KR20060007978A - Assembly and method for culturing an organism - Google Patents

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Abstract

본 발명은 세포를 고농도로 배양할 수 있는 생물 배양 장치 및 방법에 관한 것이다. 본 발명의 생물 배양 장치 및 방법은 액체 배지 및 배양하고자 하는 세포를 수용한 생물 배양기를 요동시키며 세포를 배양하고, 그 세포 배양액을 생물 배양기 외부에 있는 하나 이상의 반투과성의 중공사막을 통과시키는 것을 특징으로 한다. The present invention relates to a biological culture apparatus and method capable of culturing cells at high concentration. The biological culture apparatus and method of the present invention are characterized by shaking a biological incubator containing a liquid medium and a cell to be cultured, culturing the cells, and passing the cell culture liquid through at least one semipermeable hollow fiber membrane outside the biological incubator. do.

생물 배양 장치, 중공사막, 생물 배양 방법Biological culture apparatus, hollow fiber membrane, biological culture method

Description

생물 배양 장치 및 방법{Assembly and Method for Culturing an Organism}Assemble and Method for Culturing an Organism

도 1은 세포 유지 장치인 중공사막 챔버가 생물 배양기 외부에 구비된 회전식 배지 교환 생물 배양 장치를 도시한 것이고,1 illustrates a rotating medium exchange bioculture apparatus in which a hollow fiber membrane chamber, which is a cell maintenance apparatus, is provided outside the bioculture apparatus.

도 2는 세포 유지 장치인 배지 교환 필터가 생물 배양기 내부에 구비된 웨이브 생물 배양 장치를 도시한 것이고,FIG. 2 illustrates a wave biological culture apparatus in which a medium exchange filter, which is a cell maintenance apparatus, is provided inside a biological incubator.

도 3은 본 발명에 따른 생물 배양 장치를 도시한 것이고,3 shows a biological culture apparatus according to the present invention,

도 4는 본 발명의 생물 배양 장치에 있어서 생물 배양기의 좌우 상하 요동을 나타내기 위한 모식도를 도시한 것이고, Figure 4 shows a schematic diagram for showing the left and right up and down fluctuations of the biological incubator in the biological culture apparatus of the present invention,

도 5는 본 발명의 생물 배양 장치와 회전식 배지 교환 생물 배양 장치에서의 세포 성장과 생존율 및 인터페론-베타의 생산성을 비교한 것이고,5 is a comparison of cell growth and survival rate and productivity of interferon-beta in the biological culture apparatus and the rotary medium exchange biological culture apparatus of the present invention,

도 6은 본 발명의 생물 배양 장치와 웨이브 생물 배양 장치에서의 세포 성장과 생존율 및 인터페론-베타의 생산성을 비교한 것이다.Figure 6 compares the cell growth and survival rate and the productivity of interferon-beta in the biological culture apparatus and wave organism culture apparatus of the present invention.

<주요 도면 부호에 대한 설명><Description of Major Reference Marks>

10 생물 배양기 20 배지탱크10 Biological incubator 20 Medium tank

30 챔버 31 중공사막30 chamber 31 hollow fiber membrane

40 수확 탱크40 harvest tanks

본 발명은 생물 배양 장치 및 방법에 관한 것이다. 구체적으로 본 발명은 배양하고자 하는 세포를 고농도로 배양할 수 있는 생물 배양 장치 및 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a biological culture apparatus and method. Specifically, the present invention relates to a biological culture apparatus and method capable of culturing cells to be cultured at high concentration.

유전공학, 생물공학의 발달로 인하여 최근에 세포 배양 기술에 대해서 상당한 관심이 집중되고 있다. 세포 배양은 치료, 연구, 진단 목적의 백신이나 항체 등의 단백질 또는 인터페론 등의 생리 활성 물질을 얻기 위하여 많이 이용되고 있다. Due to the development of genetic engineering and biotechnology, a great deal of attention has recently been focused on cell culture technologies. Cell culture is widely used to obtain proteins such as vaccines and antibodies for therapeutic, research, and diagnostic purposes, or bioactive substances such as interferon.

이러한 목적 물질을 대량으로 얻기 위하여 다양한 배양 방법과 배양 장치들이 개발되어 왔다. 세포의 대규모 배양 방법은 크게 회분식 배양 방법(batch culture), 유가식 배양 방법(fed-batch culture), 연속 배양 방법(continuous culture)으로 나눌 수 있다. 이 중에서 연속 배양 방법은 비교적 소규모의 생물 배양기(bioreactor)를 이용하여 대규모의 목적 물질을 장 시간에 걸쳐 생산할 수 있기 때문에 최근에 각광받고 있는 배양 방법이다. Various culture methods and culture apparatuses have been developed to obtain a large amount of these target substances. Large-scale cultivation methods of cells can be divided into batch culture (batch culture), fed-batch culture, continuous culture (continuous culture). Among these, the continuous culture method is a cultivation method that has been in the spotlight recently because a relatively small bioreactor can produce a large-scale target substance over a long time.

세포의 연속 배양 방법 중에 특히 배지 교환식 연속 배양 방법(continuous perfusion culture)은 회분식 및 유가식 배양 방법에 비해 여러 가지 장점을 갖는다. 즉 생산성이 높고 균질성 있는 품질의 목적 물질을 생산할 수 있고 안정된 생산 공정 및 우수한 세포 생리학적 조절이 가능한 점 등이 그것이다. 그러나 배지 교환식 연속 배양 방법의 장애 요인 중 한 가지는 적절한 세포 유지 장치(cell retention device)의 필요성이다. 세포 유지 장치는 세포와 배양액을 구분하기 위 해 설치한 물리적 분리장치로 여러 가지 방법들이 사용되고 있다. Among the continuous culture methods of the cells, in particular, the medium exchange continuous perfusion culture has several advantages over the batch and fed-batch culture methods. That is, it is possible to produce the target material of high productivity and homogeneous quality, stable production process and excellent cell physiological control. However, one of the obstacles of the medium exchange continuous culture method is the need for an appropriate cell retention device. The cell maintenance device is a physical separation device installed to distinguish between cells and culture medium, and various methods are used.

세포 유지 장치는 세포의 고농도 연속 배양에 있어서 가장 중요한 요소 중 하나인데, 이러한 세포 유지 장치가 가져야 할 필수 조건은, 첫째 생물 배양기 내의 세포의 유지 효율이 높아야 하고, 둘째 안정적인 장기 가동이 가능해야 하며, 셋째 장치가 세척, 멸균, 재사용이 가능해야 하고, 넷째 높은 세포 생존율을 유지하며 세포의 손상이나 세포의 물질 대사의 변화를 유발해서는 안 된다. 따라서 이들 조건을 잘 만족하는 세포 유지 장치의 사용이 세포 고농도 연속 배양에 있어서 핵심 기술이라고 할 수 있다.Cell maintenance devices are one of the most important elements in the continuous high concentration of cells.The essential conditions for these cell maintenance devices are: 1) high retention of cells in the bioincubator, 2) stable long-term operation, Third, the device should be washable, sterilized and reusable. Fourth, it should maintain high cell viability and not cause cell damage or changes in cell metabolism. Therefore, it can be said that the use of a cell maintenance device that satisfies these conditions is a key technology in continuous high concentration of cells.

이러한 세포 유지 장치는 생물 배양기 내부에 장착되거나 순환 튜브를 통해 그 외부에 연결시킬 수 있다. Such cell maintenance devices may be mounted inside the bio-incubator or connected to the outside via a circulation tube.

도 1에는 세포 유지 장치가 순환 튜브를 통하여 생물 배양기 외부에 연결된 종래의 생물 배양 장치가 도시되어 있다. 이는 세포 유지 장치로서 중공사막(Hollow Fiber) 챔버가 장착된 회전식 배지 교환 생물 배양 장치(stirred perfusion bioreactor)이다.1 shows a conventional biological culture apparatus in which a cell maintenance device is connected to the exterior of the biological incubator through a circulation tube. It is a rotary media exchange bioreactor equipped with a Hollow Fiber chamber as a cell maintenance device.

도 1에 도시된 바와 같이, 상기 회전식 배지 교환 생물 배양 장치에서는 배지 탱크(20)로부터 액체 배지가 연속적으로 생물 배양기(10)로 공급되고 생물 배양기(10)의 배양액은 순환 튜브(27;28)를 통해 반투과성의 중공사막 챔버(30)를 통과하게 되는데, 세포는 유지된 채, 분리 대상 목적 물질을 포함하는 투과액은 중공사막(31)의 공경을 통과하여 수확 탱크(40)로 회수되고, 세포를 포함하는 잔류액은 다시 생물 배양기(10)로 순환되게 된다. 생물 배양기의 내부에는 교반 날개(11)가 장착되어 있어서 세포 증식 및 성장에 필요한 산소를 전달하고 배지를 균일하게 유지한다.As shown in FIG. 1, in the rotary medium exchange bioculture apparatus, the liquid medium is continuously supplied from the medium tank 20 to the biological incubator 10, and the culture solution of the biological incubator 10 is circulated tube 27; 28. Through the semi-permeable hollow fiber membrane chamber 30 is passed through, while the cells are maintained, the permeate containing the target material to be separated is passed through the pore of the hollow fiber membrane 31 is recovered to the harvesting tank 40, Residue containing cells is circulated back to the biological incubator (10). The inside of the biological incubator is equipped with a stirring blade 11 to deliver oxygen necessary for cell growth and growth and to keep the medium uniform.

