 및 ISAtx247와 같은, 중수소화된 사이클로스포린(미국 특허 출원 공개 제2002/0132763호 A1에 설명된)을 포함한다. 추가적인 사이클로스포린 유사체는 미국 특허 제6,136,357호, 제4,384,996호, 제5,284,826호, 및 제5,709,797호에 개시되어 있다. 사이클로스포린 유사체는 D-Sar(α-SMe)3 Val2-DH-Cs(209-825), Allo-Thr-2-Cs, 노르발린-2-Cs, D-AIa(3-아세틸아미노)-8-Cs, Thr-2-Cs, 및 D-MeSer-3-Cs, D-Ser(O-CH2CH2-OH)-8-Cs, 및 D-Ser-8-Cs을 포함하지만, 반드시 이들로 제한되는 것은 아니며, 그것은 Cruz 등 (Antimicrob. Agents Chemother. 44:143-149, 2000)에 설명되어 있다.
사이클로스포린은 물의 존재 하에서(예를 들어 체액과 접촉시에) 매우 소수성이며 쉽게 침전된다. 향상된 생체이용률(bioavailability)을 갖는 사이클로스포린 제형을 제공하는 방법은 미국 특허 제4,388,307호, 6,468,968호, 5,051,402호, 5,342,625호, 5,977,066호, 및 6,022,852호에 개시되어 있다. 사이클로스포린 미세유탁액(microemulsion) 조성물은 미국 특허 제5,866,159호, 5,916,589호, 5,962,014호, 5,962,017호, 6,007,840호, 및 6,024,978호에 개시되어 있다.
사이클로스포린은 정맥내로 또는 경구로 투여될 수 있으나, 경구 투여가 바람직하다. 사이클로스포린 A의 소수성을 극복하기 위하여, 정맥 내의 사이클로스포린 A는 투여 전에 희석되어야만 하는 에탄올-폴리옥시에틸화된 피마자유 비히클(vehicle) 내에 제공될 수 있다. 사이클로스포린 A는, 예를 들면, 25mg 또는 100mg 정제 내의 미세유탁액으로, 또는 100mg/ml 경구 용액(NEORAL)으로 제공될 수 있다.
전형적으로, 경구 사이클로스포린의 환자 용량은 상기 환자의 상태에 따라 변하나, 선행 기술분야 치료요법의 몇몇의 표준 권장 용량을 본 명세서에 기재하였다. 장기 이식을 받는 환자들은 전형적으로 12 mg/kg/일 및 15 mg/kg/일 사이의 양으로 경구 사이클로스포린 A의 초기 용량(initial dose)을 투여받는다. 그 후, 용량은 서서히 7 내지 12 mg/kg/일 유지 용량(maintenance dose)에 도달할 때까지 1주일에 5%씩 감소된다. 2 내지 6 mg/kg/일 정맥내 투여는 대부분의 환자들에게 바람직하다. 크론병 또는 궤양성 대장염을 가진 것으로 진단된 환자들에게, 6 내지 8 mg/kg/일 용량이 일반적으로 투여된다. 전신홍반루푸스로 진단된 환자들에게, 2.2 내지 6.0 mg/kg/일 용량이 일반적으로 투여된다. 건선 또는 류마티스 관절염에는, 0.5 내지 4 mg/kg/일 용량이 전형적이다. 다른 유용한 용량은 0.5 내지 5 mg/kg/일, 5 내지 10 mg/kg/일, 10 내지 15 mg/kg/일, 15 내지 20 mg/kg/일, 또는 20 내지 25 mg/kg/일을 포함한다. 종종 사이클로스포린은, 글루코코르티코이드와 같은 다른 면역억제제와 함께 투여된다. 추가적인 정보를 표 2에 나타내었다.
Figure 112006093178457-PCT00002
범례
CsA = 사이클로스포린 A
RA = 류마티스 관절염
UC = 궤양성 대장염
SLE = 전신홍반루푸스
타크롤리무스
FK506로도 알려진, 타크롤리무스 (PROGRAF, Fujisawa)는 T 세포의 세포 내 신호전달 경로를 표적으로 삼는 면역억제제이다. 타크롤리무스는 사이클로필린과 구조적으로 관계가 없는 세포 내 단백질 FK506 결합단백질(FKBP-12)에 결합한다(Harding 등 Nature 341:758-7601, 1989; Siekienka 등 Nature 341:755-757, 1989; 및 Soltoff 등, J. Biol. Chem. 267:17472-17477, 1992). FKBP/FK506 복합체는 칼시뉴린에 결합하여 칼시뉴린의 포스파타제 활성을 저해한다. 이 저해는 전염증성 사이토카인 (예컨대, IL-2, 감마 인터페론) 생성 및 T 세포 활성에 필요한 유전자 전사를 시작하는 핵 성분인, 활성화된 T 세포의 핵인자(NFAT)의 탈인산화 및 핵전위를 차단한다. 따라서, 타크롤리무스는 T 세포 활성을 저해한다.
타크롤리무스는 스트렙토마이세스 츠쿠바엔시스( Streptomyces tsukubaensis )에 의하여 생성되는 마크로라이드 항생제(macrolide antibiotic)이다. 그것은 면역계를 억제하고 이식된 장기의 생존을 연장시킨다. 그것은 일반적으로 경구 및 주사 제형으로 이용가능하다. 타크롤리무스 캡슐은 젤라틴 캡슐 셸 내에 0.5 mg, 1 mg, 또는 5 mg의 무수 타크롤리무스를 포함한다. 주사 제형은 주입 전에 0.9% 염화나트륨 또는 5% 포도당으로 희석된 알콜 및 피마자유 내 5 mg 무수 타크롤리무스를 포함한다. 경구 투여가 바람직하지만, 경구용 캡슐을 섭취할 수 없는 환자에게는 주사가능한 타크롤리무스를 투여한다. 초기 용량은 이식 후 6시간 이후에 지속적인 정맥내 주입에 의하여 투여되어야 한다.
타크롤리무스 및 타크롤리무스 유사체는 Tanaka 등, (J. Am. Chem. Soc., 109:5031, 1987)에 의해 설명되고 미국 특허 제4,894,366호, 4,929,611호, 및 4,956,352호에 개시되어 있다. FR-900520, FR-900523, 및 FR-900525를 포함하는 FK506-관련 화합물들은 미국 특허 제5,254,562호에 개시되어 있고; O-아릴, O-알킬, O-알케닐, 및 O-알키닐마크로라이드는 미국 특허 제5,250,678호, 제532,248호, 제5,693,648호에 개시되어 있으며; 아미노 O-아릴 마크로라이드는 미국 특허 제5,262,533호에 개시되어 있고; 알킬리덴 마크로라이드는 미국 특허 제5,284,840호에 개시되어 있고; N-헤테로아릴, N-알킬헤테로아릴, N-알케닐헤테로아릴, 및 N-알키닐헤테로아릴 마크로라이드는 미국 특허 제5,208,241호에 개시되어 있고; 아미노마크로라이드 및 그 유도체들은 미국 특허 제5,208,228호에 개시되어 있고; 플루오르마크로라이드는 미국 특허 제5,189,042호에 개시되어 있고; 아미노 O-알킬, O-알케닐, 및 O-알키닐마크로라이드는 미국 특허 제5,162,334호에 개시되어 있고; 및 할로마크로라이드는 미국 특허 제5,143,918호에 개시되어 있다.
제안된 용량은 환자의 상태에 따라 변화될 것이나, 선행 기술분야에서 사용된 표준 권장 용량을 후술한다. 전형적으로, 크론병 또는 궤양성 대장염을 가진 것으로 진단된 환자들에게 0.1 내지 0.2 mg/kg/일 경구 타크롤리무스를 투여한다. 장기를 이식받은 환자들에게는 전형적으로 0.1 내지 0.2 mg/kg/일 경구 타크롤리무스를 투여한다. 류마티스 관절염 치료를 받고 있는 환자들에게는 전형적으로 1 내지 3 mg/일의 경구 타크롤리무스를 투여한다. 건선 치료의 경우에는, 0.01 내지 0.15 mg/kg/일의 경구 타크롤리무스를 환자에게 투여한다. 아토피 피부염은 0.03 내지 0.1% 타크롤리무스가 함유된 크림을 1일 2회 환부에 바름으로써 치료될 수 있다. 경구 타크롤리무스 캡슐을 복용한 환자들은 전형적으로 이식 후 6시간, 또는 정맥 내 타크롤리무스 주입이 중단된 후 8 내지 12시간 이후에 최초용량(first dose)을 받는다. 다른 제안된 타크롤리무스 용량은 0.005 내지 0.01 mg/kg/일, 0.01 내지 0.03 mg/kg/일, 0.03 내지 0.05 mg/kg/일, 0.05 내지 0.07 mg/kg/일, 0.07 내지 0.10 mg/kg/일, 0.10 내지 0.25 mg/kg/일, 또는 0.25 내지 0.5 mg/kg/일을 포함한다.
타크롤리무스는 혼합-기능 산화효소계(mixed-function oxidase system), 특히, 사이토크롬 P-450계에 의해 광범위하게 대사된다. 대사의 주요한 메커니즘은 탈메틸화 및 하이드록실화이다. 다양한 타크롤리무스 대사산물은 면역억제 생물학적 활성을 나타낼 것 같지만, 13-디메틸 대사산물은 타크롤리무스와 같은 활성을 갖는 것으로 보고된다.
피메크롤리무스 및 아스코마이신 유도체
아스코마이신은 FK506의 폐쇄 구조 유사체(close structural analog)이고 잠재적인 면역억제제이다. 그것은 FKBP-12에 결합하여 및 프롤린 로마타제(proline rotamase) 활성을 억제한다. 아스코마이신-FKBP 복합체는 칼시뉴린, 타입 2B 포스파타제를 저해한다.
