KR20030023232A - Method of extracting saponin from Panax ginseng or Gynostemma pentaphyllum and foods containing the extracted saponin therefrom - Google Patents
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Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
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- A23V2250/2124—Ginseng
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Abstract
Description
본 발명은 인삼 또는 돌외로부터 사포닌(saponin)을 추출하는 방법 및 이 방법에 따라 추출된 사포닌을 함유하는 항당뇨성 및 항고지혈성 식품에 관한 것이다. 본 발명에서는 인삼 또는 돌외 추출물로부터 클로로포름, 에테르 또는 메틸렌클로라이드를 이용하여 탈지시키고, 비이온성 교환수지를 사용하여 당과 무기염을 제거함으로써 고순도로 사포닌을 추출할 수 있고, 지방, 당, 무기염 등이 제거된 고순도의 사포닌 성분을 식품에 첨가하므로 소량을 첨가하여도 항당뇨성 및 항고지혈성 효과를 얻을 수 있는 장점이 있다.The present invention relates to a method for extracting saponin from ginseng or dodol and an antidiabetic and antihyperlipidemic food containing saponin extracted according to the method. In the present invention, by degreasing with chloroform, ether or methylene chloride from ginseng or dodol extract, by removing sugar and inorganic salts using a nonionic exchange resin, saponins can be extracted with high purity, fat, sugar, inorganic salts, etc. Since the removed high-purity saponin component is added to foods, there is an advantage that antidiabetic and antihyperlipidemic effects can be obtained even by adding a small amount.
산업사회의 발달로 현대인들은 경제적인 여유와 문화적인 혜택을 누리게 되었지만 날로 심각해지는 환경 오염 또는 과영양화로 삶의 질은 직·간접적으로 위협을 받고 있다. 특히 가장 문제가 되고 있는 것은 영양과잉 및 운동 부족으로인한 비만과 이에 수반되는 순환기 질환, 고혈압, 당뇨병 등 현대병의 발병이라 하겠다. 일반적으로 당뇨병 환자의 치료에 있어 저탄수화물, 저지방 식이요법이 권장되고 있는데 이는 혈당을 조절하고 혈청 지질과 지단백질 농도를 개선하기 위한 것이다. 이러한 식이요법의 필요성은 비만 환자에 있어서도 마찬가지이다. 그러나 실제로 식이요법의 까다로움 때문에 이를 이행하는 환자는 매우 적으며, 따라서 환자가 식이요법을 따르지 못하더라도 이들이 섭취한 탄수화물이나 지방의 흡수를 낮추는 기능을 갖는 보조 식품 또는 약품의 개발이 필요하다.The development of the industrial society has brought economic margins and cultural benefits to people, but the quality of life is threatened directly and indirectly due to the increasing environmental pollution or overnutrition. In particular, the most problematic is the development of modern diseases, such as obesity due to overnutrition and lack of exercise, and accompanying circulatory diseases, hypertension, diabetes. In general, low-carbohydrate, low-fat diets are recommended for the treatment of diabetics to control blood glucose and improve serum lipid and lipoprotein levels. The need for such a diet is the same in obese patients. However, due to the dietary difficulty, very few patients implement it, and therefore, even if the patient does not follow the diet, there is a need for the development of supplements or drugs that have a function of lowering the absorption of carbohydrates or fats they ingest.
최근 당 및 지질의 흡수를 저해하는 효과가 있는 것으로 알려져 있는 식품 중에서 가장 활발히 연구가 이루어지고 있는 것 중 하나는 인삼의 주요 구성 성분인 다마란(dammarane)계 사포닌이다. 전 세계 온대 지방에 10여종 이상 분포되어 있는 인삼속(Panax spp) 식물 중에서 특히 우리나라에서 재배되는 인삼(Panax ginseng)의 경우 다른 나라 인삼속 식물과는 달리 다마란계 사포닌의 함량이 높고(생약학연구회: 현대생약학, 학창사, 서울, p. 252 (1995)), 이러한 다마란계 사포닌은 장에 작용하여 당의 흡수를 억제하고(Bao, T. T., Effect of total saponin of panax ginseng on alloxan diabetes in mice.Yao Xue Xue Bao. 16, 618(1981) 및 Yokozaya, T., 등, Studies on the mechanism of the hypoglycemic activity of ginsenoside-Rb2 in streptozotocin-diabetic rats. Chem. Pharm. Bull.(Tokyo). 33, 869(1985)), 고지혈증을 개선하는 효과가 있으며 담즙을 통한 스테로이드 물질의 배설을 촉진하는 것으로 알려져 있다(Yokozawa, T., 등, Hyperlipemia-improving effects of ginsenoside-Rb2 in cholesterol-fed rats.Chem. Pharm.Bull. (Tokyo) 33, 722(1985) 및 Yamamoto, M., 등, Plasma lipid-lowering action of ginseng saponins and mechanism of the action.Am. J. Chin. Med.11, 84(1983)).Recently, one of the most actively studied among foods known to inhibit the absorption of sugar and lipids is dammarane-based saponin, which is a major component of ginseng. Panax ginseng, which is distributed in more than 10 species in temperate regions of the world, especially Ginseng (Panax ginseng), which is grown in Korea, has a high content of Damaran-based saponins, unlike other ginseng plants in other countries. : Modern biopharmaceuticals, Hakchangsa, Seoul, p. 252 (1995)), these damaran saponins act on the intestine to inhibit the absorption of sugar (Bao, TT, Effect of total saponin of panax ginseng on alloxan diabetes in mice. Yao Xue Xue Bao . 16, 618 (1981) and Yokozaya, T., et al., Studies on the mechanism of the hypoglycemic activity of ginsenoside-Rb2 in streptozotocin-diabetic rats.Chem. Pharm.Bull. (Tokyo). 33, 869 (1985)), which have an effect on improving hyperlipidemia and are known to promote the excretion of steroid substances through bile (Yokozawa, T., et al., Hyperlipemia-improving effects of ginsenoside-Rb2 in cholesterol-fed rats.Chem . Pharm Bull . (Tokyo) 33, 722 (1985) and Yamamoto, M., et al., Plasma lipid-lowering action of ginseng saponins and mechanism of the action.Am . J. Chin.Med. 11 , 84 (1983)).
그리고 다마란계 사포닌을 다량 함유하는 다른 과 식물로는 박과(Cucurbitaceae) 식물과 갈매나무과(Rhamnaceae) 식물 등이 있다. 특히 동과자, 오이, 수세미 등의 박과 식물 중의 다마란계 (dammarane) 사포닌은 다이어트 기능이 있음이 보고되어 있다(Piacente, S., 등, New dammarane-type glycosides fromGynostemma pentaphyllum.J. Nat. Prod.58, 512(1995) 및 Cui, J., 등 :Gynostemma pentaphyllum: identification of major sapogenins and differentiation from Panax species.Eur. J. Pharm. Sci.8, 187(1999)).Other family plants containing large amounts of damaran saponins include the Cucurbitaceae and Rhamnaceae plants. In particular, dammarane saponins in gourds, cucumbers and scrubbers have been reported to have a dietary function (Piacente, S., et al., New dammarane-type glycosides fromGynostemma pentaphyllum.J. Nat. Prod.58, 512 (1995) and Cui, J., et al .:Gynostemma pentaphyllum: identification of major sapogenins and differentiation from Panax species.Eur. J. Pharm. Sci.8, 187 (1999).
박과 식물 중 하나인 돌외(Gynostemma pentaphyllum)는 우리나라 남부 및 제주도 지방에서 자생 또는 재배되는 덩굴성 초본으로 잎은 인삼과 비슷하며, 지상부에는 인삼의 사포닌 성분이 다량 함유되어 있는 것으로 알려져 있다(Yu, R., Wang, D.S., Zhou, H.: Clinical and experimental study on effects of yinchen wuling powder in preventing and treating hyperlipoproteinemia, Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi, 16, 470(1996)). 일본의 경우 돌외를 이용하여 제조한 다이어트 및 당뇨병 치료 보조의 기능성 제품(Gynostemma Dried Extract(60N-DE-0005-A))이 시판된 상태이다. Gynostemma pentaphyllum , one of the gourds, is a vine herb that grows or grows in southern Korea and Jeju Island, and its leaves are similar to ginseng, and the ground part is known to contain a large amount of saponin of ginseng (Yu, R., Wang, DS, Zhou, H .: Clinical and experimental study on effects of yinchen wuling powder in preventing and treating hyperlipoproteinemia, Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi, 16, 470 (1996)). In Japan, a diet product prepared using dodol and a supplementary product for diabetic treatment (Gynostemma Dried Extract (60N-DE-0005-A)) are commercially available.
