KR20000000375A - Anticancer activities of chinese cabbage Kimchi and process for preparation thereof - Google Patents

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KR20000000375A
KR20000000375A KR1019990044936A KR19990044936A KR20000000375A KR 20000000375 A KR20000000375 A KR 20000000375A KR 1019990044936 A KR1019990044936 A KR 1019990044936A KR 19990044936 A KR19990044936 A KR 19990044936A KR 20000000375 A KR20000000375 A KR 20000000375A
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박건영
이숙희
조은주
김주연
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박건영
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Abstract

PURPOSE: A cabbage Kimchi of an anti-cancer function and a production method thereof are provided to show the anti-cancer function not only in the in vitro but also in the in vivo, and that is excellent in the preservation. CONSTITUTION: A cabbage Kimchi of the anti-cancer function comprises: radish 13.0%; leek 2.0%; powder of red pepper 7%; garlic 2.8%; ginger 0.6%; salted anchovies 2.2%; sugar 1.0%; refined salt 2.5%; leaf mustard 5% mixed in salted cabbage 100; fermented the first in 15°C; re-fermented in a low temperature of 5°C to pH4.3.

Description

항암 기능성 배추김치 및 그 제조방법{Anticancer activities of chinese cabbage Kimchi and process for preparation thereof} Anticancer functional Kimchi, and a method of manufacturing {Anticancer activities of chinese cabbage Kimchi and process for preparation thereof}

본 발명은 항암 기능성 배추김치 및 그 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to an anticancer functional Kimchi, and a method of manufacturing the same. 더욱 상세하게는, 배추김치를 제조함에 있어서, 고춧가루, 마늘, 갓, 초피와 같은 재료의 배합비를 조절하여 배추김치의 항암 기능성을 증진시킨 항암 기능성 배추김치 및 그 제조방법에 관한 것이다. More specifically, in preparing the cabbage, to a hot pepper powder, garlic, mustard, controlling the blending ratio of the materials, such as Chopi to which promote cancer functionality of Kimchi anticancer functional Kimchi, and a method of manufacturing the same.

현대는 음식마다 건강증진 기능이 있음이 밝혀지고 있어 각각의 음식재료 수급, 처리, 발효 기술 등의 연구가 활발히 이루어 지고 있다. Hyundai has been made it is found that the health-promoting functional foods whenever actively studies of each of the food supply, processing and fermentation technology. 특히 김치는 우리 식단에서 빠지지 않는 음식으로 많은 연구가 이루어져 있다. In particular kimchi is made up of a number of studies that do not fall into the food in our diet. 예를 들면 부재료를 첨가한 김치제조에 관한 연구는 키토산올리고당 첨가에 의한 김치의 숙성 및 보존기간 연장방법(대한민국 공개특허 98-019544), 키틴과 구운소금을 함유하는 김치양념조성물(대한민국 공개특허 96-13238), 인삼이 첨가된 배추김치의 제법(대한민국 공개특허 96-13237), 인삼김치 제조방법(대한민국 공개특허 98-025327), 해초김치의 제조방법(대한민국 공개특허 97-58579), 버섯김치 제조방법(대한민국 공개특허 97-032465) 등이 알려져 있으나 이들 공지 기술들은 보존기간의 연장에 관한 것과 기존에 기능성이 있다고 알려진 부재료를 미량 첨가한 것이다. For example, studies on kimchi manufacturing method is added to the sub material extending aging and shelf life of kimchi by adding chitosan oligosaccharide (Republic of Korea Laid-Open Patent Publication 98-019544), kimchi seasoning compositions containing chitin and baked salt (Republic of Korea Patent Publication 96 -13238), preparation (Republic of Korea disclosure of ginseng is added kimchi Patent 96-13237), ginseng, kimchi preparation (Republic of Korea Patent Publication 98-025327), a method of seaweed, kimchi (Republic of Korea Patent Publication 97-58579), sauerkraut with mushrooms such as the production method (Republic of Korea Laid-Open Patent Publication 97-032465), known but these known techniques is the addition of a very small amount, known as sub material that is functional in the existing on the extension of the preservation period.

김치는 발효식품으로 김치의 발효기술은 전통적으로 주부들에 의해 전해져왔으나 최근에는 산업화가 추진되어 공장김치의 사용도가 증가하고 있다. Kimchi is a fermented kimchi fermentation technology has traditionally wateuna handed down by housewives recently been promoted industrialization has increased the use of sauerkraut factory also. 이러한 산업화와 함께 김치의 다양화 및 기능성이 강조되고 있으나 지금까지 항암 기능성이 있는 김치는 항암효과를 갖는 재료를 단순히 김치에 첨가하는 것으로 그 효과를 얻으려고 하는 연구가 주로 이루어 졌으며 김치제조시에 첨가되는 재료의 함량을 조절하여 항암 기능성이 있는 김치를 제조하는 기술에 관한 연구는 발표된 바 없다. With this industrialization is diversified and functionality of Kimchi is emphasized but Kimchi with cancer functionality until now, studies that try to get the effect that the addition of a material having an anticancer effect simply kimchi was mainly achieved added at the time of Kimchi by controlling the amount of material study on the technology of preparing kimchi with cancer functionality that is not been published.

본 발명자는 상기와 같은 문제점을 해결하고자 재료의 종류와 그 배합비 및 발효조건에 따라 여러 종류의 배추김치를 제조한 후 이들 배추김치의 항암 기능성을 in vitro에서 뿐만 아니라 in vivo에서 조사하여 가장 우수한 항암 효과가 있는 배추김치의 배합비와 발효조건을 조사하므로써 본 발명을 완성하였다. The present inventors best investigated were prepared several kinds of kimchi depending on the material type and the blend ratio and the fermentation conditions in order to solve the above problems anticancer functionality of these Chinese cabbage kimchi, as well as in vitro and in in vivo anti-cancer by investigating the mixing ratio and the fermentation conditions of the kimchi in the effect and it completed the present invention.

따라서 본 발명의 목적은 표준화 배추김치에 부재료를 적정비율로 혼합한 후 특정 조건에서 발효시킴으로써 항암 기능성을 나타내는 배추김치를 제공함에 있다. It is therefore an object of the present invention to provide a cabbage showing a functional to provide anti-cancer by fermentation, under certain conditions, then a solution of the sub material standardization cabbage an appropriate ratio. 본 발명의 다른 목적은 상기 항암 기능성 배추김치의 제조방법을 제공함에 있다. Another object of the present invention to provide a method for producing the anti-cancer functional Kimchi. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 항암 기능성 배추김치를 함유하는 식이를 제공함에 있다. It is another object of the present invention to provide a diet containing the anticancer functional Kimchi.

본 발명의 상기 목적은 표준화 배추김치를 기준으로 고춧가루, 마늘, 갓, 청각, 초피, 계피가루, 인삼가루, 키토산 올리고당, 알긴산, 첨차분말의 양을 달리하여 담근 김치와 유기배추김치를 pH 4.3이 될 때까지 여러 방법으로 발효시켜 배추김치즙액의 항암효과, 항돌연변이 효과를 조사하고 발효시킨 배추김치로부터 얻은 메탄올 추출물의 항암효과를 in vitro에서 조사하였다. The above object of the present invention is red pepper powder, garlic, freshly, hearing, Chopi, cinnamon powder, ginseng powder, chitosan oligosaccharide, alginic acid, persimmons and organic cabbage dipped by varying the amount of cheomcha powder pH 4.3, based on the standardized Kimchi by fermentation in a variety of ways until the anti-cancer effect of the methanol extract obtained from the anti-cancer effect, which examine the antimutagenic effect is fermented Kimchi juice of cabbage was investigated in the in vitro. 이어서 유기농으로 재배한 재료를 사용하고 표준화김치의 재료배합비에 고춧가루, 마늘, 갓, 초피를 더 첨가한 배추김치를 제조한 후 이 배추김치의 암예방효과와 항암효과를 역시 in vitro에서 조사하고 in vivo에서 상기 유기농으로 재배한 재료로 제조한 배추김치의 항암효과와 면역활성 증강효과 및 마우스 대식세포의 산화질소 생성에 미치는 영향을 조사하였다. Then use the material grown organically and investigating cancer effects and anti-cancer effects of kimchi was prepared the chili powder, garlic, mustard, cabbage one more added Chopi a material proportion of standardized Kimchi also in in vitro and in in vivo it was investigated anti-cancer effect and immune activity enhancing effect, and nitric oxide production in mouse macrophages of a cabbage made of the material grown in the organic. 나아가, 상기 유기농 재료로 제조한 배추김치를 적당량 함유하는 식이를 마우스에 급여한 후 역시 항암효과와 면역증강효과를 조사하였고 상기 유기농 배추김치의 메탄올 추출물을 마우스에 피하주사한 후 폐에 전이력이 있는 종양세포주를 마우스 꼬리에 주사한 다음 종양전이 억제효과를 조사하므로써 달성하였다. Furthermore, the previous history in later fed diets that amount containing the Kimchi made of the organic material in the mouse also after the anti-cancer effect and immune enhancement was investigated the effect to avoid the methanol extract of the organic cabbage kimchi in mice injected waste the tumor cell line was injected to the mouse tail, and then was achieved by irradiation of the tumor metastasis inhibitory effect.

이하, 본 발명의 구성 및 작용을 설명한다. Hereinafter, the construction and operation of the present invention.

도 1은 본 발명 배추김치 추출물로 처리된 마우스의 복강내 대식세포에서 생성된 아질산염(nitrate ion) 이온의 농도로 측정된 산화질소(nitric oxide; NO)를 나타낸다. Figure 1 is a nitrite (nitrate ion) the nitrogen oxide measuring the concentration of ions generated by the present invention cabbage extract the peritoneal macrophages of the mice treated with; represents a (nitric oxide NO).

도 2는 sarcoma-180 세포로 처리된 마우스 간내 글루타치온 S-트랜스퍼라아제(glutathione-S-transferase:GST) 활성에 미치는 본 발명 항암 기능성 배추김치 메탄올 추출물의 영향을 나타낸다. Figure 2 is a mouse hepatic glutathione S- transferase dehydratase (glutathione-S-transferase: GST) treatment in sarcoma-180 cell shows the effect of the present invention anticancer functional Kimchi methanol extract on the activity.

도 3은 sarcoma-180 세포로 처리된 마우스 간내 글루타치온(glutathione :GSH) 함량에 미치는 본 발명 항암 기능성 배추김치 메탄올 추출물의 영향을 나타낸다. Figure 3 is a mouse hepatic glutathione treatment in sarcoma-180 cells: shows the effect of the present invention anticancer functional Kimchi methanol extract on (glutathione GSH) content.

도 4는 sarcoma-180 세포로 처리된 마우스 간내 산화지질(lipid peroxide)의 함량에 미치는 본 발명 항암 기능성 배추김치 메탄올 추출물의 영향을 나타낸다. Figure 4 shows the effect of the present invention anticancer functional Kimchi methanol extract on the content of the mouse hepatic lipid oxidation treated with sarcoma-180 cells (lipid peroxide).

도 5는 마우스 비장 임파구의 자연살해세포(natural killer cell) 활성에 미치는 본 발명 항암 기능성 배추김치 메탄올 추출물의 영향을 나타낸다. Figure 5 shows the effect of the present invention anticancer functional Kimchi methanol extract on NK cells (natural killer cell) activity of mouse spleen lymphocytes.

도 6은 마우스 비장 임파구의 자연살해세포 활성에 미치는 본 발명 배추김치 함유 식이의 영향을 나타낸다. Figure 6 shows the effects of the invention diet on cabbage containing NK cell activity of mouse spleen lymphocytes.

도 7은 본 발명 항암 기능성 배추김치의 소핵유발억제효과를 표준화 배추김치와 비교하여 나타낸 그래프이다. 7 is a graph showing in comparison the inhibition effects of the present invention induce micronucleus anticancer functional cabbage kimchi and standardization.

표준화 배추김치에 항암 기능성 효과가 있는 구운소금, 고춧가루, 마늘, 갓, 청각, 초피, 계피, 인삼, 키토산 올리고당, 알긴산나트륨, 첨차분말 등의 부재료를 각각 다른 양으로 첨가하여 13종의 배추김치를 제조하는 단계; Baked with anticancer functional effect on standardized cabbage salt, pepper, garlic, mustard, hearing, Chopi, cinnamon, ginseng, chitosan oligosaccharide, sodium alginate, cheomcha powder such as sub material for each 13 kinds of kimchi by adding a different amount of a step of producing; 본 발명 항암효과 실험에 사용할 AGS 인체 위암세포(human adenocarcinoma cell), HT-29 인체 결장암 세포(human colon adenocarcinoma cell), MG-63 인체 골육암세포(human osteosarcoma cell)를 배양하여 준비하는 단계; A step of preparing cultured human stomach cancer cells AGS (human adenocarcinoma cell), HT-29 human colon carcinoma cells (human colon adenocarcinoma cell), MG-63 human golyuk cancer cells (human osteosarcoma cell) used in the present invention anti-cancer effect test; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 13종의 배추김치가 각각 다른 발효온도에서 김치의 최종 적숙기인 pH 4.3까지 도달하는데 걸리는 시간(보존성 비교)을 비교하는 단계; Step of the 13 kinds of Chinese cabbage kimchi manufactured by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage compares the time (storage stability compared) takes to reach a final maturity of pH 4.3 of kimchi fermentation temperature in each other; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 13종의 배추김치를 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때까지 다시 발효시켜 얻은 배추김치 즙액의 인체위암세포와 인체 결장암 세포에 대한 생존저해 효과를 MTT assay로 비교분석하는 단계; 1 days after the fermentation above the body of the Kimchi juice obtained by re-fermentation until a pH 4.3 at 5 ℃ cancer cells and human colon carcinoma the 13 kinds of Chinese cabbage kimchi manufactured by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage at 15 ℃ comparing the survival analysis inhibitory effect on cells by MTT assay; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 13종의 배추김치를 15℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 배추김치 즙액의 인체 위암세포와 인체 결장암 세포에 대한 생존저해효과를 MTT assay로 비교분석하는 단계; The survival inhibitory effect on that Kimchi juice human stomach cancer cells and human cancer cells in the fermentation until the pH 4.3 the 13 kinds of Chinese cabbage kimchi manufactured by varying the amount and type of the sub material at 15 ℃ standardization Kimchi by MTT assay Comparative analysis method comprising; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 배추김치 13종을 25℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시켜 얻은 배추김치 즙액의 인체 위암세포와 인체 결장암 세포에 대한 생존저해효과를 MTT assay로 비교분석하는 단계; The viability inhibition effect for a Kimchi 13 kinds of manufacture by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage in 25 ℃ Kimchi juice human stomach cancer cells and human colon cancer cells obtained by fermentation until a pH 4.3 in a MTT assay Comparative analysis method comprising; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 배추김치 13종으로부터 얻은 메탄올 추출물의 항돌연변이 효과를 Salmonella typhimurium TA100 균주를 사용한 Ames test에 의해 조사하는 단계; Irradiating by the antimutagenic effect of the methanol extract obtained from the 13 kinds of Chinese cabbage kimchi manufactured by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage the Ames test using Salmonella typhimurium TA100 strain; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 배추김치 13종으로부터 얻은 메탄올 추출물의 항돌연변이 효과를 SOS 크로모테스트(SOS chromotest)에 의해 다시 한번 확인하는 단계; Confirming once again by the antimutagenic effect of the methanol extract obtained from the 13 kinds of Chinese cabbage kimchi manufactured by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage in SOS chromotherapy test (SOS chromotest); 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 배추김치 13종으로부터 얻은 메탄올 추출물의 AGS 인체 위암세포, HT-29 인체 결장암세포, HL-60 인체 혈액암 세포 및 MG-63 인체 골육암 세포의 생존 저해효과를 조사하는 설포로다민 B 분석법(sulforhodamine B assay)으로 비교하는 단계; The methanol extracts obtained from a Kimchi 13 kinds of manufacture by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage AGS of the body above the cancer cells, HT-29 human colon cancer cells, HL-60 human leukemia cells and MG-63 human golyuk cancer cells comparing the set captive damin B assay (sulforhodamine B assay) to examine the inhibitory effect of survival; 표준화 배추김치에 부재료의 양과 종류를 달리하여 제조한 배추김치 13종으로부터 얻은 메탄올 추출물의 AGS 인체 위암세포, HT-29 인체 결장암세포, HL-60 인체 혈액암 세포 및 MG-63 인체 골육암 세포의 생존 저해효과를 MTT 분석법으로 조사하는 단계; The methanol extracts obtained from a Kimchi 13 kinds of manufacture by varying the amount and type of the sub material standardization cabbage AGS of the body above the cancer cells, HT-29 human colon cancer cells, HL-60 human leukemia cells and MG-63 human golyuk cancer cells irradiating the viability inhibition effect by MTT assay; AGS 인체 위암세포와 HT-29 인체 결장암세포를 플레이트에 부착시킨 후 발효시킨 배추김치 메탄올 추출물을 시료로 첨가하고 배양한 후 증식된 세포의 수를 측정하여 암세포 성장억제효과를 조사하는 단계; AGS irradiating the human stomach cancer cells and HT-29 human colon carcinoma cells was attached to the plate after the addition of the fermented Kimchi methanol extracts used as the sample, and after incubation by measuring the number of proliferated cells Cytotoxic Effects; 표준화 배추김치, 유기농으로 재배한 재료를 이용한 유기농 표준화 배추김치, 일반재료를 사용하고 상기 항암 기능성 조사 실험에 의해 얻어진 결과를 바탕으로 고춧가루, 마늘, 갓, 초피를 첨가한 일반 고활성 배추김치, 유기배추에 고춧가루, 마늘, 갓, 초피를 첨가한 유기 고활성 배추김치를 각각 제조하여 발효 및 동결건조시킨 후 메탄올 추출하여 추출물을 얻는 단계; Standardization cabbage, using the ingredients organically grown organic standardization cabbage, and use a common material and the addition of red pepper powder, garlic, mustard, Chopi based on the results obtained by the anti-cancer functional research experiment general high activity cabbage, organic after the high to the Chinese cabbage it was added to the organic red pepper powder, garlic, mustard, Chopi each producing the active Kimchi fermented and lyophilized to obtain the extract, methanol extract; 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치의 메탄올 추출물을 마우스에 경구투여하고 소핵억제 효과를 관찰하여 암예방증진효과를 조사하는 단계; Administering orally to said standardized cabbage, Chinese cabbage kimchi organic standardized, general activity and Kimchi, organic and mouse methanol extract of the active cabbage and by observing the inhibiting effect micronucleus investigating cancer promoting effects; 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치로부터 얻은 메탄올 추출물의 AGS 인체 위암세포 저해효과를 MTT 분석법으로 조사하는 단계; Irradiating the standardization cabbage, Chinese cabbage kimchi organic standardized, general activity and Kimchi, AGS human stomach cancer cells inhibited the organic and the methanol extract was obtained from the active cabbage effect by MTT assay; dye exclusion method을 이용하여 in vitro에서 생존시험을 행하여 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치의 메탄올 추출물의 세포독성 실험을 행하는 단계; Step using the dye exclusion method is performed in vitro survival test carried out in a cytotoxicity test of the standardized cabbage, Chinese cabbage kimchi organic standardized, general and methanol extract of the active cabbage, Chinese cabbage kimchi organic high activity; 웅성 Balb/c 마우스의 복강내에 sarcoma-180 세포 1.0 × 10 6 cell/mL의 종양세포 부유액을 이식하고 20일간 복강으로 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치로부터 얻은 메탄올 추출물 시료를 투여하고 시간경과에 따른 생존여부를 관찰하여 수명연장효과를 관찰하고 각 장기들의 체중변화를 조사하는 단계; Male Balb / c into the abdominal cavity of mouse sarcoma-180 cells, 1.0 × 10 6 cell / implant mL suspension of tumor cells, and the standardization cabbage in 20 days intraperitoneally, organic standardization cabbage, general high activity cabbage, organic high activity cabbage administration of the methanol extract sample obtained from Kimchi, and by observing the survival over time observed life extension effect and irradiating the weight change of the respective organ; 종양세포 부유액을 마우스에 피하이식한 후 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치의 메탄올 추출물 시료를 복강으로 투여한 후 생성된 고형암을 적출하고 그 무게를 측정하는 단계; After the suspension, tumor cells were subcutaneously transplanted to the mouse excision the standardization cabbage, organic standardization cabbage, general high activity Kimchi, the resulting solid tumor and then the organic and administration of the methanol extract of the sample of active cabbage into the abdominal cavity and the weight measuring; 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치의 메탄올 추출물이 투여된 마우스간내 글루타치온-S-트랜스퍼라아제 (glutathione-S-transferase;GST) 활성 및 글루타치온(glutathione:GSH) 함량변화를 조사하는 단계; The standardization cabbage, Chinese cabbage kimchi organic standardized, general high activity cabbage, Chinese cabbage organic high activity of mouse hepatic glutathione methanol extract is administered in the kimchi -S- transferase dehydratase (glutathione-S-transferase; GST) activity and glutathione (glutathione : GSH) irradiating the content changes; 종양세포와 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치의 메탄올 추출물을 투여한 마우스의 비장에서 NK세포를 분리하여, 이들의 Yac-1 세포에 대한 세포파괴활성(target cell cytolysis %)을 측정하는 단계; Tumor cells and the standardization cabbage, organic standardization cabbage, general high activity cabbage, by NK cells isolated from the spleen of an organic and treated with the methanol extract of the active cabbage mouse, cell death for those of Yac-1 cells and measuring the activity (target cell cytolysis%); 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치 메탄올 추출물을 마우스 구강으로 3주 동안 투여한 후 복강내 대식세포를 분리하여 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide)를 작용시켜 생성되는 산화질소(nitric oxide;NO)의 양을 측정하는 단계; After administration for 3 weeks, the standard Chinese cabbage kimchi, organic standardization cabbage, general high activity cabbage, organic high activity cabbage methanol extract of the mouse oral and separating within macrophages Peritoneal to react with lipopolysaccharide (lipopolysaccharide) measuring an amount of; (NO nitric oxide) is produced nitric oxide; 상기 표준화 배추김치, 유기농 표준화 배추김치, 일반 고활성 배추김치, 유기 고활성 배추김치를 함유하는 식이를 급여한 마우스의 서혜부에 sarcoma-180 세포를 주사하고 계속해서 상기 식이를 공급한 후 고형암 성장저지와 자연살해세포의 활성을 조사하는 단계 및; After the groin of the standardized cabbage, organic standardization cabbage, general high activity cabbage, mice fed a diet containing an organic high activity cabbage injected with sarcoma-180 cells and continued to feed the dietary solid tumor growth inhibition steps to investigate the activity of natural killer cells, and; 배추김치 메탄올추출물을 피하주사하고, 2일 후에 Balb/c 마우스의 꼬리에 고전이성 종양세포주인 colon 26-M3.1 carcinoma를 정맥주사한 다음 14일 후에 종양의 표적기관인 폐를 적출하여 종양전이 억제효과를 조사하는 단계로 구성된다. Subcutaneous injection of cabbage methanol extract, and 2 days after the Balb / c classic the tail of the mouse tumor cell line reason of colon 26-M3.1 carcinoma by the intravenous injection, and then the target organ by excision of lung tumor 14 days after tumor metastasis inhibition It consists of the step of examining the effect.

본 발명에서 표준화 배추김치는 부산대학교 식품영양학과의 조은주, 이선미, 이숙희, 박건영이 배추김치의 재료배합비에 따른 관능적 검사와 이화학적 검사를 통해 표준화한 배추김치 레시피이며 1998년 6월에 한국식품과학회지(HSKCAN 39(2))에 배추김치의 표준화 연구로 발표한 바 있는 이상적인 배추김치배합비로 절인배추 100에 대해 무 13.0, 파 2.0, 고춧가루 3.5, 마늘 1.4, 생강 0.6, 멸치액젓 2.2, 설탕 1.0, 최종염 2.5을 함유하는 배추김치이다. Standardization cabbage in the present invention is kimchi recipes are standardized through a sensory test and physicochemical tests of the material proportion of joeunju, yiseonmi, yisukhui, bakgeonyoung the cabbage with Pusan ​​National University Department of Food and Nutrition, Korea Food in June 1998 and Journal (HSKCAN 39 (2)) for cabbage 100 marinated ideal cabbage mixing ratio which announced that a standardized research kimchi radish 13.0, par 2.0 chili powder 3.5 and garlic 1.4, ginger 0.6 anchovy Sauce 2.2 sugar 1.0 a Kimchi containing the final salt 2.5.

본 발명에서 사용한 세포주중 인체 위암세포(AGS human adenocarcinoma cell), 인체 결장암 세포(HT-29 human colon adenocarcinoma cell), HL-60 인체 혈액암세포(HL-60 human promyelocytic leukemia cell), MG-63 인체 골육암세포(MG-63 human osteosarcoma cell)는 한국 세포주 은행(서울의대)으로부터 분양받았으며 마우스의 sarcoma 180 세포는 본 실험실에서 보관중이다. Of the cell lines used in the present invention the body above the cancer cells (AGS human adenocarcinoma cell), human colon cancer cells (HT-29 human colon adenocarcinoma cell), HL-60 human blood cancer cells (HL-60 human promyelocytic leukemia cell), MG-63 human golyuk cancer cells (MG-63 human osteosarcoma cell) has received pre-sale from Korea cell Line bank (Seoul National University) sarcoma 180 cells of mice being kept in the laboratory. 또 사용한 고전이성 종양세포주인 Colon 26-M3.1 carcinoma는 한동대학 윤택준 박사로부터 분양받았고 사용한 동물인 Balb/c 마우스(female, 6주령)은 대전 소재 한국화학연구소에서 구입하였다. Another reason with classic tumor cell line Colon 26-M3.1 carcinoma is animal Balb / c mice with pre-sale received from Handong University Dr. yuntaekjun (female, 6 weeks old) were purchased from Daejeon Korea Research Institute of Chemical Technology.

