KR20070013429A - Process for the production of mycophenolic acid by culturing penicillium brevi-compactum in low temperature - Google Patents

Process for the production of mycophenolic acid by culturing penicillium brevi-compactum in low temperature Download PDF

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Abstract

A method for the production of mycophenolic acid by culturing Penicillium brevi-compactum Dierckx ATCC 46514 at low temperature is provided to increase production amount of mycophenolic acid by optimizing the culture conditions, especially culture temperature. The mycophenolic acid represented by the formula(3), wherein R1 is methyl or hydroxymethyl and R2 is hydroxy group or amino group, and its derivative are produced by culturing Penicillium brevi-compactum in a medium containing a carbon source, a nitrogen source and trace elements at 15-23 deg.C, wherein the nitrogen source is NH4NO3, KNO3, (NH4)2SO4, NH4Cl, urea, Nz-amine, bean proteins, concentrated and fermented corn steep liquor, cottonseed meal, soybean cake, skim milk, peptone, beef extract, yeast extract, CGM(corn gluten meal), casamino acid or casein.

Description

저온에서 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒｅｖｉ-ｃｏｍｐａｃｔｕｍ을 배양하여 마이코페놀산을 생산하는 방법{Process For The Production Of Mycophenolic Acid By Culturing Penicillium brevi-compactum In Low Temperature} Process For The Production Of Mycophenolic Acid By Culturing Penicillium brevi-compactum In Low Temperature} Incubating PFENｉｃｉｌｌｉｕｍ ｂｒｅｖｉ-ｃｏｍｐａｃｔｕｍ at low temperature

도 1 은 마이코페놀산의 구조식을 보인다.1 shows the structural formula of mycophenolic acid.

본 발명은 Penicillium brevi-compactum을 저온배양하여 마이코페놀산(Mycophenolic acid; MPA)을 생산하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a method for producing Mycophenolic acid (MPA) by low temperature culture of Penicillium brevi-compactum .

마이코페놀산은 Pencillium glaucum 의 발효 산물로써 1896년에 처음으로 보고 되었으며[E.L. Jones et al,;J. Invest. Dermatol. 65, 537 (1975)], 그 구조는 1952년에 결정되었다. 마이코페놀산은 처음에는 항세균, 항진균 작용이 있는 것으로 알려졌었으나 후에 항바이러스, 암조직 성장억제 작용, 면역거부반응 억제 작용이 있는 것으로 보고 되었다. 최근 마이코페놀산은 면역억제제로 동종 심장, 신장 이식자의 거부 반응 예방약으로 미국 FDA 승인을 받고 간 이식과 자가 면역성 또는 면역에 의한 염증성 질병인 용혈성 빈혈, 수포성 천포창, 염증성 장염, 중증 근무력증, 신장병증, 건선, 류머티스성 관절염 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있고 지속적으로 임상적인 응용이 연구되고 있다. Mycophenolic acid was first reported in 1896 as a fermentation product of Pencillium glaucum [EL Jones et al ,; Invest. Dermatol. 65, 537 (1975), whose structure was decided in 1952. Mycophenolic acid was initially known to have antibacterial and antifungal effects, but later it was reported to have antiviral, cancer tissue growth inhibitory effect and immunorejection inhibitory effect. Recently, mycophenolic acid has been approved by the US FDA as an immunosuppressive agent for preventing rejection of allogeneic heart and kidney transplants. It is known to be effective for psoriasis and rheumatoid arthritis, and the clinical application is continuously studied.

