KR20000005403A - Lycopersicon pimpinellifolium as a source of resistance to the plant pathogen phytophthora infestans - Google Patents

Lycopersicon pimpinellifolium as a source of resistance to the plant pathogen phytophthora infestans Download PDF

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Abstract

PURPOSE: Tomato plants(Lycopersicon esculentum) and Lycopersicon pimpinellifolium plants is provided to be resistant to the tomato strain of P. infestans races 0 and 1. CONSTITUTION: After crossing an Lycopersicon pimpinellifolium plants discovered to contain a new allele(s) which confers resistance to P. infestans races 0 and 1 with an Lycopersicon esculentum, the seed is collected and regenerated into plants. The resulting plants are evaluated for resistance to the tomato strain of P. infestans races 0 and 1 and plants demonstrating resistance are identified and selected. These selected resistant plats are backcrossed with other Lycopersicon esculentum lines displaying desirable phenotypes to obtain commercially acceptable varieties which are resistant to the tomato strain of P. infestans races 0 and 1. The plants can also be produced by protoplast fusion.

Description

식물 병원체인 파이토프토라 인페스탄스에 대한 내성원으로서의 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움Lycoppericcon pimfinellifolium as a Source of Resistance to the Plant Pathogen Phytophthora infestans

1세기 전부터, 토마토 및 감자 식물의 역병(late blight)은 식물 육종가들의 관심이 되어 왔다. 역병은 차고 축축한 기후의 땅에서 흔히 볼 수 있으며, 습도가 높은 우기동안 땅을 황폐화시킬 수 있다. 역병은 세계적인 문제이지만, 특히 미국 동부, 멕시코 및 극동에서 유행하고 있다.Since the 1st century, late blight of tomato and potato plants has been of interest to plant breeders. Plague is common on cold, wet climates and can devastate lands during the wet season. Plague is a global problem, but it is particularly prevalent in the eastern United States, Mexico and the Far East.

역병은 파이토프토라 인페스탄스(Phytophthora infestans; "피 인페스탄스"(P. infestans))라 불리는 진균에 의해 야기된다. 파이토프토라 인페스탄스는 식물 조직파편, 감자 괴경 및 가지과 잡초에서 살 수 있다. 진균의 포자는 전형적으로 바람부는 비오는 시기에 널리 흩어지지만, 진균은 감염된 식물 조직파편 및 열매 위에 흩어질 수 있다. 포자가 토마토 식물의 잎, 줄기 및 열매에 내려 앉으면, 포자는 신속하게 식물 조직에 침입하여 조직을 붕괴시키고 결국에는 식물을 죽일 수 있다.The late blight is caused by a fungus called Phytophthora infestans ("P. infestans"). Phytophthora infestans can be found in plant debris, potato tubers and eggplant weeds. Fungal spores are typically scattered widely during windy and rainy days, but fungi can be scattered on infected plant tissue debris and fruits. If the spores settle on the leaves, stems and fruits of the tomato plant, the spores can quickly invade the plant tissues, disrupt the tissues and eventually kill the plants.

현재, 토마토에는 피 인페스탄스로 기술되는 두 생리학적 품종이 있다. 첫째는 내성 유전자를 갖지 않는 상업적인 변종에 병원성인 피 인페스탄스 0이다. 두번째는 Ph1내성 유전자를 갖는 상업적인 변종에 병원성인 피 인페스탄스 1이다.Currently, there are two physiological varieties of tomatoes described as blood infestans. First is blood infestans 0, which is pathogenic to commercial strains that do not have a resistance gene. The second is P. infestans 1, which is pathogenic to commercial strains with Ph 1 resistance genes.

1952년에, 야생 토마토의 일종인 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움(Lycopersicon Pimpinellifolium)에서 피 인페스탄스에 대한 내성이 보고되었다. 이 내성은 토마토균인 피 인페스탄스 0에 대한 내성을 제공한 하나의 우성 유전자(Ph1, 이전에는 TR1로 공지됨)에 의해 부여된 것으로 밝혀졌다. 갈레글리(Gallegly, M. E.)의 문헌["Resistance to the Late Blight Fungus in Tomato", (1960) Campbell Plant Science Seminar, p.116]을 참조한다. 또한, 토마토 품종인 웨스트 버지니아(West Virginia) 700(P1204996)에서 다중유전자 내성이 밝혀졌다. 이 내성은 완전하지 않으며, 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성만을 부여하였다. 실험 조건이 피 인페스탄스 1 발육에 유리하였을 때, 이들 내성 식물은 심각한 질병에 걸렸다.In 1952, resistance to blood infestans was reported in Lycopersicon Pimpinellifolium, a type of wild tomato. This resistance was found to be conferred by one dominant gene (Ph 1 , formerly known as TR 1 ) that provided resistance to the tomato bacterium P. infestans 0. See Gallegly, ME, "Resistance to the Late Blight Fungus in Tomato", (1960) Campbell Plant Science Seminar, p. 116. In addition, multigene resistance was found in tomato varieties West Virginia 700 (P1204996). This resistance is not complete and confers only resistance to blood infestans 0 and 1. When the experimental conditions favored the development of P. infestans 1, these resistant plants developed a serious disease.

재배 토마토인 라이코페르시콘 에스쿨렌툼(Lycopersicon esculentum)은 미국 및 세계적으로 가장 중요한 식물 작물중 하나이며, 미국에서만 매년 수백만 톤이 생산되고 있다. 이 작물의 상업적인 중요성은 재배 변종을 개량하기 위한 부단한 노력을 필요로 하였다. 따라서, 피 인페스탄스 1에 대해 질병내성을 나타내는 재배 토마토 변종이 필요하다.Lycopersicon esculentum, a cultivated tomato, is one of the most important plant crops in the United States and the world, and millions of tonnes are produced annually in the United States alone. The commercial importance of these crops required constant efforts to improve the cultivars. Thus, there is a need for cultivated tomato varieties that exhibit disease resistance to blood infestans 1.

본 발명의 목적은 토마토균인 피 인페스탄스 1에 대한 내성원으로서 사용될 수 있는 신규한 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 변종을 개시하는 것이다. 본 발명의 또 하나의 목적은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성이 있고, 질병의 압력이 큰 야외에서도 피 인페스탄스 1에 대한 내성을 유지하는 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to disclose a novel lycopperic pimplepinfolium strain that can be used as a resistance against the tomato bacterium P. infestans 1. It is another object of the present invention to provide a lycopperic cone esculentum plant that is resistant to the tomato bacteria P. infestans 0 and 1, and maintains resistance to P. infestans 1 even when the disease pressure is high. To provide.

