KR20020066862A - Raw food material with high functionality containing chitosan and chitooligosaccharides originated from microorganisms and method for preparing same - Google Patents

Raw food material with high functionality containing chitosan and chitooligosaccharides originated from microorganisms and method for preparing same Download PDF

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Abstract

PURPOSE: Provided are a raw food material with high functionality containing chitosan and chitooligosaccharides originated from microorganisms and a method for preparing the same. The food material has preventing and treating effects on diseases, such as cancer, AIDS, hypertension, etc. CONSTITUTION: The manufacturing method comprises the steps of: inoculating Rhizopus sp. and Bacillus sp. strains respectively into legumes, cereals, or steamed cereals then culturing them; mixing a fermented material by Rhizopus sp. strain containing chitosan and a fermented material by Bacillus sp. strain containing endo type chitosanase; and reacting the mixture at 30-60 deg.C, pH 5.5-7.0 for 1-10 hours.

Description

미생물 유래 키토산 및 키토올리고당을 포함하는 고기능성 건강 식품원료 및 이의 제조방법{RAW FOOD MATERIAL WITH HIGH FUNCTIONALITY CONTAINING CHITOSAN AND CHITOOLIGOSACCHARIDES ORIGINATED FROM MICROORGANISMS AND METHOD FOR PREPARING SAME}FOOD MATERIAL WITH HIGH FUNCTIONALITY CONTAINING CHITOSAN AND CHITOOLIGOSACCHARIDES ORIGINATED FROM MICROORGANISMS AND METHOD FOR PREPARING SAME}

본 발명은 미생물로부터 유래된 키토산 및 키토올리고당을 포함하는 식품원료 및 이의 제조방법, 및 이 식품원료로부터 제조된 식품에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 리조퍼스 속(Rhizopus sp.) 및 바실러스 속(Bacillus sp.) 균주로부터 유래된 키토산 및 키토올리고당을 포함하는 고기능성 건강 식품원료 및 이의 제조방법, 및 이 식품원료로부터 제조된 식품에 관한 것이다.The present invention relates to a food raw material comprising a chitosan and chitooligosaccharide derived from a microorganism, a method for producing the same, and a food prepared from the food raw material. More specifically, the present invention provides a high functional health food raw material including chitosan and chitooligosaccharides derived from the genus Rhizopus sp. And Bacillus sp. It is about food.

키토올리고당(COS)은 β-1,4-D-글루코사민의 중합체인 키토산의 부분 분해된 올리고머로서, 생리적 기능성을 갖는다. 로진(Rozhin) 등 및 마데손(Matheson) 등은 키토산(폴리아민)의 면역 부활 증진성을 보고하였고, 또한 키토올리고당이 항암, 항종양, 암 예방물질(chemopreventive agent of cancer) 임을 보고하였다(1984). 미카미(Mikami) 등은 키토산과 키토올리고당의 면역 부활성에 대하여(1988), 토코로(Tokoro) 등은 항종양 기능에 대하여(1988), 추카다(Tsukada)등은 항암 기능에 대하여 보고하였다(1990). 또한 김(Kim) 등은 키토산과 키토올리고당이 혈압상승의 원인인 염소이온과 결합하여 이를 체외로 배출함으로써 혈압상승을 예방하고, 칼슘 흡수촉진 기능을 갖는다고 보고한 바 있으며(1997), 혈당량을 감소시키고, 비피더스균과 유산균 등의 장내 유용균을 증가시키는 동시에 대장균 등에 대해서 강한 항균작용을 하며, 중금속을 흡착시켜 배설하는 작용을 하는 것으로 보고하였다(2000). 또한 마에자키(Maezaki) 등은 키토산을 섭취함으로써 인간의 혈중 콜레스테롤이 저하됨을 보고한 바 있다(1993).Chitooligosaccharide (COS) is a partially degraded oligomer of chitosan, a polymer of β-1,4-D-glucosamine, and has physiological functionality. Rozhin et al. And Matheson et al. Reported the enhancement of immunostimulation of chitosan (polyamine), and also reported that chitooligosaccharides are anti-cancer, anti-tumor and chemopreventive agents of cancer (1984). . Mikami et al. Reported the immunostimulatory activity of chitosan and chitooligosaccharides (1988), Tokoro et al. Antitumor function (1988), and Tsukada et al. (1990). ). Kim et al. Also reported that chitosan and chitooligosaccharides combine with chlorine ions, the cause of blood pressure, to be released into the body to prevent blood pressure rise and promote calcium absorption (1997). It has been reported to increase the intestinal useful bacteria such as bifidus and lactic acid bacteria, and to have strong antibacterial activity against E. coli, and to absorb and excrete heavy metals (2000). In addition, Maezaki et al. (1993) reported that ingestion of chitosan lowers blood cholesterol in humans.

샘슨(Samson) 등에 의하면 식품과 사료에 관계하는 곰팡이류는 주로 자이고마이세테스(Zygomycetes), 아스코마이세테스(Ascomycetes), 바시디오마이세테스(Basidiomycetes)및 듀테로마이세테스(Deuteromycetes)이며[Mycology, No.11p47, 1976], 가르시아(Garcia)는 이들 균주의 세포벽은 주로 글루칸-키토산 및 키틴-글루칸으로 이루어져 있다고 보고하였다[Annu. Rev. Microbiol. 22.87, 1968]. 특히, 자이고마이세테스류(Zygomycetes)곰팡이의 세포벽은 글루칸과 키토산으로 구성되어 있으며, 뮤코 속(Mucorsp.) [고바야시 등,일농화회지, 62, 1463, 1988], 아브시디아 속(Absidiasp.)[고바야시 등,일농화회지, 62, 1471, 1988], 및 리조퍼스 속[Kubo 등,일농화회지, 66, 1541, 1992]에 있어서 키토산은 약 33% 정도의 함량으로 존재한다고 보고한 바 있다.According to Samson et al., Fungi related to food and feed are mainly Zygomycetes , Ascomycetes , Basidiomycetes and Deuteromycetes . [ Mycology, No. 11 p47, 1976], Garcia reported that the cell walls of these strains consist mainly of glucan-chitosan and chitin-glucan [ Annu. Rev. Microbiol. 22. 87, 1968]. In particular, the cell wall of the Zygomycetes fungus is composed of glucan and chitosan, and Mucor sp. (Kobayashi et al. , 62 , 1463, 1988), and the genus Absidia ( Absidia sp .) [Kobayashi et al . , 62 , 1471, 1988], and the genus Rezopus [Kubo et al. , 66 , 1541, 1992]. I have reported it.

한편 리조퍼스 속 등의 곰팡이는 특히 우리나라의 전통 발효식품인 약주, 탁주, 간장, 고추장, 된장의 발효곰팡이이다. 이중에서, 된장 및 간장은 우리나라의가장 주된 부식으로서, 발효 숙성 과정에서 자가분해(autolysis) 또는 메주 내부에 분포하는 바실러스 속 균주가 생산하는 키토산아제 및 단백질 분해효소들에 의해 키토올리고당의 존재 가능성이 있으나 그 함량은 매우 낮다. 조(Cho) 등은 메주의 표면에 뮤코 무세도(Mucor mucedo), 리조퍼스 자포니쿠스(Rhizopus japonicus), 페니실리엄 글라우컴(Penicillium glaucum), 페니실리엄 속(Penicillium sp.)등의 곰팡이들이 주로 서식하고, 메주의 중심부에는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 포함하는 바실러스 속(Bacillus sp.)이 주로 서식한다고 보고하였다(1970).On the other hand, the fungus, such as genus of lippers, is a fermented mold of Yakju, Takju, Soy sauce, Gochujang and Doenjang, which are traditional Korean fermented foods. Among them, doenjang and soy sauce are the most important corrosion in Korea, and the presence of chitooligosaccharides may be caused by chitosanase and protease produced by the bacillus strain distributed within Meju during autolysis or fermentation. But its content is very low. Cho et al. Are the surface of Muju muco mucedo , Rhizopus japonicus , Penicillium glaucum , Penicillium sp. It is reported that fungi inhabit mainly, and Bacillus sp. , Including Bacillus subtilis , lives mainly in the center of Meju (1970).

