KR20040094464A - Pyridinyl pyrazole derivatives - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 전환성장인자(TGF)-β신호 경로의 억제제, 특히 제I형 또는 액티빈 유사-키나제(ALK)-5 수용체에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화(phosphorylation) 억제제인 피리디닐 피라졸 유도체, 이의 제조 방법, 그리고 의약 특히 이 경로에 의해 매개되는 질환의 치료 및 예방제로서의 이의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to pyridinyl pyrazole derivatives which are inhibitors of the transforming growth factor (TGF) -β signaling pathway, in particular phosphorylation inhibitors of smad2 or smad3 by type I or activin-like kinase (ALK) -5 receptors, It relates to a process for its preparation and its use as a medicament, in particular for the treatment and prophylaxis of diseases mediated by this route.
TGF-β1은 단일막 세린/트레오닌 키나제 수용체류를 통해 신호하는 TGF-β, 액티빈, 인히빈, 골형성 단백질 및 뮬레리안(Mullerian) 억제 물질을 비롯해 시토킨류에 속하는 원형질류(prototypic member)이다. 이들 수용체는 두 가지 종류, 즉 제I형 또는 액티빈 유사 키나제(ALK) 수용체 및 제Ⅱ형 수용체로 분류할 수 있다. ALK 수용체는 (a) 세린/트레오닌 풍부 세포내 꼬리(tail)가 없고, (b) 제I형 수용체들 사이에서 매우 상동성인 세린/트레오닌 키나제 도메인을 가지며, (c) 글리신 및 세린 잔기가 풍부한 영역으로 구성된 GS 도메인이라 불리는 통상의 서열 모티프를 공유하고 있다는 점에서 제Ⅱ형 수용체와 구별된다. GS 도메인은 세포내 키나제 도메인의 아미노 말단 끝(amino-terminal end)에 위치하고 제Ⅱ형 수용체에 의한 활성화에 있어 중요하다. 연구 결과, TGF-β신호에 있어 ALK 및 제Ⅱ형 수용체가 필요하다는 것이 밝혀졌다. 구체적으로, 제Ⅱ형 수용체는 TGF-β의 존재 하에서 TGF-β, ALK5를 위한 제I형 수용체의 GS 도메인을 인산화한다. 상기 ALK5는 2개의 카르복시 말단 세린에서 세포질 단백질 samd2 및 smad3를 인산화한다. 많은 종에 있어서 일반적으로 제Ⅱ형 수용체는 세포 증식을 조절하고 제I형 수용체는 매트릭스 생성을 조절하는 것으로 여겨진다. 따라서, 제I형 수용체를 억제하고 이에 따라 매트릭스 생성을 억제하나 제Ⅱ형 수용체 매개 증식을 억제하지 않는 화합물이 바람직하다.TGF-β1 is a prototypic member of the cytokines, including TGF-β, activin, inhibin, bone morphogenetic proteins and Mullerian inhibitors, which are signaled through single membrane serine / threonine kinase receptors to be. These receptors can be classified into two types, type I or activin-like kinase (ALK) receptors and type II receptors. ALK receptors (a) have no serine / threonine-rich intracellular tail, (b) have serine / threonine kinase domains that are highly homologous between type I receptors, and (c) regions rich in glycine and serine residues. It is distinguished from type II receptors in that it shares a common sequence motif called a GS domain consisting of: The GS domain is located at the amino-terminal end of the intracellular kinase domain and is important for activation by type II receptors. Studies have shown that ALK and type II receptors are required for TGF-β signaling. Specifically, type II receptors phosphorylate the GS domain of type I receptors for TGF-β, ALK5 in the presence of TGF-β. The ALK5 phosphorylates cytoplasmic proteins samd2 and smad3 at two carboxy terminal serines. In many species it is generally believed that type II receptors regulate cell proliferation and type I receptors regulate matrix production. Thus, compounds that inhibit type I receptors and thus inhibit matrix formation but do not inhibit type II receptor mediated proliferation are preferred.
TGF-β1 축의 활성 및 세포외 매트릭스의 팽창은 만성 신장 질환 및 혈관 질환의 전개 및 발전에 있어 초기의 그리고 지속적인 병인이다[Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331(19): 1286-92]. 나아가, TGF-β1은 TGF-β1 수용체 ALK5에 의한 smad3 인산화의 활성을 통해 피브로넥틴 및 플라스미노겐 활성자 억제제-1, 피부 퇴적(sclerotic deposit) 성분의 형성에 있어 어떤 역할을 수행한다[Zhang Y., Feng X.H., Derynck R., Nature, Aug. 27, 1998; 394(6696): 909-13; Usui T., Takase M., Kaji Y., Suzuki K., Ishida K., Tsuru T., Miyata K., Kawabata M., Yamashita H., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., Oct. 1998; 39(11):1981-9].The activity of the TGF-β1 axis and the expansion of the extracellular matrix are early and persistent etiologies for the development and development of chronic kidney disease and vascular disease [Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331 (19): 1286-92. Furthermore, TGF-β1 plays a role in the formation of fibronectin and plasminogen activator inhibitor-1, sclerotic deposit components through the activity of smad3 phosphorylation by TGF-β1 receptor ALK5 [Zhang Y. , Feng XH, Derynck R., Nature, Aug. 27, 1998; 394 (6696): 909-13; Usui T., Takase M., Kaji Y., Suzuki K., Ishida K., Tsuru T., Miyata K., Kawabata M., Yamashita H., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., Oct. 1998; 39 (11): 1981-9.
신장 및 심혈관계에서 점진적인 섬유화는 질환 및 사망의 주원인이고 보건 비용의 원인이다. TGF-β1은 많은 신장 섬유증에 관여한다[Border W.A., NobleN.A., N. Engl. J. Med., Nov 10, 1994; 331(19): 1286-92]. TGF-β1은 급성 및 만성 신염에서 증가한다[Yoshioka K., Takemura T., Murakami K., Okada M., Hino S., Miyamoto H., Maki S., Lab. Invest., Feb. 1993; 68(2): 154-63, diabetic nephropathy, Yamamoto T., Nakamura T., Noble N.A., Ruoslahti E., Border W.A., (1993) PNAS 90:1814-1818, allograft rejection, HIV nephropathy and angiotensin-induced nephropathy, Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331(19): 1286-92]. 이들 질환에서, TGF-β1의 수준은 세포외 매트릭스의 생성과 일치한다. 3개의 증거는 TGF-β1과 매트릭스 생성간의 인과관계가 존재함을 암시한다. 첫째, 통상의 사구체, 신간 세포 및 비신장 세포를 유발시켜 세포외 메트릭스 단백질을 생성하고 외인성 TGF-β1의 시험관내 프로테아제 활성을 억제할 수 있다. 둘째, TGF-β1에 대한 항체를 중화시켜 신장염에 걸린 래트에서 세포외 매트릭스의 축적을 예방할 수 있다. 셋째, TGF-β1 형질전환 마우스 또는 TGF-β1 유전자의 정상적인 래트 신장으로의 생체내 트란스펙션은 사구체경화증의 빠른 전개를 초래한다[Kopp J.B., Factor V.M., Mozes M., Nagy P., Sanderson N., Bottinger E.P., Klotman P.E., Thorgeirsson S.S., Lab Invest, June 1996; 74(6): 991-1003]. 따라서, TGF-β1 활성의 억제는 만성 신장 질환에서 치료적으로 개입한다.Progressive fibrosis in the kidneys and cardiovascular system is a major cause of disease and death and a cause of health costs. TGF-β1 is involved in many kidney fibrosis [Border W.A., Noble N.A., N. Engl. J. Med., Nov 10, 1994; 331 (19): 1286-92. TGF-β1 is increased in acute and chronic nephritis [Yoshioka K., Takemura T., Murakami K., Okada M., Hino S., Miyamoto H., Maki S., Lab. Invest., Feb. 1993; 68 (2): 154-63, diabetic nephropathy, Yamamoto T., Nakamura T., Noble NA, Ruoslahti E., Border WA, (1993) PNAS 90: 1814-1818, allograft rejection, HIV nephropathy and angiotensin-induced nephropathy , Border WA, Noble NA, N. Engl. J. Med., Nov. 10, 1994; 331 (19): 1286-92. In these diseases, the level of TGF-β1 is consistent with the production of extracellular matrix. Three evidences suggest that a causal relationship exists between TGF-β1 and matrix generation. First, conventional glomeruli, kidney cells and non-renal cells can be induced to produce extracellular matrix proteins and to inhibit the in vitro protease activity of exogenous TGF-β1. Second, neutralizing antibodies to TGF-β1 can prevent the accumulation of extracellular matrix in rats with nephritis. Third, in vivo transfection of TGF-β1 transgenic mice or TGF-β1 gene into normal rat kidney results in rapid development of glomerulosclerosis [Kopp JB, Factor VM, Mozes M., Nagy P., Sanderson N ., Bottinger EP, Klotman PE, Thorgeirsson SS, Lab Invest, June 1996; 74 (6): 991-1003. Thus, inhibition of TGF-β1 activity is therapeutically involved in chronic kidney disease.
TGF-β1 및 그의 수용체는 손상된 혈관에서 증가하고 풍선혈관 성형술 후의 신내막 형성에서 나타난다[Saltis J., Agrotis A., Bobik A., Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., Mar. 1996; 23(3): 193-200]. 또한, TGF-β1은평활근(SMC) 이동의 강력한 생체내 촉진제이고 동맥벽에서 SMC의 이동은 죽상경화증 및 재협착의 병인에서 한 원인이다. 더욱이, 전체 콜레스테롤에 대한 내피 세포 산물의 다변량 자료분석에서, TGF-β수용체 ALK5는 전체 콜레스테롤과 상관관계가 있다(p＜0.001) [Blann A.D., Wang J.M., Wilson P.B., Kumar S., Atherosclerosis, Feb. 1996; 120(1-2): 221-6]. 나아가, 인간의 죽상경화 상처로부터 유래된 SMC는 증가된 ALK5/TGF-β제Ⅱ형 수용체 비를 갖는다. TGF-β1은 섬유증식성 혈관 상처에서 과발현되기 때문에, 수용체-변형 세포는 세포외 매트릭스 성분을 과생산하면서 천천히 그러나 조절되지 않는 방식으로 성장할 것이다[McCaffrey T.A., Consigli S., Du B., Falcone D.J., Sanborn T.A., Spokojny A.M., Bush H.L., Jr., J Clin. Invest., Dec. 1995; 96(6): 2667-75]. TGF-β1은 활성 매트릭스 합성이 일어나는 죽상경화성 상처에서 비포말 대식세포에 면역국소화(immunolocalization)되었고, 이는 비포말 대식세포가 TGF-β의존성 기전에 의한 죽상경화성 리모델링에서 매트릭스 유전자 발현의 조절에 관여한다는 것을 암시한다. 따라서, ALK5에 대한 TGF-β1의 작용 억제는 또한 죽상경화증 및 재협착에서 필요하다.TGF-β1 and its receptors increase in injured blood vessels and appear in endometrial formation after balloon angioplasty [Saltis J., Agrotis A., Bobik A., Clin. Exp. Pharmacol. Physiol., Mar. 1996; 23 (3): 193-200]. In addition, TGF-β1 is a potent in vivo promoter of smooth muscle (SMC) migration and the migration of SMC in the arterial wall is a cause in the pathogenesis of atherosclerosis and restenosis. Furthermore, in multivariate data analysis of endothelial cell products against total cholesterol, TGF-β receptor ALK5 correlates with total cholesterol (p <0.001) [Blann AD, Wang JM, Wilson PB, Kumar S., Atherosclerosis, Feb . 1996; 120 (1-2): 221-6]. Furthermore, SMCs derived from human atherosclerotic wounds have an increased ALK5 / TGF-β type II receptor ratio. Because TGF-β1 is overexpressed in fibrotic vascular wounds, receptor-modified cells will grow in a slow but unregulated manner while overproducing extracellular matrix components [McCaffrey TA, Consigli S., Du B., Falcone DJ, Sanborn TA, Spokojny AM, Bush HL, Jr., J Clin. Invest., Dec. 1995; 96 (6): 2667-75]. TGF-β1 has been immunolocalized to non-follicular macrophages in atherosclerotic wounds where active matrix synthesis occurs, suggesting that non-follicular macrophages are involved in the regulation of matrix gene expression in atherosclerotic remodeling by TGF-β-dependent mechanisms. Imply that. Thus, inhibition of the action of TGF-β1 on ALK5 is also required in atherosclerosis and restenosis.
