KR20010085007A - A semi-quantitative membrane immunochromatographe and a method for the preparation thereof - Google Patents

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Abstract

PURPOSE: A semiquantitative membrane immune chromatograph strip is provided to enable a user to diagnose diseases for himself or herself by checking more than regular density of a disease element. CONSTITUTION: To diagnose using a semiquantitative immune chromatograph strip, first a pre capture pad(2) is prepared by combining a first antibody with regular amount of antigens and setting density removable from a sample, and a conjugate pad(3) having a gold conjugate attached with a second antibody. Then, a third antibody is prepared by being fixed on a membrane strip in a band shape. The pre capture pad, the conjugate pad and the membrane strip are sequentially attached on a sample absorbing pad(1). When injected into an absorbing pad(6), a sample reaches to the pre capture pad and a disease element in the sample is combined with the first antibody and removed from the sample. Then, the sample reaches to the conjugate pad and the element is combined with the second antibody and spread over the membrane strip with the gold conjugate. Then, the element combined with the gold conjugate is combined with the third antibody and accumulated in a third antibody band(5) to be checked with naked eyes. Thus, a user checks if the disease element exits more than regular.

Description

반정량 멤브레인 면역 크로마토그래프 기법 및 이의 제조 방법.{A semi-quantitative membrane immunochromatographe and a method for the preparation thereof}A semi-quantitative membrane immunochromatographe and a method for the preparation according to the present invention.

본 발명은 반정량이 가능한 멤브레인 면역 크로마토그래프 기법과 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 생체내에 일정량 이상의 양이 존재할 경우암 혹은 다른 질병이 발병했다는 근거로 활용될 수 있는 여러 인자들의 생체내 농도를 반정량적으로 확인할 수 있는 면역 크로마토그래프와 이의 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a semi-quantitative membrane immunochromatography technique and a method for preparing the same. More specifically, the present invention relates to a membrane immunochromatography technique and a method for preparing the same. It relates to an immunochromatography capable of confirming the concentration semi-quantitatively and a method for producing the same.

생체내에 존재하는 수 많은 인자들 중에는 병의 발병에 따라 생체 내부에서의 농도가 변화하는 것들이 있으며 이러한 농도의 변화를 확인하는 방법을 통하여 진단에 활용되고 있다.Among the many factors present in the living body, the concentration in the living body changes according to the onset of the disease, and is used for diagnosis through the method of confirming the change of the concentration.

이러한 물질들 중 대표적인 인자로 암이 발생하였을 경우 농도가 증가하는 것으로 보고되고 있는 Tumor marker(이하 암표지자)들[참조: Khalifa A, Mady EA, Abadeer N, Kamal A. Anticancer Res. 19(4A):2495-500 (1999 Jul-Aug)]등이 있다.Tumor markers that are reported to increase in concentration when cancer occurs as a representative factor among these substances (Khalifa A, Mady EA, Abadeer N, Kamal A. Anticancer Res. 19 (4A): 2495-500 (1999 Jul-Aug).

현재 이러한 인자들의 농도를 분석하는 정량적인 검사에는 효소 면역 기법(EIA)과 동위원소 면역 기법(RIA) 등이 활용되고 있다. 그 중 효소면역 기법은 분석하고자 하는 대상 시료에 대한 특이 항체를 마이크로 웰 플레이트에 고정시키고, 여기에 시료를 가하여 시료내의 분석 대상 성분과 마이크로 웰 플레이트상의 항체가 특이 항원 항체 결합을 이루도록 하여준 다음, 발색 효소가 부착된 2차 항체를 주입하여 웰 플레이트상에 고정된 분석 대상 성분과 결합하도록 하고, 여기에 발색 시약을 가하여 발색을 시켜 준뒤 발색의 정도를 분석하여 시료내의 특정 성분의 농도를 확인하는 기법이고, 동위원소 면역 기법은 표지 물질로서 발색 효소가 아닌 동위원소가 부착된 2차 항체를 사용하여 면역 결합 반응을 이룬 이후 세척된 용기내에서 발생되는 방사능의 량을 측정하여 분석하고자 하는 성분의 농도를 확인하는 기법이다.Currently, quantitative tests for analyzing the concentrations of these factors include enzyme immunoassay (EIA) and isotope immunoassay (RIA). Among them, the enzyme immunization technique immobilizes a specific antibody to a target sample to be analyzed in a microwell plate, and adds the sample to the specific antigen antibody binding between the component to be analyzed in the sample and the antibody on the microwell plate. Inject the secondary antibody to which the color-enzyme is attached to bind to the analyte to be fixed on the well plate, add color development reagents to the color, and then analyze the degree of color development to confirm the concentration of a specific component in the sample. The isotope immunization technique uses an isotope attached secondary antibody rather than a chromophore as a labeling substance to measure the amount of radioactivity generated in a washed container after an immune binding reaction. This is a technique to check the concentration.