이러한 생체 내에서의 마이코페놀산의 다양한 활성은 선택적, 가역적, 비경쟁적으로 이노신 모노포스페이트 디하이드로지나제(inosine monophosphate dehydrogenase; IMPDH)를 저해함으로써 퓨린(purine) 생합성의 de novo 경로를 차단하고, DNA합성을 억제함으로써 작용하는 것으로 보고 되었다(de novo 경로 : 아미노산에서 GMP를 생산하는 생합성 경로 중의 하나). IMPDH가 차단되면 세포내 구아노신 뉴클레오티드(guanosine nucleotides)의 결핍이 일어나는 반면, ATP는 영향을 받지 않는다. 또한 마이코페놀산은 T 림프구, B 림프구의 증식을 억제하고 B 림프구에 의한 체액성 면역 반응을 억제한다. 그러나 시토킨(IL-1과 IL-2)생성을 억제하지 않는다. 림프구가 다른 세포에 비해 GMP 합성에 있어 de novo 경로에 의존적이므로 마이코페놀산은 림프구에 더 선택적인 효과를 나타낸다. The various activities of mycophenolic acid in vivo block the de novo pathway of purine biosynthesis by selectively, reversibly and noncompetitively inhibiting inosine monophosphate dehydrogenase (IMPDH), DNA It has been reported to work by inhibiting synthesis ( de novo pathway: one of the biosynthetic pathways that produces GMP from amino acids). Blocking IMPDH results in a deficiency of guanosine nucleotides in the cell, while ATP is not affected. Mycophenolic acid also inhibits the proliferation of T lymphocytes, B lymphocytes, and inhibits the humoral immune response by B lymphocytes. However, it does not inhibit the production of cytokines (IL-1 and IL-2). Mycophenolic acid has a more selective effect on lymphocytes because lymphocytes are dependent on the de novo pathway in GMP synthesis compared to other cells.

상기 마이코페놀산의 이화학적 특성은 다음과 같다. Physicochemical properties of the mycophenolic acid are as follows.

화학명은 6-(4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-5-isobenzofranyl)-4-methyl-4-hexenoic acid, 분자식은 C17H20O6, 분자량 320.34이며 구조식은 다음 화학식 1과 같다The chemical name is 6- (4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-5-isobenzofranyl) -4-methyl-4-hexenoic acid, the molecular formula is C 17 H 20 O 6 , molecular weight 320.34 and the structural formula is Same as Formula 1

Figure 112005040693012-PAT00001
(화학식 1)
Figure 112005040693012-PAT00001
(Formula 1)

이처럼 중요한 마이코페놀산은 미생물 특히 진균을 이용한 발효 생산을 통해서만 생합성 되므로 마이코페놀산 생성균주의 산업적 보존, 배양 및 개량 기술의 개발이 절실히 요구되고 있다.  Since these important mycophenolic acids are biosynthesized only through fermentation production using microorganisms, especially fungi, the development of industrial preservation, culture, and improvement techniques for mycophenolic acid-producing strains is urgently required.

산업 균주로 많이 사용되는 곰팡이는 진균류로 상동염색체를 갖고 있으며 대립유전자가 존재하고 유전자 개수나 크기가 원핵세포미생물인 세균이나 방선균과 비교할 때 매우 크고 복잡하다. 또한 독특한 균사형태의 생장, 포자형성 등의 세포 분화 과정 및 이차대사산물의 생합성 등 복잡한 대사과정을 갖고 있어서 다루기가 어려운 미생물에 속하며, 각 기업체가 보유한 균주는 고유한 특성을 갖고 있어서 고유한 개량 프로토콜 작성과 개량 기술이 개발되어야 한다.      Fungi, which are widely used as industrial strains, are fungi that have homologous chromosomes and are very large and complex when compared with bacteria or actinomycetes, which have alleles and the number or size of genes are prokaryotic microorganisms. In addition, it is a microorganism that is difficult to handle due to complex metabolic processes such as cell differentiation such as unique mycelial growth, spore formation, and biosynthesis of secondary metabolites. Creation and improvement techniques should be developed.

대한민국 특허출원 10-2002-7003830 에서는 마이코페놀산 및 이의 유도체의 제조방법에 대하여 기술되어 있다. 상기 발명에서는 마이코페놀산 생성균주로서 페니실륨 왁스마니 균주를 사용하였고, 구체적으로 균주의 배양 조건에 있어서 질소원, pH 및 배양 온도에 대한 설명이 있으나, 마이코페놀산 생성 균주에 따른 배양의 온도로써 24°C 내지 28°C, 바람직하게는 25°C로 기재되어 있거나, 25°C 내지 32°C , 바람직하게는 28°C 로 기재되어 있어서 그 범위가 넓고, 구체적인 생산조건의 최적화에 대하여는 기재가 충분치 않아서 산업적으로 마이코페놀산을 대량생산하는 경우 그 적용이 충분치 못한 문제가 있었다.Korean patent application 10-2002-7003830 describes a method for preparing mycophenolic acid and its derivatives. In the present invention, the penicillium wax mani strain was used as the mycophenolic acid-producing strain, and in particular, the description of the nitrogen source, the pH and the culture temperature in the culture conditions of the strain, It is described as ° C to 28 ° C, preferably 25 ° C, or it is described as 25 ° C to 32 ° C, preferably 28 ° C, the range is wide, and for the optimization of specific production conditions There was a problem that the application is not enough if the mass production of mycophenolic acid industrially.