TGF-β는 또한 상처 치료에서 필요하다. TGF-β1에 대한 항체를 억제하는 것은 많은 모델에서 사용되어 왔고, 그 결과 TGF-β1 신호의 억제가 치유 과정 중 과도한 흉터 생성을 억제함으로써 부상 후 기능을 회복하는데 유익한 것으로 나타났다. 예를 들어, TGF-β1 및 TGF-β2에 대한 항체를 억제한 결과, 상처 형성을 감소시켰고, 래트에서 피부 피브로넥틴 및 콜라겐 침착을 감소시켰을 뿐 만아니라 단핵세포 및 대식세포의 수를 줄임으로써 네오더미스(neodermis)의 시토아커텍쳐(cytoarchitecture)를 증가시켰다[Shah M., J. Cell. Sci., 1995, 108, 985-1002]. 더욱이, TGF-β항체는 토끼에서 각막 손상의 치유를 개선시키고[Moller-Pedersen T., Curr. Eye Res., 1998, 17, 736-747], 래트에서 위궤양의 상처 치유를 촉진 시킨다[Ernst H., Gut, 1996, 39, 172-175]. 이들 데이타는 TGF-β의 활성 억제는 많은 조직에서 유익함을 강력히 암시하고 있고, TGF-β의 만성 상승을 갖는 임의의 질환은 smad2 및 smad3 신호 경로를 억제함으로써 호전될 수 있음을 암시하고 있다.TGF-β is also required in wound healing. Inhibiting antibodies to TGF-β1 has been used in many models, and as a result, inhibition of TGF-β1 signaling has been shown to be beneficial in restoring post-injury function by inhibiting excessive scar formation during the healing process. For example, inhibition of antibodies to TGF-β1 and TGF-β2 resulted in reduced wound formation, reduced skin fibronectin and collagen deposition in rats, as well as reduced number of monocytes and macrophages. Increased cytoarchitecture of neodermis [Shah M., J. Cell. Sci., 1995, 108, 985-1002. Moreover, TGF-β antibodies improve the healing of corneal damage in rabbits [Moller-Pedersen T., Curr. Eye Res., 1998, 17, 736-747], promotes wound healing of gastric ulcers in rats [Ernst H., Gut, 1996, 39, 172-175]. These data strongly suggest that inhibition of TGF-β activity is beneficial in many tissues, and that any disease with chronic elevation of TGF-β can be improved by inhibiting the smad2 and smad3 signaling pathways.
TGF-β는 또한 복막성 유착에 관여한다[Saed G.M., et al, Wound Repair Regeneration, 1999 Nov-Dec, 7(6), 504-510]. 따라서, ALK5의 억제는 외과 수술 이후 복막 및 피하 섬유성 유착을 예방하는데 유익할 것이다.TGF-β is also involved in peritoneal adhesions (Saed G.M., et al, Wound Repair Regeneration, 1999 Nov-Dec, 7 (6), 504-510). Thus, inhibition of ALK5 would be beneficial in preventing peritoneal and subcutaneous fibrous adhesions after surgical surgery.
TGF-β1 항체는 신생혈관생성 억제 기전을 통해 누드 마우스에서 이식된 신장 종양 성장을 예방하는 것으로 여겨진다[Ananth S, et al, Journal Of The American Society Of Nephrology Abstracts, 9:433A(발췌)]. 종양 그 자체는 TGF-β에 비반응성이지만, 주위 조직은 반응성이고 TGF-β분비 종양의 신생혈관생성에 의해 종양 성장을 도와준다. 따라서, TGF-β경로의 길항작용은 전이 성장을 방지하고 암의 고통을 줄여줄 것이다.TGF-β1 antibodies are believed to prevent renal tumor growth transplanted in nude mice through angiogenesis suppression mechanisms (Ananth S, et al, Journal Of The American Society Of Nephrology Abstracts, 9: 433A (excerpt)). The tumor itself is nonreactive to TGF-β, but the surrounding tissue is reactive and aids tumor growth by angiogenesis of TGF-β secreting tumors. Thus, antagonism of the TGF-β pathway will prevent metastatic growth and reduce cancer pain.
ALK5의 억제제로서 WO 00/61576 A1은 트리아릴이미다졸 화합물을, WO 01/62756 A1은 피리디닐이미다졸 화합물을, WO 02/055077 A1은 이미다졸일 시클릭 아세탈 유도체를, WO 02/40467 A1은 2-피리딜이 치환된 벤즈이미다졸 화합물을, WO02/40476 A1은 피리딜이 치환된 트리아졸 화합물을 개시하고 있다. 또한, 문헌[Callahan J.F., Burgess J.L., Fornwald J.A., Gaster L.M.,Harling J.D., Harrington F.P., Heer J., Kwon C., Lehr R., Mathur A., Olson B.A., Weinstock J., Laping N.J., J Med Chem, 2002;45(5):999-1001]은 ALK5의 억제제로서 디히드로피롤로이미다졸 화합물과 트리아릴이미다졸 화합물을 개시하고 있다.As inhibitors of ALK5 WO 00/61576 A1 is a triarylimidazole compound, WO 01/62756 A1 is a pyridinylimidazole compound, WO 02/055077 A1 is an imidazolyl cyclic acetal derivative, WO 02 / 40467 A1 discloses a benzimidazole compound substituted with 2-pyridyl and WO02 / 40476 A1 discloses a triazole compound substituted with pyridyl. See also Callahan JF, Burgess JL, Fornwald JA, Gaster LM, Harling JD, Harrington FP, Heer J., Kwon C., Lehr R., Mathur A., Olson BA, Weinstock J., Laping NJ, J Med Chem, 2002; 45 (5): 999-1001, discloses dihydropyrrolidimidazole compounds and triarylimidazole compounds as inhibitors of ALK5.
본 발명에서는 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐 피라졸 유도체가 ALK5의 강력하고 선택적인 비펩티드 억제제로서의 활성을 나타내므로, ALK5 키나제 기전에 의해 매개되는 각종 질환, 예를 들어 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 상처 치유, 관절염, 골다공증, 신질환(kidney disease), 울혈성 심부전, 궤양, 안질환, 각막 손상, 당뇨병성 신장장애, 손상된 신경 기능, 알쯔하이머병, 영양상태 이상, 죽상경화증, 복막 및 피하 유착, 폐 섬유증 및 간섬유증(단, 이들에 국한되는 것은 아님)과 같이 섬유형성이 주원인인 임의의 질환 및 재협착의 치료 및 예방에 있어 유용하다는 것을 밝힘으로써 본 발명을 완성하게 되었다.In the present invention, since the pyridinyl pyrazole derivative represented by Chemical Formula 1 shows the activity of ALK5 as a potent and selective non-peptide inhibitor, various diseases mediated by ALK5 kinase mechanism, for example, chronic kidney disease, acute kidney disease , Wound healing, arthritis, osteoporosis, kidney disease, congestive heart failure, ulcers, eye diseases, corneal damage, diabetic kidney failure, impaired nerve function, Alzheimer's disease, malnutrition, atherosclerosis, peritoneal and subcutaneous adhesions, The present invention has been completed by revealing that it is useful in the treatment and prevention of any disease and restenosis in which fibrosis is a major cause, such as but not limited to pulmonary fibrosis and liver fibrosis.
따라서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐 피라졸 유도체와 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는데 그 목적이 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pyridinyl pyrazole derivative represented by Chemical Formula 1 and a pharmaceutically acceptable salt thereof.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐 피라졸 유도체의 제조방법을 제공하는데 다른 목적이 있다.Another object of the present invention is to provide a method for preparing a pyridinyl pyrazole derivative represented by Chemical Formula 1.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피리디닐 피라졸 유도체와 이의약학적으로 허용 가능한 염이 유효성분으로 함유되어 있어 ALK5 키나제 기전에 의해 매개되는 각종 질환의 치료 및 예방제로 유효한 약제를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.In addition, the present invention contains a pyridinyl pyrazole derivative represented by the formula (1) and a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient to provide an effective drug for the treatment and prevention of various diseases mediated by ALK5 kinase mechanism There is another purpose.
본 발명은 다음 화학식 1로 표시되는 피리디닐[1,2,3]트리아졸 유도체와 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 그 특징으로 한다.The present invention is characterized by a pyridinyl [1,2,3] triazole derivative represented by the following formula (1) and a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[화학식 1][Formula 1]
상기 화학식 1에서,In Chemical Formula 1,
R1은 나프틸, 안트라세닐, 또는 할로, C1-6알콕시, C1-6알킬티오, C1-6알킬, C1-6할로알킬, O-(CH2)n-Ph, S-(CH2)n-Ph, 시아노, 페닐 및 CO2R(식 중, R은 수소 또는 C1-6알킬이고 n은 0 내지 3임)로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 치환체로 치환된 임의의 페닐이거나, 또는 R1은 시클릭 고리가 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 3종 이하의 헤테로원자를 경우에 따라 함유하고 =O로 경우에 따라 치환된 5 내지 7원의 방향족 또는 비방향족 시클릭 고리로 융합된 페닐 또는 피리딜이고;R 1 is naphthyl, anthracenyl, or halo, C 1-6 alkoxy, C 1-6 alkylthio, C 1-6 alkyl, C 1-6 haloalkyl, O- (CH 2 ) n -Ph, S- (CH 2 ) any substituted with one or more substituents selected from the group consisting of n- Ph, cyano, phenyl and CO 2 R, wherein R is hydrogen or C 1-6 alkyl and n is 0-3 Is phenyl, or R 1 is a 5-7 membered aromatic or nonaromatic cyclic ring optionally containing up to 3 heteroatoms independently selected from N, O and S and optionally substituted with = 0; Phenyl or pyridyl fused to a cyclic ring;
R2는 수소, C1-6알킬, C1-6알콕시, 페닐, C1-6할로알킬, 할로, NH2, NH-C1-6알킬 또는 NH(CH2)o-Ph(식 중, o은 0 내지 3임)를 나타내고;R 2 is hydrogen, C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, phenyl, C 1-6 haloalkyl, halo, NH 2 , NH-C 1-6 alkyl or NH (CH 2 ) o -Ph , o is 0 to 3);
R3는 CO2H, CONR4R5, CN, NO2, C1-6알킬티오, -SO2-C1-6알킬, C1-6알콕시, SONH2, CONHOH, NH2, CHO, CH2OH, CH2NH2또는 -CO2-C1-6알킬을 나타내고, R4및 R5는 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬을 나타낸다.R 3 is CO 2 H, CONR 4 R 5 , CN, NO 2 , C 1-6 alkylthio, -SO 2 -C 1-6 alkyl, C 1-6 alkoxy, SONH 2 , CONHOH, NH 2 , CHO, CH 2 OH, CH 2 NH 2 or —CO 2 —C 1-6 alkyl, and R 4 and R 5 independently represent hydrogen or C 1-6 alkyl.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 바람직하게는 R1은 할로, C1-6알콕시, C1-6알킬티오 및 페닐로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 치환체로 임의 치환된 페닐이거나, 또는 R1은 시클릭 고리가 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택된 3종 이하의 헤테로원자를 경우에 따라 함유하고 =O로 경우에 따라 치환된 5 내지 7원의 방향족 또는 비방향족 시클릭 고리로 융합된 페닐 또는 피리딜, 특히 페닐이다. 예를 들어, R1은 벤조[1,3]디옥솔릴, 2,3-디히드로벤조[1,4]디옥시닐, 벤졸사졸릴, 벤조티아졸릴, 퀴녹살리닐, 벤조[1,2,5]옥사디아졸릴, 벤조[1,2,5]티아디아졸릴, [1,2,4]트리아졸로[1,5-a]피리딜, [1,2,3]트리아졸로[1,5-a]피리딜, 디히드로벤조푸라닐, 벤조[1,4]옥사지닐-3-온 또는 벤족사졸릴-2-온이다.In the compound represented by Formula 1, preferably R 1 is phenyl optionally substituted with one or more substituents selected from the group consisting of halo, C 1-6 alkoxy, C 1-6 alkylthio and phenyl, or R 1 is a cyclic ring fused to a 5-7 membered aromatic or non-aromatic cyclic ring optionally containing up to 3 heteroatoms independently selected from N, O and S and optionally substituted with = 0; Phenyl or pyridyl, in particular phenyl. For example, R 1 is benzo [1,3] dioxolyl, 2,3-dihydrobenzo [1,4] dioxyyl, benzoxazolyl, benzothiazolyl, quinoxalinyl, benzo [1,2, 5] oxadiazolyl, benzo [1,2,5] thiadiazolyl, [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyridyl, [1,2,3] triazolo [1,5 -a] pyridyl, dihydrobenzofuranyl, benzo [1,4] oxazinyl-3-one or benzoxazolyl-2-one.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 바람직하게는 R2는 수소 또는 메틸이고, 특히 바람직하기로는 R2는 피리딜 고리의 질소에 대해 오르토에 위치하는 것이다.In the compound represented by the formula (1), preferably R 2 is hydrogen or methyl, particularly preferably R 2 is located in ortho to the nitrogen of the pyridyl ring.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 바람직하게는 R3는 CO2H, CONH2,CN, NO2, SONH2, CONHOH, NH2, CHO, CH2OH 또는 CH2NH2이다.In the compound represented by Formula 1, preferably R 3 is CO 2 H, CONH 2 , CN, NO 2 , SONH 2 , CONHOH, NH 2 , CHO, CH 2 OH or CH 2 NH 2 .