발명의 요약Summary of the Invention

본 발명은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성이 있는 토마토 식물(라이코페르시콘 에스쿨렌툼)을 생산하는 방법을 포함한다. 이 식물은 피 인페스탄스 0 및 1에 내성을 부여하는 신규한 대립 유전자(들)를 함유하는 것으로 밝혀진 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물과 라이코페르시콘 에스쿨렌툼을 교잡시켜 생산한다. 교잡을 행한 후, 종자를 수집하여 식물로 재생시킨다. 얻어진 식물을 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성에 대하여 평가한다. 내성을 나타내는 식물을 동정하고 선별한다. 선별된 내성 식물을 원하는 표현형을 나타내는 다른 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 품종과 여교잡시켜, 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 상업적으로 허용되는 변종을 얻는다. 이 방법은 또한 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 토마토 식물(라이코페르시콘 에스쿨렌툼)을 생산하는 종자를 생산하는데 사용될 수 있다.The present invention includes a method for producing a tomato plant (lycopericone esculentum) resistant to the tomato bacterium pi infestans 0 and 1. This plant is produced by hybridizing lycoppericone pimfinellifoliium plants and lycoppericone esculentum which have been found to contain novel allele (s) that confer resistance to blood infestans 0 and 1. After hybridization, seeds are collected and regenerated into plants. The obtained plants were evaluated for resistance to tomato bacteria pi infestans 0 and 1. Identify and select resistant plants. Selected resistant plants are then hybridized with other lycopperic cone esculentum varieties that exhibit the desired phenotype to obtain commercially acceptable strains resistant to the tomato strains P. infestans 0 and 1. This method can also be used to produce seeds that produce tomato plants (lycopericone esculentum) that are resistant to the tomato bacteria P. infestans 0 and 1.

피 인페스탄스 0 및 1에 대해 신규한 내성을 갖는 것으로 발견되었고, 그 후 엘 에스쿨렌툼(L. esculentum)과의 교잡에 사용된 선별된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움은 LA 2533으로 명명되며, 이를 본 발명자들은 호프(Hope) 84라고도 불렀다.It was found to have novel resistance to P. infestans 0 and 1, and the selected lycopperic pimfinellifolium used for hybridization with L. esculentum was then designated LA 2533. This is also called the Hope 84 by the inventors.

본 발명의 식물은 또한 원형질체 융합에 의해 생산될 수 있다. 원형질체 융합에 의해 식물을 생산하기 위하여, 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물의 원형질체 및 라이코페르시콘 에스쿨렌툼의 원형질체를 얻는다. 그 다음, 당업계에 널리 공지된 표준의 원형질체 융합 과정을 사용하여 원형질체들을 융합한다. 그 결과, 동종 이계 세포를 얻고, 이를 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 것으로 평가된 식물로 재생시킨다. 내성 식물을 동정하고 선별한다.Plants of the invention can also be produced by protoplast fusion. In order to produce plants by protoplast fusion, protoplasts of lycoppericcon pimfinellifoliium plants resistant to the tomato bacterium pi infestans 0 and 1 and protoplasts of lycoppericcone esculentum are obtained. The protoplasts are then fused using standard protoplast fusion procedures well known in the art. As a result, allogeneic cells are obtained and regenerated into plants evaluated to be resistant to the tomato bacterium P. infestans 0 and 1. Identify and select resistant plants.

본 발명의 방법에 따라 생산된 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성이며, 질병의 압력이 큰 야외에서도 피 인페스탄스 1에 대해 내성을 유지한다.Lycopericon esculentum plants produced according to the method of the present invention are resistant to the tomato bacteria P. infestans 0 and 1, and tolerate to P. infestans 1 even in the field with high pressure of disease.

본 발명은 또한 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 부여하는 대립 유전자(들)를 함유하는 토마토 식물 및 그 토마토 식물에 의해 생산된 종자를 포함한다.The present invention also includes tomato plants containing allele (s) conferring resistance to the tomato bacterium pi infestans 0 and 1 and seeds produced by the tomato plants.

본 발명은 토마토균인 피 인페스탄스에 대해 내성이 있는 토마토 식물(라이코페르시콘 에스쿨렌툼)의 생산에 관한 것이다. 식물이 토마토균인 피 인페스탄스에 노출되었을 때 질병 증후를 보이지 않거나 또는 내성이 약한 식물에 비하여 상당히 감소된 증후를 보인다면, 그 식물은 질병내성이 있다고 한다. 본 발명의 식물은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성이므로 새롭고 신규하다.The present invention relates to the production of tomato plants (lycopericone esculentum) resistant to the tomato bacterium P. infestans. If a plant shows no symptoms of disease when exposed to the tomato bacterium P. infestans, or a significantly reduced symptom than a less resistant plant, the plant is said to be disease resistant. The plant of the present invention is new and novel because it is resistant to the tomato bacterium pi infestans 0 and 1.

본 발명의 발명자들은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 부여하는 대립 유전자(들)를 함유하는 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 발견하였다. 이 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 토마토 식물(라이코페르시콘 에스쿨렌툼)을 생산하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, LA 2533으로 명명된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 사용하여 본 발명의 식물을 생산하였다. 본 발명자들은 LA 2533으로 명명된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 호프 84로도 불렀다. LA 2533(호프 84)의 종자는 부다페스트 조약의 규정에 따라 미국 메릴랜드주 20852 파크론 드라이브 12301 소재의 미국종균보존소(American Type Culture Collection, ATCC)에 기탁되었다. 종자는 1995년 12월 14일에 기탁되었고, ATCC 수탁번호 제 97382 번을 부여받았다. 또한, LA 2533(호프 84)은 미국 캘리포니아주 데이비스 소재의 유니버시티 오브 캘리포니아-데이비스(University of California-Davis)의 릭 센터(Rick Center)로부터 신청하는대로 입수가능하다.The inventors of the present invention have found a lycoppericcon pimpinellifoliium plant containing allele (s) conferring resistance to the tomato bacterium pi infestans 0 and 1. This lycoppericum pimfinellifolium plant can be used to produce tomato plants (lycopericone esculentum) that are resistant to the tomato bacterium P. infestans 0 and 1. For example, the lycoppericum pimpinifolium plants, designated LA 2533, were used to produce the plants of the present invention. The inventors also called the lycoppericicon pimfinellifolium plant, designated LA 2533, as hop 84. Seeds from LA 2533 (Hoff 84) were deposited with the American Type Culture Collection (ATCC), 12301 Parkron Drive 12301, Maryland, in accordance with the provisions of the Budapest Treaty. Seeds were deposited on December 14, 1995 and were assigned ATCC accession no. 97382. In addition, LA 2533 (Hope 84) is available upon request from the Rick Center of the University of California-Davis, Davis, CA.

