KR20070022197A - Ｃｄｉｍ 결합 항체의 증강된 ｂ 세포 세포독성 - Google Patents

Abstract

본 발명은 림프암, 자가면역병 또는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 포뮬레이션 및 방법에 관한 것이다. 상기 치료방법은 (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양; 및 (2) 화학요법제, 방사성 동위원소, 세포독성 항체, 면역접합체, 리간드 접합체, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 독소, 또는 그들의 혼합물을 포함하고, 특히 빈카 알칼로이드 또는 콜히친인 B 세포의 세포골격를 분열하는 약제를 포함하는 세포독성제를 투여하는 단계를 포함한다.

Description

ＣＤＩＭ 결합 항체의 증강된 Ｂ 세포 세포독성 {ENHANCED B CELL CYTOTOXICITY OF CDIM BINDING ANTIBODY}

본 발명은 암, 과다세포증식질환 및 이와 유사한 질병을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

급성림프구성백혈병(ALL)은 소아기의 가장 일반적인 악성종양이다. 소아기 ALL의 약 80%는 B 세포 계열이다. ALL을 가진 아동들의 약 80%가 현재의 요법으로 치료되고 있으나, 나머지 환자의 그룹은 치료를 이어나갈 수 있는 새롭고 달라진 치료 전략을 필요로 한다. 백혈병 동종골수이식(BMT) 후의 골수 재발을 겪는 아동들에 대한, 치료의 가능성은 매우 희박하다. 유사하게, 적당한 제공자가 없어 BMT를 받을 수 없는 아동들과 2번 이상 병의 재발을 경험한 아동들은 전형적인 화학요법으로 치료하는 것이 맞지 않다. 이러한 환경하에서, 재유도 화학요법으로 완전완화를 달성하는 것은 매우 어려우며, 이미 힘겨운 치료를 거친 환자의 잠재적인 취약 성질뿐만 아니라 백혈병의 무반응 성질 모두에 기인한다. 따라서, 단독으로 또는 화학요법과 조합된 ALL에 유효한 새로운 약제의 개발이 요구되며, 이것은 현대 백혈병 치료의 목적이다. 백혈병 모세포에 대한 특이성을 나타내지만 화학요법 약제와 유사한 독성 수준을 공유하지 않는 약제는 항-백혈병 치료의 새로운 전략 을 짜는데 특히 유용하다. 또한, B 세포에 의해 매개되는 자가면역병 뿐만 아니라 B 세포 계열의 만성림프성 백혈병 (CLL) 및 림프종을 포함하는 다른 B 세포 암의 치료에 있어서 존재하는 화학요법제 또는 생물학적제제의 효능을 증가시키는 약제 및 방법을 개발하는 것이 바람직하다.

미국특허 제5,593,676호, 제5,417,972호, 및 유럽특허 제0 712 307B1호에 서술된, 모두 일반적으로 언급하고 있는, MAb 216는 킬링 B 세포(killing B cells)에 대한 CDIM 에피토프와 결합하는 항체의 용도를 서술한다. B 세포의 가변성 양은 이 항체를 사용하여 사멸되며, 증강된 효능은 림프암과 같이 B 세포의 과다세포증식에 의한 것을 특징으로 하는 병을 치료하기에 바람직하다.

발명의 요약

따라서, 본 발명의 주된 목적은 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 림프암 및 다른 질환과 싸우기 위한 새로운 방법 및 약제학적 포뮬레이션의 제공에 의하여 당업계에서의 상술한 필요성을 해결하기 위한 것이다.

따라서, 한 구체예에서, 방법은 B 세포 계열의 세포를 제한하기 위한 CDIM 항체를 발현하는 인간 또는 다른 포유류 종을 치료하기 위해 제공되고, 상기 포유류는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 병을 앓고 있다. 상기 방법은 (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대한 특이결합을 가지는 항체의 세포독성의 양, 및 (2) 세포독성제와 상기 B 세포을 접촉하는 단계를 포함한다. 바람직한 관점에 있어서, B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 병은 림프암, 바이러스성 감염, 면역결핍증, 또는 자가면역병이다. 대표적인 바이러스성 감염은 사람의 면역결핍증 바이러스 또는 단핵세포증을 포함한다. 대표적인 면역결핍증은 이식후면역증식병 또는 면역결핍 증후군을 포함하며 항암요법 또는 다른 면역억제요법을 받는 환자에서 발견될 수 있다. 대표적인 자가면역병은 전신홍반루프스, 류마티스관절염, 자가면역 림프세포증식질환, 다발경화증, 건선, 및 중증근육무력증을 포함할 뿐만 아니라, 하시모토 갑상선염, 루프스신장염, 피부근육염, 쇼그렌증후군, 시든햄 무도병, 류마티스열, 다분비선증후군, 수포성 유천포창, 당뇨병, 헤노호쉔라인자색반, 연쇄구균감염후 신장염, 결절홍반, 타카야스 동맥염, 애디슨병, 크론병, 알츠하이머병, 사코이드증, 궤양 대장염, 다형홍반, 면역글로블린에이 신장병증, 결절다발동맥염, 강직척추염, 굿파스처증후군, 혈전맥관염(thromboangitis ubiterans), 원발쓸개관간경화, 갑상샘항진증, 피부경화증, 만성활동간염, 다발근육염/피부근육염, 다발연골염, 보통천포창, 베게너 육아종증, 막성콩팥병증, 근위축성측삭경화증, 척수매독, 거세포 동맥염/다발근육통증, 악성빈혈, 급속진행 사구체신염, 섬유화 폐포염(fibrosing alveolitis), 면역매개 저혈소판증과 같은 제 3 급(Class III) 자가면역병, 급성특발혈소판감소자색반병 및 만성특발혈소판감소자색반병, 및 이와 유사한 질병을 포함한다.

세포독성제는 화학요법제, 방사성 동위원소, 세포독성 항체, 면역접합체(immunoconjugate), 리간드 접합체(ligand conjugate), 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 독소, 또는 그들의 혼합물이 될 수 있다. 화학요법제는 B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제가 될 수 있다. 또다른 구체예에서, 화학요법제는 아스파라기나아제, 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin), 캄토테신(camptothecin), 항생제, 백금배위착염, 알킬화제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 또는 토포아이소머레이즈(topoisomerase) 억제제, 또는 그들의 혼합물이 될 수 있다.

바람직하게, B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제는 탁센(taxane), 빈카 알칼로이드 및 콜히친, 또는 그들의 혼합물과 같은 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하는 약제이다. 빈카 알칼로이드는 예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 또는 비노렐빈(vinorelbine), 또는 그들의 혼합물을 포함한다. 탁센은 파클리탁셀 및 도세탁셀(docetaxel) 및 그들의 혼합물을 포함한다. 다른 구체예에서, B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제는 자스플라키노라이드(jasplakinolide) 및 시토칼라신과 같은 항액틴제(anti-actin agent)이다.

토포아이소머레이즈 억제제는 에토포시드 또는 테니포시드와 같은 에피포도필로톡신을 포함한다. 피리미딘 유사체는, 제한없이, 카페시타빈, 5-플루오로우라실, 5-플루오로데옥시유리딘, 5-플루오로데옥시유리딘 모노포스페이트, 시토신 아라비노시드(시토신 arabinoside), 5-아자시티딘(azacytidine), 2',2'-디플루오로데옥시시티딘을 포함한다. 퓨린 유사체는 예를 들어, 머캅토퓨린, 아자티오프린, 티오구아닌, 펜토스타틴, 에리스로하이드록시노닐아데닌, 클라드리빈, 비다라빈, 인산플루다라빈을 포함한다. 엽산 유사체는 메토트렉세이트, 랄티트렉스드(raltitrexed), 로메트렉솔(lometrexol), 퍼미프렉스드(permefrexed), 에다트렉세이트(edatrexate), 페미트렉스드(pemetrexed)를 포함한다. 캄토테신은 이리노토칸(irinotocan), 토포테칸(topotecan), 캄토테칸(camptothecan)을 포함한다. 항생제는, 제한없이, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 에피루비신, 발루부신(valrubucin), 미톡산트론(mitoxanthrone), 블레오마이신, 및 미토마이신을 포함한다. 백금배위착염은 예를 들어, 시스플라틴, 카보플라틴, 및 옥살릴플라틴을 포함한다. 알킬화제는 예를 들어, 메클로레타민, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜파란, 다카바진, 테모졸로마이드, 티오테파, 헥사메틸멜라민, 스트렙토조신, 카무스틴, 부설판, 알트레타민 및 클로람부실을 포함한다.

세포독성제는 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 투여 전후 또는 동시에 투여될 수 있다. 예를 들어, 전형적인 화학 또는 면역요법으로 치료되기 이전에 림프암을 앓는 환자에 대한 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양의 투여에 의해, 환자 내의 종양 부하를 감소시키기 위한 방법이 제공된다. 예를 들어, 환자가 재유도요법(reinduction therapy)을 감당할 수 없을 때, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 투여는 환자로 하여금 이후의 재유도요법을 받도록 한다. 상기 방법은 세포독성제와 함께 환자를 치료하는 단계를 더 포함할 수 있다.

또다른 구체예에서, 골수절제요법 후에 환자 내에서 골수의 재이식 이전에 악성 B 세포의 림프암을 앓는 환자의 골수를 제거하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양으로 생체밖 골수를 치료하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 또한 세포독성제와 함께 생체밖 골수를 치료하는 단계를 더 포함한다.

세포막 상처에 의해 B 세포 세포질액에 대한 접근이 용이하게 되면, 강화된 효능을 가질 수 있는 다른 세포독성제 뿐만 아니라, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양은 화학요법제에 대한 B 세포의 투과성의 결과로 인한 세포막 상처를 유도한다. 따라서, 전형적인 화학요법으로 치료하기 전이거나, 치료중이거나 혹은 치료된 후라도 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양의 투여에 의해, 화학요법제의 세포독성을 증가시키기 위한 방법이 제공되며, 그것에 의하여 화학요법의 효능이 증강된다. 또한, 화학요법의 효능에 있어서의 이러한 증강은 환자의 치료에 있어서 낮은 농도의 화학요법제의 사용을 가능하게 하고, 그것에 의하여 잠재적으로 적은 부작용과 역효과를 가진 효과적인 치료법을 제공한다.

유사하게, 전형적인 면역요법으로 치료하기 전이거나, 치료중이거나 혹은 치료된 후라도 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양의 투여에 의해, 면역요법 중에 이용되는 항-B 세포 항체의 세포독성을 증가시키기 위한 방법이 제공된다. 또한, 전형적인 항-B 세포 면역요법은 보완 저장물이 소진되는 때와 같이 종양 고부하 또는 면역결핍증의 상태하에서 효능이 떨어질 수 있으며, 항-B 세포 면역요법의 효능이 없게 한다. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 조합은 예를 들어, 보완물이 없는 곳에서 전형적인 항-B 세포 면역요법의 이러한 효능의 결여를 극복한다. 따라서, 이러한 항체가 세포 상처를 유도하고, 항체와 세포독성제의 효능 모두를 강화하는 것처럼, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 투여전 또는 투여중에 세포독성제를 투여하는 것은 가장 큰 장점이 될 수 있다.

B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 항체에 의해 세포막 투과성 및/또는 세포독성이 제공되는 동안은 자연 항체, 단클론 항체, 다클론 항체, 키메라 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 단일 사슬 Fv 항체, 항체 조각(예를 들어, Fab), 페길화된 항체, 사가 항체, 다이어보디(diabody), 또는 미니보디(minibody), 또는 이와 유사한 것이 될 수 있다. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 또한 세포독성제를 포함하는 면역접합체를 형성하기 위한 이종 폴리펩티드를 포함하는 융합 단백질로서 제조될 수 있으며, 또는 방사성 동위원소 또는 독소와 같은 세포독성제를 포함하도록 공유적 또는 비공유적으로 변형될 수 있다. 바람직하게, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체가 접합될 때, 지정된, 또는 세포독성제로 용해된, 세포독성제에 의해 제공되는 부가적인 세포독성 뿐만 아니라 항체에 의해 제공되는 세포 상처 세포독성의 장점을 가지도록 실제 크기의 항체가 이용된다.

다른 관점에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 VH4-34 엔코딩 항체이다. 이러한 항체 패밀리의 바람직한 구성원은 mAb 216, RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K를 포함한다. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 바람직한 항체들은 순 양전하를 가지는 CDR 시퀀스를 포함한다.

어떤 구체예에서, 세포독성제는 예를 들어, ¹³¹I, ¹²⁵I, ¹²³I, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁰⁵Rh, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, 및 ¹⁸⁸Re 및 ¹⁸⁶Re, ³²P, ⁵⁷Co, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁷⁷Ga, ⁸¹Rb, ⁸¹Kr, ⁸⁷Sr, ¹¹³1n, ¹²⁷Cs, ¹²⁹Cs, ¹³²I, ¹⁹⁷Hg, ²¹³Pb, ²¹⁶Bi, ¹¹⁷Lu, ²¹²Pb, ²¹²Bi, ⁴⁷Sc, ¹⁰⁵Rh, ¹⁰⁹Pd, ¹⁹⁹Au, ²²⁵Ac, ²¹¹At, 및 ²¹³Bi와 같은 방사성 동위원소이다. 이러한 방사성 동위원소 중에서, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹¹¹In 및 ¹⁸⁶Re가 가장 바람직하다. 방사성 동위원소는 면역접합체 또는 리간드 접합체의 부분을 포함할 수 있다. 다른 구체예에서, 방사성 동위원소는 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체 또는 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 특이결합하는 세포독성 항체에 공유결합된다.

상세한 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 특이결합하는 부가적인 세포독성 항체와 조합하여 사용된다. 세포독성 항체는 B 세포 상의 어떠한 세포 표면 수용체에 대해서도 특이결합할 수 있다. 세포 표면 분자는 수용체, 면역글로불린, 사이토카인, 당단백질 등을 포함한다. 예를 들어, 세포독성 항체는, 제한없이, CD11a, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD34, CD37, CD38, CD40, CD45, CD52, CD80, CD 86, IL-4R, IL-6R, IL-8R, IL-13, IL-13R, α-4/β-1 인테그린 (VLA4), BLYS 수용체, 세포 표면 이디오타입 Ig, 종양괴사인자(TNF), 또는 그들의 혼합물에 대해 특이결합을 나타낼 수 있다. 예를 들어, CD11a에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 이팔리주맙(efalizumab; RAPTIVA)이 될 수 있다. CD20에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는 리툭시맙(rituximab; RITUXAN)이 될 수 있다. CD22에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 에프라투주맙(epratuzumab)이 될 수 있다. CD25에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 다클리주맙(daclizumab; ZENAPAX) 또는 바실리주맙(basiliximab; SIMULECT)이 될 수 있다. CD52에 대한 항체는, 예를 들어, 캄패스(CAMPATH)를 포함한다. α-4/β-1 인테그린 (VLA4)에 대한 항체는, 예를 들어, 나탈리주맙(natalizumab)을 포함한다. TNF 에 대한 항체는, 예를 들어, 인플릭시맙(infliximab; REMICADE)을 포함한다.

따라서 바람직한 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 리투산(RITUXAN), 제나팩스(ZENAPAX), 레미케이드(REMICADE) 또는 랍티바(RAPTIVA), 예를 들어, 또는 그들의 조합과 결합되어 사용된다. 세포독성 항체는, 예를 들어, 방사성 동위원소 또는 독소를 포함하는 면역접합체로서 사용될 수 있다. 또한, 부가된 구체예에서, 병용 요법은 항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체, 부가적인 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 특이결합하는 세포독성 항체, 및 하나 이상의 화학요법제를 포함하여 사용될 수 있다. 예를 들어, mAb216은 리툭시맙, 토수티맙(tosutimab), 또는 이브리투모맙(ibritumomab)과 같은 항-CD20 항체, 또는 캄패스와 같은 항-CD52 항체, 또는 에프라투스맙(epratuxumab) 등과 같은 항-CD22 항체와 결합하여 사용될 수 있다. 화학요법 및 면역요법의 결합에 있어서, 결합요법은 예를 들어, 빈크리스틴과 같이 세포의 세포골격를 분열시키는 약제를 사용하는 화학요법을 더 포함할 수 있다.

부가된 구체예에서, 세포독성제는 리간드 접합체가 될 수 있고, 그리고 그것은 B 세포 상의 세포 표면 수용체와 결합하는 B 세포 수용체 리간드를 포함한다. 상기 리간드는, 제한없이, IL-2, IL-4, IL-6, IL-13, IL-15, BLYS, 또는 TNF, 또는 이와 유사한 것을 포함한다. 리간드 접합체는, 면역접합체와 같이, 융합 단백질 또는 공유적 또는 비공유적으로 결합하는 독소, 방사성 동위원소, 또는 다른 독성물질을 포함한다. 따라서, 이러한 구체예에서, 항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 상술한 리간드 접합체와 조합하여 사용될 수 있고, 그리고 그것은 그들의 생물학적 효과 또는 그들과 융합하거나 결합한 세포독성제에 의해 B 세포에 세포독성을 미친다. 따라서 부가적인 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는, 예를 들어, 디프테리아 독소-접합된 IL-13과 같은 리간드 접합체와의 병용 요법에서 사용되어 질 수 있다. 리간드 접합체는 또한, 예를 들어, 그것의 세포독성을 나타내기 위해 방사성 동위원소 또는 다른 독소를 포함할 수 있다.

부가된 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 세포독성제와 조합하여 자가면역병을 치료하는데 사용된다. 세포독성제는 글루코코르티코이드, 칼시뉴린(calcineurin) 억제제, 항증식/항대사제와 같은 면역억제제, 또는 면역억제제 효과, 또는 그들의 혼합물을 제공하는 항체와 같은 생물학적 제제가 될 수 있다. 면역억제제와의 조합은 B 세포에 의해 변형된 자가면역병의 치료, 또는 어떤 예에서는, 암을 치료하는데 유용하다. 특이한 구체예에서, 칼시뉴린 억제제는 시클로스포린 또는 타크롤리무스이다. 다른 구체예에서, 항증식/항대사제는 아자티오프린, 클로람부콜(chlorambucol), 사이클로포스파마이드, 레플루노미드, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 라파마이신(rapamycin), 탈리도마이드, 또는 그들의 혼합물이다. 글루코코르티코이드는, 예를 들어, 프레드니소론, 프레드니손, 또는 덱사메타손을 포함한다.

어떤 구체예에서, 면역억제제는 세포성장 조절인자 및/또는 억제제이고, 이것은 소분자 치료제, 유전자 치료제 또는 유전자 발현 조절제를 포함할 수 있다. 소분자 치료제는, 예를 들어, 키나아제 억제제, 및 프로테아좀(proteasome) 억제제를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 키나아제 억제제는 글리벡과 같은 bcr/abl 타이로신 키나아제 억제제이다. 다른 바람직한 구체예에서, 프로테아좀 억제제는 벨케이드(VELCADE)와 같은 보론산 에스터이다.

특이한 구체예에서, 세포독성제는, 제한없이, 슈도모나스 엑소톡신 A(Pseudomonas exotoxin A), 라이신(ricin), 디프테리아 독소, 모모딘(momordin), 억새풀 항바이러스 단백질, 포도구균장독소 A, 젤로닌(gelonin), 메이탄시노이드(maytansinoids), 다우나루비신(daunarubicin), 또는 이와 유사한 것을 포함하는 독소이다. 바람직한 독소는 특히 표적화된 세포에 대한 항체 또는 리간드와 접합된다.

바람직한 구체예에서, B 세포의 과다세포증식에 의해 특징지어지는 질병은 림프암이고, 구체적으로 B 세포 기원의 급성 백혈병이다. 림프암은 만성 백혈병뿐만 아니라 급성림프구성백혈병(ALL), B 전구 ALL, 성인 ALL과 같은 급성 백혈병, 및 림프종을 포함한다. 림프종은 공격성, 무통성 및 멘틀(mantel) 세포 유형을 포함한다. 림프암의 구체적인 예들은, 제한없이, 급성림프구성백혈병 (ALL), 비호지킨림프종(NHL), 버킷림프종, B 전구 ALL, 성인 ALL, 또는 만성림프성 백혈병(CLL), 및 이와 유사한 것들을 포함한다.

구체예에서, 접촉하여 과다증식하는 B 세포는 생체내(in vivo), 시험관내(in vitro) 또는 생체밖(ex vivo)에서 수행될 수 있다. 바람직하게, B 세포는 비경구 투여에 의한 상기 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 투여에 의해 생체내에 접촉된다. 세포독성제에 의해 생체내에 접촉하는 B 세포는 당업계에서 알려진 대로, 적절한 세포독성제 및 그것의 포뮬레이션과 같은 적절한 수단이 될 수 있다.