상기한 기존의 분석 및 검사 방법들은 이를 수행하는데에 필요이상으로 많은 시간과 비용이 소요되며, 시험 과정이 복잡하고 고도의 전문 장비를 필요로 하는 등 실험실이외의 공간에서 비-숙련자가 실험을 실시하는데에 여러면에서 무리가 있었다.Existing analytical and test methods described above are more time consuming and costly than necessary to perform this, and the testing process is complicated and requires highly specialized equipment. There was a lot in many ways.

아울러 기존의 간편 진단기들은 기본적으로 분석하고자 하는 성분의 유무만을 판정하는 정성 검사용으로 사용되고 있으며, 이는 기존의 자가진단기의 형태와 구조적인 문제로 정량적인 검사가 불가능하였기 때문이다.In addition, conventional simple diagnostics are basically used for the qualitative test to determine the presence of the component to be analyzed, because the quantitative test was impossible due to the form and structural problems of the existing self-diagnostics.

이와 같이, 기존의 진단 기법 및 자가 진단기들은 사용자 스스로 분석 대상 성분의 생체내 농도를 직접 분석하는데에는 여러 문제점들을 가지고 있었다.As such, the existing diagnostic techniques and self-diagnostic apparatuses have various problems in directly analyzing the in vivo concentration of the component to be analyzed by the user.

이에, 본 발명자는 사용자 스스로 정량적인 면역 진단을 수행하는데 있어, 종래의 기법 및 제품들의 비효율성과 이에 따른 문제점들을 인식하고, 이를 해결하고자 본 발명의 반정량 면역 자가진단기를 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors have completed the semi-quantitative immune self-diagnostic apparatus of the present invention to recognize the inefficiency and the problems of the conventional techniques and products in performing the quantitative immunodiagnosis by the user.

따라서, 본 발명의 진단기는 종래의 자가진단기들에 비교하여 분석하고자 하는 성분이 생체내에 일정한 농도 이상의 농도로 존재하는 경우 이를 확인할 수 있도록 하는 방법 등으로 사용자 스스로 질병을 진단할 수 있는 반정량 면역 자가 진단기를 제공하는데 그 목적이 있다.Therefore, the diagnostic apparatus of the present invention is a semi-quantitative immune self capable of diagnosing a disease by a user, such as a method for confirming when a component to be analyzed is present in a concentration higher than a certain concentration in vivo compared to conventional self-diagnostic devices. The purpose is to provide a diagnostic device.

도 1은 본 발명에 의한 반정량 면역 크로마토그래프 진단 kit를 도시한 사시도.1 is a perspective view showing a semi-quantitative immunochromatography diagnostic kit according to the present invention.

〈도면의 주요부분에 대한 부호의 설명〉<Explanation of symbols for main parts of drawing>

(1) : 시료 흡수패드(1): sample absorption pad

(2) : 1차 항체 패드(pre capture fad)(2): primary antibody pad (pre capture fad)

(3) : 컨주게이트 패드(2차 항체+골드 컨주게이트 결합체 내장)(3): conjugate pad (secondary antibody + gold conjugate conjugate incorporation)

(4) : 크로마토그래프 멤브레인(4): chromatograph membrane

(5) : 3차 항체 띠(선 혹은 띠의 형태로 제작)(5): tertiary antibody bands (produced in the form of lines or bands)