그러나, 현재까지 대부분의 기능성 식품은 그 자체 또는 물 추출물 등을 사용하여 왔기 때문에 그 내용물 중 약 80%를 차지하는 당으로 인해 오히려 혈당 강하 효과가 반감되어 항당뇨성, 항고지혈성 및 다이어트 효과가 미미한 상태이다. 또한 박과 식물인 동과자의 경우에도 물 또는 알코올 추출물을 엑스 상태로 그대로 섭취하게 되어 그 효과가 의문시되고 있다. 따라서, 추출물 그대로가 아닌 사포닌 성분만을 추출하여 섭취하게 되면 항당뇨성, 항고지혈성 및 다이어트에 우수한 효과를 나타낼 것으로 예측된다.However, to date, most functional foods have used water or water extracts themselves, but due to the sugar which accounts for about 80% of its contents, the effect of lowering blood sugar is halved, so that anti-diabetic, anti-hyperlipidemic and dietary effects are insignificant. It is a state. In addition, even in the case of cabbage, which is a gourd plant, water or alcohol extracts are ingested in an X state, and their effects are questioned. Therefore, extracting and ingesting only saponin components, not extracts, is expected to have excellent effects on antidiabetic, antihyperlipidemic and diet.
한편, 각종 식물로부터 사포닌을 추출하는 방법은 여러 가지가 공지되어 있다. 예를 들어 대한민국 특허 공개 제 97-32877호에는 인삼을 물 또는 에탄올 수용액을 이용하여 추출하되 탄산염을 첨가하는 방법이 기재되어 있다. 그러나, 상기 탄산염을 이용한 사포닌 침전법은 고전적인 방법으로 다량의 염이 사포닌과 흡착 난용성 침전을 만드는 방법으로 형성된 염을 제거하는데 많은 시간과 어려움이 있다.On the other hand, various methods of extracting saponin from various plants are known. For example, Korean Patent Publication No. 97-32877 describes a method of extracting ginseng using water or an aqueous ethanol solution, but adding carbonate. However, the saponin precipitation method using the carbonate has a lot of time and difficulty in removing the salt formed by the method of making a large amount of salts adsorbed poorly soluble precipitate with the saponin by the classical method.
대한민국 특허 공개 제 92-256호에는 초음파추출을 이용하는 방법을 개시하고 있는데, 이는 장시간 추출할 경우 사포닌이 파괴될 뿐만 아니라 다른 추출방법 보다는 초음파에 의해서 세포 내의 성분을 바람직하게 추출해 낼 수 없다.Korean Patent Laid-Open Publication No. 92-256 discloses a method using ultrasonic extraction, which not only destroys saponins when extracted for a long time, but also cannot extract components in cells by ultrasonic waves more than other extraction methods.
대한민국 특허 공개 제 98-66516호에는 분해 효소와 용매 침출법을 이용하는 방법, 그리고 대한민국 특허 공개 제 99-457호에는 용매 추출 후 락타아제 효소와 반응시키는 방법 등의 효소를 이용하는 방법을 개시하고 있는데, 이는 세포벽을 파괴하는 효소를 이용한 다음 용매 분획하는 것으로 이미 많은 추출 공정과정에 이용되고 있으나 사포닌을 추출하는 과정에서 배당체인 많은 사포닌이 효소에 의해 파괴되는 단점이 있다.Korean Patent Laid-Open Publication No. 98-66516 discloses a method using a degrading enzyme and a solvent leaching method, and Korean Patent Laid-Open Publication No. 99-457 discloses a method using an enzyme such as a method of reacting with a lactase enzyme after solvent extraction. Solvent fractionation using an enzyme that destroys the cell wall is already used in many extraction processes, but in the process of extracting saponins, many saponins, glycosides, are destroyed by enzymes.
대한민국 특허 공개 87-8586호에는 특정 엠버라이트(Amberlite) 혼합 수지를 이용하여 오갈피 중에 함유된 사포닌을 정제하는 방법을 개시하는데, 혼합 엠버라이트 수지를 이용하는 것은 엠버라이트 수지의 종류가 다양하며, 그 중 이온 교환수지인 비가역적인 수지를 사용한 경우에는 탈착시 산 알칼리 처리를 하고, 이를 다시 중화를 하여 그 염을 제거하여야 하므로 공정이 복잡하게 된다.Korean Patent Publication No. 87-8586 discloses a method for purifying saponins contained in agalpi using a specific Amberlite mixed resin, and using a mixed Amberlite resin includes various kinds of Amberlite resins. In the case of using an irreversible resin, which is an ion exchange resin, the acid alkali treatment is required during desorption, and the salt is neutralized again to remove the salt, which makes the process complicated.
대한민국 공개 특허 제 99-84453호에는 인공합성한 다이아이온 에치피-20 수지 흡착법을 이용하는 방법 등이 기재되어 있으나, 가격이 비싸고, 100% 물이 아닌 25% 주정을 이용하므로 사포닌 분획을 제거해야 하는 단점이 있다.Korean Patent Application Publication No. 99-84453 describes a method using artificial synthetic Dion Echipi-20 resin adsorption method, but it is expensive and requires removal of the saponin fraction because it uses 25% alcohol instead of 100% water. There are disadvantages.
따라서, 상기의 방법들로는 고순도의 인삼 또는 돌외의 사포닌 성분을 추출하는데 한계가 있다.Therefore, the above methods have a limitation in extracting saponin components other than high purity ginseng or stone.
또한, 상기 추출법들은 고순도의 사포닌을 얻을 수 없으므로, 식품에 사용할 경우 고함량으로 사용할 수밖에 없는 문제점이 있고, 사포닌 외에 지질, 당, 무기염 등을 함께 섭취하게 되므로 항당뇨성 및 항고지혈성 효과가 미미한 문제점이 있었다.In addition, the extraction methods can not obtain high-purity saponin, there is a problem that can be used in a high content when used in food, and in addition to saponin intake lipids, sugars, inorganic salts, etc. have antidiabetic and antihyperlipidemic effect There was a slight problem.
본 발명은 상술한 종래의 사포닌 추출법에 따른 문제점을 해결하는 것으로, 인삼 또는 돌외에 함유된 사포닌을 클로로포름과 비이온성 교환수지를 이용하여 고순도로 추출하는 것을 목적으로 한다.The present invention solves the problems according to the conventional saponin extraction method described above, and aims to extract saponins contained in ginseng or stone with high purity using chloroform and nonionic exchange resin.
또한, 본 발명은 상기 방법을 통해 추출된 사포닌을 함유하는 항당뇨성 및 항고지혈성 식품을 제공하는 것을 목적으로 한다.In addition, an object of the present invention is to provide an antidiabetic and antihyperlipidemic food containing saponin extracted through the method.
도 1은 인삼 또는 돌외로부터 사포닌을 추출하는 과정의 개략도이다.1 is a schematic diagram of a process for extracting saponin from ginseng or dodol.
본 발명에 의한 사포닌 제조방법은Saponin production method according to the present invention
인삼 또는 돌외를 에틸알코올 또는 메틸알코올로 열수해서 추출한 후 50℃에서 감압 농축하여 엑스를 얻는 단계;Extracting ginseng or dolanto with hydrothermally extracted with ethyl alcohol or methyl alcohol and concentrating under reduced pressure at 50 ° C. to obtain X;
상기 엑스를 증류수에 녹여 현탁시킨 후 여과하여 불용부와 가용부로 나눈 다음 물 가용부를 클로로포름, 에테르 또는 메틸렌클로라이드로 탈지시키는 단계;Dissolving the X in distilled water, suspending and dividing the filtrate into an insoluble part and a soluble part, and then degreasing the water soluble part with chloroform, ether or methylene chloride;
상기 탈지된 물 가용부에서 클로로포름, 에테르 또는 메틸렌클로라이드를 제거한 후 컬럼 크로마토그래피용 비이온성 교환수지에 흡착시키는 단계; 및Removing chloroform, ether or methylene chloride from the deionized water soluble part and then adsorbing the non-ionic exchange resin for column chromatography; And
증류수로 용출한 당과 무기염을 제거한 다음 에틸알코올 또는 메틸알코올로 용출하여 사포닌 분획을 얻는 단계;Removing sugar and inorganic salts eluted with distilled water and then eluting with ethyl alcohol or methyl alcohol to obtain a saponin fraction;
로 이루어진다.Is made of.
본 발명을 좀 더 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.Looking at the present invention in more detail as follows.