피메크롤리무스 (SDZ ASM-981로도 알려진)는 아스코마이신의 33-에피-클로로 유도체이다. 피메크롤리무스는 스트렙토마이세스 하이그로스코피쿠스 바 아스코미에투스(Streptomyces hygroscopicus var . ascomyceitus ) 계통에 의해 생성된다. 타크롤리무스와 같이, 피메크롤리무스(ELIDELTM Novartis)는 FKBP-12에 결합하고, 칼시뉴린 포스파타제 활성을 저해시키며, 초기 사이토카인의 전사를 차단함으로써 T-cell의 활성화를 저해한다. 특히, 피메크롤리무스는 IL-2 생성 및 다른 전염증성 사이토카인의 방출을 저해한다.
피메크롤리무스 구조 및 기능 유사체는 미국 특허 제6,384,037호에 개시되어 있다. 피메크롤리무스는 특히 아토피 피부염의 치료에 유용하다. 피메크롤리무스는 일반적으로 1% 크림으로 이용할 수 있다. 개개의 용량 조절은 상기 환자의 상태에 따라 달라질 것이나, 몇몇의 표준 권장 용량을 후술한다. 경구 피메크롤리무스를 건선 또는 류마티스 관절염의 치료를 위해 40 내지 60 mg/일의 양으로 투여할 수 있다. 크론병 또는 궤양성 대장염의 치료를 위해 80 내지 160 mg/일의 양으로 피메크롤리무스를 투여할 수 있다. 장기이식을 한 환자들에게 160 내지 240 mg/일의 피메크롤리무스를 투여할 수 있다. 전신홍반루푸스로 진단된 환자들에게 40 내지 120 mg/일의 피메크롤리무스를 투여할 수 있다. 다른 유용한 피메크롤리무스의 용량은 0.5 내지 5 mg/일, 5 내지 10 mg/일, 10 내지 30 mg/일, 40 내지 80 mg/일, 80 내지 120 mg/일, 또는 심지어 120 내지 200 mg/일을 포함한다.
라파마이신
라파마이신 (Rapamune® 시롤리무스, Wyeth)은 스트렙토마이세스 하이그로스코피쿠스(Streptomyces hygroscopicus)에 의해 생성되는 사이클릭 락톤이다. 라파마이신은 T 림프구 활성 및 증식을 저해하는 면역억제제이다. 사이클로스포린 및 타크롤리무스와 같이, 라파마이신은 이뮤노필린 FKBP-12와 복합체를 형성하나, 라파마이신-FKBP-12 복합체는 칼시뉴린 포스파타제 활성을 저해하지 않는다. 라파마이신-이뮤노필린 복합체는 라파마이신의 포유동물 타겟(mammalian targetof rapamycin:mTOR), 즉 세포-주기 진행에 요구되는 키나아제에 결합하여 억제한다. mTOR 키나아제 활성의 저해는 T 세포 활성 및 전염증성 사이토카인 분비를 차단한다.
라파마이신 구조 및 기능 유사체는 모노- 및 디아실화된 라파마이신 유도체 (미국 특허 제4,316,885호); 라파마이신 수용성 전구약제 (미국 특허 제4,650,803호); 카르복실산 에스테르 (PCT 공개 제WO 92/05179호); 카르바메이트 (미국 특허 제5,118,678호); 아미드 에스테르 (미국 특허 제5,118,678호); 바이오틴 에스테르 (미국 특허 제5,504,091호); 불소화된 에스테르 (미국 특허 제5,100,883호); 아세탈 (미국 특허 제5,151,413호); 실릴 에테르 (미국 특허 제5,120,842호); 이환 유도체 (미국 특허 제5,120,725호); 라파마이신 이합체 (미국 특허 제5,120,727호); O-아릴, O-알킬, 0-알케닐 및 0-알키닐 유도체 (미국 특허 제5,258,389호); 및 중수소화된 라파마이신 (미국 특허 제6,503,921호)을 포함한다. 부가적인 라파마이신 유사체는 미국 특허 제5,202,332호 및 5,169,851호에 개시되어 있다.
에버롤리무스(40-O-(2-하이드록시에틸)라파마이신; CERTICANTM; Novartis)는 구조적으로 라파마이신에 관련된 면역억제 마크로리드이며, 사이클로스포린 A 와 함께 투여할 경우 급성 장기이식거부를 예방하는데 특히 효과적임이 알려졌다.
라파마이신은 액상 및 정제 제형(tablet formulations)의 경구 투여용으로 시판되고 있다. RAPAMUNETM 액체는 투여 전에 물 또는 오렌지 주스로 희석된 1 mg/mL 라파마이신을 포함한다. 1 또는 2 mg의 라파마이신을 포함하는 정제 또한 시판되고 있다. 라파마이신은 이식 후 가능한 한 빨리 1일 1회 투여하는 것이 바람직하다. 그것은 경구 투여 후 신속하게 완전히 흡수된다. 전형적으로, 라파마이신의 환자 용량은 상기 환자의 상태에 따라 달라질 것이나, 몇몇 표준 권장 용량을 아래에 제시하였다. 라파마이신의 초기 부하용량은 6 mg이다. 그 이후의 0.5-2 mg/일의 유지 용량이 전형적이다. 그 대신, 3 mg, 5 mg, 10 mg, 15 mg, 20 mg, 또는 25 mg의 부하용량이 1일 1 mg, 3 mg, 5 mg, 7 mg, 또는 10 mg 유지 용량과 함께 사용될 수 있다. 몸무게 40 kg미만의 환자들의 경우, 라파마이신 용량은 전형적으로 체표면적에 근거하여 조절되며; 일반적으로 3 mg/m2/일 부하용량 및 1 mg/m2/일 유지 용량이 투여된다.
펩티드 모이어티
NFAT, NFκB, AP-1 또는 Elk-1 신호전달 경로를 손상시키는, 천연, 합성 또는 화학적으로 변형된 펩티드, 펩티드 유사물질, 펩티드 분절은 본 발명을 실시할 경우 사용하기에 적합하다. NFAT 활성 및 NFAT 전사인자를 억제함으로써 칼시뉴린 저해제의 역할을 하는 펩티드의 실시예는, 예를 들면, Aramburu 등, Science 285:2129-2133, 1999) 및 Aramburu 등, Mol. Cell 1:627-637, 1998)에 설명되어 있다. 칼시뉴린 저해제의 클래스로서, 이러한 약제들은 본 발명의 방법에 유용하다.
저해제 예들은 표적 단백질의 양 또는 RNA 레벨을 감소시키는 화합물 (예컨대, 안티센스 화합물, dsRNA, 리보좀) 및 파트너 (예컨대, 우성 음성 단백질 또는 그를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드)와 결합하기 위하여 내생의(endogenous) 유사분열 키네신 또는 단백질 티로신 포스파타제와 경쟁하는 화합물을 포함한다.
안티센스 화합물
유사분열 키네신 및/또는 단백질 티로신 인산가수분해효소의 생물학적 활성은 표적 단백질을 인코딩하는 RNA에 대한 안티센스 화합물의 이용을 통해서 감소될 수 있다. 신호전달 분자의 발현을 감소시키는 안티센스 화합물을 표준 기술을 사용하여 동정할 수 있다. 예를 들면, 신호전달 분자의 표적 mRNA의 접근가능한 영역은 MFOLD (M. Zuker, D. H. Mathews & D. H. Turner, Algorithms and Thermodynamics for RNA Secondary Structure Prediction: A Practical Guide. In: RNA Biochemistry and Biotechnology, J. Barciszewski & B. F. C. Clark, eds. , NATO ASI Series, Kluwer Academic Publishers, (1999) )같은 RNA 2차구조 폴딩(folding)프로그램을 사용하여 예측될 수 있다. mRNAm의 예측한 가장 안정적인 폴드의 5%내에서 자유 에너지값을 갖는 부-최적(sub-optimal) 폴드는 200 염기의 윈도우(window)를 이용하는 것으로 예상되는데 이러한 윈도우 안에서 하나의 잔기는 상보적인 염기를 찾아 염기쌍 결합을 형성한다. 염기쌍을 형성하지 않는 열린 영역(open regions)은 각각의 부-최적 폴드에 함께 합해지고, 열린 것으로 예측되는 영역들은 안티센스 핵염기 과합체(nucleobase oligomers)에 대한 결합에 더 접근가능한 것으로 간주된다. 안티센스 디자인의 다른 방법은 예를 들면, 미국 특허 제6,472,521호, Antisense Nucleic Acid Drug Dev.1997 7: 439-444, Nucleic Acids Research 28: 2597-2604,2000, 및 Nucleic Acids Research 31: 4989-4994,2003에 개시되어 있다.
RNA 간섭
신호전달 분자의 생물학적 활성은 예를 들면, 당해 신호전달 분자에 대한 이중가닥 RNA(dsRNA) 또는 작은 간섭 RNA(siRNA)를 이용하는 RNA 간섭(RNAi)의 이용을 통해 감소될 수 있다 (예컨대, Miyamoto 등 , Prog. Cell Cycle Res. 5: 349-360,2003 ; 미국 특허 출원 공개 제2003/0157030호 참조). 그러한 간섭하는 RNAs를 디자인하는 방법은 본 발명이 속하는 기술분야에 알려져 있다. 예를 들면, 간섭하는 RNA를 디자인하는 소프트웨어(software)는 Oligoengine (Seattle, WA)으로부터 얻을 수 있다.