본 발명자들은 LA 2533 식물이 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 나타냄을 발견하였다. 이 발견 이전에는, LA 2533으로 명명된 식물에서 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성은 공지된 바 없었다. LA 2533으로서 명명된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물은 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 부여하는 대립 유전자(들)를 함유한다. 그러나, 당업자라면 대립 유전자(들)를 함유하고 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움을 본 발명에 사용할 수 있음을 알 것이다.We found that the LA 2533 plant was resistant to the tomato bacterium P. infestans 0 and 1. Prior to this discovery, resistance to blood infestans 0 and 1 in plants named LA 2533 was unknown. LycoPericicon piffininifolium plants, designated LA 2533, contain allele (s) conferring resistance to the tomato bacterium P. infestans 0 and 1. However, one of ordinary skill in the art will appreciate that lycopericone pimpinifolium, which contains the allele (s) and is resistant to the tomato bacterium P. infestans 0 and 1, may be used in the present invention.

본 발명의 식물은 전통적인 육종 기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, LA 2533으로 명명된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물의 종자를 사용할 수 있다. LA2533의 종자를 온실 또는 야외에 심는다. 얻어진 식물을 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 노출시킨다. 충분히 질병 압력을 가한 후, 최상의 내성을 나타내는 식물을 선별한다. 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성은 두가지 방식으로 결정될 수 있다. 피 인페스탄스에 대한 내성을 결정하는 하나의 방식은 소위 "온실 스크린"(greenhouse screen)법을 사용함을 포함한다. 온실 스크린법에서, 토마토 묘종을 5개의 참잎이 나올 때까지 성장시킨다. 이때, 식물에 피 인페스탄스 1 포자낭의 현탁액(농도는 용액 1㎖당 포자낭 10,000개임)을 분사한다. 접종 후, 식물을 100%의 습도의 챔버에 24시간동안 둔다. 그 다음, 식물을 습도 챔버에서 꺼내어 온실 벤치로 옮겨 질병이 발생하도록 한다. 거의 7일 내에 내성 식물을 동정하고 선별한다. 그 다음, 식물에 피 인페스탄스 0의 현탁액을 동일한 방식으로 2차 분사할 수 있다. 그러나, 피 인페스탄스 0에 대한 내성에 대해 식물을 여러번 시험할 필요는 없는데, 이는 당업자라면 피 인페스탄스 1에 대해 내성인 토마토 식물은 반드시 피 인페스탄스 0에 대해서도 내성임을 일반적으로 알고 있기 때문이다.The plants of the present invention can be produced by traditional breeding techniques. For example, one may use seeds of the lycophericone pimpinifolium plant designated LA 2533. Seeds of LA2533 are planted in greenhouses or outdoors. The obtained plant is exposed to the tomato bacteria pi infestans 0 and 1. After sufficient disease pressure, the plants with the best resistance are selected. Resistance to P. infestans 0 and 1 can be determined in two ways. One way of determining resistance to blood infestans involves the use of the so-called "greenhouse screen" method. In greenhouse screening, tomato seedlings are grown until five sesame leaves emerge. At this time, the plants are sprayed with a suspension of blood infestans 1 spore sac (concentration is 10,000 spore sacs per ml of solution). After inoculation, the plants are placed in a chamber at 100% humidity for 24 hours. The plant is then removed from the humidity chamber and transferred to a greenhouse bench for disease to occur. Within 7 days resistant plants are identified and selected. The plant may then be secondary sprayed with a suspension of blood infestans 0 in the same manner. However, plants do not need to be tested for resistance to P. infestans 0 multiple times, as those skilled in the art generally know that tomato plants that are resistant to P. infestans 1 are necessarily resistant to P. infestans 0. Because.

피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 결정하는 두번째 방식은 야외 스크린(field screen)법이다. 야외 스크린법은 기후 조건이 자연 감염 및 질병 발생에 유리한 야외 시험지에 묘종을 이식함을 포함한다. 질병이 발생한 후, 거의 식물이 열매를 맺기 시작할 때, 내성 식물을 동정하고 선별한다.The second method of determining resistance to infestans 0 and 1 is the field screen method. Field screening involves transplanting seedlings into field strips where climatic conditions are beneficial for natural infections and disease outbreaks. After the disease occurs, almost when the plants begin to bear fruit, the resistant plants are identified and selected.

본 발명의 발명자들은 본 발명의 방법에 의해 생산된 식물이 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인지 또는 내성이 약한지를 평가하기 위한 질병 평가 등급을 고안하였다. 질병 평가 등급은 숫자 1 내지 5를 기본으로 하며, 이를 더 구체적으로 기술하자면 다음과 같다: 1은 잎에 병소가 없거나 작음에 해당하고; 2는 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있음에 해당하고; 3은 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었음에 해당하고; 4는 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있음에 해당하고; 5는 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 줄기 또는 죽은 식물에 병소가 확대되었음에 해당한다. 3보다 작은 질병 등급이 매겨진 식물은 내성이 있는 것으로 간주하며, 3 이상의 질병 등급이 매겨진 식물은 내성이 약한 것으로 간주한다.The inventors of the present invention devised a disease assessment grade to assess whether the plants produced by the method of the present invention are resistant or weakly resistant to blood infestans 0 and 1. Disease ratings are based on the numbers 1 to 5, which are more specifically described as follows: 1 corresponds to no or small lesion on the leaf; 2 corresponds to no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, and small lesions on the leaf spigot (diameter 2 mm); 3 indicates no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions on the leaf pacifier (diameter 2 mm), and enlarged lesions on the pacifiers; 4, no or small in leaf, enlarged leaf lesion, small leaflet (2 mm diameter) on leaf tip, focal enlargement on leaf tip, small lesion (2 mm diameter) on stem; 5 has no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions on the pacifier (2 mm in diameter), enlarged lesions on the pacifiers, small lesions (2 mm on the stem), and enlarged lesions on stems or dead plants It is equivalent to. Plants rated at disease ratings less than 3 are considered resistant, and plants rated at disease rating 3 or higher are considered to be less resistant.

전통적으로, 대부분의 식물 육종가들은 피 인페스탄스에 대해 내성을 나타내는 토마토를 평가하고, 동정하고, 선별하지 않는다. 대부분의 육종가들은 피 인페스탄스를 대상으로 연구하지 않는데, 이는 이 진균이 전 농작물을 죽일 것이라는 염려가 없기 때문이다. 대신에, 대부분의 육종가들은 이 진균이 농작물에 침범하지 않도록 살균제를 분사하여 피 인페스탄스를 방제한다.Traditionally, most plant breeders do not evaluate, identify, and screen tomatoes that are resistant to blood infestans. Most breeders do not study blood infestans because there is no concern that the fungus will kill the entire crop. Instead, most breeders control blood infestans by spraying fungicides to prevent the fungus from invading crops.