본 발명에서 사용한 소금 시료는 시중에 판매되고 있는 정제과정을 거친 기계염 2종[NaCl 시약용(Junsei Chemical Co., Ltd)과 한주소금)]과 천일염 2종[(주)산내들에서 구입한 서해안 천일염, 생소금(주) 산내들] 그리고 가열처리 공정을 거친 가공염 3종[구운소금(주) 산내들. Salt samples used in the present invention are two kinds gigyeyeom subjected to purification, which is commercially available [for reagent NaCl (Junsei Chemical Co., Ltd) with one weeks salt) and two kinds of solar salt [(Note) the west solar salt purchased from sannaedeul , raw salt, Ltd sannaedeul] and rough gagongyeom three kinds of [roasted salt Co. sannaedeul the heating process. 생금(주)산내들, 죽염(개암죽염)을 각각 사용하였다. The saenggeum Co. sannaedeul, bamboo salt (hazelnuts bamboo salt) was used, respectively.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 들어 상세히 설명하고자 하지만 본 발명의 권리범위는 이들 실시예에만 한정되는 것은 아니다. Hereinafter it is described a specific method of the present invention in detail the example embodiments, but the scope of the present invention is not limited to these Examples.

실시예 1: 배추김치 13종 제조 Example 1 13 kinds of Chinese cabbage kimchi

배추는 배추무게의 2배에 해당하는 소금물(10%)에 10시간 절여 세 번 씻은 다음 2시간 물을 빼서 사용하였다. Chinese cabbage was used for the next two hours, remove the water 10 hours, washed three times pickled in brine (10%), which corresponds to twice the weight of Chinese cabbage. 표준화 배추김치를 기본으로 부재료의 종류와 양을 달리하여 13종류의 배추김치를 제조하였다. Unlike the type and amount of the sub material with a base to manufacture a standardized Kimchi 13 kinds of kimchi. 표준화 배추김치, 10.5% 고춧가루 첨가 김치, 5.2% 마늘 첨가 김치, 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가 김치, 5% 갓 첨가 김치, 5% 청각 첨가 김치, 1% 초피첨가 김치, 1% 계피가루 첨가 김치, 1% 인삼가루 첨가 김치, 1% 키토산 올리고당 첨가 김치, 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치, 1% 첨차분말 첨가 김치, 일반배추 대신 유기배추를 사용한 유기 배추김치를 담근 후 이들 김치를 가장 적숙기라 알려진 pH 4.3이 될 때까지 온도 처리를 다르게 하거나 15℃에서 1일간 발효시키고 5℃에서 발효시켜 즙액과 메탄올 추출물을 얻었다. Standardization cabbage, 10.5% pepper Kimchi, 5.2% garlic Kimchi, 7% red pepper powder + 2.8% garlic Kimchi, 5% of freshly added kimchi, 5% hearing Kimchi, 1% Chopi Kimchi, 1% of cinnamon powder Kimchi , 1% ginseng powder Kimchi, 1% chitosan oligosaccharide Kimchi, 1% sodium alginate was added sauerkraut, 1% cheomcha powdered Kimchi, after immersing the common cabbage instead of organic cabbage using organic cabbage known as the most appropriate maturity these kimchi Alternatively the processing temperature until the pH 4.3, or 1 days fermentation at 15 ℃ and fermented at 5 ℃ to obtain a juice and a methanol extract. 이때 본 실시예에서 사용한 소금은 시약용 NaCl, 기계염, 천일염, 생소금, 구운소금, 생금, 죽염중 어느 것을 사용하여도 무방하나 HT-29 인체 결장암 세포의 성장 저해효과가 가장 우수하고 암세포의 DNA 합성 저해효과가 가장 우수한 구운소금을 사용하였다. The salt used in this example is NaCl reagent, gigyeyeom, salt, raw salt, baked salt, saenggeum, mubang be any use that of bamboo salt one HT-29 human growth of colon cancer cells The inhibitory effect is most excellent, and the cancer cell DNA synthesis inhibitory effect was used as the best baked salt.

구운소금은 HT-인체결장암 세포에 처리하고 그 성장저해효과를 실험하면 표 1에 나타낸 바와 같이 시약용 NaCl이 26%, 기계염 19%, 천일염 33%, 생소금 31%, 구운소금 60%, 생금 57%, 죽염 50%의 저해를 보여 구운소금이 가장 높은 효과를 나타냈다. Baked salt HT- treatment in human cancer cells and that when this experiment the growth-inhibiting effect for the reagents NaCl 26% As shown in Table 1, gigyeyeom 19%, salt 33%, salt 31% raw, roasted salted 60%, saenggeum show a 57% inhibition of 50% bamboo salt roasted salt exhibited the highest effect. 또 HT-29 암세포를 이용한 DNA 합성 저해효과를 보면 표 2에 나타낸 바와 같이 10㎕/well의 농도에서 NaCl이 28%, 기계염 40%, 천일염 45%, 생소금 30%, 구운소금 82%, 생금 83%, 죽염 61%의 DNA 합성 저해효과를 보여 주었다.또한 구운소금은 다른 첨가농도에서도 높은 효과를 보였다. In looking at the DNA synthesis-inhibiting effect Using HT-29 cancer cells are 28% NaCl at a concentration of 10㎕ / well, as shown in Table 2, gigyeyeom 40%, salt 45%, salt 30% raw, roasted salted 82%, saenggeum 83%, showed a DNA synthesis-inhibiting effect of bamboo salt 61%. in addition, baked salt showed a high effect in different concentrations.

소금의 HT-29 인체 결장암 세포 성장저해 효과 HT-29 human colon cancer cell growth inhibitory effects of salt 웰당 농도 Concentration per well 1㎍ 1㎍ 5㎍ 5㎍ 10㎍ 10㎍ 20㎍ 20㎍ 시약용 NaCl NaCl Reagent 32±3(24) 1) 32 ± 3 (24) 1) 31±1(23) 31 ± 1 (23) 36±7(14) 36 ± 7 (14) 35±3(17) 35 ± 3 (17) 기계염 Gigyeyeom 34±6(19) 34 ± 6 (19) 34±6(19) 34 ± 6 (19) 30±6(29) 30 ± 6 (29) 40±7(5) 40 ± 7 (5) 천일염 Solar salt 35±1(17) 35 ± 1 (17) 28±4(33) 28 ± 4 (33) 26±1(38) 26 ± 1 (38) 30±6(29) 30 ± 6 (29) 생소금 Raw salt 34±4(19) 34 ± 4 (19) 29±11(31) 29 ± 11 (31) 30±1(29) 30 ± 1 (29) 30±4(29) 30 ± 4 (29) 구운소금 Salt-baked 32±5(24) 32 ± 5 (24) 17±3(60) 17 ± 3 (60) 18±5(57) 18 ± 5 (57) 12±7(71) 12 ± 7 (71) 생금 Saenggeum 20±0(52) 20 ± 0 (52) 18±7(57) 18 ± 7 (57) 15±7(64) 15 ± 7 (64) 13±5(69) 13 ± 5 (69) 죽염 Bamboo Salt 24±2(43) 24 ± 2 (43) 21±8(50) 21 ± 8 (50) 21±8(50) 21 ± 8 (50) 21±12(50) 21 ± 12 (50) [주] 단위: 세포수 × 10 4 /mL(1): 저해비율 NOTE Unit: number of cells × 10 4 / mL (1) : Inhibition Ratio

소금의 HT-29 인체 결장암 세포 DNA 합성 저해 효과 HT-29 human colon cancer cell DNA synthesis-inhibiting effect of the salt 웰당 농도 Concentration per well 1㎍ 1㎍ 5㎍ 5㎍ 10㎍ 10㎍ 20㎍ 20㎍ 시약용 NaCl NaCl Reagent 1.65±0.06(20) 1) 1.65 ± 0.06 (20) 1) 1.80±0.09(12) 1.80 ± 0.09 (12) 1.48±0.44(28) 1.48 ± 0.44 (28) 1.86±0.33(10) 1.86 ± 0.33 (10) 기계염 Gigyeyeom 2.00±0.67(3) 2.00 ± 0.67 (3) 1.82±0.29(12) 1.82 ± 0.29 (12) 1.22±0.17(40) 1.22 ± 0.17 (40) 2.17±0.04(-5) 2.17 ± 0.04 (-5) 천일염 Solar salt 2.03±0.96(1) 2.03 ± 0.96 (1) 0.89±0.12(8) 0.89 ± 0.12 (8) 1.13±0.23(45) 1.13 ± 0.23 (45) 1.82±0.02(12) 1.82 ± 0.02 (12) 생소금 Raw salt 1.91±0.17(7) 1.91 ± 0.17 (7) 1.81±0.17(12) 1.81 ± 0.17 (12) 1.44±0.23(30) 1.44 ± 0.23 (30) 1.55±0.31(25) 1.55 ± 0.31 (25) 구운소금 Salt-baked 2.08±0.51(1) 2.08 ± 0.51 (1) 1.40±0.19(32) 1.40 ± 0.19 (32) 0.37±0.08(82) 0.37 ± 0.08 (82) 0.42±0.02(79) 0.42 ± 0.02 (79) 생금 Saenggeum 1.92±0.68(7) 1.92 ± 0.68 (7) 1.38±0.05(33) 1.38 ± 0.05 (33) 0.35±0.10(83) 0.35 ± 0.10 (83) 0.30±0.01(85) 0.30 ± 0.01 (85) 죽염 Bamboo Salt 1.65±0.75(20) 1.65 ± 0.75 (20) 1.31±0.20(36) 1.31 ± 0.20 (36) 0.81±0.14(61) 0.81 ± 0.14 (61) 0.66±0.30(68) 0.66 ± 0.30 (68) [주] (1) 저해비율 [Note] (1) The inhibitory ratio

실시예 2: 암세포 배양 Example 2: cancer cells cultured

AGS 인체 위암세포와 HT-29 인체 결장암세포는 100units/mL의 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)과 10%의 FCS가 함유된 RPMI 1640을 사용하여 37℃, 5% CO 2 배양기에서 배양하였다. AGS human stomach cancer cells and HT-29 human colon carcinoma cells are penicillin 100units / mL - using RPMI 1640 containing of streptomycin (penicillin-streptomycin) and 10% FCS and cultured at 37 ℃, 5% CO 2 incubator. 배양한 각각의 암세포는 새로운 배지로 일주일에 2 ~ 3회 재공급(refeeding)하고 6 ~ 7일 만에 PBS로 세척한 후 0.05% 트립신-0.02% EDTA로 부착된 세포를 분리하여 원심분리한 후 집적된 암세포에 배지를 넣고 피펫으로 암세포가 골고루 분산되되도록 잘 혼합하여 75mL 세포 플라스크에 10mL씩 일정수 분할하여 주입하고 계속 6 ~ 7일 마다 계배배양하면서 실험에 사용하였다. Each of the cancer cells were cultured, after a week with fresh medium 2-3 times refeed (refeeding) and centrifuged to remove the cell attachment 6 to 7 man After washing with PBS 0.05% trypsin-EDTA on day -0.02% while putting the medium into an integrated cancer cells cultured cancer cells are well mixed to be uniformly dispersed into the pipette to a certain number divided by 10mL to 75mL flask to cell injection and continued every gyebae 6 to 7 were used in the experiments. 계대배양시 각각의 계대 수를 기록하였고 계대 수가 10회 이상일 때는 새로운 암세포를 액체질소 탱크로부터 꺼내어 다시 배양하여 실험하였다. The number of passage were recorded each passaged when the culture was tested by passage number of cultured tumor cells when taken out of the new ten times more than from the liquid nitrogen tank.

실시예 3: 발효온도에 따른 배추김치의 보존력 실험 및 배추김치 즙액의 in vitro 항암효과 Example 3: retention experiment, and cabbage in vitro antitumor activity of the cabbage juice according to fermentation temperature

실험예 1: 발효온도에 따른 배추김치의 보존력 실험 Experimental Example 1: Experiment of retention cabbage according to fermentation temperature

본 실험에서는 발효 온도에 따른 김치에 첨가물질에 따른 보존력 증진을 pH 4.3이 될 때 까지를 먼저 비교하였다. In this experiment, it was compared to the retention time enhancement of the additive material in accordance with the kimchi fermentation temperature to be pH 4.3 first. 표 3에 나타낸 바와 같이 표준화 배추김치에 비해 고춧가루를 3배(10.5%) 첨가한 김치는 발효가 서서히 진행되어 pH 4.3까지 도달하는데 걸리는 시간이 표준화 배추김치에 비해 길었다. Kimchi added pepper three times (10.5%) compared to the normalized cabbage as shown in Table 3 is the fermentation progresses gradually longer as compared to a standardized cabbage time to reach pH 4.3.

15℃에서 1일간 발효시키고 5℃에서 발효시킨 경우 pH 4.3에 도달하는데 걸린 시간은 표준화 배추김치는 15일인데 비해 고춧가루를 3배(10.5%) 첨가한 김치는 18일 걸렸다. At 15 ℃ 1 ilgan fermentation and in which case the time taken to reach a pH 4.3 is standardized cabbage 15 days inde kimchi was added three times (10.5%) of a red pepper powder compared to the fermentation at 5 ℃ took 18 days. 또 마늘을 3배(5.2%) 첨가한 김치도 표준화 김치에 비해 다소 천천히 발효가 일어남을 알 수 있었으며, 고춧가루와 마늘을 각각 2배씩 첨가한 김치는 발효속도가 표준화 배추김치와 큰 차이가 없었으나, 25℃에서 발효시킨 경우 발효가 지연됨을 알 수 있었다. In kimchi by the addition of garlic 3 times (5.2%) also had to find out some fermentation occurs slowly compared to the standardized kimchi, sauerkraut was added each 2-fold the red pepper and garlic is the fermentation rate were not much different standardized Kimchi , it could be fermented to know the delayed when fermented at 25 ℃.

표준화 배추김치에 갓과 청각을 5% 첨가한 김치는 발효속도가 표준화 김치와 별 차이가 없었고, 갓 첨가 김치의 경우 25℃에서 발효시켰을 경우 발효가 다소 지연됨을 알 수 있었다. Freshly and hearing the standard cabbage kimchi was added 5% was able to know the speed of the fermentation the fermentation is somewhat delayed when sikyeoteul fermentation at 25 ℃ for no difference, freshly Kimchi by the standardization kimchi. 초피와 키토산 올리고당, 첨차분말을 첨가한 김치가 표준화 배추김치에 비해 발효가 더디게 일어났고, 특히 키토산 올리고당과 첨차분말을 첨가한 김치는 15℃→5℃로 발효시킨 경우 pH 4.3에 도달하는데 걸리는 시간이 각각 20일, 24일로 표준화 김치 15일에 비해 훨씬 오래 걸렸음을 알 수 있었다. Case that the Kimchi was added Chopi and chitosan oligosaccharide, cheomcha powder got up slows the fermentation compared to the standardized cabbage, especially kimchi was added to chitosan oligosaccharides and cheomcha powder is fermented in 15 ℃ → 5 ℃ time it takes to reach a pH 4.3 each 20 days, it was found jammed a lot longer than the standard 24 days Kimchi 15 days.

유기배추로 담근 김치의 경우는 표준화 김치보다 발효가 조금 더디게 일어났으나 큰 차이는 없었다. In the case of cabbage kimchi dipped into organic, there was no significant difference nateu or fermentation happens a little slower than standard kimchi.

온도를 달리하여 발효시킨 부재료첨가 김치와 유기배추김치가 pH 4.3이 될 때까지 걸리는 발효일 수(일) Unlike the temperature and sub material was added to the organic cabbage kimchi fermentation the fermentation may be applied until the pH 4.3 (days) 발효온도김치종류 Kimchi fermentation temperature 15℃→5℃ 1) 15 ℃ → 5 ℃ 1) 15℃ 15 ℃ 25℃ 25 ℃ 표준화 배추김치10.5% 고춧가루 첨가 김치5.2% 마늘첨가 김치7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가 김치5% 갓 첨가 김치5% 청각 첨가 김치1% 초피 첨가 김치1% 계피가루 첨가 김치1% 인삼 가루 첨가 김치1% 키토산 올리고당 첨가 김치1% 알긴산 나트륨 첨가 김치1% 첨차분말 첨가 김치유기배추 김치 Standardization cabbage 10.5% pepper Kimchi 5.2% garlic Kimchi 7% red pepper powder + 2.8% garlic Kimchi 5% of freshly added kimchi 5% hearing Kimchi 1% Chopi Kimchi 1% of cinnamon powder Kimchi 1% ginseng powder Kimchi 1 % chitosan oligosaccharide Kimchi 1% sodium alginate was added to 1% kimchi cheomcha powder cabbage kimchi organic 15181615151516201320152416 15181615151516201320152416 4544445446475 4544445446475 11.51.52.52122.512.5131 11.51.52.52122.512.5131

15℃에 하루를 방치하고 5℃에서 발효한 이유는 김치의 맛에 관여하며, 저온, 발효 초기에 나타나는 Leuconostoc sp.의 젖산균의 수를 증가시켜 맛과 발효기간을 증진시키기 위함이다. The reason was allowed to stand for a day at 15 ℃ and fermented at 5 ℃ and is involved in the taste of kimchi, by increasing the number of lactic acid bacteria of the Leuconostoc sp. Appear in the low temperature, the initial fermentation stage in order to improve the taste and fermentation.

실험예 2: 5℃에서 발효시킨 배추김치 즙액의 항암효과 Experimental Example 2: Antitumor Activity of Kimchi juice was fermented at 5 ℃

암세포를 96웰 플레이트에 웰당 1 × 10 3 cells/mL가 되도록 접종(seeding)하고 24시간 배양한 후 실시예 1에서 제조한 배추김치로 발효시키기 전 배추김치 각각의 즙액을 시료로 첨가한 후 37℃, 5% CO 2 배양기에서 배양하였다. Per well of cancer cells in a 96-well plate at 1 × 10 3 cells / mL inoculation (seeding) and followed by the addition of a 24-hour leavening as a kimchi manufactured by incubation of Example 1 before cabbage each juice as a sample 37 to be ℃, and cultured at 5% CO 2 incubator. 배양 3일 후에 3-(4,5-dimethyl-thiazol)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide;MTT, 2㎎/mL) 50㎕를 첨가하고 4시간 동안 더 배양한 후 배지를 제거(180㎕)하고 DMSO를 150㎕첨가하여 플레이트 혼합기로 혼합시킨 후에 540nm에서 흡광도를 측정하였다. Three days after the culturing, 3- (4,5-dimethyl-thiazol) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide; remove the medium after addition of MTT, 2㎎ / mL) 50㎕ further incubated for 4 hours (180㎕) after the plate was mixed in a mixer by addition of a DMSO 150㎕ was measured at 540nm. 각 시료를 농도별로 처리하여 얻어진 평균 세포성장율(%)을 근거로 하여 로터스 테이타 회귀 프로그램(Lotus data regression program)에 따라서 세포성장을 50% 저해하는 각 시료의 농도(IC 50 )을 산출하였다. Based on the average cell growth rate (%) obtained by processing the respective samples at different concentrations and the cell growth according to the lotus teyita regression program (Lotus program data regression) was calculated for each concentration of the sample (IC 50) that inhibits 50%. 배추김치를 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 후(13∼20일) 그 즙액을 시료로 사용하였다. After 1 days of cabbage at 15 ℃ fermentation after fermentation until a pH 4.3 at 5 ℃ (13~20 days) was used as the juice sample. 실험결과, 표 4에 나타낸 바와 같이 13종류의 배추김치를 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 배추김치의 AGS 인체 위암세포의 생존 저해효과는 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 김치와 유기 배추김치가 표준화 배추김치에 비해서 AGS 인체 위암세포의 생존을 더 크게 억제함을 알 수 있었으며 특히 초피를 첨가한 김치가 높은 저해효과를 보임을 알 수 있었다(p<0.05). Experimental results, AGS survival inhibitory effect of the human body above the cancer cells of the 13 kinds of which Kimchi fermentation until after the Kimchi one days fermentation at 15 ℃ be pH 4.3 at 5 ℃ As shown in Table 4, the red pepper and garlic 7%, 2.8%, was added kimchi and organic cabbage kimchi was found to show the AGS human stomach was found to be more significantly inhibited survival of cancer cells, a high kimchi especially added Chopi inhibitory effect compared to the standard Kimchi (p <0.05). 표 5에는 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3까지 발효시킨 배추김치 즙액의 HT-29 결장암세포에 대한 생존 저해효과를 나타낸 것으로 위암세포에 비해서는 다소 낮은 저해효과를 보였으나, 표준화 배추김치에 비해 갓을 첨가한 김치와 유기배추김치가 높은 저해효과를 보임을 관찰할 수 있었다(p<0.05). Table 5 and showed a somewhat lower inhibitory activity as compared to the above cancer cell that after a day at 15 ℃ fermentation showing the survival inhibitory effect on HT-29 colon cancer cells in which Kimchi juice fermented in 5 ℃ to pH 4.3, standardize the addition of the freshly than cabbage kimchi and organic cabbage were observed to show high inhibitory effect (p <0.05). 10㎕/assay의 즙액농도에서 표준화 배추김치는 42%의 인체 결장암세포에 대한 생존을 저해한 반면, 갓을 첨가한 김치와 유기배추김치는 50%이상으로 결장암세포의 생존을 저해함을 알 수 있었다(p<0.05). 10㎕ / standardization Kimchi juice in a concentration in the assay, while one inhibiting the survival of 42% of human colon carcinoma cells, the addition of fresh cabbage kimchi and the organic is 50% or more can be seen that inhibited the survival of colon cancer cells were (p <0.05).

배추김치 13종을 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시켜 얻은 즙액의 MTT 시험법에 의한 AGS 인체 위암세포 생존저해 효과 AGS human stomach cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay of the juice obtained by fermentation until the Kimchi 13 kinds to be one day's pH 4.3 at 5 ℃ was fermented at 15 ℃ 처리물(㎕/assay) Treated water (㎕ / assay) OD 540 OD 540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.790±0.05 a 0.790 ± 0.05 a 0.618±0.032 a 0.618 ± 0.032 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.652±0.012 bc (17) 1) 0.652 ± 0.012 bc (17) 1 ) 0.190±0.012 cd (69) 0.190 ± 0.012 cd (69) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.368±0.022 e (53) 0.368 ± 0.022 e (53) 0.187±0.022 cd (70) 0.187 ± 0.022 cd (70) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.506±0.078 d (36) 0.506 ± 0.078 d (36) 0.233±0.078 bcd (62) 0.233 ± 0.078 bcd (62) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가 김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.768±0.021 ab (3) 0.768 ± 0.021 ab (3) 0.150±0.021 cd (76) 0.150 ± 0.021 cd (76) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.487±0.088 de (38) 0.487 ± 0.088 de (38) 0.077±0.088 d (88) 0.077 ± 0.088 d (88) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.808±0.015 a (-2) 0.808 ± 0.015 a (-2) 0.265±0.015 bc (57) 0.265 ± 0.015 bc (57) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.541±0.120 cd (32) 0.541 ± 0.120 cd (32) 0.402±0.012 b (35) 0.402 ± 0.012 b (35) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.591±0.087 cd (25) 0.591 ± 0.087 cd (25) 0.166±0.087 cd (73) 0.166 ± 0.087 cd (73) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.652±0.109 bc (17) 0.652 ± 0.109 bc (17) 0.250±0.109 bc (60) 0.250 ± 0.109 bc (60) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.648±0.065 bc (18) 0.648 ± 0.065 bc (18) 0.375±0.065P(39) 0.375 ± 0.065P (39) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.672±0.069 abc (15) 0.672 ± 0.069 abc (15) 0.371±0.069 b (40) 0.371 ± 0.069 b (40) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.750±0.231 ab ( 5) 0.750 ± 0.231 ab (5) 0.569±0.231 a ( 8) 0.569 ± 0.231 a (8) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.603±0.123 cd (24) 0.603 ± 0.123 cd (24) 0.125±0.123 cd (80) 0.125 ± 0.123 cd (80) 1) One) a~d는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ d represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

배추김치 13종을 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시켜 얻은 즙액의 MTT 시험법에 의한 HT-29 인체 결장암세포 생존저해 효과 HT-29 human colon cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay of the juice obtained by fermentation until the Kimchi 13 kinds to be one day's pH 4.3 at 5 ℃ was fermented at 15 ℃ 처리물(㎕/assay) Treated water (㎕ / assay) OD 540 OD 540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.703±0.02 a 0.703 ± 0.02 a 0.913±0.028 a 0.913 ± 0.028 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.483±0.014 bc (31) 2) 0.483 ± 0.014 bc (31) 2 ) 0.526±0.034 bc (42) 0.526 ± 0.034 bc (42) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.337±0.072 cd (52) 0.337 ± 0.072 cd (52) 0.662±0.083 b (28) 0.662 ± 0.083 b (28) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.510±0.179 b (28) 0.510 ± 0.179 b (28) 0.614±0.143 bc (33) 0.614 ± 0.143 bc (33) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가 김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.521±0.063 b (30) 0.521 ± 0.063 b (30) 0.617±0.138 bc (32) 0.617 ± 0.138 bc (32) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.229±0.101 d (67) 0.229 ± 0.101 d (67) 0.415±0.072 c (55) 0.415 ± 0.072 c (55) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.667±0.059 a ( 5) 0.667 ± 0.059 a (5) 0.648±0.078 b (29) 0.648 ± 0.078 b (29) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.382±0.027 bc (46) 0.382 ± 0.027 bc (46) 0.545±0.022 bc (40) 0.545 ± 0.022 bc (40) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.453±0.062 bc (36) 0.453 ± 0.062 bc (36) 0.416±0.116 c (54) 0.416 ± 0.116 c (54) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.431±0.020 bc (39) 0.431 ± 0.020 bc (39) 0.670±0.266 b (27) 0.670 ± 0.266 b (27) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.477±0.134 bc (32) 0.477 ± 0.134 bc (32) 0.532±0.061 bc (42) 0.532 ± 0.061 bc (42) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.269±0.065 bc (40) 0.269 ± 0.065 bc (40) 0.469±0.015 bc (49) 0.469 ± 0.015 bc (49) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.481±0.800 bc (32) 0.481 ± 0.800 bc (32) 0.562±0.085 bc (38) 0.562 ± 0.085 bc (38) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.400±0.420 bc (43) 0.400 ± 0.420 bc (43) 0.445±0.005 bc (51) 0.445 ± 0.005 bc (51) 1) One) a~d는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ d represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