본 발명은 이러한 문제점을 해결하기위하여 생산 조건을 적정화한 곰팡이를 이용한 발효를 통하여 마이코페놀산을 산업적으로 대량 생산하는 것을 그 목적으로 한다.   In order to solve this problem, an object of the present invention is to industrially mass-produce mycophenolic acid through fermentation using molds having optimized production conditions.

본 발명은 Penicillium brevi-compactum 균주를 이용하여 하기 화학식 3의 마이코페놀산 및 이의 유도체을 생산하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method for producing mycophenolic acid of Formula 3 and derivatives thereof using Penicillium brevi-compactum strain.

Figure 112005040693012-PAT00002
(화학식 3)
Figure 112005040693012-PAT00002
(Formula 3)

상기에서 R1 은 메틸 또는 하이드록시메틸이고, R2는 하이드록시기 또는 아미노기이다. R 1 is methyl or hydroxymethyl, and R 2 is a hydroxy group or an amino group.

보다 상세하게는 배양 조건 중 배양액의 온도를 15°C 내지 23°C로 하여 상기 균주가 동화 가능한 탄소원, 질소원 및 미량원소를 함유하는 배지에서 Penicillium brevi-compactum 균주를 배양하는 것을 특징으로 하는 마이코페놀산의 생산방법에 관한 것이다. More specifically, the mycophenol characterized in that the culture of the culture medium in the culture conditions of 15 ° C to 23 ° C culturing the Penicillium brevi-compactum strain in a medium containing a carbon source, nitrogen source and trace elements assimilable It relates to a production method of acid.

본 발명에 따라 생산되어진 마이코페놀산은 공지의 방법을 통하여 유도체화 되어질 수 있다(참고문헌 한국특허출원번호 특1987-0014353호). 임상적으로 사용되는 마이코페놀산의 순도는 95% 이상이며 용해성은 에탄올에는 잘 녹지만 물에는 녹지 않는 성질을 갖고 있다.Mycophenolic acid produced according to the present invention can be derivatized by a known method (Reference Korean Patent Application No. 1987-0014353). Clinically used mycophenolic acid has a purity of over 95% and its solubility is soluble in ethanol but insoluble in water.

마이코페놀산이 실제 경구용으로 사용될 경우에는 흡수를 위하여 마이코페놀레이트 모페틸(Mycophenolate Mofetil; 이하 MPM이라 한다)로 간단히 에스테르화시켜 사용된다.     When mycophenolic acid is actually used for oral use, it is simply esterified with Mycophenolate Mofetil (MPM) for absorption.

MPM은 전구약물(prodrug)으로서 복용 후 체내에서 신속히 흡수되어 활성형인 마이코페놀산으로 전환된다. MPM은 미국의 Syntex사에서 1987년 면역억제제로 개발되어 물질특허를 취득하였고 스위스의 Roche사에 판권이 양도되어 Cellcept란 상품명으로 판매되고 있다.    MPM, taken as a prodrug, is rapidly absorbed by the body and converted to the active mycophenolic acid. MPM was developed by Syntex in the US as an immunosuppressant in 1987 and obtained a patent for a material. It is sold to Roche of Switzerland and sold under the name Cellcept.

상기 MPM의 이화학적 특성은 다음과 같다.Physicochemical properties of the MPM are as follows.