그러나 상기 회전식 배지 교환 생물 배양 장치는 세포 유지 장치로서 생물 배양기(10) 외부에 순환 튜브(27;28)를 통하여 연결된 중공사막 챔버(30)를 사용함으로써 단위 막 면적 당 여과시킬 수 있는 여과액이 많고, 여과액의 막힘 현상이 발생할 경우 중공사막 챔버(30)를 새로운 것으로 교체하여 사용할 수 있는 장점이 있지만, 교반 날개(11)를 사용함으로써 그것에 의한 물리적인 충격으로 사멸되는 세포가 발생하기 때문에 세포의 고농도 성장에 장애 요소가 되는 문제점이 있다.However, the rotatable medium exchange bioculture apparatus uses a hollow fiber membrane chamber 30 connected to the outside of the incubator 10 through a circulation tube 27; In many cases, there is an advantage that the hollow fiber membrane chamber 30 can be replaced with a new one when the clogging of the filtrate occurs, but since the cells are killed by the physical impact by using the stirring blade 11, There is a problem that is a barrier to growth of high concentration.

한편, 도 2에는 세포 유지 장치가 생물 배양기 내부에 구비된 생물 배양 장치가 도시되어 있다. 이것은 세포를 유지시키기에 적당한 공경을 가진 여과막을 지닌 배지 교환 필터(30)가 생물 배양기(10) 내부에 구비된 웨이브 생물 배양 장치(Wave Bioreactor)이다.Meanwhile, FIG. 2 shows a biological culture apparatus in which a cell maintenance device is provided inside the biological incubator. This is a Wave Bioreactor provided with a medium exchange filter 30 inside the biological incubator 10 with a filtration membrane having a suitable pore size to hold cells.

상기 웨이브 생물 배양 장치에서 상기 배지 교환 필터(30)는 생물 배양기(10)의 일부를 채우고 있는 액체 배지 위를 부유하면서 세포는 남겨두고 분리 대상 목적 물질을 포함하는 투과액만을 투과시킨다. 투과된 투과액은 수확 탱크(40)로 회수되게 된다. In the wave biological culture apparatus, the medium exchange filter 30 permeates only the permeate containing the target material to be separated while leaving the cells while floating on the liquid medium filling a part of the biological incubator 10. The permeate that has passed through is recovered to the harvesting tank 40.

그리고 상기 웨이브 생물 배양 장치에서는 생물 배양기(10)가 피벗점(13)을 중심으로 좌우에서 상하로 이동이 가능한 플래폼(12) 위에 안치되어 있는데, 생물 배양기(10)의 상하 운동시 배양액에는 파도가 생겨나고 결과적으로 산소 전달이 용이하여 세포 증식에 적합한 환경을 제공할 수 있는 장점을 지닌다. In the wave biological culture apparatus, the biological incubator 10 is placed on the platform 12 which is movable up and down from the left and right about the pivot point 13. It is generated and consequently has an advantage of providing an environment suitable for cell proliferation due to easy oxygen transfer.

또 상기 웨이브 생물 배양 장치는 그 생물 배양기가 일회용 백으로 구성될 수 있다는 것이다. 그러므로 세척과 멸균을 위한 추가 설비가 필요 없게 된다. 세척과 멸균에 추가 설비가 필요 없으므로 배양되는 규모에 비하여 소규모의 공간으로도 설치가능 하다는 장점이 있다. 또한 생물 배양기가 일회용이기 때문에 여러 종류의 세포주를 동일한 배양기로 배양할 때 발생할 수 있는 교차 오염을 방지할 수 있다는 장점도 있다. 한정된 배양 설비를 통해 여러 종류의 치료용 단백질 생산 세포주를 교체하며 배양할 경우 교차오염의 가능성이 있기 때문에 선진국에서는 1회 배양 종료 후에 세척 검증(Cleaning Validation)을 실시하도록 법규화 하고 있다. 이러한 세척 검증으로 생산 비용이 증가되고, 검증 기간 만큼의 배양 설비의 가동률이 떨어지게 된다. 일회용 세포 배양용 백의 교체만으로 세척 검증 없이 연이은 배양 공정을 실시할 수 있다.In addition, the wave biological culture device is that the bio-incubator may be composed of a disposable bag. Therefore, no additional equipment for cleaning and sterilization is needed. Since no additional equipment is required for cleaning and sterilization, it can be installed in a small space compared to the scale of culture. In addition, the bio-incubator is a disposable, it is also possible to prevent cross-contamination that can occur when incubating different cell lines in the same incubator. Because of the possibility of cross-contamination when cultivating and replacing various kinds of therapeutic protein-producing cell lines through limited culture facilities, developed countries are required to conduct cleaning validation after the completion of one culture. This cleaning verification increases production costs and lowers the utilization of the culture plant by the verification period. Subsequent culture processes can be carried out without washing verification by just replacing the disposable cell culture bag.

또한 일회용 백의 크기는 500ℓ까지 가능하여 대용량화의 문제가 없다는 것도 장점이다.In addition, the size of the disposable bag is possible up to 500ℓ is also an advantage that there is no problem of large capacity.

상술한 바의 장점에도 불구하고 웨이브 생물 배양 장치는 세포 유지 장치인 배지 교환 필터가 생물 배양기 내부에 구비됨으로써 연속 배양에서 1 x 107 cells/㎖ 이상의 고농도로 배양하기 쉽지 않은 단점을 지니고 있다. 그것은 생물 배양기 내부에 구비된 세포 유지 장치인 배지 교환 필터가 그 성능에 한계가 있어 세포의 고농도 배양에 필요한 적절한 배지 교환 속도를 감당할 수 없기 때문이다.Despite the above-mentioned advantages, the wave biological culture apparatus has a disadvantage in that it is not easy to culture at a high concentration of 1 x 10 7 cells / ml or more in continuous culture because the medium exchange filter, which is a cell maintenance device, is provided inside the biological incubator. This is because a medium exchange filter, which is a cell maintenance device provided inside a biological incubator, has a limit in its performance and cannot afford an appropriate medium exchange rate necessary for high concentration culture of cells.

본 발명은 상기 회전식 배지 교환 생물 배양 장치와 웨이브 생물 배양 장치 가 가지는 장점을 그대로 보유하면서도 상기 회전식 배지 교환 생물 배양 장치에서 생물 배양기에 구비된 교반 날개가 갖는 문제점을 해결하고, 또 상기 웨이브 생물 배양 장치에서 생물 배양기 내부에 구비된 세포 유지 장치가 갖는 문제점을 해결함으로써, 결과적으로 고농도의 세포 배양이 가능한 생물 배양 장치 및 그 방법을 제공한다.The present invention solves the problems of the stirring blade provided in the bioculture device in the rotating medium exchange bioculture apparatus while maintaining the advantages of the rotating medium exchange bioculture apparatus and the wave bioculture apparatus as it is, and the wave organism culture apparatus In order to solve the problems of the cell maintenance device provided in the biological incubator, as a result, it provides a biological culture apparatus and a method capable of culturing a high concentration of cells.

따라서 본 발명의 목적은 배양하고자 하는 세포를 고농도로 배양할 수 있는 생물 배양 장치를 제공하는데 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a biological culture apparatus capable of culturing cells to be cultured at high concentration.

본 발명의 또 다른 목적은 배양하고자 하는 세포를 고농도로 배양할 수 있는 생물 배양 방법을 제공하는데 있다.Still another object of the present invention is to provide a biological culture method capable of culturing cells to be cultured at high concentration.

본 발명은 일 측면에 있어, 배양하고자 하는 세포를 고농도로 배양할 수 있는 생물 배양 장치에 관한 것이다.In one aspect, the present invention relates to a biological culture apparatus capable of culturing cells to be cultured at high concentration.

본 발명의 생물 배양 장치는 The biological culture device of the present invention

(a) 액체 배지를 수용하여 세포를 배양하기 위한 생물 배양기, (a) a bioincubator for culturing cells by receiving liquid medium,

(b) 상기 생물 배양기가 안치되고 이를 요동시키기 위한 플랫폼, (b) a platform for placing and oscillating the bio-incubator,

(c) 상기 생물 배양기에서 생성된 세포 배양액을 이동시키기 위한 제1의 튜브, (c) a first tube for transferring the cell culture solution produced in the biological incubator,

(d) 일단부가 상기 제1의 튜브에 연결되어 있는 반투과성의 중공사막을 하나 이상 포함하며, 상기 중공사막의 외부 표면과의 사이에 일정 공간을 형성하는 내부 표면을 지님으로써 중공사막을 흐르는 세포 배양액에 함유된 분리 대상 목적 산물을 상기 일정 공간으로 투과시키기 위한 챔버, 및 (d) a cell culture fluid flowing through the hollow fiber membrane by having at least one semipermeable hollow fiber membrane having one end connected to the first tube and having an inner surface defining a predetermined space between the outer surface of the hollow fiber membrane A chamber for permeating the product to be separated contained in the predetermined space, and

(e) 일단부가 상기 중공사막의 타단부에 연결되어 있고 타단부가 상기 생물 배양기에 연결됨으로써 중공사막을 통과한 잔류액을 상기 생물 배양기로 이동시키기 위한 제2의 튜브를 포함하여 구성된다.(e) a second tube, one end of which is connected to the other end of the hollow fiber membrane and the other end of which is connected to the biological incubator, for moving the residual liquid that has passed through the hollow fiber membrane to the biological incubator.