실험예 3: 15℃에서 발효시킨 배추김치 즙액의 항암효과 Experiment 3: Anticancer Effect of Kimchi juice was fermented at 15 ℃

상기 실험예 1과 동일한 방법으로 항암효과를 조사하되 배추김치를 15℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 후 그 즙액을 시료로 사용하였다. After fermentation until but examine the anti-cancer effect in the same manner as in Experimental Example 1 to be pH 4.3 for cabbage at 15 ℃ was used as the juice sample. 실험결과, 표 6에 나타낸 바와 같이 상기 실험예 2의 15℃에서 1일간 발효시키고 5℃에서 발효시킨 배추김치 즙액에 비해서는 다소 낮은 저해효과를 보였다. The experimental results, in Table 6 and 1 days fermentation at 15 ℃ in Experimental Example 2 as shown in comparison to that in the fermented Kimchi juice 5 ℃ showed a slightly lower inhibitory activity. 표준화 배추김치 즙액에 비해 고춧가루를 3배 첨가한 김치, 고춧가루와 마늘을 각각 2배씩 첨가한 김치, 청각 첨가김치, 초피 첨가김치와 유기배추김치의 즙액이 높은 AGS 인체 위암세포 생존 저해효과를 보였다(p<0.05). It showed a red pepper powder compared to the standardized Kimchi juice triple added a sauerkraut, red pepper and garlic, respectively 2-fold by adding Kimchi, hearing Kimchi, Chopi Kimchi to the above cancer cell survival inhibition with the high AGS human juice of organic cabbage effect ( p <0.05). 특히 고춧가루와 마늘을 각각 2배씩 첨가한 김치(7%, 2.8%)는 5㎕/assay와 10㎕/assay의 즙액농도에서 57%, 68%의 인체 위암세포의 생존 저해효과를 보여 표준화 배추김치 40%, 59%보다 훨씬 높은 저해효과를 보였다. In particular, pepper and garlic respectively kimchi was added 2-fold (7%, 2.8%) is standardized Kimchi shows the inhibitory effect of the human body above the survival of cancer cells, 57% and 68% juice at a concentration of 5㎕ / assay and 10㎕ / assay It showed a significantly higher inhibitory effect than the 40%, 59%. 이로써 발효온도에 따라서 암세포의 생존에 미치는 영향은 다소 차이가 있었으나, 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가한 김치와 초피 첨가김치 및 유기배추김치가 표준화 배추김치에 비해서는 높은 암세포 생존 저해효과를 가짐을 알 수 있었다. Thus according to the fermentation temperature effect on the survival of cancer cells are but slightly different, the red pepper and the addition of garlic at a high concentration kimchi and Chopi Kimchi and organic cabbage know is having a high cancer cell survival inhibitory effect compared to the standard Kimchi could. 또 표 7에는 HT-29 인체 결장암세포의 생존에 대한 15℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 13종류의 김치 즙액의 영향을 비교하여 나타냈다. In Table 7 are shown as compared to the effect of which 13 kinds of fermented Kimchi juice until a pH 4.3 at 15 ℃ for the survival of the HT-29 human colon carcinoma cells. 표준화 배추김치에 비해 고춧가루를 3배 첨가한 김치, 갓을 5% 첨가한 김치, 초피를 1% 첨가한 김치와 키토산 올리고당을 1% 첨가한 배추김치의 즙액이 HT-29 인체 결장암세포의 생존을 더 크게 억제함을 알 수 있었다(p<0.05). Was added three times as the red pepper powder compared to the standardized cabbage kimchi, leaf mustard for the survival of 5% Kimchi, juice is HT-29 of the addition of Chopi 1% kimchi and chitosan oligosaccharide with 1% added cabbage human colon carcinoma cells added It was found to be suppressed more significantly (p <0.05). 15℃에서 발효시킨 배추김치 즙액의 경우도 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가하고 초피를 첨가한 김치와 유기배추김치가 AGS 인체 위암세포 뿐만 아니라 HT-29 인체 결장암세포의 생존을 크게 억제함을 알 수 있었다. For that Kimchi juice fermented at 15 ℃ also the addition of red pepper and garlic in a high concentration and the addition of Chopi kimchi and organic cabbage AGS be seen that the human stomach cancer cells, as well as the HT-29 inhibited significantly the survival of human colon carcinoma cells there was.

배추김치 13종을 15℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시켜 얻은 즙액의 MTT 시험법에 의한 AGS 인체 위암세포 생존저해 효과 AGS human stomach cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay of the juice obtained by fermentation until the Kimchi 13 kinds to be pH 4.3 at 15 ℃ 처리물(㎕/assay) Treated water (㎕ / assay) OD 540 OD 540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.795±0.037 a 0.795 ± 0.037 a 0.795±0.037 a 0.795 ± 0.037 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.476±0.032 cd (40) 1) 0.476 ± 0.032 cd (40) 1 ) 0.323±0.011 efg (59) 0.323 ± 0.011 efg (59) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.345±0.050 e (57) 0.345 ± 0.050 e (57) 0.256±0.007 gh (68) 0.256 ± 0.007 gh (68) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.431±0.095 de (46) 0.431 ± 0.095 de (46) 0.348±0.015 def (56) 0.348 ± 0.015 def (56) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.389±0.042 de (51) 0.389 ± 0.042 de (51) 0.257±0.028 gh (68) 0.257 ± 0.028 gh (68) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.565±0.071 c (29) 0.565 ± 0.071 c (29) 0.362±0.023 cde (55) 0.362 ± 0.023 cde (55) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.413±0.016 f (48) 0.413 ± 0.016 f (48) 0.254±0.031 gh (68) 0.254 ± 0.031 gh (68) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.475±0.050 cd (40) 0.475 ± 0.050 cd (40) 0.298±0.020 efgh (63) 0.298 ± 0.020 efgh (63) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.676±0.106 b (15) 0.676 ± 0.106 b (15) 0.234±0.018 h (71) 0.234 ± 0.018 h (71) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.731±0.018 ab ( 8) 0.731 ± 0.018 ab (8) 0.436±0.042 b (45) 0.436 ± 0.042 b (45) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.484±0.017 cd (39) 0.484 ± 0.017 cd (39) 0.283±0.027 fgh (49) 0.283 ± 0.027 fgh (49) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.615±0.021 ab (23) 0.615 ± 0.021 ab (23) 0.409±0.075 bcd (64) 0.409 ± 0.075 bcd (64) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.452±0.055 cde (43) 0.452 ± 0.055 cde (43) 0.320±0.024 ef (60) 0.320 ± 0.024 ef (60) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.406±0.053 de (49) 0.406 ± 0.053 de (49) 0.330±0.017 bc (59) 0.330 ± 0.017 bc (59) 1) One) a~h 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ h represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

배추김치 13종을 15℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시켜 얻은 즙액의 MTT 시험법에 의한 HT-29 인체 결장암세포 생존저해 효과 HT-29 human colon cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay of the juice obtained by fermentation until the Kimchi 13 kinds to be pH 4.3 at 15 ℃ 처리물(㎕/assay) Treated water (㎕ / assay) OD 540 OD 540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.425±0.017 a 0.425 ± 0.017 a 0.626±0.032 a 0.626 ± 0.032 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.197±0.017 bcdef (54) 1) 0.197 ± 0.017 bcdef (54) 1 ) 0.256±0.040 defgh (59) 0.256 ± 0.040 defgh (59) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.168±0.002 def (61) 0.168 ± 0.002 def (61) 0.236±0.015 efgh (62) 0.236 ± 0.015 efgh (62) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.139±0.014 f (67) 0.139 ± 0.014 f (67) 0.281±0.003 cde (55) 0.281 ± 0.003 cde (55) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.136±0.006 f (68) 0.136 ± 0.006 f (68) 0.352±0.021 b (44) 0.352 ± 0.021 b (44) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.152±0.019 ef (64) 0.152 ± 0.019 ef (64) 0.204±0.018 h (67) 0.204 ± 0.018 h (67) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.182±0.018 cdef (57) 0.182 ± 0.018 cdef (57) 0.315±0.019 bc (50) 0.315 ± 0.019 bc (50) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.170±0.010 def (60) 0.170 ± 0.010 def (60) 0.241±0.031 efgh (62) 0.241 ± 0.031 efgh (62) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.243±0.013 b (43) 0.243 ± 0.013 b (43) 0.270±0.021 cdef (57) 0.270 ± 0.021 cdef (57) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.235±0.008 bc (45) 0.235 ± 0.008 bc (45) 0.219±0.004 fgh (65) 0.219 ± 0.004 fgh (65) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.216±0.070 bcd (49) 0.216 ± 0.070 bcd (49) 0.120±0.046 i (81) 0.120 ± 0.046 i (81) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.223±0.013 bcd (48) 0.223 ± 0.013 bcd (48) 0.299±0.004 cd (52) 0.299 ± 0.004 cd (52) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.210±0.070 bcde (51) 0.210 ± 0.070 bcde (51) 0.211±0.260 gh (66) 0.211 ± 0.260 gh (66) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.217±0.053 f (49) 0.217 ± 0.053 f (49) 0.260±0.005 defg (59) 0.260 ± 0.005 defg (59) 1) One) a~h 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ h represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

실험예 4: 25℃에서 발효시킨 배추김치 즙액의 항암효과 Experiment 4: Anticancer Effect of Kimchi juice was fermented at 25 ℃

상기 실험예 1과 동일한 방법으로 항암효과를 조사하되 배추김치를 25℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 후 그 즙액을 시료로 사용하였다. After fermentation until but examine the anti-cancer effect in the same manner as in Experimental Example 1 to be pH 4.3 for cabbage at 25 ℃ was used as the juice sample. 실험결과, 표 8에 나타낸 바와 같이 상기 실험예2의 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 발효시킨 배추김치와 실험예 3의 15℃에서 발효시킨 배추김치 즙액에 비해 25℃에서 발효시킨 경우가 다소 낮은 위암세포 생존 저해효과를 보였고, 표준화 배추김치에 비해 고춧가루와 마늘을 2배씩 첨가한 배추김치, 갓을 5% 첨가한 배추김치 및 유기 배추김치 즙액이 높은 위암세포 생존 저해효과를 보였다(p<0.05). The experimental results, when fermented at 25 ℃ compared to the Experimental Example 2 for a day at 15 ℃ after fermentation fermented at 15 ℃ in which Kimchi and Example 3 Fermentation at 5 ℃ Kimchi juice as shown in Table 8 the rather low above showed the cancer cells to survive inhibiting effect, it was red pepper and garlic two-fold addition of a Chinese cabbage kimchi, leaf mustard a 5% addition of a cabbage, and the organic cabbage juice is high above cancer cell survival inhibitory effect compared to the standard cabbage ( p <0.05). 10㎕/assay 즙액 농도에서 표준화 배추김치의 경우 29%의 저해효과를 보인 반면, 7% 고춧가루+2.8% 마늘을 첨가한 김치, 5% 갓 첨가김치, 유기 배추김치가 각각 62%, 58%, 49%의 높은 암세포 생존 저해효과를 나타내었다(p<0.05). 10㎕ / assay, while in the juice concentrations showed an inhibitory effect of 29% in standardized cabbage, red pepper 62% 7% + 2.8% kimchi by the addition of garlic and 5% of freshly added Kimchi, Kimchi organic respectively, 58%, exhibited high cancer cell viability inhibition effect of 49% (p <0.05). 또 25℃에서 발효시킨 13종류의 배추김치 즙액의 HT-29 인체 결장암세포의 생존에 미치는 효과는 표 9에 나타낸 바와 같이 AGS 인체 위암세포와는 달리 발효온도에 따라 암세포의 생존 저해효과에는 큰 차이를 보이지 않았다. In effect on the survival of which 13 kinds of cabbage juice HT-29 human colon carcinoma cells in the fermentation at 25 ℃ the AGS human stomach cancer cells, as opposed viability inhibition effect of tumor cells according to the fermentation temperature, as shown in Table 9, significant differences the did not. 표준화 배추김치의 즙액에 비해 고춧가루를 10.5% 첨가한 김치, 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 김치, 청각을 5% 첨가한 김치와 초피를 1% 첨가한 김치 및 유기배추김치가 높은 HT-29 결장암세포의 생존 저해효과를 나타내었다(p<0.05). The juice 10.5% Kimchi, pepper and garlic addition of red pepper powder compared to the standardized cabbage 7%, 2.8%, was added a kimchi, hearing of 5% was added was added a 1% with kimchi and Chopi kimchi and a high organic cabbage HT-29 is shown the survival of colon cancer cells the inhibitory effect (p <0.05). 특히 고춧가루를 고농도로 첨가한 김치가 높은 저해효과를 보였고, 표준화 배추김치의 즙액은 43%의 저해효과를 나타낸 반면, 고춧가루와 마늘을 각각 2배씩 첨가한 배추김치 즙액의 경우 10㎕/assay의 처리농도에서 72%의 훨씬 높은 저해효과를 보였다. In particular, the kimchi was added at a high concentration pepper showed a high inhibitory effect, juice of standardized kimchi, while showing an inhibitory effect of 43%, it was added a 2-fold the red pepper and garlic cabbage juice treatment of 10㎕ / assay of 72% at a concentration showed a significantly higher inhibitory effect.

이상, 상기 실험예1∼4의 결과로부터 부재료의 양과 종류를 달리하여 담근 배추김치는 발효온도에 따라 암세포의 생존에 미치는 영향은 다소 차이가 있었으며, 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 발효시킨 배추김치가 가장 높은 저해효과를 보임을 알 수 있었고 또한 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가한 김치, 초피첨가 김치 및 유기배추 김치가 AGS 인체 위암세포 및 HT-29 결장암세포의 생존을 크게 저해함을 알 수 있었다. Above, the experimental results for example cabbage dipped by varying the amount and type of the sub material from 1 to 4 of the impact on the survival of cancer cells according to the fermentation temperature was slightly different, fermentation at 5 ℃ after 1 days fermentation at 15 ℃ to which also Kimchi is was found to show the highest inhibitory effect also significantly inhibit the survival of the kimchi was added at a high concentration of red pepper powder, garlic, Chopi Kimchi and organic cabbage AGS human stomach cancer cells and HT-29 colon carcinoma cells Could know.

배추김치 13종을 25℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 후 그 즙액의 인체 위암세포 생존저해 효과 After the Kimchi 13 kinds of fermented until a pH 4.3 at 25 ℃ inhibiting cancer cell survival above the body of the juice effect 처리물(㎕/assay) Treated water (㎕ / assay) OD 540 OD 540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.672±0.07 a 0.672 ± 0.07 a 0.672±0.07 a 0.672 ± 0.07 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.349±0.034 ef (48) 1) 0.349 ± 0.034 ef (48) 1 ) 0.542±0.086 b (29) 0.542 ± 0.086 b (29) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.376±0.018 de (44) 0.376 ± 0.018 de (44) 0.226±0.055 f (70) 0.226 ± 0.055 f (70) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.396±0.075 de (41) 0.396 ± 0.075 de (41) 0.477±0.045 bc (37) 0.477 ± 0.045 bc (37) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.437±0.030 cd (35) 0.437 ± 0.030 cd (35) 0.287±0.001 ef (62) 0.287 ± 0.001 ef (62) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.355±0.048 ef (47) 0.355 ± 0.048 ef (47) 0.320±0.075 def (58) 0.320 ± 0.075 def (58) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.349±0.043 ef (48) 0.349 ± 0.043 ef (48) 0.430±0.069 bcd (43) 0.430 ± 0.069 bcd (43) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.464±0.007 c (31) 0.464 ± 0.007 c (31) 0.449±0.001 bcd (41) 0.449 ± 0.001 bcd (41) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.396±0.460 de (41) 0.396 ± 0.460 de (41) 0.516±0.053 b (32) 0.516 ± 0.053 b (32) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.304±0.011 f (55) 0.304 ± 0.011 f (55) 0.482±0.126 bc (36) 0.482 ± 0.126 bc (36) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.562±0.026 b (16) 0.562 ± 0.026 b (16) 0.381±0.055 cde (50) 0.381 ± 0.055 cde (50) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.595±0.017 b (12) 0.595 ± 0.017 b (12) 0.387±0.116 cde (49) 0.387 ± 0.116 cde (49) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.580±0.025 b (8) 0.580 ± 0.025 b (8) 0.380±0.056 cde (8) 0.380 ± 0.056 cde (8) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.343±0.026 ef (49) 0.343 ± 0.026 ef (49) 0.390±0.071 cde (49) 0.390 ± 0.071 cde (49) 1) One) a~f 는 Duncan's multiple range test의 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ f denotes a significant difference (p <0.05) in the Duncan's multiple range test.

배추김치 13종을 25℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시켜 얻은 즙액의 MTT 시험법에 의한 HT-29 인체 결장암세포 생존저해 효과 HT-29 human colon cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay of the juice obtained by fermentation until the Kimchi 13 kinds to be pH 4.3 at 25 ℃ 처리물(㎕/assay) Treated water (㎕ / assay) OD540 OD540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.513±0.02 a 0.513 ± 0.02 a 0.702±0.007 a 0.702 ± 0.007 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.262±0.031 cd (49) 1) 0.262 ± 0.031 cd (49) 1 ) 0.399±0.010 b (43) 0.399 ± 0.010 b (43) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.231±0.004 d (55) 0.231 ± 0.004 d (55) 0.193±0.056 f (73) 0.193 ± 0.056 f (73) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.221±0.050 d (57) 0.221 ± 0.050 d (57) 0.399±0.069 b (43) 0.399 ± 0.069 b (43) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.198±0.018 de (61) 0.198 ± 0.018 de (61) 0.194±0.073 f (72) 0.194 ± 0.073 f (72) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.196±0.012 de (62) 0.196 ± 0.012 de (62) 0.291±0.024 cde (59) 0.291 ± 0.024 cde (59) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.234±0.037 d (54) 0.234 ± 0.037 d (54) 0.245±0.034 def (65) 0.245 ± 0.034 def (65) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.229±0.012 d (55) 0.229 ± 0.012 d (55) 0.260±0.029 cdef (63) 0.260 ± 0.029 cdef (63) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.358±0.057 b (30) 0.358 ± 0.057 b (30) 0.317±0.017 c (55) 0.317 ± 0.017 c (55) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.307±0.037 bc (40) 0.307 ± 0.037 bc (40) 0.316±0.026 cd (55) 0.316 ± 0.026 cd (55) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.336±0.008 b (35) 0.336 ± 0.008 b (35) 0.259±0.008 cdef (63) 0.259 ± 0.008 cdef (63) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.352±0.011 b (31) 0.352 ± 0.011 b (31) 0.263±0.029 cdef (63) 0.263 ± 0.029 cdef (63) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.310±0.032 e (8) 0.310 ± 0.032 e (8) 0.255±0.009 ef (8) 0.255 ± 0.009 ef (8) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.141±0.028 bc (73) 0.141 ± 0.028 bc (73) 0.237±0.039 cdef (66) 0.237 ± 0.039 cdef (66) 1) One) a~f는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ f represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

실시예 4: 배추김치 메탄올 추출물의 항돌연변이 효과 Example 4: antimutagenic effect of Chinese cabbage kimchi methanol extract

실험예 1: Ames test에 의한 항돌연변이 효과 Experimental Example 1: antimutagenic effect by the Ames test

본 실험에서 사용한 균주는 Samonella typhimurium TA100으로 미국 캘리포니아 대학의 BN Ames박사로부터 제공 받아 사용하였다. Strains used in this experiment was used to receive offers Samonella typhimurium TA100 from the University of California, Dr. BN Ames. 간접 돌연변이원인 아플라톡신 B 1 은 미국 Sigma 회사에서 구입하여 사용하였다. Indirect mutation causes aflatoxin B 1 was purchased from Sigma US companies. 간접 돌연변이원을 활성화시키기 위해 Maron과 Ames의 방법에 따라 간의 마이크로좀 효소화합물인 S9 혼합물을 조제하였다. In order to enable the indirect mutagen to prepare a microsomal enzyme mixture between compound S9 according to the procedure of Maron and Ames. 약 200g의 웅성 Sprague-Dawley rat 간의 효소활성을 위하여 폴리클로리네이트 바이페닐 혼합물(polychlorinated biphenyl;PCB) 혼합물인 Aroclor 1254를 옥수수유(corn oil) 1mL 당 200mg의 농도로 희석하여 1회 복강주사하고(500mg/kg) 5일 후에 간을 적출하였다. For about 200g of male Sprague-Dawley enzymatic activity between rat polyclonal Li carbonate biphenyl mixture; oil (polychlorinated biphenyl PCB) the mixture Aroclor 1254 maize (corn oil) and diluted to a concentration of 200mg per 1mL and injected once intraperitoneally (500mg / kg) was excised liver after five days. 45℃ 무균상태에서 적출한 간을 0.15 KCl로 수회 세척하고 간 무게의 3배량의 0.15M KCl 용액을 가하여 호모게나이저(homogenizer;Potter-Elvehien apparatus, USA)에서 균질화하였다. It was homogenized in; (Potter-Elvehien apparatus, USA homogenizer) between the extraction at 45 ℃ sterile 0.15M KCl was added to a solution of 3-fold amount of the weight of liver and washed several times in 0.15 KCl homogenizer. 이것을 9000×g에서 10분간 원심분리하여 상등액인 S9 분획을 얻었으며 크라이오 튜브(cryogenic tube)에 1 ~ 2mL씩 분주하여 드라이 아이스(dry ice)에서 급속 동결한 후 -70℃ 동결기(deep freezer)에서 보관하였다. This is to separate 10 minutes and centrifuged at 9000 × g and the supernatant was obtained in S9 fractions cryo tube (cryogenic tube) 1 ~ divides by 2mL of dry ice (dry ice) and then rapidly frozen -70 ℃ freezer (deep freezer at a ) it was kept in. 이 S9 분획(10%)을 MgCl-KCl 염(2%), 1M 글루코스-6-포스페이트(glucose-6-phosphate)(0.5%), 1M NADP(4%), 0.2M 인산 버퍼(phosphate buffer)(pH 7.4) 및 멸균수와 혼합하여 S9 혼합물을 조제하였다. The S9 fraction (10%) KCl-MgCl salt (2%), 1M glucose-6-phosphate (glucose-6-phosphate) (0.5%), 1M NADP (4%), 0.2M phosphate buffer (phosphate buffer) S9 was prepared by mixing the mixture can (pH 7.4) and sterilized. 발효시킨 배추김치 메탄올 추출물 시료를 실험에 사용하기 전에 독성 실험을 행하여 독성이 나타나지 않는 범위 내에서 시료의 농도를 결정하였다. Performing a toxicity test before using the methanol extract was Kimchi fermentation sample was determined in the experiment of the sample concentration in a range that is not toxic. 먼저 멸균된 캡 테스트 튜브(cap test tube)에 상층 아가(top agar) 2mL을 분주한 후 균주 100㎕와 희석한 시료 100㎕를 첨가하여 가볍게 볼덱스(votex)한 후 최소 아가플레이트(minimal agar plate)에 분주, 고화시켜서 37℃에서 24시간 배양한 다음 돌연변이 유무를 판정하였다. First a sterile test tube cap top layer agar (top agar) to (cap test tube) after the frequency division 2mL ball gently added to the diluted sample 100㎕ 100㎕ and strain index (votex) after the minimum agar plates (minimal agar plate ) busy, solidified by incubation for 24 hours at 37 ℃ was then determined whether or not a mutation. 돌연변이 억제효과는 하기 식에 의해 계산하였다. Mutant inhibitory effect was calculated by the following equation.

저해율(%)=100 × [(ab)/(ac)] Inhibition rate (%) = 100 × [(ab) / (ac)]

a는 돌연변이원에 의해 유도된 복귀돌연변이수 a is the number of reverse mutation induced by a mutagen

b는 시료를 처리하였을 때의 복귀돌연변이수 b is a number of reverse mutation by treatment of the sample

c는 돌연변이원과 시료가 없을 경우의 자연 복귀돌연변이수이다. c is a natural number of reverse mutation in the absence of a mutagen and samples.