본 발명의 부가적인 관점에서, (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양, 및 (2) 화학요법제의 투여를 포함하는, 림프암을 앓는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 바람직한 구체예에서, 화학요법제는 탁센, 콜히친, 빈카 알칼로이드, 아스파라기나아제, 항액틴제, 에피포도필로톡신, 캄토테신, 항생제, 백금배위착염, 알킬화제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 또는 토포아이소머레이즈 억제제, 또는 그들의 혼합물이다. 구체예에서, 빈카 알칼로이드는 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 또는 비노렐빈이다. 피리미딘 유사체는 카페시타빈, 5-플루오로우라실, 5-플루오로데옥시유리딘, 5-플루오로데옥시유리딘 모노포스페이트, 시토신 아라비노시드, 5-아자시티딘, 또는 2',2'-디플루오로데옥시시티딘을 포함한다. 퓨린 유사체는 머캅토퓨린, 아자티오프렌, 티오구아닌, 펜토스타틴, 에리스로하이드록시노닐아데닌, 클라드리빈, 비다라빈, 또는 인산플루다라빈이 될 수 있다. 엽산 유사체는 메토트렉세이트, 랄티트렉스드, 로메트렉솔, 퍼미프렉스드, 또는 에다트렉세이트, 페미트렉스드가 될 수 있다. 에피포도필로톡신은 에토포시드 또는 테니포시드가 될 수 있다. 캄토테신은 이리노토칸, 토포테칸, 캄토테칸을 포함한다. 화학요법 항생제는 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 에피루비신, 발루부신, 미톡산트론, 블레오마이신, 또는 미토마이신을 포함한다. 백금배위착염은 시스플라틴, 카보플라틴, 또는 옥살릴플라틴을 포함한다. 알킬화제는 메클로레타민, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜파란, 다카바진, 테모졸로마이드, 티오테파, 헥사메틸멜라민, 스트렙토조신, 카무스틴, 부설판, 알트레타민 또는 클로람부실을 포함한다. 동등물, 변형물, 및 유도체 및 이와 유사한 것들은 본 발명의 방법과 조성에 사용될 수 있는 화학 요법제의 범위에서 포함된다. 화학요법제는 CDIM 에피토프에 대한 특이결합을 가진 항체와 투여전, 투여후 또는 동시에 투여될 수 있다.

바람직한 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 순 양전하를 가지는 CDR 시퀀스를 포함한다. 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는, 제한없이, mAb 216, RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K를 포함하는 VH4-34 엔코딩 항체이다. 구체적으로 바람직한 항체는 mAb 216이다.

본 발명의 또다른 관점에서, (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양, 및 (2) B 세포 상의 세포 표면 수용체에 대한 특이결합을 갖는 세포독성 항체의 투여를 포함하는, 림프암을 앓는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 구체예에서, 세포독성 항체는 B 세포(CDIM 에피토프 이외에) 상의 세포 표면 분자에 대한 특이결합을 할 수 있다. 예를 들어, 세포독성 항체는, 제한없이, CD1la, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD34, CD37, CD38, CD40, CD45, CD52, CD80, CD86, IL-4R, IL-6R, IL-8R, IL-13, IL-13R, α-4/β-1 인테그린 (VLA4), BLYS 수용체, 세포 표면 이디오타입 Ig, 종양괴사인자(TNF), 또는 그들의 혼합물에 대한 특이결합을 나타낼 수 있다. 예를 들어, CD11a에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 이팔리주맙(RAPTIVA)이 될 수 있다. CD20에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는 리툭시맙(RITUXAN)이 될 수 있다. CD22에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 에프라투주맙(epratuzumab)이 될 수 있다. CD25에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 다클리주맙(ZENAPAX) 또는 바실리주맙(SIMULECT)이 될 수 있다. CD52에 대한 항체는, 예를 들어, 캄패스(CAMPATH)를 포함한다. α-4/β-1 인테그린 (VLA4)에 대한 항체는, 예를 들어, 나탈리주맙을 포함한다. TNF 에 대한 항체는, 예를 들어, 인플릭시맙(REMICADE)을 포함한다. 따라서 바람직한 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 리투산(RITUXAN), 제나팩스(ZENAPAX), 레미케이드(REMICADE) 또는 랍티바(RAPTIVA), 예를 들어, 또는 그들의 조합과 결합되어 사용된다. 세포독성 항체는, 예를 들어, 방사성 동위원소 또는 독소를 포함하는 면역접합체로서 사용될 수 있다.

B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 순 양전하를 가지는 CDR 시퀀스를 포함한다. 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 VH4-34 엔코딩 항체이다. 바람직한 VH4-34 항체는 mAb 216, RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K를 포함한다.

부가된 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양, 및 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 대한 특이결합을 갖는 세포독성 항체의 투여를 포함하는, 림프암을 앓는 환자를 치료하는 방법은 화학요법제, 방사성 동위원소, 면역접합체, 리간드 접합체, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 또는 그들의 혼합물의 투여를 더 포함한다. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 방사성 동위원소로 표지화될 수 있다. 또한, B 세포 상의 세포 표면 수용체에 대한 특이결합을 가진 세포독성 항체는 방사성 동위원소로 표지화될 수 있다. 바람직한 방사성 동위원소는, ¹³¹I, ¹²⁵I, ⁹⁰Y, ¹¹¹In 및 ¹⁸⁶Re를 포함한다. 항체는 면역접합체로서 사용될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 면역접합체는 슈도모나스 엑소톡신 A, 라이신, 디프테리아 독소, 모모딘, 억새풀 항바이러스 단백질, 포도구균장독소 A, 젤로닌, 메이탄시노이드, 다우나루비신, 또는 이와 유사한 것들을 포함한다.

리간드 접합체는 IL-2, IL-4, IL-6, IL-13, IL-15, BLYS, 또는 TNF, 및 유사한 것들을 포함할 수 있고, 방사성 동위원소, 또는 독소를 더 포함할 수 있다. 면역억제제는, 제한없이, 글루코코르티코이드, 칼시뉴린 억제제, 항증식/항대사제 또는 항체를 포함한다. 구체적인 칼시뉴린 억제제는 시클로스포린, 또는 타크롤리무스, 또는 유사한 것들을 포함한다. 구체적인 항증식/항대사제는 아자티오프린, 클로람부콜, 사이클로포스파마이드, 레플루노미드, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 라파마이신, 탈리도마이드, 또는 그들의 혼합물을 포함한다. 글루코코르티코이드는 또한 프레드니소론, 프레드니손, 또는 덱사메타손과 같은 것들이 이용될 수 있다. 세포성장 조절인자 및/또는 억제제는 소분자 치료제(예를 들어, 키나아제 억제제, 또는 프로테아좀 억제제), 유전자 치료제 또는 유전자 발현 조절제를 포함한다.

본 발명의 다른 관점에서, 방법은, CDIM 에피토프 및 B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제와 결합하는 항체와 접촉하는 B 세포로 구성되는, CDIM 에피토프와 결합하는 항체의 B 세포 세포독성의 증가를 제공한다. 바람직하게, B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제는 탁센, 빈카 알칼로이드 또는 콜히친과 같이 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하는 약제이다. 빈카 알칼로이드는 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 또는 비노렐빈을 포함한다. 탁센은, 제한없이, 파클리탁셀, 또는 도세탁셀을 포함한다. B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제는 항액틴제가 될 수 있다. 즉, 상기 약제는 중합체 액틴 또는 비중합체 액틴인 액틴 필라멘트에 영향을 끼친다. 바람직한 구체예에서, B 세포 세포독성이 증가하는 방법은 림프암, B 세포 과다증식세포질환, 또는 자가면역병의 치료에 사용된다. 림프암은 급성림프구성백혈병(ALL), 비호지킨림프종(NHL), 버킷림프종, B 전구 ALL, 성인 ALL, 또는 만성림프성 백혈병(CLL)과 같은 B 세포 기원의 급성 백혈병을 포함한다. 바람직한 구체예에서, B 세포는 CDIM 에피토프와 결합하는 항체의 세포독성 양을 포함하는 약제학적 포뮬레이션의 비경구 투여에 의해 접촉된다.

다른 관점에 있어서, (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양, 및 (2) 화학요법제, B 세포상의 세포 표면 수용체에 대한 결합을 가진 항체, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 또는 그들의 혼합물의 투여를 포함하는, 포유류에서 자가면역병을 치료하기 위한 방법이 제공된다. 바람직하게, 면역억제제는 글루코코르티코이드, 칼시뉴린 억제제, 또는 항증식/항대사제이다. 바람직하게, 칼시뉴린 억제제는 시클로스포린, 또는 타크롤리무스이다. 항증식/항대사제는 아자티오프린, 클로람부콜, 사이클로포스파마이드, 레플루노미드, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 라파마이신, 탈리도마이드, 또는 그들의 혼합물이 될 수 있다. 글루코코르티코이드는 프레드니소론, 프레드니손, 또는 덱사메타손으로부터 선택될 수 있다. 세포성장 조절인자 및/또는 억제제는 소분자 치료제, 또는 유전자 치료제 또는 유전자 발현 조절제가 될 수 있다.

바람직하게, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 순 양전하를 가지는 CDR 시퀀스를 포함한다. 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 mAb 216, RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K와 같은 VH4-34 엔코딩 항체이다. 상기 방법은 전신홍반루프스, 류마티스관절염, 자가면역 림프세포증식질환, 다발경화증, 건선, 중증근육무력증, 하시모토 갑상선염, 루프스신장염, 피부근육염, 쇼그렌증후군, 시든햄 무도병, 알츠하이머병, 루프스신장염, 류마티스열, 다분비선증후군, 수포성 유천포창, 당뇨병, 헤노호쉔라인자색반, 연쇄구균감염후 신장염, 결절홍반, 타카야스 동맥염, 애디슨병, 크론병, 사코이드증, 궤양 대장염, 다형홍반, 면역글로블린에이 신장병증, 결절다발동맥염, 강직척추염, 굿파스처증후군, 혈전맥관염, 원발쓸개관간경화, 갑상샘항진증, 피부경화증, 만성활동간염, 다발근육염/피부근육염, 다발연골염, 보통천포창, 베게너 육아종증, 막성콩팥병증, 근위축성측삭경화증, 척수매독, 거세포 동맥염/다발근육통증, 악성빈혈, 급속진행 사구체신염, 섬유화 폐포염, 면역매개 저혈소판증과 같은 3급 자가면역병, 급성특발혈소판감소자색반병 및 만성특발혈소판감소자색반병, 그리고 유사한 것과 같은 자가면역병을 치료하는데 유용하다.

본 발명의 다른 관점에서, 항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체와 상기 악성 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는, 화학요법제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 또는 세포독성 항체에 내성을 가진 악성 B 세포를 파괴하기 위한 방법이 제공된다. 구체예에서, 상기 방법은 화학요법제와 상기 악성 B 세포를 접촉하는 단계를 더 포함한다. 어떤 구체예에서, 항체는 화학요법제가 존재하지 않는 경우보다 더 낮은 농도에서 효율적이고/또는 화학요법제는 항체가 존재하지 않는 경우보다 더 낮은 농도에서 효율적이다.

본 발명의 부가적인 관점에서, 화학요법제 및/또는 B 세포상의 CDIM 에피토프에 특이결합하는 항체로 상기 B 세포를 치료하는 단계를 포함하는, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체에 내성을 가지는 악성 B 세포를 파괴하기 위한 방법이 제공된다. 어떤 구체예에서, 화학요법제는 항체가 존재하지 않는 경우보다 더 낮은 농도에서 효율적이다.

본 발명의 부가적인 관점에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체와 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는 B 세포 투과의 방법이 제공된다. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 순 양전하를 가지는 CDR 시퀀스를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 mAb 216, RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K와 같은 VH4-34 엔코딩 항체이다.

본 발명의 다른 관점에 있어서, B 세포를 투과하기에 충분한 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 양과 B 세포가 접촉하는 단계를 포함하는, B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 세포독성제와 상기 B 세포가 접촉하는 단계를 더 포함할 수 있다. 구체예에서, 세포독성제와 B 세포가 접촉하는 단계는 CDIM 에피토프에 특이결합하는 항체와 상기 B 세포가 접촉하는 단계전, 중간 또는 후에 수행된다. B 세포의 투과성은 다양한 수단에 의해 세포독성제의 효능을 증강시키며, 어떤 구체예에서는, 세포독성제의 효능이 B 세포의 세포질액으로 세포독성제의 접근이 증가하는 것에 의해 증강된다. 바람직한 구체예에서, 세포독성제는 화학요법제, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 독소, 또는 그들의 혼합물이다. 부가적인 바람직한 구체예에서, B 세포 접촉 단계는 환자에 항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체를 비경구적으로 주입하여 수행된다.

구체적인 관점에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 약 2.5에서 약 3000 mg/m²의 용량에서 투여되고, 보다 바람직하게 투여되는 항체의 용량은 약 25에서 1000 mg/m²이고, 보다 구체적으로, 약 75, 150, 300 또는 600 mg/m²이다. 부가적인 관점에서, 항체는 약 0.25 mg/kg 에서 약 100 mg/kg의 용량에서 투여되고, 보다 바람직한 투여되는 항체의 용량은 약 1.25, 2.5, 5, 10, 또는 20 mg/kg이다. 항-CDIM 항체는 일반적으로 일주일 단위로 투여되고, 일부 구체예에서, 하루 1회와 같이 주 1회 이상 투여된다. 부가적인 세포독성 항체는 4주 동안 주당 10-375 mg/m²의 양, 또는 2 내지 10주에 걸쳐 주당 0.4-20 mg/kg의 양으로 투여될 수 있다.

본 발명의 부가적인 관점에서, 비경구 투여를 위한 약제학적 포뮬레이션은 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양을 포함하여 제공된다. 구체예에서, 약제학적 포뮬레이션은 화학요법제를 더 포함한다.

본 발명의 다른 관점에서, B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 상태를 앓는 환자를 치료하기 위해 제공되는 키트는 (a) 환자에서 B 세포를 투과하기에 충분한 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 양을 포함하는 약제학적 조성, 및 (b) B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 상태를 효율적으로 치료하기 위한 세포독성제의 치료적으로 효율적인 양을 포함하는 약제학적 조성을 포함한다. 조성을 포뮬레이팅하기 위한 주입을 위한 선택적인 약학적으로 허용되는 용액이 제공될 수 있다. 항체 조성은 바람직하게 비경구적으로 투여되고, 세포독성제는 적당한 수단에 의해 투여될 수 있다. 항체 조성과 세포독성제 조성의 투여를 위한 지도가 키트와 함께 제공될 수도 있다.

부가적인 관점에서, 본 발명은 B 세포 림프암, 자가면역병 및 B 세포 과다세포증식 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 사용을 포함한다.

본 발명의 부가적인 목적, 장점 및 새로운 특징은 아래의 발명의 상세한 설명에서 일부 상세하게 설명될 것이고, 일부는 아래의 고찰에 의해 당업자에게 명백하게되거나, 본 발명의 실시예에 의해 명확하게 될 것이다.

발명의 상세한 설명

I. 정의 및 개요

본 발명을 자세히 설명하기 이전에, 본 발명은 특별한 버퍼, 부형제, 화학요법제, 또는 이와 유사한 것에 의해 제한되지 않으며 다양해질 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 또한, 여기서 사용되는 기술은 구체적인 실시예를 설명하는 것을 목적으로 하고 본 발명의 영역을 제한하기 위한 것이 아니다.

주의해야만 하는 것은 여기 및 청구항에서 사용되는 단수형 "a", "and" 및 "the"는 문맥이 명확히 나타내지 않더라도 복수형을 포함한다는 것이다. 따라서, 예를 들어, "화학요법제"는 둘 이상의 화학요법제를 포함하며; "약제학적 부형제"는 둘 이상의 약제학적 부형제를 포함한다.

제공되는 값의 영역에서, 각 중개값은, 문맥이 명확히 나타내지 않더라도 가장 낮은 단위가 10이고, 상기 영역의 최고와 최저의 제한 사이인 정해진 영역에서 다른 정해진 또는 중개값은, 본 발명에 포함된다. 더 작은 영역에서의 최고 및 최저의 제한은 보다 작은 영역에서 독립적으로 포함되어 질 수 있으며, 역시 본 발명에 포함되고, 정해진 영역에서 제한은 특히 배제될 수 있다. 정해진 영역에서 하나 이상의 제한을 포함하는 곳에서, 제한을 포함하는 하나 이상의 것들을 배제한 영역 역시 본 발명에 포함된다.

여기서 사용되는 "항-CDIM 항체" 및 "CDIM 결합 항체"는 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체를 표시한다. 이러한 용어들은 여기서 번갈아 사용될 것이다.

여기서 사용되는 약제인 "성장을 억제하는" 또는 "성장 억제제"는 세포의 성장 또는 증식을 억제하는 화합물 또는 조성물을 표시하고, 특이한 종양 세포 형태는 요구되는 CD20 항원과 같은 B 세포 항원을 발현한다. 따라서, 성장 억제제는 합성기(S기)에서 종양 세포의 백분율을 상당히 감소시킨다.

"암" 및 "암성"은 일반적으로 조절되지 않는 세포 성장을 특징으로 하는 포유류에서의 생리적 조건를 표시하거나 설명한다.

"CD20" 항원은 35 kDa이고, 말초혈액 또는 림프기관으로부터 B 세포의 90% 이상의 표면에서 글리코실레이트되지 않은 인단백질이 발견된다. CD20은 이른 전-B 세포 개발 동안 발현되고 플라즈마 세포 분화 동안 남는다. CD20은 악성 B 세포뿐만 아니라 보통 B 세포에서도 나타난다. 본 문헌에서 CD20에 대한 다른 이름은 "B-림프구-제한 항원" 및 "Bp35"이다. CD20 항원은 예를 들어, Clark et al. PNAS (USA) 82:1766 (1985)에 서술되어 있다.

"세포 상처"는 일반적인 막 임퍼미언트(impermeant) 표지자의 세포질액 내로의 흡입에 의해 표지되는 생존 가능한 플라즈마 막 분열 이벤트를 표시한다. 일반적인 세포 상처 분열은 약 1에서 1000 ㎛²사이의 범위이고 따라서 막 분열이 동반된 보완물 매개된 세포독성 또는 퍼포린 또는 독소 또는 그라미시딘 또는 황색포도상구균 알파 독소 같은 포어 형성제(pore forming agents)에 의해 형성된 큰 포어보다도 더 크다. 세포 상처는 상기 상처의 결과로서, 다시 말해 상기 상처를 치료하기 위한 리소솜 융해의 결과로서 세포 표면상의 Lamp-1의 발현으로 명백하게 되는 세포 치료 메커니즘에 의해 검출된다.

"화학요법제"는 암 또는 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 다른 질환의 치료에 유용한 화학적 화합물로 표시된다.

여기서 사용되는 "세포독성제" 및 "독소"는 세포의 성장을 억제하거나 제어하는 또는 세포의 기능을 억제하거나 막고/막거나 세포의 사멸을 초래하는 물질을 표시한다. 상기 용어는 하나 이상의 방사성 동위원소, 화학요법제, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제를 포함하기 위해 계획된 것이고, 그리고 그것은 소분자 치료제, 세포독성 항체, 및 박테리아, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소와 같은 독소, 또는 그들의 조각이 될 수 있다. 상기 용어는 또한 면역접합체 방사성표지된 리간드, 및 독소-표지된 리간드와 같은 다른 리간드 접합체뿐만 아니라, 표적 세포에 특이결합하기 위한 독소 또는 방사성 동위원소로 표지된 항체를 포함하는 면역접합체를 포함한다. 또한, 하나 이상의 세포독성제는 조합으로 사용될 수 있다.

"장애"는 여기서 서술된 조합치료와 함께 치료되는 장점을 가지는 어떤 질환이다. 이것은 만성 및 급성 장애 또는 상기 장애가 포유동물에 미리 걸리게 하는 병리 상태들을 포함하는 질병을 포함한다. 여기서 치료되기 위한 장애의 제한없는 예들은 암, 혈액암, 백혈병 및 림프암 및 염증 및 면역 장애와 같은 자가면역병을 포함한다.

"과다세포증식" 및 "과다세포증식하는" 이란 용어는 세포 유형의 비정상적 성장을 표시하고, 그리고 그것은 암성 또는 양성이 될 수 있다. 과다세포증식은 자가면역병을 매개하는 B 세포에서 분비된 자율항체의 다클론 증식을 포함한다.

"면역접합체"는 세포독성제로 접합된 항체를 표시하고, 그것은 공유적 또는 비공유적으로 조합된다.

"정맥내 주입"은 일반적으로 약 15분 이상, 보다 일반적으로 약 30에서 90분 사이의, 시간에 걸쳐 동물 또는 인간 환자의 정맥내로 약제를 주입하는 것을 표시한다.