현재 상업적으로 생산되는 메주 및 된장은, 일본 된장, 간장, 청주 등의 제조 균주인 아스퍼길러스 오리재(Aspergillus oryzae)를 주로 이용한 코지(koji, 黃麴)가 사용되고 있다. 이러한 아스퍼길러스 오리재는 세포벽에 키토산을 가지지 않으므로, 전통의 메주 및 된장보다는 키토산 및 키토올리고당의 함량이 낮거나 전혀 존재하지 않는다.Currently, commercially produced meju and soybean paste are used koji (koji, 黄 麴) mainly using Aspergillus oryzae, which is a manufacturing strain of Japanese miso, soy sauce, and sake. Since the Aspergillus duck material does not have chitosan on the cell wall, the content of chitosan and chitooligosaccharides is lower or not present at all than traditional meju and miso.

이에 본 발명자들은 곡류 또는 두류에 균주로서 세포벽에 키토산을 함유하고 있는 리조퍼스 속 균주를 접종 발효하여 생성된 미생물성 키토산을 함유하는 발효원료와 곡류 또는 두류에 바실러스속 균주를 접종 배양하여 엔도형 키토산아제가 생성된 발효원료를 혼합하여 30 내지 60℃, pH 5.5 내지 7.0의 조건에서 1 내지 10시간 동안 효소 반응시켜 제조된, 키토산과 키토올리고당의 함량이 증가된 기능성 건강 식품원료 및 이의 제조방법을 개발하고, 이 식품원료를 이용하여 제조될 수 있는 건강식품을 제공하기에 이른 것이다.Accordingly, the present inventors inoculated and cultured endobacterial chitosan by inoculating the fermentation material containing microbial chitosan produced by inoculating and fermenting the strain of the genus Rizopus containing chitosan on the cell wall as a strain on cereals or legumes. A functional health food raw material with an increased content of chitosan and chitooligosaccharides prepared by enzymatic reaction for 1 to 10 hours at 30 to 60 ° C. and a pH of 5.5 to 7.0 by mixing fermented raw material produced by an azease and a method for preparing the same To develop and provide a health food that can be manufactured using this food raw material.

본 발명의 목적은 미생물 유래 키토산과 키토올리고당의 함량이 높은 고기능성 건강 식품원료를 제공하는 데 있다.An object of the present invention is to provide a high functional health food raw material having a high content of microorganisms chitosan and chitooligosaccharides.

본 발명의 다른 목적은 상기 고기능성 건강 식품원료의 제조방법을 제공하는 데 있다.Another object of the present invention to provide a method for producing the high functional health food raw materials.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 고기능성 건강 식품원료로부터 제조된 식품을 제공하는 데 있다.Another object of the present invention to provide a food prepared from the high functional health food raw materials.

도 1은 2개월 간의 숙성기간동안 된장내 총질소 함량의 변화를 나타내는 그래프이다.1 is a graph showing the change of total nitrogen content in the doenjang during the maturation period of 2 months.

도 2는 2개월 간의 숙성기간동안 간장내 총질소 함량의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the change in total nitrogen content of the liver during the aging period of 2 months.

도 3은 2개월 간의 숙성기간동안 된장내 아미노태 질소 함량의 변화를 나타내는 그래프이다.3 is a graph showing the change of amino nitrogen content in the doenjang during the maturing period of 2 months.

도 4는 2개월 간의 숙성기간동안 간장내 아미노태 질소 함량의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 4 is a graph showing the change of amino nitrogen content in the liver during the maturation period of 2 months.

도 5는 2개월 간의 숙성기간동안 된장내 키토올리고당(COS) 함량의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 5 is a graph showing the change in chitooligosaccharides (COS) content in doenjang during the maturing period of 2 months.

도 6은 2개월 간의 숙성기간동안 간장내 COS 함량의 변화를 나타내는 그래프이다.Figure 6 is a graph showing the change in the liver COS content during the maturation period of 2 months.

도 7은 일본 된장, 국내시판 된장 및 BR 된장(바실러스 균주 및 리조퍼스 균주를 이용하여 제조된 식품원료로부터 숙성된 된장)의 COS 함량을 비교하는 그래프이다.Figure 7 is a graph comparing the COS content of Japanese miso, domestic commercial miso and BR doenjang (Miso matured from food ingredients prepared using Bacillus strains and Reoper strain).

도 8은 일본 간장, 국내시판 간장 및 BR 간장의 COS 함량을 비교하는 그래프이다.8 is a graph comparing the COS content of Japanese soy sauce, domestic commercial soy sauce, and BR soy sauce.

본 발명에서는 곡류 또는 두류에 리조퍼스 속(Rhizopus sp.) 균주를 접종시킨 후 배양하여 생성된 미생물성 키토산 함유 발효원료와 곡류 또는 두류에 바실러스 속(Bacillus sp.) 균주를 접종시킨 후 배양하여 생성한 엔도형 키토산아제(endo type chitosanase) 함유 발효원료를 혼합하고, 온도 30 내지 60℃, pH 5.5 내지 7.0의 조건에서 효소 반응시켜 제조된, 미생물 유래 키토산 및 키토올리고당을 포함하는 고기능성 건강 식품원료, 이의 제조방법 및 이로부터 제조된 식품을 제공한다.In the present invention, inoculated with the strain of Rhizopus sp. In cereals or legumes, and then inoculated with microbial chitosan-containing fermentation material and Bacillus sp. High functional health food raw materials including chitosan and chitooligosaccharides derived from microorganisms prepared by mixing a fermentation raw material containing an endo type chitosanase and enzymatically reacting at a temperature of 30 to 60 ° C. and a pH of 5.5 to 7.0. It provides a method for producing and food prepared therefrom.