(6) : 흡수 패드(6): absorbent pad

본 발명은 기존의 체외진단용 자가 진단기의 구조 및 제조 방법을 변경 개선하여 생체내에 존재하는 분석하고자 하는 생체내 성분의 농도를 확인할 수 있도록하여 주는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 대상 성분에 대한 항체가 처리되어진 면역 자가진단기용 멤브레인 스트립을 제조하는 과정에서 시료 흡수패드와 gold conjugate 패드 사이에 일정한 농도의 대상 성분과 특이면역 결합을 이룰 수 있는 항체를 처리한 1차 항체 패드(pre capture fad)를 부착하여 시료가 흡수패드를 통해 1차 항체 패드에 도달하였을때 시료내의 분석 대상 성분의 일정량이 항체 패드의 항체와 특이 면역 결합에 의하여 포획되도록하여 제거하고, 이후에 진행되는 면역 크로마토 그래프 반응에 포획된 분석 대상 성분이 참여할 수 없도록하여 분서하고자하는 성분이 일정량 이상의 농도로 존재할 경우에만 면역크로마토 그래프 반응의 결과로 밴드를 형성시킬 수 있도록하여 분석하고자 하는 성분이 일정량 이상의 농도로 생체내에 존하는지 여부를 환자 스스로 판정할 수 있도록 하여주는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for changing the structure and manufacturing method of the existing in vitro diagnostic self-diagnostics to confirm the concentration of the components in vivo to be present in vivo, and more particularly, to antibodies to the target component In the process of preparing the membrane strip for the immune self-diagnostic treatment, the first antibody pad (pre capture fad) treated with an antibody capable of forming specific immunity binding with a certain concentration between the sample absorbing pad and the gold conjugate pad was prepared. When the sample reaches the primary antibody pad through the absorption pad, a certain amount of the analyte in the sample is captured by the specific immune bond with the antibody of the antibody pad, and then removed, and subsequently captured by the immunochromatographic reaction. A certain amount of the component to be analyzed by preventing the analyzed component to participate To a method that by allowing the component to be analyzed so as to form a band as a result of immune chromatography response only when present in a concentration on the patient to determine whether the zone itself into a living body in a concentration more than a predetermined amount.

즉, 본 발명의 방법은 다음과 같은 단계들을 포함한다:That is, the method of the present invention includes the following steps:

(1) 분석하고자 하는 성분을 항원으로 하는 1차 항체를 일정량의 항원과 결합하여 시료로 부터 제거할 수 있을 정도의 농도로 처리하여 고정한 1차 항체 패드(pre capture fad)를 준비하는 단계, (2) 분석하고자 하는 성분을 항원으로 하는 2차 항체를 부착하여 고정한 골드 컨주게이트를 처리한 컨주게이트 패드를 준비하는 단계, (3) 분석하고자 하는 성분을 항원으로 하는 3차 항체를 멤브레인 스트립 위에 띠 혹은 선의 형태로 고정하여 준비하는 단계, (4) 시료 흡수 패드에 (1)의 1차 항체 패드와 (2)의 컨주게이트 패드 그리고 (3)의 멤브레인 스트립을 차례로 부착하여주는 단계, (5) 분석하고자 하는 시료를 흡수 패드에 주입하여 시료가흡수 패드를 지나 1차 항체 패드에 도달하는 단계, (6) 시료내의 분석 대상 성분이 1차 항체 패드에 고정된 1차 항체와 특이 면역 결합으로 패드에 고정되어 시료 용액으로 부터 제거 되는 단계, (7) 일정량의 성분이 제거된 시료 용액이 컨주게이트 패드에 도달하여 컨주게이트에 부착되어 고정된 2차 항체와 분석 대상 성분이 특이 면역 결합 반응을 이루고 골드 컨주게이트와 함께 멤브레인 스트립으로 전개되는 단계, (8) 상기 (7)과 같이 골드 컨주게이트와 결합한 분석 대상 성분이 멤브레인 스트립을 크로마토 그래프 효과로 전개되는 과정에서 상기 (3)에서 준비한 3차 항체와 특이 면역 결합 반응을 이루는 단계, (9) 상기 (8)의 반응으로 분석 대상 성분과 골드 컨주게이트의 결합체가 띠의 형태로 고정된 3차 항체선(line)에 축적되어 유관으로 식별이 가능한 띠를 형성하는 단계, (10) 상기 (9)와 같이 형성된 띠의 유무를 판정하여 분석하고자 하는 성분이 시료내에 일정량 이상이 존재하는지 여부를 확인하는 단계를 포함한다.(1) preparing a primary antibody pad (pre capture fad) fixed by treating a primary antibody having the component to be analyzed as an antigen with a certain amount of antigen to be removed from a sample, and fixing the same; 2) preparing a conjugate pad treated with a fixed gold conjugate by attaching a secondary antibody whose antigen is a component to be analyzed, and (3) banding a tertiary antibody whose antigen is a component to be analyzed onto the membrane strip. Or preparing by fixing in the form of lines, (4) attaching the primary antibody pad of (1), the conjugate pad of (2), and the membrane strip of (3) to the sample absorption pad in sequence, (5) Injecting a sample to be analyzed into an absorption pad and passing the sample through the absorption pad to reach the primary antibody pad, (6) the primary antibody and the specific surface having the component to be analyzed in the sample fixed to the primary antibody pad Binding to the pad to remove it from the sample solution; (7) a sample solution from which a certain amount of the component has been removed reaches the conjugate pad and is attached to the conjugate, thereby immobilizing the secondary antibody fixed to the conjugate and the specific component of the assay Reacting and developing the membrane strip together with the gold conjugate, (8) the analyte component combined with the gold conjugate as described in (7) was prepared in (3) in the process of developing the membrane strip by chromatograph effect. Forming a specific immune binding reaction with the tertiary antibody, (9) by the reaction of (8) above, the conjugate of the component to be analyzed and the gold conjugate accumulates on a fixed tertiary antibody line in the form of a band, Forming a band that can be identified, (10) Determine the presence or absence of the band formed as in (9) and the component to be analyzed has a predetermined amount or more in the sample And a step to determine whether the material.