"정맥내 덩어리" 또는 "정맥내 밀대"는 약 15 분 이하, 일반적으로 5분 이하 동안 약을 받는 동물 또는 인간의 몸의 정맥내로의 약 투여를 표시한다.

치료의 목적을 위한 "포유동물"은 탄생 후에, CDIM 항원 발현이 B 세포 계통의 세포로 현저히 제한되는 한, 인간, 집 및 농장동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완동물을 포함한 어떤 포유류 종을 표시한다.

인간화 항-CD20 항체는 "RITUXAN^®브랜드"로서 표시된다. 항-CD20 항체는 CD20 항원과 직접적으로 대비되는 유전자 가공 키메라 뮤린(뮤린)/인간 단클론 항체이다. 리툭시맙은 1998년 4월 7일에 발행된 미국특허 제5,736,137호에서 "C2B8"로 명명된 항체이다. C2B8 항체의 RITUXAN^®브랜드는 재발성 또는 난치성 저질의 소포성, CD20 양성, B 세포 비호지킨림프종을 가진 환자의 치료를 위해 표시된다.

특이결합이란 용어는 적어도 10⁶ M^-1, 및 일반적으로 약 10⁶ M^-1 및 약 10⁸ M^-1 사이의 높은 결합력을 가지는 성질을 나타낸다.

"피하투여"는 동물 또는 인간 환자의 피부 아래, 바람직하게는 피부 및 하부조직 사이의 포켓내에, 약 용기로부터 상대적으로 느리고 지속되는 전달을 위해, 약제의 주입을 나타낸다.

"피하 덩어리"는 덩어리 약 전달이 바람직하게 약 15분보다 적고, 보다 바람직하게는 5분 이하, 및 가장 바람직하게는 60초 이하인 곳에서 동물 또는 인간 환자의 피부 아래에 약을 투여하는 것을 나타낸다. 투여는 포켓이 있는 곳, 피부 및 하부조직 사이의 포켓내에 하는 것이 바람직하다.

"피하주입"은 동물 또는 인간 환자의 피부 아래, 바람직하게는 피부 및 하부조직 사이의 포켓내에, 제한되는 것은 아니지만, 30분 이하 또는 90분 이하를 포함하는 기간 동안 약 용기로부터 상대적으로 느리고 지속되는 전달을 위해, 약제의 주입을 나타낸다. 선택적으로, 주입은 동물 또는 인간 환자의 피부 아래에 이식되는 약물전달펌프의 피하이식으로 이루어질 수 있으며, 여기서 상기 펌프 전달자는 30분, 90분, 또는 치료요법에 걸리는 기간 같은 미리 예정된 시간의 주기에 대한 약제의 양이 미리 결정된다.

"약제학적으로 효과적인 양"은 성장을 저지하는 효과 또는 세포의 사멸을 초래하는 활성 약제의 양을 표시하기 위해 사용된다. 어떤 구체예에서, 약제학적으로 효과적인 양은 세포 투과의 성질, 증식성 신호의 억제, 세포 대사의 억제, 세포자멸 활성의 촉진 또는 세포의 사멸 유도의 성질을 가진다. 구체적인 관점에서, 약제학적으로 효과적인 양은, 예를 들어, 질병이 느리게 진행하는 것과 같은 효과를 보여주는 표적 혈청 농도를 표시한다. 효능은 치료되는 질환에 의존하여 전형적인 방법으로 측정될 수 있다. 예를 들어, 림프암에서, 효능은 질병 진행에 대한 시간(TTP)의 평가, 또는 반응 속도(RR)를 결정하는 것에 의해 측정될 수 있다.

본 발명의 문맥에서 사용되는 "치료하다", "치료" 및 "요법" 및 이와 유사한 것들은 제한되지는 않지만 하나 이상의 증상, 퇴행, 지체 또는 질병 또는 장애의 진행의 정지의 완화를 포함하는, 임상적으로 바람직하고 또는 유리한 효과에 이르는 질병 또는 장애를 위한 예방뿐만 아니라 요법, 또는 억제 측정을 포함하는 것을 의미한다. 따라서, 예를 들어, 치료란 용어는 질병 또는 장애의 증상의 시작 전 또는 후에 질병 또는 장애의 모든 신호를 방해 또는 제거하기 위한 약제의 투여를 포함한다. 다른 실시예에서, 상기 용어는 질병의 증상과 싸우기 위한 질병의 임상 소견 후 약제의 투여를 포함한다. 또한, 본 발명의 문맥내에서 "치료" 또는 "요법"을 포함하는 치료가 질병의 개선에 이르는 것과 상관없이, 시작 후 및 임상 증상 후 약제의 투여는, 투여가 질병 또는 장애의 조직 손상의 정도 또는 전이의 양 또는 범위와 같은 임상 파라미터에 영향을 끼치는 곳에서 전개된다.

VH4-34 유전자(다양한 중량 범위)는 53개의 밝혀진 인간 기능성 항체 배자계열 유전자중의 하나이다¹. VH4-34 유전자는 모든 하플로타입(haplotypes)을 나타내고, 시퀀스의 무변화는 관계되지 않은 각각으로부터 분리되는 배자계열 DNA에 나와있다^{2 3}. VH4-34 유전자에 의해 엔코딩된 항체는 독특한 성질을 보유하고 있는 것으로 보여진다. 적혈구(RBCs)의 "I" 또는 "i"항원에 직접적으로 대응하는 모든 mAbs는 VH4-34 유전자^{4 5 6}에 의해 엔코딩되고, 일반적인 IgM 계열이ㅁ며, 그리고, 그들이 4℃에서 RBCs에 접착하기 때문에, 차가운 응집소(CAs)로서 고전적으로 서술된다. CAs에 의해 확인되는 리간드는 단백질 및/또는 RBCs의 지질상에 존재하는 선형 또는 분지형 당포합체이다. 신생아 및 탯줄혈액 RBC는 선형 i 항원을 가진다. 분지형 I 사슬은 태어난 후에 생성된다^{7 8}. 인간 B세포 상에서 확인되는 "i"항원은 효소 엔도-베타-갈락토시다아제에 민감한 선형 락토사민 결정인자이다. VH4-34 항-B 세포/항-i mAbs의 시퀀스 분석은 그들이 배자계열 구조이지만 독립적으로 D, J, H, 및 가벼운 사슬을 발현한다는 것을 보여준다²⁰.

생체내에서, VH4-34 유전자 유도 항체의 발현은 엄격히 조절된다. 인간 B 세포의 4-8%만이 VH4-34 엔코딩 항체를 발현하므로, VH4-34 유도 항체의 혈청 레벨은 일반 성인에서 무시된다^{9 10}. 순환하는 VH4-34 유도 항체에서의 증가는 EBV(단핵세포증) 및 HIV 감염 및 어떤 자가면역병을 포함하는 선택적인 병리 상태들만을 보여준다^{11 12 13 14 15 16}.

본 발명자들은 VH4-34 엔코딩된 항체 및 그들의 자가면역 장애에 있어서의 역할에 대해 광범위하게 연구하여 왔다. 이전의 연구들은 어떤 항-B 세포 VH4-34 항체가 B 세포에 세포독성을 가지고 B 세포 증식을 감소시키는지를 증명하는 것이었다(Bhat, N. et al. (1997) Clin. Exp. Immunol. 108:151; Bhat, N., et al., (2001) Crit. Rev. Oncol. Hematol. 39:59). 세포독성은 보완물과 독립적으로 보여지고, 높은 온도에 의존되고, 4℃에서 처리될 때, 세포 사멸 및 세포 표면상에서의 수포 및 구멍과 같은 플라즈마 막 결함의 형성이 증대되는 결과를 초래한다. 플라즈마 막 결함은 C9 보완물 구성성분(~100 Å) 및 퍼포린(~160 Å)과 같은 다른 잘 알려진 구멍-형성 단백질에 의해 형성된 구멍보다 상당히 더 크게 보여진다. 그것은 세포독성이 새로운 메커니즘에 의해 매개되는 것을 시사한다.

본 발명자들은 이러한 VH4-34 유전자 유도 항체가 B 세포에서 세포막 상처를 유도할 수 있다는 놀랍고도 예측하지 못한 발견을 하게 되었다. 막 손상은 유핵 포유류 세포가 직면한 통상적인 위협이지만, 항체가 직접적인 막 손상을 초래하는 것을 미루어 보면 새로운 것이다. 또한, 본 발명자들은 비록 항체가 어떤 상태하에서 구멍 및 막 결함을 초래하지만, 준치사 농도에서 처리될 때, 약간의 B 세포들은 단지 상처를 받고, 어떤 예에서는 상처를 회복할 수 있는 것을 발견하였다.

또한, 본 발명자들은 항체가 유도한 세포막 상처는 다른 막 상처와 유사한 방법으로 회복되는 것을 증명하였다. 세포독성 항체와 독립적인 이러한 보완물들로 처리된 세포는 막 상처에 부착하기 위한 플라즈마 막과 리소솜 융해를 사용하여 항체가 유도한 세포막 상처의 회복을 시도하고, 세포 표면상의 리소솜 막 단백질의 외관으로 귀착된다. 또한, 세포가 손상을 치료할 수 있는 능력이 없을 때 궁극적으로는 사멸한다는 것이 증명되었다.

또한, 본 발명자들은 상처받은 세포는 적어도 일시적으로 투과될 수 있어서, 부가적인 세포독성제의 작용에 보다 영향받기 쉬운, 동물 및 인간 질병 및 장애의 치료를 위한 강화된 효능을 가진 새로운 치료 옵션을 제공하는 것을 발견하였다. 세포막 상처는 B 세포의 투과성으로 귀결되고 화학요법제와 같은 세포독성제의 참가를 허용하며, 따라서 어떠한 약제에 내성이 있거나 투과하기 어려운 세포 또는 그들을 세포밖으로 활발히 전달하는 세포에 있어서도 화학요법제의 효능이 증가된다.

CDIM 결합 항체에 의해 제공되는 세포 사멸 및 상처의 메커니즘이 전형적인 세포독성 항체(보완물 또는 세포매개 파괴) 를 이용하는 세포독성 메커니즘과 다르기 때문에, 전형적인 면역요법과 CDIM 결합 항체의 조합은 세포독성 항체와 결합하는 부가적인 B 세포 항원에 의해 강화된 파괴의 효율을 제공할 수 있다.

바람직한 구체예에서, 항체 본 발명의 한 영역에 따르는 항체는 도 1과 2에 도시한 바와 같이, 인간 B 세포상의 CDIM 에피토프에 결합하는 VH4-34 엔코딩된 단클론 항체이다^{17 18 19}. 이러한 항체는, 도 3에 도시한 바와 같이, 재발한 소포 림프종 환자로부터 얻어진 B 세포에 세포독성을 갖는다. 또한, 도 4에서 도시한바와 같이, 항체는 B 세포주에 세포독성을 가진다. 바람직한 구체예에서, 이러한 mAbs는 인간 림프구 및 이종골수종 세포주의 융합에 의해 제조되고, 그것은 하이브리도마 분비 인간 항체를 생산한다. 예를 들어, mAb 216은 VH4-34 유전자에 의해 엔코딩된 인간 IgM이고, 여기서 서술된 CDIM 결합 VH4-34 항체의 바람직한 구체예이다. MAb 216은 Bhat 등에 의해 미국특허 제5,593,676호 및 제5,417,972호 및 유럽특허 제712 307 B1에 더 서술되었다.

CDIM 에피토프에 결합하는 부가적인 VH4-34 유도 항체는 RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K를 포함한다. 이러한 항체 중 어떤 것은 기본적인 아미노산 잔여물이 풍부한 CDR3 시퀀스 및 상기 CDR3의 순 전하가 +2일 때, 특히 강한 결합을 하는 것을 특징으로 한다. 따라서, 순 양 전하 CDR을 가지며, 특히 CDR3, CDIM 에피토프에 결합을 나타내는 항체는, 본 발명의 영역에 포함되고 부가되는 청구항에서 청구된다.

본 발명자들은 이러한 항-CDIM 항체의 B 세포독성은 화학요법제, 방사성 동위원소, 세포독성 항체, 면역접합체, 리간드 접합체, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 독소, 또는 그들의 혼합물을 포함하는 세포독성제의 첨가에 의해 현저하게 및 상승적으로 강화될 수 있다는 놀라운 발견을 하게 되었다.

따라서, 한 구체예에서, (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양, 및 (2) 세포독성제와 상기 B 세포가 접촉하는 단계를 포함하는, B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 포유류를 치료하기 위한 방법이 제공된다. B 세포의 과다세포증식은 암, 바이러스성 질병, 면역결핍 또는 자가면역병을 앓는 환자에게서 일어난다.

본 발명의 다른 관점에 있어서, B 세포를 투과하는데 충분한 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 양과 상기 B 세포가 접촉하는 단계를 포함하는, B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질병 또는 장애를 치료하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 세포독성제와 상기 B 세포가 접촉하는 단계를 더 포함할 수 있다.

림프암의 치료

항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 어떤 림프암, 특히 어떤 B 세포 기원의 급성 백혈병을 일으키는 B 세포의 과다세포증식을 치료하는데 사용될 수 있다. 림프암은, 만성 백혈병뿐만 아니라 급성림프구성백혈병(ALL), B 전구 ALL, 성인 ALL, 및 림프종과 같은 급성 백혈병을 포함한다. 림프종은 비호지킨림프종(NHL), 및 공격성, 무통성 및 멘틀(mantel) 세포 유형을 포함한다. 림프암은, 제한없이, 중추신경계 림프종뿐만 아니라 말초신경계 소포 림프종, 점막 림프종을 포함할 수 있다. 림프암의 구체적인 예들은, 제한없이, 급성림프구성백혈병(ALL), 비호지킨림프종(NHL), 버킷림프종, B 전구 ALL, 성인 ALL, 또는 만성림프성 백혈병(CLL), 및 이와 유사한 것들을 포함한다.

ALL을 치료하기 위한 대표적인 치료 프로토콜이 실시예 11에서 설명된다. 부가적인 화학요법 치료 요법은 ALL 또는 다른 B 세포 기원의 림프암의 치료를 위한 항-CDIM 항체와 조합되어 이용되어질 수 있으며, 이러한 부가적인 화학요법 치료 요법은 제한없이 본 발명의 영역에 포함된다.

바이러스성 질병에 기인하는 B 세포 과다세포증식의 치료

B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 인간 면역결핍증 바이러스 또는 단핵세포증과 같은 어떤 바이러스성 감염을 일으키는 B 세포 과다세포증식을 치료하기 위해 사용될 수 있다.

면역결핍에 기인하는 B 세포 과다세포증식의 치료

B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 암 치료요법 또는 자가면역 장애를 치료하기 위한 면역억제요법의 결과를 일으키는 어떤 면역결핍을 일으키는 B 세포 과다세포증식을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, B 세포 과다세포증식은 항암요법 또는 다른 면역억제요법을 받는 환자에 있어서 이식후면역증식병 및 면역결핍증 증후군을 일으킨다.

B 세포에 의해 매개되는 자가면역병의 치료

B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 단독 또는 세포독성제와 조합하여 자가면역병을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 세포독성제는 글루코코르티코이드, 칼시뉴린 억제제, 항증식/항대사제, 또는 면역억제제 효과를 제공하는 항체와 같은 생물학적 제제, 또는 그들의 혼합물과 같은 면역억제제가 될 수 있다. 면역억제제와의 조합은 B 세포에 의해 매개되는 자가면역병의 치료, 또는 어떤 예에서, 암의 치료에 유용하다. 구체예에서, 칼시뉴린 억제제는 시클로스포린 또는 타크롤리무스이다. 다른 구체예에서, 항증식/항대사제는 아자티오프린, 클로람부콜, 사이클로포스파마이드, 레플루노미드, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 라파마이신, 탈리도마이드, 또는 그들의 혼합물이다. 글루코코르티코이드는, 예를 들어, 프레드니소론, 프레드니손, 또는 덱사메타손을 포함한다.

어떤 구체예에서, 면역억제제는 세포성장 조절인자 및/또는 억제제이고, 소분자 치료제, 유전자 치료제 또는 유전자 발현 조절제를 포함할 수 있다. 소분자 치료제는, 예를 들어, 키나아제 억제제, 및 프로테아좀 억제제를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 키나아제 억제제는 글리벡과 같은 bcr/abl 타이로신 키나아제 억제제이다. 또다른 바람직한 구체예에서, 프로테아좀 억제제는 벨케이드와 같은 보론산 에스터이다.

구체예에서, 세포독성제는 제한없이 슈도모나스 엑소톡신 A, 라이신, 디프테리아 독소, 모모딘, 억새풀 항바이러스 단백질, 포도구균장독소 A, 젤로닌, 메이탄시노이드, 다우나루비신, 또는 유사한 것을 포함하는 독소이다. 바람직하게 독소는 항체 또는 세포 특정 표적에 대한 리간드에 접합된다.

대표적인 자가면역병은 전신홍반루프스, 류마티스관절염, 자가면역 림프세포증식질환, 다발경화증, 건선, 및 중증근육무력증을 포함할뿐만 아니라, 하시모토 갑상선염, 루프스신장염, 피부근육염, 쇼그렌증후군, 알츠하이머병, 시든햄 무도병, 루프스신장염, 류마티스열, 다분비선증후군, 수포성 유천포창, 당뇨병, 헤노호쉔라인자색반, 연쇄구균감염후 신장염, 결절홍반, 타카야스 동맥염, 애디슨병, 크론병, 사코이드증, 궤양 대장염, 다형홍반, 면역글로블린에이 신장병증, 결절다발동맥염, 강직척추염, 굿파스처증후군, 혈전맥관염, 원발쓸개관간경화, 갑상샘항진증, 피부경화증, 만성활동간염, 다발근육염/피부근육염, 다발연골염, 보통천포창, 베게너 육아종증, 막성콩팥병증, 근위축성측삭경화증, 척수매독, 거세포 동맥염/다발근육통증, 악성빈혈, 급속진행 사구체신염, 섬유화 폐포염, 면역매개 저혈소판증과 같은 Class III 자가면역병, 급성특발혈소판감소자색반병 및 만성특발혈소판감소자색반병 같은 것들, 및 유사한 것들을 포함한다.

종양 부하를 감소시키고 재유도요법을 수행하기 위한 방법

B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양을 환자에 투여하는 것에 의해, 전형적인 화학 또는 면역요법으로 치료하기 이전에 림프암을 앓는 환자에서 종양 부하를 감소시키기 위한 방법이 제공된다.

또한, 전형적인 화학요법 또는 면역요법 및 재유도 요구에 대해 환자가 난치성이 되어갈 때, 상기 환자가 mAb 216와 같은 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 투여에 의해 재유도요법에 대한 준비를 할 수 있도록 한다. 이러한 치료는 환자에서 살아있는 종양세포의 숫자를 감소시키고 환자에게 이후의 재유도요법을 받도록 한다.

시험관내 및 생체밖 사용

또다른 구체예에서, 하기 방법은 골수절제요법후의 환자에 있어서 골수의 재이식이전에 악성 B 세포의 림프암을 앓는 환자의 골수를 제거하기 위한 방법을 포함한다. 상기 방법은 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양으로 환자 생체밖의 골수를 치료하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 화학요법제 또는 세포독성 항체와 같은 세포독성제로 생체밖 골수세포를 치료하는 단계를 더 포함할 수 있다.

항-CDIM 항체에의 민감성에 대한 환자 세포의 시험관내 프리스크리닝(prescreening)

한 구체예에서, 환자의 혈액의 샘플은 바람직하게 mAb 216과 같은 VH4-34 항체에 의해, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 특이결합하는 항체 및 항체 매개 세포독성을 시험할 수 있다. 100%이하의 세포 사멸을 나타내는 환자에 대해, 부가적인 세포독성제와의 조합은 최적의 환자 치료요법을 시험할 수 있게 할 수 있다.

치료방법의 장점

전형적인 면역요법으로의 치료 이전, 중간 또는 후라도 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양의 투여에 의해, 화학요법동안에 사용되는 세포독성제 및 면역요법동안에 사용되는 항-B 세포 항체의 세포독성을 증가시키기 위한 방법이 제공된다. 전형적인 항-B 세포 면역요법은 높은 종양 부하 또는 면역결핍증의 질환하에서 효능이 떨어질 수 있다. 예를 들어, 보완 저장물이 소진되는 때, 항-B 세포 면역요법의 효능이 없게 한다. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 조합은 전형적인 항-B 세포 면역요법의 이러한 효능의 결여를 극복할 수 있도록 한다. 왜냐하면, 항-CDIM 항체는 세포상처를 포함하여 다른 독성의 메커니즘을 사용하여 작용하기 때문이다. 세포 상처는 전형적인 면역요법에 기인하는 보완물 매개된 막 누출을 악화시킨다. 부가적인 세포독성제와의 조합에 있어서, B 세포 세포질액에 대한 화학요법 또는 다른 세포독성제의 세포질 접근의 증가에 의해, 항-CDIM 항체는 치료요법의 세포독성을 엄청나게 증가시킬 수 있다.