상기에서 그리고 청구범위를 포함하는 이하에서, 상기 "세포"란 항체나 인터페론 등 생리 활성 물질을 분비하는 동물세포, 식물세포, 곤충세포, 박테리아 등 미생물 등을 모두 포함하는 의미로서 이해되어져야 한다. 그럼에도 바람직하게는 상기 세포란 동물세포를 의미한다.Above and below, including the claims, the "cell" is to be understood as including all microorganisms such as animal cells, plant cells, insect cells, bacteria, and the like which secrete physiologically active substances such as antibodies or interferons. Nevertheless preferably the cell means an animal cell.

본 발명의 생물 배양 장치에 있어, 생물 배양기에서 배양된 세포 배양액은 제1의 튜브를 통하여 하나 이상의 중공사막을 구비한 챔버로 이동하여 중공사막을 통과하게 되는데, 세포는 중공사막 내부에 보유된 채 배양액 중의 분리 대상 목적 물질은 반투과성의 중공사막을 통하여 챔버의 내부 공간으로 투과되어 이동하며, 세포를 포함한 나머지 잔류액은 제2의 튜브를 통하여 다시 생물 배양기로 순환하게 된다.In the biological culture apparatus of the present invention, the cell culture cultured in the biological incubator is moved to the chamber having one or more hollow fiber membranes through the first tube to pass through the hollow fiber membranes, while the cells are retained inside the hollow fiber membranes. The target material to be separated in the culture solution penetrates into the inner space of the chamber through the semipermeable hollow fiber membrane, and the remaining residual liquid including the cells is circulated back to the bio-incubator through the second tube.

본 발명의 생물 배양 장치는 상기 웨이브 생물 배양 장치와 다르게 세포 유지 장치인 중공사막을 구비한 챔버가 생물 배양기에 외부에 순환 튜브 즉 상기 제1 및 제2 튜브를 통하여 상기 생물 배양기에 연결됨으로써 전술한 바의 웨이브 생물 배양 장치가 가지는 문제점을 해결할 수 있으며, 또한 생물 배양기가 플랫폼 위에 안치되어 요동함으로써 전술한 바의 회전식 배지 교환 생물 배양 장치가 생물 배양 기 내에 교반 날개를 구비함으로써 가지는 문제점을 해결할 수 있다.In the biological culture apparatus of the present invention, unlike the wave biological culture apparatus, the chamber having a hollow fiber membrane, which is a cell holding apparatus, is connected to the biological incubator through a circulation tube, that is, the first and second tubes, outside the biological incubator. It is possible to solve the problem of the wave bioculture device of the bar, and also to solve the problem of the above-described rotary medium exchange bioculture device having a stirring blade in the bioculture device by swinging the bioculture device on the platform. .

본 발명의 생물 배양 장치에 있어서, 상기 생물 배양기는 플라스틱 등의 유연한 재질의 일회용 백으로 이루어진 것이 바람직하다. 그럴 경우 전술한 바의 웨이브 생물 배양 장치가 가지는 장점을 지닐 수 있다. 또한 상기 생물 배양기에 채워지는 액체 배지 및 배양되는 세포는 부분적으로 예컨대 생물 배양기 전체 부피의 20% 내지 70% 정도로 채워지는 것이 바람직하다.In the biological culture apparatus of the present invention, the biological incubator is preferably made of a disposable bag made of a flexible material such as plastic. If so, it may have the advantages of the wave biological culture apparatus as described above. It is also preferred that the liquid medium and the cells to be cultured that are filled in the bioincubator are partially filled, for example, at about 20% to 70% of the total volume of the bioincubator.

또 본 발명의 생물 배양 장치에 있어서, 플랫폼이 그 위에 안치되는 상기 생물 배양기를 요동시키게 되는데, 이 때 이러한 요동은 생물 배양기를 좌우에서 상하로 요동시키는 방식으로 이루어지는 것이 바람직하다. 그럼으로써 기타의 요동 방식에 비하여 배지 내로 산소의 공급을 원활히 할 수 있고, 불필요한 기공의 생성을 방지하여 그러한 기공의 물리적 충격에 의한 세포의 사멸을 예방할 수 있다.In addition, in the biological culture apparatus of the present invention, the platform is rocking the biological incubator is placed thereon, wherein the shaking is preferably made in such a manner that the biological incubator is swinging from side to side. As a result, the supply of oxygen into the medium can be more smoothly compared to other oscillation methods, and the formation of unnecessary pores can be prevented, thereby preventing the death of cells due to the physical impact of such pores.

또 본 발명의 생물 배양 장치에 있어서, 상기 하나 이상의 중공사막을 구비한 챔버는 교체될 수 있도록 설치되는 것이 바람직하고, 또 일회용인 것이 바람직하다. 그럼으로써 전술한 바의 회전식 배지 교환 생물 배양 장치가 가지는 장점을 그대로 보유할 수 있다.In the biological culture apparatus of the present invention, the chamber with one or more hollow fiber membranes is preferably installed so as to be replaced, and is preferably disposable. As a result, the advantages of the rotating medium exchange bioculture apparatus as described above can be retained.

또 본 발명의 생물 배양 장치에 있어서, 상기 챔버 내의 중공사막은 배양액의 흐름을 원활히 하여 배지의 교환 속도를 적당히 유지할 수 있도록 충분한 수의 다발로 형성되는 것이 바람직하며, 적어도 3개 이상의 다발로 형성되는 것이 바람직하다. 여기서 당업자라면 자신의 통상의 능력을 활용하는 한 배양되는 규모 등에 비추어 구체적으로 본 발명의 생물 배양 장치를 이용할 때 상기 충분한 수가 어느 정도인가를 결정할 수 있을 것이다.In addition, in the biological culture apparatus of the present invention, the hollow fiber membrane in the chamber is preferably formed of a sufficient number of bundles to smoothly flow the culture solution to maintain a medium exchange rate, it is formed of at least three bundles It is preferable. Here, those skilled in the art will be able to determine, in view of the scale to be cultured, as long as they utilize their usual ability, specifically, how much of the above sufficient number is used when using the biological culture device of the present invention.

그리고 본 발명의 생물 배양 장치에 있어서, 상기 챔버 내의 중공사막은 중력 방향(즉 수직 방향)으로 설치되는 것이 바람직하다. 중공사막이 중력 방향으로 설치될 경우 수평 방향으로 설치되는 경우에 비하여 배양액의 흐름이 원활해질 수 있는 효과가 있다.In the biological culture apparatus of the present invention, the hollow fiber membrane in the chamber is preferably provided in the direction of gravity (that is, in the vertical direction). When the hollow fiber membrane is installed in the gravity direction, there is an effect that the flow of the culture solution can be smoothed as compared with the case installed in the horizontal direction.

상기 챔버 내의 중공사막이 이처럼 중력 방향으로 설치될 경우 상기 중공사막은 중력 하에서 배양액의 바람직한 유속을 가능하게 하는 직경:길이의 비율을 갖는 것이 바람직하다. 당업자라면, 배양되는 세포의 종류, 즉 배양되는 세포가 동물세포인가, 또는 식물세포인가, 또는 곤충세포 등인가 따라, 그리고 분리 대상 목적 물질의 분자량 등에 따라 중공사막을 통과하는 배양액의 바람직한 유속을 가능하게 하는 길이:직경 비율을 결정할 수 있을 것이다.When the hollow fiber membrane in the chamber is installed in the direction of gravity, the hollow fiber membrane preferably has a ratio of diameter: length to enable a desirable flow rate of the culture medium under gravity. Those skilled in the art can provide a desirable flow rate of the culture medium through the hollow fiber membrane depending on the type of cells to be cultured, that is, the cells to be cultured are animal cells, plant cells, insect cells, or the like, and the molecular weight of the target substance to be separated. The length to diameter ratio can be determined.

일반적으로는 직경이 0.25 내지 3mm이고 길이가 30 내지 115cm인 중공사막이 사용되므로 직경:길이의 비율은 약 1: 80 내지 1: 600 정도인 것이 바람직하다. In general, since a hollow fiber membrane having a diameter of 0.25 to 3 mm and a length of 30 to 115 cm is used, the ratio of diameter to length is preferably about 1:80 to 1: 600.

본 발명의 생물 배양 장치에서, 중공사막은 반투과성을 지닌 물질로 이루어지는데, 중공사막에 사용될 수 있는 반투과성의 물질로는 폴리 술폰(polysulfone)이나 변형 폴리 술폰, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리아미드, 폴리아크릴니트릴(polyacrylnitrile), 나이론, 폴리비닐리딘 플루오라이드(polyvinyledine fluoride), 셀룰로오스 아세테이트(cellulose acetate), 아크릴 공중합체(acrylic copolymer), 셀룰로오스 유도체 등을 들 수 있다.In the biological culture apparatus of the present invention, the hollow fiber membrane is made of a semipermeable material, and the semipermeable material that can be used for the hollow fiber membrane is polysulfone or modified polysulfone, polyethylene, polypropylene, polyamide, polyacryl. Nitrile (polyacrylnitrile), nylon, polyvinyledine fluoride, cellulose acetate, acrylic copolymer, cellulose derivatives, and the like.