본 발명에 의한 반정량 자가진단기, 바람직하게는 생체내에 일정한 농도 이상으로 존재할 경우 발병의 가능성 여부를 판정할 수 있는 근거로 활용되는 생체내 물질이 확인된 기준치 보다 높을 경우 이를 사용자가 스스로 확인할 수 있도록 하는 것을 특징으로 한다. 이를 위하여 기존의 자가진단용 멤브레인 스트립의 시료 흡수 패드와 골드 컨주게이트 패드 사이에 분석하고자 하는 성분의 일정량을 포획하여 시료로부터 제거할 수 있는 1차 항체를 처리한 1차 항체 패드(Pre capture fad)를 설치하여 일정량의 분석 대상 성분이 면역 크로마토 그래프 과정에 유입되기 이전에 포획되어 제거되고 시료 용액에 남아 있는 성분만이 면역 크로마토 그래프 반응에 활용될 수 있도록 하여 주는 것을 특징으로 한다.Semi-quantitative self-diagnostic device according to the present invention, preferably when present in a living body at a certain concentration or more, if the in vivo material used as a basis for determining whether the possibility of onset is higher than the determined reference value so that the user can check by themselves Characterized in that. To this end, a first antibody pad (Pre capture fad) treated with a primary antibody that can capture and remove a certain amount of the component to be analyzed between the sample absorption pad and the gold conjugate pad of the existing self-diagnostic membrane strip is removed from the sample. It is characterized in that a certain amount of analyte to be captured and removed before being introduced into the immunochromatographic process and only the components remaining in the sample solution can be utilized for the immunochromatographic reaction.

상기에서와 같이 본 발명에 의한 면역 자가진단기를 활용하여 생체내에 일정량 이상 존재하여 발병의 가능성을 확인하는데에 활용되는 인자들에 대한 반정량적인 검사를 사용자 스스로 시행하여 질병의 유무와 가능성을 판독하여 낼 수 있다는 장점이 있어 시간 및 비용면에서 효과적이다.As described above, by using the immune self-diagnostic apparatus according to the present invention, a user may perform a semi-quantitative test on factors used to confirm the possibility of onset by presenting a certain amount or more in the living body to read the presence and possibility of the disease. It has the advantage of being able to make it effective in terms of time and cost.