또한, 많은 암 또는 자가면역병 환자들은 취약하며 공격적인 치료요법을 견딜 수 없다. 항-CDIM 항체의 새로운 작용 메커니즘은, 특히 화학요법제와 조합하여 사용할 때, 예를 들어, 치료요법의 효능 증가에 의해, 그리고 환자에게 화학요법제를 효능을 낼 수 있는 것보다 더 낮은 용량으로 투여하는 것을 허용함으로 인해, 취약한 환자의 치료를 가능하게 한다.

항체

본 발명에서 유용한 항체는 항-CDIM 항체 및 부가적인 B 세포상의 세포 표면 분자에 특이결합하는 세포독성 항체를 포함한다. 항-CDIM 항체 및 부가적인 세포독성 항체는 조합 치료요법에 사용될 수 있다.

세포독성 항체는 어떠한 B 세포상의 세포 표면 분자에 대해서도 특이적 결합을 할 수 있다. 세포 표면 분자는 수용체, 면역글로불린, 사이토카인, 당단백질, 등을 포함한다. 예를 들어, 세포독성 항체는, 제한없이, CD11a, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD34, CD37, CD38, CD40, CD45, CD52, CD80, CD 86, IL-4R, IL-6R, IL-8R, IL-13, IL-13R, α-4/β-1 인테그린 (VLA4), BLYS 수용체, 세포 표면 이디오타입 Ig, 종양괴사인자(TNF), 또는 그들의 혼합물에 대한 특이결합을 나타낸다. 예를 들어, CD11a에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 이팔리주맙(RAPTIVA)이 될 수 있다. CD20에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는 리툭시맙(RITUXAN)이 될 수 있다. CD22에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 에프라투주맙(epratuzumab)이 될 수 있다. CD25에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 다클리주맙(ZENAPAX) 또는 바실리주맙(SIMULECT)이 될 수 있다. CD52에 대한 항체는, 예를 들어, 캄패스(CAMPATH)를 포함한다. α-4/β-1 인테그린 (VLA4)에 대한 항체는, 예를 들어, 나탈리주맙을 포함한다. TNF 에 대한 항체는, 예를 들어, 인플릭시맙(REMICADE)을 포함한다.

따라서 바람직한 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 리투산(RITUXAN), 제나팩스(ZENAPAX), 레미케이드(REMICADE) 또는 랍티바(RAPTIVA), 예를 들어, 또는 그들의 조합과 결합되어 사용된다. 세포독성 항체는, 예를 들어, 방사성 동위원소 또는 독소를 포함하는 면역접합체로서 사용될 수 있다. 또한, 부가적인 구체예에서, 병용 요법은 항체 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체, 부가적인 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 특이결합하는 세포독성 항체, 및 하나 이상의 화학요법제를 포함하여 사용될 수 있다. 예를 들어, mAb216은 리툭시맙, 토수티맙, 또는 이브리투모맙과 같은 항-CD20 항체와의 조합, 에프라투주맙과 같은 항-CD22 항체, 또는 캄패스와 같은 항-CD52 항체와 조합하여 사용될 수 있다. 병용 요법은, 화학요법 및 면역요법의 병용에 있어서, 예를 들어, 빈크리스틴과 같이 세포의 세포골격를 분열시키는 약제를 사용하는 화학요법을 더 포함할 수 있다.

"항체"는 가장 넒은 상식에서 사용되며 특히 완전한 자연 항체, 단클론 항체, 다클론 항체, 2개 이상의 완전한 항체로부터 형성되는 다중특이성 항체(예를 들어 이중특이성 항체), 사가 항체와 같은 합성 항체, 및 원하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 조각을 포함한다. 인간 항체는 인간 이외의 종에서 만들어진 항체를 포함한다. 항체는 또한 세포독성제 또는 세포조절제와 항체의 융합 또는 화학적 커플링을 포함한다.

"항체 조각"은 완전한 항체, 바람직하게 항원과 결합하거나 완전한 항체의 변동성 영역인 부분을 포함한다. 항체 조각의 예들은 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 조각; 다이어보디(diabodies); 선형 항체(Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 [1995]); 단일 사슬 항체 분자; 및 항체 조각으로부터 형성되는 다중특이성 항체를 포함한다.

여기서 사용되는 "단클론 항체"란 용어는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 형성되는 항체, 즉, 작은 양으로 존재할 수 있는 돌연변이를 자연적으로 일으킬 가능성을 제외하고는 동일한 집단을 포함하는 개개의 항원을 나타낸다. 단클론 항체는 단일 항원 부위에 직접적으로 대응하는 고도의 특이성을 가진다. 또한, 전형적으로 서로 다른 결정인자(에피토프)에 직접적으로 대응하는 다른 항체를 포함하는 전형적인 (다클론) 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단클론 항체는 항원상의 단일의 결정인자에 직접적으로 대응된다. 그들의 특이성에 더하여, 단클론 항체는 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않고 하이브리도마 컬처에 의해 합성되는 장점이 있다. 조절제 "단클론"은 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 얻어지는 것과 같은 항체의 특징을 나타내며, 어떤 특별한 방법에 의한 항체의 제조가 요구되는 것은 아닌 것으로 보인다. 예를 들어, 본 발명에 따라서 사용되는 단클론 항체는 문헌[Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에서 처음으로 서술된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법(참조, 예를 들어, 미국특허 제4,816,567호)에 의해 제조될 수 있다. "단클론 항체"는, 예를 들어, 문헌[Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) and Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에서 서술된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 분리될 수도 있다.

여기의 단클론 항체는, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 상기 항체의 조각뿐 아니라, 또다른 종에서 유도되는 항체 또는 또다른 항체 클래스 또는 서브클래스에서 사슬(들)의 나머지가 대응하는 시퀀스와 동일하거나 상응하는 동안, 특이하게 특수한 종에서 유도되는 항체 또는 특수한 항체 클래스 또는 서브클래스에서 무겁고/무겁거나 가벼운 사슬의 부분이 대응하는 시퀀스와 동일하거나 상응하는 "키메라" 항체(면역글로불린)을 포함한다(미국특허 제4,816,567호; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 [1984]).

인간외(예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 사슬 또는 인간외 면역글로불린으로부터 유도되는 최소한의 시퀀스를 포함하는 그것의 조각(Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 다른 항체의 항원-결합 서브시퀀스와 같은)이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용자의 상보성 결정부위(CDR)로부터의 잔여물인 인간 면역글로불린(수용자 항체)이 바람직한 특성, 친화력, 용량을 가진 마우스, 랫 또는 토끼와 같은 인간외 종(제공자 항체)의 CDR로부터의 잔여물로 대체된다. 어떤 예에서는, 인간 면역글로불린의 골격부(FR) 잔여물이 대응하는 인간외 잔여물에 의해 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체내 또는 수입 CDR 또는 골격 시퀀스내 어느 쪽에서도 발견되지 않는 잔여물을 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체수행을 더욱 개량하고 최대로 한다. 일반적으로, 인간화 항체는 실질적으로 하나 이상의, 및 전형적으로 둘인, 모두 또는 실질적으로 인간외 면역글로불린의 그것들과 대응하는 CDRs 및 모두 또는 실질적으로 인간 면역글로불린 시퀀스의 그것들과 대응하는 FRs인, 변동성 도메인을 포함할 것이다. 최적의 인간화 항체는 또한 전형적인 인간 면역글로불린의 그것인 면역글로불린 불변 부위(Fc)의 적어도 한 부분을 포함할 것이다. 더 자세한 것은 Jones et al., (1986) Nature 321:522-525; Reichmann et al., (1988) Nature 332:323-329; 및 Presta, (1992) Curr. Op. Struct. Biol., 2:593-596을 참조하라. 인간화 항체는 항체의 항원-결합 영역이 관심 항원을 가진 면역 짧은 꼬리 원숭이에 의해 생산된 항체로부터 유도되는 PRIMATIZED^™ 항체를 포함한다.

"단일 사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 조각은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하고, 이러한 도메인들은 단일의 폴리펩티드 사슬에서 나타난다. 바람직하게, Fv 폴리펩티드는 sFv가 항원 결합에 대한 바람직한 구조를 형성할 수 있는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 더 포함한다. scFv의 검토를 위해서는 Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)를참조하라.

"다이어보디"는 2개의 항원-결합 부위와 작은 항체 조각을 나타내고, 상기 조각은 같은 폴리펩티드 사슬(VH--VL)에서 가벼운 사슬 가변 도메인(VL)에 연결되는 무거운-사슬 가변 도메인(VH)을 포함한다. 같은 사슬상에서 2개의 도메인 사이에 짝지어질 수 있도록 매우 짧은 링커를 사용하므로, 상기 도메인은 또다른 사슬의 보완적인 도메인과 짝지어지도록 되며 2개의 항원-결합 부위를 만든다. 다이어보디는, 예를 들어, 유럽특허 제404,097호; WO 93/11161; 및 문헌[Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448]에 더 상세하게 서술되어 있다.

"분리된" 항체는 그것의 자연적 환경의 구성요소로부터 확인되거나 분리되고/분리되거나 회수되는 것이다. 그것의 자연적 환경의 오염된 구성요소는 항체에 대한 진단 또는 치료적 사용을 방해하는 물질들로서, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성의 또는 비단백질성의 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 구체예에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정되는 것과 같은 항체의 95% 이상의 무게로, 그리고 가장 바람직하게는 99%이상의 무게로, (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부의 아미노산 시퀀스의 적어도 15개의 잔여물을 얻기 위해 충분한 정도로, 또는 (3) 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는, 바람직하게, 실버 스테인(silver stain)을 사용한 환원 또는 비환원 상태하에서 SDS-PAGE에 의해 균질하게 정제될 것이다. 분리된 항체는 항체의 자연적 환경의 적어도 한 구성요소가 존재하지 않기 때문에 재조합 세포사이의 자리에 항체를 포함한다. 통상적으로, 그러나, 분리된 항체는 하나 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.

면역접합체

면역접합체 불안정하거나 안정해질 수 있는 반응성 가교화 그룹을 제공하기 위한 항체의 화학적 유도와 같이, 당업계에서 잘 알려진 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 불안정한 반응성 그룹은 항체로부터 세포독성제 또는 성장조절인자의 방출을 제공한다. 안정한 가교화 또한 유용하다. Ig 분자에 대한 바람직한 약제의 연관은 전형적인 커플링 기술(예를 들어, 디사이클로헥실카보디이미드(DCCI), ECDI 및 이와 유사한 것과 같은 탈수제와 커플링하는), 설피드릴 기, 아미노 기 또는 카복실 기를 통한 커플링할 수 있는 링커의 사용(Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.으로부터 판매되는), 환원적 아민화 반응을 포함하는 당업계에 잘 알려진 다양한 방법에 의해 달성될 수 있다.

한 방법에서, 항체접합체, 또는 면역접합체는 항체내로 디티오피리딜 기를 도입하기 위해 N-석신이미딜 피리딜디티오프로피오네이트(SPDP)와 같은 가교제와 항체의 제 1 변형에 의해 제조될 수 있다(Carlsson et al. (1978) Biochem. J. 173:723-737; 미국특허 제5,208,020호). 제 2 단계에서, 티올 기를 가진 세포독소는 변형된 항체에 참가되어, 상기 변형된 항체에서 티오피리딜 기의 치환과 세포독소-항체접합체의 제조가 일어난다. 메이탄시노이드(maytansinoid)-항체접합체의 제조를 위한 공정은 미국특허 제5,208,020호 기술되어 있다.

어떤 예에서, 항체의 융합 단백질과 세포독성제는 바람직해질 수 있다. 융합 단백질은 분자 생물학적 수단(예를 들어, 바람직한 세포독성제가 엔코딩된 뉴클레오타이드 시퀀스로 가교될 수 있는 재조합 Ig가 엔코딩된 뉴클레오타이드 시퀀스를 포함하는 표현벡터를 사용하는 융합 단백질의 제조)에 의해 제조될 수 있다.

방사성 동위원소

치료적으로 유용한 면역- 또는 리간드 접합체를 제조하기 위해 사용되는 동위원소는 치료적으로 효율적인 경로 길이를 가지는 전형적으로 높은 에너지의 α-, γ- 또는 β-입자들을 생성한다. 어떤 방사성 핵종은, 예를 들어 종양 세포로 접합체가 결합되는 것처럼 세포로 가까이 접근하여 사멸시킨다. 표지된 전달의 장점은 방사성의 표지된 항체 또는 리간드가 일반적으로 표적세포의 직접 접근에 있어서 세포에 영향을 주지 않거나 적은 영향만을 준다는 점에 있다.

세포독성제와 같은 방사성 동위원소의 사용에 있어서, 변형된 항체 또는 리간드는 직접적으로 표지되거나(요오드화 등을 통해) 킬레이트제를 사용하여 표지된다. 다른 방법에서, 항체 또는 리간드는 하나 이상의 방사성 핵종과 표지된다. 구체적으로 바람직한 킬레이트제는 1-이소티오시아마토벤질-3-메틸디오텔렌 트리아민펜타아세트산("MX-DTPA") 및 사이클로헥실 디에틸렌트리아민펜타아세트산("CHX-DTPA") 유도체를 포함한다. 다른 킬레이트제는 P-DOTA 및 EDTA 유도체를 포함한다. 간접적인 표지를 위한 구체적으로 바람직한 방사성 핵종은 ¹¹¹In 및 ⁹⁰Y를 포함한다.

방사성 동위원소는, 항체의 단지 Fc 부분에서만 존재하는 N-링크된 슈거와 같은, 항체 또는 리간드상의 특정한 부위에 접착될 수 있다. 테크네튬-99m 표지된 항체 또는 리간드는 리간드 교환 공정 또는 배치 레벨링 공정에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 항체는, 세파덱스(Sephadex) 컬럼상으로 환원된 테크네튬을 킬레이트화 하고 이 컬럼에 항체를 적용하는, 주석 이온 용액과 환원 퍼테크네이트(pertechnate; TcO₄)에 의해 표지될 수 있다. 배치 레벨링 기술은, 예를 들어, 인큐베이팅 퍼테크네이트, SnC1₂와 같은 환원제, 소듐-포타슘 프탈레이트-용액과 같은 버퍼 용액, 및 항체를 포함한다. 레벨링을 위한 바람직한 방사성 핵종은 당업계에서 잘 알려져 있다. 레벨링을 위한 전형적인 방사성 핵종은 타이로신 잔여물을 매개로 하여 공유적으로 접합된다. 본 발명에 따른 방사성 표지된 항체는 방사성 소듐 또는 포타슘 아이오다이드 및 소듐 하이포아클로라이트, 클로라민 T 또는 이와 유사한 것과 같은 화학적 산화제, 또는 락토퍼옥시다아제, 글루코오스 옥시다아제 및 글루코오스와 같은 효소적 산화제와 함께 제조될 수 있다.

킬레이터 및 킬레이터 접합체에 관한 특허들은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, Gansow의 미국특허 제4,831,175호는 다중치환된 디에틸렌트리아민펜타아세트산 킬레이트 및 같은 것을 포함한 단백질 접합체 및 그들의 제조에 관한 방법에 관한 것이다. Gansow의 미국특허 제5,099,069, 5,246,692, 5,286,850, 5,434,287 및 5,124,471호 역시 다중치환된 DTPA 킬레이트에 관련된다. 이러한 특허들은 여기서 참조문헌으로 인용된다. 적당한 금속 킬레이터의 다른 예들은 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DPTA), 1,4,8,11-테트라아자테트라데칸, 1,4,8,11 테트라아자테트라데칸-1,4,8,11-테트라아세트산, 1-옥사-4,7,12,15-테트라아자헵타데칸, 4,7,12,15-테트라아세트산, 또는 이와 유사한 것들이다. 사이클로헥실-DTPA 또는 CHX-DTPA는 구체적으로 바람직하다. 아직 발견되지 않은 것들을 포함하는 다른 적당한 킬레이터는 당업자에 의해 쉽게 구별될 수 있으며 본 발명의 영역내에서 명확해진다. 부가적인 킬레이터는 특허 제6,682,734, 6,399,061 및 5,843,439호에서 서술된 특정의 이중작용기 킬레이터를 포함하며, 바람직하게는 삼가 금속에 대한 높은 친화력을 제공하기 위해 선택되고, 증가된 종양 대 비종양 비율과 표적 부위, 즉, B-세포 림프종 종양 부위에서 방사성핵종의 생체내 유지만큼 감소되는 뼈 흡수를 나타낸다. 그러나, 다른 이중작용기 킬레이터가 보유하거나 보유하지 않을 수 있는 이러한 모든 특성들은 당업계에 알려져 있고 종양 치료에 이점이 될 수도 있다.

변형된 항체는 또한 치료 목적뿐만 아니라 진단을 위한 방사성 표지에 접합될 수 있다. 종양의 "화상"진단을 위한 방사성 표지된 치료 접합체는 또한 환자에 항체 및 세포독성제의 투여전에 사용될 수 있다. 예를 들어, C2B8로 알려진 인간 CD20 항원에 결합하는 단클론 항체는 MX-DTPA(디에틸렌트리아민펜타아세트산)와 같은, 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸-DTPA 및 1-메틸-3-이소티오시아나토벤질-DTPA의 1:1 혼합물을 포함하는 이중작용기 킬레이터를 사용하는 ¹¹¹In 과 방사성표지될 수 있다. ^l11In은, 약 1 및 약 10 mCi 사이에서 검출되는 독성없이 안전하게 투여될 수 있기 때문에 바람직한 진단 방사성 동위원소이고, 화상 데이터는 다음의 ⁹⁰Y-표지된 항체 분포의 인디케이터이다. 화상 연구를 위해 전형적인 용량인 5 mCi의 ¹¹¹1n-표지된 항체가 사용되고, 최적의 화상은 표지된 항체 또는 리간드의 투여후에 다양한 시간에서 검출될 수 있는데 전형적으로는 투여후 3일에서 6일이다. 예를 들어, 문헌[Murray, J. (1985) Nuc. Med. 26: 3328] 및 문헌[Carraguillo et al., (1985) J. Nuc. Med. 26: 67]을 참조하라.

여러 가지 방사성 동위원소가 사용될 수 있고 당업자는 용이하게 다양한 상태하에서 가장 적당한 방사성 동위원소를 결정할 수 있다. 예를 들어, ¹³¹I는 표적 면역요법에 대해 빈번하게 사용된다. 그러나, ¹³¹I의 임상적 유용성은 그것의 짧은 반감기(8일), 혈액 및 종양 또는 부위에서 요오드화된 항체의 탈할로젠화 가능성, 및 바람직하게 종양 크기에 의존하는, 종양내 충분한 국소 용량 침착을 증명할 수 없도록 하는 자체의 높은 에너지 γ 방출에 의해 제한될 수 있다. 부가적인 킬레이트제의 출현에 대해, 부가적인 기회가 단백질에 금속 킬레이트 그룹이 접착되고 ¹¹¹In 및 ⁹⁰Y와 같은 다른 방사성핵종을 사용하기 위해 제공된다. ⁹⁰Y는 방사성면역치료 적용에서 사용되기 위한 여러 가지 장점을 제공한다. 예를 들어, ⁹⁰Y에 대한 64시간의 더 긴 유용한 반감기는 ¹³¹I와 다르게 종양 세포에 의한 항체 축적을 허용하는데 충분히 길고, ⁹⁰Y는 100에서 1,000 세포 직경의 조직내 범위를 가지는, 자체의 붕괴에서 감마 방사선을 동반하지 않는 순수한 베타 방출체이다. 또한, ⁹⁰Y-표지된 항체의 외래환자 투여에 대해 최소량의 투과 방사선이 허용된다. 게다가, 표지된 항체의 내재화가 세포를 사멸하는데 필요로 되지 않으며, 이온화 방사선은 should be lethal for 표적 항원을 상실한 인접한 종양 세포에 대해 치명적이 되어야 한다.

⁹⁰Y-표지된 항체의 효과적인 단일 치료 용량(즉, 약제학적으로 효과적인 양)은 약 5-75 mCi이고, 보다 바람직하게 약 10-40 mCi이다. ¹³¹I-표지된 항체의 효율적인 단일 치료 비골수 절제 용량은 약 5-70 mCi이고, 보다 바람직하게 약 5-40 mCi이다. ¹³¹I-표지된 항체의 효율적인 단일 치료 절제 용량(즉, 자가 골수 이식에 필요한 양)은 약 30-600 mCi이고, 보다 바람직하게 약 50-500 mCi이다. 항체 또는 리간드가 뮤린 항체와 같은 이종단백질에 대해 상대적으로 더 긴 혈중 반감기를 가질 때, ¹³¹I-표지된 항체의 효율적인 단일 치료 비골수 절제 용량은 약 5-40 mCi이고, 보다 바람직하게 약 30 mCi 이하이다. 예를 들어, ¹¹¹In 표지와 같은, 방사성 동위원소 표지를 위한 화상 용량은 약 5 mCi 이하이다.