또한, 본 발명의 특정 화합물의 예는 다음의 실시예에 기재한 바와 같다.In addition, examples of specific compounds of the present invention are as described in the following Examples.
또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약제학적으로 허용 가능한 염을 형성할 수도 있는 바, 예를 들면 염산염, 황산염, 인산염, 이인산염, 브롬화수소염 및 질산염과 같은 무기산과의 염, 또는 말레이트, 말레에이트, 푸마레이트, 타르트레이트, 숙시네이트, 시트레이트, 아세테이트, 락테이트, 메탄술포네이트,p-톨루엔술포네이트, 팔미테이트, 살리실레이트 및 스테아레이트와 같은 유기산과의 염을 포함한다.In addition, the compound represented by Formula 1 according to the present invention may form a pharmaceutically acceptable salt, for example, salts with inorganic acids such as hydrochloride, sulfate, phosphate, diphosphate, hydrobromide and nitrate Or salts with organic acids such as maleate, maleate, fumarate, tartrate, succinate, citrate, acetate, lactate, methanesulfonate, p -toluenesulfonate, palmitate, salicylate and stearate It includes.
본 발명의 화합물의 일부는 수성 및 유기 용매와 같은 용매로부터 결정화되거나 또는 재결정화될 수 있다. 그러한 경우, 용매화물이 형성될 수 있다. 동결건조와 같은 방법으로 제조 가능한 다양한 양의 물 함유 화합물 이외에 수화물을 비롯한 화학양론적 용매화물도 본 발명의 범위에 속한다.Some of the compounds of the present invention may be crystallized or recrystallized from solvents such as aqueous and organic solvents. In such cases, solvates may be formed. In addition to various amounts of water-containing compounds that can be prepared by methods such as lyophilization, stoichiometric solvates, including hydrates, are also within the scope of the present invention.
상기 화학식 1로 표시되는 어떤 화합물은 광학 이성질체, 예를 들어 부분입체 이성질체 및 모든 비의 이성질체 혼합물(예, 라세미체)의 형태로 존재할 수 있다. 상이한 이성질체 형태는 통상의 방법에 의해 분리되거나 또는 분해될 수 있거나, 또는 임의의 소정 이성질체는 통상의 합성법에 의해 또는 입체특이적 또는 비대칭적 합성에 의해 수득할 수 있다.Certain compounds represented by Formula 1 may exist in the form of optical isomers, for example diastereomers and mixtures of all ratios of isomers (eg racemates). Different isomeric forms may be separated or resolved by conventional methods, or any given isomer may be obtained by conventional synthesis or by stereospecific or asymmetric synthesis.
본 발명에서 'C1-6알킬' 및 'C1-7알킬'이란 용어는 그 자체로 또는 더 큰기(예, C1-6알콕시)의 일부로서 간에 관계없이 메틸, 에틸,n-프로필, 이소프로필,n-부틸,sec-부틸, 이소부틸 및t-부틸을 비롯해(단, 이들에만 국한되는 것은 아님) 1 내지 6개 및 1 내지 7개의 탄소원자의 직쇄 또는 분지쇄 라디칼을 의미한다.In the present invention, the terms 'C 1-6 alkyl' and 'C 1-7 alkyl' are used either independently or as part of a larger group (e.g., C 1-6 alkoxy) regardless of methyl, ethyl, n -propyl, By straight or branched chain radicals of 1 to 6 and 1 to 7 carbon atoms, including but not limited to isopropyl, n -butyl, sec -butyl, isobutyl and t -butyl.
C1-6할로알킬기는 1종 이상의 할로 원자, 특히 CF3에서 언급될 수 있는 C1-6할로알킬을 함유할 수 있다.The C 1-6 haloalkyl group may contain one or more halo atoms, especially C 1-6 haloalkyl, which may be mentioned in CF 3 .
'할로' 또는 '할로겐'이란 용어는 서로 교환 가능하게 사용되는 용어로서 원소인 염소, 불소, 요오드 및 브롬으로부터 유도된 라디칼을 의미한다.The terms 'halo' or 'halogen' are used interchangeably and refer to radicals derived from the elements chlorine, fluorine, iodine and bromine.
'C3-7시클로알킬'이란 용어는 본 발명에서 시클로프로필, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 비롯해(단, 이들에만 국한되는 것은 아님) 3 내지 7개의 탄소원자를 갖는 시클릭 라디칼을 의미한다.The term 'C 3-7 cycloalkyl' refers to cyclic radicals having 3 to 7 carbon atoms in the present invention, including but not limited to cyclopropyl, cyclopentyl and cyclohexyl.
'아릴'이란 용어는 본 발명에서 5 내지 14원의 치환되거나 비치환된 방향족 고리(들), 또는 페닐 및 나프틸을 비롯해(단, 이들에만 국한되는 것은 아님) 바이 또는 트리-시클릭계를 포함할 수 있는 고리 시스템을 의미한다.The term 'aryl' is used herein to refer to bi or tri-cyclic systems including, but not limited to, 5-14 membered substituted or unsubstituted aromatic ring (s), or phenyl and naphthyl. It means a ring system that can include.
'ALK5 억제제'란 용어는 본 발명에서 억제적 smad(예, smad6 및 smad7) 이외의 화합물로서 ALK5를 바람직하게는 p38 또는 제Ⅱ형 수용체에 대해 선택적으로 억제하는 화합물을 의미한다.The term 'ALK5 inhibitor' refers to a compound which, in the present invention, inhibits ALK5, preferably selectively against p38 or type II receptors, as compounds other than inhibitory smads (eg, smad6 and smad7).
'ALK5 매개 질환'이란 용어는 본 발명에서 ALK5에 의해 매개(또는, 조절)되는 임의의 질환, 예를 들어 TGF-β1신호 경로에서 smad2/3의 인산화의 억제에 의해 조절되는 질환을 말한다.The term 'ALK5 mediated disease' refers to any disease mediated (or modulated) by ALK5 in the present invention, eg, a disease that is controlled by the inhibition of phosphorylation of smad2 / 3 in the TGF-β1 signaling pathway.
본 발명에서 '궤양'이란 용어는 당뇨병성 궤양, 만성 궤양, 위장 궤양 및 십이지장 궤양을 들 수 있으나, 이들에만 국한되는 것은 아니다.In the present invention, the term 'ulcer' may include, but is not limited to, diabetic ulcers, chronic ulcers, gastrointestinal ulcers and duodenal ulcers.
또한, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 포함하는 바, 화학식 1로 표시되는 화합물은 공지되거나 시판중인 출발물질로부터 당 업계에 인식된 통상의 절차에 의해 제조 가능하다. 출발물질이 상업적으로 이용가능하지 않다면, 그의 합성이 본 발명에서 기술되거나 또는 당 업계에 공지된 방법에 의해 제조 가능하다.In addition, the present invention includes a method for preparing a compound represented by Chemical Formula 1, the compound represented by Chemical Formula 1 may be prepared by a conventional procedure recognized in the art from known or commercially available starting materials. If the starting materials are not commercially available, their synthesis can be prepared by methods described in the present invention or known in the art.
구체적으로 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 다음 반응식 1에 따라 제조할 수 있다.Specifically, the compound represented by Chemical Formula 1 may be prepared according to the following Scheme 1.
상기 반응식 1에서, R1, R2, 및 R3는 각각 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.In Reaction Scheme 1, R 1 , R 2 , and R 3 are each as defined in Chemical Formula 1.
상기 반응식 1에서 반응 중간물질로 생성되는 상기 화학식 2로 표시되는 화합물은 문헌[Tetrahedron Letters, Vol. 43, No.12, pp 2171-2173, 2002, WO 01/72737 A1, WO 00/0799 A1]을 참조하여 제조 사용하였다. 구체적으로는 아실클로라이드와 R3로 치환된 아세토벤젠 화합물을 LiHMDS, BuLi, NaH, NaOMe와 같은 염기 존재 하에서 반응시켜 상기 화학식 2로 표시되는 화합물을 제조하였다. 반응용매는 디클로로메탄, THF, 아세토니트릴, 1,4-디옥산 또는 톨루엔 등이 사용될 수 있다. 그리고, 상기 화학식 2로 표시되는 1,3-디키톤 화합물을 촉매량의 염산, 아세트산과 같은 산 존재 하에서, 상기 화학식 3으로 표시되는 히드라진 화합물과 디클로로메탄, THF, 아세토니트릴, 톨루엔 또는 크실렌 등의 용매에서 반응시켜 본 발명이 목적하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조할 수 있다.Compound represented by the formula (2) produced as a reaction intermediate in Scheme 1 is described in Tetrahedron Letters, Vol. 43, No. 12, pp 2171-2173, 2002, WO 01/72737 A1, WO 00/0799 A1. Specifically, the compound represented by Chemical Formula 2 was prepared by reacting an acyl chloride and an acetobenzene compound substituted with R 3 in the presence of a base such as LiHMDS, BuLi, NaH, and NaOMe. As the reaction solvent, dichloromethane, THF, acetonitrile, 1,4-dioxane or toluene may be used. Then, the hydrazine compound represented by the formula (3) and a solvent such as dichloromethane, THF, acetonitrile, toluene or xylene in the presence of an acid such as hydrochloric acid and acetic acid in a catalytic amount of the 1,3-dikitone compound represented by the formula (2) By reacting at the present invention, a compound represented by Chemical Formula 1 may be prepared.
또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 중, R3가 CONH2인 상기 화학식 5로 표시되는 화합물의 경우는 다음 반응식 2에 나타낸 바와 같이 R3가 CN인 상기 화학식 4로 표시되는 화합물을 28% H2O2와 6N NaOH를 에탄올 용매 중에서 반응시켜 얻을 수 있다.In addition, in the case of the compound represented by Formula 5 wherein R 3 is CONH 2 among the compounds represented by Formula 1 according to the present invention, the compound represented by Formula 4 wherein R 3 is CN is represented by the following Scheme 2 Can be obtained by reacting 28% H 2 O 2 with 6N NaOH in an ethanol solvent.
상기 반응식 2에서, R1및 R2는 각각 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.In Scheme 2, R 1 and R 2 are the same as defined in Chemical Formula 1.
상기 화학식 2로 표시되는 화합물의 제조방법 및 상기 화학식 2로 표시되는 화합물을 출발물질로 사용하여 본 발명이 목적하는 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 관한 상세한 설명은 다음의 실시예를 통하여 상세히 설명하기로 한다.Detailed description of the method for preparing a compound represented by Chemical Formula 2 and a method for preparing a compound represented by Chemical Formula 1 using the compound represented by Chemical Formula 2 as a starting material is as follows. It will be described in detail.