리조퍼스 속 균주는 세포벽에 키토산을 25∼33% 함유하고 있으며, 유기산 대사에 있어서 L-형의 젖산만을 생성한다. 이 리조퍼스 속 균의 미생물성 키토산은 바실러스 속 균주가 함유하는 엔도형 키토산아제에 의해 β-1,4 결합을 무작위로 절단하는 가수분해 기작에 따라 키토올리고당(chitooligosaccharide; COS)으로 부분 가수분해된다. 또한 리조퍼스속 균은 프로테아제(protease), 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase) 활성이 높고, 또한 바실러스 속 균은 엔도 키토산아제, 프로테아제(protease) 활성이 높은 특성으로 인해, 곡류중 당질, 단백질과 지질을 가수분해시켜 식품의 풍미를 높일 수 있다. 본원발명에 사용될 수 있는 리조퍼스 속 균주로는 리조퍼스 오리재(R. oryzae), 리조퍼스 자포니쿠스(R. japonicus), 리조퍼스 올리고스포러스(R. oligosporus), 리조퍼스 델레마(R. delemar) 등을 예로 들 수 있다. 이들은 가공할 곡류의 종류에 따라서 다르게 이용된다.The genus of the genus Ripus contains 25-33% of chitosan in the cell wall and produces only L-type lactic acid in organic acid metabolism. The microbial chitosan of the genus Rizopus is partially hydrolyzed to chitooligosaccharides (COS) by a hydrolysis mechanism that randomly cleaves β-1,4 bonds by an endotype chitosanase contained in the Bacillus strain. . In addition, the genus of the genus Risperus has a high protease, amylase and lipase activity, and the bacillus genus has high endochitosan and protease activity, and thus, the sugars, proteins and Hydrolyzing lipids can increase the flavor of foods. As a strain of the genus of Reuspurus which can be used in the present invention, Reusor duck ( R. oryzae ), Resperus japonicus ( R. japonicus ), Resperus oligosporus (R. oligosporus) , Resperus dellema ( R) delema r). These are used differently depending on the kind of grain to be processed.

메주유래의 바실러스 속 균주는 엔도형 키토산아제, 프로테아제를 함유하여 키토산과 단백질을 가수분해하는 특성을 갖는다. 또한 바실러스 속 균주를 곡류 또는 두류에 접종·발효시키는 경우, 생성된 식품원료는 전통 메주가 갖는 특유의 불쾌한 냄새를 갖지 아니하므로 모든 종류의 식품의 원료로 이용하기에 적합하다.The strain of Bacillus sp. Derived from Meju contains endo type chitosanase and protease to hydrolyze chitosan and protein. In addition, when inoculating and fermenting strains of the genus Bacillus in cereals or soybeans, the resulting food raw materials do not have the peculiar unpleasant smell of traditional meju, so it is suitable for use as a raw material of all kinds of food.

본 발명에 사용되는 곡류에는 쌀, 보리쌀, 밀, 콩 등이 있으나, 이에 한정되지 아니하며, 그 외 모든 종류의 곡류에 이용이 가능하다. 이중에서 쌀, 밀, 콩이 바람직하며, 특히 밥 짓는 쌀, 술 빚는 쌀, 제면·제빵·제과용 밀이 바람직하다. 또한 두류에는 모든 종류의 콩 등을 사용할 수 있다. 바람직하기로는 간장용 콩, 된장용 콩, 이유식 제조용 콩 등이 있으며, 가장 바람직하기로는 이유식 제조용 콩이 있다.The grains used in the present invention include rice, barley rice, wheat, soybeans, etc., but are not limited thereto, and may be used for all other kinds of grains. Of these, rice, wheat, and soybeans are preferable, and rice, rice, liquor, rice, noodle making, baking, and confectionery are particularly preferable. Also, beans can be used for all kinds of beans. Preferably soy beans, soybeans for soybeans, soybeans for producing baby food, and the like, and most preferably there are soybeans for producing baby food.

본 발명의 식품원료는 다음과 같은 방법으로 제조될 수 있다:Food ingredients of the present invention can be prepared by the following method:

곡류 또는 두류를 하룻밤동안 수침시키고 물기를 제거한 후, 121℃에서 30분내지 60분간, 바람직하게는 60분 동안 증자한다. 이렇게 증자시킨 곡류 또는 두류를 30℃ 내지 50℃, 바람직하게는 40℃로 냉각시킨 후, 여기에 리조퍼스 속 균주 및 바실러스 속 균주를 각각 접종한다. 이때 리조퍼스 속 균주의 포자는 곡류 또는 두류 1㎏당 4×107개 내지 9×107개의 양으로 접종하며, 바실러스 속 균주는 뉴트리언트 브로스에서 종 배양한 현탁액을 곡류 또는 두류 1㎏당 3×107개 내지 7×107개의 양으로 접종한다. 리조퍼스 속 균주를 접종시킨 곡류 또는 두류를 27℃ 내지 30℃, 바람직하게는 28℃ 내지 29℃의 온도에서, 2일 내지 7일간, 바람직하게는 3일간 내지 5일간 배양시켜서 미생물성 키토산에 의한 면역활성이 증강된 발효곡류 또는 두류를 제조한다. 또한 바실러스 속 균주를 접종시킨 콩을 30℃ 내지 40℃, 바람직하게는 37℃의 온도에서 2일 내지 7일간, 바람직하게는 2 내지 4일간 배양하여 발효곡류 또는 두류를 제조한다.Cereals or beans are soaked overnight and dried, and then cooked at 121 ° C. for 30 to 60 minutes, preferably for 60 minutes. The cooked cereals or legumes are cooled to 30 ° C. to 50 ° C., preferably to 40 ° C., and then inoculated with the strains of genus Reus and Bacillus. At this time, spores of the genus of the genus Ripus was inoculated in the amount of 4 × 10 7 to 9 × 10 7 per 1 kg of grain or legumes, Bacillus strain is 3 per kg of cereal or legumes suspension cultured in the nutri broth × 10 7 7 × 10 one to be inoculated into seven sheep. Cereals or legumes inoculated with the strains of the genus of Reosperus were incubated for 2 days to 7 days, preferably 3 days to 5 days at a temperature of 27 ° C. to 30 ° C., preferably 28 ° C. to 29 ° C. Prepare fermented grains or legumes with enhanced immune activity. In addition, the soybean seed inoculated with the Bacillus strain is incubated for 2 to 7 days, preferably 2 to 4 days at a temperature of 30 ℃ to 40 ℃, preferably 37 ℃ to prepare fermented grains or legumes.

생성된 리조퍼스 균주 발효곡류/두류 및 바실러스 균주 발효곡류/두류를 1 : 1 내지 11 : 1, 바람직하게는 10 : 1의 비율로 혼합하여 효소반응 최적화 공정인 온도 30 내지 60℃, 바람직하게는 45℃, pH 5.5 내지 7.0, 바람직하게는 pH 6.4 내지 6.6에서, 20 내지 40rpm 교반 조건에서 1 내지 10시간, 바람직하게는 4 내지 6시간의 효소 반응 공정으로 키토산을 가수분해시킴으로써, 키토올리고당 함량이 높은 본 발명의 식품원료를 제조한다.The resulting strains of fermented grains of cereal grains / beans and Bacillus strains are mixed at a ratio of 1: 1 to 11: 1, preferably 10: 1 to a temperature of 30 to 60 ° C., which is an enzymatic optimization process. The chitooligosaccharide content is increased by hydrolyzing chitosan at 45 ° C., pH 5.5 to 7.0, preferably pH 6.4 to 6.6, at an enzymatic reaction process of 1 to 10 hours, preferably 4 to 6 hours at 20-40 rpm stirring conditions. It produces high food raw materials of the present invention.

본 발명에서는 리조퍼스 속 균주 및 바실러스 속 균주 외에도, β-1,4-글루코스 결합을 절단시키는 강력 엔도 키틴아제 생산균인 트리코더마비리드KH104(Trichoderma viride KH104), 엔도형 키토산아제 활성이 큰 아스퍼길러스 푸미가투스 KH96(Aspergillus fumigatus KH96) 등의 균주를 추가로 사용할 수 있으며, 이들 트리코더마 비리드, 아스퍼길러스 푸미가투스의 접종량은 리조퍼스 속 균주와 비슷한 양으로 접종하는 것이 바람직하다.In the present invention, in addition to the strains of the genus of the genus of the genus of the genus and the bacillus of the genus, Trichoderma viride KH104 ( trichoderma viride KH104 ), a endotype chitosanase activity of the endotype chitosanase activity is large Aspergillus fumigatus KH96 strains such as Rusfumigatus KH96 may be further used, and the inoculation amounts of these tricoderma bileads and Aspergillus fumigatus are preferably inoculated in an amount similar to that of the genus Ripus.