먼저, 인삼 또는 돌외를 에틸알코올 또는 메틸알코올로 추출하고, 물에 현탁시켜서 난용성 물질의 경우 지용성 물질로서 여과하여 제거하고, 미량 포화되어 있는 지용성 성분들은 클로로포름, 에테르 또는 메틸렌클로라이드로 제거한다. 따라서, 수용성인 사포닌은 모두 물 분획에 녹아 있으며 이를 비이온성 교환수지(Amberlite XAD)에 흡착시킨다. 흡착시킨 후, 물로 용출하는 경우 이중 결함이 없는 당(단당류, 이당류, 다당류 등) 또는 극성이 강한 무기염 등이 흡착되지 않고 물에 용출되어 나온다. 따라서 그 외 모든 사포닌 성분은 비이온성 교환수지에 흡착되어 있고, 에틸알코올 또는 메틸알코올로 다시 용출시킴으로써 사포닌분획만을 간단히 얻을 수 있다.First, ginseng or dolanto is extracted with ethyl alcohol or methyl alcohol, suspended in water, filtered in the case of poorly soluble substances, removed as a fat-soluble substance, and trace saturated oil-soluble components are removed with chloroform, ether or methylene chloride. Therefore, all of the water-soluble saponins are dissolved in the water fraction and adsorbed to the nonionic exchange resin (Amberlite XAD). After the adsorption, when eluted with water, sugars (monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, etc.) having no double defects or inorganic salts having strong polarity do not adsorb and are eluted in water. Therefore, all other saponin components are adsorbed on the nonionic exchange resin, and only the saponin fraction can be obtained simply by eluting again with ethyl alcohol or methyl alcohol.
이때, 비이온성 교환수지는 Amberlite XAD 군으로부터 선택되며, Amberlite XAD-2 또는 Amberlite XAD-4가 바람직하다.At this time, the nonionic exchange resin is selected from Amberlite XAD group, and Amberlite XAD-2 or Amberlite XAD-4 is preferred.
여기서, 비이온성 교환수지를 사용하는 이유는 본 수지를 이용함으로써 간단히 당과 무기염을 제거할 수 있고, 또한 용매의 극성을 이용하여 수지로부터 사포닌을 탈착함으로써 사포닌 생산 과정이 매우 간단하게 되어 대량 생산이 가능하게 된다. 또한, 비이온성 교환수지의 경우 재생하여 다시 사용할 수 있는 이점이 있다.Here, the reason for using the nonionic exchange resin is that by using this resin, sugar and inorganic salts can be easily removed, and the saponin production process becomes very simple by mass-desorbing saponin from the resin by using the polarity of the solvent. This becomes possible. In addition, the nonionic exchange resin has the advantage that can be recycled and used again.
또한, 본 발명에 따른 항당뇨성 및 항고지혈성 식품은 상기 방법에 따라 추출된 사포닌을 첨가함으로써 제조된다. 이때, 돌외는 인삼보다 저렴하므로 돌외로부터 추출된 사포닌만을 첨가하거나 돌외와 인삼으로부터 각각 추출한 사포닌을 일정 비율로 혼합하여 첨가하는 것이 바람직하다.In addition, antidiabetic and antihyperlipidemic foods according to the present invention are prepared by adding saponin extracted according to the above method. At this time, it is preferable to add only the saponin extracted from the dodol or the saponins extracted from the dodol and the ginseng, respectively, in a certain ratio, since dodol is cheaper than ginseng.
이하, 본 발명을 보다 상세히 설명하기 위해 실시예를 들어 설명하지만, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples, but the present invention is not limited thereto.
본 발명에서 사포닌 분획의 추출 및 정제에 사용된 재료는 인삼(Panax ginseng)의 지하부인 백삼(Ginseng Radix Alba)과 돌외(Gynostemma pentaphyllum)의 지상부인 덩굴차(Gynostemmae Herba)로서, 모두 건조된 시판품을 사용하였으며, 특히 덩굴차의 경우에는 식물학적 감정을 거친 후 사용하였다.In the present invention, the materials used for the extraction and purification of the saponin fraction are Ginseng Radix Alba and Gynostemma pentaphyllum, which are ground parts of Panax ginseng, and Gynostemmae Herba, which are both dried and commercially available products. Especially, in the case of vine tea, it was used after undergoing botanical sentiment.
또한, 실험동물로는 4주 또는 5주령의 스프라우그 다울리(Spraugue-Dawley: SD) 계의 수컷 흰쥐를 대한 바이오링크(충북음성)로부터 구입하여 사용하였다. 12시간 명암 주기와 항온(21∼23℃), 항습(55%) 조건하에서 사료(제일제당)와 물을 자유롭게 공급하면서 적어도 일주일간 적응시킨 후 실험에 사용하였다.In addition, 4 or 5 weeks old Spraugue-Dawley (SD) male rats were purchased from Biolink (Chungbuk voice) for experimental animals. Under the 12-hour light cycle, constant temperature (21-23 ° C), and humidity (55%) conditions, the animals were adapted for at least one week with free feeding of feed (Cheil) and water.
실시예1Example 1
인삼 사포닌의 추출 및 정제Extraction and Purification of Ginseng Saponin
백삼 20 kg을 잘게 절단한 후 80% 에틸알코올 200L로 열수에서 3회 추출한 후 50℃에서 감압 농축하여 엑스 3.5kg을 얻었다. 이 엑스를 증류수 8L에 녹여 현탁시킨 후 여과하여 불용부와 가용부로 나누고 가용부를 클로로포름 20L로 3회 탈지시킨다. 탈지된 물 가용부에서 클로로포름을 제거한 후 Amberlite XAD-2 (Fluka, Switzerland) 20kg에 흡착시켜 컬럼 크로마토그래피를 실시하였다. 먼저 용출 용매로써 증류수를 사용하여 당과 무기염의 분획 1.8kg을 얻었으며 다음으로 에틸알코올을 용출 용매로써 사용하여 사포닌 분획 1.1kg을 얻었다.20 kg of white ginseng was cut finely, extracted three times in hot water with 200 L of 80% ethyl alcohol, and concentrated under reduced pressure at 50 ° C. to obtain X 3.5 kg. The extract is dissolved in 8 L of distilled water, suspended, filtered, and divided into an insoluble part and a soluble part. The soluble part is degreased three times with 20 L of chloroform. Chloroform was removed from the deionized water soluble part and column chromatography was carried out by adsorption on 20 kg of Amberlite XAD-2 (Fluka, Switzerland). First, 1.8 kg of the sugar and inorganic salt fractions were obtained using distilled water as the elution solvent, and 1.1 kg of the saponin fraction was obtained using ethyl alcohol as the elution solvent.
실시예2Example 2
돌외 사포닌의 추출 및 정제Extraction and Purification of Dodol Saponins
덩굴차 20kg을 80% 에틸알코올 300L로 열수에서 3회 추출한 후 50℃에서 감압 농축한 후 엑스 2.9kg을 얻은 것을 제외하고, 실시예1과 동일한 방법으로 하여 사포닌 분획 1.0kg을 얻었다.20 kg of vine tea was extracted three times in hot water with 300 L of 80% ethyl alcohol, and concentrated under reduced pressure at 50 ° C., except that 2.9 kg was obtained. 1.0 kg of a saponin fraction was obtained in the same manner as in Example 1.
실시예3Example 3
STZ 유발 당뇨 쥐에서 인삼 사포닌의 반복 투여Repeated Administration of Ginseng Saponin in STZ-induced Diabetic Rats
STZ(streptozotocin)을 복강 주사하여 당뇨를 유발시킨 흰쥐에 대하여 상기 실시예1에서 추출한 인삼 사포닌을 개체 kg당 1, 5, 10mg 투여하여 용량에 따른 혈당 강하 작용을 시험하였다.Glucose lowering effect according to the dose was tested by administering 1, 5, 10 mg / kg of ginseng saponin extracted in Example 1 to rats induced with diabetes by intraperitoneal injection of STZ (streptozotocin).