한편, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 유효성분으로 함유되어 있어 포유동물에서 ALK5에 의해 매개되는질환의 치료 및 예방에 유효한 약제를 포함한다.On the other hand, the present invention contains a compound represented by the formula (1) and a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient includes a drug effective in the treatment and prevention of diseases mediated by ALK5 in mammals.
본 발명은 ALK5에 의해 매개되는 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게서 ALK5 매개 질환을 치료하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method for treating ALK5-mediated disease in a mammal comprising administering to a mammal in need thereof a therapeutically effective amount of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Provide a method of treatment.
ALK5 매개 질환에는 만성 신장 질환, 급성 신장 질환, 상처 치유, 관절염, 골다공증, 신질환(kidney disease), 울혈성 심부전, 궤양, 안질환, 각막 손상, 당뇨병성 신장장애, 손상된 신경 기능, 알쯔하이머병, 영양상태 이상, 죽상경화증, 복막 및 피하 유착, 폐 섬유증 및 간섬유증(단, 이들에 국한되는 것은 아님)과 같이 섬유형성이 주원인인 임의의 질환 및 재협착을 들 수 있다. 본 발명에서의 '치료'라는 용어는 예방적 또는 치료적 요법을 의미한다.ALK5-mediated diseases include chronic kidney disease, acute kidney disease, wound healing, arthritis, osteoporosis, kidney disease, congestive heart failure, ulcers, eye diseases, corneal damage, diabetic kidney disorders, impaired nerve function, Alzheimer's disease, nutrition Any disease and restenosis where fibrosis is a major cause, such as condition abnormalities, atherosclerosis, peritoneal and subcutaneous adhesions, pulmonary fibrosis and hepatic fibrosis, but not limited to these. The term 'treatment' in the present invention means prophylactic or therapeutic therapy.
나아가, 본 발명은 본 발명은 TGF-β신호 경로의 억제, 예를 들어 제I형 또는 액티빈 유사 키나제 ALK5 에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화의 억제를 필요로 하는 포유동물에게 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게서 TGF-β신호 경로의 억제 방법을 제공한다.Furthermore, the present invention is directed to mammals in need of inhibition of the TGF-β signaling pathway, for example, the inhibition of phosphorylation of smad2 or smad3 by type I or activin-like kinase ALK5. A method of inhibiting the TGF-β signaling pathway in a mammal, comprising administering a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof in a therapeutically effective amount.
나아가, 본 발명은 포유동물에게서 TGF-β신호 경로를 억제하기 위한 약제를 제조함에 있어 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.Furthermore, the present invention provides the use of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the manufacture of a medicament for inhibiting the TGF-β signaling pathway in a mammal.
나아가, 본 발명은 매트릭스 형성의 억제, 예를 들어 제I형 또는 액티빈 유사 키나제 ALK5 수용체에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화의 억제를 필요로 하는 포유동물에게 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 치료 유효량으로 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에게서 매트릭스 형성을 억제하는 방법을 제공한다.Furthermore, the present invention provides a compound represented by the formula (1) or a pharmaceutical thereof in a mammal that requires inhibition of matrix formation, for example, inhibition of phosphorylation of smad2 or smad3 by the type I or activin-like kinase ALK5 receptor. There is provided a method of inhibiting matrix formation in a mammal comprising administering a therapeutically effective amount of an acceptable salt.
나아가, 본 발명은 포유동물에게서 매트릭스 형성을 억제하기 위한 약제를 제조함에 있어 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.Furthermore, the present invention provides the use of a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof in the manufacture of a medicament for inhibiting matrix formation in a mammal.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 표준 약학 담체 또는 희석제와 당 업계에 알려진 통상의 절차에 따라 배합하여 제조된 통상의 투여 형태로 투여할 수 있다. 이들 절차에는 원하는 제형에 적합하게 성분을 혼합하고, 과립화하고, 압축하거나 용해시키는 것을 포함한다.The compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be administered in a conventional dosage form prepared by combining the compound represented by Formula 1 with a standard pharmaceutical carrier or diluent according to conventional procedures known in the art. Can be. These procedures include mixing, granulating, compacting or dissolving the ingredients as appropriate for the desired formulation.
본 발명의 약학 조성물은 임의의 투여 경로에 맞게 제제될 수 있고 인간을 비롯한 포유동물에 경구, 국소 또는 비경구 투여하기에 적합한 형태를 포함한다.The pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated for any route of administration and include forms suitable for oral, topical or parenteral administration to mammals, including humans.
본 발명의 조성물은 임의의 투여 경로를 위해 제제될 수 있다. 본 발명의 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 로젠지, 크림 또는 액상 제제(예, 경구 또는 살균성 비경구 용액 또는 현탁액)의 형태일 수 있다.Compositions of the present invention may be formulated for any route of administration. The compositions of the present invention may be in the form of tablets, capsules, powders, granules, lozenges, creams or liquid preparations (eg oral or sterile parenteral solutions or suspensions).
본 발명의 국소 제제는 예컨대, 연고, 크림 또는 로션, 안연고 및 점안액 또는 이용액, 함침된 드레싱 및 에어로졸로 제공될 수 있고, 방부제, 약투과를 돕는 용매 및 연고 및 크림 중의 에몰리엔트와 같은 통상의 적합한 첨가제를 함유할 수있다.Topical formulations of the present invention may be provided, for example, as ointments, creams or lotions, eye ointments and eye drops or solutions, impregnated dressings and aerosols, and are conventional agents such as emollients in preservatives, solvents and ointments and creams that aid in drug penetration. It may contain suitable additives.
본 발명의 제제는 또한 크림 또는 오인트먼트 기재 및 로션용 에탄올 또는 올레일 알코올과 같은 상용성인 통상의 담체를 함유할 수 있다. 그러한 담체는 제제의 약 1% 내지 약 98%로 존재할 수 있다. 더욱 바람직하기로는 이들은 제제 중에 약 80% 이하로 존재할 것이다.The formulations of the present invention may also contain compatible conventional carriers such as ethanol or oleyl alcohols for cream or ointment bases and lotions. Such carriers may be present from about 1% to about 98% of the formulation. More preferably they will be present in the formulation at up to about 80%.
경구 투여용 정제 및 캡슐은 단위 투여 제공 형태로 존재할 수 있고, 결합제(예, 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트 또는 폴리비닐피롤리돈)와 같은 통상의 부형제, 락토오스, 당, 옥수수 전분, 인산칼슘, 소르비톨 또는 글리신과 같은 충전제, 스테아르산 마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실리카와 같은 타정용 윤활제, 감자 전분과 같은 붕해제 또는 소듐 라우릴 술페이트와 같은 허용가능한 습윤제를 함유할 수 있다. 정제는 통상의 약제 업계에 알려진 방법에 따라 코팅할 수 있다. 경구용 액상 제제는 예컨대 수성 또는 유성 현탁액, 용액, 에멀젼, 시럽 또는 엘릭시르의 형태일 수 있거나, 또는 사용전 물 또는 다른 적합한 비이클과 재구성하기 위해 건조한 산물로 제공될 수 있다. 그러한 액상 제제는 소르비톨, 메틸 셀룰로오스, 글로코오스 시럽, 젤라틴, 히드록시에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 알루미늄 스테아레이트 겔 또는 수소화 식용 지방과 같은 현탁화제, 렉시틴, 소르비탄 모노올레에이트 또는 아카시아와 같은 에멀젼제, 아몬드 오일, 유성 에스테르(예, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 에틸 알코올)와 같은 비수성 비이클(식용 오일을 함유할 수 있음), 메틸 또는 프로필p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산과 같은 방부제 및 원한다면 통상의 풍미제 또는착색제와 같은 첨가제를 함유할 수 있다.Tablets and capsules for oral administration may be in unit dosage form and may be conventional excipients such as binders (eg, syrup, acacia, gelatin, sorbitol, tragacanth or polyvinylpyrrolidone), lactose, sugar, corn starch , Fillers such as calcium phosphate, sorbitol or glycine, tableting lubricants such as magnesium stearate, talc, polyethylene glycol or silica, disintegrating agents such as potato starch or acceptable wetting agents such as sodium lauryl sulfate. Tablets may be coated according to methods known in the conventional pharmaceutical art. Oral liquid preparations may, for example, be in the form of aqueous or oily suspensions, solutions, emulsions, syrups or elixirs, or may be provided as a dry product for reconstitution with water or other suitable vehicle before use. Such liquid preparations include suspending agents, such as sorbitol, methyl cellulose, glucose syrup, gelatin, hydroxyethyl cellulose, carboxymethyl cellulose, aluminum stearate gel or hydrogenated edible fats, emulsions such as lecithin, sorbitan monooleate or acacia Agents, non-aqueous vehicles (which may contain edible oils) such as almond oils, oily esters (e.g. glycerin, propylene glycol or ethyl alcohol), preservatives such as methyl or propyl p -hydroxybenzoate or sorbic acid and if desired It may contain additives such as conventional flavoring or coloring agents.
좌약은 통상의 좌약 기재, 예컨대 코코아-버터 또는 기타 글리세라이드를 함유할 것이다.Suppositories will contain conventional suppository bases such as cocoa-butter or other glycerides.
비경구 투여의 경우, 유체 단위 투여 형태는 화합물 및 살균성 비이클(물이 바람직함)을 이용해 제조한다. 화합물은 사용된 비이클 및 농도에 따라 비이클 중에 현탁화되거나 용해될 수 있다. 용액을 제조함에 있어, 본 발명의 화합물은 주입용 물에 용해시킬 수 있고, 필터는 적합한 바이알 또는 앰플로 충전시키고 밀봉시키기 전에 살균시킬 수 있다. 또한, 국소 마취제, 방부제 및 완충제와 같은 물질을 비이클 중에 용해시킬 수 있다. 본 발명의 조성물은 안정성을 증가시키기 위하여 바이알로 충전한 후에 냉동시킬 수 있고 물은 진공 하에서 제거할 수 있다. 이어서, 동결 건조된 분말을 바이알에 밀봉하고, 수반되는 주입용 물의 바이알을 사용전 액체를 재구성하기 위해 공급한다. 비경구 현탁액은 본 발명의 화합물이 용해되는 대신에 비이클 중에 현탁되고 살균이 여과를 수반할 수 없다는 점을 제외하고는 실질적으로 동일한 방식으로 제조된다. 본 발명의 화합물은 살균성 비이클에 현탁시키기 전에 에틸렌 옥사이드에 노출시킴으로써 살균 가능하다. 또한, 계면활성제 또는 습윤제를 본 발명의 조성물에 포함시켜 화합물의 균일한 분포를 촉진시킬 수도 있다.For parenteral administration, the fluid unit dosage form is prepared using a compound and a bactericidal vehicle (preferably water). The compound may be suspended or dissolved in the vehicle, depending on the vehicle and concentration used. In preparing the solution, the compounds of the present invention can be dissolved in water for injection and the filter can be sterilized before filling and sealing with a suitable vial or ampoule. In addition, substances such as local anesthetics, preservatives and buffers can be dissolved in the vehicle. The composition of the present invention can be frozen after filling with a vial to increase stability and water can be removed under vacuum. The lyophilized powder is then sealed in a vial and the accompanying vial of water for injection is fed to reconstitute the liquid before use. Parenteral suspensions are prepared in substantially the same manner except that the compounds of the present invention are suspended in the vehicle instead of dissolving and sterilization cannot involve filtration. Compounds of the invention can be sterilized by exposure to ethylene oxide prior to suspending in the bactericidal vehicle. Surfactants or wetting agents may also be included in the compositions of the present invention to promote uniform distribution of the compounds.