¹³¹I 및 ⁹⁰Y가 임상에서 광범위하게 사용되는 동시에, 다른 방사성 동위원소들도 당업계에서 알려져 있고 비슷한 목적으로 사용될 수 있어왔다. 게다가 다른 방사성 동위원소는 화상검진에 사용된다. 예를 들어, 사용될 수 있는 부가적인 방사성 동위원소는, ¹³¹I, ¹²⁵I, ¹²³I, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁰⁵Rh, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, 및 ¹⁸⁸Re 및 ¹⁸⁶Re, ³²P, ⁵⁷Co, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁷⁷Ga, ⁸¹Rb, ⁸¹Kr, ⁸⁷Sr, ¹¹³1n, ¹²⁷Cs, ¹²⁹Cs, ¹³²I, ¹⁹⁷Hg, ²¹³Pb, ²¹⁶Bi, ¹¹⁷Lu, ²¹²Pb, ²¹²Bi, ⁴⁷Sc, ¹⁰⁵Rh, ¹⁰⁹Pd, ¹⁹⁹Au, ²²⁵Ac, ²¹¹At, 및 ²¹³Bi를 포함하지만 이것에 제한되는 것은 아니다. 알파, 감마 및 베타 방출체라는 점에 있어서는 본 발명의 영역으로 모두 예상될 수 있다. 또한, 당업자는 방사성핵종의 결정을 쉽게 할 수 있다. 이 때문에, 임상적 진단에 이미 사용되는 부가적 방사성핵종은 ^l11In 뿐만 아니라 ¹²⁵I, ¹²³I, ⁹⁹Tc_, ⁴³K, ⁵²Fe, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga를 포함한다. 항체는, 예를 들어, 문헌[Peitersz et al. (1987) Immunol. Cell Biol. 65: 111-125]에 서술된 바와 같이, 표적 면역요법에 사용될 가능성이 있는 여러 가지 방사성핵종으로 표지될 수도 있다. 이러한 방사성 동위원소는 include as well as ¹⁹⁹Au 및 ⁶⁷Cu 뿐만 아니라 ¹⁸⁸Re 및 ¹⁸⁶Re를 포함한다. 여기에서 참조 문헌으로 인용되는 미국특허 제5,460,785호는 상기 방사성 동위원소들에 관한 정보를 제공한다.

화학요법제:

본 발명의 포뮬레이션과 방법에서 사용될 수 있는 화학요법제는 탁센, 콜히친, 빈카 알칼로이드, 에피포도필로톡신, 캄토테신, 항생제, 백금배위착염, 알킬화제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 또는 토포아이소머레이즈 억제제를 포함한다. 바람직한 토포아이소머레이즈 억제제는 에피포도필로톡신이다. 바람직한 피리미딘 유사체는 카페시타빈, 5-플루오로우라실, 5-플루오로데옥시유리딘, 5-플루오로데옥시유리딘 모노포스페이트, 시토신 아라비노시드, 5-아자시티딘, 또는 2',2'-디플루오로데옥시시티딘을 포함한다. 바람직한 퓨린 유사체는 머캅토퓨린, 아자티오프렌, 티오구아닌, 펜토스타틴, 에리스로하이드록시노닐아데닌, 클라드리빈, 비다라빈, 및 인산플루다라빈을 포함한다. 엽산 유사체는 메토트렉세이트, 랄티트렉스드, 로메트렉솔, 페미프렉스드(pemmefrexed), 에다트렉세이트, 및 페미트렉스드를 포함한다. 바람직한 에피포도필로톡신은 에토포시드 또는 테니포시드이다. 바람직한 캄토테신은 이리노토칸, 토포테칸, 또는 캄토테칸이다. 바람직하게, 항생제는 닥티노마이신, 다우노루비신(다우노마이신, 다우노솜), 독소루비신, 이다루비신, 에피루비신, 발루부신, 미톡산트론, 블레오마이신, 또는 미토마이신이다. 바람직한 백금배위착염은 시스플라틴, 카보플라틴, 또는 옥살릴플라틴이다. 바람직하게, 알킬화제는 메클로레타민, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜파란, 다카바진, 테모졸로마이드, 티오테파, 헥사메틸멜라민, 스트렙토조신, 카무스틴, 부설판, 알트레타민 또는 클로람부실이다.

부가적인 화학요법제의 예들은 하기의 예들을 포함할 수 있다:

티오테파 및 사이클로포스파마이드(CYTOXAN^™)와 같은 알킬화제;

부설판, 임프로설판 및 피포설판과 같은 알킬 설포네이트;

벤조도파, 카보쿠네(carboquone), 메터도파(meturedopa), 및 우레도파와 같은 아지리딘;

알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라마이드, 트리에틸렌티오포스포라마이드 및 트리메틸로로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민(methylamelamines);

아세토제닌[특히 불라탁신(bullatacin) 및 불라탁시논(bullatacinone)];

캄토테신(합성 유사체 토포테칸을 포함하는);

브리오스타틴; 칼리스타틴(callystatin); CC-1065[그것의 아도젤레신(adozelesin), 카젤레신(carzelesin) 및 비젤레신(bizelesin) 합성 유사체를포함하는];

크립토피신(cryptophycins)[구체적으로 크립토피신 1 및 크립토피신 8);

돌라스타틴(dolastatin); 듀오카마이신(duocarmycin)[합성 유사체, KW-2189 및 CBI-TMI를 포함하는];

엘레우테로빈(eleutherobin); 판크라티스타틴; 서코딕틴(sarcodictyin); 스펀지스타틴(spongistatin);

클로람부실, 클로나파진(chlornaphazine), 콜로포스파마이드(cholophosphamide), 에스트라머스틴(estramustine), 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜파란, 노벰비신(novembichin), 페네스테린(phenesterine), 프레드니머스틴(prednimustine), 트로포스파마이드(trofosfamide), 우라실 머스타드와 같은 질소 머스터드;

카무스틴, 클로로조토신(chlorozotocin), 포테머스틴(fotemustine), 로무스틴(lomustine), 니무스틴, 라니머스틴과 같은 나이트로스우레아(nitrosureas);

항생제 에네딘(enediyne) 항생제[예를 들어 칼리치마이신(calicheamicin), 특히 칼리치마이신 감마 1I 및 칼리치마이신 필 1, 예를 들어, Agnew (1994) Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186를 참조하면; 다이네마이신(dynemicin) A를 포함하는 다이네마이신; 네오카지노스타틴(neocarzinostatin) 크로모포어(chromophore) 및 크로모프로틴(chromoprotein) 에네딘 항생제 크로모포어와 관련된 것뿐만 아니라 클로드로네이트(clodronate); 에스페라마이신(esperamicin)과 같은 비스포스포네이트], 아클라시노마이신(aclacinomysins), 악티노마이신(actinomycin), 어스라마이신(uthramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신(cactinomycin), 카라비신, 카미노마이신(carminomycin), 카지노필린(carzinophilin), 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신(detorubicin), 6-디아조-5-옥소-L-노루신, 독소루비신(아드리아마이신™)(모포리노-독소루비신, 시아노모포리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신을 포함하는), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 머셀로마이신(marcellomycin), 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 미코페놀릭산(mycophenolic acid), 노갈라마이신(nogalamycin), 올리보마이신, 페플로마이신(peplomycin), 포트피로마이신, 퍼로마이신(puromycin), 켈라마이신(quelamycin), 로도루비신, 스트렙토니그린(streptonigrin), 스트렙토조신, 튜버시딘(tubercidin), 우베니멕스(ubenimex), 지노스타틴, 조루비신;

메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)과 같은 항대사물질;

데놉테린(denopterin), 메토트렉세이트, 테롭테린(pteropterin), 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체;

폴린산과 같은 엽산 보충물;

플루다라빈(fludarabine), 6-머캅토퓨린, 티아미프린(thiamiprine), 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체;

안시타빈(ancitabine), 아자시티딘(azacitidine), 6-아자우리딘, 카모퍼(carmofur), 사이타라빈(cytarabine), 디에옥시유리딘(dideoxyuridine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에노시타빈(enocitabine), 플락소유리딘(floxuridine)과 같은 피리미딘 유사체;

칼루스테론, 드로모스테노론 프로피오네이트, 에피티오스타놀(epitiostanol), 메피티오스테인(mepitiostane), 테스토락톤과 같은 안드로겐;

아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 미토테인, 트릴로스테인과 같은 항아드레날;

아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레벌리닉산(aminolevulinic acid); 에닐우라실; 암사크린(amsacrine); 베스트라부실(bestrabucil); 비산트렌; 에다트렉세이트; 데포파민(defofamine); 데모콜신(demecolcine); 디아지퀀(diaziquone); 엘포니틴(elfornithine); 엘립티니움 (elliptinium) 아세테이트; 에포틸론(epothilone); 에토글루시드(etoglucid); 갈리움(gallium) 나이트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난(lentinan); 로니다민(lonidamine); 메이탄신(maytansine) 및 안사미톡신(ansamitocins)과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존(mitoguazone); 미토산트론(mitoxantrone); 모피다몰; 니트라크린(nitracrine); 펜토스타틴; 페나멧(phenamet); 피라루비신; 록소산트론(losoxantrone); 포도필리닉산(podophyllinic acid); 2-에틸히드라자이드; 프로카바진; PSK^®; 라족센(razoxane); 리족신(rhizoxin); 시조피란(sizofiran); 스피로저마니움(spirogermanium); 테뉴어조닉산(tenuazonic acid); 트리아지퀀(triaziquone); 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(trichothecenes)[특히 T-2 독소, 버라큐린(verracurin) A, 로리딘 A 및 안귀딘(anguidine)]; 우레탄; 빈데신; 다카바진; 만노머스틴; 미토브로니톨(mitobronitol); 미토락톨(mitolactol); 피포브로만(pipobroman); 가시토신; 시토신, 아라비노시드("Ara-C");

사이클로포스파마이드; 티오테파; 텍소이드(taxoids), 예를 들어 파클리탁셀(TAXOL^® Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) 및 도세탁셀(TAXOTERE^® Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로람부실; 젬시타빈(Gemzar^™); 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트;

시스플라틴 및 카보플라틴과 같은 백금 유사체;

빈블라스틴, 빈크리스틴; 비노렐빈 (Navelbine^™);

에토포시드(VP-16); 이포스파마이드; 미토산트론; 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미놉테린; 젤로다(xeloda); 이반드로네이트; CPT-11;

토포아이소머레이즈 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸로니틴(DMFO);

레티놀산과 같은 레티노이드; 카페시타빈; 및 상기 물질의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체.

부가적인 바람직한 화학요법제는 예를 들어, CHOP 등과 같은 조합 치료에 사용될 수 있는 것들을 포함한다. 구체예에서, 상기 조합 치료는 항-CDIM 결합 항체, 또는 부가적인 세포독성 항체, 특히 항-CD22, 항-CD52 및 항-CD20 항체와 조합으로 사용될 수 있다.

구체적으로 바람직한 약제는 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하여 B 세포의 세포주기를 정지시킨다. 약제의 예들에는 콜히친, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 또는 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드, 및 택솔, 파클리탁셀, 및 도세탁셀과 같은 탁센을 포함한다. 부가적인 바람직한 약제는 항액틴제이다. 바람직한 구체예에서, 항액틴제는 자스플라키노라이드 또는 시토칼라신이고, 악성세포의 골수 제거방법과 같은 생체밖 방법에서 좀더 바람직하게 사용될 수 있다. CHOP, CAMP, DHAP, EPIC, 및 이와 유사한 것과 같은 상기 약제의 혼합물도 미국특허출원 제2004/0136951호에서 기술된 바와 같이 사용될 수 있다.

독소

독소는 면역접합체, 리간드 접합체로서 투여될 수 있거나, 항체와 동시에 투여될 수 있다. 독소는, 제한없이, 슈도모나스 엑소톡신 A, 라이신, 디프테리아 독소, 모모딘, 억새풀 항바이러스 단백질, 포도구균장독소 A, 젤로닌, 메이탄시노이드(예를 들어, 미국특허 제 6,441,163호에서 서술된 것과 같이), 또는 이와 유사한 것을 포함한다.

세포성장 조절인자 및/또는 억제제

세포성장 조절인자 및/또는 억제제는 호르몬 또는 항호르몬 약제와 같은 소분자 치료제, 키나아제 억제제, 프로테아좀 억제제, 유전자 치료제 또는 유전자 발현 조절제를 포함한다.

항호르몬 약제는 구체적으로 여성에 있어서 에스트로겐 작용과 같은 호르몬 악화와 관련된 곳에서의 자가면역병의 치료에 유용하게 사용될 수 있다. 항호르몬 약제는 항에스트로겐 및 선택적인 에스토로겐 수용체 조정자(SERMs)와 같은 종양상의 호르몬 작용을 조절하거나 방해하는 작용을 하며, 예를 들어, 타목시펜(Nolvadex™을 포함하는), 라록시펜(raloxifene), 드롤록시펜(droloxifene), 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤(onapristone), 및 토레미펜(Fareston™); 예를 들어, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드(aminoglutethimide), 메제스테롤(megestrol) 아세테이트(Megace™), 이그제메스테인(exemestane), 포미스테인(formestane), 파드로졸, 볼로졸(Rivisor™), 레트로졸(Femarat™), 및 아나스트로졸(Arimidex™)과 같은 효소 아로마테이스를 방해하고 부신에서 에스트로겐 생산을 조절하는 아로마테이스 억제제; 및 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 루프로리드(leuprolide), 및 고세레린(goserelin)과 같은 항안드로겐; 및 상기 화합물의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 안드로겐 호르몬은 자가면역병의 치료에 특히 유용하게 사용될 수 있고, 대표적인 안드로겐 호르몬은 디하이드로에피안드로스테론(DHEA)이다. 선택적인 안드로겐 수용체 조정자(SARMs)는, 예를 들어, 안드로스테인 및 안드로스텐 카복사미드와 같은 Hutchinson의 미국특허 제6,645,974호에서 서술된 화합물을 포함한다.

키나아제 억제제는 널리 알려져 있고, 구체적으로 바람직한 키나아제 억제제는 Zimmermann의 미국특허 제5,521,184호에서 서술된, 이마티닙(글리벡) 및 그것과 관련된 화합물과 같은 bcr/abl 타이로신 키나아제 억제제를 포함한다. 부가적인 티로신 키나아제 억제제는, 예를 들어, 키나아제의 활성을 차단하는 siRNAs을 포함하는 Lyn 키나아제의 활성 및 전사에 참여하는 차단 신호 복합체인 약제를 포함할 수 있다. 그러나 부가적인 키나아제 억제제는 비호지킨 림프종을 유도하기 위해 아포토시스되는 것을 보여주는 문헌[Ben-Bassat, H. et al., (2002) J. Pharmacol. Exp. Ther. 303:163]에서 서술된 AGL 2592과 같은 화합물; DNA 결합 및 NF-카파 B-유도된 유전자 발현을 차단하는 것을 보여주는 문헌[Mahon, TM 및 O'Neill, LA (1995) J. Biol. Chem. 270:28557]에서 서술된 허비마이신(herbimycin) A; Tang의 미국특허 제6,680,335호에서 서술된 것들과 같은 인돌리논 화합물; Hirst의 미국특허 제6,660,744호에 서술된 피라졸로피리미딘 유도체, 및 이와 유사한 것들을 포함한다. 프로테아좀 억제제는 Adams의 미국특허 제6,083,903호에 서술된 보론산 에스터를 포함한다. 바람직한 프로테아좀 억제제는 보테조밉(bortezomib; 벨케이드).

유전자 치료제 및 유전자 발현 조절제는 방해하는 핵산 시퀀스 및 이와 유사한 것들인 안티센스 핵산 시퀀스를 포함한다. 유전자 치료제 및 유전자 발현 조절제 면역접합체 또는 분리되어 투여되는 세포독성제와 같이 사용될 수 있다. 구체적으로 유용한 유전자 치료제 및 유전자 발현 조절제는 아포토틱 전(pro-apoptotic) 경로의 차단 억제제인 것들 또는 조절되지 않는 증식 및 과다세포증식에 기여할 수 있는 모든 증식 신호를 차단하는 것들뿐만 아니라 아포토틱 전 경로에 참여하는 엔코딩된 단백질인 것들을 포함한다. 예를 들어, 유전자 발현 조절제는 안티센스 또는 NF-kB 경로를 차단하기 위해 작용하는 siRNA을 포함할 수 있으며, 그것에 의하여 이 경로가 비정상적으로 작용할 때 비정상적 증식의 차단을 나타낸다.

안티센스 DNA 올리고뉴클레오타이드는 일반적으로 메신저 RNA (mRNA) 또는 mRNA 전구체인 표적 시퀀스에 보완적인 전형적인 시퀀스로 구성된다. mRNA는 기능기, 또는 센스, 방향내에 유전적 정보를 포함하며 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 결합은 계획된 mRNA를 비활성화하고 그것의 단백질내로의 번역을 방해한다. 상기 안티센스 분자는 특별한 RNAs 및 알려진 RNA의 한 시퀀스로부터 번역되는 단백질을 보여주는 생화학적 실험들을 기반으로 하여 결정되며, 그것에 결합할 안티센스 분자는 보완적인 왓슨-크리크 염기쌍을 통해 디자인될 수 있다. 상기 안티센스 분자는 전형적으로 10-30 염기쌍, 보다 바람직하게 10-25 염기쌍, 및 가장 바람직하게는 15-20 염기쌍을 포함한다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드 뉴클레아제 가수분해에 대한 개선된 내성을 위해 변형될 수 있고, 상기 유사체는 WO 97/07784에서 서술된 포스포로티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포디에스터 및 p-에톡시 올리고뉴클레오타이드를 포함한다.

유전자 치료제는 또한 리보자임, DNA자임, 촉매 RNA, 또는 작은 방해 RNA(siRNA)가 될 수 있다. RNA 방해는 전형적으로 약 30 염기쌍 이하인 짧은 RNAs를 이용하고, 상술한 보완적 염기쌍을 통해 작용한다. siRNAs는 선형 또는 원형이 될 수 있다.

상술한 바와 같이, Lyn 키나아제의 활성 및 전사에 참여하는 차단 신호 복합체인 약제 및 변형제는 장점이 될 수 있다. 구체예에서, 문헌[Ptasznik, A et al., (2004) Nat. Med.10:1187]에 의해 보고된 siRNA와 같은, Lyn 키나아제의 활성을 차단하는 siRNA는 면역접합체 또는 분리되어 투여되는 세포독성제로서 항-CDIM 결합 항체와 함께 투여될 수 있다.

약제학적 포뮬레이션

항체 및 세포독성제는 당업계에 알려진 어떠한 방법들 및 약제학적으로 허용가능한 부형제를 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로, 항체는 선택적 부형제 및 안정화제와 함께 식염수에서 제공된다. 화학요법제는 포뮬레이션 방법들 및 부형제에서 다양하게 될 수 있고, 이러한 정보는 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences(Arthur Osol, Editor)에서 이용할 수 있다.

세포독성 항체:

본 발명에서 유용한 세포독성 항체는 어떠한 B 세포상의 세포 표면 분자에 대해 특히 결합하는 항체를 포함한다. 세포 표면 분자는 수용체, 면역글로불린, 사이토카인, 당단백질 등을 포함한다. 예를 들어, 세포독성 항체는, 제한없이, CD11a, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD34, CD37, CD38, CD40, CD45, CD52, CD80, CD 86, IL-4R, IL-6R, IL-8R, IL-13, IL-13R, α-4/β-1 인테그린 (VLA4), BLYS 수용체, 세포 표면 이디오타입 Ig, 종양괴사인자 (TNF), 또는 그들의 혼합물에 대해 특별한 결합을 보여줄 수 있다. 예를 들어, CD11a에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 이팔리주맙(RAPTIVA)이 될 수 있다. CD20에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는 리툭시맙(RITUXAN)이 될 수 있다. CD22에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 에프라투주맙(epratuzumab)이 될 수 있다. CD25에 대해 특이결합을 가진 세포독성 항체는, 예를 들어, 다클리주맙(ZENAPAX) 또는 바실리주맙(SIMULECT)이 될 수 있다. CD52에 대한 항체는, 예를 들어, 캄패스(CAMPATH)를 포함한다. α-4/β-1 인테그린 (VLA4)에 대한 항체는, 예를 들어, 나탈리주맙을 포함한다. TNF 에 대한 항체는, 예를 들어, 인플릭시맙(REMICADE)을 포함한다.