5주령 SD계 수컷 흰쥐 24마리를 10일간 예비 사육하여 적응시킨 후 체중을 측정하였다. 16시간 절식시키고, 20마리(STZ 투여군)에는 차게 해 두었던 시트르산 완충액 (10mM, pH4.5)에 STZ를 사용 직전에 녹여 체중 kg당 45mg 용량으로 각 개체마다 복강 주사하여 당뇨를 유발시켰으며, 별도로 4마리 (정상 대조군)에는 시트르산 완충액만을 복강 주사하였다. 주사 용량은 체중 200g당 0.5ml로 하였다. 주사 후 72시간 동안 사료와 물을 자유 급식한 후 6시간 절식시키고 STZ 투여군 및 정상 대조군의 꼬리 끝으로부터 채혈하여 혈당을 측정하였다. 혈당 측정 기구로는 ONE TOUCHRBASICRMeter (LIFESCAN, USA) 및 ONE TOUCHRtest strip을 사용하였다. STZ 투여 후 78시간에 STZ 투여군 및 정상 대조군의 6시간 절식시의 혈당을 측정한 결과 STZ 투여군에서는 정상 대조군 (normal)보다 3.6배 상승되어 당뇨가 유발되었음을 확인할 수 있었다. STZ 투여군 20마리를 혈당에 따라 각 군의 혈당 평균이 비슷하도록 4마리씩 다섯 군 (당뇨 대조군, 치료 대조군, 인삼 사포닌 투여군 3개군)으로 나누고 각 군마다 해당 약물을 1일 2회 14일간 경구 투여하였다 (투여량 0.25ml, 각 개체 동일). 즉, 정상 대조군 (Normal) 및 당뇨 대조군 (diabetic)에는 3차 증류수만 투여하였고, 치료 대조군에는 30% 폴리에틸렌글리콜 400 수용액에 현탁화한 글리벤클라마이드(Glibenclamide, 한영제약) 3mg/kg을 투여하였으며, 사포닌 투여군에는 각 군당 1, 5, 10mg/kg 농도로 증류수에 녹인 인삼 사포닌을 투여하였다(PG1, PG5, PG10). 먹이는 매일 아침, 저녁 약물 투여 직전에는 쥐가 공복이 될 만큼의 양으로 공급하였다. 마지막 약물 투여 후 1시간 먹이를 공급하고 6시간 절식시킨 후 각 개체의 꼬리 끝으로부터 채혈하여 혈당을 측정한 다음, 에테르 마취 하에 체중을 재고 심장 천공법으로 1.5ml의 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액을 0.03ml의 헤파린 나트륨 (녹십자)으로 처리하고 4,000rpm, 4℃에서 5분간 원심분리하여 혈청을 분리해 낸 후, 이 혈청 샘플을 동결하여 서울의과학연구소 (SCL, 서울 용산구)에 의뢰하여 총 콜레스테롤 및 총 중성지질의 농도를 측정하였고, 그 결과를 하기 표1에 나타내었다.Twenty four five-week-old male rats were preliminarily bred for 10 days and then weighed. Fasting for 16 hours and dissolving STZ in chilled citric acid buffer (10 mM, pH4.5) in 20 (STZ-administered group) immediately before use, intraperitoneally injected at 45 mg / kg body weight to induce diabetes. Four (normal control) were intraperitoneally injected only with citric acid buffer. The injection dose was 0.5 ml per 200 g body weight. For 72 hours after injection, feed and water were fed freely and then fasted for 6 hours, and blood glucose was measured by collecting blood from the tail tip of the STZ-administered group and the normal control group. ONE TOUCH R BASIC R Meter (LIFESCAN, USA) and ONE TOUCH R test strip were used as blood glucose measuring instruments. As a result of measuring glucose at 6 hours fasting of the STZ-administered group and the normal control group at 78 hours after STZ administration, it was confirmed that diabetes was increased by 3.6 times in the STZ-administered group. Twenty STZ-treated groups were divided into five groups (diabetes control group, treatment control group, and ginseng saponin group 3 groups) of 4 animals so that the average blood sugar level of each group was similar to each group. (Dose 0.25ml, same for each individual). That is, only normal tertiary (diabetic) and diabetic control (dibetic) was administered only tertiary distilled water, and the treated control group was administered 3mg / kg of glybenclamide (Glibenclamide, Han Young Pharm) suspended in 30% polyethylene glycol 400 aqueous solution, saponin administration group Ginseng saponin dissolved in distilled water at the concentration of 1, 5, 10mg / kg per group was administered (PG1, PG5, PG10). The food was fed every morning and evening, just before drug administration, in a quantity fasting rats. One hour after the last drug administration was fed for 6 hours and fasted for 6 hours, blood was collected from the tail end of each subject to measure blood glucose, weighed under ether anesthesia, and 1.5 ml of blood was collected by cardiac puncture. The collected blood was treated with 0.03ml of heparin sodium (green cross), centrifuged at 4,000rpm and 4 ℃ for 5 minutes to separate the serum, and the serum sample was frozen to Seoul Medical Research Institute (SCL, Yongsan-gu, Seoul). Requested to measure the concentration of total cholesterol and total triglycerides, the results are shown in Table 1 below.
a. 평균 ± S.E.M. (n=6)로 나타낸 값a. Mean ± S.E.M. value represented by (n = 6)
b. PG 1: 인삼 사포닌 1mg/kgb. PG 1: Ginseng Saponin 1mg / kg
c. 처리 전c. Before treatment
d. 2주 동안 처리 후 값d. Value after treatment for 2 weeks
e. 2주 동안 처리 후 값e. Value after treatment for 2 weeks
† P<0.05에서 정상군과의 유의한 차이 † significant difference from normal group at P <0.05
†† P<0.01에서 정상군과의 유의한 차이 †† Significant difference from normal group at P <0.01
*P<0.05에서 당뇨군과의 유의한 차이* Significant difference from diabetic group at P <0.05
**P<0.01에서 당뇨군과의 유의한 차이** Significant difference from diabetic group at P <0.01
상기 표1에서 혈당에 대한 결과를 살펴보면, 정상 대조군이 117.5mg/dl로서 정상 혈당 범위를 보였으나, 당뇨 대조군 (diabetic)은 375.0mg/dl로서 당뇨의 증세를 계속하여 유지하였음을 확인하였다. 글리벤클라마이드를 투여한 치료 대조군이나 인삼 사포닌을 투여한 실험군은 모두 약물 투여 이전의 수치보다 55∼60% (평균 57.8%) 감소되어 당뇨 대조군에 대해 유의성 있는 차이가 있었다(P<0.05). 특히 인삼 사포닌 투여군에서는 모두 글리벤클라마이드 투여군보다 혈당치가 감소하는 경향을 보였다. 또한 인삼 사포닌 1mg/kg 내지 10mg/kg 사이에 혈당 강하 작용에 대한 용량 의존성은 없는 것으로 보이며, 인삼 사포닌 1mg/kg의 적은 용량 투여에도 불구하고 STZ 유발 당뇨쥐에 있어서 상승된 혈당치를 정상치로 회복시키는 활성이 있음을 알 수 있다.Looking at the results for blood glucose in Table 1, the normal control group showed a normal blood sugar range as 117.5mg / dl, the diabetic control (diabetic) was confirmed that the symptoms of diabetes continued to maintain 375.0mg / dl. The treatment control group treated with glybenclamide or the experimental group treated with ginseng saponin decreased 55-60% (mean 57.8%) from the pre-drug levels, which was significantly different from the diabetic control group ( P <0.05). In particular, the ginseng saponin-administered group showed a tendency to decrease blood glucose level than the glybenclamide-administered group. In addition, there was no dose dependence on hypoglycemic action between ginseng saponin 1mg / kg and 10mg / kg, and despite elevated doses of ginseng saponin 1mg / kg, the elevated blood glucose level was restored to normal levels in STZ-induced diabetic rats. It can be seen that there is activity.
한편 체중 증가량을 보면, 당뇨를 유발시키지 않았던 정상 대조군 (normal)의 경우 체중이 83.1g 증가하였지만, 당뇨 대조군 (diabetic)의 경우는 21.3g이 증가하여 정상 대조군보다 74.4% 감소된 체중 증가량을 보였다. 이에 대해 글리벤클라마이드 투여군에서는 체중 증가량이 51.2g으로서 당뇨 대조군의 저하된 체중 증가량에 대해 36.0%의 회복 효과를 나타내었으며, 인삼 사포닌 투여군에서는 당뇨 대조군과 유의성 있는 차이를 보였고, 글리벤클라마이드 보다도 우수한 체중 회복 효과가 있음이 관찰되었다.On the other hand, the weight gain was increased by 83.1g in the normal control group which did not induce diabetes, but the diabetic control group increased by 21.3g, which was 74.4% less than the normal control group. In contrast, the gbenbenamide treatment group gained 51.2 g of body weight, showing a 36.0% recovery effect on the reduced weight gain of the diabetic control group, and the ginseng saponin group showed a significant difference from the diabetic control group, and had a better weight recovery effect than the glybenclamide group. This was observed.