본 발명의 조성물은 투여 방법에 따라 활성 물질을 0.1 중량% 이상, 바람직하게는 10 내지 60 중량% 함유한다. 조성물이 투여 단위를 포함하는 경우, 각각의 단위는 활성 성분을 바람직하게는 50 내지 500 mg 함유하는 것이다. 성인을 치료하는데 사용되는 투여량은 투여 경로 및 빈도에 따라 다르지만 바람직하게는 100 내지 3,000 mg/일, 예컨대 1,500 mg/일이다. 그러한 투여량은 1.5 내지 50 mg/kg/일에 해당한다. 투여량은 적합하게는 5 내지 20 mg/kg/일이다.The composition of the present invention contains at least 0.1% by weight, preferably 10 to 60% by weight of the active substance, depending on the method of administration. If the composition comprises dosage units, each unit preferably contains 50 to 500 mg of the active ingredient. The dosage used to treat an adult depends on the route and frequency of administration but is preferably between 100 and 3,000 mg / day, such as 1,500 mg / day. Such dosages correspond to 1.5 to 50 mg / kg / day. The dosage is suitably 5 to 20 mg / kg / day.
당 업계의 숙련자들은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 개개 투여량의 최적 양 및 간격이 치료하고자 하는 증상, 투여 형태, 경로 및 부위의 특성 및 정도에 의해 결정될 것이고, 그러한 최적 양 및 간격은 통상의 기술로 결정될 것이라는 점을 인식할 것이다. 또한, 당업자들은 치료의 최적 과정, 즉 소정의 날에 대한 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 일일당 투여 회수는 치료 결정 시험의 통상적인 과정을 사용해 확인할 수 있음을 알 것이다.Those skilled in the art will determine that the optimal amount and interval of the individual dosage of the compound represented by Formula 1 will be determined by the nature and extent of the condition, dosage form, route and site to be treated, and such optimal amount and interval will be It will be appreciated that the technology will be determined. In addition, those skilled in the art will appreciate that the optimal course of treatment, ie the number of doses per day of the compound represented by Formula 1 for a given day, can be ascertained using conventional procedures of treatment determination testing.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 상기한 투여 범위로 투여될 때, 어떠한 독성도 나타나지 않는다.When the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof is administered in the above-described dosage range, no toxicity is shown.
본 명세서에 인용된 특허 및 특허출원을 비롯한(이들 문헌에 국한되는 것은 아님) 모든 간행물은 마치 각각의 문헌이 참고문헌으로서 구체적이고 개별적으로 삽입된 것처럼 참고문헌으로서 인용한다.All publications, including but not limited to patents and patent applications cited herein, are incorporated by reference as if each document were specifically and individually incorporated by reference.
이상에서 설명한 바와 같은 본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는 바, 아래 실시예들은 단지 예시적인 것으로 해석되어야 하며 어떠한 식으로든 본 발명의 범위를 제한하도록 사용되어서는 안될 것이다. 이들 실시예에서, 질량 스펙트럼은 전자분무(ES)이온화기술에 의한 Micromass Platform(M@ldi사 제품)을 사용해 수행하였다. 그리고 핵자기 공명 스펙트럼은 Varian Technology사에 의한 Unity INOVA 400MHz FT-NMR을 사용하여 구조를 분석하였다.The present invention as described above will be described in more detail based on the following examples, which are to be construed as illustrative only and should not be used to limit the scope of the present invention in any way. In these examples, mass spectra were performed using the Micromass Platform (manufactured by M @ ldi) by electrospray (ES) ionization technology. Nuclear magnetic resonance spectra were analyzed using Unity INOVA 400MHz FT-NMR by Varian Technology.
실시예 1: 4-(3-벤조[1,3]디옥솔-5-일-3-옥소-프로피오닐)벤조니트릴(A1)Example 1: 4- (3-benzo [1,3] dioxol-5-yl-3-oxo-propionyl) benzonitrile (A1)
4-아세틸벤즈니트릴(1,462 mg, 10.00 mmol, 1.00 당량)을 무수 THF(30 mL)에 녹인 후, -78 ℃까지 냉각하였다. 이후 1M LiHMDS/THF 용액을 적가하고, 10분간 교반하였다. -78 ℃에서 반응 혼합물에 무수 THF(15 mL)에 녹인 피페노닐일 클로라이드(2,124 mg, 12.00 mmol, 1.20 당량)를 적가하였다. -78 ℃에서 2시간 교반후 반응 온도를 상온까지 올렸다. 상온에서 14시간 교반한 후, 반응 혼합물에 20% 시트르산 수용액(20 mL)을 가하였다. 감압 증류하여 용매를 제거한 후, 디클로로메탄(150 mL), 포화 NaHCO3수용액(100 mL)에 분배하였다. 유기층을 분리하여 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올에서 재결정하여 표제 화합물 A1을 얻었다 (1,213 mg, 41.9%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 6.06(s, 2H), 6.72(s, 1H), 6.88(dd, 1H), 7.44(d, 1H), 7.59(m, 2H), 7.74(d, 2H), 8.01(d, 2H)4-acetylbenznitrile (1,462 mg, 10.00 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in anhydrous THF (30 mL) and then cooled to -78 ° C. Then 1M LiHMDS / THF solution was added dropwise and stirred for 10 minutes. To the reaction mixture was added dropwise pipefenylyl chloride (2,124 mg, 12.00 mmol, 1.20 equiv) in anhydrous THF (15 mL) at -78 ° C. After stirring at −78 ° C. for 2 hours, the reaction temperature was raised to room temperature. After stirring for 14 hours at room temperature, 20% citric acid aqueous solution (20 mL) was added to the reaction mixture. After distillation under reduced pressure to remove the solvent, the mixture was partitioned into dichloromethane (150 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 solution (100 mL). The organic layer was separated, washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and then recrystallized in methanol to give the title compound A1 (1,213 mg, 41.9%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 6.06 (s, 2H), 6.72 (s, 1H), 6.88 (dd, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.59 (m, 2H), 7.74 (d, 2H ), 8.01 (d, 2H)
실시예 2: 4-(5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-피리딘-2-일-1Example 2: 4- (5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-1-pyridin-2-yl-1 HH -피라졸-3-일)벤조니트릴(A2)-Pyrazol-3-yl) benzonitrile (A2)
A1(562 mg, 1.92 mmol, 1.00 당량)의 에탄올(25 mL) 현탁액에, 히드라지노피리딘(218 mg, 2.00 mmol, 1.04 당량)과 촉매량의 염산(0.100 mL)을 가하고 환류하에서 8시간 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각한 후, 여과하였다. 여과된 고체를 에틸 아세테이트, 헥산, 디클로로메탄1대 2대 1의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A2를 얻었다 (306 mg, 43.5%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.99(s, 2H), 6.77(m, 4H), 7.29(m, 1H), 7.53(dd, 1H), 7.71(td, 2H), 7.80(td, 1H), 8.03(m, 2H), 8.46(m, 1H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 101.58, 106.51, 108.58, 109.36, 111.64, 119.22, 119.38, 122.94, 123.15, 124.32, 126.53, 127.58, 132.64, 132.71, 137.39, 138.58, 145.52, 147.81, 148.17, 148.95, 150.72, 152.40; MSm/z367(MH+)To an ethanol (25 mL) suspension of A1 (562 mg, 1.92 mmol, 1.00 equiv), hydrazinopyridine (218 mg, 2.00 mmol, 1.04 equiv) and catalytic amount of hydrochloric acid (0.100 mL) were added and stirred under reflux for 8 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and then filtered. The filtered solid was purified by flash chromatography on silica using ethyl acetate, hexane, dichloromethane in a ratio of 1: 1 to dichloromethane to give the title compound A2 (306 mg, 43.5%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 5.99 (s, 2H), 6.77 (m, 4H), 7.29 (m, 1H), 7.53 (dd, 1H), 7.71 (td, 2H), 7.80 (td, 1H ), 8.03 (m, 2 H), 8.46 (m, 1 H); 13 C NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 101.58, 106.51, 108.58, 109.36, 111.64, 119.22, 119.38, 122.94, 123.15, 124.32, 126.53, 127.58, 132.64, 132.71, 137.39, 138.58, 145.52, 147.81, 148.95. 150.72, 152.40; MS m / z 367 (MH + )
실시예 3: 4-(5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-피리딘-2-일-1Example 3: 4- (5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-1-pyridin-2-yl-1 HH -피라졸-3-일)벤즈아미드(A3)-Pyrazol-3-yl) benzamide (A3)
A2(163 mg, 0.44 mmol, 1.00 당량)를 95% 에탄올(25 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.110 mL, 1.73 mmol, 3.93 당량)와 6N NaOH(0.021 mL, 0.123 mmol, 0.28 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×30 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대19의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A3을 얻었다 (135 mg, 79.8%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.57(br s, 1H), 5.96(s, 2H), 6.16(br s, 1H), 6.76(m, 4H), 7.24(m, 1H), 7.52(d, 1H), 7.77(td, 1H), 7.85(d, 2H), 7.98(d, 2H), 8.41(dd, 1H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 101.56, 106.57, 108.56, 109.41, 119.39, 122.93, 124.60, 126.24, 128.02, 132.80, 136.61, 138.53, 148.07, 148.91, 151.53, 152.56, 169.08; MSm/z385(MH+)A2 (163 mg, 0.44 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in 95% ethanol (25 mL), 20 28% H at ℃2O2(0.110 mL, 1.73 mmol, 3.93 equiv) and 6N NaOH (0.021 mL, 0.123 mmol, 0.28 equiv) were added and the reaction temperature was 55 Raised to C and stirred for 3 h. 0 reaction mixture Neutralize by adding 1N HCl at ° C and the neutralized reaction mixture was extracted with dichloromethane (2 x 30 mL). The extracted dichloromethane solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using methanol and dichloromethane in a ratio of 1:19 to give the title compound A3 (135 mg, 79.8%).OneH NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.57 (br s, 1H), 5.96 (s, 2H), 6.16 (br s, 1H), 6.76 (m, 4H), 7.24 (m, 1H), 7.52 (d, 1H), 7.77 (td, 1H), 7.85 (d, 2H), 7.98 (d, 2H), 8.41 (dd, 1H);13C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 101.56, 106.57, 108.56, 109.41, 119.39, 122.93, 124.60, 126.24, 128.02, 132.80, 136.61, 138.53, 148.07, 148.91, 151.53, 152.56, 169.08; MSm / z385 (MH+)
실시예 4: 4-[5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1Example 4: 4- [5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-1- (6-methylpyridin-2-yl) -1 HH -피라졸-3-일]벤조니트릴(A4)-Pyrazol-3-yl] benzonitrile (A4)
A1(293 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)의 에탄올(15 mL) 현탁액에, (6-메틸피리딘-2-일)히드라진(123 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)과 촉매량의 염산(0.060 mL)을 가하고 환류하에서 8시간 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각한 후, 여과하였다. 여과된 고체를 에틸 아세테이트, 헥산, 디클로로메탄1대 2대 1의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A4를 얻었다(212 mg, 55.7%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.46(s, 3H), 5.94(s, 2H), 6.74(m, 4H), 7.10(d, 1H), 7.17(d, 1H), 7.60(t,1H), 7.65(d, 2H), 7.98(d, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 24.31, 101.46, 106.10, 108.33, 109.44, 111.42, 116.43, 119.18, 122.79, 123.01, 124.31, 126.48, 132.57, 137.45, 138.57, 145.48, 147.61, 147.99, 150.46, 151.53, 158.46To an ethanol (15 mL) suspension of A1 (293 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), (6-methylpyridin-2-yl) hydrazine (123 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) and catalytic amount of hydrochloric acid (0.060 mL) It was added and stirred under reflux for 8 hours. The reaction mixture was cooled to room temperature and then filtered. The filtered solid was purified by flash chromatography on silica using ethyl acetate, hexane, dichloromethane in a ratio of 1: 1 to dichloromethane to give the title compound A4 (212 mg, 55.7%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 2.46 (s, 3H), 5.94 (s, 2H), 6.74 (m, 4H), 7.10 (d, 1H), 7.17 (d, 1H), 7.60 (t, 1H ), 7.65 (d, 2H), 7.98 (d, 2H); 13 C NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 24.31, 101.46, 106.10, 108.33, 109.44, 111.42, 116.43, 119.18, 122.79, 123.01, 124.31, 126.48, 132.57, 137.45, 138.57, 145.48, 147.61, 147.99, 150. 158.46