세포독성 항체는 바이러스성 질병 및 면역결핍과 관련되는 자가면역병, 림프암, 및 다른 B 세포 과다증식세포질환의 치료에 대한 조합된 면역요법의 부분으로서 사용될 수 있다. 따라서 바람직한 구체예에서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합하는 항체는 리투산(RITUXAN), 제나팩스(ZENAPAX), 레미케이드(REMICADE) 또는 랍티바(RAPTIVA), 예를 들어, 또는 그들의 조합과 결합되어 사용된다.

세포독성 항체는, 예를 들어, 방사성 동위원소 또는 독소를 포함하는 면역접합체로서 사용될 수도 있다. 또한, 부가적인 구체예에서, 병용 요법은 B 세포상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합하는 항체, 부가적인 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 특이결합하는 세포독성 항체, 및 하나 이상의 화학요법제를 포함하여 사용될 수 있다. 예를 들어, mAb216은 리툭시맙, 토수티맙, 또는 이브리투모맙과 같은 항-CD20 항체와의 조합, 에프라투주맙과 같은 항-CD22 항체, 또는 캄패스와 같은 항-CD52 항체와 조합하여 사용될 수 있다. 병용 요법은, 화학요법 및 면역요법의 병용에 있어서, 예를 들어, 빈크리스틴과 같이 세포의 세포골격를 분열시키는 약제를 사용하는 화학요법을 더 포함할 수 있다.

다른 세포 표면 항원에 직접적으로 대응하는 세포독성 항체와 VH4-34 항체 같은 CDIM 결합 항체의 조합은, 도 7에서 도시한 실시예 10에서 논의한 바와 같이,효능이 있다. 도 7에서 도시한 실시예 10에서 논의한 바와 같이, 적어도 부가적이고 몇몇 예들에서는 상승적인 결과를 제공하는, 효과가 있다. 또한, 도 4에 도시한 바와 같이, mAb 216은 재발하거나 난치성 B 세포 림프종을 가진 환자로부터 얻어진 많은 세포들의 사멸에 매우 효율적이다.

mAb 216 또는 CDIM 에피토프에 직접적으로 대응하는 다른 VH4-34 항체의 조합은 리투산 저항 세포의 발생과 싸울 것으로 예측되고, mAb 216 치료의 효능이 증가하는 만큼 리투산의 효능을 증가시킨다.

구체적인 B 세포 항원은 생체내 및 시험관내에서 B 세포 증식 및 분화(Moore et al., Science 285: 260-263 (1999))를 유도하는 종양괴사인자("TNF") 초군의 멤버인 B 림프구 자극제(BLyS)를 포함한다. BLyS 단백질의 레벨은 전신홍반루프스(SLE), 류마티스관절염, 및 쇼그렌증후군(Zhang et al., The Journal of Immunology, (2001) 166:6-10; Cheema et a1., Arthritis 및 Rheumatism (2001) 44:1313-1319; 및 Groom et al., Journal of Clinical Investigation (2002) 109:59-68)을 포함하는 자가면역병을 가진 환자에서 상승되는 것이 관찰되어 왔다. BLyS 수용체의 용해되는 형태의 투여, TACI는, NZBWF1 및 MRL-lpr/lpr 마이스(Gross et al., Nature, (2000) 404:995-999)의 자가면역 표현형을 완화시키는 것을 보여준다. 따라서, 항체 및 BLyS에 결합하는 관련 분자는 자가면역 장애 및 림프암을 포함하는 B 세포 관련된 질병 및 장애의 치료에 있어서 의료적 유용성을 발견할 수 있다.

세포 표면 이디오타입 Ig는 B 세포 기원의 림프암상에서 나타나는 환자 특별 표지이다. 이러한 세포 표면 수용체 역시 세포독성 항체 치료요법에 대한 유용한 표적을 제공하고, 여기서 서술된 방법들에 대해 유용하다. 이러한 환자 특별 세포 표면 Igs에 대한 항-이디오토프 항체의 제조는 Denney의 미국특허 제5,972,334호에 서술되어 있다.

투여의 방법

본 발명의 항체는 다양한 다른 방법들에 의해 인간 또는 동물 환자에 투여될 수 있으며, 전형적으로는 비경구적 투여를 통한다. 기능적 형태에서 투여되는 항체 및 세포독성제에 대해 효율적인 것으로 발견되는 다른 투여의 방법으로, 예를 들어, 경구적, 국소적, 또는 이식 용기를 통한 방법이 유용하게 될 수 있다. 국소 투여는, 예를 들어, 패치, 캐리어, 또는 이온토포레시스(iontophoresis); 트랜스점막, 예를 들어, 혀밑, 볼, 직장, 질, 코, 또는 경요도, 예를 들어, 가루형태의 활성 약제의 분무의 흡입을 통한, 폐, 기관지 및 코 통로에 대한 국소 전달을 사용하는 수동적 또는 활성 방법을 포함한다. 경구 투여는 일반적으로 위 또는 십이지장을 포함한다. 비경구 투여는 예를 들어, 복막내, 정맥, 림프계내, 종양내, 근육내, 사이질, 동맥내, 피하조직, 병변내, 안내, 윤활내, 또는 관절내와 같은 체강 또는 혈관내 주입, 인트라스테멀(intrastemal), 뇌혈관내 (예를 들어, 뇌내, 뇌실내, 경막내), 간내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다.

본 발명의 이해를 위해 본 발명은 그것의 바람직한 구체예와 관련하여 설명되지만, 본 발명의 영역이 상술한 실시예와 이에 따른 도면에 의해 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 실습은 고용되고, 나타내지는 않았지만, 당업계의 전형적인 기술인 약제학적 포뮬레이션 및 이와 유사한 것의 제조기술이 사용될 것이다. 다른 관점에서, 본 발명의 영역내에서의 장점 및 변형은 본 발명이 포함되는 기술 영역에서 명백하게 될 것이다. 상기 기술은 본 문헌에서 상세하게 설명된다.

여기서 언급된 모든 특허, 특허출원, 및 문헌은 위, 아래에서 참고문헌으로 언급된다.

다음의 실시예에서, 사용된 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)에 대해 확실한 정확성을 기하기 위한 노력이 있었지만, 약간의 실험적 에러 및 오차가 있을 수 있다. 나타내지는 않았지만, 온도는 ℃이고 압력은 대기압 내지 그와 비슷한 기압이다.

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도 1은 일차 B 세포 림프종 및 백혈병에 결합하는 VH4-34 엔코딩된 항체를 도시한 것이다.

도 2는 인간 B 세포주에 결합하여 파괴하는 VH4-34 엔코딩된 단클론 항체를 도시한 것이다.

도 3은 소포성 림프종세포에 대한 mAb 216의 세포독성의 변동성을 도시한 것 이다.

도 4는 mAb 216 및 빈크리스틴에 의한 B 세포의 파괴가 상승효과를 나타내는 것을 도시한 것이다.

도 5A는 시간 경과에 따른 mAb 216으로 처리된 B 세포의 표면상의 Lamp-1의 외관과 시간 경과에 따른 세포 생존 능력의 상실의 비교를 도시한 것이다.

도 5B는 시간 경과에 따른 손상된 세포로부터의 ATP의 방출과 생존 가능한 세포의 수의 비교를 도시한 것이다.

도 6A는 칼슘이 있거나 없는 상태에서 두 개의 VH4-34 항체로 처리된 세포의 생존 능력을 도시한 것이다.

도 6B는 세포독성제로 처리된 세포의 생존 능력을 도시한 것이다.

도 7은 서로 다른 두 개의 농도에서 C2B8, mAb 216 및 두 개의 항체의 조합에 의해 세포를 파괴하기 위한 효능을 도시한 것이다.

실시예 1

mAb 216은 종양 세포 뱅크로부터의 CD19+ 골수 세포에 결합한다

27개의 완전히 특성 규명된 골수 시료를 유아 종양학 그룹(Children's Oncology Group) 종양 세포 뱅크로부터 수득하였다. 해동시킨 세포를 바이오티닐화된 mAb 216 및 형광-표지된 스트렙타비딘으로 염색하였다. MAb 216은 717(225 내지 1020의 범위)의 평균 채널 형광(mean channel fluorescence, MCF)으로 모든 15개의 CD+19 B-선조세포 ALL에 결합하였다. T 세포 ALL의 12개의 시료를 시험하였고, 이는 62(28 내지 149의 범위)의 MCF를 나타내었고, 3개의 T-ALL이 상기 백그라운드(background)에서 mAb 216 결합을 지녔었다. 결과는 도 1에 도시하고, 여기서 상대적 결합 강도를 "+", "++" 및 "+++"로 나타내었고, 비결합은 "-"으로 나타내었다. 도 1에 도시된 바와 같이, mAb 216은 B 세포 림프종 및 모든 유형의 백혈병에 결합하였으나, T 세포 림프종에 대한 유의한 결합을 나타내지 않았다.

실시예 2

mAB 216은 골수로부터의 프레-B ALL 세포를 사멸시킨다

신선한 골수(BM)의 12개의 견본을 백혈병에 대한 진단상의 골수 천자를 시술하는 환자로부터 수득하고, 시험관 내에서 24시간에서의 mAb 216 결합 및 세포독성을 분석하였다. CD19, CD10, CD34, CD20, CD3 및 CD2의 발현에 대한 면역표현형 분석(immunophenotyping), 및 바이오틴 표지된 mAb 216의 결합을 모든 시료상에서 수행하였다. BM을 세척하고 20 ㎍/㎖ mAb 216 또는 대조군 IgM과 함께 밤새 인큐베이션시킴으로써 세포독성을 분석하였다. 인큐베이션된 세포를 FITC 항-CD-19 및 프로피디움 요오다이드(PI)으로 염색하였다. 유세포 분석에 의해 CD19+ 세포의 % 변화 및 CD19 발현 세포에서의 PI 흡수로 세포 사멸을 측정하였다.

대조군 IgM을 사용한 인큐베이션에 비해 mAb 216을 사용하여 인큐베이션된 후 사멸된 세포의 퍼센트로 측정된 세포독성은 프레-B ALL을 지닌 환자로부터의 BM에 대해 하기와 같았다: 60-90%(n=4), 30-50%(n=4) 및 7-20%(n=2). MCF에 의한 mAb 216 결합의 경도와 관련하여 세포독성이 증가하였고, 이는 mAb 216에 대한 리 간드의 세포 주기 의존성 상호 발현과 관련이 있을 수 있다. T-ALL(n=1) 및 AML(n=1)을 지닌 환자로부터의 BM 시료는 mAb216에 의해 사멸되지 않았다.

실시예 3

항체는 B 세포 백혈병의 동물 모델에서 B 세포를 사멸시킨다

CB17 SCID 및 NOD/LtSz-SCID 면역결핍 마우스에서의 b 세포 백혈병의 인간 프레 B 세포 Nalm-6 모델을 이용한 실험은 mAb 216²²를 이용한 처리 후에 생존률 및 20%의 치유율을 증가시킴을 나타내었다. Nalm-6는 성숙 B 세포 항원 CD20을 발현하지 않고, SCID 마우스²³에서의 인간 종양의 재현성 정맥내 모델을 발생시키는 ALL로부터 유래된 세포주이다. 마우스를 치료하기 위해, 정제된 mAb(400 ㎍/200 ㎕)을 조직 접목(engraftment)후 1, 7, 14 및 21일째에 정맥내(IV) 주사하였다. 체표면적에 있어서 마우스 대 인간을 비교하여, 마우스에게 각각의 용량을 인간의 90 내지 100 ㎎/㎡와 동등하게 투여하였다. 마우스를 종양 발달에 대해 100일 동안 관찰하였다.

1㎎의 정제된 mAb 216(인간의 약 220 내지 250 ㎎/㎡와 동등함) 및 대조군 폴리클로날 인간 IgM을 4마리의 Balb/c 마우스에 정맥내 주사하였다. 24시간째에 혈액을 채집하였다. 크레아티닌, 빌리루빈, 알칼리성 인산분해효소, SGOT(AST), 및 SGPT(ALT)를 포함하는 화학 패널은 다소 약간의 간장 효소 상승을 나타내었으나, 빌리루빈은 정상이었다. 14일째에 대조군 및 시험 마우스에서 알칼리성 인산분해효소를 제외한 모든 값은 정상으로 돌아왔다. 마우스는 생존하였고, 8주째에 서 무사하였다. Balb/c 마우스에 500 ㎍의 mAb 216을 정맥내 주사하고, 주사후 24시간 및 48시간째에 희생시켰다. 비장, 신장, 간장 및 심장의 조직 구조는 병리를 나타내지 않았다. CB17-SCID/SCID 마우스에 또한 0, 3 및 10일째에 mAb 216(200 ㎍/주사, 복막내 또는 정맥내)을 주사하였다. mAb 주사(정맥내 또는 복막내)의 모드에도 불구하고 모든 마우스는 최종 주사후 6주째에도 명백히 양호하게 건강하였다.

실시예 4

mAb 216은 B 세포막에 손상를 주고, 리소좀에 의한 재생 반응을 발생시킨다

막 손상에 대한 자연 반응은 손상 부위에서의 내부 리소좀막의 첨가에 의해 신속히 재생된다. Lamp-1은 일반적으로 원형질막에 존재하지 않는 풍부한 리소좀막 당단백질이다[Granger, B.L., et al. (1990) J. Biol. Chem. 265:12036; McNeil, P.L.(2002) J. Cell Sci. 115:873]. 리소좀이 원형질막에 융합되도록 유도되는 경우, Lamp-1의 리소좀내 NH₂-말단 도메인이 세포 표면으로 노출된다. 이러한 융합은 mAb를 지닌 생(生) 세포를 Lamp-1의 루멘 에피토프에 적용시켜 표면 염색시킴으로써 모니터할 수 있다[Reddy, A., et al. (2001) Cell 106:157; Rodriguez, A., et al. (1997) J. Cell. Biol. 137.93; Martinez, I., et al. (2000) J. Cell. Biol. 148:1141]. 따라서, 세포 표면상의 Lamp-1의 존재는 막 파쇄후 막 재생을 나타내는 것이다[McNeil, P. L., and R. A. Steinhardt (2003) Ann. Rev. Cell Dev. Biol. 19:697).

VH4-34 엔코딩된 mAb 216이 세포에 손상을 주고, 이에 따라 신속한 복구 및 재생 반응을 일으키는지의 여부를 시험하기 위해, mAb 216으로 처리한 인간 B 세포주를 리소좀 특이적 단백질 Lamp-1의 세포 표면상에서의 신속한 현상에 대해 분석하였다.

세포 및 시약

인간 Pre-B 세포주 Nalm-6(Hurwitz, R., et al. (1979) Int. J. Cancer 23.174), Reh (Rosenfield, C., A. et al. (1977) Nature 267:841), 및 성숙 B-세포주 OCI-Ly8(Tweeddale, M. E., et al. (1987) Blood 69:1307)을 열 불활성화된 10% FCS를 지닌 이스코브 배지(Iscove's medium)에서 대수증식기로 유지시켰다. B 세포주를 ATCC로부터 수득하였다. VH4-34 엔코딩된 mAb, mAb 216(Bhat, N. M., et al. (1993) J. Immunol. 151:5011), Z2D2 (Bhat, N. M., et al. (2000) Scand. J. Immunol. 51:134), 및 Y2K 뿐만 아니라 동형-매칭된 대조군 mAb, VH3 패밀리의 일원으로부터 유래된 MS2B6(Glasky, M. S., et al. (1992) Hum. Antibod. Hybridomas 3:114)을 실험실에서 생성시키고, 물로 2회 침전시킴으로써 무혈청 하이브리도마 상층액으로부터 정제하였다. MAb를 필요시 센트리프렙(Centriprep) 농축기(Amnicon, Dancers, MA)상에서 농축시켰다. 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동에 의해 확인된 IgM mAb의 순도는 90 내지 95% 순도였다. 정제된 IgM의 농도는 인간 IgM을 표준물질로 사용하는 샌드위치 ELISA(catalog # 31146, Pierce Biochemicals, Rockford, IL)로 결정하였다. MS2B6 이외에, 피어스(Pierce) IgM을 또한 동형 대조군으로 사용하였다. 모든 mAb를 멸균여과하여 나트륨 아지드를 제거하였다.

PI 염색 및 전방 산란을 이용한 세포 생존능 검정

원형질막의 온전성을 프로피디움 요오다이드(PI, Sigma, St. Louis, MO)를 배출시키는 세포의 능력에 의해 측정하였다. PI 혼입의 수준을 스탠포드 FACS 설비에서 베르사텀프로(VersatermPro) 및 플로우조(FlowJo) 프로그램으로 접속된 FACScan(Becton-Dickinson, San Jose CA) 상에서의 유세포분석에 의해 정량하였다. 전방 산란 신호에 의해 측정됨에 따라 정상적인 크기를 지닌 PI-음성 세포를 생(生) 세포로 간주하였다.

간단히, 각각의 실험에 상술된 바와 같이 세포를 처리하고, 3% FCS 및 10 ㎍/㎖의 PI를 지닌 PBS에 재현탁시켰다. 독성이 Ca-비함유 배지에서 평가되는 실험에서, 세포를 칼슘을 지니거나 지니지 않는 10 ㎍/㎖ PI가 첨가된 적합한 배지에 재현탁시켰다. 기존의 연구는 mAb 216-매개 독성이 낮은 온도에서 현저하게 나타난다는 것을 보여주었고(Bhat, N. M., et al. (1996) Clin. Exp. Immunol. 105:183), 모든 배지 및 세포를 37℃에서 유지하기 위한 예방법을 취하였고, 실온에서 원심분리하였다.

ATP 고갈 및 방출 검정

바이오루미네슨스 어세이 키트(bioluminescence assay kit)(Catalog # A- 22066, Molecular Probes)의 제조업체 지시에 따라 세포내 및 방출형 ATP를 측정하였다. 1 nM 내지 1μM의 표준 ATP 희석액을 양성 대조군으로서 시험하였다. 세포를 각각의 실험에서 상술된 바에 같은 다양한 배지 중의 다양한 농도의 mAb 216에 노출시켰다. 10 ㎕의 반응 상층액을 DTT, 루시페린 및 루시퍼라아제를 함유하는 90㎕의 표준 반응 용액에 첨가하였다. 공기질로서 ATP의 존재하에서, 빛의 생성을 마이크로윈(MicroWin) 2000, 버전 4.2 소프트웨어(Mikrotek Laborsysteme, Gmbh)로 인터페이스 접속된 휘도계(Lumimark Microplate Reader, Bio-Rad)로 즉시 측정하였다. 이러한 검정은 펩토몰 양의 ATP 검출을 가능하게 한다. 세포내 ATP 함량을 평가하기 위해, 세포를 10분 동안 실온에서 1% NP-40으로 용해시키고, 상기 기재된 바와 같이 10 ㎕의 용해질을 시험하였다.

Lamp-1 발현 연구

표면 Lamp-1 발현을 에피-플루오레슨스(epi-fluorescence), 유세포분석 및 공초점 현미경(confocal microscopy)으로 연구하였다. 인간 Lamp-1의 루멘 에피토프(CD107a, clone H4A3)에 대한 항체 및 Lamp-1에 대한 동형 대조군, 마우스 IgG₁k을 BD-파르밍겐(BD-PharMingen)으로부터 수득하였다. 두 항체 모두를 제2의 FITC-컨쥬게이팅된 염소 F(ab)₂ 항-마우스 IgG (Pierce Biochemicals)로 검출하였다. 세포(5 X 105)를 37℃에서 각각의 실험에서 특정한 시간 동안 다양한 농도의 mAb 216 또는 인간 IgM 대조군(mAb MS2B6 또는 Pierce IgM)에 노출시켰다. 이후, 세포를 20분 동안 실온에서 2% 미리 가온된 파라포름알데하이드로 고정시키고미리 가온된 배지로 2회 세척하고, 항-Lamp-1 또는 동형 대조군으로 15분 동안 염색시켰다. 이후, 세포를 염색 배지(3% FCS 및 0.2% 나트륨 아지드를 지닌 PBS)로 2회 세척하고, 항-Lamp-1에 대한 제2의 항체로 15분 동안 인큐베이션하였다. 2회의 세척 후, 세포를 염색 배지에 재현탁시키고, 유세포분석, 면역형광법, 공초점 현미경으로 분석하였다.