우성음성 단백질
본 발명이 속하는 기술분야의 전문가는 우성음성 유사분열 키네신 및 단백질 티로신 인산가수분해효소를 만드는 방법을 알 것이다. 그러한 우성음성 단백질은, 예를 들면, Gupta 등, J. Exp. Med. , 186:473-478, 1997; Maegawa 등 , J. Biol. Chem. 274: 30236-30243,1999 ; Woodford- Thomas 등, J. Cell Biol. 117: 401-414,1992 에 설명되어 있다.
전염증성 사이토카인-억제 활성에 대한 분석
본 발명의 조합의 치료적 효능 또는 소염 효능은 본 발명이 속하는 기술분야에 공지된 표준 기술에 의하여 또는 본 명세서에 기재된 바와 같이 정해질 수 있다. 예를 들어, 표적된 신호전달 경로에 관계된 임의의 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성은 본 발명이 속하는 기술분야에 공지된 표준 기술 (예컨대, 인산화 연구, 웨스턴 및 노던 분석, ELISA 및 면역조직화학(immunohistochemistry))에 의해 정해질 수 있다. 신호전달 분자의 발현 또는 생물학적 활성이 비처리된 대조군에서의 발현 생물학적 활성에 비하여 감소된다면, 상기 조합은 본 발명에 따라 유용한 것으로 동정된다. 이러한 경우에서, 신호전달 분자는 신호전달 분자의 표적된 위치의 다운스트림 역할을 한다. 필요한 경우, NFAT, NFκB, AP-1 및 Elk-1의 발현 레벨 또는 생물학적 활성 또한 정해질 수 있다. 신호전달 경로 내에서 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성의 검출뿐만 아니라, 본 발명의 조합의 소염 효능은 전-염증성 사이토카인의 생성 및 방출을 분석함으로써 정해질 수 있다 (본 명세서에 기재된 바와 같디). TNF-α 생성은 예를 들어,TNF-α 전사를 측정함으로써 또는 ELISA에 의해 TNF-α 단백질 레벨을 측정함으로써 평가될 수 있다. 화합물 희석화 매트릭스(Compound dilution matrices)는 후술하는 바와 같이 TNFα, IFNγ, IL-I β, IL-2, IL-4 및 IL-5의 억제에 대하여 평가될 수 있다.
TNF α
폴리스티렌 384-웰 플레이트 (NalgeNunc)의 각각의 웰 내에 포함된 100 μl 서스펜션의 희석된 인간 백혈구는 최종 농도가 2 μg/mL인 리포폴리사카라이드 (Sigma L-4130)의 처리에 의해 TNFα를 분비하도록 자극된다. 자극될 때 다양한 농도의 각각의 테스트 화합물이 첨가된다. 가습 인큐베이터(humidified incubator) 내에서 37℃ 상태로 16 내지 18 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 원심분리하여 상청액(supernatant)을 항-TNFα 항체 (PharMingen, #551220)로 코팅된 흰색의 불투명 폴리스티렌 384-웰 플레이트(NalgeNunc, Maxisorb)로 옮겼다. 2 내지 4시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 0.1% Tween 20을 포함하는 PBS로 세정하였고(Tecan Powerwasher 384), 바이오틴-표지된(PharMingen, #554511) 항-TNFα 항체 및 스트렙타비딘(streptavidin)과 결합된 HRP(PharMingen, #13047E)와 함께 1시간의 추가 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 0.1% Tween 20/PBS로 세정한 후, HRP-발광 물질을 각각의 웰에 첨가하고 각각의 웰의 광도를 LJL Analyst 플레이트 조도계(luminometer)를 사용하여 측정하였다.
IFN γ
폴리스티렌 384-웰 플레이트 (NalgeNunc)의 각각의 웰 내에 포함된 100 μl 서스펜션의 희석된 인간 백혈구는 최종 농도가 10 ng/mL인 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 (Sigma, P-1585) 및 750 ng/mL인 이오노마이신 (Sigma, I-0634)의 처리에 의해 IFNγ를 분비하도록 자극된다. 자극될 때 다양한 농도의 각각의 테스트 화합물이 첨가된다. 가습 인큐베이터 내에서 37℃ 상태로 16 내지 18 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 원심분리하여 상청액을 항-IFNγ 항체 (Endogen,#M-100A-E)로 코팅된 흰색의 불투명 384-웰 플레이트(NalgeNunc, Maxisorb)로 옮겼다. 2 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 0.1% Tween 20 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트)을 포함하는 PBS로 세정하였고(Tecan Powerwasher 384), 바이오틴 표지된(Endogen, M701B) 항-IL-1 항체 및 스트렙타비딘과 결합된 홍당무과산화효소(horse radish peroxidase: HRP)(PharMingen, #13047E)와 함께 추가 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 0.1% Tween 20/PBS로 세정한 후, HRP-발광 물질을 각각의 웰에 첨가하고 각각의 웰의 광도를 LJL Analyst 플레이트 조도계를 사용하여 측정하였다.
IL -1β
폴리스티렌 384-웰 플레이트 (NalgeNunc)의 각각의 웰 내에 포함된 100 μl 서스펜션의 희석된 인간 백혈구는 최종 농도가 2 μg/mL인 리포폴리사카라이드 (Sigma L-4130)의 처리에 의해 IL-1β를 분비하도록 자극된다. 자극될 때 다양한 농도의 각각의 테스트 화합물이 첨가된다. 가습 인큐베이터 내에서 37℃ 상태로 16 내지 18 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 원심분리하여 상청액을 항-IL-lβ 항체 (R&D, #MAB-601)로 코팅된 흰색의 불투명 384-웰 플레이트(NalgeNunc, Maxisorb)로 옮겼다. 2 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 0.1% Tween 20을 포함하는 PBS로 세정하였고(Tecan Powerwasher 384), 바이오틴 표지된 (R&D, BAF-201) 항-IL-1β 항체 및 스트렙타비딘과 결합된 HRP (PharMingen, #13047E)와 함께 추가 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 0.1% Tween 20/PBS로 세정한 후, HRP-발광 물질을 각각의 웰에 첨가하고 각각의 웰의 광도를 LJL Analyst 플레이트 조도계를 사용하여 측정하였다.
IL -2
폴리스티렌 384-웰 플레이트 (NalgeNunc)의 각각의 웰 내에 포함된 100 μl 서스펜션의 희석된 인간 백혈구는 최종 농도가 10 ng/mL인 포르볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 (Sigma, P-1585) 및 750 ng/mL인 이오노마이신 (Sigma, I-0634)의 처리에 의해 IFNγ를 분비하도록 자극된다. 자극될 때 다양한 농도의 각각의 테스트 화합물이 첨가된다. 가습 인큐베이터 내에서 37℃ 상태로 16 내지 18 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 원심분리하여 상청액을 항-IL-2 항체 (PharMingen, #555051)로 코팅된 흰색의 불투명 384-웰 플레이트(NalgeNunc, Maxisorb)로 옮겼다. 2 시간 인큐베이션한 후에, 상기 플레이트를 0.1% Tween 20 을 포함하는 PBS로 세정하였고(Tecan Powerwasher 384), 바이오틴 표지된(Endogen, M600B) 항-IL-2 항체 및 스트렙타비딘과 결합된 HRP (PharMingen, #13047E)와 함께 추가 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 0.1% Tween 20/PBS로 세정한 후, HRP-발광 물질을 각각의 웰에 첨가하고 각각의 웰의 광도를 LJL Analyst 플레이트 조도계를 사용하여 측정하였다.
IL -4 및 IL -5
IL-4 및 IL-5 사이토카인 발현의 분석은 설명서에 따라 BD PharMingen Cytometric 6 Bead Array 시스템을 이용하여 수행된다. 간략하게, the supernatant from a 백혈구연층(buffy coat) 분석 플레이트로부터의 상청액을 표지된 사이토카인 검출 비드 칵테일(labeled cytokine detection bead cocktail)과 인큐베이션하였다. 그리고 나서 상기 샘플을 세정하였고, 재현탁하고 BD Pharmingen FACsCalibur 플로우 사이토미터(flow cytometer)를 읽어낸다. 데이터는 BD Pharmingen CBA 6 Bead Analysis 소프트웨어를 이용해 분석된다.
실시예 1: 병행 신호전달 경로는 아목사핀 및 파록세틴에 의해 저해된다
재료 및 방법
약물
O.lmM MES (2-(N-모르폴리노에탄설폰산) (Sigma) 버퍼에서 준비된 아목사핀을 제외한 모든 약물을 위해 DMSO에 원액(Stock solutions)을 제조하였다. DMSO의 포르볼 미리스테이트 아세테이트 (PMA) (100 μg/ml) 및 이오노마이신 (5 mg/ml)의 원액을 배양 배지에서 희석하여 최종 농도의 PMA (10 ng/ml, 16.2 nM) 및 이오노마이신 (750 μg/ml, 1 μM)을 생성하였다.
세포 및 세포주
Ficoll-Plaque (Pharmacia) 레이어드(layered) 원심분리에 의해 말초혈액단핵세포 (PBMCs)를 고립시키는데 기증된 혈액 (Red Cross, Rhode Island)으로부터 의 신선한 백혈구연층 준비를 이용하였다. "Pan T 세포 Isolation Kit II - human", (Miltenenyibiotec, Germany)을 이용하여 PBMCs로부터 T 세포를 정제하였다. American Type Cell Culture (ATCC)로부터 임파성 백혈병(lymphoid leukemia) T 세포주 (CCRF-CEM)를 수득하였다. 10% 혈청 (Gibco) 및 1% Pen-Strep 용액 (Cellgro)으로 보충된 RPMI 1640 배지 (Cellgro)에서 모든 세포를 성장시켰다. 핵 전좌 연구에서, 0.1% 혈청을 포함하는 혈청-기아(starved) 배지에서 세포를 성장시켰다.