실시예 5: 4-[5-벤조[1,3]디옥솔-5-일-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1Example 5: 4- [5-benzo [1,3] dioxol-5-yl-1- (6-methylpyridin-2-yl) -1 HH -피라졸-3-일]벤즈아미드(A5)-Pyrazol-3-yl] benzamide (A5)
A4(172 mg, 0.45 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.110 mL, 1.73 mmol, 3.84 당량)와 6N NaOH(0.021 mL, 0.123 mmol, 0.27 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×25 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄 용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트와 메탄올을 9대1의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A5를 얻었다 (121 mg, 67.5%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.46(s, 3H), 5.63(br s, 1H), 5.96(s, 2H), 6.08(br s, 1H), 6.76(m, 4H), 7.10(d, 1H), 7.19(d, 1H), 7.61(t, 1H), 7.85(d, 2H), 7.99(dd, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 24.42, 101.50, 106.23, 108.40, 109.59, 116.53, 122.68, 123.10, 124.71, 126.29, 127.99, 132.71, 136.75, 138.59, 145.31, 147.65, 147.97, 151.39, 151.77, 158.51, 169.14; MSm/z399(MH+)A4 (172 mg, 0.45 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in 95% ethanol (15 mL), 20 28% H at ℃2O2(0.110 mL, 1.73 mmol, 3.84 equiv) and 6N NaOH (0.021 mL, 0.123 mmol, 0.27 equiv) were added and the reaction temperature was 55 Raised to C and stirred for 3 h. 0 reaction mixture Neutralize by adding 1N HCl at < 0 > C and the neutralized reaction mixture was extracted with dichloromethane (2 x 25 mL). The extracted dichloromethane solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using a 9: 1 ratio of ethyl acetate and methanol to give the title compound A5 (121 mg, 67.5%).OneH NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.46 (s, 3H), 5.63 (br s, 1H), 5.96 (s, 2H), 6.08 (br s, 1H), 6.76 (m, 4H), 7.10 (d, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.85 (d, 2H), 7.99 (dd, 2H);13C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 24.42, 101.50, 106.23, 108.40, 109.59, 116.53, 122.68, 123.10, 124.71, 126.29, 127.99, 132.71, 136.75, 138.59, 145.31, 147.65, 147.97, 151.39, 151.77, 158.51, 158.51, 158.51 MSm / z399 (MH+)
실시예 6: 4-(3-옥소-3-퀴녹살린-6-일-프로피오닐)벤조니트릴(A6)Example 6: 4- (3-oxo-3-quinoxalin-6-yl-propionyl) benzonitrile (A6)
4-아세틸벤즈니트릴(726 mg, 5.00 mmol, 1.00 당량)을 무수 THF(15 mL)에 녹인 후, -78 ℃까지 냉각하였다. 이후 1M LiHMDS/THF 용액(7.2 mL, 7.20 mmol, 1.40 당량)을 적가하고, 10분간 교반하였다. -78 ℃에서 반응 혼합물에 무수 THF(30 mL)에 녹인 퀴녹살린닐 클로라이드(1156 mg, 6.00 mmol, 1.20 당량)를 적가하였다. -78 ℃에서 1시간 교반후 반응 온도를 상온까지 올렸다. 상온에서 14시간 교반한 후, 반응 혼합물에 20% 시트르산 수용액(5 mL)을 가하였다. 감압 증류하여 용매를 제거한 후, 에틸 아세테이트(50 mL), 포화 NaHCO3수용액(100 mL)에 분배하였다. 수용액층을 에틸 아세테이트(50 mL)로 추출하였다. 혼합 유기층을 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에탄올에서 재결정하여 표제 화합물 A6을 얻었다 (634 mg, 42.1%).1H NMR(400MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.63(s, 1H), 7.93(d, 2H), 8.12(s, 1H), 8.18(d, 1H), 8.37(d, 2H), 8.49(dd, 1H), 8.99(dd, 2H), 16.41(br s, 1H)4-acetylbenznitrile (726 mg, 5.00 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in anhydrous THF (15 mL) and cooled to -78 ° C. Then 1M LiHMDS / THF solution (7.2 mL, 7.20 mmol, 1.40 equiv) was added dropwise and stirred for 10 minutes. To the reaction mixture was added dropwise quinoxalinyl chloride (1156 mg, 6.00 mmol, 1.20 equiv) dissolved in anhydrous THF (30 mL) at -78 ° C. After stirring at −78 ° C. for 1 hour, the reaction temperature was raised to room temperature. After stirring for 14 hours at room temperature, 20% citric acid aqueous solution (5 mL) was added to the reaction mixture. The solvent was removed by distillation under reduced pressure, and then partitioned into ethyl acetate (50 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 solution (100 mL). The aqueous layer was extracted with ethyl acetate (50 mL). The combined organic layers were washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and then recrystallized in ethanol to give the title compound A6 (634 mg, 42.1%). 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.63 (s, 1H), 7.93 (d, 2H), 8.12 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.37 (d, 2H), 8.49 (dd , 1H), 8.99 (dd, 2H), 16.41 (br s, 1H)
실시예 7: 4-(1-피리딘-2-일-5-퀴녹살린-6-일-1Example 7: 4- (1-pyridin-2-yl-5-quinoxalin-6-yl-1 HH -피라졸-3-일)벤조니트릴(A7)-Pyrazol-3-yl) benzonitrile (A7)
A6(301 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)의 에탄올(25 mL) 현탁액에, 히드라지노피리딘(109 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)과 촉매량의 염산(0.060 mL)을 가하고 환류하에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각한 후, 감압증류하여 용매를 제거하였다. 디클로로메탄(50 mL)과 포화 NaHCO3수용액(50 mL)에 분배하였다. 수용액층을 디클로로메탄(2×15 mL)으로 추출하였다. 혼합 유기층을 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트, 헥산, 디클로로메탄1대 1대 22의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A7을 얻었다 (35 mg, 9.3%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 7.07(s, 1H), 7.28(m, 1H), 7.48(dd, 2H), 7.66(dd, 2H), 7.90(m, 2H), 8.19(d, 1H), 8.28(d, 1H), 8.48(dd, 1H), 8.57(d, 1H), 8.86(dd, 2H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 108.24, 112.18, 118.17, 118.80, 123.09, 126.15, 128.43, 129.62, 130.19, 132.17, 134.39, 135.99, 139.00, 143.42, 143.58, 143.85, 145.13, 145.72, 148.24, 151.55, 152.37; MSm/z375(MH+)To an ethanol (25 mL) suspension of A6 (301 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), hydrazinopyridine (109 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) and catalytic amount of hydrochloric acid (0.060 mL) were added and stirred under reflux for 14 hours. After cooling the reaction mixture to room temperature, the solvent was removed by distillation under reduced pressure. Partition between dichloromethane (50 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 (50 mL). The aqueous layer was extracted with dichloromethane (2 x 15 mL). The combined organic layers were washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using ethyl acetate, hexane, dichloromethane in a ratio of 1: 1 to 1:22 to give the title compound A7 (35 mg, 9.3%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 7.07 (s, 1H), 7.28 (m, 1H), 7.48 (dd, 2H), 7.66 (dd, 2H), 7.90 (m, 2H), 8.19 (d, 1H ), 8.28 (d, 1H), 8.48 (dd, 1H), 8.57 (d, 1H), 8.86 (dd, 2H); 13 C NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 108.24, 112.18, 118.17, 118.80, 123.09, 126.15, 128.43, 129.62, 130.19, 132.17, 134.39, 135.99, 139.00, 143.42, 143.58, 143.85, 145.13, 145.72, 145.72, 145.72 152.37; MS m / z 375 (MH + )
실시예 8: 4-(1-피리딘-2-일-5-퀴녹살린-6-일-1Example 8: 4- (1-pyridin-2-yl-5-quinoxalin-6-yl-1 HH -피라졸-3-일)벤즈아미드(A8)-Pyrazol-3-yl) benzamide (A8)
A7(54 mg, 0.34 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.076 mL, 1.19 mmol, 3.29 당량)와 6N NaOH(0.015 mL, 0.09 mmol, 0.26 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×35 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하고 메탄올에서 재결정하여 정제함으로써 표제 화합물 A8을 얻었다 (36 mg, 65.5%).1H NMR(400MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.14(br s, 1H), 7.33(m, 3H), 7.79(d, 1H), 7.85(d, 2H), 7.90(br s, 1H), 7.95(m, 2H), 8.10(d, 1H), 8.28(m, 1H), 8.42(dd, 1H), 8.54(d, 1H), 8.85(dd, 2H)A7 (54 mg, 0.34 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in 95% ethanol (15 mL), 20 28% H at ℃2O2(0.076 mL, 1.19 mmol, 3.29 equiv) and 6N NaOH (0.015 mL, 0.09 mmol, 0.26 equiv) were added and the reaction temperature was 55 Raised to C and stirred for 3 h. 0 reaction mixture Neutralize by adding 1N HCl at ° C and the neutralized reaction mixture was extracted with dichloromethane (2 x 35 mL). The extracted dichloromethane solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated, then flash chromatographed on silica using methanol and dichloromethane in a ratio of 1 to 9 and recrystallized from methanol to give the title compound A8 (36 mg, 65.5%).OneH NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.14 (br s, 1H), 7.33 (m, 3H), 7.79 (d, 1H), 7.85 (d, 2H), 7.90 (br s, 1H), 7.95 (m, 2H), 8.10 (d, 1H), 8.28 (m, 1H), 8.42 (dd, 1H), 8.54 (d, 1H), 8.85 (dd, 2H)
실시예 9: 4-[1-(6-메틸피리딘-2-일)-5-퀴녹살린-6-일-1Example 9: 4- [1- (6-methylpyridin-2-yl) -5-quinoxalin-6-yl-1 HH -피라졸-3-일]벤조니트릴(A9)-Pyrazol-3-yl] benzonitrile (A9)
A6(235 mg, 0.78 mmol, 1.00 당량)의 에탄올(25 mL) 현탁액에, (6-메틸피리딘-2-일)히드라진(106 mg, 0.86 mmol, 1.10 당량)과 촉매량의 염산(0.020 mL)을 가하고 환류하에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각한 후, 감압증류하여 용매를 제거하였다. 디클로로메탄(40 mL)과 포화 NaHCO3수용액(40 mL)에 분배하였다. 수용액층을 디클로로메탄(2×15 mL)으로 추출하였다. 혼합 유기층을 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트, 헥산, 디클로로메탄1대 1대 22의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A9를 얻었다 (35 mg, 11.0%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.26(s, 3H), 7.02(s, 1H), 7.08(d, 1H), 7.45(d, 2H), 7.60(m, 3H), 7.72(t,1H), 8.15(d, 1H), 8.45(dd, 1H), 8.53(d, 1H), 8.82(dd, 2H)To a ethanol (25 mL) suspension of A6 (235 mg, 0.78 mmol, 1.00 equiv) was added (6-methylpyridin-2-yl) hydrazine (106 mg, 0.86 mmol, 1.10 equiv) and a catalytic amount of hydrochloric acid (0.020 mL). It was added and stirred at reflux for 14 hours. After cooling the reaction mixture to room temperature, the solvent was removed by distillation under reduced pressure. Partition between dichloromethane (40 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 (40 mL). The aqueous layer was extracted with dichloromethane (2 x 15 mL). The combined organic layers were washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using ethyl acetate, hexane and dichloromethane in a ratio of 1 to 22 to give the title compound A9 (35 mg, 11.0%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 2.26 (s, 3H), 7.02 (s, 1H), 7.08 (d, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.60 (m, 3H), 7.72 (t, 1H ), 8.15 (d, 1H), 8.45 (dd, 1H), 8.53 (d, 1H), 8.82 (dd, 2H)
실시예 10: 4-[1-(6-메틸피리딘-2-일)-5-퀴녹살린-6-일-1Example 10: 4- [1- (6-methylpyridin-2-yl) -5-quinoxalin-6-yl-1 HH -피라졸-3-일]벤즈아미드(A10)-Pyrazol-3-yl] benzamide (A10)