상기 중공사막은 배양되는 세포의 종류나 분리 대상 목적 물질에 따라 적당 한 크기의 공경을 가지는 것이 바람직하며, 만일 배양되는 세포가 동물세포라면 상기 공경의 크기는 0.1 내지 0.65㎛의 범위가 될 것이다.The hollow fiber membrane preferably has a pore size of suitable size according to the type of cell to be cultured or the target material to be separated. If the cell to be cultured is an animal cell, the pore size will be in the range of 0.1 to 0.65 μm.

한편, 본 발명의 생물 배양 장치는 상기 생물 배양기에 연결되어 생물 배양기에 연속적으로 배지를 공급할 수 있는 배지 탱크를 추가로 포함할 수 있으며, 또한 상기 챔버에 연결되어 상기 중공사막을 투과한 투과액을 회수하기 위한 수확 탱크를 추가로 포함할 수 있다.On the other hand, the biological culture apparatus of the present invention may further include a medium tank which is connected to the biological incubator and can continuously supply the medium to the biological incubator, and further connected to the chamber to pass through the hollow fiber membrane permeate solution It may further comprise a harvesting tank for recovery.

또한 본 발명의 생물 배양 장치는 생물 배양기에 공급되는 액체 배지의 부피를 제어할 수 있는 제어 시스템을 추가로 포함할 수 있다. 그럼으로써 생물 배양기에 채워지는 액체 배지의 부피를 일정하게 유지할 수 있다.In addition, the biological culture apparatus of the present invention may further include a control system capable of controlling the volume of the liquid medium supplied to the biological incubator. This allows the volume of the liquid medium to be filled in the bioincubator to be kept constant.

이러한 제어 시스템은 배지 탱크 및 수확 탱크에 있는 액체 배지나 회수된 투과액의 양을 감지할 수 있는 무게 센서와, 이러한 무게 센서의 신호를 받아 배지 탱크에서 생물 배양기로 액체 배지를 공급하는 공급 펌프를 작동시킬 수 있고 또 생물 배양기에서 챔버로 세포배양액을 배출시키거나 챔버에서 수확 탱크로 투과액을 배출시키는 배출 펌프를 작동시킬 수 있는 제어 장치로 구성된다. 배지 탱크에서 생물 배양기로 공급되는 액체 배지의 양이 수확 탱크로 회수되는 투과액의 양보다 적을 경우 무게 센서가 이를 감지하여 제어 장치에 전달하게 되면 제어 장치는 공급 펌프를 작동시켜 생물 배양기로 공급되는 액체 배지의 양을 증가시키게 되고, 그 반대의 경우는 배출 펌프를 작동시켜 투과액의 양을 증가시키게 된다.The control system includes a weight sensor capable of detecting the amount of liquid medium or recovered permeate in the medium tank and harvest tank, and a feed pump that receives the signal from the weight sensor and supplies the liquid medium from the medium tank to the bioincubator. And a control device capable of operating and operating a discharge pump for discharging the cell culture liquid from the bioculture to the chamber or for discharging the permeate from the chamber to the harvesting tank. If the amount of liquid medium supplied from the medium tank to the bioreactor is less than the amount of permeate recovered to the harvesting tank, the weight sensor detects this and delivers it to the control device. The amount of liquid medium is increased, and vice versa, the discharge pump is operated to increase the amount of permeate.

한편, 본 발명은 다른 측면에 있어서, 배양하고자 하는 세포를 고농도로 배 양할 수 있는 생물 배양 방법에 관한 것이다. On the other hand, in another aspect, the present invention relates to a biological culture method capable of culturing cells to be cultured at a high concentration.

본 발명의 생물 배양 방법은 The biological culture method of the present invention

(a) 생물 배양기에 액체 배지를 부분적으로 채우는 단계;(a) partially filling the biological incubator with liquid medium;

(b) 상기 액체 배지에 배양하고자 하는 세포를 접종시키는 단계;(b) inoculating the cells to be cultured in the liquid medium;

(c) 상기 생물 배양기를 요동시키며 세포를 배양하는 단계;(c) shaking the biological incubator and culturing the cells;

(d) 상기 배양된 배양액을 상기 생물 배양기 외부에 있는 하나 이상의 반투과성의 중공사막으로 통과시키는 단계; 및(d) passing the cultured culture medium through one or more semipermeable hollow fiber membranes external to the biological incubator; And

(e) 상기 중공사막을 통과한 잔류액을 생물 배양기로 이동시키는 단계를(e) transferring the residual liquid that has passed through the hollow fiber membrane to a biological incubator

포함하여 구성된다.It is configured to include.

본 발명의 생물 배양 방법에는, 상기 본 발명의 생물 배양 장치에서 상술한 바의 바람직한 양태들이 적용가능한 한 필요한 변형을 통하여 그대로 적용되는 것으로 간주되어진다.In the biological culture method of the present invention, it is considered that the preferred embodiments described above in the biological culture device of the present invention are applied as it is through the necessary modifications as applicable.

그러므로 상기 생물 배양기는 플라스틱 등의 유연한 재질의 일회용 백으로 이루어지는 것이 바람직하고, 생물 배양기를 요동시킬 때 이러한 요동은 생물 배양기를 좌우에서 상하로 요동시키는 방식으로 이루어지는 것이 바람직하며, 상기 중공사막은 배양액의 흐름을 원활히 하여 배지의 교환 속도를 적당히 유지할 수 있도록 충분한 수의 다발로 형성되는 것이 바람직하고, 또 중력 방향으로 배치되는 것이 바람직하다.Therefore, the biological incubator is preferably made of a disposable bag made of a flexible material such as plastic, and when the biological incubator is shaken, the shaking is preferably performed in a manner of swinging the biological incubator from side to side, and the hollow fiber membrane of the culture medium It is preferable to form a sufficient number of bundles so that the flow can be smoothly maintained to maintain the exchange rate of the medium appropriately, and it is preferable to be arranged in the direction of gravity.

또한 상기 중공사막이 중력 방향으로 배치될 경우 그 중공사막은 중력 하에서 배양액의 바람직한 유속을 가능하게 하는 직경:길이의 비율을 갖는 것이 바람직 하며, 그 직경:길이의 비율은 약 1:80 내지 1:600 정도인 것이 바람직하다.In addition, when the hollow fiber membrane is disposed in the direction of gravity, the hollow fiber membrane preferably has a diameter: length ratio that enables a preferable flow rate of the culture medium under gravity, and the diameter: length ratio is about 1:80 to 1: 1. It is preferable that it is about 600.

또한 상기 중공사막은 폴리 술폰이나 변형 폴리 술폰, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리아미드, 폴리아크릴니트릴, 나이론, 폴리비닐리딘 플루오라이드, 셀룰로오스 아세테이트, 아크릴 공중합체, 셀룰로오스 유도체 등으로 이루어지는 것이 바람직하고, 배양되는 세포의 종류나 분리 대상 목적물의 종류에 따라 적당한 크기의 공경을 가지는 것이 바람직하다.In addition, the hollow fiber membrane is preferably made of polysulfone or modified polysulfone, polyethylene, polypropylene, polyamide, polyacrylonitrile, nylon, polyvinylidene fluoride, cellulose acetate, acrylic copolymer, cellulose derivative, and the like. It is desirable to have a pore size of suitable size depending on the type of cells or the kind of target object to be separated.

또한 본 발명의 생물 배양 방법은 생물 배양기에 액체 배지를 연속적으로 공급하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있고, 또 중공사막을 투과한 투과액을 회수하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.In addition, the biological culture method of the present invention may further include the step of continuously supplying the liquid medium to the biological incubator, and may further include the step of recovering the permeate passed through the hollow fiber membrane.

또한 본 발명의 생물 배양 방법은 생물 배양기에 공급되는 액체 배지의 양이나 회수되는 투과액의 양을 제어하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.In addition, the biological culture method of the present invention may further comprise the step of controlling the amount of liquid medium supplied to the biological incubator or the amount of permeate recovered.

이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described with reference to the accompanying drawings. However, the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예의 설명에서는 상기 도 1의 회전식 배지 교환 생물 배양 장치 및 도 2의 웨이브 생물 배양 장치와 동일한 구성 요소에 대해서는 편의상 동일한 부호를 사용한다.In the description of the embodiment, the same reference numerals are used for the same components as those of the rotary medium exchange organism culturing apparatus of FIG. 1 and the wave organism culturing apparatus of FIG. 2.