사이토카인 스크리닝을 위한 ELISA ( ELISA for cytokine screening )
효소결합면역흡착검사(enzyme linked immunosorbant assay: ELISA)를 위한 항체는 BD Pharmingen에서 구하였다. 몇몇의 변경을 가한 표준 절차에 의해 샌드위치(Sandwich) ELISA를 수행하였다. 백혈구연층 또는 고립된 T 세포를 화합물 및 유도제(inducer) (PMA/이오노마이신 (PI))를 포함하는 384 웰 플레이트에서 배양 배지와 함께 희석하였다. 상기 플레이트를 37℃ 상태로 16 내지 18 시간동안 인큐베이션하였다. 원심분리한 이후에, 상청액을 제거하고 포획 항체(capture antibody)를 포함하는 384-웰 플레이트로 옮겼다. 상기 포획 항체를 40℃에서 오버나이트 (16 내지 18시간) 코팅하고 및 흡인(aspirate)한 후 상청액을 첨가하였다. 2시간 동안 인큐베이션한 후, 플레이트를 PBS (0.1% Tween20)로 세정하고 검출 항체를 첨가하였다. 루시퍼라제 기질 (Amersham)을 사용하여 조도계 (LJL 또는 Wallac)로 형광 광도를 측정하였다.
전사활성 측정법 ( transactivation assay )
뉴클레오펙션(nucleofection) (뉴클레오펙터; AMAXA, Germany)을 이용하여 CCRF-CEM 세포 내로 리포터 플라스미드를 트랜스펙트(transfect)하였다. 반디불이(firefly) 루시퍼라제(Luc)를 발현하는 리포터 플라스미드를 Stratagene으로부터 구입하였다. pNFAT-Luc는 4개의 NFAT 결합 부위를 포함하고; pGRE-Luc는 4개의 GRE 부위를 포함하며 pAPl-Luc는 7개의 AP1 결합 부위를 포함한다. NFκB 루시퍼라제 리포터(luciferase reporter), p(IL6κB)3-50hu.lL6-luc+, 는 3개의 NFκB 부위를 포함하고 Dr. De Bosscher (겐트 대학교, 벨기에)가 발견하였다. lOOμL의 Amaxa 'R' 세포주 용액에 현탁된 107 세포를 큐벳(cuvette)으로 옮겼다. 리포터 플라스미드 (반디불이 루시퍼라제) 및 대조군 플라스미드 (pRL-TK-Renilla) (레닐라 루시퍼라제(Renilla luciferase)) (Promega)를 10:1의 비율로 포함하는 1 μL (l μg/μL)의 용액을 세포 서스펜션에 첨가하였다. 프로그램 T-14를 이용하여 Amaxa 뉴클레오펙터로 트랜스펙션을 수행하였고, CCRF-CEM 세포에 대한 최대 효능을 나타내었다. 트랜스펙션이후 상기 세포를 200 μL 배지에 현탁하였고, 1시간 동안 회복되도록 하였으며, 2X 약물을 포함하는 동일한 부피의 배지를 첨가하여 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 추가로 5시간 동안 세포를 PI로 자극하였다. 플라스미드 및 대조군 레닐라 플라스미드 각각의 루시퍼라제 활성을 Promega Luciferase 분석 키트의 절차마다 측정하였다.
웨스턴 블럿 분석법( Western blot assat)
정제된 주된 인간 T-세포 (1 x 106 cells/ml 상태의 107 T-세포)를 37℃에서 30분 동안 다양한 약물로 예비처리한 후, 30분 동안 PMA 및 이오노마이신으로 자극하였다. 그리고 나서 세포를 펠릿(pellet)하였고 2X 단백질 로드 염료(load dye) (Invitrogen, NP0008)로 추출하였다. 전체 세포 용해물(lysate)을 가열하였고 원심분리 후 로딩(loading)하였다. 레인(lane)마다 10 내지 15 μl의 용해물 (대략 250,000 세포)을 10 내지 12% 트리스-비스(Tris-Bis gel) 또는 3 내지 8% 트리스 아세테이트 겔(Tris-Acetate gel) (Invitrogen에서 프리캐스트(precast)) 상에서 런(run)하였다. Owl Semi-Dry 전기블러팅 시스템(electroblotting system)을 이용하여 30분 동안 이모빌런(immobilon) PVDF 막 (Millipore) 상에서 단백질을 면역블러팅(immunoblot)하였다. 4시간 동안 4% 우유로 차단한 후 적당한 주된 항체로 인큐베이션하고 3회 세정한 다음, 2차 항체로 프로브(probe)하였다. Chemi-glow™ (Alpha Innotech) 화학형광(chemiluminescence) 검출 용액을 첨가하였고 Alpha Imager 8900 (Alpha Innotech)를 이용하여 영상을 캡쳐하여 시각화하였다. NFATl를 BD 형질도입 Laboratory로부터 수득한 항체 (#610703)를 이용하여 시각화하였다. IκB-alpha를 Santa Cruz Biotechnology로부터 수득한 항체 (#sc371)를 이용하여 시각화하였다. 미토겐 활성 단백질 키나제 (MAPK)를 Cell Signaling으로부터 수득한 후술하는 항체를 이용하여 시각화하였다: ERK p44/p42 (포스포(phospho), #9101; 전체, #9102); p38 (포스포, #9211; 전체, #9212); 및 JNK/SAPK (포스포, #9251; 전체, #9252).
전좌 분석( Translocation assays )
CCRF-CEM 세포를 완전한 배지 (10% 혈청, RPMI 1640)에서 2 x 105 cells/ml 밀도까지 성장시킨 후 16시간 동안 혈청 기아 배지(serum starved media) (0.1% FBS, RPMI 1640)를 오버나이트하였다. 상기 세포를 폴리 L-라이신-코팅된 글래서 커버슬립(glass coverslip) (Fisher) 상에서 드랍(drop)하여 15분 동안 상기 커버 슬립에 부착되게 하였다. 세포-코팅된 커버슬립을 20분 동안 약물로 예비배양한 후 혈청 기아 배지에서 1시간 동안 IX PMA + 이오노마이신 또는 프레드니솔론으로 자극하였다. 약물과 자극제(stimulant)로 인큐베이션한 후, 배지를 흡인하였고 상기 세포를 15분 동안 PBS 내에 3.7% 포름알데하이드로 고정하였다. 상기 세포를 IX PBS, 0.2% Triton으로 3회 세정하고, "Superblock"™ (Pierce)에서 15분 동안 2회 차단하였으며 주된 항체 (1 :5000 희석)와 30분 동안 인큐베이션하였다. NFATl를 BD 형질도입 Laboratory로부터 수득한 항체 (#610703)를 이용하여 시각화하였다. NFκB (p65 component)를 Santa Cruz Biotechnology로부터 수득한 항체 (#sc372)를 이용하여 시각화하였다. 커버슬립을 다시 3회 세정한 후 표지된 2차 항체 (Alexa Fluor™, 분자 프로브)를 첨가하였다. 핵을 DAP1 (Sigma)으로 표지하였다. 최종적으로 상기 커버슬립을 1회 PBS/Triton으로 세정하였고 및 Nikon 형광 현미경으로 관찰하기 위하여 유리 슬라이드 위에 Fluoromount™으로 탑재하였다. 전사 인자의 핵 내로의 전좌를 블라인드된(blinded) 슬라이드를 스코어링하여 정량하였다.
결과
아목사핀 및 파록세틴은 NFAT 경로를 억제한다
T 세포 활성의 결과는 칼시뉴린, 세린/트레오닌 포스파타제를 활성시키는 세포내 칼슘에서의 증가이다. 차례로 칼시뉴린은 NFAT의 핵 전좌를 개시하는 사이토플라즈믹 NFAT를 탈인산화한다. 핵 안에서, NFAT는 전사 유도에 유익한 TNFα를 포함하는 전연증성 유전자의 프로모터의 조절 부위와 결합한다. 본 발명자들의 연구에서 본 발명자들은 아목사핀 및 파록세틴의 효과를 NFAT 활성의 3 단계로 검사하였다: i) NFAT 단백질의 탈인산화, ii) 핵으로의 NFAT의 전좌 및 iii) NFAT-의존성 전사의 활성. 35 내지 50세의 남성 도너의 백혈구연층으로부터 T 세포를 분리하였다. 이러한 T 세포를 30분 동안 시험관 내에서 PMA/이오노마이신 (PI)으로 30분 동안 활성화하였고 NFAT의 인산화를 웨스턴 블럿 상에서의 운동성 이동(mobility shift)에 의해 분석하였다. 활성화된 T 세포에서 탈인산화된 NFAT는 SDS PAGE에서 더욱 큰 운동성으로 이동하고 그 결과 밴드 이동(band shift)을 발생시킨다. 그 결과를 도 2B에 도시하였다. 예상한 바와 같이, 예비배양 of 사이클로스포린, 칼시뉴린의 직접적인 저해제의 예비배양은 3 nM 아래로 밴드 이동을 방지한다. 유사하게, 아목사핀 (3 μM) 및 파록세틴 (30 μM부근에서 약한 효과)과의 예비배양은 밴드 이동을 방지하였다. 프레드니솔론은 3 μM까지 NFAT 탈인산화에 영향을 주지 않았다. 사이클로스포린 및 아목사핀 양자를 위해 관측된 밴드 이동 전이 농도는 1000-폴드에 의해 분리되눈데, 이는 PI 자극된 TNFα 방출 분석에서 관측된 효능 차이와 근접하게 일치한다. Pi-활성화된 CCRP-CEM 세포에서 핵으로의 NFAT 전좌는 면역형광에 의해 추적된다 (도 2C). 다시 예상한 바와 같이, 사이클로스포린은 5 nM의 IC50 수치를 생성하는 NFAT의 전좌를 저해하였는데, 사이토카인 저해 및 NFAT 밴드 이동 분석 양자에서의 사이클로스포린의 행동과 근접하게 병행된다. 또한 아목사핀 및 파록세틴은 각각 4 μM의 IC50s 및 3 μM의 IC50s로 NFAT 전좌를 저해하였다. 프레드니솔론은 이러한 분석에서 활성화되지 않았다. NFAT 전좌 연구의 전체 결과는 사이토카인 및 웨스턴 블럿 분석에서 관측된 화합물 효능의 순위(rank order)와 일치한다.