실험결과, 표 10에 나타낸 바와 같이 부재료의 양을 달리하거나 암예방 기능성이 있는 재료를 첨가하여 담근 13종류의 배추김치(15℃→5℃ 발효, pH 4.3) 메탄올 추출물(methanol ext. 수용성 및 지용성 물질 추출됨)의 살로넬라 타피무리움 TA100 (Salmonella typhimurium TA100) 균주에서 아플라톡신(aflatoxin;AFB 1 )에 대한 항돌연변이 효과는 표준화된 배추김치의 경우, AFB 1 에 대한 돌연변이 유발을 66% 억제하였으며, 이에 비해 마늘을 고농도(5.2%)로 첨가한 김치와 마늘과 고춧가루를 각각 2.8%, 7% 첨가한 김치가 75%이상의 더 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다(p<0.05). The experimental results, varying the amount of the sub material, as shown in Table 10, or preventing cancer functionality of the 13 kinds of cabbage dipped in the addition of material (15 ℃ → 5 ℃ fermentation, pH 4.3) the methanol extract (methanol ext. Water-soluble and oil-soluble aflatoxin (aflatoxin in Salo Nella tapi herd help TA100 (Salmonella typhimurium TA100) strain of the material ejected); antimutagenic effect on AFB 1) was the mutagenesis for the case of a standardized cabbage, AFB 1 inhibited 66%, the garlic than exhibited a high concentration (5.2%) a kimchi and garlic and 2.8% of pepper powder, respectively, more than 7% by adding Kimchi 75% higher antimutagenic effect is added to the (p <0.05). 또 갓을 5% 첨가한 김치와 인삼가루를 1% 첨가한 김치도 돌연변이 유발을 크게 억제하였으며, 특히 갓 첨가김치의 경우 86%의 저해효과를 보였다(p<0.05). In the 5% addition of the kimchi and the ginseng powder was freshly Kimchi added 1% significantly inhibit mutagenesis, especially for freshly added kimchi showed the inhibitory effect of 86% (p <0.05). 유기배추로 담근 배추김치도 표준화 김치에 비해 더 높은 항돌연변이 효과를 보여 AFB 1 에 대한 돌연변이 유발을 80% 억제하였다(p<0.05). Cabbage dipped in the organic cabbage also show a higher antimutagenic effect compared to standard kimchi inhibited 80% of the mutagenesis to AFB 1 (p <0.05). 따라서 마늘을 고농도로 첨가한 김치, 갓과 인삼가루를 첨가한 김치와 유기배추김치가 표준화 배추김치에 비해 항돌연변이 효과가 증진되었음을 알 수 있었다. Therefore, it was kimchi by the addition of garlic at a high concentration, and fresh ginseng was added to powder and organic cabbage kimchi is known that the antimutagenic effect of enhancement in comparison to standardized cabbage.

부재료가 첨가된 배추김치 * 메탄올 추출물(2.5mg/plate)의 Salmonella typhimurium TA100균주에서 AFB 1 (2.0㎍/plate)에 대한 항돌연변이 효과 A sub material is added Kimchi - methanol extract (2.5mg / plate) antimutagenic effect on AFB 1 (2.0㎍ / plate) in TA100 strain of Salmonella typhimurium 처리물 Water treatment 복귀돌연변이/플레이트 Reverse mutation / Plate 저해율(%) Inhibition rate (%) 자연복귀돌연변이(Spontaneous)AFB 1 (Control) Nature reverse mutation (Spontaneous) AFB 1 (Control) 118±141099±77 a 118 ± 141099 ± 77 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 456±29 de 456 ± 29 de 66 66 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 449±38 de 449 ± 38 de 66 66 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 360±50 fg 360 ± 50 fg 76 76 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 357±49 fg 357 ± 49 fg 76 76 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 261± 5 h 261 ± 5 h 86 86 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 438±16 de 438 ± 16 de 68 68 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 436±17 ef 436 ± 17 ef 68 68 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 496±73 d 496 ± 73 d 62 62 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 401±16 ef 401 ± 16 ef 71 71 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 601±16 c 601 ± 16 c 51 51 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 672±60 bc 672 ± 60 bc 41 41 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 677±28 b 677 ± 28 b 43 43 유기배추 김치 Organic cabbage 314±47 gh 314 ± 47 gh 80 80 * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 a~h 는 Duncan's multiple range test의 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. * After 1 days fermentation at 15 ℃ Kimchi sample a ~ h fermented until a pH 4.3 at 5 ℃ denotes a significant difference (p <0.05) in the Duncan's multiple range test.

실험예 2: SOS 크로모테스트에 의한 항돌연변이 효과 Experimental Example 2: The antimutagenic effect of SOS chromotherapy test

본 실험예에서는 상기 실험예 1의 Ames test에서 밝혀진 돌연변이 물질의 약 90%가 SOS 유발물질이며, 이 두 방법 간에는 정량적인 상관관계가 있다고 보고되어져 있어 SOS 크로모테스트(SOS chromotest)를 이용하여 MNNG(N-methyl-N'-nitro-N- nitrosoguanidine)에 대한 부재료의 종류와 양을 달리한 13종류의 배추김치의 SOS 반응 억제효과를 살펴보았다. In this experiment about 90% of the mutations substance identified in Ames test of Experimental Example 1 has an SOS inducing substance, the two methods quantitative correlation is that reported here been between using the SOS chromotherapy test (SOS chromotest) MNNG It looked at the (N-methyl-N'-nitro-N- nitrosoguanidine) of the sub material type and amount of the SOS response inhibition of 13 kinds of Chinese cabbage kimchi contrast effect on the.

실험에 사용한 균주는 E.coli GC4436으로부터 유래된 E.coli PQ37(강원대 함승시교수)로써 균주는 90% 글리세롤과 L 배지에서 하룻밤 배양한 균액을 1:1로 혼합하여 -20℃에 보관하였다. Strain used in the experiment was an overnight cultured bacterial solution in an E.coli strain is 90% glycerol and L medium as PQ37 (Kangwon Professor Ham, Seung - Shi) derived from E.coli GC4436 1: a mixture of 1 and stored at -20 ℃. 돌연변이 유발원은 직접 돌연변이원으로 MNNG를 미국 Aldrich사로부터 구입하여 증류수에 녹여 실험에 사용하였다. Mutagenic agent was used in this experiment were dissolved in distilled water to directly purchase the United States from Aldrich MNNG captured by mutagen.

냉동보관된 PQ37 균액 50㎕을 5mL L배양액에 접종하고 37℃에서 하룻밤 진탕배양한 후 이를 다시 5mL L배양액에 접종하고 A 660 측정치가 0.3 ~ 0.4에 이를 때 까지 2시간 정도 진탕배양하였다. Frozen a PQ37 broth inoculated 50㎕ in 5mL L culture medium and cultured overnight with shaking and then inoculated them again in 5mL L broth at 37 ℃ and A 660 measurements are subjected to shake culture for about two hours up to the 0.3 to 0.4. 얻어진 균액을 L 배양액에 1/10로 희석하여 각 농도별로 준비한 시료와 돌연변이원을 혼합한 시료 20㎕를 미리 분주하여 둔 96웰 플레이트의 각 웰에 100㎕씩 분주하고 90분간 37℃에서 진탕하여 SOS 반응을 유도한 후 한쪽에는 β-갈락토시다아제(β-galactosidase;β-G)의 활성측정을 위하여 O-나이트로페닐-β-D-갈락토피라노사이드(O-nitrophenyl-β-D-galactopyraniside;ONPG) 100㎕, 다른 쪽에는 알카라인 포스파타아제(alkaline phosphatase;AP)의 활성 측정을 위해 P-니트로페닐 포스파테이트 디소듐(P-nitrophenyl phosphate disodium;PNPP) 100㎕를 첨가하였다. The bacterial solution obtained by diluting 1/10 in L broth Pipette 100㎕ to each well of a 96-well plate placed in dispensing a sample 20㎕ mixing the sample and the mutagen prepared in advance for each concentration and shaken at 37 ℃ 90 bungan after inducing the SOS response on one side β- galactosidase (β-galactosidase; β-G) phenyl -β-D- go O- night for measuring the activity of galactosyl-pyrano side (O-nitrophenyl-β- D-galactopyraniside; ONPG) 100㎕, the other side is alkaline phosphatase (alkaline phosphatase; was added to PNPP) 100㎕; AP) activity P- nitrophenyl phosphazene for measuring lactate disodium (P-nitrophenyl phosphate disodium in . 발색시간은 30분으로 하였으며 β-G는 1.5M Na 2 CO 3 100㎕로 AP는 1M HCl 50㎕로서 효소에 의한 발색 반응을 정지시키고 5분 후 AP 쪽에 50㎕의 2M 트리스 버퍼를 첨가하여 HCl을 중화하고 분광광도계로 420nm에서 흡광도를 측정하였다. Color development time was 30 minutes, β-G is in 1.5M Na 2 CO 3 100㎕ AP is HCl to stop the color development reaction by the enzyme as a 1M HCl 50㎕ and adding 2M Tris buffer of the AP side 50㎕ After 5 minutes It was neutralized and the absorbance is measured at 420nm with a spectrophotometer. 측정된 OD 420nm측정치는 Miller의 공식에 의해 효소 유니트(enzyme unit;EU) 값을 구하였다. The measured OD 420nm measurement enzyme units by the Miller formula; was determined value (enzyme unit EU).

EU=(1000×A 420 )/t(min) EU = (1000 × A 420) / t (min)

실험결과, 표 11에 나타낸 바와 같이 MNNG를 이용한 크로모테스트에서도 Ames 실험계에서와 유사한 효과를 보였다. The experimental results, in the test using the chromotherapy MNNG As shown in Table 11 showed effects similar to those in the Ames experiment system. 고춧가루를 10.5% 첨가한 배추김치와 마늘을 5.2% 첨가한 배추김치가 표준화 배추김치에 비해 높은 SOS반응 억제효과를 보였고, 또한 1% 초피 첨가김치와 알긴산 나트륨 첨가 김치, 첨차분말 첨가김치도 표준화 배추김치에 비해 높은 저해효과를 보였다(p<0.05). The addition of red pepper powder 10.5%, cabbage, garlic showed a high SOS response inhibitory effect as compared to a standardized cabbage kimchi was added 5.2%, and 1% Chopi Kimchi and sodium alginate Kimchi, cheomcha powdered Kimchi also standardized cabbage It showed a higher inhibitory effect than the kimchi (p <0.05). 특히 유기배추김치는 가장 높은 SOS 반응억제효과를 보여 표준화 배추김치 33%의 항돌연변이 효과에 비해 55%의 높은 저해효과를 관찰할 수 있었다. In particular, organic cabbage kimchi was observed a high inhibitory effect of 55% compared to the antimutagenic effect of the 33% highest SOS response showing the inhibitory effect standardization cabbage. 따라서 고춧가루, 마늘, 초피 첨가김치와 유기배추김치가 항돌연변이 효과가 높아 유기배추에 고춧가루와 마늘을 중심으로 초피 등의 첨가로 항돌연변이 효과를 올릴 수 있었다. Therefore, there is a red pepper powder, garlic, cabbage Chopi Kimchi and the organic was added to raise the antimutagenic effect, such as antimutagenic effect is increased Chopi around the red pepper and garlic in an organic cabbage.

부재료가 첨가된 배추김치 * 메탄올 추출물의 E.coli PQ37균주에서 N-methyl-N'- nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG, 40ng/assay)에 대한 항돌연변이 효과 Antimutagenic effect on N-methyl-N'- nitro-N -nitrosoguanidine (MNNG, 40ng / assay) in the E.coli strain PQ37 of the sub material is added Kimchi - methanol extract 처리물 Water treatment β-갈락토시다아제Unit(β) β- galactosidase Unit (β) 알카라인포스파타아제Unit(??) Alkaline phosphatase Unit (??) (β)/(ρ) (Β) / (ρ) SOS유도인자 SOS inducers 저해비율(%) Inhibition ratio (%) 자연복귀돌연변이(Spontaneous)대조군(MNNG) Nature reverse mutation (Spontaneous) control (MNNG) 22.388.9 a 22.388.9 a 14.613.9 14.613.9 1.526.41 1.526.41 1.004.22 1.004.22 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 73.9 f 73.9 f 15.4 15.4 4.79 4.79 3.15 3.15 33 33 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 65.8 h 65.8 h 15.5 15.5 4.25 4.25 2.80 2.80 44 44 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 65.5 h 65.5 h 15.6 15.6 4.19 4.19 2.76 2.76 45 45 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 63.3 i 63.3 i 15.0 15.0 4.22 4.22 2.78 2.78 45 45 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 72.7 g 72.7 g 14.9 14.9 4.87 4.87 3.20 3.20 32 32 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 81.5 c 81.5 c 16.3 16.3 5.01 5.01 3.30 3.30 29 29 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 64.7 h 64.7 h 15.1 15.1 4.28 4.28 2.82 2.82 44 44 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 79.1 d 79.1 d 16.0 16.0 4.95 4.95 3.26 3.26 30 30 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 87.3 b 87.3 b 16.9 16.9 5.17 5.17 3.40 3.40 26 26 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 76.8 e 76.8 e 16.1 16.1 4.76 4.76 3.13 3.13 34 34 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 71.6 g 71.6 g 16.2 16.2 4.42 4.42 2.91 2.91 41 41 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 70.5 g 70.5 g 15.9 15.9 4.44 4.44 2.92 2.92 40 40 유기배추 김치 Organic cabbage 59.5 j 59.5 j 15.9 15.9 3.74 3.74 2.46 2.46 55 55 * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 a~j 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. * After 1 days fermentation at 15 ℃ Kimchi sample a ~ j fermented until a pH 4.3 at 5 ℃ represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

실시예 5: 배추김치 메탄올 추출물의 항암효과 Example 5: Antitumor effect of the methanol extract of Chinese cabbage kimchi

실험예 1: SRB 분석법에서 배추김치 메탄올 추출물의 항암효과 Experiment 1: Anticancer effect of the methanol extract from the Chinese cabbage kimchi SRB assay

암세포를 96웰 플레이트에 웰당 40,000 cells/mL이 되도록 접종(seeding)하고 24시간 배양 후 세포가 플레이트에 부착되면 시료 추출물 100㎕를 첨가한 후 37℃ 5% CO 2 배양기에서 배양하였다. Per well 40,000 cells / mL so that the inoculation (seeding) in a 96-well plate, and cultured cancer cells in 24 hours when the cells are attached to the plate after the incubation after adding the sample extract 100㎕ 37 ℃ 5% CO 2 incubator. 이때 블랭크(blank)에는 시료와 10% FCS를 함유한 배지만 넣고 대조군에는 세포와 시료 대신에 DMSO를 첨가하였다. The blank (blank), insert baejiman containing sample with 10% FCS was added in place of DMSO to the sample cell, the control group. 배양 48시간에 배지를 제거한 후 PBS로 한번 씻은 후 50% TCA를 첨가하여 4℃에서 냉장 방치하였다. After washing once with PBS after removal of the medium for incubation 48 hours and allowed to stand refrigerated at 4 ℃ by the addition of 50% TCA. 1시간 후 TCA를 제거하고 증류수로 5번 씻은 후 실온에서 건조시킨 후 0.4% 설포로다민 B 100㎕를 첨가해서 30분 동안 염색하였다. One hour after removing the TCA and washed five times with distilled water then dried at room temperature by the addition of 0.4% sulfonic captive damin B 100㎕ were stained for 30 min. 다음 1% 아세트산으로 5번 씻고 다시 실온에서 건조시켜 0.01M 트리스 베이스를 150㎕를 첨가한 후 510nm에서 흡광도를 측정하였다. And then washed 5 times with 1% acetic acid was further dried at room temperature, it was measured at 510nm after the addition of the 150㎕ 0.01M Tris base. 실험결과, 표 12에 나타낸 바와 같이 0.05㎎/mL의 처리농도에서 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 김치가 50%이상의 암세포 생존 저해효과를 보였다. The experimental results, Table 12, the red pepper and garlic were 7% and 2.8% was added at concentrations of kimchi 0.05㎎ / mL as shown in the cancer cells was more than 50% viability inhibition effect. 반면 0.1㎎/mL의 처리농도에서는 고춧가루 10.5%, 마늘 5.2%, 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 김치와 1% 초피 첨가김치, 1% 첨차분말 첨가김치 및 유기배추김치가 50%이상 AGS 인체 위암세포의 생존을 저해함을 알 수 있었다(p<0.05). In contrast, concentration of 0.1㎎ / mL 10.5% red pepper powder, garlic, 5.2% and 7%, the red pepper and garlic, respectively, 2.8% and 1% Chopi adding Kimchi Kimchi, Kimchi 1% cheomcha powder and organic cabbage 50% AGS or more was found to be inhibited the survival of the human stomach cancer cells (p <0.05). 또 표 13에 나타낸 바와 같이 HT-29 인체 결장암세포를 이용하여 13종류의 김치 메탄올 추출물에 대해 SRB assay를 실시한 결과를 나타낸 바와 같이 고춧가루를 표준화 김치에 비해 3배(10.5%) 첨가한 김치, 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 배추김치의 시료가 높은 HT-29 결장암세포의 생존 저해효과를 보였다(p<0.05). In Table 13, in the manner described using the HT-29 human colon carcinoma cells as 13 kinds of kimchi methanol extract by the pepper as shown the result of the SRB assay is added three times (10.5%) compared to the normalized kimchi for kimchi shown in, pepper and 7%, 2.8%, a high sample HT-29 of each cabbage is added garlic showed a survival of colon cancer cells the inhibitory effect (p <0.05). 또한 갓, 초피, 알긴산 나트륨, 첨차분말을 첨가한 김치와 유기배추김치가 50% 이상 결장암세포의 생존을 저해함을 알 수 있었다(p<0.05). In addition, it was found that freshly, Chopi, sodium alginate, inhibiting the survival of more than cheomcha powder and organic cabbage kimchi was added to the 50% cancer cells (p <0.05). 표 14는 13종류 배추김치(15℃→5℃ 발효, pH 4.3) 메탄올 추출물의 HL-60 인체 혈액암세포의 생존 저해효과를 SRB assay로 비교한 결과이다. Table 14 shows the results of comparing the 13 kinds of cabbage (15 ℃ → 5 ℃ fermentation, pH 4.3) the methanol extract of HL-60 inhibited survival of human blood cancer effect in SRB assay. 0.1㎎/mL의 처리농도에서 고춧가루 10.5% 첨가한 김치, 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 김치와 초피를 1% 첨가한 김치 및 유기배추김치가 표준화 배추김치에 비해 HL-60 인체 혈액암세포의 생존을 더 크게 억제하였다(p<0.05). 0.1㎎ / mL was added 10.5% red pepper powder in concentrations of sauerkraut, red pepper and garlic to a 7%, 2.8%, was added a kimchi and Chopi added 1% and organic cabbage kimchi is compared with the standardized cabbage HL-60 human It inhibited the viability of blood cancer cells more significantly (p <0.05). 이는 다른 인체 암세포에서와의 결과와도 유사한 것으로, 고춧가루, 마늘, 초피 및 유기배추는 배추김치에 있어서 항암 기능성을 향상시킬 수 있는 부재료임을 알 수 있었다. This was found to be as similar to the results of Figure and in the other human cancer cells, red pepper powder, garlic, cabbage and organic Chopi sub material to enhance the anti-cancer functionality in Kimchi. 표 15은 MG-63 인체 골육암세포에 대한 13종류의 배추김치 메탄올 추출물의 생존 저해효과를 SRB assay로 살펴 본 다른 인체 암세포 즉 위암, 결장암, 혈액암에서보다 낮은 생존 저해효과를 보였다. Table 15 showed the MG-63 human cancer cells at the other by the SRB assay viability inhibition effect of 13 kinds of Chinese cabbage kimchi methanol extract on human cancer cells golyuk i.e. gastric cancer, colon cancer, than the low survival effect of inhibition in the blood cancer. 고춧가루 7%, 마늘 2.8%를 첨가한 배추김치만이 0.1㎎/mL의 처리 농도에서 40%의 저해효과를 보임을 관찰할 수 있었다(p<0.05). Chinese cabbage kimchi was pepper was added to 7%, 2.8% garlic can be observed show the inhibitory effect of 40% at the concentration of 0.1㎎ / mL (p <0.05).

부재료가 첨가된 배추김치 * 메탄올 추출물의 SRB 분석법에 의한 AGS 인체위암세포 생존저해효과 AGS human stomach cancer cell viability inhibition effect by the SRB assay of the sub material is added to the methanol extract cabbage * 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 510 OD 510 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.757±0.036 a 0.757 ± 0.036 a 0.757±0.036 0.757 ± 0.036 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.691±0.076 ab (9) 1) 0.691 ± 0.076 ab (9) 1 ) 0.472±0.006 b (38) 0.472 ± 0.006 b (38) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.667±0.067 ab (12) 0.667 ± 0.067 ab (12) 0.328±0.068 cde (57) 0.328 ± 0.068 cde (57) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.616±0.105 ab (19) 0.616 ± 0.105 ab (19) 0.308±0.017 de (59) 0.308 ± 0.017 de (59) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.339±0.047 c (55) 0.339 ± 0.047 c (55) 0.251±0.013 e (67) 0.251 ± 0.013 e (67) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.411±0.025 c (46) 0.411 ± 0.025 c (46) 0.399±0.093 bcd (47) 0.399 ± 0.093 bcd (47) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.653±0.021 ab (14) 0.653 ± 0.021 ab (14) 0.389±0.076 bcd (49) 0.389 ± 0.076 bcd (49) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.720±0.050 ab (5) 0.720 ± 0.050 ab (5) 0.200±0.005 e (74) 0.200 ± 0.005 e (74) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.691±0.049 ab (9) 0.691 ± 0.049 ab (9) 0.434±0.012 bc (43) 0.434 ± 0.012 bc (43) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.687±0.114 ab (9) 0.687 ± 0.114 ab (9) 0.516±0.161 b (32) 0.516 ± 0.161 b (32) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.389±0.109 c (49) 0.389 ± 0.109 c (49) 0.519±0.075 b (31) 0.519 ± 0.075 b (31) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.393±0.041 c (48) 0.393 ± 0.041 c (48) 0.397±0.066 bcd (48) 0.397 ± 0.066 bcd (48) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.583±0.008 b (23) 0.583 ± 0.008 b (23) 0.201±0.027 e (73) 0.201 ± 0.027 e (73) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.663±0.107 ab (12) 0.663 ± 0.107 ab (12) 0.294±0.003 de (61) 0.294 ± 0.003 de (61) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~e 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ e represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

부재료가 첨가된 배추김치 * 메탄올 추출물의 SRB 시험법에 의한 HT-29 인체결장암세포의 생존저해효과 HT-29 human colon cancer cell survival inhibitory effect of by the SRB test sub material of the cabbage was added methanol extract * Act 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 510 OD 510 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.718±0.072 a 0.718 ± 0.072 a 0.638±0.072 a 0.638 ± 0.072 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.443±0.030 c (38) 2) 0.443 ± 0.030 c (38) 2 ) 0.460±0.038 bc (36) 0.460 ± 0.038 bc (36) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.479±0.005 c (33) 0.479 ± 0.005 c (33) 0.196±0.047 f (73) 0.196 ± 0.047 f (73) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.711±0.021 a (1) 0.711 ± 0.021 a (1) 0.498±0.029 b (31) 0.498 ± 0.029 b (31) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.402±0.046 c (44) 0.402 ± 0.046 c (44) 0.038±0.035 g (95) 0.038 ± 0.035 g (95) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.590±0.008 b (18) 0.590 ± 0.008 b (18) 0.331±0.032 e (54) 0.331 ± 0.032 e (54) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.439±0.024 c (39) 0.439 ± 0.024 c (39) 0.514±0.031 b (28) 0.514 ± 0.031 b (28) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.407±0.067 c (43) 0.407 ± 0.067 c (43) 0.329±0.047 e (54) 0.329 ± 0.047 e (54) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.596±0.005 b (17) 0.596 ± 0.005 b (17) 0.412±0.022 cd (35) 0.412 ± 0.022 cd (35) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.703±0.026 a (2) 0.703 ± 0.026 a (2) 0.482±0.042 b (33) 0.482 ± 0.042 b (33) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.717±0.062 a (0) 0.717 ± 0.062 a (0) 0.360±0.006 de (50) 0.360 ± 0.006 de (50) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.668±0.027 ab (7) 0.668 ± 0.027 ab (7) 0.308±0.044 e (57) 0.308 ± 0.044 e (57) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.394±0.030 c (45) 0.394 ± 0.030 c (45) 0.342±0.007 e (52) 0.342 ± 0.007 e (52) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.448±0.033 c (38) 0.448 ± 0.033 c (38) 0.345±0.044 e (52) 0.345 ± 0.044 e (52) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~g 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ g represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

부재료를 첨가한 다양한 배추김치 * 메탄올 추출물의 SRB 시험법에 의한 HL-60 인체 혈액암세포 생존저해효과 HL-60 human blood cancer cell viability inhibition effect by the SRB assay the various sub material was added to the methanol extract cabbage * 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 510 OD 510 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.872±0.012 a 0.872 ± 0.012 a 0.872±0.012 a 0.872 ± 0.012 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.635±0.023 b (27) 1) 0.635 ± 0.023 b (27) 1 ) 0.198±0.079 cdef (77) 0.198 ± 0.079 cdef (77) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.425±0.016 def (51) 0.425 ± 0.016 def (51) 0.050±0.022 g (94) 0.050 ± 0.022 g (94) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.520±0.060 cd (40) 0.520 ± 0.060 cd (40) 0.221±0.030 cde (75) 0.221 ± 0.030 cde (75) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.366±0.016 f (49) 0.366 ± 0.016 f (49) 0.146±0.132 defg (83) 0.146 ± 0.132 defg (83) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.449±0.032 def (49) 0.449 ± 0.032 def (49) 0.287±0.030 cd (67) 0.287 ± 0.030 cd (67) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.362±0.065 f (59) 0.362 ± 0.065 f (59) 0.230±0.023 cde (74) 0.230 ± 0.023 cde (74) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.335±0.087 ef (62) 0.335 ± 0.087 ef (62) 0.079±0.028 fg (91) 0.079 ± 0.028 fg (91) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.512±0.037 cde (41) 0.512 ± 0.037 cde (41) 0.271±0.081 cde (69) 0.271 ± 0.081 cde (69) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.495±0.035 cde (43) 0.495 ± 0.035 cde (43) 0.423±0.030 b (52) 0.423 ± 0.030 b (52) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.410±0.057 def (53) 0.410 ± 0.057 def (53) 0.328±0.077 bc (62) 0.328 ± 0.077 bc (62) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.595±0.022 bc (32) 0.595 ± 0.022 bc (32) 0.296±0.057 cde (65) 0.296 ± 0.057 cde (65) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.462±0.052 def (47) 0.462 ± 0.052 def (47) 0.145±0.119 defg (83) 0.145 ± 0.119 defg (83) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.493±0.088 cde (44) 0.493 ± 0.088 cde (44) 0.128±0.042 efg (85) 0.128 ± 0.042 efg (85) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~g 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ g represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