도 3에 도시된 바와 같이, 본 발명의 생물 배양 장치는 주요하게는 액체배지를 수용하여 세포를 배양하기 위한 생물 배양기(10), 상기 생물 배양기(10)에 공급되는 액체 배지를 수용하기 위한 배지 탱크(20), 상기 생물 배양기(10)로부터 이동 된 배양액이 통과하는 중공사막(31)이 구비된 챔버(30), 상기 챔버(30)의 내부 표면과 중공사막(31)의 외부 표면 사이에 형성된 챔버의 내부 공간(33)으로 투과된 분리 대상 목적 물질을 포함하는 투과액을 회수하기 위한 수확 탱크(40)로 구성되어 있다.As shown in Figure 3, the biological culture apparatus of the present invention is a medium for receiving a liquid medium supplied to the biological incubator 10, the biological incubator 10, mainly for receiving the liquid medium and culture the cells Between the tank 20, the chamber 30 having the hollow fiber membrane 31 through which the culture liquid moved from the bio-incubator 10 passes, and between the inner surface of the chamber 30 and the outer surface of the hollow fiber membrane 31. It consists of the harvesting tank 40 for collect | recovering the permeate containing the target object of separation permeate | transmitted to the internal space 33 of the formed chamber.

위 생물 배양기(10), 배지 탱크(20), 챔버(30) 및 수확 탱크(40)는 유연한 재질의 플라스틱으로 이루어진 튜브(26; 27; 28; 29)로 연결되어 있다. The biological incubator 10, the medium tank 20, the chamber 30, and the harvest tank 40 are connected by tubes 26; 27; 28; 29 made of a flexible plastic material.

도 2에서 실선의 화살표는 액체 배지 또는 배양액의 흐름 방향을 표시한 것이며 점선의 화살표는 투과액의 흐름 방향을 표시한 것이다.In FIG. 2, the solid arrows indicate the flow direction of the liquid medium or the culture medium, and the dashed arrows indicate the flow direction of the permeate.

액체 배지가 배지 탱크(20)에서 생물 배양기(10)로 공급되면 생물 배양기(10)에서는 그 액체 배지를 영양분으로 하여 세포가 증식하게 된다. 증식된 세포를 포함하는 배양액은 챔버(30)로 이동하여 챔버(30) 내의 중공사막(31)의 내부를 통과하게 된다. 중공사막(31)은 적당한 크기의 공경을 지닌 물질로 이루어져 있기 때문에 세포는 중공사막(31)을 통과하지 못하지만 분리 대상 목적물은 중공사막(31)을 통과하여 챔버의 내부 공간(33)으로 이동하게 된다. 챔버의 내부 공간(33)에 있는 분리 대상 목적물을 포함하는 투과액은 수확 탱크(40)로 회수되고, 중공사막(31)을 흘러 내린 잔류액은 생물 배양기(10)로 순환한다. When the liquid medium is supplied from the medium tank 20 to the biological incubator 10, the biological incubator 10 uses the liquid medium as nutrients to proliferate the cells. The culture medium containing the proliferated cells moves to the chamber 30 and passes through the inside of the hollow fiber membrane 31 in the chamber 30. Since the hollow fiber membrane 31 is made of a material having a pore size of appropriate size, the cells do not pass through the hollow fiber membrane 31, but the object to be separated passes through the hollow fiber membrane 31 and moves to the internal space 33 of the chamber. do. The permeate containing the object to be separated in the internal space 33 of the chamber is recovered to the harvesting tank 40, and the residual liquid flowing down the hollow fiber membrane 31 is circulated to the bio-incubator 10.

본 발명의 생물 배양 장치에서 생물 배양기(10)는 플라스틱 등의 유연한 물질로 이루어져 있고, 생물 배양기(10) 전체 부피의 20 % 내지 70%가 액체 배지 및 세포로 채워져 있다. 생물 배양기(10)의 나머지 부분(11)은 가스로 채워져 있다. 세포 증식 또는 성장에 필요한 산소 등의 기체는 주입 필터(14)를 통하여 생물 배 양기(10)로 공급되며, 세포 증식 또는 성장시 발생한 이산화탄소 등의 기체는 배기 필터(15)를 통하여 외부로 배출된다. 상기 주입 필터(14)와 배기 필터(15)는 생물 배양기(10) 내부의 세포가 밖으로 유출되거나 외부의 미생물이 감염되지 않도록 구성되어 있다. In the biological culture apparatus of the present invention, the biological incubator 10 is made of a flexible material such as plastic, and 20% to 70% of the total volume of the biological incubator 10 is filled with liquid medium and cells. The remaining part 11 of the bioincubator 10 is filled with gas. Gas such as oxygen necessary for cell proliferation or growth is supplied to the biological incubator 10 through the injection filter 14, and gas such as carbon dioxide generated during cell proliferation or growth is discharged to the outside through the exhaust filter 15. . The injection filter 14 and the exhaust filter 15 are configured so that the cells inside the biological incubator 10 are not leaked out or the external microorganisms are infected.

생물 배양기(10)은 플랫폼(12) 위에 안정적으로 안치되며 플랫폼(12)은 피벗점(pivot point)(13)에 좌우 상하로 요동할 수 있도록 연결되어 있다. The biological incubator 10 is stably settled on the platform 12, and the platform 12 is connected to the pivot point 13 so as to swing left and right and up and down.

도 4에는 플랫폼 위에 안치된 생물 배양기(10)가 피벗점(13)을 중심으로 좌우 상하로 어떻게 요동하고 있는가를 보여주고 있다.4 shows how the biological incubator 10 placed on the platform swings left and right up and down about the pivot point 13.

전술하였지만, 위 생물 배양기(10)는 배지 탱크(20)로부터 공급 튜브(26)를 통하여 공급 펌프(21)에 의해 액체 배지를 계속적으로 공급받을 수 있다.As described above, the biological incubator 10 may be continuously supplied to the liquid medium by the supply pump 21 through the supply tube 26 from the medium tank 20.

생물 배양기(10)에서 세포가 액체 배지를 영양분으로 하여 배양되게 되면, 배양액은 제1의 배출 펌프(22)에 의하여 제1의 배출 튜브(27)를 통하여 중공사막(31)이 구비된 챔버(30)로 이동하게 된다.When the cells are cultured using the liquid medium as the nutrients in the biological incubator 10, the culture medium is provided with a chamber in which the hollow fiber membrane 31 is provided through the first discharge tube 27 by the first discharge pump 22 ( Go to 30).

도 3에 도시되어 있는 바와 같이 챔버(30)는 3개의 중공사막(31)을 구비하고 있고, 네개의 포트(port)(34; 35; 36; 37)가 형성되어 있으며, 중공사막(31)의 외부 표면과 챔버(30)의 내부 표면 사이에는 일정한 내부 공간(33)이 형성되어 있다.As shown in FIG. 3, the chamber 30 includes three hollow fiber membranes 31, four ports 34; 35; 36; 37 are formed, and the hollow fiber membranes 31 are formed. A constant inner space 33 is formed between the outer surface of the chamber and the inner surface of the chamber 30.

챔버(30)로 이동된 배양액은 상부 포트(34)에서 세개의 중공사막(31)의 내부(32)으로 나누어져 흐르게 된다. The culture solution moved to the chamber 30 flows into the interior 32 of the three hollow fiber membranes 31 at the upper port 34.

중공사막(31)은 일반적으로 그 직경이 0.25 내지 3mm이고 그 길이는 30 내지 115cm이다. 중공사막(31)은 중공사막(31)의 내부 표면에 대한 배양액의 접촉 시간 이나 배양액의 유속 등을 고려하여 그 직경과 길이 결정되는 것이 바람직하다. 이러한 관점에서 중공사막(31)의 직경:길이의 비율은 약 1:80 내지 1:600 정도인 것이 바람직하다.The hollow fiber membrane 31 generally has a diameter of 0.25 to 3 mm and a length of 30 to 115 cm. The hollow fiber membrane 31 is preferably determined in diameter and length in consideration of the contact time of the culture medium to the inner surface of the hollow fiber membrane 31, the flow rate of the culture solution, and the like. From this point of view, the diameter: length ratio of the hollow fiber membrane 31 is preferably about 1:80 to 1: 600.

본 발명의 생물 배양 장치에서 중공사막(31)은 챔버(30) 내부에서 중력 방향으로 구비되어 있는데, 이는 배양액을 원활히 흐르게 하고 세포의 퇴적을 방지하기 위해서이다. In the biological culture apparatus of the present invention, the hollow fiber membrane 31 is provided in the direction of gravity in the chamber 30, in order to smoothly flow the culture solution and prevent the deposition of cells.

중공사막(31)은 중공사막(31)을 통과하는 배양액 속에 함유된 세포가 부착하지 않고, 공경을 가지고 있는 반투과성 필름이면 어떠한 재질의 필름이든 사용할 수 있다. 그러한 재질로서는 예컨대, 폴리 술폰이나 변형 폴리 술폰, 폴리에틸렌, 나이론, 폴리비닐리딘 플루오라이드, 셀룰로오스 아세테이트, 아크릴 공중합체, 셀룰로오스 유도체 등을 들 수 있다.The hollow fiber membrane 31 may be a film of any material as long as the cells contained in the culture medium passing through the hollow fiber membrane 31 do not adhere and have semi-permeable films having a pore size. Examples of such a material include polysulfone, modified polysulfone, polyethylene, nylon, polyvinylidene fluoride, cellulose acetate, acrylic copolymer, cellulose derivative and the like.