A9(40 mg, 0.10 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.024 mL, 0.38 mmol, 3.80 당량)와 6N NaOH(0.005 mL, 0.03 mmol, 0.30 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×20 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하고, 메탄올에서 재결정하여 정제함으로써 표제 화합물 A10을 얻었다 (24 mg, 68.9%).1H NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 2.27(s, 3H), 7.05(br s, 1H), 7.15(d, 1H), 7.18(s, 1H), 7.34(d, 2H), 7.46(d, 1H), 7.75(t,1H), 7.85(m, 3H), 8.08(d, 1H), 8.40(dd, 1H), 8.51(s, 1H), 8.82(dd, 2H)A9 (40 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in 95% ethanol (15 mL), 20 28% H at ℃2O2(0.024 mL, 0.38 mmol, 3.80 equiv) and 6N NaOH (0.005 mL, 0.03 mmol, 0.30 equiv) were added and the reaction temperature was 55 Raised to C and stirred for 3 h. 0 reaction mixture Neutralize by adding 1N HCl at < 0 > C and the neutralized reaction mixture was extracted with dichloromethane (2x20 mL). The extracted dichloromethane solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated, then flash chromatographed on silica using methanol and dichloromethane in a ratio of 1 to 9, and recrystallized and purified in methanol to obtain the title compound A10 (24 mg, 68.9%).OneH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2.27 (s, 3H), 7.05 (br s, 1H), 7.15 (d, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.34 (d, 2H), 7.46 (d, 1H), 7.75 (t, 1H) ), 7.85 (m, 3H), 8.08 (d, 1H), 8.40 (dd, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.82 (dd, 2H)
실시예 11: 4-[3-(4-메톡시페닐)-3-옥소-프로피오닐]벤조니트릴(A11)Example 11: 4- [3- (4-methoxyphenyl) -3-oxo-propionyl] benzonitrile (A11)
4-아세틸벤즈니트릴(2,903 mg, 20.00 mmol, 1.00 당량)을 무수 THF(50 mL)에 녹인 후, -78 ℃까지 냉각하였다. 이후 1M LiHMDS/THF 용액(25.00 mL, 25.00 mmol, 1.25 당량)을 적가하고, 10분간 교반하였다. -78 ℃에서 반응 혼합물에 무수 THF(50 mL)에 녹인p-아니솔일 클로라이드(3412 mg, 20.00 mmol, 1.00 당량)를 적가하였다. -78 ℃에서 1시간 교반후 반응 온도를 상온까지 올렸다. 상온에서 14시간 교반한 후, 반응 혼합물에 20% 시트르산 수용액(15 mL)을 가하였다. 감압 증류하여 용매를 제거한 후, 에틸 아세테이트(150 mL), 포화 NaHCO3수용액(150 mL)에 분배하였다. 수용액층을 에틸 아세테이트(2×50 mL)로 추출하였다. 혼합 유기층을 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에탄올에서 재결정하여 표제 화합물 A11을 얻었다(3211 mg, 57.5%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 3.87(s, 3H), 6.76(s, 1H), 6.96(td, 2H), 7.74(td, 2H), 7.95(td, 2H), 8.01(td, 2H), 16.75(s, 1H)4-acetylbenznitrile (2,903 mg, 20.00 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in anhydrous THF (50 mL) and then cooled to -78 ° C. Then 1M LiHMDS / THF solution (25.00 mL, 25.00 mmol, 1.25 equiv) was added dropwise and stirred for 10 minutes. To the reaction mixture was added dropwise p -anisoleyl chloride (3412 mg, 20.00 mmol, 1.00 equiv) dissolved in anhydrous THF (50 mL) at -78 ° C. After stirring at −78 ° C. for 1 hour, the reaction temperature was raised to room temperature. After stirring for 14 hours at room temperature, 20% citric acid aqueous solution (15 mL) was added to the reaction mixture. The solvent was removed by distillation under reduced pressure, and then partitioned into ethyl acetate (150 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 solution (150 mL). The aqueous layer was extracted with ethyl acetate (2 x 50 mL). The combined organic layers were washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and then recrystallized in ethanol to give the title compound A11 (3211 mg, 57.5%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 3.87 (s, 3H), 6.76 (s, 1H), 6.96 (td, 2H), 7.74 (td, 2H), 7.95 (td, 2H), 8.01 (td, 2H ), 16.75 (s, 1 H)
실시예 12: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-피리딘-2-일-1Example 12: 4- [5- (4-methoxyphenyl) -1-pyridin-2-yl-1 HH -피라졸-3일]벤조니트릴(A12)-Pyrazol-3yl] benzonitrile (A12)
A11(279 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)의 에탄올(25 mL) 현탁액에, 히드라지노피리딘(109 mg, 1.00 mmol, 1.00 당량)과 촉매량의 염산(0.060 mL)을 가하고 환류하에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각한 후, 감압증류하여 용매를 제거하였다. 디클로로메탄(50 mL)과 포화 NaHCO3수용액(50 mL)에 분배하였다. 수용액층을 디클로로메탄(2×15 mL)으로 추출하였다. 혼합 유기층을 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트, 헥산, 디클로로메탄1대 1대 25의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A12를 얻었다 (32 mg, 9.1%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 3.83(s, 3H), 6.77(s, 1H), 6.95(td, 2H), 7.18(m, 1H), 7.40(dd, 2H), 7.59(dd, 2H), 7.81(m, 4H), 8.21(dd, 1H);13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 55.56, 107.48, 111.82, 114.36, 118.08, 118.91, 122.63, 125.23, 127.46, 129.51, 132.07, 136.37, 138.83, 143.20, 148.14, 152.53, 152.87, 160.21To an ethanol (25 mL) suspension of A11 (279 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv), hydrazinopyridine (109 mg, 1.00 mmol, 1.00 equiv) and catalytic amount of hydrochloric acid (0.060 mL) were added and stirred under reflux for 14 hours. After cooling the reaction mixture to room temperature, the solvent was removed by distillation under reduced pressure. Partition between dichloromethane (50 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 (50 mL). The aqueous layer was extracted with dichloromethane (2 x 15 mL). The combined organic layers were washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using ethyl acetate, hexane, dichloromethane in a ratio of 1: 1 to 1:25 to give the title compound A12 (32 mg, 9.1%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 3.83 (s, 3H), 6.77 (s, 1H), 6.95 (td, 2H), 7.18 (m, 1H), 7.40 (dd, 2H), 7.59 (dd, 2H ), 7.81 (m, 4 H), 8.21 (dd, 1 H); 13 C NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 55.56, 107.48, 111.82, 114.36, 118.08, 118.91, 122.63, 125.23, 127.46, 129.51, 132.07, 136.37, 138.83, 143.20, 148.14, 152.53, 152.87, 160.21
실시예 13: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-피리딘-2-일-1Example 13: 4- [5- (4-methoxyphenyl) -1-pyridin-2-yl-1 HH -피라졸-3일]벤즈아미드(A13)-Pyrazol-3yl] benzamide (A13)
A12(78 mg, 0.22 mmol, 1.00 당량)를 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.048 mL, 0.76 mmol, 3.45 당량)와 6N NaOH(0.012 mL, 0.06 mmol, 0.27 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×20 mL)로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A13을 얻었다 (49 mg, 60.1%).1H NMR(400MHz, CD3OD) δ 3.83(s, 3H), 6.83(s, 1H), 6.95(td, 2H), 7.28(m, 1H), 7.33(dd, 2H), 7.57(d, 1H), 7.80(m, 5H), 8.30(d, 1H), NH not observed;13C NMR(400MHz, CDCl3) δ 55.70, 107.03, 114.64, 119.88, 123.60, 125.51, 127.83, 128.10, 129.12, 133.52, 134.63, 139.48, 144.69, 148.77, 152.54, 153.48, 160.50, 170.69A12 (78 mg, 0.22 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in 95% ethanol (15 mL), 20 28% H at ℃2O2(0.048 mL, 0.76 mmol, 3.45 equiv) and 6N NaOH (0.012 mL, 0.06 mmol, 0.27 equiv) were added and the reaction temperature was 55 Raised to C and stirred for 3 h. 0 reaction mixture Neutralize by adding 1N HCl at < 0 > C and the neutralized reaction mixture was extracted with dichloromethane (2 x 20 mL). The extracted dichloromethane solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using methanol to dichloromethane in a ratio of 1 to 9 to give the title compound A13 (49 mg, 60.1%).OneH NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.83 (s, 3H), 6.83 (s, 1H), 6.95 (td, 2H), 7.28 (m, 1H), 7.33 (dd, 2H), 7.57 (d, 1H), 7.80 (m, 5H ), 8.30 (d, 1 H), NH not observed;13C NMR (400 MHz, CDCl3) δ 55.70, 107.03, 114.64, 119.88, 123.60, 125.51, 127.83, 128.10, 129.12, 133.52, 134.63, 139.48, 144.69, 148.77, 152.54, 153.48, 160.50, 170.69
실시예 14: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1Example 14: 4- [5- (4-methoxyphenyl) -1- (6-methylpyridin-2-yl) -1 HH -피라졸-3-일]벤조니트릴(A14)-Pyrazol-3-yl] benzonitrile (A14)
A11(176 mg, 0.63 mmol, 1.00 당량)의 에탄올(25 mL) 현탁액에, (6-메틸피리딘-2-일)히드라진(78 mg, 0.63 mmol, 1.00 당량)과 촉매량의 염산(0.020 mL)을 가하고 환류하에서 14시간 교반하였다. 반응 혼합물을 상온까지 냉각한 후, 감압증류하여 용매를 제거하였다. 디클로로메탄(30 mL)과 포화 NaHCO3수용액(30 mL)에 분배하였다. 수용액층을 디클로메탄(15 mL)으로 추출하였다. 혼합 유기층을 포화 소금물로 씻고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 에틸 아세테이트, 헥산, 디클로로메탄1대 1대 23의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하여 정제함으로써 표제 화합물 A14를 얻었다 (25 mg, 10.8%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.47(s, 3H), 3.84(s, 3H), 6.81(s, 1H), 6.99(td, 2H), 7.08(d, 1H), 7.46(dd, 2H), 7.58(d, 1H), 7.64(dd, 2H), 7.72(t,1H), 7.8(td, 2H)To a ethanol (25 mL) suspension of A11 (176 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv) was added (6-methylpyridin-2-yl) hydrazine (78 mg, 0.63 mmol, 1.00 equiv) and a catalytic amount of hydrochloric acid (0.020 mL). It was added and stirred at reflux for 14 hours. After cooling the reaction mixture to room temperature, the solvent was removed by distillation under reduced pressure. Partition between dichloromethane (30 mL) and saturated aqueous NaHCO 3 (30 mL). The aqueous layer was extracted with dichloromethane (15 mL). The combined organic layers were washed with saturated brine, dried over sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated and purified by flash chromatography on silica using ethyl acetate, hexane, dichloromethane in a ratio of 1: 1 to 1:23 to give the title compound A14 (25 mg, 10.8%). 1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 2.47 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 6.81 (s, 1H), 6.99 (td, 2H), 7.08 (d, 1H), 7.46 (dd, 2H ), 7.58 (d, 1H), 7.64 (dd, 2H), 7.72 (t, 1H), 7.8 (td, 2H)
실시예 15: 4-[5-(4-메톡시페닐)-1-(6-메틸피리딘-2-일)-1Example 15: 4- [5- (4-methoxyphenyl) -1- (6-methylpyridin-2-yl) -1 HH -피라졸-3-일]벤즈아미드(A15)-Pyrazol-3-yl] benzamide (A15)
A14(35 mg, 0.10 mmol, 1.00 당량)을 95% 에탄올(15 mL)에 녹인 후, 20 ℃에서 28% H2O2(0.024 mL, 0.38 mmol, 3.80 당량)와 6N NaOH(0.005 mL, 0.03 mmol, 0.30 당량)을 가하고, 반응온도를 55 ℃로 올린 후, 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 ℃에서 1N HCl을 가하여 중화시키고, 중화된 반응 혼합물을 디클로로메탄(2×20 mL)으로 추출하였다. 추출된 디클로로메탄용액을 포화 소금물로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하였다. 여과된 유기용매를 농축 후, 메탄올과 디클로로메탄을 1대9의 비율로 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 크로마토그래피하고 메탄올에서 재결정하여 정제함으로써 표제 화합물 A15를 얻었다 (26 mg, 67.6%).1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 2.31(s, 3H), 3.83(s, 3H), 5.64(br s, 1H), 6.07(br s, 1H), 6.76(s, 1H), 6.93(td, 2H), 7.04(d, 1H), 7.37(m, 3H), 7.62(t,1H), 7.74(td, 2H), 7.83(td, 2H).A14 (35 mg, 0.10 mmol, 1.00 equiv) was dissolved in 95% ethanol (15 mL), 20 28% H at ℃2O2(0.024 mL, 0.38 mmol, 3.80 equiv) and 6N NaOH (0.005 mL, 0.03 mmol, 0.30 equiv) were added and the reaction temperature was 55 Raised to C and stirred for 3 h. 0 reaction mixture Neutralize by adding 1N HCl at < 0 > C and the neutralized reaction mixture was extracted with dichloromethane (2x20 mL). The extracted dichloromethane solution was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate and filtered. The filtered organic solvent was concentrated, then flash chromatographed on silica using methanol and dichloromethane in a ratio of 1 to 9 and recrystallized from methanol to give the title compound A15 (26 mg, 67.6%).OneH NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.31 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 5.64 (br s, 1H), 6.07 (br s, 1H), 6.76 (s, 1H), 6.93 (td, 2H), 7.04 (d, 1H), 7.37 (m, 3H), 7.62 (t, 1H), 7.74 (td, 2H), 7.83 (td, 2H).