따라서, NFAT 의존성 전사는 CCRF-CEM 세포 내로의 NFAT 리포터 플라스미드의 일시적인 트랜스펙션 및 이어지는 PI와의 활성에 의해 관측되었다. 그 결과를 도 2A에 도시하였다. 사이클로스포린은 5nM의 IC50로 Pi-자극된 NFAT 전사를 저해하는데 효과적이었고, 이는 사이토카인, 밴드 이동 및 전좌 분석에서 관측된 효과와 일치한다. 아목사핀 및 파록세틴은 각각 2 μM의 IC50 및 9 μM의 IC50을 생성하였다. 프레드니솔론은 심지어 고용량에서도 강한 저해를 나타내지 못했다.
아목사핀 및 파록세틴은 NF -κB 경로를 억제한다
NFAT와 같이, NFκB 전염증성 사이토카인 유전자의 활성에 중요한 조절 전사 인자이다. NFκB는 IκB와의 복합체 내의 세포질에서 격리된다. T 세포 활성이 시작되면, IκB는 탈인산화되고 분해되며, NFκB을 자유롭게 하여 핵으로 전좌되고 염증에 관계된 유전자를 활성화시키도록 한다. 본 발명자들은 IκB의 분해, 핵으로의 NFκB의 전좌 및 NFκB-의존성 전사 활성에서의 아목사핀 및 파록세틴의 효과를 평가하였다.
주된 T 세포를 시험관 내에서(in vitro) PI와 활성화시켰고 (30분) 웨스턴 블럿 분석을 위해 추출하였다. 사이클로스포린, 아목사핀 및 파록세틴은 IκB를 안정화시키지만 (도 3B) 그 효능의 정도는 상이하다. 사이클로스포린은 30 nM에서 시작하는 효과로 가장 강력하였다. 아목사핀 및 파록세틴의 효과는 각각 25 μM 및 15 μM에서 시작하였다. 이러한 관측은 TNFα 저해 분석에서의 이러한 화합물에 대하여 관측된 효능 순위와 상반된다. 프레드니솔론은 IκB 분해에 영향을 주지 않았다.
NFκB의 핵 전좌를 NFκB의 p65 요소에 대한 항체를 이용하여 면역형광에 의해 활성화된 CCRF-CEM 세포에서 분석하였다. 그 결과를 도 3C에 도시하였다. 다시 사이클로스포린은 2 μM의 IC50로 NFκB 전좌를 강력하게 저해하였다. 아목사핀 및 파록세틴은 거의 동일한 저해 곡선을 가지는데, 각각은 2 μM의 IC50을 생성한다. 프레드니솔론은 NFκB 전좌에 영향을 주지 않았다.
NFAT 의존성 전사는 CCRF-CEM 세포 내로의 NFAT 리포터 플라스미드의 일시적인 트랜스펙션 및 이어지는 PI와의 활성에 의해 관측되었다. 그 결과를 도 3A에 도시하였다. NFκB 저해제 CAPE는 예상한 바와 같이 저해하엿으나 사이클로스포린은 1 μM까지 NFκB 전사 분석에서 영향을 거의 주지 않았다. 파록세틴이 30 μM의 최고 농도에서 40% 저해를 수득한 반면, 사이클로스포린 및 아목사핀은 고농도 (IC50 = 20 μM)에서 유사한 효과를 나타낸다. 프레드니솔론은 1 μM에서 30% 저해를 보였고, 이는 NFκB 전사의 보고된 글루코코르티코이드 트랜스리프레션과 일치한다.
아목사핀 및 파록세틴은 MAP 키나제 경로를 억제한다
T 세포 활성은 다중 신호 형질도입(transduction) 경로를 개시한다. NFAT 및 NFκB 활성뿐만 아니라, MAP 키나제 캐스캐이드 또한 활성화된다. 이러한 캐스캐이드는 ERK, p38 및 JNK의 활성에서 최고조에 달하는 3개의 주요한 암(arm)으로 구성된다. 이러한 MAP 키나제의 몇몇 기질은 ELKl, ERG 및 AP1와 같은 전사 인자를 포함하는데, 차례로 전염증성 유전자 발현을 조절한다. 본 발명자들은 아목사핀 또는 파록세틴의 존재 하에서 ERK, p38 및 JNK의 활성을 추적하기 시작했다.
정제된 주된 T 세포를 30분 동안 활성화시켰고 웨스턴 블럿 분석을 위해 추출하였다. 각각의 MAPK의 활성을 MAPK의 각각의 타입상에 있는 조절 부위에 대한 인산특이성 항체(phospospecific antibody)를 이용하여 추적하였고, 각각의 MAPK 종의 전체 양을 측정하여 규준화하였다 (도 4A-4C). 심지어 테스트된 최고 용량의 사이클로스포린 (1 μM), 프레드니솔론 (3 μM), 아목사핀 (30 μM) 및 파록세틴 (30 μM)도 ERK1/2의 인산화를 방지하는데 효과적이지 않았다. 반면, 30 nM을 넘는 사이클로스포린에서, 몇몇의 포스포-p38 저해의 증거가 존재하였다. 파록세틴은 10 μM에서 포스포-p38의 저해를 나타내었으나, 아목사핀 및 프레드니솔론은 p38 분석에서 영향이 없었다. JNK 활성을 분석할 경우, 사이클로스포린은 30 nM 이상에서 JNK 활성을 저해하는 것으로 관측되었다. 아목사핀 및 파록세틴 양자는 10 내지 20 μM 이상에서 유사한 저해를 나타내었다. 프레드니솔론은 JNK에 대한 영향이 없었다. AP1-의존성 전사는 CCRF-CEM 세포 내로의 AP1 리포터 플라스미드의 일시적인 트랜스펙션 및 이어지는 PI와의 활성에 의해 관측되었다 (도 4D). 사이클로스포린은 TNF-PI을 거의 완전하게 저해하는 농도의 100배 이상의 농도인 1 μM까지 효과를 거의 나타내지 않았다. 반면, 아목사핀 및 파록세틴은 이러한 약물이 사이토카인 분석에서 효과를 보이는 농도인 20 내지 30 μM 범위의 IC50에 대한 저해 곡선과 유사한 형태를 나타내었다. 300 nM의 프레드니솔론은 AP1 전사에서 관측된 글루코코르티코이드 트랜스리프레션과 일치하는 30% 저해를 생성하였다.
투여
본 발명의 임의의 방법의 구체적인 구현예에서, 상기 화합물들은 서로 10일 이내, 서로 5일 이내, 서로 24시간 이내 또는 동시에 투여된다. 상기 화합물들은 단일 조성물로서 함께 제형화되거나, 또는 개별적으로 제형화되어 투여될 수 있다. 상기 화합물들 중 어느 하나 또는 양자는 저용량으로 또는 고용량으로 투여될 수 있는데, 각각은 본 명세서에 정의되어 있다. 환자에게 코르티코스테로이드, NSAIDs (예컨대, 나프록센나트륨, 디클로페낙나트륨, 디클로페낙칼륨, 아스피린, 설린닥, 디플루니살, 피록시캄, 인도메타신, 이부프로펜, 나부메톤, 트리살리살산마그네슘콜린, 살리실산나트륨, 살리실살리실산, 페노프로펜, 플루르비프로펜, 케토프로펜, 메클로페남산나트륨, 멜록시캄, 옥사프로진, 설린닥, 및 톨메틴), COX-2 저해제 (예컨대, 로페콕시브, 셀레콕시브, 발데콕시브, 및 루미라콕시브) 또는 DMARD와 같은 다른 화합물들을 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 본 발명의 병용요법은 다른 항사이토카인 약제 또는 세포부착에 영향을 주는 약제 또는 생물학적 제제 (즉, IL-6, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 또는 TNFα의 활성을 차단하는 약제 (예컨대, 에타너셉트, 아델리무맙, 인플릭시맙, 및 CDP-870))와 같이, 질병에 양성적으로 작용하는 면역 반응을 조절하는 약제들과 조합을 이루어 면역염증성 질환의 치료에 특히 유용하다. 이러한 예에서 (TNFα의 효과를 차단하는 약제), 상기 병용요법은 염증성 사이토카인의 나머지 부분에 작용하는 사이토카인, 에타너셉트 또는 인플릭시맙의 생성을 감소시켜, 향상된 치료를 제공한다.
본 발명에 따른 치료는 단독으로 또는 다른 치료와 함께 수행될 수 있으며 집, 의원, 클리닉, 병원의 외래환자 진료실, 또는 병원에서 제공될 수 있다. 치료는 선택적으로 병원에서 시작하여 의사가 치료의 효과를 면밀히 관찰하고 필요한 조치를 취할 수 있게 하거나, 또는 외래환자 진료실에서 시작할 수 있다. 치료의 지속시간은 치료되는 질병 또는 질환의 유형, 환자의 나이 및 상태, 환자 질병의 단계 및 유형, 및 환자가 치료에 어떻게 반응하는가에 의존한다. 또한, 염증성 질병의 발병 위험이 더 큰 사람 (예컨대, 나이-연관 호르몬 변화를 겪고 있는 사람)은 증상의 개시를 저해하거나 늦추기 위한 치료를 받을 수 있다.