화학명은 2-morpholinoethyl(E)-6-(1,3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-5-isobenzofranyl)-4-methyl-4-hexenoic acid, 분자식은 C23H31NO7, 분자량은 433.50이며 구조식은 다음과 화학식 2와 같다.The chemical name is 2-morpholinoethyl (E) -6- (1,3-dihydro-4-hydroxy-6-methoxy-7-methyl-3-oxo-5-isobenzofranyl) -4-methyl-4-hexenoic acid, C 23 H 31 NO 7 , Molecular weight is 433.50 and the structural formula is as shown in the formula (2).

Figure 112005040693012-PAT00003
(화학식 2)
Figure 112005040693012-PAT00003
(Formula 2)

MPM은 주로 장, 콩팥 및 간 이식에 있어서 다기능성 면역억제제로 사용되고 있으나, 최근에는 이중 사슬 DNA에 대한 항체 생성으로 야기되는 전신성 홍반성 루푸스가 치료 후에도 6개월내 임상적 재발이 빈번한데 부신피질 호르몬제를 투여로 예방은 하지만 부작용이 있는 반면 MPM이 부신피질 호르몬제과 관련된 부작용 없이 임상적 재발을 예방할 수 있다는 보고가 있었다(한국과학기술정보연구원(KISTI, 해외과학기술동향, 2003.6.2. 의학). 이 처럼 이중 사슬 DNA에 대한 항체 농도의 상승 후에 MPM을 투여하여 환자들을 괴롭히지 않으면서 항이중 사슬 DNA 농도와 B 세포 활성도를 감소시키고, 전신성 홍반성 루푸스 환자의 임상적 재발의 발생을 예방할 수 있다는 최근 보고는 지속적인 임상 실험을 통하여 마이코페놀산의 다기능성 치료제로서의 가치가 폭발적으로 증가될 전망이 있음을 시사하고 있는 것이다.MPM is mainly used as a multifunctional immunosuppressive agent for intestinal, kidney and liver transplantation, but recently, systemic lupus erythematosus caused by antibody production against double-stranded DNA is frequently recurred within 6 months after treatment. While drug administration prevents but has side effects, it has been reported that MPM can prevent clinical recurrence without side effects associated with corticosteroids (KISTI, International Science and Technology Trends, 2003.6.2. After raising the antibody concentration to double-stranded DNA, MPM can be administered to reduce anti-double-stranded DNA concentration and B cell activity without bothering patients and to prevent the occurrence of clinical recurrence in patients with systemic lupus erythematosus. Recent reports show that mycophenolic acid as a multifunctional therapeutic has exploded through ongoing clinical trials. Which it would suggest that there is expected to be increased.

본 발명에서는 마이코페놀산 생성균주로서 Penicillium brevi-compactum 균주를 사용하는데, 바람직하게는 수탁기관에 기탁된 균주인 Penicillium brevi-compactum Dierckx ATCC46514을 사용한다. In the present invention, Penicillium brevi-compactum strains are used as mycophenolic acid producing strains, and Penicillium brevi -compactum Dierckx ATCC46514, which is a strain deposited in a depository, is used.

본 발명에 있어서 Penicillium brevi-compacticum 를 배양하기 위하여 동화 가능한 탄소원, 질소원 및 미량원소를 함유하는 배지를 사용한다. 본 발명의 질소원 중에서 마이코페놀산을 최적으로 생산하기위한 배지에 사용된 질소원으로서 무기 질소원 또는 유기 질소원을 사용할 수 있다. 바람직하게는 무기질소원으로서는 NH4NO3, KNO3, (NH4)2SO4, NH4Cl, 우레아(Urea)를 사용 할 수 있으며, 유기질소원으로서는 Nz-아민, 콩 단백질, 농축발효 옥수수 침출물, 면실박, 대두박, 탈지유, 펩톤, 쇠고기 추출물, 효모 추출물, 옥수수 글루텐 가루(Corn Gluten Meal; CGM), 카사미노산, 카세인을 사용할 수 있다. In the present invention, a medium containing an assimilable carbon source, nitrogen source and trace element is used to culture Penicillium brevi-compacticum . An inorganic nitrogen source or an organic nitrogen source can be used as the nitrogen source used in the medium for optimally producing mycophenolic acid among the nitrogen sources of the present invention. Preferably, as the inorganic nitrogen source, NH 4 NO 3 , KNO 3 , (NH 4 ) 2 SO 4 , NH 4 Cl, urea (Urea) can be used, and as the organic nitrogen source Nz-amine, soy protein, concentrated fermented corn leaching Water, cottonseed meal, soybean meal, skim milk, peptone, beef extract, yeast extract, Corn Gluten Meal (CGM), casamino acid, casein may be used.