부재료를 첨가한 다양한 배추김치 * 메탄올 추출물의 SRB 시험법에 의한 MG-63 인체 골육암세포 생존저해효과 MG-63 human cancer cell survival golyuk inhibitory effect by the SRB assay the various sub material was added to the methanol extract cabbage * 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 510 OD 510 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.501±0.018 a 0.501 ± 0.018 a 0.501±0.018 a 0.501 ± 0.018 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.392±0.082 bcd (22) 1) 0.392 ± 0.082 bcd (22) 1 ) 0.366±0.014 ef (27) 0.366 ± 0.014 ef (27) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.372±0.001 bcde (26) 0.372 ± 0.001 bcde (26) 0.441±0.006 bcd (12) 0.441 ± 0.006 bcd (12) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.441±0.035 ab (12) 0.441 ± 0.035 ab (12) 0.452±0.034 abcd (10) 0.452 ± 0.034 abcd (10) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.375±0.050 bcde (25) 0.375 ± 0.050 bcde (25) 0.090±0.005 h (40) 0.090 ± 0.005 h (40) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.355±0.007 cdef (29) 0.355 ± 0.007 cdef (29) 0.299±0.002 g (18) 0.299 ± 0.002 g (18) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.441±0.044 ab (12) 0.441 ± 0.044 ab (12) 0.411±0.053 cde (20) 0.411 ± 0.053 cde (20) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.258±0.027 g (49) 0.258 ± 0.027 g (49) 0.401±0.039 de (5) 0.401 ± 0.039 de (5) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.404±0.042 bc (19) 0.404 ± 0.042 bc (19) 0.474±0.040 ab 6) 0.474 ± 0.040 ab 6) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.351±0.013 cdef (30) 0.351 ± 0.013 cdef (30) 0.469±0.055 ab (28) 0.469 ± 0.055 ab (28) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.351±0.103 cdef (30) 0.351 ± 0.103 cdef (30) 0.363±0.017 ef (9) 0.363 ± 0.017 ef (9) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.324±0.069 defg (35) 0.324 ± 0.069 defg (35) 0.456±0.008 abc (8) 0.456 ± 0.008 abc (8) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.311±0.005 efg (38) 0.311 ± 0.005 efg (38) 0.462±0.027 abc (20) 0.462 ± 0.027 abc (20) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.295±0.029 fg (41) 0.295 ± 0.029 fg (41) 0.349±0.017 f (30) 0.349 ± 0.017 f (30) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~h 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ h represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

실험예 2: MTT 분석법에서 의해 배추김치 메탄올 추출물의 항암효과 Experimental Example 2: Antitumor effect of the methanol extract by cabbage in MTT assay

본 실험예에서는 실시예 3에서 실시하였던 MTT assay와 동일한 방법으로 항암효과를 실시하였으며 실시예 3과 다른 점은 시료로 배추김치 즙액을 사용치 않고 배추김치 메탄올 추출물을 사용하였다. This experimental example in the exemplary anti-cancer effect was performed in the same manner as in Example 3 who MTT assay was used as in Example 3 and the difference is without using the Kimchi juice into the sample cabbage methanol extract. 실험결과, 표 16에 나타낸 바와 같이 상기 실험예 1의 SRB assay 결과와 유사하게 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가한 김치, 초피 첨가김치, 키토산 올리고당 첨가김치, 첨차분말 첨가 김치와 유기배추김치가 AGS 인체 위암세포의 생존을 크게 저해함을 알 수 있었다(p<0.05). Experimental results table as shown at 16 in analogy to SRB assay results of the above Experimental Example 1 by the addition of red pepper and garlic in a high concentration kimchi, Chopi Kimchi, chitosan oligosaccharide Kimchi, cheomcha powdered Kimchi and organic cabbage the AGS human it was found that significantly inhibit the survival of the above cancer cells (p <0.05). 특히 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8% 첨가한 김치, 초피 첨가김치 및 유기배추김치가 90% 이상의 높은 암세포 생존 저해효과를 보였다. In particular, it showed 7% of the red pepper and garlic, respectively, 2.8%, was added Kimchi, Kimchi Chopi and organic cabbage is inhibited at least 90% more effective cancer cell survival. 이 결과는 실시예 3에서 즙액을 이용한 in vitro 항암실험에서도 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가한 김치, 초피 첨가김치 및 유기배추김치가 위암세포의 생존을 크게 저해하는 것과 일치하는 결과였다. The result was the result of Example in vitro using the juice in the third anti-cancer experiment in kimchi with addition of red pepper and garlic in a high concentration, and an organic Chopi Kimchi Kimchi is consistent with those that significantly inhibit the viability of cancer cells above. 따라서 관능성, 기능성, 저장성을 고려하여 암예방김치의 개발이 가능함을 알 수 있었다. Therefore, considering the functional, functional, Zhejiang could see the possible development of cancer kimchi. 표 17에는 MTT assay로 HT-29 인체 결장암세포의 생존에 미치는 효과를 비교한 결과를 나타낸 것으로 표준화 배추김치에 비해 3배의 고춧가루를 첨가한 김치(10.5%), 고춧가루와 마늘을 각각 2배씩 첨가한 김치 및 유기배추김치가 높은 결장암세포 생존 저해효과를 보였으며, 이외에도 갓, 알긴산 나트륨, 첨차분말 첨가 김치도 높은 저해효과를 보였다(p<0.05). Table 17 shows MTT assay in HT-29 human colon cancer survival, respectively 2-fold was added to the batching shown that kimchi (10.5%) was added to a three-fold red pepper powder compared to the standardized cabbage a result, the red pepper and garlic effect on the cells Kimchi and showed the organic cabbage high colon cancer cell survival, inhibiting effect, in addition showed a fresh, sodium alginate, powdered Kimchi cheomcha high inhibitory effect (p <0.05). 표 18에는 MTT assay를 통하여 13종류 배추김치 시료의 HL-60 인체 혈액암세포의 생존 저해효과를 나타낸 것으로 상기 실험예 1의 SRB assay에서 처럼 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가한 김치, 초피 첨가김치 및 유기배추김치가 표준화 배추김치에 비해 혈액암세포의 생존을 더 크게 억제함을 관찰할 수 있었다(p<0.05). Table 18 13 kinds of Chinese cabbage kimchi samples of HL-60 human blood illustrates the viability inhibition effect of tumor cells, as in the SRB assay in Experimental Example 1 Kimchi by the addition of red pepper and garlic in a high concentration, Chopi Kimchi and organic through the MTT assay It was observed that the cabbage is larger inhibit survival of blood cancer cells as compared to standardized cabbage (p <0.05). 특히 고춧가루와 마늘을 표준화 배추김치의 2배씩 첨가한 배추김치는 0.05㎎/㎖의 첨가농도에서도 50%이상의 저해효과를 보였으며, 0.1㎎/㎖의 처리농도에서는 91%의 매우 높은 혈액암세포 생존 저해효과를 나타내었다. In particular, a cabbage was added 2-fold of standard cabbage the red pepper and garlic is 0.05㎎ / ㎖ concentration of even showed a 50% or more inhibitory effect, 0.1㎎ / ㎖ concentration of the inhibitory high blood cancer cell survival of 91% It shows the effect. 또 표 19에는 MTT assay를 통하여 13종류 배추김치 시료가 MG-63 골육암세포의 생존에 미치는 효과를 비교한 결과를 나타냈다. In Table 19 are shown the results of the 13 kinds of cabbage sample is compared to the effect on the survival of cancer cells, MG-63 golyuk through MTT assay. 0.1㎎/㎖의 처리농도에서 고춧가루와 마늘을 표준화 배추김치에 비해 2배씩 첨가한 김치와 초피를 1% 첨가한 김치만이 50%의 골육암세포의 생존 저해효과를 보임을 알 수 있었다(p<0.05). 0.1㎎ / ㎖ in concentration of the kimchi and pepper was added to 2-fold by adding Kimchi and Chopi than the garlic standardization Kimchi 1% was found to show a survival of 50% of the inhibitory effect golyuk cancer cells (p <0.05 ).

부재료를 첨가한 배추김치 메탄올 추출물의 MTT assay 분석법에 의한 AGS 인체 위암세포 생존저해효과 AGS human stomach cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay method of the cabbage was added to the methanol extract sub material 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 540 OD 540 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.747±0.004 a 0.747 ± 0.004 a 0.747±0.004 a 0.747 ± 0.004 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.491±0.087 bc (34) 1) 0.491 ± 0.087 bc (34) 1 ) 0.328±0.045 bc (57) 0.328 ± 0.045 bc (57) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.393±0.112 c (47) 0.393 ± 0.112 c (47) 0.152±0.055 d (80) 0.152 ± 0.055 d (80) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.511±0.122 bc (32) 0.511 ± 0.122 bc (32) 0.071±0.017 de (91) 0.071 ± 0.017 de (91) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.418±0.023 c (44) 0.418 ± 0.023 c (44) 0.074±0.029 de (90) 0.074 ± 0.029 de (90) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.517±0.041 b (31) 0.517 ± 0.041 b (31) 0.395±0.069 bc (47) 0.395 ± 0.069 bc (47) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.513±0.048 bc (31) 0.513 ± 0.048 bc (31) 0.380±0.009 bc (49) 0.380 ± 0.009 bc (49) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.400±0.063 c (47) 0.400 ± 0.063 c (47) 0.015±0.010 e (98) 0.015 ± 0.010 e (98) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.432±0.045 bc (42) 0.432 ± 0.045 bc (42) 0.455±0.013 b (39) 0.455 ± 0.013 b (39) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.453±0.074 bc (39) 0.453 ± 0.074 bc (39) 0.331±0.038 c (56) 0.331 ± 0.038 c (56) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.444±0.074 bc (41) 0.444 ± 0.074 bc (41) 0.114±0.038 de (85) 0.114 ± 0.038 de (85) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.400±0.011 c (47) 0.400 ± 0.011 c (47) 0.462±0.025 b (38) 0.462 ± 0.025 b (38) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.132±0.006 d (82) 0.132 ± 0.006 d (82) 0.082±0.026 de (89) 0.082 ± 0.026 de (89) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.449±0.046 bc (40) 0.449 ± 0.046 bc (40) 0.064±0.021 de (91) 0.064 ± 0.021 de (91) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~e 는 Duncan's multiple range test의 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ e denotes a significant difference (p <0.05) in the Duncan's multiple range test.

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 MTT assay 분석법에 의한 HT-29 인체 결장암세포 생존저해효과 HT-29 human colon cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay method of the Kimchi - methanol extract was added to sub material 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 540 OD 540 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.434±0.060 a 0.434 ± 0.060 a 0.594±0.001 a 0.594 ± 0.001 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.385±0.019 b (11) 1) 0.385 ± 0.019 b (11) 1 ) 0.257±0.027 cd (60) 0.257 ± 0.027 cd (60) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.304±0.042 c (30) 0.304 ± 0.042 c (30) 0.124±0.016 ef (79) 0.124 ± 0.016 ef (79) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.397±0.042 b (9) 0.397 ± 0.042 b (9) 0.251±0.037 cd (58) 0.251 ± 0.037 cd (58) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.297±0.036 c (36) 0.297 ± 0.036 c (36) 0.081±0.021 f (86) 0.081 ± 0.021 f (86) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.297±0.036 c (32) 0.297 ± 0.036 c (32) 0.189±0.016 de (68) 0.189 ± 0.016 de (68) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.338±0.010 c (22) 0.338 ± 0.010 c (22) 0.427±0.031 b (28) 0.427 ± 0.031 b (28) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.390±0.029 b (10) 0.390 ± 0.029 b (10) 0.292±0.067 c (51) 0.292 ± 0.067 c (51) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.377±0.012 b (13) 0.377 ± 0.012 b (13) 0.287±0.053 c (52) 0.287 ± 0.053 c (52) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.393±0.046 b (9) 0.393 ± 0.046 b (9) 0.430±0.024 b (28) 0.430 ± 0.024 b (28) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.142±0.073 a (2) 0.142 ± 0.073 a (2) 0.292±0.026 c (51) 0.292 ± 0.026 c (51) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.438±0.061 ab (1) 0.438 ± 0.061 ab (1) 0.134±0.016 ef (77) 0.134 ± 0.016 ef (77) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.276±0.075 c (36) 0.276 ± 0.075 c (36) 0.148±0.010 ef (75) 0.148 ± 0.010 ef (75) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.250±0.036 c (42) 0.250 ± 0.036 c (42) 0.089±0.039 f (85) 0.089 ± 0.039 f (85) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~f 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ f represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 MTT assay 분석에 의한 HL-60 인체 혈액암세포 생존저해효과 HL-60 human blood cancer cell viability inhibition effect by the MTT assay analysis of the methanol extract was added to sub material cabbage * 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 540 OD 540 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.507±0.078 a 0.507 ± 0.078 a 0.507±0.078 a 0.507 ± 0.078 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.418±0.037 abc (18) 1) 0.418 ± 0.037 abc (18) 1 ) 0.109±0.015 ef (79) 0.109 ± 0.015 ef (79) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.302±0.002 def (40) 0.302 ± 0.002 def (40) 0.089±0.017 ef (82) 0.089 ± 0.017 ef (82) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.395±0.047 bcd (22) 0.395 ± 0.047 bcd (22) 0.081±0.027 f (84) 0.081 ± 0.027 f (84) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.222±0.030 f (56) 0.222 ± 0.030 f (56) 0.044±0.011 f (91) 0.044 ± 0.011 f (91) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.459±0.043 ab (10) 0.459 ± 0.043 ab (10) 0.277±0.055 c (45) 0.277 ± 0.055 c (45) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.430±0.111 ab (15) 0.430 ± 0.111 ab (15) 0.067±0.039 f (87) 0.067 ± 0.039 f (87) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.361±0.007 bcde (28) 0.361 ± 0.007 bcde (28) 0.050±0.059 f (90) 0.050 ± 0.059 f (90) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.400±0.023 abcd (21) 0.400 ± 0.023 abcd (21) 0.363±0.008 b (28) 0.363 ± 0.008 b (28) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.440±0.040 bcd (13) 0.440 ± 0.040 bcd (13) 0.234±0.039 cd (53) 0.234 ± 0.039 cd (53) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.409±0.012 abcd (19) 0.409 ± 0.012 abcd (19) 0.215±0.061 cd (58) 0.215 ± 0.061 cd (58) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.463±0.118 ab ( 9) 0.463 ± 0.118 ab (9) 0.404±0.029 b (20) 0.404 ± 0.029 b (20) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.316±0.093 cdef (37) 0.316 ± 0.093 cdef (37) 0.161±0.066 de (68) 0.161 ± 0.066 de (68) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.263±0.009 ef (45) 0.263 ± 0.009 ef (45) 0.099±0.056 ef (81) 0.099 ± 0.056 ef (81) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~f 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ f represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 MTT assay 분석법에 의한 MG-63 인체 골육암세포 생존저해효과 MG-63 human cancer cell survival golyuk inhibitory effect by the MTT assay method of the Kimchi - methanol extract was added to sub material 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 540 OD 540 0.05 0.05 0.1 0.1 대조군 Controls 0.622±0.05 a 0.622 ± 0.05 a 0.622±0.05 a 0.622 ± 0.05 a 표준화 배추김치 Standardization Kimchi 0.465±0.001 bc (25) 1) 0.465 ± 0.001 bc (25) 1 ) 0.450±0.043 bcde (28) 0.450 ± 0.043 bcde (28) 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 0.275±0.047 d (56) 0.275 ± 0.047 d (56) 0.331±0.007 cde (47) 0.331 ± 0.007 cde (47) 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 0.413±0.016 bc (34) 0.413 ± 0.016 bc (34) 0.481±0.066 bcd (23) 0.481 ± 0.066 bcd (23) 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 0.422±0.047 bc (32) 0.422 ± 0.047 bc (32) 0.294±0.020 e (53) 0.294 ± 0.020 e (53) 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 0.426±0.033 bc (32) 0.426 ± 0.033 bc (32) 0.365±0.080 cde (41) 0.365 ± 0.080 cde (41) 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 0.437±0.055 bc (30) 0.437 ± 0.055 bc (30) 0.521±0.086 abc (16) 0.521 ± 0.086 abc (16) 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 0.417±0.130 bc (33) 0.417 ± 0.130 bc (33) 0.306±0.185 de (51) 0.306 ± 0.185 de (51) 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 0.590±0.124 a (5) 0.590 ± 0.124 a (5) 0.598±0.162 a (4) 0.598 ± 0.162 a (4) 1% 인삼 가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 0.358±0.130 cd (42) 0.358 ± 0.130 cd (42) 0.436±0.134 cde (30) 0.436 ± 0.134 cde (30) 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 0.469±0.082 bc (25) 0.469 ± 0.082 bc (25) 0.500±0.109 abc (20) 0.500 ± 0.109 abc (20) 1% 알긴산 나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 0.507±0.013 ab (19) 0.507 ± 0.013 ab (19) 0.410±0.040 cde (34) 0.410 ± 0.040 cde (34) 1% 첨차분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 0.532±0.038 ab (15) 0.532 ± 0.038 ab (15) 0.384±0.052 cde (38) 0.384 ± 0.052 cde (38) 유기배추 김치 Organic cabbage 0.448±0.004 bc (24) 0.448 ± 0.004 bc (24) 0.371±0.062 cde (40) 0.371 ± 0.062 cde (40) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) * After 1 days fermentation at 15 ℃ that kimchi fermentation sample until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) a~e 는 Duncan's multiple range test에서 유의성 있는 차이(p<0.05)를 나타낸다. a ~ e represents the difference (p <0.05) with significance in the Duncan's multiple range test.

실험예 3: 배추김치 메탄올 추출물의 암세포 성장억제 효과 Experimental Example 3: cabbage methanol Cytotoxic Effects of Extracts

본 실험예에서 부착세포인 AGS 인체 위암세포, HT-29 인체 결장암 세포, MG-63 인체 골육암세포를 실시예 2의 배양방법과 동일한 방법으로 배양한 후 원심분리하여 집적된 암세포를 골고루 분산되도록 잘 혼합하여 24웰 플레이트에 20,000cells/mL 농도로 접종(seeding)하여 하룻밤 배양하고 암세포가 플레이트에 부착되었음을 확인한 후, 10% FCS가 있는 배지에 시료를 첨가하여 이틀에 한번씩 배양액을 교체하면서 37℃, 5% CO 2 배양기에서 배양하였다. Adherent cells in AGS human stomach cancer cells in this experiment, HT-29 well were cultured with human colon cancer cells, the same method as the culture method of the MG-63 carried the human golyuk cancer Example 2 to uniformly disperse the cancer cells integrated by centrifugation a mixed 20,000cells / mL concentration in 24-well plate inoculated (seeding) and cultured overnight, and 37 ℃ while cancer cells after confirming that the adhesion to the plate, and the sample added to the medium with 10% FCS replaced the culture medium every two days, and cultured in 5% CO 2 incubator. 발효시킨 배추김치 메탄올 추출물 시료는 2일마다 10㎕/mL medium씩 농도별로 첨가한 새로운 배지로 교체하고 배양 6일 후에 증식된 세포를 0.05% 트립신-0.02% EDTA 효소로 분리하여 각 세포수를 헤모사이토메터(hemocytometer)로 측정하여 대조군과 비교하여 암세포 성장억제효과를 관찰하였다. Fermented Kimchi methanol extract samples by every two days replaced with fresh medium supplemented by 10㎕ / mL medium by concentration and separating the cell proliferation after 6 days incubation in 0.05% trypsin EDTA enzyme -0.02% hemo the number of each cell by it measured by Saito meter (hemocytometer) compared to the control was observed for tumor growth inhibiting effect. 실험결과, 표 20에 나타낸 바와 같이 상기 실험예 1과 실험예 2의 SRB, MTT assay에서 처럼 고춧가루, 마늘을 고농도로 첨가한 김치와 초피를 첨가한 김치 및 유기배추김치가 위암세포의 성장을 억제하는 효과가 표준화 배추김치에 비해 높음을 알 수 있었다(p<0.05). The experimental results, the above Experimental Example 1 and Experimental Example 2 of the SRB, as in the MTT assay pepper powder, the addition of the kimchi and Chopi the addition of garlic at a high concentration kimchi and organic cabbage as shown in Table 20 inhibit the growth of stomach cancer cells the effect was found higher than the standardized cabbage for (p <0.05). 특히 1% 초피를 첨가한 김치는 대조군 48×10 4 /㎖의 세포수인데 비해 8×10 4 /㎖(83%)로 관찰되어 성장이 크게 억제됨을 알 수 있었다. In particular, the addition of 1% kimchi Chopi it was found that the significantly inhibited growth was observed in the control group 48 × 10 4 inde / ㎖ in cell number 8 × 10 4 / ㎖ (83 %) compared. 또 표 21에는 김치 시료를 처리하면서 6일간 배양한 후 HT-29 결장암세포의 성장 억제효과를 검토한 결과를 나타낸 것으로 10.5% 고춧가루 첨가김치, 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가김치와 1% 초피 첨가김치 및 유기배추김치가 HT-29 결장암세포의 성장을 크게 저해함을 알 수 있었다(p<0.05). In Table 21 After 6 days incubation, while processing kimchi sample HT-29 colon 10.5% shows an Reviewing growth inhibitory effect of the cell pepper Kimchi, 7% red pepper powder + 2.8% garlic Kimchi and 1% Chopi added Kimchi and organic cabbage was found that significantly inhibit the growth of HT-29 colon cancer cells (p <0.05). 특히 고춧가루와 마늘을 2배씩 첨가한 김치가 결장암세포의 성장을 가장 크게 억제하여 대조군의 경우 23×10 4 /㎖의 세포수에 비해 9×10 4 /㎖(61%)로 감소함을 알 수 있었다. In particular, found to be 23 × 10 4 / ㎖ of the number reduced by 9 × 10 4 / ㎖ (61 %) compared to the cell case of the kimchi with addition of red pepper and garlic doubled the control group by the greatest inhibiting the growth of cancer cells there was.

이상의 SRB, MTT assay 및 암세포 성장 억제효과를 통하여 표준화 배추김치에 비해 고춧가루와 마늘을 2 ~ 3배 첨가김치, 초피 첨가김치와 유기배추김치가 AGS 인체위암세포와 HT-29 결장암세포의 생존 및 성장을 억제함을 알 수 있었다. Survival and growth of the more SRB, MTT assay and Cytotoxic 2, the red pepper and garlic than the standardized cabbage through the effect to three times Kimchi, Chopi Kimchi and organic cabbage the AGS human stomach cancer cells and HT-29 colon carcinoma cells the were found to be suppressed.

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 AGS 인체 위암 세포에 대한 성장저해효과 The addition of sub material cabbage * growth inhibitory effect on human gastric cancer cell AGS of methanol extract 처리물 Water treatment 세포수(×10 4 /㎖) Cell number (× 10 4 / ㎖) 저해비율(%) Inhibition ratio (%) 대조군 Controls 48.3 a 48.3 a 0 0 표준화된 배추김치 Standardized Kimchi 18.3 cd 18.3 cd 62.1 62.1 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 16.0 d 16.0 d 66.9 66.9 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 15.3 def 15.3 def 68.3 68.3 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가 김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 13.0 ef 13.0 ef 73.1 73.1 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 23.0 b 23.0 b 52.4 52.4 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 16.3 de 16.3 de 66.3 66.3 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 8.3 g 8.3 g 82.8 82.8 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 16.3 de 16.3 de 66.3 66.3 1% 인삼가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 16.0 de 16.0 de 66.9 66.9 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 19.0 cd 19.0 cd 66.7 66.7 1% 알긴산나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 13.7 ef 13.7 ef 71.6 71.6 1% 첨차 분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 20.7 bc 20.7 bc 57.1 57.1 유기배추김치 Organic cabbage 12.0 f 12.0 f 75.2 75.2 * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 a~g Duncan's multiple range test에서 유의성이 있는 차이를 나타낸다(p<0.05). * After a day at 15 ℃ fermentation represents the difference with a significance in the samples in which Kimchi a ~ g Duncan's multiple range test fermentation until a pH 4.3 at 5 ℃ (p <0.05).

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 HT-29 인체 결장암세포에 대한 성장저해효과 Growth inhibitory effect on HT-29 human colon carcinoma cells of the addition of sub material Kimchi - methanol extract 처리물 Water treatment 세포수(×10 4 /㎖) Cell number (× 10 4 / ㎖) 저해비(%) Inhibition ratio (%) 대조구 Control 23 a 23 a 0 0 표준화된 배추김치 Standardized Kimchi 16.0 b 16.0 b 30.4 30.4 10.5% 고춧가루 첨가 김치 10.5% pepper Kimchi 9.5 efg 9.5 efg 58.7 58.7 5.2% 마늘 첨가 김치 5.2% garlic kimchi 12.5 cde 12.5 cde 45.7 45.7 7% 고춧가루 + 2.8% 마늘 첨가 김치 7% + 2.8% red pepper with garlic Kimchi 7.5 g 7.5 g 67.4 67.4 5% 갓 첨가 김치 5% of freshly added kimchi 14.5 bcd 14.5 bcd 37.0 37.0 5% 청각 첨가 김치 5% hearing Kimchi 12.0 def 12.0 def 47.8 47.8 1% 초피 첨가 김치 1% Chopi Kimchi 9.0 fg 9.0 fg 60.9 60.9 1% 계피가루 첨가 김치 1% of cinnamon powder Kimchi 14.0 bcd 14.0 bcd 39.1 39.1 1% 인삼가루 첨가 김치 1% ginseng powder Kimchi 14.0 bcd 14.0 bcd 39.1 39.1 1% 키토산 올리고당 첨가 김치 1% chitosan oligosaccharide Kimchi 15.5 bc 15.5 bc 32.6 32.6 1% 알긴산나트륨 첨가 김치 1% sodium alginate was added kimchi 11.5 def 11.5 def 50.0 50.0 1% 첨차 분말 첨가 김치 1% cheomcha powdered Kimchi 10.5 efg 10.5 efg 54.3 54.3 유기배추김치 Organic cabbage 10.5 efg 10.5 efg 54.3 54.3 * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 a~g Duncan's multiple range test에서 유의성이 있는 차이를 나타낸다(p<0.05). * After a day at 15 ℃ fermentation represents the difference with a significance in the samples in which Kimchi a ~ g Duncan's multiple range test fermentation until a pH 4.3 at 5 ℃ (p <0.05).