최상의 내성을 나타내는 식물의 꽃가루를 다른 식물의 암술머리에 놓음으로써 그 식물을 상업적인 토마토 식물(엘 에스쿨렌툼)과 교잡시킨다. 토마토 열매가 열린 후, 종자를 수집한다. 종자를 식물로 성장시키고, 질병내성에 대해 평가한다. 내성 식물을 선별하고, 식물 유형(꽃차례가 유한인지 총상인지), 열매 크기, 형태, 향, 색 및 장기간의 저장수명과 같은 원하는 표현형 특성을 갖는 상업적인 토마토 식물과 여교잡시킬 수도 있다. 원하는 표현형 특성을 가지며 토마토균인 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성인 변종이 얻어질 때까지 여교잡을 계속할 수도 있다. 얻어진 식물은 질병 압력이 큰 야외에서도 피 인페스탄스 1에 대해 안정하다.The pollen of the plant with the highest resistance is placed in the pistil of another plant to hybridize the plant to the commercial tomato plant (El Esculentum). After the tomato fruit opens, collect seeds. Seeds are grown into plants and assessed for disease resistance. Resistant plants may be selected and hybridized with commercial tomato plants with desired phenotypic characteristics such as plant type (inflorescence finite or gunshot), fruit size, morphology, aroma, color and long shelf life. The hybridization may be continued until a strain with the desired phenotypic characteristics and resistant to the tomato strains P. infestans 0 and 1 is obtained. The obtained plant is stable against P. infestans 1 even in the open air with high disease pressure.

라이코페르시콘 에스쿨렌툼이 폐화 수정성이라는 점은 흥미롭다. 따라서, 야생에서 인간의 기술적 개입이 없이도 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움과 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 사이에 교차 수분작용이 일어날 가능성이 매우 높다. 또한, 피 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 부여하는 대립 유전자(들)의 동정, 선별 및 역교배가 자연에서 일어날 가능성은 없다.It is interesting to note that Lycopethic Esculentum is abolished fertility. Therefore, there is a high possibility that cross-pollination occurs between lycophericone pimfinellifolium and lycoppericone esculentum without human technical intervention in the wild. In addition, there is no possibility that identification, selection and backcrossing of allele (s) conferring resistance to blood infestans 0 and 1 will occur in nature.

본 발명의 식물을 생산하는데 원형질체 융합을 사용할 수 있다. 예를 들어, LA 2533으로 명명된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움으로부터 제 1 원형질체를 얻고, 라이코페르시콘 에스쿨렌툼으로부터 제 2 원형질체를 얻는다. 그 다음, 당업계에 널리 공지된 전통적인 원형질체 융합 과정을 사용하여 원형질체들을 융합시킨다.Protoplast fusions can be used to produce the plants of the invention. For example, a first protoplast is obtained from lycophericone pimpinifolium, designated LA 2533, and a second protoplast is obtained from lycophericone esculentum. The protoplasts are then fused using traditional protoplast fusion procedures well known in the art.

예를 들어, 원형질체 융합은 융합 완충제(즉, 세포막이 융합되게 하는 고 pH의 용액)의 존재하에 교착을 일으키는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 사용하여 이룰 수 있다. 이러한 체세포 잡종교배는 본원에 참조로 인용된, 선드버그(Sundberg) 등의 문헌[Plant Science, 43, (1986) 155]에 개시된, 종간 잡종 또는 그의 변종을 생산하기 위한 조건하에 수행할 수도 있다. 그러나, 당업자라면 원형질체 융합은 폴리에틸렌 글리콜(PEG)의 사용이 아닌 다른 방식으로 수행할 있음을 알 것이다. 예를 들어, 원형질체는 본원에 참조로 인용된, 쿠프(Koop) 등의 문헌["Electric Field-Induced Fusion and Cell Reconstruction with Preselected Single Protoplasts and Subprotoplasts of Higher Plants", Electroporation and Electrofusion in Cell Biology, 누만 등 편집, pp.355-365]에 기술된 전계 유도성 융합 기술을 사용하여 융합시킬 수 있다. 또한, 원형질체 융합은 본원에 참조로 인용된, 호프만(Hauptmann) 등의 문헌["Carrot×Tobacco Somatic Cell Hybrids Selected by Amino Acid Analog Resistance Complementation", 제 6 차 국제 원형질체 심포지움, 바즐, 1983년 8월 12일-16일]에 기술된 바와 같이 덱스트란 및 폴리비닐 알콜을 사용하여 이룰 수 있다.For example, protoplast fusion can be achieved using polyethylene glycol (PEG), which causes a deadlock in the presence of a fusion buffer (ie, a high pH solution that allows cell membranes to fuse). Such somatic hybridization can also be performed under conditions for producing interspecies hybrids or variants thereof, as disclosed in Sundberg et al., Plant Science, 43, (1986) 155, which is incorporated herein by reference. However, those skilled in the art will appreciate that protoplast fusion can be performed in a manner other than the use of polyethylene glycol (PEG). For example, protoplasts are described in Koop et al., “Electric Field-Induced Fusion and Cell Reconstruction with Preselected Single Protoplasts and Subprotoplasts of Higher Plants,” Electroporation and Electrofusion in Cell Biology, Numan et al. Fusing using the field inductive fusion technique described in Edit, pp. 355-365. Protoplast fusion is also described in Hauptmann et al., “Carrot × Tobacco Somatic Cell Hybrids Selected by Amino Acid Analog Resistance Complementation,” 6th International Protoplast Symposium, Basel, Aug. 12, 1983. 1-16 days], using dextran and polyvinyl alcohol.

이하에, 본 발명의 실시예를 제공하는데, 이는 예시를 목적으로 하며 본 발명을 제한하는 것은 아니다.In the following, examples of the present invention are provided, which are for illustrative purposes and do not limit the present invention.

실시예 1Example 1

상이한 몇개의 식물에 대해 피 인페스탄스에 대한 내성을 평가하였다. 다음 종자를 수득하였다: LA 373이라고 표시되는 엘 핌피넬리폴리움, LA 1338이라고 표시되는 엘 에스쿨렌툼 바르. 세라시포름(L. esculentum var. cerasiforme), LA 1375라고 표시되는 엘 핌피넬리폴리움, LA 2650이라고 표시되는 엘 히르수툼(L.hirsutum) 및 LA 2533(호프 84)라고 표시되는 엘 핌피넬리폴리움. 이들 모든 종자들을 미국 캘리포니아주 데이비스 소재의 유니버시티 오브 캘리포니아-데이비스의 릭 센터로부터 얻었다. 호프 33은 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 토마토 품종이다. 셀레브리티(Celebrity) 및 판단고(Fandango)는 피 인페스탄스에 대해 아무런 내성을 나타내지 않는 상업적인 변종이다.Several different plants were evaluated for resistance to blood infestans. The following seeds were obtained: El Pimfinellipoliium, designated LA 373, El Esculentum Bar, designated LA 1338. L. esculentum var.cerasiforme, El Pimfinellipoliium, labeled LA 1375, L.hirsutum, labeled LA 2650, and El Pimfinellipoli, labeled LA 2533 (Hoff 84). cellar. All of these seeds were obtained from Rick Center, University of California-David, Davis, CA. Hope 33 is a tomato variety that is resistant to pi infestans 0 and 1. Celebrity and Fandango are commercial varieties that show no resistance to blood infestans.