Claims (2)

(1) 분석하고자 하는 성분을 항원으로 하는 1차 항체를 일정량의 항원과 결합하여 시료로 부터 제거할 수 있을 정도의 농도로 처리하여 고정한 1차 항체 패드(pre capture fad)를 준비하는 단계,(1) preparing a fixed primary antibody pad (pre capture fad) by treating a primary antibody having the component to be analyzed as an antigen with a certain amount of antigen and treating it at a concentration sufficient to be removed from the sample; (2) 분석하고자 하는 성분을 항원으로 하는 2차 항체를 부착하여 고정한 골드 컨주게이트를 처리한 컨주게이트 패드를 준비하는 단계,(2) preparing a conjugate pad treated with a fixed gold conjugate by attaching a secondary antibody having the component to be analyzed as an antigen, (3) 분석하고자 하는 성분을 항원으로 하는 3차 항체를 멤브레인 스트립 위에 띠 혹은 선의 형태로 고정하여 준비하는 단계,(3) preparing by fixing a tertiary antibody whose antigen is a component to be analyzed in the form of a strip or line on the membrane strip, (4) 시료 흡수 패드에 (1)의 1차 항체 패드와 (2)의 컨주게이트 패드 그리고 (3)의 멤브레인 스트립을 차례로 부착하여주는 단계,(4) attaching the primary antibody pad of (1), the conjugate pad of (2) and the membrane strip of (3) to the sample absorption pad in sequence; (5) 분석하고자 하는 시료를 흡수 패드에 주입하여 시료가 흡수 패드를 지나 1차 항체 패드에 도달하는 단계,(5) injecting the sample to be analyzed into the absorbent pad so that the sample passes through the absorbent pad and reaches the primary antibody pad, (6) 시료내의 분석 대상 성분이 1차 항체 패드에 고정된 1차 항체와 특이 면역 결합으로 패드에 고정되어 시료 용액으로 부터 제거 되는 단계,(6) a component to be analyzed in the sample is fixed on the pad by specific immune binding with the primary antibody fixed on the primary antibody pad and removed from the sample solution, (7) 일정량의 성분이 제거된 시료 용액이 컨주게이트 패드에 도달하여 컨주게이트에 부착되어 고정된 2차 항체와 분석 대상 성분이 특이 면역 결합 반응을 이루고 골드 컨주게이트와 함께 멤브레인 스트립으로 전개되는 단계,(7) a sample solution from which a certain amount of the component has been removed reaches a conjugate pad and is attached to the conjugate, whereby the immobilized secondary antibody and the analyte to be subjected to a specific immune binding reaction and develop into a membrane strip together with the gold conjugate , (8) 상기 (7)과 같이 골드 컨주게이트와 결합한 분석 대상 성분이 멤브레인 스트립을 크로마토 그래프 효과로 전개되는 과정에서 상기 (3)에서 준비한 3차 항체와 특이 면역 결합 반응을 이루는 단계,(8) performing a specific immune binding reaction with the tertiary antibody prepared in (3) in the course of developing the membrane strip with the chromatograph effect of the analyte to which the gold conjugate is bound as shown in (7); (9) 상기 (8)의 반응으로 분석 대상 성분과 골드 컨주게이트의 결합체가 띠의 형태로 고정된 3차 항체선(line)에 축적되어 유관으로 식별이 가능한 띠를 형성하는 단계,(9) in the reaction of (8), the conjugate of the component to be analyzed and the gold conjugate accumulates in a fixed tertiary antibody line (line) in the form of a band to form a band that can be identified by ducts; (10) 상기 (9)와 같이 형성된 띠의 유무를 판정하여 분석하고자 하는 성분이 시료내에 일정량 이상이 존재하는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는 반정량 면역 멤브레인 크로마토그래프 자가진단 방법.(10) A semi-quantitative immune membrane chromatograph self-diagnostic method comprising the step of determining the presence or absence of a certain amount of the component to be analyzed in the sample by determining the presence or absence of the band formed as in (9). 1항에 있어서, 상기 1차 항체 패드는 시료 용액이 크로마토그래프 효과로 이동되는 순서에서 골드 컨주게이트 패드 앞쪽에 위치하여 제거하고자하는 분석대상 성분의 일부와 결합반응을 이루어 이후 크로마토그래프에 참여될 수 없도록 하는 것을 특징으로 하는 반정량 면역 멤브레인 크로마토그래프 자가진단 방법.The method of claim 1, wherein the primary antibody pad is located in front of the gold conjugate pad in the order in which the sample solution is moved to the chromatographic effect to bind to a portion of the analyte to be removed to participate in the chromatograph thereafter. Semi-quantitative immune membrane chromatographic self-diagnosis method, characterized in that no.
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