실험예 1, 2 및 3의 결과로부터 부재료의 종류와 양을 달리하여 담근 13종류의 배추김치 메탄올 추출물은 AGS 인체 위암세포, HT-29 인체 결장암세포 및 HL-60 인체 혈액암세포의 생존을 크게 저해하는 반면 MG-63 인체 골육암세포에 대해서는 다른 인체 암세포에 비해서는 다소 낮은 저해 효과를 보였다. Experimental Example 1, 2, and 13 kinds of Chinese cabbage kimchi methanol extract dipped by varying the type and amount of the sub material from the result of the 3 AGS human stomach cancer cell, HT-29 human colon carcinoma cells and HL-60 significantly inhibit the survival of human blood cancer cells whereas MG-63 for human golyuk cancer cells showed a somewhat lower inhibitory activity than any other human cancer. 고춧가루와 마늘을 고농도로 첨가한 김치, 초피를 첨가한 김치와 유기배추김치가 표준화 배추김치에 비해 그 저해효과가 훨씬 큼을 알 수 있었다. The red pepper and garlic was added to a high concentration kimchi, sauerkraut, and the addition of Chopi organic cabbage was found that the inhibitory effect is great compared to the more standard cabbage. 기능성 식품으로 알려진 인삼가루, 알긴산 나트륨과 키토산 올리고당은 그 자체의 항암 기능성은 알려져 있으나, 이를 김치에 첨가하였을 경우는 항돌연변이 및 항암 기능성을 높이는데 그다지 효과를 보이지 않았고 오히려 전통적으로 사용되어져 오던 재료인 고춧가루, 마늘과 초피를 첨가하거나 유기배추를 사용한 김치가 그 기능성이 더 증진됨을 알 수 있었다. Ginseng powder, sodium alginate and chitosan oligosaccharide, known as functional foods is that cancer functionality itself, but known, when adding it to the kimchi did not show much effect in increasing the antimutagenic and anticancer functional materials rather ohdeon been traditionally used addition of red pepper powder, garlic and Chopi or there is a kimchi using organic cabbage be seen that the functionality is further enhanced.

또한 저온에서 발효시킨 김치가 in vitro 항암효과가 컸으며, AGS 인체위암세포를 이용한 실험에서는 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 발효시킨 김치가 항암효과가 컸다. In addition, the kimchi was fermented at a low temperature keot the in vitro anti-cancer effect, AGS the human body in the above experiments with cancer cells in which Kimchi fermented at 5 ℃ After a day at 15 ℃ fermentation was greater the antitumor activity. 이는 앞선 실험에서와 같은 경향이다. This is the same tendency as in the previous experiment. HT-29 인체결장암세포에 대해서는 15℃와 25℃에서 발효시킨 김치가 암세포 생존 및 억제효과가 높았다. HT-29 human colon carcinoma cells which are for the kimchi fermentation at 15 ℃ and 25 ℃ were the tumor survival and inhibitory effects. 그러나 저온에서 발효시킨 김치가 맛이 좋고, 위암과 관련된 효과가 높았으므로 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 발효시키는 방법을 선택하였다. However, a good taste in which Kimchi fermentation at a low temperature, because the effect associated with gastric cancer was higher were selected after one days fermentation at 15 ℃ method of fermentation in 5 ℃. 항돌연변이 및 항암효과는 시료의 추출방법, 시료의 농도 및 발효온도, 실험방법에 따라 달라지나 일반적으로 저온(5℃)에서 적숙기(pH 4.3)까지 발효시킨 김치가 가장 높다. Antimutagenic and anticancer effect extraction of a sample method, the concentration of the sample and the fermentation temperature, over based on the test method typically is highest kimchi fermented to ever Maturity (pH 4.3) at low temperature (5 ℃).

실시예 6: 항암 기능성 증진을 위한 배추김치의 레시피 조절 Example 6: A recipe control of cabbage for improving anticancer functional

본 실시에서는 상기 실시에 1∼5에서 얻은 결과에 따라 가장 우수한 항암활성을 지닌 고춧가루, 마늘, 초피, 갓의 농도를 조절한 레시피로 배추김치를 제조하고 in vitro 항돌연변이 및 항암증진 효과와 in vivo에서 마우스 대식세포의 산화질소 생성에 미치는 효과를 조사하였다. In the embodiment with the best anti-cancer activity based on the results obtained in 1-5 above in red pepper powder, garlic, Chopi, producing a cabbage in a recipe, and adjusting the concentration of freshly in vitro mutagenesis and cancer promoting effects in vivo in it examined the effects on the nitric oxide production in macrophages vs. mouse. 즉, 실시예 1과 동일한 표준화 배추김치(K-1)와 고춧가루와 마늘을 각각 7%, 2.8%를 첨가한 유기배추김치(K-2), 고춧가루, 마늘, 초피를 각각 7%, 2.8%, 0.1%를 첨가한 유기배추김치(K-3), 고춧가루, 마늘, 초피, 갓을 각각 7%, 2.8%, 0.1%, 5%를 첨가한 유기배추김치(K-4)를 제조하고 각각 15℃에서 1일간 발효시키고 pH4.3이 될 때까지 5℃에서 발효시켜 즙액과 메탄올로 추출물을 만들었다. That is, in Example 1 and 7% of the same standardized cabbage (K-1) and the organic cabbage was added to 7%, 2.8%, the red pepper and garlic, respectively (K-2), red pepper powder, garlic, Chopi respectively, 2.8% and 0.1% organic cabbage (K-3) was added, red pepper powder, garlic, Chopi, 7% freshly respectively, 2.8%, 0.1%, organic cabbage was added to 5% produced the (K-4) and each at 15 ℃ 1 ilgan until fermentation was pH4.3 be fermented in 5 ℃ made to extract sap and methanol. 이 즙액과 메탄올 추출물은 in vitro에서 항돌연변이 및 항암증진효과와 in vivo에서 마우스 대식세포의 산화질소 생성에 미치는 효과를 확인하기 위한 시료로 준비하였다. The juice and the methanol extract was prepared as a sample for confirming the effect of antimutagenic and anti-cancer enhancing effect and nitric oxide production in mouse macrophages in vivo and in in vitro.

실시 예 7 : 배추김치 메탄올 추출물의 항돌연변이 효과 Example 7: The antimutagenic effect of Chinese cabbage kimchi methanol extract

실험예 1 : Ames test에 의한 항돌연변이 효과 Experimental Example 1: antimutagenic effect by the Ames test

표 22은 표준화 배추김치(K-1), 7% 고춧가루와 2.8% 마늘을 더 첨가한 배추김치(K-2), 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루 첨가 배추김치(K-3), 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루, 5% 갓 첨가 배추김치(K-4) 4종류의 배추김치를 제조하여 Ames test에서 항돌연변이 효과를 살펴본 결과이다. Table 22 is standardized cabbage (K-1), 7% of Chinese cabbage kimchi was further added hot pepper powder, and 2.8% of garlic (K-2), 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi Powder cabbage (K-3 ), the result to prepare a 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi powder, 5% of freshly added cabbage (K-4) 4 kinds of cabbage examining the antimutagenic effect in the Ames test. 1.25㎎/plate첨가농도에서 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루, 5% 갓 첨가 배추김치(K-4)가 65%로 훨씬 높은 처해효과를 보였고, 2.5㎎/plate 처리농도에서는 표준화 배추김치(K-1)는 45% 항돌연변이 효과를 보였으나 모든 활성증진 김치가 AFB 1 에 대해 더 높은(70% 이상) 항돌연변이 효과를 보여 춧가루, 마늘, 초피가루, 갓을 첨가하고 유기배추를 사용하는 것이 가장 배추김치의 항돌연변이 효과를 증진시킬 수 있는 것으로 나타났다. 1.25㎎ / plate at concentrations of 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi powder, 5% of the freshly added cabbage (K-4) showed a significantly higher effect subjected to 65%, 2.5㎎ / plate concentrations standardized cabbage (K-1) is 45% wherein the mutant showed an effect or all of the active enhancement kimchi showed higher antimutagenic effect (70% or more) for AFB 1 was added to chili powder, garlic, Chopi powder, fresh and organic It shows that it is possible to enhance the antimutagenic effect of the cabbage to use the Chinese cabbage.

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 Salmonella typhimurium TA100균주에서 AFB 1 (2.0㎍/plate)에 대한 항돌연변이 효과 Antimutagenic effect for the addition of sub material cabbage * in Salmonella typhimurium TA100 strain in the methanol extract to AFB 1 (2.0㎍ / plate) 김치시료 Kimchi samples 복귀돌연변이/프레이트(㎎/프레이트) Reverse mutation / freight (㎎ / freight) 1.25 1.25 2.5 2.5 자연복귀돌연변이 Nature reverse mutation 105± 6 105 ± 6 AFB ! AFB! (Control) (Control) 706± 3 a 706 ± 3 a K-1 K-1 422±3 cd (47) 1 422 ± 3 cd (47) 1 436±45 b (45) 436 ± 45 b (45) K-2 K-2 670±33 b (19) 670 ± 33 b (19) 286±36 c (70) 286 ± 36 c (70) K-3 K-3 458±144 c (41) 458 ± 144 c (41) 232±53 c (79) 232 ± 53 c (79) K-4 K-4 317±83 d (65) 317 ± 83 d (65) 271±4 c (73) 271 ± 4 c (73) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때 까지 발효시킨 김치시료 1) 저해율K-1 : 표준화배추김치K-2 : 7% 고춧가루+2.8% 마늘 첨가 유기배추김치K-3 : 7% 고춧가루+2.8% 마늘+0.1% 초피 첨가 유기배추김치K-4 : 7% 고춧가루+2.8% 마늘+0.1% 초피+5% 갓 첨가 유기배추김치 * After a day at 15 ℃ fermented kimchi samples fermented until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) inhibition K-1: standardization cabbage K-2: 7% red pepper powder + 2.8% Garlic organic cabbage K-3 : 7% red pepper powder + 2.8% + 0.1% garlic Chopi added organic cabbage K-4: 7% red pepper powder + 2.8% + 0.1% garlic Chopi + 5% of freshly added organic cabbage

실시예 8 : 배추김치 즙액의 항암효과 Example 8: antitumor activity of the cabbage juice

실험예 1 : MTT assay에 의한 항암증진효과 Experimental Example 1: Antitumor promoting effect by the MTT assay

표 23은 표준화 배추김치(K-1), 7% 고춧가루와 2.8% 마늘을 더 첨가한 배추김치(K-2), 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루 첨가 배추김치(K-3), 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루, 5% 갓 첨가 배추김치(K-4) 4종류의 배추김치 즙액의 AGS 인체 위암세포에 대한 in vitro 항암활성을 MTT assay로 살펴본 결과이다. Table 23 shows normalized cabbage (K-1), 7% of Chinese cabbage kimchi was further added hot pepper powder, and 2.8% of garlic (K-2), 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi Powder cabbage (K-3 ), the result of 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi powder, 5% of freshly added cabbage (K-4) 4 kinds of Chinese cabbage in vitro anti-cancer activity of the AGS human stomach cancer cells of Kimchi juice examined by MTT assay . 1.0㎕/assay의 처리농도에서는 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루, 5% 갓 첨가 배추김치(K-4)가 더 높은 in vitro 항암활성을 보였으나 2.5㎕/assay의 처리농도에서는 표준화 김치가 36%의 AGS 위암세포 저해효과를 보인 반면, 3종류의 항암활성김치는 모두 60%이상의 훨씬 높은 저해효과를 보여 고춧가루, 마늘, 초피가루, 갓을 첨가하고 유기배추를 사용하는 것이 가장 배추김치의 in vitro 항암효과를 증진시킬 수 있는 것으로 나타났다. The concentration of 1.0㎕ / assay 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi powder, 5% of freshly added cabbage (K-4) is higher in vitro the concentration of the anti-cancer activity and showed 2.5㎕ / assay while the standardization kimchi showed the AGS above cancer-inhibiting effect of 36%, all three types of anti-cancer active kimchi showed more than 60% significantly higher inhibitory effect addition of red pepper powder, garlic, Chopi powder, freshly and to use an organic cabbage most It showed that can promote the in vitro anti-cancer effect of the cabbage.

부재료를 첨가한 배추김치 * 메탄올 추출물의 MTT assay 분석법 의한 AGS 인체 위암세포 생존저해효과 The addition of sub material cabbage * MTT assay method AGS human stomach cancer cell viability inhibition effect by the methanol extract Treatment(㎕/assay) Treatment (㎕ / assay) OD 540 OD 540 1.0 1.0 2.5 2.5 control control 0.738±0.016 a 0.738 ± 0.016 a 0.714±0.017 a 0.714 ± 0.017 a K-1 K-1 0.525±0.016 cd (45) 1) 0.525 ± 0.016 cd (45) 1 ) 0.574±0.016 b (36) 0.574 ± 0.016 b (36) K-2 K-2 0.615±0.014 b (26) 0.615 ± 0.014 b (26) 0.445±0.014 c (67) 0.445 ± 0.014 c (67) K-3 K-3 0.537±0.018 c (44) 0.537 ± 0.018 c (44) 0.496±0.035 c (61) 0.496 ± 0.035 c (61) K-4 K-4 0.498±0.014 d (55) 0.498 ± 0.014 d (55) 0.449±0.005 c (63) 0.449 ± 0.005 c (63) * 15℃에서 1일간 발효시킨 후 5℃에서 pH 4.3이 될 때까지 발효시킨 김치시료 1) 저해율K-1 : 표준화배추김치K-2 : 7% 고춧가루+2.8% 마늘 첨가 유기배추김치K-3 : 7% 고춧가루+2.8% 마늘+0.1% 초피 첨가 유기배추김치K-4 : 7% 고춧가루+2.8% 마늘+0.1% 초피+5% 갓 첨가 유기배추김치 * After a day at 15 ℃ fermented kimchi samples fermented until a pH 4.3 at 5 ℃ 1) inhibition K-1: standardization cabbage K-2: 7% red pepper powder + 2.8% Garlic organic cabbage K-3 : 7% red pepper powder + 2.8% + 0.1% garlic Chopi added organic cabbage K-4: 7% red pepper powder + 2.8% + 0.1% garlic Chopi + 5% of freshly added organic cabbage

실시예 9: 항암활성 증진 김치의 마우스 대식세포의 산화질소 생성에 미치는 효과 Example 9: Effects on nitric oxide production in mouse macrophages of promoting antitumor activity kimchi

산화질소(Nitric oxide;NO)는 사이토카인이나 미생물의 영향을 받아 대식세포, 호중구, 혈관내피세포, 활막표충세포, 활막섬유아세포, 연골세포등에서 생성되는 반응질소중간체(reactive nitrogen intermediates, RNI)로서 nitric oxide synthase(NOS)가 산소와 결합하여 L-알지닌을 산화시켜 NO가 생성된다. Nitrogen oxide (Nitric oxide; NO) the macrophages under the influence of cytokines and microorganisms, as neutrophils, endothelial cells, synovial pyochung cells, synovial fibroblasts, and the reaction nitrogen intermediates (reactive nitrogen intermediates, RNI) is generated, etc. chondrocytes nitric oxide synthase (NOS) is combined with oxygen, a NO is produced by oxidation of the Al with L-. 생성된 NO는 생체내에서 혈관이완물질, 신경전달물질, 면역기능조절물질로서 작용할 뿐만아니라 항미생물작용 혹은 항암작용을 일으키는 것으로 알려지고 있다. The resulting NO is becoming not only act as a vasodilator substances, neurotransmitters, immune regulation substance in the body known to cause an anti-microbial action or anti-cancer action. 표준화 배추김치(K-1), 7% 고춧가루와 2.8% 마늘을 더 첨가한 배추김치(K-2), 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루 첨가 배추김치(K-3), 7% 고춧가루, 2.8% 마늘, 0.1% 초피가루, 5% 갓 첨가 배추김치(K-4) 4종류의 배추김치를 제조하여 이를 마우스에 투여한 후 복강내 대식세포를 분리하고, 분리된 대식세포에 세균독소를 작용시킴으로서 생성될 것으로 예측되는 NO생성능을 비교하였다. Standardization cabbage (K-1), 7% red pepper powder 2.8% Chinese cabbage kimchi was further added garlic (K-2), 7% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi Powder cabbage (K-3), 7 in% red pepper powder, 2.8% garlic and 0.1% Chopi powder, 5% of freshly added cabbage (K-4) the following administration of the mouse this by producing four kinds of cabbage separating within macrophages, peritoneal, separating macrophages the NO producing ability are predicted to generate a bacterial toxin sikimeuroseo action were compared. 각 김치추출물을 마우스 구강으로 매일 0.5㎎씩 각각 투여하여 투여 3주 후의 실험군들로부터 복강내 대식세포를 분리하였다. Respectively administered per day for each 0.5㎎ kimchi extract of the mouse peritoneal macrophages my mouth were separated from the group for three weeks after administration. 분리된 대식세포에 리포폴리사카라이드(lipopolysacchride;LPS, 10㎍)를 작용시킴으로서 나타나는 산화질소(nitric oxide;NO)를 측정하였다. Lipopolysaccharide to an isolated macrophages was measured;; (NO nitric oxide) to (lipopolysacchride LPS, 10㎍) nitric oxide appears sikimeuroseo action. 대조군은 생리식염수만을 투여한 군으로 하였다. Control group was a group administered only physiological saline. 실험결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 표준화 배추김치투여군(K-1과 K-2)은 대조군보다 NO의 생성량이 다소 적었으나 고춧가루와 마늘의 첨가량을 늘리고 초피첨가(K-3)와 갓과 초피를 첨가(K-4)한 유기고활성배추김치투여군은 NO생성을 크게 증가시키는 효과를 나타내었다. Experimental results, standardized cabbage treated (K-1 and K-2) is the production of NO rather ever eoteuna Chopi added to increase the addition amount of pepper and garlic (K-3) than in the control group, as shown in Figure 1, freshly and Chopi It was added (K-4) an organic high activity cabbage treated group showed the effect of significantly increasing the NO production.

실시예 10 :항암 기능성 증진 유기 고활성 배추김치 제조 Example 10: Antitumor promoting functional organic manufacture high activity Kimchi

본 실시예에서는 상기 실시예 1 ~ 9에서 얻은 결과에 따라 가장 우수한 항암효과를 얻을 수 있는 항암 기능성 증진 배추김치의 레시피에 따라 배추김치를 제조하고 암예방증진 및 항암증진효과를 in vivo에서 조사하였다. In this embodiment, the embodiment 1-9 results best producing a cabbage and cancer promotion and anti-cancer enhancing effect according to the recipe for the anticancer functional enhancement cabbage to obtain the anti-cancer effect in accordance with the obtained in was investigated in in vivo . 즉, 실시예 1과 동일한 표준화 배추김치(CⅠ)와 유기농법으로 제조된 재료를 이용한 표준화배추김치(OCⅠ), 일반재료를 사용하고 상기 실시예 1 ~9에서 얻은 결과에 따라 표준화배추김치를 바탕으로 고춧가루, 마늘, 초피, 갓을 각각 7%, 2.8%, 0.1%, 5% 첨가한 일반배추 고활성배추김치(CⅡ) 및 상기 실시예 1 ~ 9에서 얻은 결과에 따라 가장 항암 기능성 증진 배추김치로 표준화 배추김치 바탕으로 유기배추에 고춧가루, 마늘, 초피, 갓을 각각 7%, 2.8%, 0.1%, 5% 첨가한 유기고활성배추김치(OCⅡ)를 제조하고 각각 15℃에서 1일간 발효시키고 pH 4.3이 될 때까지 5℃에서 발효시켜 동결건조한 후 메탄올 추출물을 만들었다. That is, in Example 1 and the same standardized cabbage (CⅠ) and standardized cabbage using the material prepared in organic agriculture (OCⅠ), using the general materials and based on the normalized kimchi depending on the results obtained in the above Example 1-9 as red pepper powder, garlic, Chopi, 7% freshly respectively, 2.8%, 0.1%, 5% addition of a common cabbage high activity cabbage (CⅡ) and example 1-9 the anticancer functional enhancement kimchi depending on the results obtained in the standardized cabbage on organic cabbage pepper, the garlic, Chopi, as freshly to 7%, 2.8%, 0.1%, the organic and the addition of 5% was prepared the active cabbage (OCⅡ) and 1 days fermentation at 15 ℃ respectively after freeze-dried fermented at 5 ℃ until pH 4.3 made of a methanol extract. 이 메탄올 추출물은 in vitro에서 항돌연변이 및 항암실험과 in vivo에서 Balb/c 마우스에 sarcoma-180 종양세포를 이식한 후 수명연장효과와 고형암성장저지효과를 확인하기 위한 시료로 준비하였다. The methanol extract was prepared as a sample for confirming the antimutagenic and anticancer experiment with sarcoma-180 was transplanted with the tumor cells extended life effect solid tumor growth inhibition effect on Balb / c mice in vivo and in in vitro.

실시예 11 : MTT 분석법에 의한 유기 고활성 배추김치의 항암효과 Example 11: Organic high anti-cancer effect of the active Kimchi by the MTT assay

본 실시예에서는 실시예 6에서 제조한 표준화 배추김치의 양념비(Ⅰ)와 표준화 양념비를 바탕으로 기능성을 증진시킨 양념비(Ⅱ)로 일반배추(CⅠ)김치, 유기배추(OCⅠ)김치, 일반 고활성배추(CⅡ)김치, 유기 고활성배추(OCⅡ)김치를 가지고 실시예 3에서 실시한 MTT assay와 동일한 방법으로 본 발명 항암 기능성 유기 고활성 배추김치의 항암효과를 실험하였다. In this embodiment, Examples 6 sauce standardized kimchi manufactured from a non-(Ⅰ) and standardized general cabbage a seasoning ratio as seasoning ratio (Ⅱ) which increase the functionality, based on (CⅠ) kimchi organic cabbage (OCⅠ) Kimchi, General and examined the antitumor activity of the active cabbage (CⅡ) Kimchi, organic high activity cabbage (OCⅡ) Kimchi has the embodiment of this invention as carried out in the same manner as 3 MTT assay anticancer functional organic high activity cabbage. 실험결과, 표 24에 나타낸 바와 같이 MTT assay에서 AGS 인체위암세포의 저해효과가 일반배추(CⅠ)김치는 5㎎/㎖, 10㎎/㎖에서 각각 61%, 67%를 나타낸데 비해 일반 고활성배추(CⅡ)김치는 73%, 72%로, 유기배추(OCⅡ)김치는 78%, 83%로 높게 나타났다. The experimental results, the effect of the human stomach cancer cells AGS inhibit normal cabbage (CⅠ) kimchi in MTT assay as shown in Table 24 are highly active compared to normal showing a 61% and 67%, respectively, in 5㎎ / ㎖, 10㎎ / ㎖ Chinese cabbage (CⅡ) Kimchi, 73%, 72%, organic cabbage (OCⅡ) kimchi was higher by 78%, 83%. 배추별로 보면 일반배추보다 유기배추가 높은 저해율을 보이며 표준화된 양념비(Ⅰ)보다 기능성을 증진시킨 양념비(Ⅱ)가 더 높은 저해율을 보였다. In the non-seasoned that increase the functionality than the non-marinated (Ⅰ) standard showed a higher inhibition rate than regular organic Chinese cabbage Chinese cabbage (Ⅱ) by Chinese cabbage showed a higher inhibition rate.

AGS 인체 위암세포에 배추김치 메탄올 추출물의 MTT 시험법에 의한 생존저해효과 AGS viability inhibition effect by the MTT assay of methanol extracts from the human stomach cancer cells, Chinese cabbage kimchi 처리물(㎎/㎖) Treated water (㎎ / ㎖) OD 540 OD 540 5 5 10 10 대조군 Controls 0.873±0.128 0.873 ± 0.128 0.680±0.044 0.680 ± 0.044 C 1) (Ⅰ) 김치 C 1) (Ⅰ) Kimchi 0.511±0.014 (61) 3) 0.511 ± 0.014 (61) 3) 0.443±0.031 (67) 0.443 ± 0.031 (67) OC 2) (Ⅰ) 김치 OC 2) (Ⅰ) Kimchi 0.470±0.083 (66) 0.470 ± 0.083 (66) 0.439±0.074 (71) 0.439 ± 0.074 (71) C(Ⅱ) 김치 C (Ⅱ) Kimchi 0.493±0.093 (73) 0.493 ± 0.093 (73) 0.457±0.022 (72) 0.457 ± 0.022 (72) OC(Ⅱ) 김치 OC (Ⅱ) Kimchi 0.407±0.148 (78) 0.407 ± 0.148 (78) 0.354±0.016 (83) 0.354 ± 0.016 (83) 1) 일반배추2) 유기배추3) 1) General cabbage 2) organic cabbage 3)

실시예 12 : in vivo에서 고활성 배추김치의 항암효과 및 면역활성 증강효과 Example 12: anti-cancer effect and immune activity enhancing effect of the high activity in in vivo Kimchi

본 실시예에서는 in vivo에서 고활성 배추김치의 항암효과 및 면역활성 증강 효과를 조사하였다. In the present embodiment it was investigated antitumor activity and immunosuppressive activity enhancing effect of the activity on the cabbage and in vivo.

본 실시예에서 사용한 실험동물인 Balb/c mouse는 체중이 25g 정도의 것을 사용하며 사료는 표준사료로 사육하였다. In Balb / c mouse experiment animals used in this example it is used to weight of about 25g and the feed was fed with standard feed. 사육시 물과 사료는 충분한 양을 공급하고 동물실은 12시간 간격의 명암 사이클(light-dark cycle)을 유지하였다. Water and feed were supplied during breeding of a sufficient amount of animal actually keep the contrast cycle (light-dark cycle) for 12 hours.