종자를 온실에서 파종하였다. 토마토 종자를 흙에 뿌리고(50% 물이끼: 50% 모래), 온실내의 벤치위에 놓고(주간 온도 75℉ 및 야간 온도 70℉), 필요에 따라 물을 주었다. 토마토 묘종의 참잎이 5개가 되면 이들에게 피 인페스탄스 1을 접종하였다. 묘종에 용액 1㎖당 10,000개의 포자낭의 농도로 피 인페스탄스 포자낭의 현탁액을 모두 고갈될때까지 분사시켰다. 접종후, 식물을 24시간동안 100% 습도의 챔버에 넣어두었다. 이어서, 식물을 꺼내 질병이 발생되게 하였다. 접종후 대략 7일후에 다음 질병 등급을 사용하여 내성이 있는 식물을 동정하고 선별하였다. 전술된 이들 동일한 품종을 동일한 방법으로 피 인페스탄스 O에 대해서 평가하였다.Seeds were sown in a greenhouse. Tomato seeds were sown in soil (50% moss: 50% sand), placed on benches in the greenhouse (75 ° F. weekly and 70 ° F. at night) and watered as needed. When five seedlings of tomato seedlings were inoculated, they were inoculated with blood infestans 1. Seedlings were sprayed at a concentration of 10,000 spore sacs per ml of solution until all of the suspension of blood infestans spore sacs was depleted. After inoculation, the plants were placed in a chamber at 100% humidity for 24 hours. The plant was then taken out to cause disease. Approximately 7 days after inoculation, resistant plants were identified and selected using the following disease classes. These same varieties described above were evaluated for P. infestans O in the same manner.

질병 등급Disease grade

1: 잎에 병소가 없거나 작음1: no leaves on the leaves or small

2: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있음2: no leaf on the leaf, small leaf lesion enlarged, small leaf lesion (2 mm diameter) on leaf tip

3: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었음3: leaf no lesion or small, leaf lesion enlarged, leaf lesion small lesion (diameter 2mm), leaf lesion enlarged

4: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있음4: no or small on the leaf, enlarged leaf lesion, small on the pacifier (diameter 2mm), enlarged on the pacifier, small on the stem (2mm diameter)

5: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 줄기 또는 죽은 식물에 병소가 확대되었음.5: no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions (2 mm in diameter) on leafstalks, enlarged lesions on scapes, small lesions (2 mm in diameter) on stems, enlarged lesions on stems or dead plants It was.

질병 등급을 매긴 결과를 다음 표 1에 나타내었다:Disease grading results are shown in Table 1 below:

품종kind 질병 등급Disease grade 식물의 번호Number of plants 인페스탄스 1Infestans 1 인페스탄스 0Infestans 0 호프 33Hope 33 3.03.0 1.01.0 99 셀레브리티Celebrity 5.05.0 2.32.3 99 판단고Judgment 5.05.0 2.32.3 99 LA 373 L. 핌피넬리폴리움LA 373 L. Pimfinellipoliium 5.05.0 3.03.0 66 LA 1338 L. 에스쿨렌툼 바르. 세라시포름LA 1338 L. Esculentum Bar. Cerashiform 5.05.0 1.31.3 66 LA 1375 L. 핌피넬리폴리움LA 1375 L. Pimfinellipoliium 4.34.3 1.01.0 66 LA 2650 L.히르수툼 f.티피쿰LA 2650 L. Hirtsumum f.Thippikum 4.34.3 1.21.2 66 LA 2533 L. 핌피넬리폴리움LA 2533 L. Pimfinellipoliium 1.31.3 1.01.0 66

상기 표는 LA 2533으로 표시되는 엘 핌피넬리폴리움 식물이 피 인페스탄스 0 및 1에 대해서 높은 수준의 내성을 갖는 반면, LA 373 및 1375로 표시되는 엘 핌피넬리폴리움 균주는 높은 수준의 내성을 나타내지 않음을 보여준다.The table above shows that the elpimfinellifoliium plants, represented by LA 2533, have a high level of resistance to piinfestans 0 and 1, while the elpimfinellifoliium strains, represented by LA 373 and 1375, have a high level of resistance. It does not show.

실시예 2Example 2

LA 2533으로 표시되고 호프 84라고도 칭해지는 에이 엘 핌피넬리폴리움 식물을 Fla 7065로 표시되는 토마토(엘 에스쿨렌툼) 식물과 교잡시켰다. 식물 Fla 7065는 유한의 큰 열매를 맺고, 고른 녹색을 갖는 신선한, 동종 이계 번식주로서 미국 플로리다주 소재의 유니버시티 오브 플로리다(University of Florida)의 제이 스코트(Jay Scott) 박사의 육종 프로그램에 의해 얻어진 것이었다. 이들 교잡종(F1)로부터 얻은 종자를 실시예 1에 기술된 바와 같이 흙에 뿌리고 온실에서 키우고 피 인페스탄스 1을 접종하였다. 실시예 1에 기술된 것과 동일한 질병 등급을 사용했을때 상기로부터 얻은 모든 종자들이 1 또는 2의 등급을 가져 이들이 피 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 가짐을 증명하였다. 이는 내성에 관련있는 유전자(들)이 우성 유전됨을 암시하는 것이다.A. El Pimfinellifolium plants, designated LA 2533 and also referred to as Hope 84, were hybridized with tomato (L. Esculentum) plants, designated Fla 7065. The plant Fla 7065 is a fresh, allogeneic breeding fruit with a finite, fruity, even green color, obtained by Dr. Jay Scott's breeding program at the University of Florida, Florida, USA. . Seeds obtained from these hybrids (F1) were sown in soil, grown in greenhouses and inoculated with blood infestans 1 as described in Example 1. When using the same disease class as described in Example 1, all seeds obtained above had a grade of 1 or 2, demonstrating that they are resistant to blood infestans 0 and 1. This suggests that the gene (s) involved in resistance are dominantly inherited.