다양한 구현예에 있어 투여 경로는 국소, 경피, 코, 및 전신 투여 (정맥내, 근육내, 피하조직, 흡입, 직장, 볼쪽, 질, 복막내, 관절내, 안구, 귀(otic) 또는 경구 투여 같은)를 포함하나, 반드시 이들로 한정되는 것은 아니다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "전신 투여"는 모든 비피부 투여경로를 나타내며, 특히 국소 및 경피 투여 경로를 배제한다.
병용요법에서, 상기 조합의 각 성분의 투여의 용량 및 횟수를 독립적으로 조절할 수 있다. 예를 들어, 하나의 화합물은, 다른 화합물이 1일 1회 투여될 수 있는 것과 달리 1일 3회 투여될 수 있다. 병용요법은 환자의 신체가 임의의 예기치 않은 부작용으로부터 회복할 기회를 갖도록 하는 휴식 주기를 포함하여 단속적인 반복으로(on-and-off cycle) 행할 수도 있다. 또한, 상기 화합물은 한 번의 투여로 화합물들 모두를 전달하도록 함께 제형화될 수 있다.
약학적 조성물의 제형 (Formulation of Pharmaceutical Compositions)
본 발명의 조합은 표적 부위에서 전염증성 사이토카인 농도가 억제되도록 임의의 적절한 수단에 의해 투여될 수 있다. 상기 화합물은 임의의 적합한 운반체 물질 내에 임의의 적절한 양으로 포함될 수 있으며, 일반적으로 상기 조성물의 총 중량의 1 내지 95%의 양으로 존재한다. 상기 조성물은 경구, 비경구 (예컨대, 정맥내, 근육내), 직장, 피부, 코, 질, 흡입제, 피부(패치), 또는 안구 투여 경로에 사용하기에 적합한 용량 형태로 제공될 수 있다. 따라서, 상기 조성물은, 예를 들면, 정제, 캡슐, 알약, 분말제, 과립, 부유액, 유탁액, 용액, 하이드로겔을 포함하는 겔, 페이스트, 연고, 크림, 고약(plasters), 음약(drenches), 삼투성 전달 장치(osmotic delivery devices), 좌약, 관장제, 주사제, 이식, 분무제, 또는 분무약제의 형태일 수 있다. 약학적 조성물은 종래의 약학적 실무에 따라 제형화될 수 있다 (예컨대, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th edition, 2000, ed. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, and Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York 참조).
상기 약제 조합의 각각의 화합물은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 잘 알려진 다양한 방법으로 제형화될 수 있다. 예를 들면, 제 1 약제(글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제) 및 제 2 약제(NFAT, NFκB, AP-1 또는 Elk-1 중 하낭 이상의 신호전달 경로의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제)는 함께 또는 개별적으로 제형화될 수 있다. 제 1 약제 및 제 2 약제가 동시에 또는 거의 동시에 상기 약제을 투여하도록 제형화되는 것이 바람직하다. 그러한 공동제형화된 조성물은, 예를 들어, 동일한 알약, 캡슐, 액체, 등 내에서 함께 제형화된 두 약제를 포함할 수 있다. 그러한 조성물의 제형을 언급할 때, 이용된 제형 기술은 본 발명의 다른 조합뿐만 아니라 조합의 개별적인 약제들의 제형에도 유용한 것을 이해되어야 한다. 다른 약제에 맞는 다른 제형화 방법을 사용함으로써, 약제 각각에 대한 약동학적 거동(pharmacokinetic profiles)을 적합하게 대응시킬 수 있다.
개별적으로 또는 분리되어 제형화된 약제는 한 키트로 함께 포장될 수 있다. 포장은 제한없이, 예컨대 두 개의 알약, 한 개의 알약 및 한 개의 분말제, 한 개의 좌약 및 작은 병 안에 액체, 두 개의 국소 크림, 등을 포함하는 키트를 포함한다. 키트는, 재생 분말 형태용 작은 병, 주입을 위한 주사기, 사용자 지정(cusomized) Ⅳ 전달 시스템, 흡입기, 그 밖의 것과 같은 환자에 대한 단위 용량 투여를 돕는 임의의 구성요소를 포함할 수 있다. 또한, 단위 용량 키트는 상기 조성물의 준비 및 투여 설명서를 포함할 수 있다. 키트는 한 명의 환자를 위한 1회 사용 단위 용량, 특정 환자(일정한 용량이 필요하거나 개별 화합물이 치료 진척에 따라 효능이 변할 수 있는)를 위한 다중 사용용으로 제조될 수 있다; 또는 키트는 다수의 환자들에 대한 투여에 적당한 다수 용량을 포함할 수 있다(벌크 포장). 키트 구성요소들은 종이상자, 수포팩(blister pack), 병, 튜브 등 내에 포장될 수 있다.
용량
일반적으로, 인간에게 투여할 때, NFκB, NFAT, AP-1 또는 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제는 약제의 성질에 따라 달라질 것이고 본 발명이 속한 기술분야의 당업자에게 쉽게 판단될 수 있다. 전형적으로, 그러한 약제는 보통 1일 약 0.001 내지 2000 mg, 바람직하게 1일 약 1 내지 1000 mg 및 더욱 바람직하게 1일 약 5 내지 500이다. 1일 200 mg까지의 용량이 필요할 수 있다.
전신투여될 경우, 본 발명에 따른 조합에서의 이용을 위해 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제는 보통 1일 약 0.1 내지 1500 mg, 바람직하게 1일 약 0.5 내지 10 mg 및 더욱 바람직하게 1일 약 0.5 내지 5이다
조합된 각각의 약물은 독립적으로, 1일 1 내지 4회 투여되는데 1일 내지 1년 및 심지어 환자의 일생동안 투여될 수 있다. 만성적이고 장기간의 투여는 많은 경우에서 표시될 것이다.
추가적인 응용
본 발명의 화합물은 다른 조합, 또는 단일 약제가 전염증성 사이토카인의 증식 또는 생성을 저해하거나 면역 반응을 조절하는 데 있어 상기 조합과 마찬가지로 효과적인가를 판단하기 위한 본 발명이 속하는 기술분야에 일반적으로 알려져 있는 분석을 이용하여 면역조절 분석 또는 기계적 분석에 사용될 수 있으며, 이들의 예는 본원에서 설명된다. 예를 들어, 후보 화합물은 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 또는 NFκB, NFAT, AP-1 또는 Elk-1 경로 중 1 이상의 신호전달 활성을 감소시키는 비스테로이드성 약제와 함께 사용될 수 있고 자극된 PBMCs에 응용될 수 있다. 적절한 시간 후에, 사이토카인 분비 또는 생성이나 다른 적절한 면역 반응에 대하여 세포를 조사한다. 개별적인 화합물에 대한 조합의 상대적인 효과, 및 단일 약제에 대한 조합의 상대적인 효과를 비교하여 유효한 화합물 및 조합을 동정한다.
본 발명의 조합 또한 염증에 관련된 생물학적 경로에 대한 기계적 정보를 밝히는데 유용한 수단이다. 그러한 정보는 전염증성 사이토카인에 의해 유발된 염증을 저해 새로운 조합 또는 단일 약물의 개발을 유도할 수 있다. 생물학적 경로를 결정하기 위한 본 발명이 속하는 기술분야에서 알려진 방법은 전염증성 사이토카인을 생성하도록 자극된 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시킴으로써 영향을 받는 경로, 또는 경로들의 네트워크를 결정하는데 사용될 수 있다. 그러한 방법들은 치료되지 않은 경우에 비해 본 발명의 화합물과 접촉된 후에 발현되거나 억제된 세포 성분, 양성적 또는 음성적 제어 화합물 및/또는 신규한 단일 약제 및 조합을 분석하는 방법 또는 효소 활성, 영양 섭취 및 증식과 같은 세포의 다른 대사 활동을 분석하는 방법을 포함할 수 있다. 분석된 세포 구성성분은 유전자 전사체, 및 단백질 발현을 포함할 수 있다. 적절한 방법은 표준 생화학 기술, 본 발명의 화합물의 방사능표지(예를 들면, 14C 또는 3H 표지), 및 예컨대 2d 겔, 유전자 발현 거동을 이용한 단백질에 결합하는 화합물의 관찰을 포함할 수 있다. 일단 동정되면, 그러한 화합물은 생체 내(in vivo) 모델에서 추가로 수단을 증명하거나 새로운 항-염증 약제를 개발하는데 사용될 수 있다.
다른 구현예들
본 명세서에 인용된 모든 문헌 및 특허는 참조에 의해 본 명세서에 편입된다.
본 발명의 범위 및 사상으로부터 벗어나지 않고 본 발명에서 기술된 방법 및 계통에 대한 다양한 변형 및 변경은 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 자명할 것이다. 본 발명을 구체적인 바람직한 구현예에 관련지어 설명하였으나, 청구된 본 발명을 그런 특정한 구현예에 과도하게 제한받지 않는 발명으로 이해해야 한다. 나아가, 제약, 면역학, 약리학, 내분비학 또는 관련분야의 전문가에게 자명한 본 발명을 수행하기 위해 설명된 방법의 다양한 수정은 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 해석한다.
도 1은 NFκB, NFAT, Elk-1 및 AP-1 신호전달 경로를 설명하는 스키매틱 다이어그램(schematic diagram)이다.
도 2A-2C는 NFAT 경로를 억제하는 아목사핀 및 파록세틴을 도시하는 도해들이다. T 세포는 테스트 약물 아목사핀, 파록세틴, 프레드니솔론 및 사이클로스포린의 양을 증가시키거나 또는 증가시키지 않고 PMA (90 ng/ml)/이오노마이신 (5 μg/ml)으로 활성화된다. 도 2A는 부형제 또는 약물 처리 (n=4 실험)로 예비배양(preincubation)되기 4시간 전에 NFAT 루시퍼라제 리포터로 감염된 T 세포주 CCRF-CEM을 도시한다. 도 2B는 NFATl-인산특이성 항체로 정화되고 처리된 주된 T 세포의 웨스턴 블럿을 도시한다. 도 2C는 20분 동안 약물처리되고 그 후 1시간 동안 자극되며 면역형광(immunofluorescence)으로 처리된 T 세포주 CCRF-CEM의 핵 전좌 분석(nuclear translocation analysis)을 도시한다.