혈중 콜레스테롤은 STZ 유발 당뇨 대조군과 정상 대조군 간에 유의성 있는 차이가 발견되지 않았으나, 중성지질의 경우에는 당뇨 대조군에서 57.7mg/dl로 정상 대조군의 32.0mg/dl에 비해 80.3% 상승되었다. 이에 대해 글리벤클라마이드를 투여한 쥐에서는 47.0mg/dl으로 당뇨 대조군의 상승치에 대해 33.3%의 감소 효과를 나타내었다. 이러한 중성지질 감소 효과는 사포닌 투여군에서 더욱 뚜렷하였는데, 인삼 사포닌 5mg/kg 투여군에서 중성지질 함량이 39.7mg/dl로 가장 낮았고, 1mg/kg과 10mg/kg 투여군에서 각각 42.0mg/dl 과 45.5mg/dl로 모두 글리벤클라마이드 보다 낮은 중성지질 함량을 보였다. 이러한 인삼 사포닌의 중성지질 감소 효과는 혈당 감소 효과와 마찬가지로 용량 의존성은 관찰되지 않았다.There was no significant difference in serum cholesterol between STZ-induced diabetic and normal controls. However, in the case of triglycerides, 57.7mg / dl was increased in diabetic control compared to 32.0mg / dl in normal control. In rats receiving glybenclamide, 47.0 mg / dl showed a 33.3% reduction in the increase of the diabetic control group. The triglyceride-reducing effect was more pronounced in the saponin-administered group. The lowest triglyceride content was 39.7 mg / dl in the ginseng saponin 5 mg / kg group, and 42.0 mg / dl and 45.5 mg / kg in the 1 mg / kg and 10 mg / kg groups, respectively. All of dl showed lower triglyceride content than glybenclamide. Dose-dependent doses of ginseng saponins, such as hypoglycemic effects, were not observed.
실시예4Example 4
STZ 유발 당뇨 쥐에서 돌외 사포닌의 반복 투여Repeated Dose of Dodol Saponin in STZ-induced Diabetic Rats
STZ를 복강주사하여 당뇨를 유발시킨 흰쥐에 대하여 돌외 사포닌을 개체 kg당 0.5, 1, 5mg 투여하여 용량에 따른 혈당 강하 작용을 시험하였다. 6주령 SD계수컷 흰쥐 30마리를 9일간 예비 사육하여 적응시킨 후 체중을 측정하였다. 16시간 절식시킨 후 25마리 (STZ 투여군)에는 인삼 사포닌 투여 실험에서와 같은 방법으로 당뇨를 유발시키고, 따로 5마리 (정상 대조군)에는 시트르산 완충액 만을 복강 주사하였다. 주사 후 24시간 동안 사료와 물을 자유 급식한 후 6시간 절식시키고 STZ 투여군 및 정상 대조군의 혈당을 측정하였다. 혈당 측정 방법은 인삼 사포닌 투여 실험과 같다. STZ 투여 후 30시간에 STZ 투여군 및 정상 대조군의 6시간 절식시의 혈당을 측정한 결과 STZ 투여군에서는 정상 대조군 (normal)보다 3.0배 상승되어 당뇨가 유발되었음을 확인할 수 있었다. STZ 투여군을 혈당에 따라 각 군의 혈당 평균이 비슷하도록 5마리씩 다섯개 군(당뇨 대조군, 치료 대조군, 돌외 사포닌 투여군 3개군)으로 나누고, 각 군마다 해당 약물을 1일 2회 14일간 경구 투여하였다(투여량 0.25ml, 각 개체 동일). 즉, 정상 대조군 및 당뇨 대조군에는 3차 증류수만 투여하였고, 치료 대조군에는 30% 폴리에틸렌글리콜 400 수용액에 현탁화한 글리벤클라마이드 3mg/kg을 투여하였으며, 돌외 사포닌 투여군에는 각 군당 0.5, 1, 5 mg/kg 농도로 증류수에 녹인 돌외 사포닌을 투여하였다. 먹이는 매일 아침 저녁 약물 투여 직전에는 쥐가 공복이 될 만큼의 양을 공급하였다. 마지막 약물 투여 후 1시간 먹이 공급하고 6시간 절식시킨 후 혈당, 총 콜레스테롤, 총 중성지질 측정 방법은 인삼 사포닌 투여 실험에서와 같게 하였다. 그 결과를 표2에 나타내었다.Diabetic rats intraperitoneally injected with STZ were tested for hypoglycemic activity according to the dose by administering 0.5, 1, or 5 mg of extradol saponin per kg. Thirty six-week-old SD rats were preliminarily bred for nine days and then weighed. After fasting for 16 hours, 25 rats (STZ-administered group) induced diabetes in the same manner as in the ginseng saponin administration experiment, and 5 rats (normal control group) were intraperitoneally injected with only citric acid buffer. For 24 hours after injection, feed and water were fed freely and then fasted for 6 hours, and blood glucose levels of the STZ-administered group and the normal control group were measured. Blood glucose measurement method is the same as ginseng saponin administration experiment. As a result of measuring blood glucose at 6 hours fasting in the STZ-treated group and the normal control group 30 hours after STZ administration, it was confirmed that diabetes was induced by 3.0 times higher than the normal control group (normal). The STZ-administered group was divided into five groups (diabetes control group, treatment control group, and extradolescent saponin group 3 groups) of 5 animals so that the mean blood sugar level of each group was similar to each group, and each group was orally administered the drug twice a day for 14 days ( Dose 0.25ml, same for each individual). That is, only the tertiary distilled water was administered to the normal control group and the diabetic control group, and 3 mg / kg of glycbencamide suspended in 30% polyethylene glycol 400 solution was administered to the treatment control group, and 0.5, 1, 5 mg / kg of each group was treated in the dodol saponin group. Dodol saponins dissolved in distilled water at a concentration was administered. The food was given to the rats on an empty stomach every morning and evening just before drug administration. After feeding for 1 hour and fasting for 6 hours after the last drug administration, blood glucose, total cholesterol, and total triglyceride were measured in the same manner as in the administration of ginseng saponin. The results are shown in Table 2.
a. 평균 ± S.E.M. (n=6)로 나타낸 값a. Mean ± S.E.M. value represented by (n = 6)
b. GP 0.5: 돌외 사포닌 0.5 mg/kgb. GP 0.5: dodol saponin 0.5 mg / kg
c. 처리 전c. Before treatment
d. 2주 동안 처리 후 값d. Value after treatment for 2 weeks
e. 2주 동안 처리 후 값e. Value after treatment for 2 weeks
† P<0.05에서 정상군과의 유의한 차이 † significant difference from normal group at P <0.05
†† P<0.01에서 정상군과의 유의한 차이 †† Significant difference from normal group at P <0.01
*P<0.05에서 당뇨군과의 유의한 차이* Significant difference from diabetic group at P <0.05
**P<0.01에서 당뇨군과의 유의한 차이** Significant difference from diabetic group at P <0.01
상기 표2에서 혈당은 정상 대조군에서 118.3mg/dl, 당뇨 대조군에서 270.7 mg/dl을 나타내어 각각 정상 혈당과 고혈당의 측정치를 유지하였다. 이에 대해, 글리벤클라마이드를 투여한 치료 대조군에서는 당뇨 대조군의 50% 수준인 134.3 mg/dl를 나타내어 뚜렷하게 강하되었으며, 돌외 사포닌을 투여한 실험군에서도 투여 용량의 증가에 따라 혈당 평균이 각각 163.5, 147.3, 141.5mg/dl 순으로 낮아져, 돌외 사포닌 1mg/kg 투여 용량에서도 글리벤클라마이드 3mg/kg과 비슷한 정도의 혈당 강하 작용이 있음을 알 수 있었다.In Table 2, the blood glucose level was 118.3 mg / dl in the normal control group and 270.7 mg / dl in the diabetic control group, thereby maintaining the normal and hyperglycemic values, respectively. In contrast, the treatment control group treated with glybenclamide showed a marked drop of 134.3 mg / dl, which is 50% of the diabetic control group, and the average blood sugar level was 163.5, 147.3, and 141.5 mg, respectively. It was lowered in the order of / dl, and it was found that even in the dose of 1 mg / kg of extradol saponin, the blood glucose lowering action was similar to that of 3 mg / kg of glybenclamide.
한편 체중 증가량에 있어서는 당뇨를 유발시키지 않았던 정상 대조군의 경우 체중이 평균 54.4g 증가하였지만, 당뇨 대조군의 경우는 11.6g이 증가하여 정상 대조군 보다 78.7% 감소된 체중 증가량을 보였다. 그러나, 글리벤클라마이드 투여군에서는 43.3g 증가하여 정상 대조군의 79.6% 수준으로 회복되었다. 돌외 0.5mg/kg 투여군에서는 당뇨 대조군과의 차이가 인정되지 않지만, 1mg/kg 및 5mg/kg에서는 정상 대조군의 체중 증가량의 44 ∼47%로서 당뇨 대조군과의 유의성 있는 차이가 인정되었다(P<0.05).On the other hand, the weight gain was increased by 54.4g on average in the normal control group that did not induce diabetes, but in the diabetic control group by 11.6g, 78.7% less than the normal control group. However, in the glybenclamide-administered group, it increased by 43.3 g to 79.6% of the normal control group. The difference between the diabetic 0.5 mg / kg group and the diabetic control group was not recognized, but at 1 mg / kg and 5 mg / kg, 44-47% of the weight gain of the normal control group was found to be significant ( p <0.05). ).