공초점 영상화를 멀티프로브(MultiProbe) 2010 레이저 공초점 현미경(Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA) 상에서 스탠포드 세포 과학 영상화 설비에서 수행하였다. 멀티프로브는 488,568의 여기 라인(excitation line)을 지닌 Ar/Kr 혼합 가스을 사용하고, 니콘 디아포트 200 도립현미경(Nikon Diaphot 200 inverted microscope)을 사용하였다. 488nm의 여기 파장을 이용하여, 방출광을 510LP 빔스플리터(beamsplitter)를 통해 통과시키고, 510 장파장 통과 필터(510 long pass filter)로 수거하였다. 니콘(Nikon) 60X (NA1.4) 플라나포 대물렌즈(planapo objective)를 사용하였다. 에피-플루오레슨스 영상화를 액시오비전(Axiovision) 3.1 소프트웨어(Carl Zeiss)로 인터페이스 접속된 액시오캠(AxioCam) HRc 카메라(Carl Zeiss) 및 옵티-퀴프 전원 공급장치(Opti-Quip Power Supply)(Model 1200, Highland Mills, New York)가 장착된 액시오플랜(Axioplan) 2 현미경(Carl Zeiss, Inc., GmbH) 상에서 수행하였다. 유세포분석을 FACScan 상에서 수행하였다.

결과 및 결론

미처리된 세포 상에서 발현된 Lamp-1 5%의 낮은 수준 내지 50%로 다양하였다. B 세포 라인의 표준 실험 처리로 인해 변이가 발생하였다. lamp-1 발현의 기선 수준이 50%인 실험에서, 동형 대조군 처리 세포는 50%의 양성으로 잔류하였고, mAb 216 처리 세포는 100% Lamp-1 양성이었다. 세포주 상에서의 Lamp-1 염색을 5회 반복하여 재현성을 보장하였다. 결과는 기선 Lamp-1 발현이 5%인 실험으로부터 논의하였다.

1분 동안 mAb 216에 노출된 Nalm-6 세포는 Lamp-1 염색을 극적으로 증가시켰으나, 동형 대조군에 노출된 세포 또는 처리되지 않은 세포는 이들의 lamp-1 발현이 증가하지 않았다. Lamp-1 노출은 또한 FACS 및 에피-플루오레슨스에 의해 기타 B 세포주, OCI-Ly8(성숙-B) 및 Reh에서 관찰되었다(데이터를 나타내지는 않음). 세포의 막 온전성을 PI 흡수에 의해 동시에 평가하였다. 세포는 216 노출후 1분째에서 PI 음성으로 잔류했다.

Lamp-1 염색 및 PI 흡수를 또한 mAb 216 노출후 상이한 시점에서 측정하였다. Lamp-1 노출은 Ab 노출의 30초째에 관찰된 가장 밝은 염색을 지닌 신속한 결과였고, 이는 다음 5분 동안 차츰 감소하였다(도 5A). 세포는 이 기간 동안 PI-음성으로 잔류했다. PI 흡수는 mAb 216에 대한 약 5분의 노출 후에 나타났고, 20분이 지나서 10 내지 25%의 세포가 PI 흡수에 의해 증명되는 막 투과성이 되었다.

ATP의 방출에 의해 측정되는 막 분열은 또한 유사한 시간 경과를 나타내었다. 도 5B에 나타낸 바와 같이, ATP는 Lamp-1이 세포막에서 검출되는 시점인 2분 째에서의 상층액에서 검출되지 않았다. 그러나, 15분 및 1시간째에서 , ATP 방출은 증가하였고, 이는 재생될 수 없는 막 손상이 발생했음을 암시한다. mAb 216 처리후 2 및 24시간째에서 방출된 ATP를 분해시키는 세포 용해 및 괴사의 결과일 수 있는 측정된 ATP의 감소가 있었다. 세포 펠릿에서의 ATP 함량 측정시에, 생물발광 검정은 세포 증식 및 세포독성의 척도가 된다. mAb의 세포독성 효과는 노출후 1시간 내에서 명백했다.

이 결과는 mAb 216 매개성 막 손상이 기계적 또는 물리적 손상에 의한 손상후 세포 생존력을 회복시키는 동일한 메커니즘에 의해 회복되었음을 입증하고, 이는 mAb 216 처리가 임의의 기타 큰 세포 파열과 유사한 세포 손상 결과를 야기시켰음을 나타낸다. 지금까지 항체에 의한 세포 손상은 관찰되지 않았다. mAb 216에 의한 막 손상은 초기에 내막이 지질 이중층에 신속히 첨가됨에 따라 재생되지만, mAb 216에 대한 노출 시간이 증가됨에 따라 재생하려는 시도는 실패하게 되고 막은 PI 및 ATP 둘 모두에 대해 투과정이 된다. mAb 216 이외에, 기타 항-B-세포 VH4-34 엔코딩된 IgM mAb는 유사한 막 손상을 매개하였고, 리소좀에 의한 유사한 재생 반응을 발생시켰다.

실시예 5

mAb 216 유도성 막 손상의 보수는 기능성 액틴에 의존된다

문헌[McNeil, P. ((2002) J. Cell Sci. 115:873) 및 기타 문헌에 논의된 바와 같이, 막 손상 보수는 액틴 의존 과정을 수반한다. mAb 216에 의해 유도된 막 손상의 보수가 액틴 의존 보수 메커니즘을 사용하는지의 여부를 시험하기 위해, 세포를 액틴 중합반응에 영향을 주는 작용제로 처리하고, mAb 216에 의해 유도된 막 손상의 보수에 대한 영향을 평가하였다. 세포를 액틴 중합반응에 대해 반대의 효과를 지닌 두 작용제인 시토칼라신 또는 자스플라키노라이드로 처리하였다. 시토칼라신은 모노머로의 액틴을 해중합시키는 반면, 해양 해면동물로부터 수득한 사이클릭 펩티드인 자스플라키노라이드는 액틴의 필라멘트 형태에서 액틴을 고정시킨다. 둘 모두의 처리는 액틴 기초 세포골격 활성을 방해하였다.

방법:

시토칼라신을 시그마(Sigma)로부터 수득하였고, 자스플라키노라이드를 몰레큘라 프로브스(Eugene, OR)로부터 수득하였다. 카스파제(caspase) 억제제인 Ac-IETD-CHO 및 Ac-DEVD-CHO를 파르밍겐(PharMingen, San Diego, CA)으로부터 수득하였다. Nalm-6 세포(1 X 10⁶ 세포/ml)를 mAb 216으로 처리하기 전에 37℃에서 2시간 동안 자스플라키노라이드(3 ㎍/ml), 시토칼라신 (5 ㎍/ml), 또는 카스파제 억제제(10 μM)로 처리하였다. 동등한 양의 DMSO를 지닌 대조군 시료를 동시에 세팅하였다. 이후, 세포를 25 ㎍의 mAb 또는 대조군 Ab에 노출시키고, 유세포분석으로 분석하였다.

결과:

시토칼라신 또는 자스플라키노라이드와 mAb 216으로 처리한 세포는 감소된 생존률(생존하는 세포의 퍼센트) 및 이에따른 mAb 216에 대한 민감성을 나타내었고, 이는 상승작용적인 효과를 입증하고, 보수 과정에서 기능성 액틴이 필요함을 나타낸다. 시토칼라신 또는 자스플라키노라이드와 대조군 항체로 처리한 세포는 생존률의 감소를 나타내지 않았다. 한 대표적인 실험의 데이터를 도 6B에 도시하였다. 세 개의 기타 실험으로부터 유사한 결과가 수득되었다.

카스파제 억제제인 Ac-IETD-CHO 및 Ac-DEVD-CHO를 사용한 세포의 인큐베이션은 세포 생존률을 변화시키지 않았고, 이는 세포 사멸의 메커니즘이 아폽토시스에 의한 것이 아님을 나타낸다.

이들 결과는 상기 항체에 노출됨으로써 야기된 항체 유도성 세포막 손상의 메커니즘을 또한 지지한다.

실시예 6

mAb 216 유도성 막 손상의 보수는 칼슘에 의존된다

리조솜의 세포외유출은 칼슘 의존성 현상인 것으로 공지되어 있으므로(Miyake, K., and P. L. McNeil (1995) J. Cell Biol. 131:1737; Bi, G. Q., et al. (1995) J. Cell Biol. 131:1747), mAb 216에 의한 막 손상 및 손상의 복구를 칼슘 비함유 및 정상 칼슘 조건에서 시험하였다. 50, 25 및 12.5 ng/ml 농도에서 두 개의 VH4-34 엔코딩된 mAb, mAb 216, 및 50 ng/ml에서의 Y2K으로 처리시의 Nalm-6 세포의 생존률을 칼슘을 함유하거나 함유하지 않는 배지의 존재하에서 시험하였다. 도 6A에 도시된 바와 같이, 세포 생존률은 칼슘의 부재하에서 현저하게 감소하였고, 이는 칼슘이 손상 보수에 필요함을 나타낸다. 대조군 항체로 처리하거나 항체로 처리하지 않은 세포는 칼슘의 존재 또는 부재하에서 세포 생존률의 임의의 변화를 나타내지 않았다. 기타 B 세포주인 OCI-Ly8 및 Reh는 또한 칼슘 비함유 조건하에서 세포독성에 있어서 유사한 증가를 나타내었다(데이터는 나타내지 않음).

실시예 7

mAb 216 유도성 막 손상의 속구는 기능성 골지에 의존적이다

브레펠딘 A(Brefeldin A, BFA)의 처리는 골지 회합된 코트 단백질의 방출, 소포체로의 골지막의 재분포 및 골지체로부터의 분비 방해를 야기시키는 것으로 공지되어 있다(Klausner, R. D., (1992) J Cell Biol. 116:1071). 새로이 형성된 리소좀은 BFA 처리된 세포에서 발생하지 않으므로, 손상 복구에서의 이들의 필요성을 시험하기 위한 조건을 제공한다. 따라서, mAb 216에 의해 유도된 막 손상의 보수 원조하기 위한 새로이 형성된 리소좀의 능력을 BFA를 사용하여 세포를 처리함으로써 시험하였다.

방법:

시그마로부터 브레펠딘-A를 수득하였다. Nalm-6 세포(1 X 10⁶ 세포/ml)를 mAb 216으로 처리하기 전에 37℃에서 2시간 동안 BFA(25 ㎍/ml)으로 처리하였다. 동일한 양의 DMSO를 사용한 대조군 시료를 동시에 세팅하였다. 이후, 세포를 25 ㎍의 mAb 216 또는 대조군 Ab에 노출시키고, 유세포분석으로 분석하였다.

결과:

도 6B에 도시된 바와 같이, BFA 및 mAb 216의 조합에 의해 세포 생존률(생존 세포 퍼센트)이 감소되었고, 이는 생존률에 대한 상승작용적 효과를 입증한다. BFA는 대조군 항체로 처리된 세포의 생존률은 효과가 없었다. 이 결과는 막 보수가 BFA에 의해 방해됨을 입증하고, 새로이 형성된 리소좀이 막 보수에 필요하고, mAb 216 손상된 B-세포주의 생존률 및 온전성을 지속시키는데 필요하다는 것을 암시한다. 따라서, 이러한 결과는 mAb 216이 B 세포상의 막 손상을 발생시키고, 세포가 원형막과의 리소좀 융합을 이용하여 손상을 미봉하려 시도한다는 것을 확증한다. 추가의 리소좀의 생성이 BFA에 의해 억제되는 경우, 보수 과정은 세포 생존률을 유지시키는데 충분하지 않을 수 있다.

실시예 8

빈크리스틴을 이용한 상승작용적 B 세포 사멸

B 세포주에 대해 직접적인 세포독성 분석에서 mAb 216이 화학요법제, 특히 빈크리스틴과 조합되는 경우에 세포 사멸이 향상되었음이 입증되었다. 상이한 유전형 및 표현형의 ALL 모세포로부터 유래된 세 개의 세포주인 Nalm 6, REH, 및 SUPB 15을 37℃에서 48시간 동안 mAb 216 단독 또는 빈크리스틴(VCR)과 조합하여 인큐베이션하였다.

도 4 및 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 이들 결과는 낮은 빈크리스틴 농 도(0.2 ng/ml)에서 빈크리스틴 단독의 처리로 인해 세포 사멸이 발생하지 않았음을 나타낸다. 그러나, 빈크리스틴을 mAb 216과 조합하는 경우, B 세포 사멸의 백분율이 두배 이상을 넘었고, 이는 상승작용적 상호작용을 입증한다. B-전구 림프모구에 대한 mAb 216의 세포독성은 단독으로 및 화학요법과의 조합으로 이들 항체를 유년기 ALL에서의 추가의 면역요법 연구에 대한 유망한 작용제로 만든다.

실시예 9

화학요법제에 의한 B 세포주에 대한 mAb 216의 향상된 세포독성

단일의 화학요법제와의 조합에 의한 mAb 216의 시험관내 세포독성을 시험하였다. 상이한 유전형 및 표현형의 ALL 모세포로부터 유래된 세 개의 세포주인 Nalm 6, REH, 및 SUPB 15를 단독으로 또는 빈크리스틴(VCR), 다우노루비신(DNR), 또는 L-아스파라기나아제(ASPR)과의 조합으로 인큐베이션하였다. mAb 216과의 조합하는 경우 모든 화학요법제는 단일 작용제의 화학요법 또는 mAb 216 단독으로 사용하여 관찰되는 것 보다 높은 정도의 세포독성을 야기시켰다. 그러나, 빈크리스틴과 mAb 216의 조합이 가장 효과가 있었고, 빈크리스틴 또는 mAb 216 단독에 의해 유도된 세포 독성의 양에 비해 상승작용적인 세포독성의 크기를 야기시켰다. 이들 결과는 화학요법제의 존재하에서의 mAb의 향상된 세포독성을 입증하고, 적어도 부분적으로는 mAb 216 처리가 B 세포의 투과화(permeabilization)를 야기시키고, 그렇지 않으면 불투과성의 화학요법제를 세포 내부로 들어가도록 한다는 것을 입증한다.

결과를 하기 표 1에 나타내었다.

표 1. mAb 216과 화학요법제 병용의 시험관내 세포독성

세포주/인큐베이션 시간	처리	생(生) 세포 x 105	생(生) 세포에서의 변화율(%)
Nalm 6 48시간	대조군	13
	mAb 216 5㎍/㎖	10	23
	VCR 0.2ng/㎖	13	0
	mAb 216+VCR	6	53
Nalm 6 48시간	대조군	8.2
	mAb 216 5㎍/㎖	5.6	31
	DNR 5ng/㎖	4.3	47
	mAb 216+DNR	1.5	81
Nalm 6 48시간	대조군	11
	mAb 216 5㎍/㎖	7.1	35
	VCR 2ng/㎖	5	54
	DNR 5ng/㎖	4.5	59
	mAb 216+VCR	0.28	97
	mAb 216+DNR	4.3	61
Nalm 6 48시간	대조군	12
	mAb 216 5㎍/㎖	5.1	57
	ASPR 0.8U/㎖	9.2	23
	mAb 216+ASPR	3.2	73
REH 48시간	대조군	8.6
	mAb 216 5㎍/㎖	4.6	46
	VCR 2ng/㎖	4.2	86
	mAb 216+VCR	0.45	94
REH 48시간	대조군	13
	mAb 216 5㎍/㎖	11	15
	VCR 2ng/㎖	7.7	40
	DNR 5ng/㎖	4.5	65
	mAb 216+VCR	0.9	93
	mAb 216+DNR	4.1	68
REH 48시간	대조군	9.6
	mAb 216 5㎍/㎖	3.4	65
	ASPR 0.8U/㎖	6.2	35
	mAb 216+aspar.	2.4	75
SUP B15 48시간	대조군	5.1
	mAb 216 5㎍/㎖	3.6	29
	VCR 2ng/㎖	2.8	45
	DNR 4ng/㎖	0.44	91
	mAb 216+VCR	1.5	50
	mAb 216+DNR	0.38	92
SUP B15 48시간	대조군	5.7
	mAb 216 5㎍/㎖	4.3	24
	ASPR 0.8U/㎖	3	47
	mAb 216+ASPR	2.3	60

VCR; 빈크리스틴, DNR; 다우노루비신, ASPR; 아스파라기나아제

실시예 10

mAb 216 및 C2B8(항-CD-20 Ab)의 조합 처리

mAb 216 및 항-CD20항체가 생체내에서 효과적인 배합을 제공할 수 있는지의 여부를 연구하기 위해, 인간 환자의 생체내 처리 동안 조우될 수 있는 보체의 존재하에서 B 세포에 대한 조합 항체 처리의 효과를 시험하였다.

림프종 세포주 OCI-Ly8을 토끼 보체의 존재하에서 mAb 216 또는 C2B8(Rituxan)으로 처리하였다. 세포 사멸(%)을 결정하기 위해 미토콘드리아 효소의 기능의 척도인 3(4,5)-디메틸티아졸-2,5-디페닐 테트라졸리움 브로마이드의 비색 변화를 측정하는 MTT 분석을 이용하여 세포독성을 검출하였다. 세포를 ml당 1x10⁵ 또는 ml당 3x10⁵의 농도로 플레이팅시켰다. 각각의 항체를 215 ng/ml 또는 430 ng/ml에서 각각 시험하고, 430 ng/ml의 조합 농도에 대한 215 ng/ml에서의 각각의 항체로 구성된 조합 처리를 시험하였다. 결과는, 특히 항체 및/또는 보체 농도가 효능을 제한할 수 있는 높은 세포 농도에서 조합 항체 처리가 킬링 B 세포에 대한 효능을 향상시켰음을 나타내는 결과를 도 7에 도시하였다. 낮은 플레이팅 밀도에서, 조합 항체 처리는 약 34%를 사멸시킨 것으로 보이나, 215 ng/ml에서 각각 시험된 각각의 항체의 추가적인 효과는 약 29%를 사멸시킴에 따라, 최소한 추가적이고 아마 상승작용적인 효과를 입증한다. 높은 플레이팅 밀도에서, 조합 항체 처리는 약 30%를 사멸시키는 것으로 보이나, 215 ng/ml에서 시험된 각각의 항체의 추 가적인 효과가 약 23%를 사멸시킴에 따라, 역시 최소한 추가적이고 아마 상승작용적인 효과를 입증한다. 나타낸 데이터는 세 개의 실험중 대표적인 하나이다.

실시예 11

ALL을 지닌 환자에서의 mAb 216의 효능을 시험하기 위한 임상 시험 처리 프로토콜

이는 재발성 또는 불응성 B-전구물질 ALL을 지닌 유아에서의 인간 mAb 216의 단계 I 투여 점증(escalation) 연구일 것이다. 두 개의 처리 과정의 mAb 주입이 0일 및 7일째에 투여되는 동일한 용량의 항체로 주어질 것이다.

0일: mAb 216 용량 #1

7일: mAb 216 용량 #2

항체 투여: 0일 및 7일

mAb 216를 실온에서 일반적인 염수중에서 1 mg/ml의 최종 부피로 희석시켰다. mAb 용액을 임의의 기타 용액 또는 약제와 혼합하거나 이로 희석시키지 않았다. 최초 mAb 216 주입의 시점에서의 최초 투여 속도는 최초 30분 동안 25 mg/시간이었다. 독성 또는 주입 관련 사건이 발생하지 않는 경우, 투여 속도는 최대 200 mg/시간까지 상승(30분 간격에서 25 mg/시간 증가)시킬 수 있다. 임의의 주입 관련 독성이 발생하는 경우, 항체 주입은 일시적으로 낮추거나 중단시킬 수 있고, 환자는 적절하게 치료받아야 한다. 증상이 개선되는 경우, 주입은 이전 속도의 1/2에서 재개할 수 있고, 200 mg/시간의 최대 속도로 점차 상승시킬 수 있다.

질병 평가 및 약물동역학

이차 항체 주입을 진행하기 전에 요법에 대한 조기 반응을 7일째에 수행할 것이다. 항체의 최초 투여에 대한 양호한 반응을 입증하는 환자에게 0일째에 동일한 방식의 이차 용량을 투여할 것이다. 7일째에 불량한 반응을 지니는 환자에게 빈크리시틴과 함께 항체의 이차 용량을 투여할 것이다. 5일째까지 요법에 대한 불량한 반응을 명백하게 지니는 환자, 즉 말초신경계 모세포 수가 명백하게 증가하는 환자의 경우, 환자는 5일과 같이 조기에 mAb 216을 빈크리스틴의 이차 용량으로 처리할 수 있다.

항체 처리에 대한 최종 반응을 35일째에 수행할 것이다.

약물동역학 시료 추출을 용량 # 1의 항체 주입으로만 수행할 것이다.

mAb 216 용량 점증 스케쥴

용량 수준	용량(㎎/㎏)
용량 수준 1 용량 수준 2 용량 수준 3 용량 수준 4 용량 수준 5	1.25 2.5 5.0 10.0 20.0

mAb 216의 용량을 상기 나타낸 바와 같이 ㎏ 당 ㎎으로 계산할 것이다. 하기와 같이 세명의 환자의 그룹에서 점증을 계획되어 있고, 용량 제한적 독성(DLT)의 첫 번째 징후에서 추가의 두명의 환자가 추가된다:

세명의 환자를 용량 수준 1(1.25 mg/kg)로 처리하였다.