본 발명의 식품원료는 세포벽에 키토산을 함유하고 있는 리조퍼스 속 균주로부터 생성된 미생물성 키토산을 식품원료 g당 1.5㎎ 내지 4.8㎎ 함유하며, 또한 바실러스 속 균주의 엔도형 키토산아제 반응 공정에 의해 상기 미생물성 키토산이 가수분해되어 생성된 키토올리고당을 식품원료 g당 0.077㎎ 내지 3.5㎎ 함유한다. 이는 전통 된장의 키토올리고당 함량에 비해 약 4 ∼ 170배 많은 양을 함유하는 것이다. 일본 된장, 상업적으로 시판되는 국내 된장/간장의 원료인 황국균 코지는 세포벽에 글루칸과 키틴만을 함유하며, 키토산과 키토올리고당은 함유하지 않는다. 또한 리조퍼스 속을 포함하는 여러 종류의 미생물이 집식된 전통 메주로부터 숙성된 전통된장에는 키토올리고당의 함량이 최고 20㎍/g 정도 함유되어 있다.The food material of the present invention contains 1.5 mg to 4.8 mg of microbial chitosan per g of food material, which is produced from a strain of the genus Rizopus which contains chitosan on the cell wall, and is also subjected to the above-described endotype chitosanase reaction process of the strain Bacillus The chitooligosaccharide produced by the hydrolysis of the microbial chitosan contains 0.077 mg to 3.5 mg per g of food material. This is about 4 to 170 times more than the content of chito oligosaccharides of traditional miso. Japanese soybean paste, commercially available domestic miso / soy sauce, contains only glucan and chitin in the cell wall, and no chitosan and chitooligosaccharides. In addition, traditional doenjang, which is aged from traditional meju containing various microorganisms, including the genus of reus, contains up to 20 µg / g of chitooligosaccharides.

본 발명의 식품원료로부터 다양한 종류의 식품을 제조할 수 있다. 상기 식품원료는 균주로서 바실러스 속 균주를 이용함에 있어, 종래의 메주 등과 같이 특유의 냄새를 갖지 아니하므로, 여러 종류의 건강기능성 식품에 적용할 수 있다. 상기 식품으로는 된장, 간장, 고추장, 두유제품, 쌀가공, 밀가공제품, 이유식, 건강보조식품 등이 포함되나, 이에 한정되지 않으며, 통상적인 음식에 적용할 수 있다.Various kinds of food can be prepared from the food raw material of the present invention. In the use of the Bacillus strain as a strain, the food raw material does not have a unique smell as in the conventional meju, etc., it can be applied to various types of health functional food. The foods include, but are not limited to, miso, soy sauce, red pepper paste, soy milk products, rice processing, wheat products, baby food, health supplements, and the like, and may be applied to conventional foods.

상술한 바와 같이, 곡류 또는 두류로부터 제조된 본 발명의 식품원료는 종래의 콩 발효식품의 원료인 코지, 메주 등에 비하여 총 질소 함량 및 아미노태 질소 함량이 다량 증가하고, 키토산 및 키토올리고당의 함량 비율이 훨씬 높다.As described above, the food raw material of the present invention prepared from cereals or soybeans has a large increase in total nitrogen content and amino nitrogen content compared to koji and meju, which are raw materials of conventional soybean fermented foods, and the content ratio of chitosan and chitooligosaccharides. This is much higher.

키토산 및 키토올리고당은 장내에서 담즙산을 포집하여 콜레스테롤의 흡수를 억제하는 항콜레스테롤 효과를 가지므로, 항동맥경화, 면역활성작용 증대효과, 항세균성, 항곰팡이성이 강력하여 음식의 보존성을 향상시키는 기능을 갖는다. 본 발명의 식품원료 및 이로부터 제조된 식품은 항암, 항종양, 항AIDS, 항고혈압 등의 기능성을 갖는 건강식품이며, 나아가 이를 섭취함으로써 국민건강을 증진시킬 수 있다.Chitosan and chitooligosaccharides have anti-cholesterol effect that inhibits the absorption of cholesterol by capturing bile acids in the intestine, thus enhancing anti-arteriosclerosis, immune-activating effect, antibacterial and antifungal properties and improving food preservation. Has Food raw materials of the present invention and the food prepared therefrom are health foods having functionalities such as anti-cancer, anti-tumor, anti-AIDS, antihypertensive, and the like, and furthermore, by ingesting them, it is possible to improve national health.

본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.The invention can be better understood by the following examples, which are intended for the purpose of illustration of the invention and are not intended to limit the scope of protection defined by the appended claims.

실시예Example

실시예 1: 식품원료의 제조Example 1 Preparation of Food Ingredients

콩의 무게를 측정한 후 삼각 플라스크에 넣고 하룻밤 동안 수침한 후 30분간 물기를 제거하였다. 이것을 121℃에서 1시간 동안 증자한 후 40℃로 냉각시키고, 여기에 리조퍼스 오리재 LK(Rhizopus oryzae LK) (입수처: 서울대학교 식품공학과) 및 바실러스 서브티리스 SB(Bacillus subtilis SB) (입수처: 서울대학교 식품공학과)의 균체를 접종하였다. 리조퍼스 오리재 LK 균주를 감자 덱스트로스배지(potato dextrose agar; PDA)에서 배양시킨 후, 멸균수에 포자를 현탁, 희석하여 균수를 4.25×107/㎖가 되도록 하였고, 바실러스 서브티리스 SB 균주는 뉴트리언트 브로스에서 배양한 후, 멸균수에 균체를 현탁, 희석하여 균수를 5.0×107/㎖로 하였다. 이 희석액들을 상기 증자한 콩에 접종하고, 리조퍼스 오리재 LK 균주 콩은 30℃에서 일주일간 배양하고, 바실러스 서브티리스 SB 균주 콩은 37℃에서 4일간 배양하였다.The beans were weighed and placed in a Erlenmeyer flask, soaked overnight, and then drained for 30 minutes. It was cooked at 121 ° C. for 1 hour and then cooled to 40 ° C., and the Refrigerant Duck LK (Rhizopus oryzae LK) (Acquisition: Department of Food Science and Technology, Seoul National University) and Bacillus Subtilis SB (Bacillus subtilis SB) (Obtained from Seoul National University). After incubating the Reosperus duck LK strain in potato dextrose agar (PDA), the spores were suspended and diluted in sterile water to 4.25 × 107/ Ml, and Bacillus subtilis SB strain was cultured in nutrient broth, and then suspended and diluted with sterile water in sterile water 5.0 × 107/ Ml. These dilutions were inoculated into the cooked soybeans, and the Reosperus duck LK strain beans were incubated for one week at 30 ° C., and Bacillus subtilis SB. Strain beans were incubated at 37 ° C. for 4 days.