콜레스테롤 수치에서는 정상 대조군과 당뇨 대조군 간에 유의성 있는 차이가 없고, 약물 투여에 의한 영향도 없었으나 중성지질에 있어서는 당뇨 대조군에서 정상 대조군에 비해 189.5mg/dl로 의미있게 상승되었으며(P<0.05), 돌외 사포닌 투여군에서 당뇨 대조군에 비해 의미있게 감소되었다(P<0.05). 그러나 글리벤클라마이드 투여군에서는 감소의 유의성이 없었다.Cholesterol levels were not significantly different between normal and diabetic controls, and there was no effect of drug administration. However, in triglycerides, diabetes mellitus significantly increased to 189.5 mg / dl compared to normal controls ( P <0.05). The saponin group was significantly decreased compared to the diabetic control group ( P <0.05). However, there was no significant decrease in the gleebenclamide group.
실시예5Example 5
STZ 유발 당뇨 쥐에서 인삼 사포닌 및 돌외 사포닌 혼합물의 반복 투여Repeated Administration of Ginseng Saponin and Dodol Saponin Mixtures in STZ-induced Diabetic Rats
STZ를 복강주사하여 당뇨를 유발시킨 흰쥐에 대하여 인삼과 돌외 사포닌의 혼합 투여에 의한 효과를 시험하기 위해, 인삼 사포닌 1mg/kg 및 돌외 사포닌 1mg/kg 투여량을 그 기준으로 삼고 인삼 사포닌과 돌외 사포닌을 혼합하여 1mg/kg이 되도록 세 가지 다른 조성으로 혼합하여 투여하였다. 5주령 SD계 수컷 흰쥐 32마리를 9일간 예비 사육하여 적응시킨 후 체중을 측정하였다. 16시간 절식시키고, 28마리 (STZ 투여군)에는 인삼 사포닌 투여 실험에서와 같은 방법으로 당뇨를 유발시키고, 별도로 4마리 (정상 대조군)에는 시트르산 완충액 만을 복강 주사하였다. 주사 후 72시간동안 사료와 물을 자유 급식한 후 6시간 절식시키고 STZ 투여군 및 정상 대조군의 혈당을 측정하였다. 혈당 측정 방법은 인삼 사포닌 투여 실험과 같다. STZ 투여군을 혈당에 따라 각 군의 혈당 평균이 비슷하도록 4마리씩 일곱 개 군(당뇨 대조군, 치료 대조군, 사포닌 투여군 5개군)으로 나누고 각 군마다 해당 약물을 1일 2회 14일간 경구 투여하였다(투여량 0.25ml, 각 개체 동일). 즉, 정상 대조군 및 당뇨 대조군에는 3차 증류수만 투여하였고, 치료 대조군에는 30% 폴리에틸렌글리콜 400 수용액에 현탁화한 글리벤클라마이드 3mg/kg을 투여하였으며, 사포닌 투여군에는 인삼 사포닌 1mg/kg (PG1), 인삼 사포닌 0.75 + 돌외 사포닌 0.25mg/kg (PG0.75 + GP0.25), 인삼 사포닌 0.5 + 돌외 사포닌 0.5mg/kg (PG0.5 + GP0.5), 인삼 사포닌 0.25 + 돌외 사포닌 0.75mg/kg (PG0.25 + GP0.75), 돌외 사포닌 1mg/kg (GP1)을 각각 증류수에 녹여 각 군에 투여하였다. 먹이는 매일 아침저녁 약물 투여 직전에는 쥐가 공복이 될 만큼의 양을 공급하였다. 마지막 약물 투여 후 1시간 먹이를 공급하고 6시간 절식시킨 후 혈당, 총 콜레스테롤 및 총 중성 지질 측정 방법은 인삼 사포닌 투여 실험에서와 같다.To test the effects of the combined administration of ginseng and extradolone saponin on the diabetic rats by intraperitoneal injection of STZ, ginseng saponin and dodol saponin were used as the basis for the dose of 1 mg / kg ginseng saponin and 1 mg / kg dodol saponin. Was mixed and administered in three different compositions to be 1mg / kg. Thirty-two male rats of 5-week-old SD were preliminarily bred for 9 days and then weighed. Fasting for 16 hours, 28 (STZ-administered group) induced diabetes in the same manner as in the ginseng saponin administration experiments, and 4 animals (normal control) were intraperitoneally injected only with citric acid buffer. For 72 hours after injection, feed and water were fed freely and then fasted for 6 hours, and blood glucose levels of the STZ-administered group and the normal control group were measured. Blood glucose measurement method is the same as ginseng saponin administration experiment. The STZ-administered group was divided into seven groups (diabetes control group, treatment control group, and saponin-administered group 5 groups) of 4 dogs so that the mean blood sugar level of each group was similar to each group, and each group was orally administered the drug twice a day for 14 days (administration). Amount of 0.25ml, the same for each individual). That is, only the tertiary distilled water was administered to the normal control group and the diabetic control group, and 3 mg / kg of glycbencamide suspended in 30% polyethylene glycol 400 aqueous solution was administered to the control control group. 0.75 + Dolto Saponin 0.25mg / kg (PG0.75 + GP0.25), Ginseng Saponin 0.5 + Dolto Saponin 0.5mg / kg (PG0.5 + GP0.5), Ginseng Saponin 0.25 + Dolto Saponin 0.75mg / kg (PG0 .25 + GP0.75), and 1 mg / kg of dodol extra Saponin (GP1) were dissolved in distilled water and administered to each group. The animals were fed on an empty stomach every morning and evening just before drug administration. Blood glucose, total cholesterol and total neutral lipids were measured in the same manner as in the ginseng saponin administration experiment after feeding for 1 hour and fasting for 6 hours after the last drug administration.
인삼과 돌외 사포닌의 혼합 투여에 의한 효과를 시험하기 위해, 앞의 실험에서 우수한 혈당 강하 작용을 보였던 인삼 사포닌 1mg/kg 및 돌외 사포닌 1mg/kg 투여량을 그 기준으로 삼고 인삼 사포닌과 돌외 사포닌을 혼합하여 1mg/kg이 되도록 세 가지 다른 조성으로 반복 투여한 결과를 표3에 나타내었다.To test the effects of the combined administration of ginseng and dodol saponins, ginseng saponins and dodol saponins were mixed based on the dose of 1 mg / kg ginseng saponin and 1 mg / kg dodol saponin, which showed excellent hypoglycemic activity in the previous experiment. Table 3 shows the results of repeated administrations with three different compositions to 1 mg / kg.
a. 평균 ± S.E.M. (n=6)로 나타낸 값a. Mean ± S.E.M. value represented by (n = 6)
b. PG1: 인삼 사포닌 1 mg/kg, GP1: 돌외 사포닌 1 mg/kgb. PG1: Ginseng saponin 1 mg / kg, GP1: Dodol saponin 1 mg / kg
c. 처리 전c. Before treatment
d. 2주 동안 처리 후 값d. Value after treatment for 2 weeks
e. 2주 동안 처리 후 값e. Value after treatment for 2 weeks
† P<0.05에서 정상군과의 유의한 차이 † significant difference from normal group at P <0.05
†† P<0.01에서 정상군과의 유의한 차이 †† Significant difference from normal group at P <0.01
*P<0.05에서 당뇨군과의 유의한 차이* Significant difference from diabetic group at P <0.05
**P<0.01에서 당뇨군과의 유의한 차이** Significant difference from diabetic group at P <0.01
상기 표3의 혈당에 있어서 정상 대조군이 51.0mg/dl, 당뇨 대조군이 287.8mg/dl로서 각각 정상 혈당과 고혈당 수치를 유지하였으며, 글리벤클라마이드를 투여한 치료 대조군에서는 124.5mg/dl로서 당뇨 대조군의 43% 수준으로 강하되었다. 이에 비해, 인삼 사포닌 1mg/kg을 투여한 경우 120.5mg/dl의 혈당을 나타내어 대조 약물과 비슷한 정도의 혈당 강하 효과를 나타내었으며, 돌외 사포닌 1mg/kg을 투여한 경우는 111.5mg/dl로서 가장 우수한 혈당 강하 작용을 나타내었다. 인삼과 돌외를 혼합한 경우, 두 가지 사포닌의 배합 비율에 상관없이 모두 유사한 혈당 강하 작용이 있었고 (혈당 감소 수치 평균 97.7mg/dl), 이들은 모두 글리벤클라마이드의 경우와 비슷한 정도의 혈당 강하 작용을 나타내었다.In the blood glucose of Table 3, the normal control group was 51.0 mg / dl, and the diabetic control group was 287.8 mg / dl, respectively, and maintained normal blood glucose and hyperglycemic levels, respectively, and 124.5 mg / dl in the treatment control group administered with glybencamide as 43% of the diabetic control group. Descended to the level. On the other hand, when ginseng saponin 1mg / kg was administered, it showed a blood sugar level of 120.5mg / dl, which was comparable to that of the control drug, and when administered 1 mg / kg of dorsal saponin, 111.5mg / dl was the best. It has a hypoglycemic effect. When ginseng and dol-o were mixed, there was a similar hypoglycemic effect regardless of the combination ratio of the two saponins (average of hypoglycemic value of 97.7mg / dl), and all of them showed a similar hypoglycemic effect as that of glybenclamide. .