중공사막(31)은 배양하는 세포의 종류나 분리 대상 목적물의 분자량 등을 고려하여 적당한 크기의 공경을 가지는 반투과성 필름을 사용할 수 있는데, 그러한 공경의 크기는 일반적으로 0.1 내지 0.7㎛인 것이 바람직하고, 0.2 내지 0.65㎛인 것이 더 바람직하다.The hollow fiber membrane 31 may be a semi-permeable film having a pore size of a suitable size in consideration of the type of cells to be cultured, the molecular weight of the target object to be separated, and the like. It is more preferable that it is 0.2-0.65 micrometer.

중공사막(31)은 세포를 유지함과 동시에 분리 대상 목적물은 공경을 통하여 챔버(30)의 내부 공간(33)으로 투과되도록 하는 작용을 한다.The hollow fiber membrane 31 maintains the cells and at the same time serves to separate the object to be separated into the internal space 33 of the chamber 30 through the pore size.

중공사막(31)을 통과한 잔류액은 하부 포트(35)를 통해 챔버(30)에서 배출되어 생물 배양기(10)로 이동되며, 중공사막(31)을 관통한 분리 대상 목적물을 포함하는 투과액은 챔버(30)의 내부 공간(33)에서 하부 측면 포트(37)를 통하여 수확 탱크(40)로 회수되게 된다.The residual liquid that has passed through the hollow fiber membrane 31 is discharged from the chamber 30 through the lower port 35 and moved to the biological incubator 10, and a permeate containing a target object to be separated through the hollow fiber membrane 31. Is recovered to the harvesting tank 40 through the lower side port 37 in the interior space 33 of the chamber 30.

한편, 챔버(30)에 형성된 네개의 포트 중 측면 상부 포트(36)는 세포의 고농도 연속 배양과 투과액의 원활한 흐름을 위해서 막는 것이 바람직하며, 도시되어 있지는 않지만 측면 하부 포트(37)에는 투과액의 유속을 제어하기 유속 제어기가 설치될 수 있다. On the other hand, of the four ports formed in the chamber 30, the side upper port 36 is preferably blocked for high concentration continuous culture of cells and smooth flow of the permeate, and although not shown, the permeate solution is provided in the side lower port 37. To control the flow rate of the flow rate controller can be installed.

한편, 생물 배양기(10)가 장시간 운행될 경우 등에는 생물 배양기(10)의 배양액의 양을 일정하게 유지할 필요가 있다. 이는 배지 탱크(20)에서 공급되는 액체 배지의 양과 수확 탱크(40)로 회수되는 투과액의 양을 감지하여 회수된 투과액의 양 만큼 액체 배지를 공급해줌으로써 가능해진다.On the other hand, when the biological incubator 10 is operated for a long time, it is necessary to keep the amount of the culture medium of the biological incubator 10 constant. This is possible by sensing the amount of the liquid medium supplied from the medium tank 20 and the amount of the permeate recovered to the harvesting tank 40 and supplying the liquid medium by the amount of the recovered permeate.

도 3에 도시된 바와 같이, 이러한 제어 시스템은 배지 탱크(20)와 수확 탱크(40)에 연결되어 있는 무게 센서(50)와 이러한 무게 센서(50)에 연결되고, 공급 펌프(21), 제1의 배출 펌프(22) 및 제2의 배출 펌프(23)에 연결된 제어 장치(60)로 구성된다. 무게 센서(50)가 수확 탱크(40)에 회수된 투과액의 양과 배지 탱크(20)에서 공급된 액체 배지의 양의 불균형을 감지하게 되면, 제어 장치(60)에서 그러한 불균형을 상쇄할 수 있도록 공급 펌프(21) 또는/및 제1과 제2의 배출 펌프(22; 23)를 작동시키게 된다. 예컨대, 수확 탱크(40)에 회수된 투과액의 양이 배지 탱크(20)에서 생물 배양기(10)로 공급된 액체 배지의 양을 초과하게 되면 제어 장치(60)가 공급 펌프(21)를 작동시켜 생물 배양기로 공급되는 액체 배지의 유속을 높이게 되고, 반대로 배지 탱크(20)에서 생물 배양기(10)로 공급되는 액체 배지의 양 보다 수확 탱크(40)로 회수되는 투과액의 양이 작을 경우에는 제어 장치(60)가 제1 과 제2의 배출 펌프(22; 23)를 작동시켜 수확 탱크(40)로 회수되는 투과액의 유속을 높이게 된다.As shown in FIG. 3, this control system is connected to the weight sensor 50, which is connected to the discharge tank 20 and the harvesting tank 40, to the weight sensor 50, and to the feed pump 21, Control device 60 connected to the first discharge pump 22 and the second discharge pump 23. If the weight sensor 50 detects an imbalance between the amount of permeate recovered in the harvest tank 40 and the amount of liquid medium supplied from the medium tank 20, the control device 60 can compensate for such an imbalance. The feed pump 21 and / or the first and second discharge pumps 22 and 23 are operated. For example, when the amount of permeate recovered in the harvesting tank 40 exceeds the amount of liquid medium supplied from the medium tank 20 to the biological incubator 10, the control device 60 operates the feed pump 21. In this case, the flow rate of the liquid medium supplied to the biological incubator is increased, and conversely, when the amount of the permeate recovered from the medium tank 20 to the harvesting tank 40 is smaller than the amount of the liquid medium supplied to the biological incubator 10. The control device 60 operates the first and second discharge pumps 22 and 23 to increase the flow rate of the permeate recovered to the harvesting tank 40.

또한 상기 제어 시스템은 공급 펌프(21)와 배출 펌프(22;23)를 작동시켜 배양되는 세포나 분리 대상 목적물에 적합하게 유속을 조절하기 위해서 사용될 수도 있다.The control system may also be used to operate the feed pump 21 and the discharge pumps 22; 23 to adjust the flow rate to suit the cells to be cultured or the target of separation.

이하 상기 본 발명의 생물 배양 장치를 이용하여 세포를 배양할 경우에 전술한 바의 회전식 배지 교환 생물 배양 장치와 웨이브 생물 배양 장치에 비하여 어떠한 효과가 있는가를 비교예를 통하여 설명한다.Hereinafter, when the cells are cultured using the biological culture apparatus of the present invention, the effects of the above-described rotary medium exchange biological culture apparatus and wave biological culture apparatus will be described through comparative examples.

<비교예 1> 회전식 배지 교환 생물 배양 장치와 본 발명의 생물 배양 장치에서의 세포 성장의 비교 Comparative Example 1 Comparison of Cell Growth in the Rotating Medium Exchange Bioculture Apparatus and the Bioculture Apparatus of the Present Invention

먼저 기존의 7.5 ℓ 용량의 생물 배양기(Celligen Plus, NBS 사)에 중공사막 챔버를 장착하여 도 1의 회전식 배지 교환 생물 배양 장치를 제작하여 연속배양을 실시하였다. 인터페론 베타를 생산하도록 형질전환된 중국 햄스터 난소(CHO) 세포를 α-MEM(Gibco사) 배지에 10%의 소태아 혈청(FBS, Hyclone사)이 포함된 배지를 사용하여 T-플라스크에 접종, 37℃, 5% CO2 배양기에서 약 2일간 배양하였다. 세포가 충분히 자라 약 2× 107 cells에 이르렀을 때 배양액을 제거하고 PBS 용액으로 세척한 후 0.1% 트립신 용액으로 플라스크에 부착된 세포를 떼어 내어 자체 개발한 CHO-SFM-SGM1 무혈청 배지 100 ㎖이 든 250 ㎖ 스피너 플라스크에 접종하여 무혈청 부유배양을 실시하였다. 약 3× 105 cells/㎖ 접종하여 3일간 배양한 후 약 1.2× 106 cells/㎖ 농도에서 CHO-SFM-SGM1 배지 400 ㎖이 든 1 ℓ 스피너 플라스크로 전량 이송 배양하였다. 1 ℓ 플라스크 2개를 3일간 배양하여 약 1.2× 106 cells/㎖ 농도에서 배양액 전량을 CHO-SFM-SGM1 배지 2.5 ℓ가 들어 있는 도 1의 회전식 배지 교환 생물 배양 장치에 전량 이송하여 가동을 실시하였다. 세포가 들어있는 배양액은 생물배양기 외부에 장착된 중공사막의 내부를 지나 다시 생물 배양기로 유입되며, 이 때 4℃ 냉실에서 보관 중인 신선한 배지가 같이 생물배양기 내로 공급된다. 대사산물 및 생산물은 중공사막 내에서 외부로 유입되어 회수된다. 배양은 37℃로 실시하였고, 공기와 산소의 주입으로 50% 이상의 용존산소 농도를 유지하고 중탄산나트륨과 이산화탄소가스의 주입으로 pH를 7.2로 유지하면서 배양하였다. 배양 시작 직후부터 매일 일정량의 배양액을 취하여 Vi-CELL Cell Viability Analyzer (Beckman Coulter 사)에서 세포수 및 세포 생존율을 측정하였으며, 당분석기 (YSI7100)를 이용하여 기질 및 대사산물의 농도를 측정하였다. 세포농도가 2.0× 106 cells/㎖에 이르면 배지 공급을 하루에 약 0.5 배양 부피의 속도로 시작하였으며, 배양액 중의 기질 및 대사산물 농도를 분석하여 이후 배지 공급 속도를 점차로 증가시켜 주었다. First, a hollow fiber membrane chamber was mounted on an existing 7.5 L bioreactor (Celligen Plus, NBS) to manufacture a rotary medium exchange bioculture device of FIG. Chinese hamster ovary (CHO) cells transformed to produce interferon beta were inoculated into a T-flask using a medium containing 10% fetal bovine serum (FBS, Hyclone) in α-MEM (Gibco) medium, Incubated for about 2 days at 37 ℃, 5% CO 2 incubator. When the cells have grown sufficiently to reach about 2 × 10 7 cells, the culture medium is removed, washed with PBS solution, 100% of CHO-SFM-SGM1 serum-free medium developed by detaching the cells attached to the flask with 0.1% trypsin solution. Serum-free suspension culture was performed by inoculating these 250 ml spinner flasks. After 3 days of inoculation with about 3 × 10 5 cells / ml, the whole amount was transferred to a 1 L spinner flask containing 400 ml of CHO-SFM-SGM1 medium at a concentration of about 1.2 × 10 6 cells / ml. Two 1 L flasks were incubated for 3 days to transfer the whole culture medium to the rotary medium exchange organism culture apparatus of FIG. 1 containing 2.5 L of CHO-SFM-SGM1 medium at a concentration of 1.2 × 10 6 cells / mL for operation. It was. The culture medium containing the cells passes through the inside of the hollow fiber membrane mounted on the outside of the incubator, and then flows back into the incubator. At this time, fresh medium stored in a 4 ° C. cold room is supplied into the incubator together. Metabolites and products are taken out and recovered within the hollow fiber membranes. The culture was carried out at 37 ℃, was maintained at a dissolved oxygen concentration of 50% or more by the injection of air and oxygen, and cultured while maintaining the pH at 7.2 by the injection of sodium bicarbonate and carbon dioxide gas. Immediately after the start of the culture, a certain amount of the culture medium was taken every day to measure the cell number and cell viability in the Vi-CELL Cell Viability Analyzer (Beckman Coulter), and the concentration of the substrate and the metabolite using a glucose analyzer (YSI7100). When the cell concentration reached 2.0 × 10 6 cells / ml, medium feeding was started at a rate of about 0.5 culture volume per day, and the substrate and metabolite concentrations were analyzed to increase the medium feeding rate gradually.