Penicillium brevi-compacticum 의 배양 조건 중 배양액의 온도는 15°C 내지 22°C를 유지한다. 바람직하게는 배양액의 온도는 17°C 내지 22°C를 유지한다. 보다 바람직하게는 배양액의 온도는 19°C 내지 23°C를 유지한다. 가장 바람직하게는 배양액의 온도를 21°C 내지 22°C 로 유지한다. The culture temperature of the Penicillium brevi-compacticum is maintained at 15 ° C to 22 ° C. Preferably the temperature of the culture is maintained at 17 ° C to 22 ° C. More preferably, the temperature of the culture is maintained at 19 ° C to 23 ° C. Most preferably, the temperature of the culture is maintained at 21 ° C to 22 ° C.

이하 본 발명을 보다 구체적으로 이해할 수 있도록 실시예를 들어 설명한다. 그러나 다음의 실시예로써 본 발명의 취지를 제한하는 것은 아니다.Hereinafter, examples will be described so that the present invention can be understood in more detail. However, the following examples are not intended to limit the gist of the present invention.

<실시예 1> 마이코페놀산의 생산에 있어서 온도 최적화 실험 Example 1 Temperature Optimization Experiment in the Production of Mycophenolic Acid

본 발명의 실험에 있어서 사용된 기본적인 재료 및 방법은 다음과 같다. Basic materials and methods used in the experiments of the present invention are as follows.

본 발명에서 마이코페놀산을 생산하기 위하여 Penicillium brevi-compactum Dierckx ATCC 46514 균주를 사용하였다. 본 발명의 균주는 자낭균류에 속하는 푸른곰팡이로서 최초의 항생제인 페니실린을 생산하는 Penicillium chrysogenum과 같은 속에 속하는 진핵세포 미생물이다. 본 발명의 균주는 수탁번호에 의하여 기탁기관으로부터 용이하게 획득할 수 있다. Penicillium brevi -compactum Dierckx ATCC 46514 strain was used to produce mycophenolic acid in the present invention. The strains of the present invention are eukaryotic microorganisms belonging to the same genus as Penicillium chrysogenum , which produces penicillin, the first antibiotic as a blue mold belonging to the aspergillus fungi. The strain of the present invention can be easily obtained from the deposit institution by the accession number.

본 발명에 사용한 기본 배지 조성에 대하여, 포자형성 배지는 슈크로스 30g, NaNO3 2g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 0.01g 을 증류수 1L에 녹여 사용하였다. 생산 배지는 글루코스 120g, NH4NO3 5.2g, KH2PO4 5g, MgSO4·7H2O 0.997g, 효모 추출물 1g, 미량 원소 2mL을 증류수 1L에 녹여 사용하였다. For the basal medium composition used in the present invention, the spore-forming medium was dissolved in 30 g of sucrose, 2 g of NaNO 3 , 1 g of K 2 HPO 4 , 0.5 g of MgSO 4 · 7H 2 O, 0.5 g of KCl, and 0.01 g of FeSO 4 in 1 L of distilled water. Used. The production medium was used by dissolving 120 g of glucose, 5.2 g of NH 4 NO 3 , 5 g of KH 2 PO 4 , 0.997 g of MgSO 4 · 7H 2 O, 1 g of yeast extract, and 2 mL of trace elements in 1 L of distilled water.

본 발명의 기본 배양 조건으로 특별한 언급이 없으면 포자형성 배양은 항습기에서 27°C에서 9일 동안 실시하였고, 생산 배양은 진탕 배양기에서 각각의 온도에서 200rpm에서 7일 동안 실시하였다. Spore-forming cultures were carried out for 9 days at 27 ° C in a humidifier, and production culture was carried out for 7 days at 200 rpm at each temperature in a shaker unless otherwise specified as the basic culture conditions of the present invention.