실시예 3Example 3

실시예 2에 기술된 F1 식물을 자가-수분시켰다. 이 F2로부터 나온 종자들을 흙에 뿌리고 온실에서 키웠다. 수주후에, 종자를 밭으로 옮기고 물을 적하 관개에 의해 공급하고, 숙성하도록 성장시켰다. 꽃이 피기 전에 절단하고 이를 흙에 옮기고 온실에서 성장시켰다. 절단한지 2주후, 피 인페스탄스 1(농도: ㎖당 10,000 포자낭)을 접종시키고 24시간동안 습도 100%의 방에 넣어두었다. 24시간 후, 식물을 제거하고 질병을 진행시켰다. 14일후 절단부에 대해 질병 등급을 1 내지 5로 매겼다. 여기서 사용된 질병 등급은 다음과 같다:The F1 plants described in Example 2 were self-pollinated. Seeds from this F2 were sown in soil and grown in greenhouses. After several weeks, the seeds were transferred to the field and water was supplied by dropping irrigation and grown to ripen. Before flowering, it was cut, transferred to soil and grown in a greenhouse. Two weeks after cleavage, blood infestans 1 (concentration: 10,000 spore sacs per ml) was inoculated and placed in a room with 100% humidity for 24 hours. After 24 hours, the plants were removed and the disease progressed. After 14 days the cuts were graded 1-5. The disease grade used here is as follows:

1: 잎에 병소가 없거나 작음1: no leaves on the leaves or small

2: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있음2: no leaf on the leaf, small leaf lesion enlarged, small leaf lesion (2 mm diameter) on leaf tip

3: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었음3: leaf no lesion or small, leaf lesion enlarged, leaf lesion small lesion (diameter 2mm), leaf lesion enlarged

4: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있음4: no or small on the leaf, enlarged leaf lesion, small on the pacifier (diameter 2mm), enlarged on the pacifier, small on the stem (2mm diameter)

5: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 줄기 또는 죽은 식물에 병소가 확대되었음.5: no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions (2 mm in diameter) on leafstalks, enlarged lesions on scapes, small lesions (2 mm in diameter) on stems, enlarged lesions on stems or dead plants It was.

F2 식물에 대한 등급을 다음 표 2a 내지 2d에 나타내었다.The grades for the F2 plants are shown in Tables 2a to 2d below.

질병 등급이 2.9 이하인 품종들은 내성인 것으로 간주되는 반면, 질병 등급이 3.0 이상인 품종들은 내성이 약한 것으로 간주되었다(71개의 품종이 내성이 있고 24개의 품종이 내성이 약함). 표 2의 데이터는 내성이 있는 품종: 내성이 약한 품종의 비가 3:1임을 보여주는데, 이는 내성이 있는 유전자좌가 우성 유전될때 기대되는 값이었다. 그러나, 많은 품종이 질병 등급 2.0 내지 2.8을 갖는다. 발명자들은 이들 품종이 이종접합체일 수 있다고 생각한다. 이것이 사실이라면, 이는 동형접합체 식물이 이종접합체 식물보다 높은 수준의 내성을 가질 경우, 내성이 부분적으로는 우성 유전임을 암시한다.Breeds with a disease grade of 2.9 or lower were considered resistant, while varieties with a disease grade of 3.0 or higher were considered to be weak (71 varieties were resistant and 24 varieties were weak). The data in Table 2 shows that the ratio of resistant varieties: less resistant varieties is 3: 1, which is expected when the resistant locus is dominant. However, many varieties have disease grades 2.0 to 2.8. The inventors believe that these varieties may be heterozygous. If this is true, this suggests that resistance is partially dominant inheritance when homozygous plants have a higher level of resistance than heterozygous plants.

실시예 4Example 4

실시예 3에 기술된 F2 식물을 자가-수분시켰다. 이 F3으로부터 나온 종자들을 흙에 뿌리고 온실에서 키웠다. 수주후에, 피 인페스탄스 1의 자연 감염 및 질병 진행을 일으키기에 적당한 날씨 조건을 갖는 밭으로 종자를 옮겼다. 내성이 약한 대조군 식물들(셀레브리티)이 죽으면서 심각한 질병 증세들이 명확해졌다. 식물이 열매를 맺기 시작할때 질병 등급을 1 내지 5로 매겼다. 여기서 사용된 질병 등급은 다음과 같다:The F2 plants described in Example 3 were self-pollinated. Seeds from this F3 were sown in soil and grown in greenhouses. After several weeks, the seeds were transferred to fields with weather conditions suitable to cause natural infection and disease progression of blood infestans 1. Serious disease symptoms became apparent when the less resistant control plants (celebrities) died. The disease was graded from 1 to 5 when the plants began to bear fruit. The disease grade used here is as follows:

1: 잎에 병소가 없거나 작음1: no leaves on the leaves or small

2: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있음2: no leaf on the leaf, small leaf lesion enlarged, small leaf lesion (2 mm diameter) on leaf tip

3: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었음3: leaf no lesion or small, leaf lesion enlarged, leaf lesion small lesion (diameter 2mm), leaf lesion enlarged

4: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있음4: no or small on the leaf, enlarged leaf lesion, small on the pacifier (diameter 2mm), enlarged on the pacifier, small on the stem (2mm diameter)

5: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 줄기 또는 죽은 식물에 병소가 확대되었음.5: no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions (2 mm in diameter) on leafstalks, enlarged lesions on scapes, small lesions (2 mm in diameter) on stems, enlarged lesions on stems or dead plants It was.

질병 등급을 매긴 결과를 다음 표 3a 및 3b에 나타내었다.Disease graded results are shown in Tables 3A and 3B below.

상기 결과는 실시예 3에 기술된 F2 식물로부터 나온 결과를 보여준다. F2 식물에서 동정된 동종접합체 내성을 갖는 식물(94FH98, 94FH99, 94FH114, 94FH120, 94FH121, 94FH148, 94FH162, 94FH170) 및 내성이 약한 식물(94FH95, 94FH110, 94FH116, 94FH128, 94FH129, 94FH155, 94FH178, 94FH188)은 F3식물에서 동일한 질병 등급을 나타내었다. 내성이 수많은 유전자로부터 부여되는 경우(다중유전자 복합체(multigenic complex)), 3:1 비율로는 분리되지 않을 것이며 동종접합체 내성 식물은 증명된 것만큼 쉽고 빠르게 동정되지는 않을 것이다.The results show the results from the F2 plants described in Example 3. Plants with homozygous resistance identified in F2 plants (94FH98, 94FH99, 94FH114, 94FH120, 94FH121, 94FH148, 94FH162, 94FH170) and less resistant plants (94FH95, 94FH110, 94FH116, 94FH128, 94FH129, 94FH155, 94F188) Showed the same disease class in F3 plants. If resistance is conferred from numerous genes (multigenic complex), it will not be isolated in a 3: 1 ratio and homozygous resistant plants will not be identified as easily and quickly as demonstrated.

본원에서 기술되고 청구된 본 발명은 본원에서 개시된 구체적인 실시양태에만 국한되지 않는데, 왜냐하면 이들 실시양태들은 본 발명의 몇가지의 양태들을 예시한 것이기 때문이다. 임의의 동등한 실시양태가 본 발명의 범주에 들 것이다. 실제로, 당해 분야의 숙련자들이라면 본 발명에서 기술된 것외에도 전술된 기술 내용으로부터 본 발명을 다양하게 변형시킬 수 있음을 명백히 알 것이다. 이러한 변형 또한 첨부된 청구의 범위의 범주에 드는 것으로 간주된다.The invention described and claimed herein is not limited to the specific embodiments disclosed herein, because these embodiments illustrate several aspects of the invention. Any equivalent embodiment would fall within the scope of the present invention. Indeed, it will be apparent to those skilled in the art that various modifications may be made to the present invention from the foregoing description, in addition to those described herein. Such modifications are also considered to be within the scope of the appended claims.