한편, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 목적에 따라 여러형태로 제제화가 가능하다. 다음은 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 활성성분으로 함유시킨 몇몇 제제화 방법을 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.On the other hand, the compound represented by Formula 1 according to the present invention can be formulated in various forms according to the purpose. The following illustrates some formulation methods containing the compound represented by Formula 1 according to the present invention as an active ingredient, but the present invention is not limited thereto.
제제 1 : 정제의 생산(직접 가압) Formulation 1 : Production of Tablets (Direct Pressing)
활성성분 5.0 ㎎Active ingredient 5.0 mg
락토스 14.1 ㎎Lactose 14.1 mg
Crospovidone USNF 0.8 ㎎Crospovidone USNF 0.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.1 ㎎Magnesium Stearate 0.1mg
총무게 20 ㎎/정제Gross weight 20 mg / tablet
활성성분을 체로 친 후 부형제와 함께 섞었다. 이 혼합물을 가압하여 정제로 만들었다.The active ingredient was sifted and mixed with excipients. This mixture was pressurized into tablets.
다른 방법으로, 활성성분과 락토스를 물에 녹여 동결건조시켰다. 건조 혼합물을 부형제와 함께 섞은 후 가압하여 정제로 만들었다.Alternatively, the active ingredient and lactose were lyophilized in water. The dry mixture was mixed with excipients and then pressed to tablets.
제제 2 : 정제의 생산(습식 조립) Formulation 2 : Production of Tablets (Wet Granulation)
활성성분 5.0 ㎎Active ingredient 5.0 mg
폴리솔베이트 80 0.3 ㎎Polysorbate 80 0.3 mg
락토스 16.0 ㎎Lactose 16.0 mg
녹말 4.0 ㎎Starch 4.0mg
콜로이달 실리콘 디옥사이드 2.7 ㎎Colloidal silicon dioxide 2.7 mg
마그네슘 스테아레이트 2.0 ㎎Magnesium Stearate 2.0mg
총무게 30 ㎎/정제Total weight 30 mg / tablet
활성성분을 체로 친 후 락토스, 녹말과 섞었다. 폴리솔베이트 80을 순수한 물에 녹인 후 이 용액의 적당량을 첨가한 다음 분말을 미립화하였다. 건조 후에, 미립을 체질한 후 콜로이달 실리콘 디옥사이드, 마그네슘 스테아레이트와 섞었다. 미립을 가압하여 정제로 만들었다.Sift the active ingredient and mix with lactose and starch. Polysorbate 80 was dissolved in pure water, then an appropriate amount of this solution was added and the powder was atomized. After drying, the fines were sieved and mixed with colloidal silicon dioxide and magnesium stearate. The granules were pressed into tablets.
제제 3 : 분말과 캡슐 약제의 생산 Formulation 3 : production of powder and capsule pharmaceuticals
활성성분 5.0 ㎎Active ingredient 5.0 mg
락토스 14.8 ㎎Lactose 14.8 mg
폴리비닐 피롤리돈 10.0 ㎎Polyvinyl pyrrolidone 10.0 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎Magnesium Stearate 0.2mg
총무게 30 ㎎/캡슐Total weight 30 mg / capsule
활성성분을 체로 친 다음 부형제와 함께 섞었다. 혼합물을 적당한 장치를 사용하여 단단한 No. 5 젤라틴 캡슐에 채웠다.The active ingredient was sifted and mixed with excipients. No. solid the mixture using a suitable device. Filled in 5 gelatin capsules.
[생물학적 데이터][Biological data]
본 발명의 화합물의 생물학적 활성은 아래 시험을 사용해 평가하였다.The biological activity of the compounds of the present invention was evaluated using the following test.
ALK5 키나제의 SMAD3 인산화를 측정하는 방법.Method for measuring SMAD3 phosphorylation of ALK5 kinase.
ALK5 키나제 도메인은 206번째 아미노산부터 498번째 아미노산까지 293개의 아미노산으로 구성된 부분을 베큘로바이러스(baculovirus) 발현 시스템에서 his표지자를 붙여서 발현시켰다. 발현된 도메인은 니켈-NTA 컬럼을 사용하여 정제하였다. 기질 단백질인 SMAD3 단백질은 전체크기에 해당하는 625개의 아미노산으로 구성된 부분을 베큘로바이러스(baculovirus) 발현 시스템에서 his 표지자를 붙여서 발현시킨 후, 니켈-NTA 컬럼을 사용하여 정제하였다. 정제한 ALK5 키나제 도메인을 반응 완충용액[20 mM Tris-HCl(pH 7.5), 20 mM MgCl2, 50 μM 기질 단백질(SMAD3), 40 μM ATP, 1 μCi(γ-32P ATP) 100 ㎕에 더한 다음 30 ℃에서 10분간 반응시킨 후 얼음에 방치하여 반응을 정지시켰다. 전체 반응물에서 50 ㎕를 덜어내어 phosphocellulose disk sheet로 옮기고 난 뒤, 1% 인산으로 1번 세척하고, 증류수로 2번 더 세척한 다음 sheet를 씬틸레이션 바이알(scintillation vial)로 옮겼다. 바이알(Vial)에 씬틸레이션 칵테일(scintillation cocktail) 4 mL를 더해서 충분히 혼합한 후에 씬틸레이션 카운터(scintillation counter)를 이용하여 방사능을 측정하였다.The ALK5 kinase domain expressed a portion consisting of 293 amino acids from the 206th amino acid to the 498th amino acid by attaching his marker in a baculovirus expression system. The expressed domain was purified using a nickel-NTA column. SMAD3 protein, a matrix protein, was expressed using a nickel-NTA column after expressing a portion consisting of 625 amino acids corresponding to the full size with a his marker in a baculovirus expression system. The purified ALK5 kinase domain was added to 100 μl of reaction buffer [20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 20 mM MgCl 2 , 50 μM substrate protein (SMAD3), 40 μM ATP, 1 μCi (γ-32P ATP). After reacting at 30 ° C. for 10 minutes, the reaction was stopped by standing on ice. 50 μl of the total reaction solution was removed, transferred to a phosphocellulose disk sheet, washed once with 1% phosphoric acid, twice with distilled water, and then the sheet was transferred to a scintillation vial. 4 mL of a scintillation cocktail was added to the vial, followed by sufficient mixing. Radioactivity was measured using a scintillation counter.
Western blot을 이용하여 매트릭스 표지자 및 기질의 인산화 억제를 조사 . Western blot was used to investigate the inhibition of phosphorylation of matrix markers and substrates .
신장 상피암 세포주인 A498 세포를 DMEM 배지에서 90% 이상 융합하도록 배양한 다음, 배양배지를 제거하고 우태아혈청이 첨가되지 않은 배양배지로 24시간 동안 배양한 후, 4시간 동안 화합물로 처리한 다음, TGF-beta를 10 ng/mL의 농도로 8시간 처리하였다. 세포를 모은 다음, 세포용해완충용액 [Tris-HCl 50 mM(pH 7.4), NP40 1%, Na-deoxycholate 0.25%, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM, Aprotinin, leupeptin, pepstatin 1 ㎍/mL each, Na3VO41 mM, NaF 1 mM] 을 처리하여 전체 추출물을 얻었다. 이중 25 ㎕의 세포전체 추출물에 5X 로딩 완충용액을 6 ㎕ 첨가하여 잘 섞은 후, 8% 아크릴아마이드 겔에서 전기영동하였다. SDS-PAGE 후 나일론 막으로 옮기고, 항 피브로넥틴 항체를 이용하여 western blot을 수행하였다. 반응은 다음과 같다. 나일론 막을 5% 탈지우유 및 0.1% 트윈(tween)이 포함된 인산염 완충용액에 담근 후 4 ℃에서 밤새 반응시키고 나서 0.1% 트윈(tween)이 포함된 인산염 완충용액으로 3번 세척하였다. 세척된 나일론 막에 1차 항체로 1시간 상온에서 반응시키고 난 뒤 인산염 완충용액으로 3번 세척하고, 2차 항체로 1시간 상온에서 반응시킨다. 반응 후 0.1% 트윈이 포함된 완충용액으로 4번 세척 후 ECL 탐지 키트(Amersham)를 이용하여 화합물에 의한 억제정도를 가시화하였다.A498 cells, a renal epithelial cancer cell line, were cultured to be fused at least 90% in DMEM medium, and then cultured for 24 hours in culture medium without fetal calf serum, followed by treatment with compound for 4 hours. TGF-beta was treated for 8 hours at a concentration of 10 ng / mL. After collecting the cells, the cell lysis buffer solution [Tris-HCl 50 mM (pH 7.4), NP40 1%, Na-deoxycholate 0.25%, NaCl 150 mM, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM, Aprotinin, leupeptin, pepstatin 1 μg / mL each, Na 3 VO 4 1 mM, NaF 1 mM] to give a total extract. 6 μl of 5 × loading buffer was added to 25 μl of the whole cell extract, followed by electrophoresis on 8% acrylamide gel. SDS-PAGE was transferred to a nylon membrane, and western blot was performed using an anti-fibronectin antibody. The reaction is as follows. The nylon membrane was immersed in phosphate buffer containing 5% skim milk and 0.1% tween, and then reacted at 4 ° C. overnight, and then washed three times with phosphate buffer containing 0.1% tween. After reacting the washed nylon membrane with the primary antibody for 1 hour at room temperature, washed three times with phosphate buffer solution, and reacted with the secondary antibody at room temperature for 1 hour. After the reaction, after washing four times with a buffer containing 0.1% Tween, the degree of inhibition by the compound was visualized using an ECL detection kit (Amersham).
본 발명의 화합물은 일반적으로 0.0001 내지 10 μM 값의 ALK5 수용체 조절 활성을 보여준다.Compounds of the invention generally show ALK5 receptor regulatory activity at values of 0.0001 to 10 μM.
경구독성 시험Oral Toxicity Test
본 발명에 따른 몇몇 화합물에 대해서는 래트를 대상으로 급성독성 시험을 수행하였다. 그 결과 경구 투여량 10 mg/kg 까지는 목적에 반하는 심각한 독성의 증상이 없으며, 경구 투여량 100 mg/kg 까지는 사망이 전혀 없었다.Some compounds according to the invention were subjected to acute toxicity testing in rats. As a result, up to 10 mg / kg oral dose did not cause serious toxicity symptoms, and up to 100 mg / kg oral dose did not cause any death.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 매트릭스 형성의 억제, 예를 들어 제I형 또는 액티빈 유사 키나제 ALK5 수용체에 의한 smad2 또는 smad3의 인산화의 억제 활성이 우수하므로, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 매트릭스 형성의 억제가 요구되는 질환의 치료 및 예방에 유효하다.As described above, the compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention is excellent in inhibiting matrix formation, for example, inhibiting phosphorylation of smad2 or smad3 by type I or activin-like kinase ALK5 receptors. The compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof is effective for the treatment and prevention of diseases in which inhibition of matrix formation is required.
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2003
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