분석 방법은 특별한 설명이 없으면 다음과 같은 방법과 장치를 이용하여 실시하였다. PMV (%)는 3,000 rpm에서 10분 동안 원심분리하여 분석하였다. 얇은 층 크로마토그래피(TLC) : 60F254 실리카 겔 유리판(Merck, 독일)을 사용하였다. 생물검정은 27°C에서 24시간동안 한천 플러그 방법을 이용하여 실시하였다. 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)의 경우에서는 용매로서 0.1M KH2PO4 : 아세토니트릴 (60:40)을 사용하였고, 칼럼은 C18 (150*4.6mm) 칼럼을 사용하였으며, UV 검출기(305nm)를 이용하여 마이코페놀산을 검출하였다. Unless otherwise specified, the analysis method was performed using the following method and apparatus. PMV (%) was analyzed by centrifugation at 3,000 rpm for 10 minutes. Thin layer chromatography (TLC): 60F254 silica gel glass plate (Merck, Germany) was used. Bioassay was performed using the agar plug method for 24 hours at 27 ° C. In the case of high performance liquid chromatography (HPLC), 0.1 M KH 2 PO 4 : acetonitrile (60:40) was used as a solvent, the column was a C 18 (150 * 4.6 mm) column, and a UV detector (305 nm). Mycophenolic acid was detected using.

온도 조건에 따라서 마이코페놀산의 생산성이 달라질 수 있으므로 온도별 마이코페놀산의 생산성을 비교하였다. 배양 온도를 각각 18℃, 23℃ (대조구), 28℃, 33℃ 로 하여서 실험을 실시하였으며 이를 표1에 나타내었고, 구체적 실험조건 및 방법은 표 아래 부분에 나타나 있다. Since the productivity of mycophenolic acid may vary depending on the temperature conditions, the productivity of mycophenolic acid for each temperature was compared. Experiments were carried out with the culture temperatures of 18 ° C., 23 ° C. (control), 28 ° C., and 33 ° C., respectively, and are shown in Table 1, and specific experimental conditions and methods are shown in the lower part of the table.

본 실험에 의한 결과 23°C에서 마이코페놀산이 215, 225, 220 mg/L로 가장 높게 생산되는 것으로 나타났으며, 18°C에서 198, 195, 197 mg/L 로 상당히 높은 수준으로 생산되는 것으로 나타났다. 15°C 에서도 또한 152, 162, 160 mg/L으로 나타나 23°C로부터 15°C 까지의 온도 감소에 의하여는 Penicillium brevi- compacticum Dierckx ATCC46514 균주의 마이코페놀산 생산능력이 급격하게 감소하지 않는 것으로 나타났다. 본 실험의 결과에 의하여 판단하여 볼 때 20°C, 21°C 및 22°C 부근에서도 마이코페놀산이 높은양으로 생산될 것으로 판단된다. The results showed that mycophenolic acid was the highest at 215, 225 and 220 mg / L at 23 ° C, and significantly higher at 198, 195 and 197 mg / L at 18 ° C. appear. At 15 ° C, 152, 162 and 160 mg / L also showed no significant decrease in mycophenolic acid production capacity of Penicillium brevi- compacticum Dierckx ATCC46514 by decreasing the temperature from 23 ° C to 15 ° C. . Judging from the results of this experiment, it is determined that mycophenolic acid is produced in a high amount even at around 20 ° C, 21 ° C and 22 ° C.

반면, 28°C 에서는 113, 110, 98 mg/L 로 23°C 이상에서의 온도의 증가에 의하여 균주의 마이코페놀산 생산능력이 급격하게 감소되는 것으로 나타났다. On the other hand, at 28 ° C, the mycophenolic acid production capacity of the strain was drastically decreased by increasing the temperature at 113, 110, 98 mg / L and above 23 ° C.