상기와 같이 생성된 리조퍼스 오리재 LK 발효콩과 바실러스 서브티리스 SB 발효콩을 10 : 1의 비율로 혼합하여 온도 45℃, pH 6.5, 30rpm의 조건에서 5시간 동안의 가수분해 공정에 의해 식품원료를 제조하였다. 수득된 식품원료의 성분분석 결과를 표 1에 나타내었다.As a result, the raw materials of the lysed duck LK fermented soybean and Bacillus subtilis SB fermented soybean were mixed at a ratio of 10: 1, and the food ingredients were subjected to a hydrolysis process for 5 hours at a temperature of 45 ° C., pH 6.5 and 30 rpm. Was prepared. Table 1 shows the results of component analysis of the obtained food ingredients.

성 분ingredient 함량(중량%)Content (% by weight) 키 토 산Chitosan 0.480.48 키토올리고당Quitooligosaccharides 0.350.35

실시예 2: 된장의 제조Example 2: Preparation of Miso

리조퍼스 오리재 LK 발효콩과 바실러스 서브티리스 SB 발효콩을 11 : 1로 혼합한 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 식품원료를 제조하였다. 상기 제조된 식품원료에 소금 330g, 물 300㎖를 첨가하여 된장을 담근 후 상온에서 두 달 동안 숙성시켰다. 된장의 제조 절차는 통상의 된장 제조방법과 동일하게 이루어졌으며, 제조된 된장을 구성하는 각 구성성분 및 함량을 표 2에 나타내었다.A food raw material was prepared in the same manner as in Example 1, except that the lyophorus duck LK fermented soybean and Bacillus subtilis SB fermented soybean were mixed at 11: 1. 330 g of salt and 300 ml of water were added to the prepared food ingredients, and the soybean paste was soaked and aged at room temperature for two months. The preparation procedure of the doenjang was made in the same manner as the conventional doenjang preparation method, and each component and content constituting the prepared doenjang are shown in Table 2.

실시예 3Example 3

균주로서 바실러스 서브티리스 SB 균주 (입수처: 서울대학교 식품공학과), 리조퍼스 오리재 LK 균주 (입수처: 서울대학교 식품공학과) 및 트리코더마 비리드 KH104 (입수처: 서울대학교 식품공학과)의 현탁액을 각각 3.0×107/㎖, 4.25×107/㎖ 및 5.1×107/㎖의 양으로 접종하여 배양된 발효콩을 각각 480g 씩 혼합하여 식품원료를 제조한 것을 제외하고는, 실시예 2와 동일한 방법으로 된장을 제조하였다. 상기 트리코더마 비리드 KH104는 엔도형 키틴아제 활성이 높은 균주로서, 키토산을 함유하고 있는 리조퍼스 속 균주의 세포벽 조성내의 글루칸과 키토산 분해를 위해 사용하였으며, 리조퍼스 속 균주와 동일한 방법으로 배양시켰다. 제조된 된장을 구성하는 구성성분 및 함량을 표 2에 나타내었다.As a strain, suspensions of the Bacillus subtilis SB strain (obtained from Seoul National University), the Refrigerian duck LK strain (obtained from Seoul National University) and trichoderma birid KH104 (obtained from Seoul National University) 3.0 × 107/ Ml, 4.25 × 107/ Ml and 5.1 × 107Doenjang was prepared in the same manner as in Example 2, except that 480 g of fermented soybeans inoculated in an amount of / ml were mixed for each of 480 g to prepare food ingredients. remind Trichoderma virid KH104 is a strain having high endotype chitinase activity, and was used for the degradation of glucan and chitosan in the cell wall composition of the genus Ritophorus containing chitosan. Table 2 shows the components and contents constituting the prepared miso.

실시예 4Example 4

균주로서 바실러스 서브티리스 SB 균주 (입수처: 서울대학교 식품공학과), 리조퍼스 오리재 LK 균주 (입수처: 서울대학교 식품공학과), 트리코더마 비리드 KH104 (입수처: 서울대학교 식품공학과) 및 아스퍼길러스 푸미가투스 KH96 (입수처: 서울대학교 식품공학과)의 현탁액을 각각 2.1×107/㎖, 2.4×107/㎖, 2.2×107/㎖ 및 2.0×107/㎖의 양으로 접종하여 배양된 발효콩을 각각 360g 씩 혼합하여 식품원료를 제조한 것을 제외하고는, 실시예 2와 동일한 방법으로 된장을 제조하였다.상기 아스퍼길러스 푸미가투스 KH96은 엔도형 키토산아제의 활성이 우수한 균주로서 선택하였으며, 리조퍼스 속 균주와 동일한 방법으로 배양시켰다. 제조된 된장을 구성하는 각 구성성분 및 함량을 표 2에 나타내었다.As a strain, Bacillus subtilis SB strain (obtained from Seoul National University), Recipor's duck LK strain (acquired from Seoul National University), trichoderma virid KH104 (obtained from Seoul National University) And Aspergillus pumigatus KH96 (Source: Dept. of Food Science and Technology, Seoul National University)7/ Ml, 2.4 × 107/ Ml, 2.2 × 107/ Ml and 2.0 × 107Doenjang was prepared in the same manner as in Example 2, except that 360 g of each fermented soybean cultured by inoculation in an amount of / ml was mixed to prepare food ingredients. The Aspergillus fumigatus KH96 is an endo type. The chitosanase was selected as an excellent strain, and cultured in the same manner as the strain of genus Regus. Table 2 shows the components and contents of the prepared miso.

비교실시예 1: 전통 메주를 이용한 된장의 제조Comparative Example 1 Preparation of Doenjang Using Traditional Meju

상기 실시예 2-4에서 제조한 식품원료 대신에, 전통 메주(입수처: 원주농협)를 이용하여 된장을 담갔으며, 이때 상기 메주를 발효시키는 과정에서 중량이 약 20% 감량된 것으로 계산하였다. 제조된 된장을 구성하는 각 구성성분 및 함량을 표 2에 나타내었다.Instead of the food ingredients prepared in Example 2-4, soybean paste was soaked using traditional meju (acquisition: Wonju Nonghyup), where the weight was reduced by about 20% during the fermentation process. Table 2 shows the components and contents of the prepared miso.

콩(g)Beans (g) 염(g)Salt (g) 물(㎖)Water (ml) 접종균Inoculation bacteria 실시예Example 22 120120 330330 300300 바실러스 서브티리스 SBBacillus subtilis SB 13201320 리조퍼스 오리재 LKReopers Duck Material LK 33 480480 330330 300300 바실러스 서브티리스 SBBacillus subtilis SB 480480 리조퍼스 오리재 LKReopers Duck Material LK 480480 트리코더마 비리드 KH104Tricoderma Belead KH104 44 360360 330330 300300 바실러스 서브티리스 SBBacillus subtilis SB 360360 리조퍼스 오리재 LKReopers Duck Material LK 360360 트리코더마 비리드 KH104Tricoderma Belead KH104 360360 아스퍼길러스 푸미가투스 KH96Aspergillus pumigatus KH96 비교실시예 1Comparative Example 1 11521152 330330 300+288300 + 288

상기 표 2에서, 콩의 중량(g)은 수침하기 전의 건조 중량을 나타내며, 비교예 1에서의 중량(1152g)은 메주의 중량을 나타내는 것으로서 메주의 발효과정에서 초기중량(1440g)의 20%(288g)가 수분 증발로 손실된 것으로 계산한 값이다.In Table 2, the weight (g) of the beans represents the dry weight before immersion, the weight (1152g) in Comparative Example 1 represents the weight of meju as 20% of the initial weight (1440g) during the fermentation process of Meju ( 288 g) is calculated as lost by water evaporation.