본 실시예에서 사용한 종양세포는 실험동물의 복강내에서 1주일간 배양한 sacroma-180 세포를 복수와 함께 취하고 phosphate buffered saline(PBS)와 함께 원심분리(1,200rpm, 10min)하여 종양세포를 분리하였다. Tumor cells used in this example are the tumor cells were isolated one week incubation taking a sacroma-180 cells in the abdominal cavity of the animals with a plurality centrifuged (1,200rpm, 10min) with phosphate buffered saline (PBS). 분리한 세포를 다시 PBS에 부유시켜 재차 원심분리하여 상등액을 제거한 후 sacroma-180 세포를 1.0 ×10 6 cells/mL이 되도록 종양세포 부유액을 만들어 1mL씩 복강주사하여 이식 보존하면서 실험에 사용하였다. After removing the supernatant was suspended again centrifuged to separate the cells back to the PBS to make a suspension with a tumor cell such that the cell sacroma-180 1.0 × 10 6 cells / mL by intraperitoneal injection of 1mL preserved transplants were used for the experiment.

본 실시예에서 사용한 시료는 일반배추(CⅠ)김치, 유기배추(OCⅠ)김치, 일반 고활성배추(CⅡ)김치, 유기 고활성배추(OCⅡ)김치의 메탄올 추출물로 멸균된 PBS를 사용하여 조제하며 투여량은 마우스당 0.5mg으로 하고 대조군은 멸균 PBS 만 주사하며 투여하지 않을 때는 냉장고에 보관하면서 사용하였다. Samples used in this embodiment is prepared using sterile PBS as a normal cabbage (CⅠ) kimchi organic cabbage (OCⅠ) kimchi, general and methanol extract of the active cabbage (CⅡ) Kimchi, organic high activity cabbage (OCⅡ) Kimchi the dosage to 0.5mg per mouse, and when not only the scanning and control group was administered with sterile PBS was used while stored in a refrigerator.

실험예 1: 세포 독성실험(Viability test) Experiment 1: Cell toxicity test (test Viability)

김치시료의 직접적인 세포 독성작용의 유무를 알아보기 위해서 dye exclusion method를 이용하여 in vitro에서 생존시험(viability test)을 행하였다. To investigate the presence or absence of direct cytotoxic action of kimchi sample using a dye exclusion method was subjected to the survival test (viability test) in the in vitro. 24웰 플레이트에 20% HFCS(heat inactivated fetal calf serum:Gibco Lab, USA)을 함유한 EMEM(Eagle's minimal essential medium) 배지 1mL에 5 × 10 4 cell/plate가 되게 접종(seeding)하였다. They were: (Gibco Lab, USA heat inactivated fetal calf serum) the EMEM (Eagle's minimal essential medium) Inoculation (seeding) is to be 5 × 10 4 cell / plate in culture medium containing 20% HFCS 1mL 24-well plate. 여기에 20㎕의 김치 시료를 넣어서 37℃, 5% CO 2 , 배양기에서 24시간 배양하였다. Here kimchi samples 20㎕ put and cultured for 24 hours at 37 ℃, 5% CO 2, the culture medium. 24시간 배양 후 세포 50㎕를 0.2% 트리판 블루 용액 50㎕과 잘 섞어 헤모사이토메터를 사용하여 전체 세포수, 염색되어진 세포(non-viable cell) 수 및 염색되지 않은 세포(viable cell)수를 측정한 다음 김치시료를 넣지 않은 대조 세포군과 비교하여 하기 계산식에 따라 생존비율(viablity)을 계산하였다. 24 hours for the entire cell to the cells and mix well using a 50㎕ hemo Saito meters and 0.2% trypan blue solution 50㎕ After incubation, the number of cells (non-viable cell) and cell number (viable cell) that is not been dyeing dye survival ratio (viablity) according to the formula as compared to the control without inserting a measurement sample, and then Kimchi cell population was calculated.

실험결과, 표 25에 나타낸 바와 같이 시료 메탄올추출물의 sarcoma-180 마우스 종양세포에 대한 세포독성효과는 0.75㎎/mL에서 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. The experimental results, the cytotoxic effect of the sample mouse sarcoma-180 tumor cells of the methanol extract, as shown in Table 25 was found not to affect in 0.75㎎ / mL.

유기 고활성 배추김치 메탄올 추출물의 세포독성실험 Organic high activity Cytotoxicity test Chinese cabbage kimchi methanol extract 샘플 Sample 최종 농도 (㎎/㎖) Final concentration (㎎ / ㎖) 전체 세포수 (×10 4 ) The total number of cells (× 10 4) 셍존 세포 (%) Sengjon cells (%) 대조군 Controls 17.4±2.9 17.4 ± 2.9 92 92 S-180+C(Ⅰ) 김치 S-180 + C (Ⅰ) Kimchi 0.1 0.1 12.8±2.1 12.8 ± 2.1 85 85 0.5 0.5 11.8±3.1 11.8 ± 3.1 80 80 0.75 0.75 10.4±3.0 10.4 ± 3.0 77 77 1.0 1.0 7.2±3.9 7.2 ± 3.9 62 62 2.5 2.5 7.0±2.4 7.0 ± 2.4 64 64 S-180+OC(Ⅰ) 김치 S-180 + OC (Ⅰ) Kimchi 0.1 0.1 11.8±3.4 11.8 ± 3.4 84 84 0.5 0.5 10.2±2.6 10.2 ± 2.6 77 77 0.75 0.75 10.8±2.8 10.8 ± 2.8 75 75 1.0 1.0 7.5±0.9 7.5 ± 0.9 66 66 2.5 2.5 5.6±2.9 5.6 ± 2.9 56 56 S-180+C(Ⅱ) 김치 S-180 + C (Ⅱ) Kimchi 0.1 0.1 11.6±4.6 11.6 ± 4.6 88 88 0.5 0.5 10.2±2.4 10.2 ± 2.4 85 85 0.75 0.75 8.4±2.9 8.4 ± 2.9 81 81 1.0 1.0 6.2±1.3 6.2 ± 1.3 71 71 2.5 2.5 6.8±1.9 6.8 ± 1.9 59 59 S-180+OC(Ⅱ) 김치 S-180 + OC (Ⅱ) Kimchi 0.1 0.1 13.0±2.1 13.0 ± 2.1 83 83 0.5 0.5 10.2±2.3 10.2 ± 2.3 75 75 0.75 0.75 12.4±2.1 12.4 ± 2.1 81 81 1.0 1.0 8.4±2.2 8.4 ± 2.2 64 64 2.5 2.5 7.2±2.5 7.2 ± 2.5 58 58

실험예 2: 수명연장효과 Experimental Example 2: extend the lifespan

실험동물을 각 군당 7마리씩 하여 전술한 방법으로 조제한 종양 세포 부유액 1mL(1 × 10 6 cells/mouse)씩을 실험동물의 복강내에 이식한 후 24시간 후부터 20일간 매일 시료를 복강으로 투여하고 35일 까지의 생존여부를 관찰하여 수명 일수를 계산하였다. The experimental animals for each group 7 rats by suspension tumor prepared in the above-described method the cell 1mL (1 × 10 6 cells / mouse) 20 ilgan every sample 24 hours after and then transplanted into the abdominal cavity of the animals ssikeul administered in the abdominal cavity, and to 35 days by observation of the survival days it was calculated life. 실험결과, 표 26에 나타낸 바와 같이 대조군(control)이 27일을 생존한 반면 일반배추 고활성(CⅡ)배추김치가 39.7일로 32%의 가장 높은 수명연장 효과를 보였고 유기배추(OCⅠ)배추김치와 유기고활성배추(OCⅡ)배추김치가 36.5일로 26%의 높은 수명연장효과를 보였다. Result, while the control group (control) As shown in Table 26, the survival of 27 days and common cabbage high activity (CⅡ) Chinese cabbage kimchi showed the highest life extension effect of 32% day 39.7 organic cabbage (OCⅠ) Kimchi organic and showed activity cabbage (OCⅡ) Kimchi high life extension of 26%, 36.5 days effect.

Balb/c 마우스의 수명연장에 미치는 유기 고활성 배추김치 메탄올 추출물의 영향 Balb / c of the organic high activity cabbage methanol extract on life extension effect of the mouse 샘플 Sample 생존시간 (day) Survival time (day) 연장비율 (%) Extension rate (%) 대조구 Control 27.0±1.7 27.0 ± 1.7 - - S-180+C(Ⅰ) 김치 S-180 + C (Ⅰ) Kimchi 35.2±1.7 35.2 ± 1.7 23 23 S-180+OC(Ⅰ) 김치 S-180 + OC (Ⅰ) Kimchi 36.5±2.9 36.5 ± 2.9 26 26 S-180+C(Ⅱ) 김치 S-180 + C (Ⅱ) Kimchi 39.7±2.9 39.7 ± 2.9 32 32 S-180+OC(Ⅱ) 김치 S-180 + OC (Ⅱ) Kimchi 36.5±2.8 36.5 ± 2.8 26 26

실험예 3: 고형암 성장 저지 효과 Experimental Example 3: effect solid tumor growth inhibition

실험동물을 각 군당 6마리씩하여 실험실에서 1주일 간격으로 계대보관 중인 종양 세포부유액 0.2mL(6×10 6 cells/mouse)씩을 실험동물의 왼쪽 서혜부(left groin)에 피하 이식한 후 24시간 후부터 20일간 매일 1회씩 시료 용액을 복강으로 투여하였다. Animals the suspension in each group 6 rats and one week storage are as tumor cells passaged in the laboratory interval 0.2mL (6 × 10 6 cells / mouse) for 24 hours after 20 and then transplanted subcutaneously in inguinal ssikeul left of the experimental animals (left groin) day was administered every day once a sample solution into the abdominal cavity. 종양세포 이식 26일째 되는 날 치사시켜 생성된 고형암을 적출하고 그 무게를 측정한 후 하기 식에 따라 종양 성장 저지 백분율(tumor growth inhibition ratio, IR:%)을 계산하였다. It was calculated: (% tumor growth inhibition ratio, IR) harvesting the tumor cell transplantation 26 days after the date of lethal to generate solid tumors and that tumor growth inhibition percentage according to the following equation after measuring the weight.

Cw: 대조군의 평균 종양무게 Cw: the average tumor weight in the control group

Tw: 처리군의 평균 종양무게 Tw: mean tumor weight of treated group

실험결과, 표 27에 나타낸 바와 같이 고형암 성장저지효과는 유기배추(OCⅠ)김치, 일반배추(CⅡ)김치, 유기배추(OCⅡ)김치가 각각 34.3%, 29.5%, 39.3%로 각각 높게 나타났다. Experimental results, solid tumor growth inhibitory effect are shown in Table 27, were each as high as 34.3%, respectively, the organic cabbage (OCⅠ) Kimchi, common cabbage (CⅡ) kimchi organic cabbage (OCⅡ) Kimchi, 29.5%, 39.3%. 4가지 김치종류 중 유기고활성으로 개발한 김치가 가장 고형암성장억제에 효과가 컸다. 04 different kinds of kimchi Kimchi Organic great effect on the development of the solid tumor growth inhibitory activity.

배추김치 메탄올 추출물의 sacroma-180 세포를 갖는 Balb/c 마우스의 고형암 성장 저지효과 Kimchi methanol extract of sacroma-180 Balb / c mice with solid tumor growth inhibitory effect of the cell 샘플 Sample 종양 무게(g) Tumor weight (g) 저해비율(%) Inhibition ratio (%) S-180+PBS S-180 + PBS 5.19±1.19 5.19 ± 1.19 - - S-180+C(Ⅰ) 김치 S-180 + C (Ⅰ) Kimchi 4.57±1.41 4.57 ± 1.41 11.9 11.9 S-180+OC(Ⅰ) 김치 S-180 + OC (Ⅰ) Kimchi 3.41±1.09 3.41 ± 1.09 34.3 34.3 S-180+C(Ⅱ) 김치 S-180 + C (Ⅱ) Kimchi 3.66±0.73 3.66 ± 0.73 29.5 29.5 S-180+OC(Ⅱ) 김치 S-180 + OC (Ⅱ) Kimchi 3.15±0.65 3.15 ± 0.65 39.3 39.3

실험예 4: 마우스 각 장기의 중량변화 Example 4: Mouse change in weight of each organ

상기 실험예 3에서 고형암 성장저지실험을 마친 Balb/c 마우스 각 장기의 무게를 적출하여 무게를 재어보았다. In Experimental Example 3, completing the solid tumor growth inhibition experiment he saw weighed by extraction the weight of Balb / c mouse organs. 실험결과, 표 28에 나타낸 바와 같이 유기배추(Ⅰ)김치에서 비장의 체중당 무게가 다소 높았으나 그외의 장기들의 체중당 무게는 유사하게 나타났다. The experimental results, the organic cabbage (Ⅰ) but a weight per weight of the spleen, slightly higher in the kimchi weight per weight of the other organs, as shown in Table 28 were similar.

Balb/c 마우스 각 장기의 무게 Balb / c mice weight of each organ 샘플 Sample 체중(g) Weight (g) 비장/체중 wt.(%) Spleen / weight wt. (%) 간/체중 wt.(%) wt liver / body weight (%) 심장/체중 wt.(%) Heart / weight wt. (%) 신장/체중 wt. Height / weight wt. (%) (%) 대조구 Control 29.0±1.63 29.0 ± 1.63 0.47±0.13 0.47 ± 0.13 8.68±1.15 8.68 ± 1.15 0.65±0.09 0.65 ± 0.09 2.16±0.19 2.16 ± 0.19 S-180+PBS S-180 + PBS 30.2±1.00 30.2 ± 1.00 1.50±0.17 1.50 ± 0.17 7.78±0.56 7.78 ± 0.56 0.55±0.04 0.55 ± 0.04 1.78±0.06 1.78 ± 0.06 S-180+C(Ⅰ) 김치 S-180 + C (Ⅰ) Kimchi 26.6±1.62 26.6 ± 1.62 2.35±0.3 2.35 ± 0.3 8.77±0.62 8.77 ± 0.62 0.68±0.12 0.68 ± 0.12 2.39±0.33 2.39 ± 0.33 S-180+OC(Ⅰ) 김치 S-180 + OC (Ⅰ) Kimchi 28.9±1.23 28.9 ± 1.23 1.39±0.17 1.39 ± 0.17 6.93±0.56 6.93 ± 0.56 0.74±0.11 0.74 ± 0.11 1.76±0.09 1.76 ± 0.09 S-180+C(Ⅱ) 김치 S-180 + C (Ⅱ) Kimchi 28.1±0.90 28.1 ± 0.90 1.82±0.21 1.82 ± 0.21 8.07±0.91 8.07 ± 0.91 0.72±0.11 0.72 ± 0.11 1.92±0.33 1.92 ± 0.33 S-180+OC(Ⅱ) 김치 S-180 + OC (Ⅱ) Kimchi 27.2±2.07 27.2 ± 2.07 1.77±0.16 1.77 ± 0.16 8.38±0.96 8.38 ± 0.96 0.61±0.18 0.61 ± 0.18 2.01±0.33 2.01 ± 0.33

실험예 5: 마우스간의 글루타치온-S-트랜스퍼라아제(GST) 활성 및 글루타치온 (GSH)과 리피드처록사이드(LPO)의 함량 변화 Contents of mouse glutathione transferase -S- kinase (GST) activity and glutathione (GSH) and lipid cheorok side (LPO) between: Example 5

항발암 효소로 알려진 글루타치온-S-트랜스퍼라아제(GST)는 친전자성 발암물질의 활성 대사산물의 해독작용으로서 발암물질은 생체내에서 사이토크롬 P-450이나 포스포트랜스퍼라아제 등 각종 약물대사 효소에 의해 활성화되어 DNA 손상을 일으키지만, GST는 이들 소수성 잔기를 가지는 활성대사물을 기질로, 여기에 GSH를 공유결합시켜 안정화된 형태를 만들며, 최종적으로 뇨중으로 배설시키므로서 해독작용을 한다. -S- glutathione transferase kinase (GST), known as anti-cancer enzyme is electrophilic a detoxification of the active metabolites of carcinogens carcinogens various drug metabolism in vivo such as the cytochromes P-450 or phospho transferase Kinase is activated by the enzyme only cause DNA damage, GST are a substrate for the active metabolite with these hydrophobic moiety, creates a stabilized by sharing GSH combined here form, and the final stand detoxification because excretion into the urine.

본 실험예에서는 먼저 글루타치온-S-트랜스퍼라아제(GST) 활성을 측정하기 위해 마우스를 치사시킨 후 4℃ 이하의 생리 식염수로 간을 관류하여 간내에 남아 있는 혈액을 제거한 후 간장을 적출하였다. This experiment was to, first liver is removed after removing the blood remaining in the liver to the perfusion -S- glutathione transferase kinase (GST) was lethal to mice in order to determine the activity between a physiological saline solution of less than 4 ℃. 간조직 1g 당 0.1M 인산칼륨 버퍼(potassium phospate buffer, pH 7.4)를 가하여 빙냉하에서 글라스 테플론 호모게나이저(glass teflon omogenizer)로 마쇄하였다. Liver tissue was added to 0.1M potassium phosphate buffer (potassium phospate buffer, pH 7.4) per 1g was triturated with a Teflon-glass homogenizer (glass teflon omogenizer) under ice-cooling. 이 마쇄액을 호모게네이트(homogenate) 분획으로 하였으며 이것을 13,000 rpm에서 10분간 원심분리하여 핵 및 미마쇄세포부분을 제거하고 다시 105,000×g에서 1시간 동안 초원심분리하여 얻은 상등액을 사이토졸 분획으로 하였다. The forehead supernatant obtained was a swaeaek as Homo to carbonate (homogenate) fraction by this separation at 13,000 rpm 10 bungan centrifugation to remove the nuclei and fine grinding cell portion and separated again ultracentrifugation for 1 h at 105,000 × g in cytosolic fraction It was. 이렇게 얻은 호모게네이트 분획은 글루타치온(glutathione) 함량과 지질산화(lipid peroxide) 함량 측정에 사이토졸(cytosol) 분획은 글루카치온 S-트랜스퍼라아제(glutathione S-transferse) 활성 측정에 이용하였다. Homo carbonate fraction thus obtained to the cytosol (cytosol) fraction to glutathione (glutathione) contents and lipid oxidation (lipid peroxide) content was measured by the cationic glue S- transferase dehydratase (glutathione S-transferse) activity measurement. Habig 등의 방법에 준하여 0.1M 인산칼륨버퍼(pH 6.5) 중에 0.04M 환원 글루타치온 75㎕을 가한 후 효소액을 0.1mL 넣고 블랭크에는 20% 트리크로아세트산 0.5mL를 가해 효소를 실활시키고 시료는 25℃에서 5분간 반응시킨 후 블랭크와 시료 각각에 0.12M 1-클로로-2,4-디니트로벤젠 25㎕를 가하여 25℃에서 2분간 반응시킨 다음 시료에 20% 트리클로로아세트산을 가해 반응을 완결시킨 후 원심분리하여 얻은 상등액을 340nm에서 흡광도를 측정한 다음 1-클로로-2,4-디니트로벤젠의 몰 흡광계수 9.6mM 1 cm -1 을 이용하여 활성도를 산정하였다. In 0.1M potassium phosphate buffer (pH 6.5) according to the method of Habig such as 0.04M into the enzyme solution was added to the reduced glutathione 75㎕ 0.1mL blank is applied to a 20% acetic acid 0.5mL tree croissant and deactivate the enzyme samples at 25 ℃ after 5 minutes the reaction was added to the blank and sample 0.12M 1- chloro-2,4-dinitrobenzene 25㎕ each was added to complete the reaction of acetic acid with 20% trichloroacetic the following samples were 2 min at 25 ℃ centrifugal Remove the supernatant by measuring the absorbance at 340nm obtained and then the activity was calculated using a molar extinction coefficient of 9.6mM 1 cm -1 of 1-chloro-2,4-dinitrobenzene. 효소 활성의 단위는 1분간 mg 단백질이 생성한 2,4-디니트로벤젠-글루타치온의 nmole 수로 표시하였다. The units of enzymatic activity is a 2, 4-dinitrobenzene 1 minute mg protein production were shown nmole number of glutathione. 또 조직중 글루타치온(glutathione)의 함량은 Ellaman의 방법에 준하여 효소원(400 ~ 600㎍ 단백질)에 제단백시약인 4% 설포살리실산(sulfosalicylic acid)을 가하여 단백질을 제거한 상등액에 디설파이드 리에이젼트(disulfide reagent;0.1M 인산칼륨 버퍼(pH 8.0)에 5,5'-디치오비스(2-니트로벤조산)을 녹임) 2.7mL를 가하여 생성되는 청색을 412nm에서 측정하고 표준곡선에 의하여 산정하였으며 단위는 조직 1g당 클루타치온 μmole로 표시하였다. Also the content of glutathione (glutathione) of the tissue is the protein reagent is 4% sulfonate acid (sulfosalicylic acid) and the mixture re-disulfide agent to remove the supernatant proteins (disulfide reagent in an enzyme source (400 ~ 600㎍ protein) according to the method of Ellaman ; was the melting of 5,5'-Bang-bis (2-nitrobenzoic acid) in 0.1M potassium phosphate buffer (pH 8.0)) measuring the blue color produced was added to 2.7mL in 412nm and calculated by standard curve unit 1g tissue party was represented by Cluj Tachikawa on μmole. 실험결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 간조직 중의 GST 활성변화는 유기배추(OCⅠ), 일반고활성배추(CⅡ)김치, 유기고활성배추(OCⅡ)김치가 각각 680nmol/㎎ protein/min, 747nmol/㎎ protein/min, 726 nmol/㎎ protein/min로 높게 나타났고(p<0.05) 도 3에는 글루타치온 함량(glutathione content)은 유기배추(OCⅠ)김치, 일반고활성배추(CⅡ)김치, 유기고활성배추(OCⅡ)김치가 각각 0.40μmol/g, 0.38μmol/g, 0.43μmol/g로 높게 나타났다. Experimental results also GST activity changes in the liver as shown in Fig. 2 is an organic cabbage (OCⅠ), general high school active cabbage (CⅡ) Kimchi, organic high activity cabbage (OCⅡ) kimchi each 680nmol / ㎎ protein / min, 747nmol / ㎎ protein / min, it was higher by 726 nmol / ㎎ protein / min (p <0.05) in Figure 3 in glutathione content (glutathione content) is an organic cabbage (OCⅠ) kimchi, general high school active cabbage (CⅡ) Kimchi, organic high activity cabbage ( OCⅡ) kimchi was higher in each 0.40μmol / g, 0.38μmol / g, 0.43μmol / g. 지질성분인 불포화지방산에 산소가 첨가되어 과산화된 지질인 지질산화물(lipid peroxide)은 세포막의 주요성분인 인지질을 구성하는 불포화지방산이 활성산소와 결합하여 생기게 된다. Lipids of oxygen is added to the unsaturated fatty acid in the lipid oxide lipid peroxide (lipid peroxide) is an unsaturated fatty acid constituting the main component of phospholipids of the cell membrane is causing in combination with the free radicals. 이 지질 산화물 함량은 도 4에 나타낸 바와 같이 일반고활성배추(CⅡ)김치, 유기고활성배추(OCⅡ)김치가 6.7nmol/g, 2.6nmol/g으로 값이 낮게 나타났다. The lipid content of the oxide is also high as shown in the four general high school active cabbage (CⅡ) Kimchi, organic active cabbage (OCⅡ) kimchi was low value as 6.7nmol / g, 2.6nmol / g.