또한 체중 증가량에 있어서는 정상 대조군의 경우 61.7g 증가하였지만, 당뇨 대조군은 평균 9.1g 증가하여 정상 대조군보다 85.3% 감소된 체중 증가량을 보였다. 그러나 치료 대조군에서는 29.3g이 증가하여 당뇨 대조군과 유의적인 차이가 있었다 (P<0.05). 이에 비해 인삼 사포닌 투여군과 인삼과 돌외 사포닌을 혼합 투여한 세 개 군에서는 P값 5% 미만의 수준으로 당뇨 대조군과의 차이가 있었으며 특히 돌외 1mg/kg 투여군에서는 정상 대조군의 89% 수준으로 체중이 회복되었다.In addition, the weight gain increased by 61.7 g in the normal control group, but the average diabetic control group increased by 9.1 g, which was 85.3% lower than the normal control group. However, 29.3g was increased in the control group, which was significantly different from the diabetic control group ( P <0.05). Compared to the diabetic control group, the ginseng saponin-administered group and the three groups treated with ginseng and dodol saponin were less than the P value of 5%, especially in the 1 mg / kg dodol group, the body weight returned to 89% of the normal control group. It became.
중성지질의 경우에는 당뇨 대조군에서 83.3mg/dl로 정상 대조군의 36.0mg/dl에 비해 131% 상승되었다. 이에 대해 글리벤클라마이드를 투여한 쥐에서는 63.8mg/dl로 당뇨 대조군의 상승치에 대해 약 59%의 감소 효과를 나타내었다. 인삼 사포닌 투여군 (PG 1) 및 인삼 사포닌 0.75 + 돌외 사포닌 0.25mg/kg (PG0.75 + GP0.25), 인삼 사포닌 0.5 + 돌외 사포닌 0.5mg/kg (PG0.5 + GP0.5)투여군에서는 글리벤클라마이드 투여군과 비슷한 수준으로 중성지질 함량을 감소시켰으며 (P<0.05), 인삼 사포닌 0.25 + 돌외 사포닌 0.75mg/kg (PG0.25 + GP0.75), 돌외 사포닌 1mg/kg (GP1) 에서는 글리벤클라마이드 보다도 강한 중성지질 감소 효과를 나타내는 경향이 있었으나 글리벤클라마이드 투여군과의 뚜렷한 차이는 없었다. 이러한 효과도 인삼 사포닌과 돌외 사포닌의 혼합 비율에 상관없이 거의 동일한 정도의 효과를 갖고 있는 것으로 해석된다.In the case of triglycerides, 83.3 mg / dl in the diabetic control group was 131% higher than 36.0 mg / dl in the normal control group. In mice treated with glybenclamide, 63.8 mg / dl showed a reduction of about 59% for the elevated level of the diabetic control group. Gbenbenamide in the ginseng saponin group (PG 1) and ginseng saponin 0.75 + dodol saponin 0.25 mg / kg (PG0.75 + GP0.25), ginseng saponin 0.5 + dodol saponin 0.5 mg / kg (PG0.5 + GP0.5) Neutral lipid content was decreased to the same level as the administration group ( P <0.05), and ginseng saponin 0.25 + dodol saponin 0.75mg / kg (PG0.25 + GP0.75) and dodol saponin 1mg / kg (GP1) were stronger than glybencamide There was a tendency to reduce triglyceride, but there was no clear difference with the glybenclamide group. This effect is interpreted to have almost the same effect regardless of the mixing ratio of ginseng saponin and dodol saponin.
실시예6Example 6
고지방 식이에 의한 고지혈 유발 쥐에서 인삼 및 돌외 사포닌의 장기 투여Long-term Administration of Ginseng and Dodol Saponins in Hyperlipidemic Rats with High Fat Diet
고지방 식이로 인한 체중 증가 및 혈청 지질 농도 상승에 대한 사포닌의 효과를 시험하였다. 4주령 SD계 수컷 흰쥐를 11일간 적응시켜 평균 체중 197.9g이 된 쥐를 실험에 사용하였다. 체중에 따라 난괴법 (randomized complete block design)에 의해 6마리씩 4개군으로 나누고, 3마리씩 한 케이지에 넣고 사육하면서 해당 식이 제공과 동시에 해당 약물을 4주 동안 1일 2회 경구 투여하였다(투여량 0.25ml, 각 개체 동일). 즉, 정상 대조군(normal)에는 정상 분말 사료 (제일제당) 제공 및 증류수 투여, 고지방 대조군(high fat)에는 17.5%의 라드(삼립유지)를 분말 사료와 섞은 고지방 사료 제공 및 증류수 투여, 사포닌 투여군에는 고지방 사료 제공 및 돌외 사포닌 1mg/kg (GP1) 또는 돌외 사포닌 0.5 + 인삼 사포닌 0.5mg/kg (GP0.5+PG0.5)을 증류수에 녹여 투여하였다. 약물 투여 시작일로부터 일주일마다 사료 섭취량 및 체중을 측정하였으며, 마지막 약물 투여 후 16시간 절식하고 심장 천공법으로 혈액을 채취하였다. 채취한 혈액은 4000rpm, 4℃에서 5분간 원심분리하여 혈청을 분리해 내고, 이 혈청 샘플을 동결하여 서울 의과학 연구소에 의뢰하여 총 콜레스테롤 및 총 중성지질의 농도를 측정하였다.The effect of saponin on weight gain and elevated serum lipid concentrations due to high fat diet was tested. Four-week-old SD male rats were acclimated for 11 days, and mice with an average weight of 197.9 g were used for the experiment. According to the body weight, the animals were divided into four groups of six by randomized complete block design, and placed in three cages of three animals and raised, and provided with the diet and orally administered the drug twice a day for 4 weeks (dose 0.25). ml, each object the same). That is, the normal control (normal) to provide a normal powder feed (digested sugar) and distilled water administration, the high fat control (high fat) to provide a high-fat feed mixed with powder feed of 17.5% lard (triglyceride maintenance) and distilled water administration, saponin administration group High fat feed and dolphin saponin 1 mg / kg (GP1) or dodol saponin 0.5 + ginseng saponin 0.5 mg / kg (GP0.5 + PG0.5) were administered in distilled water. Feed intake and body weight were measured every week from the start of drug administration, and 16 hours after the last drug administration, blood was collected by cardiac puncture. The collected blood was centrifuged at 4000 rpm and 4 ° C. for 5 minutes to separate the serum, and the serum samples were frozen and commissioned by the Seoul Institute of Medical Science to measure total cholesterol and total triglyceride levels.