다음으로 본 발명의 생물 배양 장치에서 연속 배양을 실시하였다. 세포의 접종 과정은 상기와 동일하게 실시하였다. 다만 1 ℓ 플라스크 한 개만을 사용하였으며, 가동부피는 1 ℓ로 하였다. 가스 공급은 5% 이산화탄소가 포함된 외부공기를 사용하였고, 세포수가 늘어남에 따라 공급 속도를 증가시켜 주었다. Next, continuous culture was performed in the biological culture device of the present invention. Cell inoculation process was carried out in the same manner as above. Only 1 liter flask was used, and the movable volume was 1 liter. The gas supply used external air containing 5% carbon dioxide, and the supply speed was increased as the number of cells increased.

위의 두 가지 방법을 사용하여 배양한 결과를 도 5에 나타내었다. 회전식 배지 교환 생물 배양 장치를 이용한 연속 배양 시 최대 세포농도가 약 1.5× 107 cells/㎖에 도달하였으며 약 15일간 배양 유지하였다. 이에 비해 본 발명의 생물 배양 장치를 이용한 연속 배양에서는 2.0× 107 cells/㎖까지 성장하였으며, 세포가 자라는 속도도 회전식 생물 배양 장치에 비해 향상되었으며 세포 생존율도 배양 중에 높게 유지하였다. 또한 인터페론-베타의 생산성에서도 평균적으로 136% 증가하였다.The culture results using the above two methods are shown in FIG. 5. The maximum cell concentration reached about 1.5 × 10 7 cells / ml in continuous culture using a rotating medium exchange bioculture device, and the culture was maintained for about 15 days. On the contrary, in the continuous culture using the biological culture apparatus of the present invention, the growth rate was increased to 2.0 × 10 7 cells / ml, and the growth rate of the cells was also improved compared to the rotary biological culture apparatus, and the cell survival rate was also maintained high during the culture. In addition, the productivity of interferon-beta increased by 136% on average.

<비교예 2> 웨이브 생물 배양 장치와 본 발명의 생물 배양 장치에서의 세포 성장의 비교 Comparative Example 2 Comparison of Cell Growth in Wave Bioculture Apparatus and Bioculture Apparatus of the Present Invention

도 2의 웨이브 생물 배양 장치를 이용하여 연속 배양을 실시하였으며, 이를 본 발명의 생물 배양 장치를 이용한 연속 배양과 비교하였다. 두 가지 모두 가동 부피를 1 ℓ로 하였으며 배양 방법은 상기 <비교예 1>에서 설명한 바와 같다.  Continuous culture was performed using the wave biological culture apparatus of FIG. 2, which was compared with continuous culture using the biological culture apparatus of the present invention. In both cases, the operating volume was 1 L and the culture method was the same as described in Comparative Example 1 above.

두 배양 장치에서 배양한 결과를 도 6에 나타내었다. 본 발명의 생물 배양 장치를 사용할 경우 최대 세포 농도가 2.0× 107 cells/㎖에 이르는데 비하여, 웨이브 생물 배양 장치를 사용할 경우 최대 세포농도가 약 0.7× 107 cells/㎖에 그쳤다.The results of the culture in both culture apparatuses are shown in FIG. 6. The maximum cell concentration reached 2.0 × 10 7 cells / ml when the biological culture apparatus of the present invention was used, whereas the maximum cell concentration was only about 0.7 × 10 7 cells / ml when the wave biological culture apparatus was used.

이는 본 발명의 생물 배양 장치가 웨이브 생물 배양 장치 보다 연속 배양에 있어 효과적임을 보여 주는 것이다. 세포 생존율도 배양기간 동안 높은 활성을 보여주었다. 또한 인터페론-베타의 생산성에서도 평균적으로 155% 증가하였다.This shows that the biological culture device of the present invention is more effective in continuous culture than the wave biological culture device. Cell viability also showed high activity during the culture. The average productivity of interferon-beta also increased by 155%.

전술한 바와 같이, 본 발명의 생물 배양 장치는 회전식 배지 교환 생물 배양 장치 및 웨이브 생물 배양 장치의 장점을 그대로 유지하면서 이들 장치의 단점을 극복할 수 있으며, 결과적으로 이들 장치에 비하여 보다 높은 농도로 목적하는 세포를 배양할 수 있다. As described above, the biological culture device of the present invention can overcome the disadvantages of these devices while maintaining the advantages of the rotating medium exchange bioculture device and the wave biological culture device, and consequently have a higher concentration than these devices. The cells can be cultured.

Claims (27)