실시예 5 내지 7: 간장의 제조Examples 5 to 7: Preparation of Soy Sauce

상기 실시예 2 내지 4와 각각 동일한 방법으로 제조한 식품원료를 표 3에 나타낸 양의 염수와 혼합하여 통상의 방법으로 간장을 제조하였다. 이를 구성하는 각 구성성분 및 함량을 표 3에 나타내었다.Soy sauce was prepared in a conventional manner by mixing the food ingredients prepared in the same manner as in Examples 2 to 4 with brine in the amounts shown in Table 3. Each component and content constituting it are shown in Table 3.

비교실시예 2Comparative Example 2

상기 비교실시예 1과 동일한 방법으로 제조한 식품원료를 표 3에 나타낸 양의 염수와 혼합한 후 통상의 방법으로 간장을 제조하였다.Soy sauce was prepared in a conventional manner after mixing the food ingredients prepared in the same manner as in Comparative Example 1 with the amount of saline in Table 3.

콩(g)Beans (g) 염(g)Salt (g) 물(㎖)Water (ml) 접종균Inoculation bacteria 실시예Example 55 120120 13001300 57605760 바실러스 서브티리스 SBBacillus subtilis SB 13201320 리조퍼스 오리재 LKReopers Duck Material LK 66 480480 13001300 57605760 바실러스 서브티리스 SBBacillus subtilis SB 480480 리조퍼스 오리재 LKReopers Duck Material LK 480480 트리코더마 비리드 KH104Tricoderma Belead KH104 77 360360 13001300 57605760 바실러스 서브티리스 SBBacillus subtilis SB 360360 리조퍼스 오리재 LKReopers Duck Material LK 360360 트리코더마 비리드 KH104Tricoderma Belead KH104 360360 아스퍼길러스 푸미가투스 KH96Aspergillus pumigatus KH96 비교예 2Comparative Example 2 11521152 13001300 5760+2885760 + 288

상기 표 3에서, 콩의 중량(g)은 수침하기 전의 건조 중량을 나타내며, 비교예 2에서의 중량(1152g)은 메주의 중량을 나타내는 것으로서 메주의 발효과정에서 초기중량(1440g)의 20%(288g)가 수분 증발로 손실된 것으로 계산한 값이다.In Table 3, the weight (g) of the beans represents the dry weight before immersion, the weight (1152g) in Comparative Example 2 represents the weight of meju as 20% of the initial weight (1440g) during the fermentation process of Meju ( 288 g) is calculated as lost by water evaporation.

실시예 8: 총질소 및 아미노태 질소 함량의 측정 및 비교Example 8 Measurement and Comparison of Total Nitrogen and Amino Nitrogen Contents

(1) 총질소 및 아미노태 질소 함량의 측정(1) Determination of total nitrogen and amino nitrogen content

상기 실시예 2-4 및 비교실시예 1에서 제조한 된장, 및 상기 실시예 5-7 및 비교실시예 2에서 제조한 간장내의 총질소 및 아미노태 질소 함량을 각각 측정하였다. 총질소 함량은 킬달 단백질/질소 분석기(스웨덴 테카터 AB(Tecator AB)사의 Kjeltec Auto 1035/1038 System)를 이용하였고, 아미노태 질소 함량은 다음과 같이 측정하였다.The total nitrogen and amino nitrogen contents in the soybean paste prepared in Examples 2-4 and Comparative Example 1, and the soy sauce prepared in Examples 5-7 and Comparative Example 2 were measured, respectively. Total nitrogen content was determined using a Kjeldahl protein / nitrogen analyzer (Kjeltec Auto 1035/1038 System from Tetecator AB, Sweden). The amino nitrogen content was measured as follows.

냉동건조하여 곱게 마쇄한 된장 2g(또는 간장 5 ㎖)을 증류수에 현탁하여 50 ㎖로 맞추고 여과지(Whatman paper No. 2)로 여과하였다. 상기 여과액 5 ㎖를 1% 페놀프탈레인 100 ㎕를 넣은 90% 에탄올 20 ㎖에 넣고, 여기에 0.02N 수산화나트륨으로 미적색이 나타날 때까지 적정하였다. 총산은, 지시약으로 1% 페놀프탈레인 100㎕를 함유하는 증류수 75㎖와 상기 여과액 5㎖를 섞어서 0.02N 수산화나트륨 용액으로 미적색이 될 때까지 적정하여 측정하였고, 공시험은 1% 페놀프타렌 100㎕을 함유하는 90% 에탄올 20㎖와 증류수 80㎖를 섞은 다음 미적색이 될 때까지 0.02N 가성소다 용액으로 적정하였다. 된장내의 아미노태 질소(%)는 하기 수학식 1로 계산하였으며, 간장내의 아미노태 질소(%)는 하기 수학식 2로 계산하였다:Lyophilized 2 g (or 5 ml of soy sauce) finely ground and suspended in distilled water were adjusted to 50 ml and filtered with filter paper (Whatman paper No. 2). 5 ml of the filtrate was added to 20 ml of 90% ethanol containing 100 µl of 1% phenolphthalein, which was titrated with 0.02N sodium hydroxide until a red color appeared. The total acid was measured by titrating 75 ml of distilled water containing 100 µl of 1% phenolphthalein as an indicator and 5 ml of the filtrate and titrating until it became reddish with 0.02N sodium hydroxide solution, and the blank test was 100 µl of 1% phenolphthalene. 20 ml of 90% ethanol and 80 ml of distilled water were mixed and then titrated with 0.02N caustic soda solution until it became reddish. The amino nitrogen (%) in the doenjang was calculated by the following equation (1), amino nitrogen (%) in the soy sauce was calculated by the following equation (2):

아미노태 질소(%) = (C-A-B)×N×0.014×50/2×100/5Amino nitrogen (%) = (C-A-B) × N × 0.014 × 50/2 × 100/5

아미노태 질소(%) = (C-A-B)×N×0.014×50/5×100/5Amino nitrogen (%) = (C-A-B) × N × 0.014 × 50/5 × 100/5

상기 수학식 1 및 2에서,In Equations 1 and 2,

A는 공시험에 대한 수산화나트륨의 용량(㎖)이고, B는 총산에 대한 수산화나트륨의용량(㎖)이며, C는 아미노태 질소에 대한 수산화나트륨의 용량(㎖)이고, N은 수산화나트륨의 농도이다.A is the dose of sodium hydroxide for the blank test (ml), B is the dose of sodium hydroxide for the total acid (ml), C is the dose of sodium hydroxide for the amino nitrogen (ml), and N is the concentration of sodium hydroxide to be.