Claims (21)

a. 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1(Phytophthora infestans races 0 and 1)에 내성을 갖는 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움(Phytophthora infestans) 식물을 제공하는 단계;a. Providing a lycophericone pimfinellifolium plant that is resistant to the tomato bacterium Phytophthora infestans races 0 and 1; b. 상기 a단계에서 얻어진 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움(Lycopersicon pimpinellifolium) 식물을 라이코페르시콘 에스쿨렌툼(Lycopersicon esculentum) 식물과 교잡시키는 단계;b. Hybridizing the Lycopersicon pimpinellifolium plant obtained in step a with the Lycopersicon esculentum plant; c. 상기 b단계에서 얻어진 교잡 식물로부터 종자를 수거하는 단계;c. Collecting seeds from the hybrid plants obtained in step b; d. 상기 종자를 식물에 재생시키는 단계;d. Regenerating the seed on a plant; e. 상기 d단계의 식물을 그의 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 평가하는 단계; 및e. Evaluating the d plant for resistance to phytophthora infestans 0 and 1; And f. 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계f. Identifying and selecting plants resistant to phytophthora infestans 0 and 1 를 포함하는, 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 제조하는 방법.A method of producing a tomato plant having resistance to the tomato bacteria, phytophthora infestans 0 and 1 comprising. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, f단계에서 선별된 식물을 목적하는 표현형 형질을 갖는 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 여교잡(backcross)시키는 단계; 여교잡 식물로부터 종자를 수거하는 단계; 상기 종자를 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 것으로 평가된 식물에 재생시키는 단계; 및 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계를 추가로 포함하는 방법.backcrossing the plant selected in step f with a lycopperic esculentum plant having the desired phenotypic trait; Harvesting seeds from the hybrid plants; Regenerating the seed to plants evaluated to be resistant to the tomato bacterium Phytophthora infestans 0 and 1; And identifying and selecting plants that are resistant to phytophthora infestans 0 and 1. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 1에서 5까지의 하기 질병 등급 기준을 사용하여 식물을 평가하는 방법:How plants are evaluated using the following disease grade criteria from 1 to 5: 1: 잎에 병소가 없거나 작음1: no leaves on the leaves or small 2: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있음2: no leaf on the leaf, small leaf lesion enlarged, small leaf lesion (2 mm diameter) on leaf tip 3: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었음3: leaf no lesion or small, leaf lesion enlarged, leaf lesion small lesion (diameter 2mm), leaf lesion enlarged 4: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있음4: no or small on the leaf, enlarged leaf lesion, small on the pacifier (diameter 2mm), enlarged on the pacifier, small on the stem (2mm diameter) 5: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 줄기 또는 죽은 식물에 병소가 확대되었음.5: no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions (2 mm in diameter) on leafstalks, enlarged lesions on scapes, small lesions (2 mm in diameter) on stems, enlarged lesions on stems or dead plants It was. 제 1 항에 있어서,The method of claim 1, 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물이 LA 2533인 방법.The method of lycopperic pim finellifoliium plants is LA 2533. 제 4 항에 있어서,The method of claim 4, wherein 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물이 ATCC 기탁 번호 97382를 갖는 LA 2533인 방법.The lycophericum pimpinifolium plant is LA 2533 with ATCC Accession No. 97382. a. ATCC 기탁 번호 97382를 갖는 LA 2533으로 표시된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 교잡시키는 단계;a. Hybridizing the lycophericone pimpinifolium plant, designated LA 2533 with ATCC Accession No. 97382, with the lycophericon esculentum plant; b. 상기 a단계에서 얻은 교잡 식물로부터 종자를 수거하는 단계;b. Collecting seeds from the hybrid plants obtained in step a; c. 상기 종자를 식물에 재생시키는 단계;c. Regenerating the seed on a plant; d. 상기 c단계의 식물을 그의 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 평가하는 단계; 및d. Evaluating the plant of step c for its phytoptophera infestans 0 and 1; And e. 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계e. Identifying and selecting plants resistant to phytophthora infestans 0 and 1 를 포함하는, 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 제조하는 방법.A method of producing a tomato plant having resistance to the tomato bacteria, phytophthora infestans 0 and 1 comprising. 제 5 항에 있어서,The method of claim 5, e단계에서 선별된 식물을 목적하는 표현형 형질을 갖는 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 여교잡시키는 단계; 여교잡 식물로부터 종자를 수거하는 단계; 상기 종자를 식물에 재생시키고, 이 식물에 대해 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 평가하는 단계; 및 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계를 추가로 포함하는 방법.hybridizing the plant selected in step e with a lycopperic esculentum plant having a desired phenotypic trait; Harvesting seeds from the hybrid plants; Regenerating the seed on a plant and evaluating resistance to the tomato strain Phytophthora infestans 0 and 1 to the plant; And identifying and selecting plants that are resistant to phytophthora infestans 0 and 1. 제 6 항에 있어서,The method of claim 6, 1에서 5까지의 하기 질병 등급 기준을 사용하여 식물을 평가하는 방법:How plants are evaluated using the following disease grade criteria from 1 to 5: 1: 잎에 병소가 없거나 작음1: no leaves on the leaves or small 2: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있음2: no leaf on the leaf, small leaf lesion enlarged, small leaf lesion (2 mm diameter) on leaf tip 3: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었음3: leaf no lesion or small, leaf lesion enlarged, leaf lesion small lesion (diameter 2mm), leaf lesion enlarged 4: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있음4: no or small on the leaf, enlarged leaf lesion, small on the pacifier (diameter 2mm), enlarged on the pacifier, small on the stem (2mm diameter) 5: 잎에 병소가 없거나 작으며 잎 병소가 확대되었고, 잎꼭지에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 잎꼭지에 병소가 확대되었고, 줄기에 작은 병소(직경 2mm)가 있으며 줄기 또는 죽은 식물에 병소가 확대되었음.5: no or small lesions on the leaves, enlarged leaf lesions, small lesions (2 mm in diameter) on leafstalks, enlarged lesions on scapes, small lesions (2 mm in diameter) on stems, enlarged lesions on stems or dead plants It was. a. 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물로부터 나온 원형질체(protoplast)와 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물로부터 나온 원형질체를 융합시키는 단계;a. Fusing the protoplasts from the lycoppericcon pimpinifolium plant resistant to the tomato bacterium phytoptotora infestans 0 and 1 with the protoplasts from the lycoppericcone esculentum plant; b. 이렇게 얻어진 동종 이계 세포를 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1의 토마토 균주에 대해 내성이 있는 것으로 평가된 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물내로 재생시키는 단계;b. Regenerating the allogeneic cells thus obtained into lycoppercone esculentum plants that were evaluated to be resistant to tomato strains of Phytophthora infestans 0 and 1; c. 