(a) 액체 배지를 수용하여 세포를 배양하기 위한 생물 배양기; (a) a biological incubator for receiving liquid medium and culturing cells; (b) 상기 생물 배양기가 안치되고 이를 요동시키기 위한 플랫폼; (b) a platform for placing and oscillating the biological incubator; (c) 상기 생물 배양기에서 생성된 세포 배양액을 이동시키기 위한 제1의 튜브;(c) a first tube for transferring the cell culture solution produced in said biological incubator; (d) 일단부가 상기 제1의 튜브에 연결되어 있는 반투과성의 중공사막을 하나 이상 포함하며, 상기 중공사막의 외부 표면과의 사이에 일정 공간이 형성하는 내부 표면을 지님으로써 중공사막을 흐르는 세포 배양액에 함유된 분리 대상 목적 산물을 상기 일정 공간으로 투과시키기 위한 챔버; 및 (d) a cell culture fluid flowing through the hollow fiber membrane by having at least one semi-permeable hollow fiber membrane having one end connected to the first tube and having an inner surface formed with a predetermined space between the outer surface of the hollow fiber membrane A chamber for permeating the target product to be contained in the predetermined space; And (e) 일단부가 상기 중공사막의 타단부에 연결되어 있고 타단부가 상기 생물 배양기에 연결됨으로써 중공사막을 통과한 잔류액을 상기 생물 배양기로 이동시키기 위한 제2의 튜브를 (e) a second tube for moving the residual liquid that has passed through the hollow fiber membrane to the bio-incubator by having one end connected to the other end of the hollow fiber membrane and the other end connected to the bio-incubator. 포함하여 구성되는 생물 배양 장치Biological culture device composed of 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 생물 배양기는 유연한 재질의 일회용 백으로 이루어진 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치. The biological incubator is a biological culture device, characterized in that consisting of a disposable bag of a flexible material. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 생물 배양기는 액체 배지 및 배양되는 세포가 부분적으로 채워지는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치. Wherein said biological incubator is partially filled with liquid medium and cells to be cultured. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 플랫폼은 그 위에 안치되는 생물 배양기를 좌우에서 상하로 요동시키는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The platform is a biological incubator, characterized in that the oscillating from left to right up and down the biological incubator is placed thereon. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중공사막을 구비한 챔버는 교체될 수 있도록 설치되고, 또 일회용인 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The chamber with the hollow fiber membrane is installed so that it can be replaced, and further bio-cultivation device, characterized in that the disposable. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 챔버 내의 중공사막은 세포 배양액의 흐름을 원활히 하여 배지의 교환 속도를 적당히 유지할 수 있도록 충분한 수의 다발로 형성되는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치. And the hollow fiber membrane in the chamber is formed of a sufficient number of bundles to smoothly flow the cell culture to maintain the medium exchange rate. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 챔버 내의 중공사막은 적어도 3개 이상의 다발로 형성되는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The hollow fiber membrane in the chamber is formed of at least three or more organisms culture apparatus. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중공사막은 챔버 내에서 중력 방향으로 설치되는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치. The hollow fiber membrane is biological culture apparatus, characterized in that installed in the direction of gravity in the chamber. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중공사막은 챔버 내에서 중력 방향으로 설치되고, 또 중력 하에서 배양액의 바람직한 유속을 가능하게 하는 직경:길이의 비율을 갖는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The hollow fiber membrane is provided in the direction of gravity in the chamber, and has a diameter: length ratio that enables a preferable flow rate of the culture medium under gravity. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중공사막은 챔버 내에서 중력 방향으로 설치되고, 또 중력 하에서 배양액의 바람직한 유속을 가능하게 하는 직경:길이의 비율을 갖되, 그 직경:길이의 비율은 1:80 내지 1:600 인 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The hollow fiber membrane is installed in the direction of gravity in the chamber, and has a ratio of diameter: length to enable a desirable flow rate of the culture medium under gravity, and the diameter: length ratio is 1:80 to 1: 600, characterized in that Biological culture apparatus. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중공사막은 폴리 술폰(polysulfone)이나 변형 폴리 술폰, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리아미드, 폴리아크릴니트릴, 나이론, 폴리비닐리딘 플루오라이드, 셀룰로오스 아세테이트, 아크릴 공중합체 및 셀룰로오스 유도체로 구성된 군에서 선택되는 물질로 이루어진 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The hollow fiber membrane is a material selected from the group consisting of polysulfone or modified polysulfone, polyethylene, polypropylene, polyamide, polyacrylonitrile, nylon, polyvinylidene fluoride, cellulose acetate, acrylic copolymer and cellulose derivative Biological culture apparatus, characterized in that consisting of. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 중공사막은 배양되는 세포의 종류나 분리 대상 목적물의 분자량에 따라 적당한 크기의 공경을 가지는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The hollow fiber membrane has a pore size of a suitable size according to the type of cells to be cultured or the molecular weight of the target object to be separated. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 배양되는 세포는 동물 세포이고, 상기 중공사막은 0.1 내지 0.65 ㎛인 크기의 공경을 갖는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The cultured cells are animal cells, and the hollow fiber membrane has a pore size of 0.1 to 0.65 ㎛ size. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 생물 배양 장치는 생물 배양기에 연결되어 생물 배양기에 액체 배지를 연속적으로 공급하기 위한 배지 탱크, 및 상기 챔버에 연결되어 중공사막을 투과한 투과액을 회수하기 위한 수확 탱크를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 배양 장치.The biological culture apparatus further includes a medium tank connected to the biological incubator for continuously supplying the liquid medium to the biological incubator, and a harvesting tank connected to the chamber to recover the permeate that has penetrated the hollow fiber membrane. Biological culture apparatus. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 생물 배양 장치는 The biological culture device (i) 무게 센서;(i) a weight sensor; (ii) 상기 무게 센서에 연결되고, 상기 생물 배양기에 연결되어 생물 배양기에 연속적으로 배지를 공급할 수 있는 배지탱크;(ii) a medium tank connected to the weight sensor, the medium tank being connected to the biological incubator to continuously supply the medium to the biological incubator; (iii) 상기 배지탱크에 연결되어 있는 공급 펌프;(iii) a feed pump connected to the discharge tank; (iv) 상기 무게 센서에 연결되고, 상기 챔버에 연결되어 상기 중공사막을 투과한 투과액을 회수하기 위한 수확 탱크; (iv) a harvesting tank connected to said weight sensor and connected to said chamber to recover permeate that has permeated said hollow fiber membrane; (v) 상기 생물 배양기에 연결되어 있는 제1의 배출 펌프; (v) a first evacuation pump connected to the bioincubator; (vi) 상기 수확 탱크에 연결되어 있는 제2의 배출 펌프; 및(vi) a second discharge pump connected to said harvest tank; And (vi) 상기 무게 센서에 연결되고, 상기 공급 펌프, 제1의 배출 펌프 및 제2의 배출 펌프에 연결되어 무게 센서가 불균형을 가르킬 때, 상기 공급 펌프 또는 제1 및 제2의 배출 펌프를 작동시켜 상기 배지탱크에서 상기 생물 배양기로 배지를 공급시키거나 상기 챔버에서 수확 탱크로 투과액을 배출시키기 위한 제어 장치를(vi) the feed pump or the first and second discharge pumps when connected to the weight sensor and connected to the feed pump, the first discharge pump and the second discharge pump to indicate an imbalance. A control device for supplying the medium from the medium tank to the bio-incubator or for draining the permeate from the chamber to the harvest tank. 추가로 포함하는 생물 배양 장치.A biological culture apparatus further comprising. (a) 생물 배양기에 액체 배지를 부분적으로 채우는 단계;(a) partially filling the biological incubator with liquid medium; (b) 상기 액체 배지에 배양하고자 하는 세포를 접종시키는 단계;(b) inoculating the cells to be cultured in the liquid medium; (c) 상기 생물 배양기를 요동시키며 세포를 배양하는 단계;(c) shaking the biological incubator and culturing the cells; (d) 상기 배양된 배양액을 상기 생물 배양기 외부에서 있는 하나 이상의 반투과성 중공사막을 통과시키는 단계; 및(d) passing the cultured culture medium through one or more semipermeable hollow fiber membranes external to the biological incubator; And (e) 상기 중공사막을 통과한 잔류액을 생물 배양기로 이동시키는 단계를(e) transferring the residual liquid that has passed through the hollow fiber membrane to a biological incubator 포함하여 이루어지는 생물 배양 방법.A biological culture method comprising a. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 생물 배양기는 유연한 재질의 일회용 백으로 이루어진 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법. The biological incubator is a biological culture method, characterized in that consisting of a disposable bag of a flexible material. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 단계 (c)는 생물 배양기를 좌우에서 상하로 요동시키며 이루어지는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The step (c) is a biological culture method, characterized in that the biological incubator is made up and down from side to side. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 일회용인 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The hollow fiber membrane is a biological culture method, characterized in that the disposable. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 세포 배양액의 흐름을 원활히 하여 배지의 교환 속도를 적당히 유지할 수 있도록 충분한 수의 다발로 형성되는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법. The hollow fiber membrane is a biological culture method, characterized in that formed in a sufficient number of bundles to facilitate the flow of the cell culture medium to maintain a moderate exchange rate of the medium. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 적어도 3개 이상의 다발로 형성되는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The hollow fiber membrane is a biological culture method, characterized in that formed in at least three or more bundles. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 중력 방향으로 배치되는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방 법. The hollow fiber membrane is a biological culture method, characterized in that arranged in the direction of gravity. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 중력 방향으로 배치되고, 또 중력 하에서 배양액의 바람직한 유속을 가능하게 하는 직경:길이의 비율을 갖는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The hollow fiber membrane is disposed in the direction of gravity and has a diameter: length ratio which enables a preferable flow rate of the culture medium under gravity. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 폴리 술폰(polysulfone)이나 변형 폴리 술폰, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리아미드, 폴리아크릴니트릴, 나이론, 폴리비닐리딘 플루오라이드, 셀룰로오스 아세테이트, 아크릴 공중합체 및 셀룰로오스 유도체로 구성된 군에서 선택되는 물질로 이루어진 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The hollow fiber membrane is a material selected from the group consisting of polysulfone or modified polysulfone, polyethylene, polypropylene, polyamide, polyacrylonitrile, nylon, polyvinylidene fluoride, cellulose acetate, acrylic copolymer and cellulose derivative Biological culture method, characterized in that consisting of. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 중공사막은 배양되는 세포의 종류나 분리 대상 목적물의 분자량에 따라 적당한 크기의 공경을 가지는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The hollow fiber membrane has a pore size of a suitable size according to the type of cells to be cultured or the molecular weight of the target object to be separated. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 생물 배양 방법은 상기 생물 배양기에 액체 배지를 연속적으로 공급하는 단계, 및 중공사막을 투과한 투과액을 회수하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The biological culture method further comprises the step of continuously supplying a liquid medium to the biological incubator, and recovering the permeate passed through the hollow fiber membrane. 제16항에 있어서,The method of claim 16, 상기 생물 배양 방법은 상기 생물 배양기에 액체 배지를 연속적으로 공급하는 단계, 및 중공사막을 투과한 투과액을 회수하기 위한 단계를 추가로 포함하고, 또 상기 생물 배양기에 공급되는 액체 배지의 양이나 회수되는 투과액의 양을 제어하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 생물 배양 방법.The biological culture method further includes the step of continuously supplying the liquid medium to the biological incubator, and recovering the permeate that has passed through the hollow fiber membrane, and the amount or recovery of the liquid medium supplied to the biological incubator And controlling the amount of permeate that is to be added.
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