[표 1] 다양한 온도에서의 마이코페놀산 생산 결과Table 1 Results of Mycophenolic Acid Production at Various Temperatures

Figure 112005040693012-PAT00004
Figure 112005040693012-PAT00004

※기본 배지; Glucose 120g, NH4NO3 5.2g, KH2PO4 5g, MgSO4·7H2O 0.997g, 효모 추출물 1g, 미량원소2mL을 증류수 1L에 녹여 사용. 5g/L 유기 질소원의 첨가 ※ basic badge; 120 g of Glucose, 5.2 g of NH 4 NO 3 , 5 g of KH 2 PO 4 , 0.997 g of MgSO 4 · 7H 2 O, 1 g of yeast extract, 2 mL of trace elements are dissolved in 1 L of distilled water. Addition of 5 g / L Organic Nitrogen Source

※미량 원소 용액; FeSO4·7H2O 0.1g, CuSO4·5H2O 0.015, ZnSO4·7H2O 0.1g, MnSO4·4H2O 0.01g, (NH4)6Mo7O24·4H2O 0.0014g, 5N-HCl 1ml을 증류수 100mL에 녹여 사용※ Trace element solution; FeSO 4 · 7H 2 O 0.1g, CuSO 4 · 5H 2 O 0.015, ZnSO 4 · 7H 2 O 0.1g, MnSO 4 · 4H 2 O 0.01g, (NH 4) 6 Mo 7 O 24 · 4H 2 O 0.0014g , Dissolve 1 ml of 5N-HCl in 100 ml of distilled water

※배양 조건; 200rpm 진탕배양기 내에서 50ml/500ml-플라스크를 사용하여 7일 동안 배양. ※ cultivation conditions; Incubate for 7 days using a 50 ml / 500 ml-flask in a 200 rpm shake incubator.

본 발명에 의하여 Penicillium brevi-compactum 저온 배양 및 질소원 및 탄소원을 적정화 하여 경제적으로 마이코페놀산을 대량 생산할 수 있다. According to the present invention, it is possible to economically mass produce mycophenolic acid by optimizing Penicillium brevi-compactum low temperature culture and optimizing nitrogen and carbon sources.

Claims (3)

곰팡이 균주를 이용하여 하기 화학식 3의 마이코페놀산 및 이의 유도체를 생산하는 방법에 있어서,In the method for producing a mycophenolic acid and its derivatives of the formula (3) using a fungal strain,
Figure 112005040693012-PAT00005
(화학식 3)
Figure 112005040693012-PAT00005
(Formula 3) (여기에서 R1 은 메틸 또는 하이드록시메틸이고, R2는 하이드록시기 또는 아미노기이다.)(Wherein R 1 is methyl or hydroxymethyl and R 2 is a hydroxy or amino group.) 상기 균주로 Penicillium brevi-compactum을 이용하고, Penicillium brevi-compactum as the strain, 상기 균주가 동화 가능한 탄소원, 질소원 및 미량원소를 함유하는 배지에서 배양액의 온도를 15°C 내지 23°C 로 하는 것을 특징으로 하는 마이코페놀산 생산방법.Mycophenolic acid production method, characterized in that the temperature of the culture solution in the medium containing the assimilation carbon source, nitrogen source and trace elements 15 ° C to 23 ° C. 제 1 항에 있어서, 상기 마이코페놀산을 유도체화하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 마이코페놀산 유도체 생산방법.The method of claim 1, wherein the mycophenolic acid derivative production method according to claim 1, further comprising the step of derivatization of the mycophenolic acid. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 질소원은 NH4NO3, KNO3, (NH4)2SO4, NH4Cl, 유리아,Nz-아민, 콩 단백질, 농축발효 옥수수 침출물, 면실박, 대두박, 탈지유, 펩톤, 쇠고기 추출물, 효모 추출물, CGM, 카사미노산, 카세인으로 이루어진 그룹에서 하나 이상 선택되는 것을 특징으로 하는 마이코페놀산의 생산방법.The nitrogen source according to claim 1 or 2, wherein the nitrogen source is NH 4 NO 3 , KNO 3 , (NH 4 ) 2 SO 4 , NH 4 Cl, urea, Nz-amine, soy protein, concentrated fermented corn leachate, cottonseed meal, Soybean meal, skim milk, peptone, beef extract, yeast extract, CGM, casamino acid, casein production method of mycophenolic acid, characterized in that at least one selected from the group consisting of.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2008026883A1 (en) * 2006-08-29 2008-03-06 Chung Choung Buk Do Process for mass production of mycophenolic acid by using urea as nitrogen source

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