(2) 총질소 및 아미노태 질소 함량의 변화(2) Changes in total nitrogen and amino nitrogen content

두 달 숙성동안의 총질소 함량은, 도 1에서 보는 바와 같이 된장에서는 5.5%로 거의 일정한 값을 보였고, 도 2에서 보는 바와 같이 간장의 경우에는 초기 0.06-0.22%에서 2개월 후에는 0.35-0.52%로 증가하였다. 실시예별로는 균주로서 바실러스 서브티리스 균주, 리조퍼스 오리재 균주, 아스퍼길러스 푸미가투스 및 트리코더마 비리드를 모두 사용한 실시예 4 및 실시예 7에서 총질소 함량이 가장 높게 나타났다. 이는 아스퍼길러스 푸미가투스가 갖는 강력한 프로테아제 활성에 기인한 것으로 여겨진다. 간장에서는 식품원료 발효과정과 장을 담근 후에 분해된 단백질이 숙성 중에 염수로 가용성화 되고 빠져 나옴으로써 총 질소 함량이 증가한 것으로 보인다.As shown in FIG. 1, the total nitrogen content during aging for two months was almost constant at 5.5% in doenjang, and 0.35-0.52 after 2 months at initial 0.06-0.22% in soy sauce as shown in FIG. Increased to%. By example, the total nitrogen content was the highest in Examples 4 and 7 using all of the Bacillus subtilis strains, Reuspus duck strain, Aspergillus fumigatus, and Trichoderma viride as strains. This is believed to be due to the potent protease activity possessed by Aspergillus fumigatus. In soy sauce, the total nitrogen content increased due to the fermentation of food ingredients and the solubilization of the degraded protein after soaking in the soybean during aging.

아미노태 질소 함량의 경우, 된장은 도 3에서와 같이 초기 0.03-0.1%에서 0.18-0.39%(w/w)으로 증가하였으며, 간장은 도 4에서와 같이 초기 0.04-0.1%에서 0.26-0.46%(w/v)로의 증가를 나타내었다. 실시예별로는 균주로서 바실러스 서브티리스 균주, 리조퍼스 오리재 균주, 아스퍼길러스 푸미가투스 및 트리코더마 비리드를 모두 사용한 실시예 4 및 실시예 7에서 아미노태 질소 함량이 가장 높게 나타났다. 접종한 균주들이 내는 단백질 분해효소로 인해 단백질이 아미노산으로 분해된 것으로 보이며, 특히 아스퍼길러스 푸미가투스는 다른 균주들보다 강한 프로테아제 활성을 갖는 것으로 생각된다.In the case of amino nitrogen content, soybean paste increased from initial 0.03-0.1% to 0.18-0.39% (w / w) as in FIG. 3, and soy sauce was 0.26-0.46% at initial 0.04-0.1% as in FIG. An increase to (w / v) is shown. By example, the amino acid nitrogen content was the highest in Examples 4 and 7 using both Bacillus subtilis strain, Reosperus duck strain, Aspergillus fumigatus and Trichoderma viride as strains. The proteolytic enzymes from the inoculated strains seemed to degrade the protein to amino acids, particularly Aspergillus fumigatus, which is thought to have stronger protease activity than other strains.

실시예 9: 접종 미생물과 생성된 COS 함량의 비교Example 9 Comparison of Inoculated Microorganisms with Generated COS Content

실시예 2-4 및 5-7과 비교실시예 1 및 2에서 제조하여 두 달간 숙성시킨 된장 및 간장내의 COS 함량을 문헌[한국 키틴키토산학회지, 이계호, 1997]에 기재된 경합적 직접 ELISA(competitive direct enzyme-linked immunosorbent assay; cdELISA)의 방법에 따라 측정하였다. 각 된장 및 간장내의 COS 함량은 접종한 미생물에 따라 차이를 보였으며, 각각 도 5 및 도 6에 나타내었다.COS content in doenjang and soy sauce prepared in Examples 2-4 and 5-7 and Comparative Examples 1 and 2 and aged for two months was described in the Competitive Direct ELISA described in the Korean Chitin Chitosan Society, Lee, Kye Ho, 1997. It was measured according to the method of enzyme-linked immunosorbent assay (cdELISA). COS content in each doenjang and soy sauce showed a difference according to the inoculated microorganisms, and are shown in FIGS. 5 and 6, respectively.

된장 및 간장의 식품원료에 사용된 균주 및 식품내에 포함된 COS 함량을 비교하여 표 4에 나타내었다.Table 4 compares the COS content of the strains and foods used in the food ingredients of doenjang and soy sauce.

식품food 균주Strain 담금 직후Immediately after soaking 두달 숙성후After two months of aging 된장Miso 실시예 2Example 2 B, RB, R 119 ㎍/g119 μg / g 684 ㎍/g684 μg / g 실시예 3Example 3 B, R, TB, R, T 65 ㎍/g65 μg / g 142 ㎍/g142 μg / g 실시예 4Example 4 B, R, T, AB, R, T, A 55 ㎍/g55 μg / g 100 ㎍/g100 μg / g 비교실시예 1Comparative Example 1 -- 45 ㎍/g45 μg / g 91 ㎍/g91 μg / g 간장Soy sauce 실시예 5Example 5 B, RB, R 9.37 ㎍/㎖9.37 μg / ml 29.05 ㎍/㎖29.05 μg / ml 실시예 6Example 6 B, R, TB, R, T 1.26 ㎍/㎖1.26 μg / ml 24.24 ㎍/㎖24.24 μg / ml 실시예 7Example 7 B, R, T, AB, R, T, A 1.71 ㎍/㎖1.71 μg / ml 7.31 ㎍/㎖7.31 μg / ml 비교실시예 2Comparative Example 2 -- 1.93 ㎍/㎖1.93 μg / ml 10.79 ㎍/㎖10.79 μg / ml B: 바실러스 서브티리스SB,R: 리조퍼스 오리재 LKT: 트리코더마 비리드 KH104,A: 아스퍼길러스 푸미가투스 KH96B: Bacillus subtilis SB , R: Resurfacers LKT: Trichoderma virid KH104 , A: Aspergillus pumigatus KH96

상기 표 4로부터, 바실러스 서브티리스 균주 및 리조퍼스 오리재 균주를 이용한 식품원료를 이용하여 제조한 실시예 2 및 5의 된장 및 간장에서 COS 함량이 각각 684 ㎍/g, 29.05 ㎍/㎖로 가장 높게 나타났다. 실시예 2 및 5의 경우, 다른 실시예에 비해 리조퍼스 오리재 균주의 발효콩 함량을 높인 것이며(바실러스 속 균주 발효콩의 11배), 이는 균사체 중량이 증가함에 따라 생성된 키토산 함량도 증가하여, 높은 COS 함량을 나타낸 것이며, 또한 바실러스 속 균주의 발효콩에서 엔도 키토산아제가 강력한 효소작용을 하였음을 나타낸 것으로 보여진다.From Table 4, the highest COS content of 684 ㎍ / g, 29.05 ㎍ / ㎖ in soybean paste and soy sauce of Examples 2 and 5 prepared using a food material using the Bacillus subtilis strain and lycopus duck strain appear. In the case of Examples 2 and 5, the fermented soybean content of the lycopus duck strain was higher than that of the other examples (11 times the strain of fermented soybean of the Bacillus strain), which increased as the weight of the mycelium increased. , High COS content, and endocytosis was also shown to be a potent enzyme action in fermented soybean of Bacillus strain.

따라서, 트리코더마 비리드의 엔도 키틴아제나 아스퍼길러스 푸미가투스의 엔도 키토산아제의 활성보다는, 리조퍼스 오리재 LK의 균사체 양을 높이고 메주 발효의 주요균으로서 강력한 엔도형 키토산아제 생산균인 바실러스 서브틸리스 SB 균주만을 사용하면 COS의 함량을 보다 높일 수 있다.Therefore, rather than the activity of endo chitinase of Trichoderma virid or endo chitosanase of Aspergillus pumigatus, it is possible to increase the amount of mycelia of lycopper duck LK and to be a major bacterium of meju fermentation. Using only SB strains can increase the content of COS.