최초 세명의 환자중 아무도 DLT를 경험하지 않는 경우, 용량을 세명의 차후 환자에서 다음 수준으로 증가시켰다.

주어진 코홀트 내의 세명의 환자중 한명이 DLT를 경험하는 경우, 두명 이하의 추가의 환자를 상기 수준으로 처리할 것이다.

상기 두명의 환자중 아무도 DLT를 경험하지 않는 경우, 용량을 차후 코홀트의 환자에 대해 상승시켰다.

상기 두명의 추가의 환자중 한명 이상이 DLT를 경험하는 경우, 상기 용량 수준에서의 환자 엔트리 및 추가의 용량 상승을 중지할 것이고, MTD는 초과했을 것이다. 이후, 두명 이상의 추가의 환자가 다음의 보다 낮은 용량 수준에서 처리될 것이다.

임의의 코홀트(세명 내지 다섯명의 환자) 내에서의 두명 이상의 환자가 DLT를 경험하는 경우, MTD가 초과했을 것이다. 이후 두명 이상의 추가의 환자가 다음의 보다 낮은 용량 수준에서 처리될 것이다.

다섯명의 환자중 한명 이하가 DLT를 경험하는 가장 높은 용량 수준이 MTD로 간주될 것이다.

본 연구에서 허용되는 환자내 용량 상승은 없을 것이다.

용량 제한 독성의 정의

유해사례(독성)가 NCI CTC v.2.0에 따라 등급이 매겨질 것이다. DLT는 임의의 최소한(어쩌면, 아마도 또는 명확하게는) 연구 작용제인 mAb 216에 기인하여 발생하는 혈액성 또는 비혈액성 독성으로 정의될 것이다.

화학요법

7일째의 평가: 7일째의 임상 반응 평가가 골수 검사 시에 백혈병 모세포가 25% 이상으로 존재하거나 말초혈액 모세포 수가 상승하는 것으로 정의되는 불량한 반응을 나타내는 경우, 용량 #2의 항체를 개시하기 7일전에 빈크리스티이 투여될 것이다. 그후, 빈크리스틴은 하기의 스케줄에 따라 총 4회의 용량으로 매주 투여될 것이다:

4회의 용량으로 매주(7, 14, 21, 28일) 빈크리스틴 1.5 mg/m²/용량(IVP).

환자가 7일째에 mAb 216 + VCR을 투여받은 후 3회의 추가의 매주 VCR 용량을 투여받음으로써 35일째까지 완전 완화되는 경우, mAb 216 유효성이 있을 때까지는 매월을 기초로 한 mAb 216 + VCR을 이용한 차후의 처리가 가능할 수 있다. mAb의 용량은 프로토콜 처리의 1일 및 7일째에 주어진 바과 동일하게 존재할 것이다.

14, 21 및 28일째의 평가: 14, 21 및 28일째의 임상 반응 평가가 골수 시험에서 백혈병 모세포가 5% 이상으로 잔류하는 것으로 정의되는 잔여 질환을 나타내는 경우, 환자는 재유도 화학요법을 시작할 수 있다.

14, 21 또는 28일째에 잔류 질환에 대해 재유도 화학요법을 받는 환자의 경우, 매주의 BMA 평가가 연구 목적상 더 이상 필요하지 않다. 재유도 화학요법을 받는 환자는 완화 상태를 평가하기 위한 화학요법을 개시한 후 약 4주째에 BMA/LP를 경험하는 것이 권고된다.

재유도 화학요법:

재유도 화학요법은 14, 21 또는 28일째에 검출된 잔류 질환을 지닌 환자만 예정된다. 표준 4-약제, 28일의 재유도 요법은 하기를 포함한다:

28일간 TID로 나누어진 프레드니손 40 mg/m²/일;

4회로 매주(1, 8, 15 및 22일) 빈크리스틴 1.5mg/m²/용량(IVP);

6회의 용량(2, 5, 8, 12, 15 및 19일)의 E. coli L-아스파라기나아제 6,000 IU/m²/용량(IM);

3회 용량으로 매주(8, 15 및 21일) 다우노마이신 30 mg/m²/용량(IV);

수막강내 메토트렉세이트(연령에 적합한 용량).

처리일은 재유도 화학요법의 첫번째 일인 1일에 시작한다.

1일 및 15일(CNS 2, 즉 < 5 WBC 및 5일 LP에서의 사이토스핀(cytospin) 상에서의 모세포인 경우 추가 용량 8일 및 22일)

CNS 예후 용량:

연령	MTX	부피
1-1.99년	8 ㎎	8 cc
2-2.99년	10 ㎎	10 cc
3-3.99년	12 ㎎	12 cc
> 9 년	15 ㎎	15 cc

상술한 프로토콜은 연구자로 하여금 다음의 목적을 달성할 수 있도록 한다:

재발 또는 난치성 급성림프구성백혈병(ALL)을 가진 아동에 주당 2회로 투여하여 VH4-34 엔코딩된 단클론 항체, mAb 216의 최대 인내 용량(MTD)를 측정하고;

To determine the dose-limiting toxicities (DLT) of mAb 216 given on this schedule, as a 단일 약제 또는 빈크리스틴과의 조합으로서 상기 주어진 스케쥴에서 mAb 216의 용량-제한 독성(DLT)를 결정하고;

재발 또는 난치성 급성림프구성백혈병(ALL)을 가진 아동에서 mAb 216의 약동력학적 성질을 밝혀내고;

임상 I 상으로 제한된 연구에서 mAb 216의 항종양 활성을 일차적으로 정의하며;

재발 또는 난치성 급성림프구성백혈병(ALL)을 가진 환자에서 mAb 216의 생물학적 활성을 평가한다.

Claims (80)

1. (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양; 및 (2) 세포독성제(cytotoxic agent)와 상기 B 세포가 접촉하는 단계를 포함하는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
2. 제 1 항에 있어서, B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환은 림프암, 바이러스성 감염, 면역결핍증, 또는 자가면역병인 방법.
3. 제 2 항에 있어서, 상기 바이러스성 감염은 인간 면역결핍증 바이러스 또는 단핵세포증인 방법.
4. 제 2 항에 있어서, 상기 면역결핍증은 이식후면역증식병 또는 면역결핍증 증후군인 방법.
5. 제 2 항에 있어서, 상기 자가면역병은 전신홍반루프스, 류마티스관절염, 자가면역 림프세포증식질환, 다발경화증, 건선, 중증근육무력증, 하시모토 갑상선염, 알츠하이머병, 루프스신장염, 면역매개 저혈소판증과 같은 제 3 급(Class III) 자가면역병, 급성특발혈소판감소자색반병, 만성특발혈소판감소자색반병, 피부근육염, 쇼그렌증후군, 다발경화증, 시든햄 무도병, 중증근육무력증, 전신홍반루프스, 루프 스신장염, 류마티스열, 다분비선증후군, 수포성 유천포창, 당뇨병, 헤노호쉔라인자색반, 연쇄구균감염후 신장염, 결절홍반, 타카야스 동맥염, 애디슨병, 크론병, 사코이드증, 궤양 대장염, 다형홍반, 면역글로블린에이 신장병증, 결절다발동맥염, 강직척추염, 굿파스처증후군, 혈전맥관염(thromboangitis ubiterans), 원발쓸개관간경화, 갑상샘항진증, 피부경화증, 만성활동간염, 다발근육염/피부근육염, 다발연골염, 보통천포창, 베게너 육아종증, 막성콩팥병증, 근위축성측삭경화증, 척수매독, 거세포 동맥염/다발근육통증, 악성빈혈, 급속진행 사구체신염 및 섬유화 폐포염(fibrosing alveolitis)인 방법.
6. 제 1 항에 있어서, 세포독성제는 화학요법제, 방사성 동위원소, 세포독성 항체, 면역접합체, 리간드 접합체, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 독소, 또는 그들의 혼합물인 방법.
7. 제 6 항에 있어서, 화학요법제는 B 세포의 세포골격를 분열하는 약제인 방법.
8. 제 7 항에 있어서, B 세포의 세포골격를 분열하는 약제는 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하는 약제인 방법.
9. 제 8 항에 있어서, 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하는 약제는 탁센(taxane), 빈카 알칼로이드 또는 콜히친, 또는 그들의 혼합물인 방법.
10. 제 9 항에 있어서, 빈카 알칼로이드는 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 또는 비노렐빈, 또는 그들의 혼합물인 방법.
11. 제 9 항에 있어서, 탁센은 파클리탁셀(paclitaxel), 또는 도세탁셀(docetaxel), 또는 그들의 혼합물인 방법.
12. 제 8 항에 있어서, B 세포의 세포골격를 분열하는 약제는 항액틴제인 방법.
13. 제 6 항에 있어서, 화학요법제는 아스파라기나아제, 에피포도필로톡신, 캄토테신, 항생제, 백금배위착염, 알킬화제, 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체 또는 토포아이소머레이즈 억제제, 또는 그들의 혼합물인 방법.
14. 제 13 항에 있어서, 토포아이소머레이즈 억제제는 에피포도필로톡신(epipodophyllotoxin)인 방법.
15. 제 13 항에 있어서, 에피포도필로톡신은 에토포시드 또는 테니포시드인 방법.
16. 제 13 항에 있어서, 피리미딘 유사체는 카페시타빈, 5-플루오로우라실, 5-플루오로데옥시유리딘, 5-플루오로데옥시유리딘 모노포스페이트, 시토신 아라비노시 드, 5-아자시티딘, 2',2'-디플루오로데옥시시티딘인 방법.
17. 제 13 항에 있어서, 퓨린 유사체는 머캅토퓨린, 아자티오프렌, 티오구아닌, 펜토스타틴, 에리스로하이드록시노닐아데닌, 클라드리빈, 비다라빈, 인산플루다라빈인 방법.
18. 제 13 항에 있어서, 엽산 유사체는 메토트렉세이트, 랄티트렉스드(raltitrexed), 로메트렉솔(lometrexol), 퍼미프렉스드(permefrexed), 에다트렉세이트(edatrexate), 페미트렉스드(pemetrexed)인 방법.
19. 제 13 항에 있어서, 캄토테신은 이리노토칸(irinotocan), 토포테칸(topotecan), 또는 캄토테칸(camptothecan)인 방법.
20. 제 13 항에 있어서, 항생제는 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 이다루비신, 에피루비신, 발루부신, 미톡산트론, 블레오마이신, 또는 미토마이신인 방법.
21. 제 13 항에 있어서, 백금배위착염은 시스플라틴, 카보플라틴, 또는 옥살릴플라틴인 방법.
22. 제 13 항에 있어서, 알킬화제는 메클로레타민, 사이클로포스파마이드, 이포스파마이드, 멜파란, 다카바진, 테모졸로마이드, 티오테파, 헥사메틸멜라민, 스트렙토조신, 카무스틴, 부설판, 알트레타민 또는 클로람부실인 방법.
23. 제 1 항에 있어서, 세포독성제는 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체와 동시에, 투여전 또는 투여후에 투여되는 방법.
24. 제 1 항에 있어서, 세포독성제는 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체와 공유적 또는 비공유적으로 접착되는 방법.
25. 제 1 항에 있어서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 VH4-34 엔코딩 항체인 방법.
26. 제 25 항에 있어서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 mAb 216, RT-2B, FS 12, A6(H4C5), Cal-4G, S20A2, FS 3, Gee, HT, Z2D2, Y2K인 방법.
27. 제 26 항에 있어서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 mAb 216인 방법.
28. 제 1 항에 있어서, B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체는 순 양전하를 가지는 CDR 시퀀스를 포함하는 방법.
29. 제 6 항에 있어서, 세포독성제는 방사성 동위원소인 방법.
30. 제 29 항에 있어서, 방사성 동위원소는 ¹³¹I, ¹²⁵I, ¹²³I, ⁹⁰Y, ¹¹¹In, ¹⁰⁵Rh, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re 및 ¹⁸⁶Re인 방법.
31. 제 6 항에 있어서, 세포독성 항체는 B 세포 상의 세포 표면 수용체에 대해 특이결합을 가지는 방법.
32. 제 31 항에 있어서, 세포독성 항체는 CD11a, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD34, CD37, CD38, CD40, CD45, CD52, CD80, CD86, IL-4R, IL-6R, IL-8R, IL-13, IL-13R, α-4/β-1 인테그린 (VLA4), BLYS 수용체, 세포 표면 이디오타입 Ig, 종양괴사인자 (TNF), 또는 그들의 혼합물에 대해 특이결합을 가지는 방법.
33. 제 31 항에 있어서, 세포독성 항체는 이팔리주맙(RAPTIVA), 리툭시맙(RITUXAN), 다클리주맙(ZENAPAX), 에프라투주맙, 바실리주맙(SIMULECT), 항-CD52(캄패스), 나탈리주맙, 또는 인플릭시맙(REMICADE)인 방법.
34. 제 31 항에 있어서, 세포독성 항체는 면역접합체(immunoconjugate)인 방법.
35. 제 6 항에 있어서, 세포독성제는 리간드 접합체인 방법.
36. 제 35 항에 있어서, 리간드 접합체는 IL-2, IL-4, IL-6, IL-13, IL-15, BLYS, 또는 TNF를 포함하는 방법.
37. 제 6 항에 있어서, 면역억제제는 글루코코르티코이드, 칼시뉴린 억제제, 항증식/항대사제, 또는 면역억제 항체인 방법.
38. 제 37 항에 있어서, 칼시뉴린 억제제는 시클로스포린(cyclosporine) 또는 타크롤리무스(tacrolimus)인 방법.
39. 제 37 항에 있어서, 항증식/항대사제는 아자티오프린, 클로람부콜, 사이클로포스파마이드, 레플루노미드, 미코페놀레이트 모페틸, 메토트렉세이트, 라파마이신, 탈리도마이드, 또는 그들의 혼합물인 방법.
40. 제 37 항에 있어서, 글루코코르티코이드는 프레드니소론, 프레드니손, 또는 덱사메타손으로부터 선택되는 방법.
41. 제 37 항에 있어서, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제는 소분자 치료제, 유전자 치료제 또는 유전자 발현 조절제인 방법.
42. 제 41 항에 있어서, 소분자 치료제는 키나아제 억제제, 또는 프로테아좀 억제제인 방법.
43. 제 42 항에 있어서, 키나아제 억제제는 bcr/abl 타이로신 키나아제 억제제, 또는 타이로신 키나아제 억제제인 방법.
44. 제 42 항에 있어서, 프로테아좀 억제제는 보론산 에스터인 방법.
45. 제 41 항에 있어서, 유전자 치료제는 플라스미드, 네이키드(naked) DNA, 또는 핵산-펩티드 복합체인 방법.
46. 제 41 항에 있어서, 유전자 발현 조절제는 안티센스 핵산, 또는 방해 핵산(예를 들어, RNAi)인 방법.
47. 제 6 항에 있어서, 독소는 슈도모나스 엑소톡신 A, 라이신, 디프테리아 독소, 모모딘, 억새풀 항바이러스 단백질, 포도구균장독소 A, 젤로닌, 또는 메이탄시 노이드(maytansinoids)인 방법.
48. 제 2 항에 있어서, 림프암은 급성 또는 만성 백혈병 또는 B 세포 기원의 림프종인 방법.
49. 제 2 항에 있어서, 림프암은 급성림프구성백혈병(ALL), 비호지킨림프종(NHL), 버킷림프종, B 전구 ALL, 성인 ALL, 또는 만성림프성 백혈병(CLL)인 방법.
50. 제 1 항에 있어서, 상기 접촉은 생체내, 시험관내 또는 생체밖에서 수행되는 방법.
51. 제 50 항에 있어서, 상기 생체내 접촉은 상기 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체를 인간 환자에 대해 비경구 투여하여 수행되는 방법.
52. (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양; 및

    (2) 화학요법제를 투여하는 단계를 포함하는 림프암을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
53. (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양; 및

    (2) B 세포 상의 세포 표면 수용체에 대해 특이결합을 가지는 세포독성 항체를 투여하는 단계를 포함하는 림프암을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
54. CDIM 에피토프와 결합하는 항체 및 B 세포의 세포골격를 분열시키는 약제와 B 세포가 접촉하는 단계를 포함하는 CDIM 에피토프와 결합하는 항체의 B 세포 세포독성을 증가시키는 방법.
55. 제 54 항에 있어서, B 세포의 세포골격를 분열하는 약제는 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하는 약제인 방법.
56. 제 55 항에 있어서, 미세관의 중합반응 또는 탈중합반응을 방해하는 약제는 탁센(taxane), 빈카 알칼로이드 또는 콜히친인 방법.
57. 제 56 항에 있어서, 빈카 알칼로이드는 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 또는 비노렐빈인 방법.
58. 제 56 항에 있어서, 탁센은 파클리탁셀(paclitaxel), 또는 도세탁 셀(docetaxel)인 방법.
59. 제 54 항에 있어서, B 세포 세포독성을 증가시키는 방법을 림프암, B 세포 과다증식세포질환, 또는 자가면역병의 치료에 사용하는 방법.
60. (1) B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양; 및

    (2) 화학요법제, B 세포 상의 세포 표면 수용체에 대해 특이결합을 가지는 항체, 면역억제제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 또는 그들의 혼합물을 투여하는 단계를 포함하는 포유류에서 자가면역병을 치료하는 방법.
61. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체와 악성 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는 화학요법제, 세포성장 조절인자 및/또는 억제제, 또는 세포독성 항체에 내성을 가지는 상기 악성 B 세포를 사멸하는 방법.
62. 제 61 항에 있어서, 부가적인 화학요법제와 상기 악성 B 세포를 접촉하는 단계를 더 포함하는 방법.
63. B 세포를 화학요법제와 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체로 치료하는 단계를 포함하는 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체에 내성을 가지는 악성 B 세포를 사멸하는 방법.
64. B 세포를 투과하기에 충분한 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 양과 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질병 또는 장애를 치료하는 방법.
65. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 처리는 환자에 다음의 재유도요법을 받을 수 있도록 하는 재유도요법에 난치성인 림프암을 앓는 환자에 있어서 종양 부하를 감소시키는 방법.
66. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양을 투여하는 단계를 포함하는 항-B 세포 항체의 세포독성을 증가시키는 방법.
67. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양을 포함하는 비경구 투여를 위한 약제학적 포뮬레이션.
68. 제 67 항에 있어서, 화학요법제를 더 포함하는 약제학적 포뮬레이션.
69. (a) 환자내에서 B 세포를 투과하기에 충분한 B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 양;

    (b) B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 치료하는데 효율적인 세포독성제의 약제학적으로 효과적인 양을 포함하는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 환자를 치료하기 위한 키트.
70. B 세포 상의 CDIM 에피토프에 대해 특이결합을 갖는 항체의 세포독성 양으로 생체밖 골수를 치료하는 단계를 포함하는 골수절제요법 후에 환자 내에서 골수의 재이식 이전에 악성 B 세포의 림프암을 앓는 환자의 골수를 제거하기 위한 방법.
71. 제 70 항에 있어서, 세포독성제로 골수를 치료하는 단계를 더 포함하는 방법.
72. (1) 항-CDIM 항체 mAb 216 또는 Y2K의 세포독성 양; 및

    (2) 항-CD20 항체와 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
73. 제 72 항에 있어서, 항-CD20 항체는 리툭시맙, 토수티맙(tosutimab), 또는 이브리투모맙(ibritumomab)인 방법.
74. 제 72 항에 있어서, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴과 환자의 B 세포를 접촉하 는 단계를 더 포함하는 방법.
75. (1) 항-CDIM 항체 mAb 216 또는 Y2K의 세포독성 양; 및

    (2) 항-CD52 항체와 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
76. 제 75 항에 있어서, 항-CD52 항체는 캄패스(CAMPATH)인 방법.
77. 제 75 항에 있어서, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴과 환자의 B 세포를 접촉하는 단계를 더 포함하는 방법.
78. (1) 항-CDIM 항체 mAb 216 또는 Y2K의 세포독성 양; 및

    (2) 항-CD22 항체와 B 세포를 접촉하는 단계를 포함하는 B 세포의 과다세포증식을 특징으로 하는 질환을 앓는 인간 환자를 치료하기 위한 방법.
79. 제 78 항에 있어서, 항-CD22 항체는 에프라투주맙(epratuzumab)인 방법.
80. 제 78 항에 있어서, 빈크리스틴 또는 빈블라스틴과 환자의 B 세포를 접촉하는 단계를 더 포함하는 방법.

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