도 3A-3C는 NF-κB 경로를 억제하는 아목사핀 및 파록세틴을 도시하는 도해들이다. T 세포는 시험 약물 아목사핀, 파록세틴, 프레드니솔론, 사이클로스포린 또는 CAPE의 양을 증가시키거나 또는 증가시키지 않고 PMA/이오노마이신으로 활성화된다. 도 3A는 부형제 또는 약물 처리 (n=4 실험)로 예비배양되기 4시간 전에 NFAT 루시퍼라제 리포터로 감염된 T 세포주 CCRF-CEM의 결과를 도시한다. 도 3B는 NFATl-특이 항체로 정화되고 처리된 주된 T 세포의 웨스턴 블럿을 도시한다. 도 3C는 면역형광으로 처리된 T 세포주 CCRF-CEM의 핵 전좌 분석을 도시한다.
도 4A-4D는 AP1 경로를 억제하는 아목사핀 및 파록세틴을 도시하는 도해들이다. 주된 T 세포는 PMA 및 이오노마이신으로 활성화되기 30분 전에 부형제 또는 약물로 예비배양된다. 이후 세포들은 30분 동안 추출되고 인산특이성 항체(phospospecific antibody)로 웨스턴 블럿 처리된다. 도 4A: ERK; 도 4B: p38; 도 4C: JNK). 상기 블럿은 로딩 대조군(loading control)으로서 알파 튜불린(alpha tubulin)으로 탐침된다. 도 4D는 AP1 리포터 플라스미드(reporter plasmid)의 CCRF-CEM 세포로의 일시적인 트랜스펙션(transfection)에 의해 측정된 AP1-의존성 전사 및 이어지는 PI와의 활성을 설명하는 도해이다.

Claims (69)

  1. (a) 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성(signaling activity)을 증가시키는 약제; 및
    (b) 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine) 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응, 이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로(signaling pathways)의 상기 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제(non-steroidal agent)를 포함하는 조성물로서,
    여기서 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제 및 상기 비스테로이드성 약제는 포유동물에게 투여될 경우, 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성을 감소시키기에 충분한 양으로 존재하는 것인 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 2 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성을 조절하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  3. 제 2항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 3 이상의 신호전달 경로의 상기 활성을 조절하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 전염증성 사이토카인은 TNF-α인 것을 특징으로 조성 물.
  5. 제 1항에 있어서, 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제는 상기 조성물 내에 저용량(low dosage)으로 존재하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 발현 레벨(expression level) 또는 생물학적 활성을 증가 또는 감소시키는 약제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 NF-κB 경로 저해제(inhibitor), NFAT 경로 저해제, AP-1 경로 저해제 또는 Elk-1 경로 저해제인 것을 특징으로 하는 조성물.
  8. 제 1항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 상기 발현 레벨을 감소시키는 안티센스 화합물(antisense compound) 또는 RNAi 화합물인 것을 특징으로 하는 조성물.
  9. 제 1항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 우성 음성(dominant negative) 또는 상기 우성 음성을 인코딩(encoding)하는 발현 벡터(expression vector)인 것을 특징으로 하는 조성물.
  10. 제 1항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자와 결합하여 상기 신호전달 분자의 상기 생물학적 활성을 감소시키는 항체인 것을 특징으로 하는 조성물.
  11. 제 6항 내지 제 10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 생물학적 활성은 효소 활성, 인산화 상태(phosphorylation state) 또는 결합 활성인 것을 특징으로 하는 조성물.
  12. 제 1항에 있어서, 추가적인 치료 화합물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물
  13. 제 12항에 있어서, 상기 추가적인 치료 화합물은 NSAID, 저분자 면역조절제, COX-2 저해제, DMARD, 생물학적 제제, 크산틴, 항콜린성 화합물, 베타 수용체 작용 제, 기관지 확장제, 비스테로이드 칼시뉴린 저해제, 비타민 D 유사체, 소랄렌, 레티노이드 및 5-아미노 살리실산으로 구성된 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  14. 제 13항에 있어서, 상기 NSAID는 이부프로펜, 디클로프로페낙 또는 나프록센인 것을 특징으로 하는 조성물.
  15. 제 13항에 있어서, 상기 COX-2 저해제는 로페콕시브, 셀레콕시브, 발데콕시브 또는 루미라콕시브인 것을 특징으로 하는 조성물.
  16. 제 13항에 있어서, 상기 생물학적 제제는 아델리무맙, 에타너셉트 또는 인플릭시맙인 것을 특징으로 하는 조성물.
  17. 제 13항에 있어서, 상기 DMARD는 메토트렉세이트 또는 레플루노미드인 것을 특징으로 하는 조성물.
  18. 제 13항에 있어서, 상기 크산틴은 테오필린인 것을 특징으로 하는 조성물.
  19. 제 13항에 있어서, 상기 항콜린성 화합물은 이프라트로퓸 또는 티오트로퓸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  20. 제 13항에 있어서, 상기 베타 수용체 작용제는 이부테롤 설페이트, 비톨테롤 메실레이트, 에피네프린, 포르모테롤 푸마레이트, 이소프로테로놀, 레발부테롤 하이드로클로라이드, 메타프로테레놀 설페이트, 피르부테롤 아세테이트, 살메테롤 크시나포에이트 또는 테르부탈린인 것을 특징으로 하는 조성물.
  21. 제 13항에 있어서, 상기 비스테로이드 칼시뉴린 저해제는 사이클로스포린, 타크롤리무스, 피메크롤리무스 또는 ISAtx247인 것을 특징으로 하는 조성물.
  22. 제 13항에 있어서, 상기 비타민 D 유사체는 칼시포트리엔 또는 칼시포트리올인 것을 특징으로 하는 조성물.
  23. 제 13항에 있어서, 상기 소랄렌은 메톡살렌인 것을 특징으로 하는 조성물.
  24. 제 13항에 있어서, 상기 레티노이드는 아시트레틴 또는 타조레텐인 것을 특징으로 하는 조성물.
  25. 제 13항에 있어서, 상기 5-아미노 살리실산은 메살아민, 설파살라진, 발살라지드 디소듐 또는 올살라진 소듐인 것을 특징으로 하는 조성물.
  26. 제 1항 내지 제 25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 국소 투여(topical administration)용으로 제형화된 것을 특징으로 하는 조성물.
  27. 제 1항 내지 제 25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 전신 투여(systemic administration)용으로 제형화된 것을 특징으로 하는 조성물.
  28. (a) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제; 및
    (b) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응, 이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택되는 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제의 조합을 포유동물에게 투여하는 방법을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소 방법으로서,
    여기서 제 1 약제 및 제 2 약제는 동시에 또는 서로 28일 이내에, 상기 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소시키기에 충분한 양으로 투여되는 것인 방법.
  29. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 2 이상의 신호전달 경로의 신호전달 활성을 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 3 이상의 신호전달 경로의 상기 활성을 조절하는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 28항에 있어서, 상기 조합은 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제 31항에 있어서, 상기 전염증성 사이토카인은 TNF-α인 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 28항에 있어서, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제는 저용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 발현 레벨 또는 생물학적 활성을 증가 또는 감소시키는 약제인 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 NF-κB 경로 저해제, NFAT 경로 저해제, AP-1 경로 저해제 또는 Elk-1 경로 저해제인 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경 로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 상기 발현 레벨을 감소시키는 안티센스 화합물 또는 RNAi 화합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자의 우성 음성 또는 상기 우성 음성을 인코딩하는 발현 벡터인 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 28항에 있어서, 상기 비스테로이드성 약제는 상기 NF-κB 경로, 상기 NFAT 경로, 상기 AP-1 경로 또는 상기 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성이 조절되도록 신호전달 분자와 결합하여 상기 신호전달 분자의 상기 생물학적 활성을 감소시키는 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제 34항 또는 제 38항에 있어서, 상기 생물학적 활성은 효소 활성, 인산화 상태 또는 결합 활성인 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 제 28항에 있어서, 상기 포유동물에 추가적인 치료 화합물을 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 제 40항에 있어서, 상기 추가적인 치료 화합물은 NSAID, 저분자 면역조절제, COX-2 저해제, DMARD, 생물학적 제제, 크산틴, 항콜린성 화합물, 베타 수용체 작용제, 기관지 확장제, 비스테로이드 칼시뉴린 저해제, 비타민 D 유사체, 소랄렌, 레티노이드 및 5-아미노 살리실산으로 구성된 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  42. 제 41항에 있어서, 상기 NSAID는 이부프로펜, 디클로프로페낙 또는 나프록센인 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 제 41항에 있어서, 상기 COX-2 저해제는 로페콕시브, 셀레콕시브, 발데콕시브 또는 루미라콕시브인 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제 41항에 있어서, 상기 생물학적 제제는 아델리무맙, 에타너셉트 또는 인플릭시맙인 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 제 41항에 있어서, 상기 DMARD는 메토트렉세이트 또는 레플루노미드인 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 제 41항에 있어서, 상기 크산틴은 테오필린인 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제 41항에 있어서, 상기 항콜린성 화합물은 이프라트로퓸 또는 티오트로퓸인 것을 특징으로 하는 조성물.