된장의 경우, 도 5에서 보는 바와 같이 한 달 후에 검출되는 COS 함량의 증가속도 기울기로부터, 숙성 기간을 연장하면 더 많은 양의 COS가 검출되리라 생각되는 반면, 간장의 경우에는 도 6에서 보는 바와 같이 실시예 5를 제외하면 한 달 후에는 더 이상의 COS 함량의 증가가 없음을 알 수 있었다.In the case of doenjang, from the slope of the increase rate of COS content detected after one month as shown in FIG. 5, it is thought that a greater amount of COS will be detected if the ripening period is extended, whereas in the case of soy sauce, as shown in FIG. Except for Example 5, it can be seen that after one month there is no increase in COS content.

실시예 10: 시판 장류와의 COS 함량 비교Example 10 COS Content Comparison with Commercial Poultry

일본 된장, 국내에서 시판되고 있는 된장과 간장, 및 본원발명의 실시예 2 및 5에서 제조된 된장과 간장 내에 함유된 COS의 양을 실시예 9에서와 같이 측정하여, 각각 도 7 및 도 8에 나타내어 비교하였다. 이로부터, 본 발명의 장류가 가장 높은 함량의 COS를 함유함을 알 수 있었다.The amounts of COS contained in Japanese soybean paste, soybean paste and soy sauce commercially available in Korea, and soybean paste and soy sauce prepared in Examples 2 and 5 of the present invention were measured as in Example 9, respectively. The comparison was shown. From this, it was found that the soy sauce of the present invention contained the highest content of COS.

일본 장류의 경우, 세포벽에 키토산을 가지지 않은 아스퍼길러스 오리재만을 주 발효균으로 이용하므로 COS가 검출되지 않을 것으로 예상했었으나 미량이 검출되었고, 이는 키토산을 가진 균주가 발효나 숙성 중에 오염되었기 때문인 것으로 생각된다.In case of Japanese soy sauce, COS was not expected to be detected because only Aspergillus duckwood which does not have chitosan on the cell wall was used as a main fermentation bacterium, but a trace amount was detected, which is because the strain containing chitosan was contaminated during fermentation or ripening. do.

본 발명은 곡류 및 두류에 균주로서 리조퍼스 속 균주 및 바실러스 속 균주를 적용하여 제조된 식품원료와 이로부터 제조된 식품을 제공하며, 본 발명의 식품원료는 종래의 아스퍼길러스 오리재 코지로 제조한 식품에 함유된 것보다 훨씬 다량의 키토산과 키토올리고당을 함유하여, 면역활성 증강, 항암, 항종양, 항AlDS, 항고혈압 등의 기능성을 갖는 식품으로 활용할 수 있으며, 이에 따라 질병의 치료 및 예방의학 차원에서 국민의 건강을 증진시킬 수 있다.The present invention provides a food material prepared by applying the strains of the genus Rizopus and Bacillus as strains to cereals and legumes, and the foods produced therefrom, the food raw materials of the present invention prepared by conventional Aspergillus duck Cozy It contains much higher amounts of chitosan and chitooligosaccharides than those contained in foods, which can be used as foods with enhanced immune activity, anti-cancer, anti-tumor, anti-AlDS, and antihypertension. It can promote the health of the people at the level.

Claims (10)

곡류, 두류, 또는 증자한 곡류 또는 두류에 리조퍼스 속(Rhizopus sp.) 균주 및 바실러스 속(Bacillus sp.)균주를 각각 접종시킨 후 배양하고;Cereals, beans, or cooked grains or beans were inoculated with Rhizopus sp. And Bacillus sp. 생성된 미생물 유래 키토산 함유 리조퍼스 균주 발효원료 및 엔도형 키토산아제(endo type chitosanase) 함유 바실러스 균주 발효원료를 혼합하고;Mixing the resulting microorganism-derived chitosan-containing lycopene strain fermentation raw material and an endo type chitosanase-containing Bacillus strain fermentation raw material; 온도 30 내지 60℃, pH 5.5 내지 7.0에서 1시간 내지 10시간 반응시키는 것을 포함하는,1 to 10 hours of reaction at a temperature of 30 to 60 ℃, pH 5.5 to 7.0, 미생물 유래 키토산 및 키토올리고당을 포함하는 식품원료의 제조방법.Method for producing a food raw material comprising a microorganism derived chitosan and chitooligosaccharides. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 리조퍼스 속 균주 및 바실러스 속 균주의 접종량이 곡류, 두류, 또는 증자한 곡류 또는 두류 1㎏에 대하여 각각 4.0×107내지 9.0×107포자, 및 3.0×107개 내지 7.0×107포자인 것을 특징으로 하는 제조방법.Inoculation amounts of the strains of the genus Ripus and genus Bacillus were 4.0 × 10 7 to 9.0 × 10 7 spores, and 3.0 × 10 7 to 7.0 × 10 7 spores, respectively, for 1 kg of grains, beans, or increased grains or beans. Manufacturing method characterized in that. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 리조퍼스 속 균주를 접종시킨 후 27℃ 내지 30℃에서 2일 내지 7일간 배양하는 것을 특징으로 하는 제조방법.After inoculating the strains of the genus Rizopus, characterized in that the culture method for 2 to 7 days at 27 ℃ to 30 ℃. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 상기 바실러스 속 균주를 접종시킨 후 30℃ 내지 40 ℃에서 2일 내지 7일간 배양하는 것을 특징으로 하는 제조방법.After inoculating the strains of the genus Bacillus, characterized in that the culture method for 2 to 7 days at 30 ℃ to 40 ℃. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 리조퍼스 균주 발효원료와 바실러스 균주 발효원료의 혼합비가 1 : 1 내지 11 : 1인 것을 특징으로 하는 제조방법.A method for producing a fermented soybean fermentor raw material and Bacillus strain fermentation is a mixing ratio of 1: 1 to 11. 제1항에 있어서,The method of claim 1, 혼합된 발효원료를 온도 30 내지 60℃, pH 6.4 내지 6.6에서 20 내지 40rpm으로 교반하면서 4시간 내지 6시간 반응시키는 것을 특징으로 하는 제조방법.The mixed fermentation raw material is a reaction method for 4 hours to 6 hours while stirring at 20 to 40 rpm at a temperature of 30 to 60 ℃, pH 6.4 to 6.6. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 식품원료.A food raw material prepared by the method of any one of claims 1 to 6. 제7항에 있어서,The method of claim 7, wherein 키토산 함량이 1.5 내지 4.8㎎/g이고, 키토올리고당(COS) 함량이 0.077 내지 3.5㎎/g 인 것을 특징으로 하는 식품원료.A chitosan content of 1.5 to 4.8 mg / g, chito oligosaccharides (COS) is a food raw material, characterized in that 0.077 to 3.5 mg / g. 제7항의 식품원료로부터 제조된 미생물 유래 키토산 및 키토올리고당을 함유하는 식품.Food containing a microorganism derived chitosan and chitooligosaccharide prepared from the food raw material of Claim 7. 제9항에 있어서,The method of claim 9, 된장, 간장, 고추장, 두유제품, 쌀가공제품, 밀가공제품, 이유식 및 건강보조식품으로 이루어진 군으로부터 선택된 식품.Food selected from the group consisting of miso, soy sauce, red pepper paste, soy milk product, rice processed product, wheat processed product, baby food and dietary supplement.
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