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계c. Identifying and selecting plants resistant to phytophthora infestans 0 and 1 를 포함하는, 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 토마토 식물을 제조하는 방법.A method for producing a tomato plant having resistance to phytoptotora infestans 0 and 1, comprising. 제 9 항에 있어서,The method of claim 9, 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움이 LA 2533인 방법.The lycophericone pimfinellipoliium is LA 2533. 제 10 항에 있어서,The method of claim 10, 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물이 ATCC 기탁 번호 97382를 갖는 LA 2533인 방법.The lycophericum pimpinifolium plant is LA 2533 with ATCC Accession No. 97382. 제 1 항, 제 6 항 또는 제 9 항의 방법에 의해 제조된, 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물.A tomato plant which is resistant to the phytophthora infestans 0 and 1, which is a tomato bacterium, produced by the method of claim 1, 6 or 9. 제 12 항의 식물에 의해 생산된 종자.Seed produced by the plant of claim 12. 제 1 항, 제 6 항 또는 제 9 항의 방법에 의해 제조된, 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 대립유전자를 함유하는 토마토 식물.A tomato plant containing alleles resistant to the phytophthora infestans 0 and 1, which are tomato bacteria, prepared by the method according to claim 1, 6 or 9. 제 14 항의 식물에 의해 생산된 종자.Seed produced by the plant of claim 14. a. 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 제공하는 단계;a. Providing a lycoppericcon pimpinelliporium plant resistant to the tomato strain Phytophthora infestans 0 and 1; b. 상기 a단계에서 얻어진 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 교잡시키는 단계;b. Hybridizing the lycoppericcon pimfinellifolium plant obtained in step a with the lycoppericcone esculentum plant; c. 상기 b단계에서 얻어진 교잡 식물로부터 종자를 수거하는 단계;c. Collecting seeds from the hybrid plants obtained in step b; d. 상기 종자를 식물에 재생시키는 단계;d. Regenerating the seed on a plant; e. 상기 d단계의 식물을 그의 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대한 내성을 평가하는 단계;e. Evaluating the plant of step d for its resistance to phytophthora infestans 0 and 1; f. 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계;f. Identifying and selecting plants resistant to phytophthora infestans 0 and 1; g. f단계의 식물을 목적하는 표현형 형질을 갖는 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 여교잡시키는 단계; 및g. f) hybridizing the plant of step f with a lycopericone esculentum plant having a desired phenotypic trait; And h. g단계의 교잡 식물로부터 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 생산하는 종자를 수거하는 단계h. collecting seeds from g stage hybrid plants to produce tomato plants resistant to the tomato bacterium Phytophthora infestans 0 and 1 를 포함하는 방법에 의해 생산된, 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물.Produced by the method comprising, tomato plants having resistance to phytoptotora infestans 0 and 1. a. 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 라이코페르시콘 핌피네릴리폴륨 식물로부터 나온 원형질체와 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물로부터 나온 원형질체를 융합시키는 단계;a. Fusing the protoplasts from the lycophericone pimpinelifolium plant resistant to the tomato bacterium phytoptotora infestans 0 and 1 and the protoplasts from the lycopericone esculentum plant; b. 이렇게 얻어진 동종 이계 세포를 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 것으로 평가된 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물내로 재생시키는 단계;b. Regenerating the allogeneic cells thus obtained into lycopperic cone esculentum plants evaluated to be resistant to the tomato bacterium Phytophthora infestans 0 and 1; c. 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계c. Identifying and selecting plants resistant to phytophthora infestans 0 and 1 를 포함하는 방법에 의해 제조된, 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 토마토 식물.Tomato plants produced by the method comprising a resistance to phytoptotora infestans 0 and 1. a. 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 제공하는 단계;a. Providing a lycoppericcon pimpinelliporium plant resistant to the tomato strain Phytophthora infestans 0 and 1; b. a단계에서 제공된 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움을 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 교잡시키는 단계; 및b. hybridizing the lycoppericcon pimfinellifolium provided in step a with the lycoppericcone esculentum plant; And c. b단계에서 생산된 교잡 식물로부터 종자를 수거하여 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 생산하는 단계c. collecting seeds from the hybrid plants produced in step b to produce tomato plants resistant to the tomato bacteria Phytoptotora infestans 0 and 1 로 이루어진, 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 생성시키는 종자를 제조하는 방법.Method for producing a seed to produce a tomato plant resistant to the tomato bacterium Phytophthora infestans 0 and 1. a. 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 제공하는 단계;a. Providing a lycoppericcon pimpinelliporium plant resistant to the tomato strain Phytophthora infestans 0 and 1; b. 상기 a단계에서 얻어진 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물을 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 교잡시키는 단계;b. Hybridizing the lycoppericcon pimfinellifolium plant obtained in step a with the lycoppericcone esculentum plant; c. 상기 b단계에서 얻어진 교잡 식물로부터 종자를 수거하는 단계;c. Collecting seeds from the hybrid plants obtained in step b; d. 상기 종자를 식물에 재생시키는 단계;d. Regenerating the seed on a plant; e. 상기 d단계의 식물을 그의 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 평가하는 단계;e. Evaluating the d plant for resistance to phytophthora infestans 0 and 1; f. 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 대해 내성을 갖는 식물을 동정하고 선별하는 단계;f. Identifying and selecting plants resistant to phytophthora infestans 0 and 1; g. f단계의 식물을 목적하는 표현형 형질을 갖는 라이코페르시콘 에스쿨렌툼 식물과 여교잡시키는 단계; 및g. f) hybridizing the plant of step f with a lycopericone esculentum plant having a desired phenotypic trait; And h. g단계의 교잡 식물로부터 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 생산하는 종자를 수거하는 단계h. collecting seeds from g stage hybrid plants to produce tomato plants resistant to the tomato bacterium Phytophthora infestans 0 and 1 를 포함하는, 토마토균인 파이토프토라 인페스탄스 0 및 1에 내성을 갖는 토마토 식물을 생산하는 종자를 제조하는 방법.A method of producing a seed for producing a tomato plant resistant to the tomato bacteria phytophthora infestans 0 and 1 comprising. 제 16 항 내지 제 19 항중 어느 한 항에 있어서,The method according to any one of claims 16 to 19, 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물이 LA 2533인 방법.The method of lycopperic pim finellifoliium plants is LA 2533. 제 20 항에 있어서,The method of claim 20, 라이코페르시콘 핌피넬리폴리움 식물이 ATCC 기탁 번호 97382인 LA 2533인 방법.The method of lycopperic pim finellifoliium plants is LA 2533 with ATCC accession number 97382.
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