  48. 제 41항에 있어서, 상기 베타 수용체 작용제는 이부테롤 설페이트, 비톨테롤 메실레이트, 에피네프린, 포르모테롤 푸마레이트, 이소프로테로놀, 레발부테롤 하이드로클로라이드, 메타프로테레놀 설페이트, 피르부테롤 아세테이트, 살메테롤 크시나포에이트 또는 테르부탈린인 것을 특징으로 하는 방법.
  49. 제 41항에 있어서, 상기 비스테로이드 칼시뉴린 저해제는 사이클로스포린, 타크롤리무스, 피메크롤리무스 또는 ISAtx247인 것을 특징으로 하는 방법.
  50. 제 41항에 있어서, 상기 비타민 D 유사체는 칼시포트리엔 또는 칼시포트리올인 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 제 41항에 있어서, 상기 소랄렌은 메톡살렌인 것을 특징으로 하는 방법.
  52. 제 41항에 있어서, 상기 레티노이드는 아시트레틴 또는 타조레텐인 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 제 41항에 있어서, 상기 5-아미노 살리실산은 메살아민, 설파살라진, 발살 라지드 디소듐 또는 올살라진 소듐인 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 제 28항 내지 제 53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 상기 비스테로이드성 약제는 서로 14일 이내에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  55. 제 54항에 있어서, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 상기 비스테로이드성 약제는 서로 7일 이내에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 제 55항에 있어서, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 상기 비스테로이드성 약제는 서로 1일 이내에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제 28항 내지 제 56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제, 상기 비스테로이드성 약제 또는 양자는 국소 투여 또는 전신 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응, 이 감소되 도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택되는 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제와 접촉시키는 단계를 포함하는, 염증 세포에서 염증성 사이토카인의 방출 또는 생성을 감소시키는 방법.
  59. 다음을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 조합을 동정하는 방법:
    (a) 시험관 내(in vitro)에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 후보 화합물(candidate compound)과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제와 접촉하지만 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에서의 전염증성 사이토카인 생성 또는 방출에 비하여, 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제 및 상기 후보 화합물의 조합이 상기 세포에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계로서, 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타내는 것인 단계.
  60. 제 59항에 있어서, 상기 세포는 T 세포인 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 다음을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 후보 화합물을 동정하는 방법:
    (a) 글루코코르티코이드 수용체 신호전달 활성을 감소시킨 염증 세포를 제공하는 단계;
    (b) 상기 세포를 후보 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (c) 상기 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에 비하여, 상기 후보 화합물이 상기 세포에서의 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계로서, 여기서 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 후보 화합물이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 화합물임을 나타내는 단계.
  62. 다음을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 조합을 동정하는 방법:
    (a) 시험관 내에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 후보 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (b) 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지만 상기 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에서의 사이토카인 방출 또는 생성에 비하여, 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 상기 후보 화합물의 조합이 상기 세포에서의 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계로서, 여기서 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타내는 단계.
  63. 다음을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 화합물을 동정하는 방법:
    (a) NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로 중 1 이상에서 신호전달 활성이 감소되게 처리된 염증 세포를 제공하는 단계;
    (b) 상기 세포를 후보 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (c) 상기 후보 화합물과 접촉하지 않는 세포에 비하여, 상기 후보 화합물이 상기 세포에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계로서, 여기서 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 후보 화합물이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 화합물임을 나타내는 단계.
  64. 다음을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 조합을 동정하는 방법:
    (a) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응, 이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택되는 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성을 조절하는 화합물을 동정하는 단계;
    (b) 시험관 내에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (c) 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지만 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지 않거나 또는 단계 (a)에서 동 정된 화합물과 접촉하지만 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지 않는 세포에 비하여, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a)에서 동정된 화합물의 조합이 상기 세포들에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계로서, 여기서 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타내는 단계.
  65. 다음을 포함하는 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용할 수 있는 조합을 동정하는 방법:
    (a) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응, 이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택되는 1 이상의 신호전달 경로의 상기 신호전달 활성을 조절하는 화합물을 동정하는 단계;
    (b) 시험관 내에서 염증 세포를 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉시키는 단계; 및
    (c) 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지만 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지 않거나 또는 단계 (a)에서 동정된 화합물과 접촉하지만 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제와 접촉하지 않는 세포에서의 사이토카인 방출 또는 생성에 비하여, 상기 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제 및 단계 (a) 에서 동정된 상기 화합물의 조합이 상기 세포에서의 전염증성 사이토카인 방출 또는 생성을 감소시키는지를 판단하는 단계로서, 여기서 전염증성 사이토카인 방출의 감소는 상기 조합이 면역염증성 질환의 치료, 예방 또는 감소에 유용한 조합임을 나타내는 단계.
  66. (i) (a) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제; 및
    (b) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응,이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제를 포함하는 조성물; 및
    (ii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 상기 조성물의 투여 설명서를 포함하는 키트.
  67. (i) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제;
    (ii) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응,이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제; 및
    (iii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제 및 상기 비스테로이드성 약제의 투여 설명서를 포함하는 키트.
  68. (i) 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제; 및
    (ii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 상기 약제 및 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응,이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제의 투여 설명서.
  69. (i) 전염증성 사이토카인 분비 또는 생성, 또는 임의의 다른 염증 반응,이 감소되도록 NF-κB 경로, NFAT 경로, AP-1 경로 및 Elk-1 경로로부터 선택된 1 이상의 신호전달 활성을 조절하는 비스테로이드성 약제; 및 (ii) 면역염증성 질환으로 진단된 환자에 대한 상기 약제 및 글루코코르티코이드 수용체의 신호전달 활성을 증가시키는 약제의 투여 설명서를 포함하는 키트.
KR1020067026553A 2004-05-17 2005-05-16 면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약 KR20070022758A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020067026553A KR20070022758A (ko) 2004-05-17 2005-05-16 면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US60/571,757 2004-05-17
KR1020067026553A KR20070022758A (ko) 2004-05-17 2005-05-16 면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20070022758A true KR20070022758A (ko) 2007-02-27

Family

ID=43654371

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020067026553A KR20070022758A (ko) 2004-05-17 2005-05-16 면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20070022758A (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150034364A (ko) * 2013-09-26 2015-04-03 충북대학교 산학협력단 사우서네올 d 화합물을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
WO2017150934A1 (ko) * 2016-03-04 2017-09-08 (주)뉴트리 판두라틴 또는 핑거루트(보에센베르기아 판두라타) 추출물을 포함하는 골 손실 질환 치료, 예방 또는 개선용 조성물

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150034364A (ko) * 2013-09-26 2015-04-03 충북대학교 산학협력단 사우서네올 d 화합물을 유효성분으로 포함하는 자가면역질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물
WO2017150934A1 (ko) * 2016-03-04 2017-09-08 (주)뉴트리 판두라틴 또는 핑거루트(보에센베르기아 판두라타) 추출물을 포함하는 골 손실 질환 치료, 예방 또는 개선용 조성물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20050271661A1 (en) Methods and reagents for the treatment of immunoinflammatory disorders
Sato et al. Protection from glucocorticoid‐induced osteoporosis by anti‐catabolic signaling in the absence of Sost/sclerostin
Monteserin‐Garcia et al. Sirt1 inhibits the transcription factor CREB to regulate pituitary growth hormone synthesis
US8067433B2 (en) Methods, compositions, and kits for the treatment of ophthalmic disorders
Yang et al. Antroquinonol mitigates an accelerated and progressive IgA nephropathy model in mice by activating the Nrf2 pathway and inhibiting T cells and NLRP3 inflammasome
US20070213296A1 (en) Compositions and methods for the treatment of immunoinflammatory disorders
MXPA06002929A (es) Metodos y reactivos para el tratamiento de desordenes inmuno-inflamatorios.
WO2006138518A1 (en) Combination therapy for the treatment of immunoinflammatory disorders
JP2006514021A (ja) Ｊａｎｕｓチロシンキナーゼ３（Ｊａｋ３）を選択的に阻害するための方法
WO2007096782A2 (en) Compositions for disorders associated wtth metachromatic cell activation
US20060286177A1 (en) Methods and reagents for the treatment of inflammatory disorders
US20080003213A1 (en) Methods and compositions for the treatment of diseases or conditions associated with increased C-reactive protein, interleukin-6, or interferon-gamma levels
US20050153947A1 (en) Methods and reagents for the treatment of diseases and disorders associated with increased levels of proinflammatory cytokines
US10881642B2 (en) Autophagy enhancer and use thereof
Galichon et al. Stress response gene Nupr1 alleviates cyclosporin A nephrotoxicity in vivo
US20040220153A1 (en) Methods and reagents for the treatment of diseases and disorders associated with increased levels of proinflammatory cytokines
Macedo et al. The role of endogenous opioid peptides in the antinociceptive effect of 15-deoxyΔ12, 14-prostaglandin J2 in the temporomandibular joint
EP1553955A2 (en) Methods and reagents for the treatment of diseases and disorders associated with increased levels of proinflammatory cytokines
Shibasaki et al. Immunosuppressive effects of DTCM-G, a novel inhibitor of the mTOR downstream signaling pathway
KR20070022758A (ko) 면역염증성 질환의 치료 방법 및 시약
Lunin et al. Modulation of inflammatory response in mice with severe autoimmune disease by thymic peptide thymulin and an inhibitor of NF-kappaB signalling
Baran et al. Current practices: immunosuppression induction, maintenance, and rejection regimens in contemporary post-heart transplant patient treatment
EP2913062B1 (en) Therapeutic or prophylactic agent for retinopathy of prematurity and method of testing for retinopathy of prematurity
Zanin-Zhorov et al. Selectivity matters: selective ROCK2 inhibitor ameliorates established liver fibrosis via targeting inflammation, fibrosis, and metabolism
WO2013148183A2 (en) Compositions and methods for inhibiting drusen

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application