동물성 지방인 라드를 17.5% 함유한 고지방 사료를 제공하면서 4주 동안 1일 2회 인삼 및 돌외 사포닌을 투여한 결과를 표4 및 5에 나타내었다. 먼저 체중 증가 및 식이 섭취량에 관한 영향을 살펴보면(표4), 정상 대조군은 4주 동안 평균 104.6g의 체중 증가가 있었으며, 식이 섭취량은 개체당 464.0g으로 가장 높았다. 식이 효율은 체중 증가량에 대한 식이 섭취량을 백분율로 나타낸 것으로, 단위 식이 섭취량에 비해 체중 증가가 어느 정도인지를 나타내는 수치이다. 정상 대조군의 식이 효율은 22.54로서 가장 낮았고, 고지방 대조군이 34.43으로 가장 높았다. 정상 대조군의 식이 효율을 100%로 보면, 고지방 대조군의 식이 효율은 정상 대조군에 비해 52.7%가 증가한 값이다. 고지방 대조군은 식이 섭취량이 377.6으로 가장 낮은 데 비해 체중 증가가 130.1g으로 가장 높기 때문이다. 돌외 사포닌을 1mg/kg 투여한 실험군 (GP 1)과 돌외와 인삼 사포닌을 각각 0.5mg/kg 혼합하여 투여한 실험군 (GP0.5+PG0.5)에서는 체중 증가에 있어 고지방 대조군에 비해 각각 14.1g이 낮은 116.0g 및 3.8g이 낮은 126.3g을 나타내었으나, 식이 섭취량에 대하여 식이 효율을 계산하면, (GP 1)과 (GP0.5+PG0.5) 모두 고지방 대조군보다 22% 이상 감소한 29.34와 29.46을 각각 나타내어, 식이 효율에 있어서는 모두 고지방 대조군에 비해 감소하였으며 GP 단독과 GP와 PG혼합에 따른 차이도 없는 것으로 나타났다.Tables 4 and 5 show the results of the administration of ginseng and extradolescent saponin twice daily for 4 weeks while providing a high fat feed containing 17.5% of animal fat lard. First, the effects on weight gain and dietary intake (Table 4) showed that the normal control group had an average weight gain of 104.6g for 4 weeks and the highest dietary intake was 464.0g per individual. Dietary efficiency is a percentage of dietary intake versus weight gain, which indicates how much weight gain is relative to unity intake. The dietary efficiency of the normal control group was the lowest as 22.54, and the high fat control group was the highest as 34.43. When the dietary efficiency of the normal control group is 100%, the dietary efficiency of the high fat control group is increased by 52.7% compared to the normal control group. The high-fat control group had the highest weight gain of 130.1g compared to the lowest dietary intake of 377.6. In the experimental group (GP 1) administered 1 mg / kg of dodol saponin (GP1) and 0.5 mg / kg of mixed dolphin and ginseng saponin (GP0.5 + PG0.5), the weight gain was 14.1 g in comparison with the high fat control group, respectively. The low 116.0g and 3.8g showed a low 126.3g, but when calculating the dietary efficiency for dietary intake, both (GP 1) and (GP0.5 + PG0.5) were reduced by more than 22% over the high fat control group 29.34 and 29.46 In terms of dietary efficiency, all of the dietary efficiency decreased compared to the high fat control group, and there was no difference between GP alone and GP and PG mixture.
a. GP1: 돌외 사포닌 1 mg/kg, PG0.5: 인삼 사포닌 0.5 mg/kga. GP1: Dodol saponin 1 mg / kg, PG0.5: Ginseng saponin 0.5 mg / kg
b. 평균 ±S.E.M.(n=6)으로 표시된 값b. Value expressed as mean ± S.E.M. (N = 6)
c. 식이 효율: [체중 증가(g)/총 식이 섭취량(g)] ×100c. Dietary efficiency: [weight gain (g) / total dietary intake (g)] × 100
d. 정상 대조군에 대한 %로 나타낸 괄호 안의 값d. Value in parentheses in% of normal control
한편, 혈중 콜레스테롤 및 중성지질 수치에 관한 결과는 표5에 나타내었다. 먼저 콜레스테롤 값은 고지방 대조군에서 정상 대조군에 비해 28.5mg/dl가 증가된 96.7mg/dl이 측정되었다. 그러나 사포닌을 투여한 실험군에서도 마찬가지로 콜레스테롤 값이 증가되었으며, 이는 고지방 대조군에 비해 유의성 있는 차이가 관찰되지 않으므로 1mg/kg 투여 용량에서 혈중 콜레스테롤 농도에 대한 사포닌의 영향은 거의 없는 것으로 보인다. 그러나, 중성지질의 경우 고지방 대조군에서 정상 대조군에 비해 85.0%가 증가한 71.3mg/dl을 나타내었으며 돌외 사포닌 1mg/kg을 투여한경우 (GP 1) 46.4mg/dl, 돌외 사포닌 0.5mg/kg과 인삼 사포닌 0.5mg/kg을 혼합 투여한 경우 (GP0.5+PG 0.5) 42.8mg/dl로서 모두 고지방 대조군의 상승된 중성지질 수치를 정상치와 근사한 수치로 저하시켰다.On the other hand, the results regarding blood cholesterol and triglyceride levels are shown in Table 5. First, the cholesterol value of 96.7 mg / dl was increased by 28.5 mg / dl in the high fat control group compared to the normal control group. However, in the experimental group treated with saponin, the cholesterol value was also increased, and since there was no significant difference compared to the high fat control group, it seems that there was little effect of saponin on blood cholesterol concentration at the 1 mg / kg dose. However, triglycerides showed an increase of 81.3% in the high-fat control group compared to the normal control group, 71.3 mg / dl, and when 1 mg / kg of extradol saponin was administered (GP 1), 46.4 mg / dl, 0.5 mg / kg of extradol saponin and 0.5 ginseng saponin 0.5 The combined administration of mg / kg (GP0.5 + PG 0.5) was 42.8 mg / dl, which lowered the elevated triglyceride levels of the high fat control group to approximate normal levels.
a. GP1: 돌외 사포닌 1 mg/kg, PG0.5: 인삼 사포닌 0.5 mg/kga. GP1: Dodol saponin 1 mg / kg, PG0.5: Ginseng saponin 0.5 mg / kg
b. 평균 ±S.E.M.(n=6)으로 표시된 값b. Value expressed as mean ± S.E.M. (N = 6)
c. 정상 대조군에 대한 %로 나타낸 값c. Value expressed as a percentage of normal control
††P<0.01에서 정상군과의 유의한 차이 †† Significant difference from normal group at P <0.01
**P<0.01에서 고지방군과의 유의한 차이 ** Significant difference from high fat group at P <0.01
각 실험 결과는 평균±표준편차로 나타내었고, 각 실험군의 평균치간의 차이에 대한 통계 처리는 언페어드(unpaired)t-검정에 의하였으며,P값이 0.05 이하인 경우를 유의한 것으로 판정하였다.The results of the experiments were expressed as mean ± standard deviation. Statistical treatment for the difference between the mean values of each experimental group was performed by an unpaired t -test, and it was determined that the P value was less than 0.05.
상기 실험의 결과로부터 알 수 있듯이 본 발명에 따라 추출된 인삼의 사포닌과 돌외의 사포닌은 혈당 감소 효과와 중성지질 감소 효과를 나타내며, 이들의 혼합물에서 뚜렷한 상승효과는 확인되지 않았지만, 돌외는 인삼에 비해 상당히 저렴하므로 돌외의 사포닌을 다량 사용하고, 인삼의 사포닌을 소량 사용하는 경우 저렴한 비용으로 사포닌의 항당뇨성 및 항고지혈성 효과를 얻을 수 있는 장점이 있다.As can be seen from the results of the above experiment, saponins and dolother saponins of ginseng extracted according to the present invention show a blood sugar reduction effect and a neutral lipid reduction effect. Since it is quite inexpensive, a large amount of saponin other than stone is used, and a small amount of saponin of ginseng has an advantage of obtaining antidiabetic and antihyperlipidemic effects of saponin at low cost.
이상과 같이, 본 발명에 따라 인삼 또는 돌외로부터 클로로포름으로 탈지시키고, 비온성 교환수지를 사용함으로써 사포닌만을 고순도로 추출할 수 있고, 이와 같이 지방, 당, 무기염 등이 제거된 고순도의 사포닌을 식품에 첨가하기 때문에 소량을 첨가하여도 항당뇨성 및 항고지혈성 효과를 얻을 수 있는 장점이 있다. 뿐만 아니라 저렴한 돌외로부터 사포닌을 추출하여 이를 고가의 인삼 사포닌과 혼합하여 사용함으로써 저렴한 비용으로 인삼의 사포닌과 동일한 정도의 혈당 감소 및 중성지질 감소 효과를 얻을 수 있는 장점도 있다.As described above, only saponins can be extracted with high purity by degreasing with chloroform from ginseng or dol, according to the present invention, and using non-ionic exchange resins. Thus, high-purity saponins from which fats, sugars, inorganic salts, and the like are removed are foods. Since it is added to the small amount of the addition has the advantage that the antidiabetic and antihyperlipidemic effect can be obtained. In addition, by extracting saponin from low-cost dodol and using it mixed with expensive ginseng saponin, there is an advantage that the same amount of blood sugar reduction and neutral lipid reduction effect as saponin of ginseng at low cost.
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