실험예 6: 자연살해세포 활성 분석 Experimental Example 6: NK cell activity assay

자연살해(NK) 세포는 자연살해성을 갖는 단핵구 세포로서 비탐식성이며 비부착성 세포로서 RNA 종양 바이러스 항원을 표현하고 있는 림프계 세포를 선택적으로 파괴하는 특성이 있기 때문에 이들 세포의 역할은 T임파구와는 다른 면역감시기구로서 종양 저항성에 관여하는 중요한 면역기능으로 인식되고 있다. Natural Killer (NK) cells as a mononuclear cell having NK property and non-phagocytic sex non adherent cells because the characteristics of selectively destroyed in the lymphoid cells that express the RNA tumor virus antigens role of these cells are T lymphocytes other than as immune surveillance mechanism has been recognized as an important immune system involved in tumor resistance. 따라서 본 실험예에서는 자연살해세포의 활성을 분석하기 위해 먼저 이펙터 세포(Effector cell)인 NK세포를 준비하였다. Therefore, we present experimental example, the preparation of the (Effector cell) first, effector cells in order to analyze the activity of NK cells NK cells. Balb/c 마우스의 비장을 클린 벤치(clean bench) 내에서 무균적으로 적출하여 페니실린(100U/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL)를 함유한 5mL의 RPMI 1640 배지로 3회 세척한 후 곱게 마쇄하였다. By extraction of the spleen of Balb / c mouse was aseptically in a clean bench (clean bench) finely penicillin (100U / mL), streptomycin were washed three times with RPMI 1640 medium containing 5mL of (100㎍ / mL) It was grinding. 이 세포 부유액을 70㎛ 나일론 메쉬로 여과시켜서 원심분리하여 림프구를 모은 다음 이것을 같은 배지에 부유시켰다. The cell suspension was filtered by a nylon mesh to 70㎛ collected lymphocytes were centrifuged and then it was suspended in the same medium. 이것을 다시 히스토파쿠에-1077(histopaque-1077)을 이용하여 원심분리(500×g, 30 min, 18℃)를 통해서 림프구를 분리해냈다. And this again using a -1077 (histopaque-1077) Heath topa ku did separate the lymphocytes by centrifugation (500 × g, 30 min, 18 ℃). 준비한 세포를 10% FCS, 2mM L-글루타민, 페니실린(100U/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL)을 함유한 RPMI 1640 배지에 재현탁시켰다. It resuspended the cells prepared in RPMI 1640 medium containing 10% FCS, 2mM L- glutamine, penicillin (100U / mL), streptomycin (100㎍ / mL). 이것을 37℃, CO 2 배양기에서 1 ~ 2 시간 배양시켜서 세포가 배양 플라스크(6cm 페트리디쉬)에 부착되도록 하였다. This by 1-2 hours incubation at 37 ℃, CO 2 incubator the cells were attached to the culture flask (6cm Petri dish). 비부착성 자연살해 세포를 원심분리하여 수집한 후 배양배지에 재현탁시킨 다음 적정 세포수를 계수하여 사용하였다. In which the non-adherent and then the NK cells collected by centrifugation resuspended in culture medium and then suspended was used to count the appropriate number of cells. 이어서, 자연살해 세포의 세포파괴활성은 MTT 방법으로 분석하였다. Then, the cell death activity of NK cells was analyzed by MTT method. Yac-1 마우스 림포마 세포(Yac-1 mouse lymphoma cell)는 타겟 세포(target cell)로 사용하였다. Yac-1 cells, mouse rim poma (Yac-1 mouse lymphoma cell) were used as target cells (target cell). Yac-1 세포는 NK 세포 활성을 측정하는데 가장 편리한 타겟 세포주이다. Yac-1 cells are most convenient for the target cells to measure NK cell activity. Yac-1 세포는 10% FCS, 2mM L-글루타민 페닐실린(100U/mL), 스트렙토마이신(100㎍/mL)를 함유한 RPMI 1640 배지에 5×10 4 cells/mL의 밀도가 되도록 희석한 후 각 웰에 50㎕씩 가하였다. Yac-1 cells, 10% FCS, 2mM L- glutamine phenyl cylinder (100U / mL), and then diluted to a density of 5 × 10 4 cells / mL in RPMI 1640 medium containing streptomycin (100㎍ / mL) It was added to each well by 50㎕. 그리고 NK cell은 1×10 7 cells/mL의 NK 세포 활성 분석을 위해서는 이펙터 세포와 Yac-1 cell 각각 50㎕씩을 96웰 플레이트에 첨가하였다. And NK cell was added ssikeul 1 × 10 7 cells / mL in NK cell activity in order to analyze effector cells and Yac-1 cell each 50㎕ a 96-well plate. 이를 37℃, CO 2 배양기 안에서 3일간 배양시킨 후 MTT(5mg/mL) 용액을 10㎕씩 각 웰에 가한 다음 37℃에서 4시간 배양하였다. It was for 3 days in 37 ℃, CO 2 incubator 10㎕ by the MTT (5mg / mL) solution was added to each well and then were incubated at 37 ℃ 4 hours. 여기에 SDS(10% in 0.02N HCl)을 25㎕ 첨가하여 실온에서 30분간 발색시킨 후 540nm에서 OD를 측정하였다. Here it was added a 25㎕ SDS (10% in 0.02N HCl) was measured in OD 540nm after color development for 30 minutes at room temperature. 세포 독성 퍼센트는 하기 공식에 의해 계산하였다. Percent cytotoxicity was calculated by the following formula.

실험결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 대조군(S-180+PBS) 18.5%에 비해 특히 유기배추(OCⅠ)김치, 일반배추(CⅡ)김치, 유기배추김치(OCⅡ)를 투여한 마우스의 NK세포는 각각 46%, 44%, 79%의 높은 세포파괴활성(cytolysis)을 보였다. Experiments, NK cells, as shown in FIG. 5, the control group (S-180 + PBS) compared to 18.5% in particular organic cabbage (OCⅠ) Kimchi, common cabbage (CⅡ) Kimchi, mice treated with organic cabbage (OCⅡ) is It showed a 46%, a high cell death activity of 44%, 79% (cytolysis).

상기 실험예 1 ~ 6에서 살펴본 바와 같이 배추종류로는 일반배추보다는 유기배추가 항암효과가 있었고 양념비를 보면 표준화된 양념비(Ⅰ)보다는 기능성을 증진시킨 양념비(Ⅱ)김치에서 in vivo 항암효과가 증진되었다. Experimental Example 1 to a Chinese cabbage types, as discussed in 6 is in the General cabbage rather than the organic cabbage antitumor effect was that promote functional look rather than a standardized seasoning ratio (Ⅰ) the sauce non seasoning ratio (Ⅱ) Kimchi vivo anti-cancer the effect was promoted.

실시예 13 : 유기 고활성 배추김치 식이의 항암효과 및 면역활성 증강 효과 Example 13: Organic high anti-cancer effect and immune activity enhancing effect of the active cabbage expression

본 실시예에서는 유기고활성 배추김치와 일반고활성 배추김치를 각각 함유하는 김치식이를 제조하고 이들의 고형암 성장저지효과와 자연살해세포의 세포파괴활성을 조사하므로써 배추김치 자체만이 아니라 배추김치 일부분을 함유하는 식이의 항암 기능성도 조사하였다. In the present embodiment By the organic and prepared kimchi diet containing active cabbage and general high school active cabbage each investigating their solid tumor growth inhibitory effect and cell death activity of natural killer cells not only Kimchi itself the cabbage part functional expression of antitumor containing were also investigated. 김치식이는 표 29에 나타난 일반성분분석을 토대로 하여 표 30에 나타낸 바와 같이 조성하였으며 실험방법은 실시예 13에서 실시한 방법과 동일하게 실시하였으며 일반표준화배추김치, 일반고활성배추김치, 유기고활성배추김치를 4, 8%를 각각 첨가하여 만든 식이로 2주간 먹이고 sarcoma-180 세포를 마우스 서혜부에 주사한 후 30일 동안 계속 먹여 실험하였다. Kimchi diet Based on the chemical composition analysis shown in Table 29 was the composition as shown in Table 30 Experimental method Example were the same manner as in method conducted in 13 normal standardized cabbage, general high school active cabbage, organic high activity Kimchi 4, the experimental feed was continued for 30 days after 2 weeks by feeding diet that was created by the addition of 8% each injected with sarcoma-180 cells to the inguinal mouse. 실험결과, 표 31에 나타낸 바와 같이 고형암 저지효과에서 저해율은 일반표준화 4%첨가한 배추김치가 3%로 가장 낮았고 유기고활성 8%첨가한 배추김치가 가장 높아 28%를 나타냈다. The experimental results, in the solid tumor inhibitory effect as shown in Table 31, exhibited a 28% inhibition of Chinese cabbage kimchi was added 4% of the lowest common standard is the high activity of 8% and an organic one cabbage was added to 3%. 일반표준화배추김치에서는 4%보다는 8%첨가한 배추김치가 높은 저해율을 보였고 일반고활성배추김치는 4%가 8%첨가한 배추김치보다 조금 높았으나 큰 차이는 없었다. The general standard kimchi showed a high inhibition rate of 8% was added kimchi than 4% of general high school activity Kimchi is 4%, but a little higher than the addition of 8% by Kimchi was no significant difference. 유기고활성배추김치는 4%보다는 8%첨가한 배추김치가 높게 나타났다. Organic high activity cabbage was higher Chinese cabbage kimchi was added 8% rather than 4%. 배추김치의 군에 따라서는 일반표준화배추김치보다는 일반고활성배추김치가 높았고 유기고활성배추김치가 더욱 높아 가장 높은 저해율을 보였다. Depending on the cabbage group showed the highest inhibition activity is general high schools had higher organic cabbage kimchi and active than the general standard Kimchi even higher. 또 면역계에 작용하는 자연 살해 세포의 활성은 도 6에 나타낸 바와 같이 일반표준화배추김치 4% 보다는 8%첨가한 배추김치가 높았고 일반고활성배추김치는 4% 첨가한 배추김치가 높았으며 유기고활성배추김치는 4%보다는 8%첨가한 배추김치의 활성이 더 높았다. It was again the NK cell activity of normal standardized cabbage 8% by adding Kimchi than 4% as shown in Fig. 6 of acting on the immune system higher general high school active Kimchi is 4% cabbage was higher addition of the organic high activity cabbage kimchi was higher by 8% of the active added kimchi than 4%. 배추김치의 군에 따라서는 일반표준화배추김치를 첨가한 식이가 대조군과 유사하게 낮았고 일반고활성배추김치를 첨가한 식이가 일반표준화배추김치를 첨가한 식이보다 높은 활성을 띠었다. According to the Chinese cabbage kimchi group was exhibiting the dietary dietary addition of common standardized cabbage is added to the general high school active cabbage was low similarly to the higher activity than the control diet supplemented with normal standardized cabbage. 유기고활성배추김치를 첨가한 식이를 공급했을 때 NK세포의 면역활성이 가장 높았다. Organic and immune activity of the NK cells was the highest when fed a diet supplemented with the active cabbage.

제조한 김치의 일반성분 분석표 General Certificate of Analysis of the prepared kimchi 일반표준화 Common standards 일반고활성 General high school activity 유기고활성 Organic high activity 수분 moisture 4.86 4.86 5.59 5.59 3.79 3.79 지방 Fat 2.87 2.87 3.09 3.09 4.71 4.71 단백질 protein 15.76 15.76 15.42 15.42 13.53 13.53 당질 Saccharin 15.12 15.12 12.16 12.16 12.16 12.16 섬유소 fibrin 39.64 39.64 43.39 43.39 48.04 48.04 회분 Ash 21.75 21.75 20.35 20.35 17.77 17.77

배추김치 식이 조성 Cabbage diet composition 표준식이 A standard diet 일표4% Ilpyo 4% 일표8% Ilpyo 8% 일고4% Think 4% 일고8% Damsel 8% 유고4% Yugoslavia 4% 유고8% Yugoslavia 8% 카제인 Casein 20.0 20.0 19.37 19.37 18.77 18.77 19.38 19.38 18.77 18.77 19.46 19.46 18.92 18.92 DL -메티오닌 DL - methionine 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 옥수수 전분 Corn starch 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 15.0 슈크로오스 Sucrose with trehalose 50.0 50.0 49.4 49.4 48.79 48.79 49.51 49.51 49.03 49.03 49.51 49.51 49.03 49.03 섬유질 Fiber 5.0 5.0 3.41 3.41 1.83 1.83 3.26 3.26 1.53 1.53 3.08 3.08 1.16 1.16 옥수수유 Corn oil 5.0 5.0 4.89 4.89 4.77 4.77 4.88 4.88 4.75 4.75 4.81 4.81 4.62 4.62 미네랄 혼합물 Mineral mixture 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 3.5 비타민 혼합물 Vitamin mixture 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 콜린 바이타트레이트 By Colin tart rate 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 표준식이 : 정상식(AIN식이)일표 4% : 표준식이+일반표준화김치 4%첨가일표 8% : 표준식이+일반표준화김치 8%첨가일고 4% : 표준식이+일반고활성김치 4%첨가일고 8% : 표준식이+일반고활성김치 8%첨가유고 4% : 표준식이+유기고활성김치 4%첨가유고 8% : 표준식이+유기고활성김치 8%첨가 Standard expressions: jeongsangsik (AIN diet) ilpyo 4%: a standard diet + regular standard kimchi 4% added ilpyo 8%: a standard diet + damsel 8% of the general standardization Kimchi added 4%: a standard diet + general high school damsel active kimchi 4% added 8% : standard diet + general high school active kimchi 8% 4% added Republic: standard diet + organic high activity kimchi 4% added Republic 8%: 8% standard diet + organic high activity kimchi added

고형암 성장저지활성 Solid tumor growth inhibition activity 다이어트 Diet 종양무게 (g) Tumor weight (g) 저해비율 (%) Inhibition ratio (%) S-180+Control S-180 + Control 6.0±1.3 6.0 ± 1.3 -- - S-180+일표 4% S-180 + 4% ilpyo 5.8±1.0 5.8 ± 1.0 3 3 S-180+일표 8% S-180 + 8% ilpyo 4.9±1.0 4.9 ± 1.0 18 18 S-180+일고 4% S-180 + think 4% 4.9±0.9 4.9 ± 0.9 18 18 S-180+일고 8% S-180 + 8% think 5.1±0.7 5.1 ± 0.7 15 15 S-180+유고 4% S-180 + 4% Republic 4.8±0.9 4.8 ± 0.9 20 20 S-180+유고 8% S-180 + Republic 8% 4.3±1.0 4.3 ± 1.0 28 28

실시예 14 : 유기 고활성 배추김치의 암예방증진 효과 Example 14: cancer enhancing effect of the organic high activity Kimchi

본 실시예에서는 상기 실시예 6에서 제조한 가장 우수한 항암 기능성 증진 배추김치의 레시피에 따라 제조한 유기 고활성 배추김치의 암예방효과를 in vivo에서 확인하기 위해 마우스 말초혈의 망상적혈구를 이용한 초생체염색 소핵 실험(supravital staining micronucleus assay)을 하였다. In this embodiment, for the embodiment in accordance with one of the best anti-cancer functional enhancement cabbage recipe prepared in June and prepared organic confirm the cancer preventive effect of the active cabbage kimchi in vivo, using a reticulocyte count of a mouse peripheral blood seconds vivo staining the micronucleus test (supravital staining micronucleus assay). 설치류의 골수내 다염성 적혈구(polychromatic erythocytes, PCE)를 이용한 소핵시험법(micronucleus assay)은 적혈구의 분화과정 중에 형성되는 비정상적인 염색체 성분인 소핵의 유도를 지표로 하는 cytogenic 시험법이다. Micronucleus assay (micronucleus assay) the bone marrow of rodents using the polychromatic erythrocytes (polychromatic erythocytes, PCE) is cytogenic testing method for the induction of micronuclei is abnormal chromosome component formed during the differentiation of blood cells as an indicator.

6 ~ 7주령의 웅성 ICR계 마우스에 양성 대조군으로 마이토마이신(mitomycin C;MMC)을 생리식염수에 용해시켜 0.1mL/10g 체중이 되도록 복강주사하였다. 6 to who is my Toma as a positive control for 7-week-old male ICR mouse-based; the (mitomycin C MMC) dissolved in physiological saline was intraperitoneally injected to a 0.1mL / 10g body weight. 시험물질의 용량은 50% 치사용량(LD 50 )의 1/2 값을 최고 용량으로 하여 복강주사하며 시험물질의 소핵 유발의 최적시간을 결정하기 위해 시험물질 투여 후 12시간부터 72시간까지 12시간 간격으로 혈액을 채취하였다. Dose of the test substance by intraperitoneal injection is 12 times the half-value of the 50% lethal dose (LD 50) in the highest dose and after administration of the test substance to determine the optimal time for induction of micronucleus test substances from 12 hours to 72 hours blood samples were taken at intervals. 복강주사한 마우스의 꼬리혈관으로부터 혈액 5㎕를 취하여 아크리딘 오렌지를 입힌 슬라이드(acridine orange-coated slide)에 떨어뜨린 후 커버 글라스로 덮은 다음, 2시간 동안 4℃에 방치하여 세포와 아크리딘 오렌지(acridine orange)가 충분히 반응하게 하였다. By taking blood from tail veins of 5㎕ intraperitoneal injection the mice acridine then dropped on the slide (acridine orange-coated slide) coated oranges covered with a cover glass then the cells and allowed to stand for O 4 ℃ for 2 hours acridine orange (acridine orange) were sufficient responses. 슬라이드는 형광현미경으로 10 × 100배에서 관찰하며 망상적혈구는 I형에서 Ⅲ형 까지 2000여개를 계수하고 그 중 소핵을 지니는 망상적혈구를 계수한 다음 Cochran Armitage 법에 의한 통계처리로 유의성을 평가하였다. Slides are observed in the 10 × 100 times under a fluorescence microscope, and reticulocytes were counted 2,000 in type I to type Ⅲ and evaluate the significance to statistical processing by a factor of reticulocytes having a micronucleus of the next Cochran Armitage method. 실험결과, 도 7에 나타낸 바와 같이 500mg/kg을 경구 투여하였을 때 표준화배추김치의 경우는 소핵유발억제능을 보이지 않았으나 가장 우수한 암예방 기능성을 나타낸 유기 고활성 배추김치는 유의성(p<0.05) 있게 소핵유발억제효과를 나타내었다. Allowing a result, even an organic high activity Kimchi is significant (p <0.05) to 500mg / kg showing a is micronucleus induction did not show the inhibitory ability best cancer prevention functionality for standardization cabbage when administered orally as shown in Fig. 7 Micronucleus causing shows the inhibitory effect. 또한 1000mg/kg의 용량으로 경구 투여한 군에서 암예방 기능성 김치는 표준화 배추김치보다 소핵유발을 억제하는 효과가 유의적(p<0.05) 으로 높아 in vivo에서 암예방 기능성 김치인 유기 고활성 배추김치의 암예방증진효과가 확인되었다. Also 1000mg / in a dose of kg oral cancer prevention functional Kimchi in administered group is significantly effective to suppress the micronucleus induction than standardized cabbage significant (p <0.05) increased in cancer prevention, functional Kimchi organic high activity cabbage kimchi in vivo, the promotion of cancer prevention effects were identified.

실시예 15: 유기고활성 배추김치의 종양전이억제 효과 Example 15: Tumor metastasis inhibiting effect of the organic high activity Kimchi

본 실험에 사용된 동물인 Balb/c 마우스(female, 6주령)는 한국화학연구소(대전)에서 구입하였으며 사료는 표준사료로 사육하였다. The animal, Balb / c mice (female, 6 weeks old) used in the experiments was purchased from Korea Research Institute of Chemical Technology (Daejeon) feed was fed a standard diet. 사육시 물과 사료는 충분한 양을 공급하였고 동물실험실은 온도 22±1℃, 습도 55±5%를 유지하였으며 12시간 간격으로 명암사이클(light-dark cycle)을 유지하였다. Water and feed were supplied during breeding of a sufficient amount of animal laboratory was maintained at a temperature of 22 ± 1 ℃, contrast cycle (light-dark cycle) every 12 hours was maintained at a humidity 55 ± 5%. 배추김치의 종양전이억제효과를 측정하기 위하여 폐에 대하여 전이력을 획득한 고전이성 종양세포주인 Colon 26-M3.1 carcinoma(한동대학, 윤택준 박사)를 in virto에서 배양(7.5% FBS가 함유된 EME 배지)하여 배양액 100㎕(2.5×10 4 mL)를 Balb/c 마우스의 꼬리에 정맥주사하였다. The Colon 26-M3.1 carcinoma (Han Dong University, Ph.D. yuntaekjun) a classic binary tumor cell lines obtained before the history with respect to the waste to tumor metastasis of cabbage measuring the inhibitory effects on the virto in which the culture (7.5% FBS-containing EME medium) to the culture medium 100㎕ (2.5 × 10 4 mL) was injected into the tail vein of Balb / c mice. 각 군은 5마리로 하였으며 배추김치 메탄올 추출물은 종양세포접종 2일전에 피하주사하였다. Each group was to five cabbage methanol extracts were injected subcutaneously into two days before tumor cell inoculation. 전이된 종양의 판정은 종양접종 14일 후에 마우스를 희생시켜 종양의 표적기관인 폐를 적출한 다음 Bouin's 용액(saturated picric acid 15: formaline 5: acetic acid 1)에서 전이된 종양을 고정시킨 후 종양의 군집수를 계수하였고 배추김치에 의한 종양전이억제 효과는 종양만 접종한 대조군과 비교함으로서 측정하였다. Determination of metastatic tumor at the expense of mice 14 days after tumor inoculation the excision of the target organ lung tumor following Bouin's solution cluster of then fixing a tumor metastasis in a (saturated picric acid 15: acetic acid 1: formaline 5) tumor was counting the number of tumor metastasis inhibiting effect of the cabbage was determined by comparing with the control group, only the tumor inoculation. 실험결과, 표 32에 나타낸 바와 같이 colon 26-M3.1 carcinoma를 이용한 종양전이의 예방적 효과에 대한 실험결과에서 표준화 배추김치 I 투여군은 1.25mg/mouse를 피하주사했을 때 14%의 종양전이억제효과를 보였다. The experimental results, shown in Table 32 as colon 26-M3.1 carcinoma tumor preventive effect results in a standardization group for the cabbage I using transition is shown in the 14% tumor inhibition of metastasis when injected subcutaneously 1.25mg / mouse It had an effect. 유기 고활성 배추김치는 0.05mg의 낮은 농도에서도 표준화 배추김치 I 투여군과 비슷한 12%의 전이 억제효과를 나타내었고 1.25mg를 피하주사했을 때는 폐로 전이된 colon 26-M3.1 종양의 성장을 35% 정도 억제하여 유기고활성 배추김치가 암전이의 예방효과도 가지고 있음이 확인되었다. The organic and growth of the active cabbage showed a metastasis inhibitory effect of 12%, similar to the I group normalized cabbage even at low concentration of 0.05mg When subcutaneous injection of 1.25mg a closed transition colon 26-M3.1 tumor 35% inhibited by an organic high activity cabbage was confirmed that also have protective effect of cancer metastasis degree.

colon 26-M3.1 세포를 이용한 유기 고활성 배추김치의 종양전이 억제효과 colon 26-M3.1 organic and tumor metastasis inhibiting effect of the active cabbage Using cell 처리물 Water treatment Dose(mg/mouse) Dose (mg / mouse) 루트 root 폐암전이수(저해 %) Number of lung metastasis (inhibition%) 평균±SD Mean ± SD 범위 range 대조군 Controls sc sc 162±7 a 162 ± 7 a 153~172 153-172 C(I)김치 C (I) Kimchi 0.050.251.25 0.050.251.25 scscsc scscsc 157±13 ab (3) 1) 147±8 ab (9)139±5 bc (14) 157 ± 13 ab (3) 1 ) 147 ± 8 ab (9) 139 ± 5 bc (14) 142~172138~157131~144 142 ~ 172138 ~ 157131 ~ 144 OC(Ⅱ)김치 OC (Ⅱ) Kimchi 0.050.251.25 0.050.251.25 scscsc scscsc 143±12 b (12)125±15 c (23)103±5 d (36) 143 ± 12 b (12) 125 ± 15 c (23) 103 ± 5 d (36) 124~156109~14696~108 124 ~ 156109 ~ 14696 ~ 108 1) 괄호안의 값은 저해율(%) a~d Duncan's multiple range test에서 유의성(p<0.05) 있는 차이를 나타낸다. 1) The values in parentheses represents the difference in significance (p <0.05) from the inhibition rate (%) a ~ d Duncan's multiple range test.

이상, 상기 실시예와 실험예를 통하여 설명한 바와 같이 As described above through the embodiments and experimental examples

절인배추 100에 대해 무 13.0%, 파 2.0%, 고춧가루 7%, 마늘 2.8%, 생강 0.6%, 멸치액젓 2.2%, 설탕 1.0%, 최종염 2.5%, 초피 0.1%, 갓 5%의 레시피를 갖으며 15℃ 1차 발효시키고 pH4.3이 될 때까지 5℃ 저온에서 재차 발효시킨 본 발명 항암 기능성 배추김치와 이를 포함하는 식이는 in vitro에서 뿐만아니라 in vivo에서 항암 기능성을 나타내는 뛰어난 효과가 있고 상기 본 발명 김치도 보존성도 증가하는 뛰어난 효과가 있으므로 식품산업상 매우 유용한 발명인 것이다. No 13.0% for pickled Chinese cabbage 100, par 2.0%, red pepper powder 7%, garlic and 2.8%, ginger 0.6%, anchovy fish sauce 2.2%, has a recipe for the sugar 1.0%, 2.5% final salt, Chopi 0.1%, freshly 5% was diet containing the same and 15 ℃ 1 fermentation was the invention in which once again fermented in a low temperature 5 ℃ anticancer functional Kimchi until pH4.3 has an excellent effect that represents the anticancer functional in in vivo as well as in the in vitro because there is an excellent effect of the present invention kimchi increased storage stability is extremely useful inventions the food industry.

Claims (6)

  1. 절인배추 100에 대해 무 13.0%, 파 2.0%, 고춧가루 7%, 마늘 2.8%, 생강 0.6%, 멸치액젓 2.2%, 설탕 1.0%, 최종염 2.5%, 초피 0.1%, 갓 5%를 함유하는 것을 특징으로 하는 항암 기능성 배추김치. In that it contains a non-13%, par 2.0%, red pepper powder 7%, garlic and 2.8%, ginger 0.6%, anchovy fish sauce 2.2%, sugar 1.0%, 2.5% final salt, Chopi 0.1%, freshly 5% for pickled Chinese cabbage 100 anticancer functional Kimchi, characterized.
  2. 절인배추 100에 대해 무 13.0%, 파 2.0%, 고춧가루를 7%, 마늘을 2.8%, 생강 0.6%, 멸치액젓 2.2%, 설탕 1.0%, 최종염 2.5%, 초피 0.1%, 갓 5%를 함유하고 15℃에서 1차 발효시키고 pH 4.3일 될 때까지 5℃ 저온에서 재차 발효시킴을 특징으로 하는 항암 기능성 배추김치. Containing no 13%, par 2.0%, a hot pepper powder 7%, garlic and 2.8%, ginger, 0.6%, anchovy fish sauce 2.2%, sugar 1.0%, 2.5% final salt, Chopi 0.1%, freshly 5% for pickled Chinese cabbage 100 and from 15 ℃ 1 fermentation was pH anticancer functional Kimchi, characterized by re-Sikkim fermentation at a low temperature 5 ℃ until 4.3 days.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 배추와 무, 파, 생강, 고춧가루, 마늘, 초피, 갓이 유기농으로 재배한 것임을 특징으로 하는 항암 기능성 배추김치. According to claim 1 or 2, wherein the Chinese cabbage and radish, onion, ginger, red pepper powder, garlic, Chopi, anticancer functional Kimchi, characterized in that the freshly grown organically.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 최종염의 성분이 구운소금, 생금, 죽염으로 이루어진 가공염중 어느 하나 이상을 선택함을 특징으로 하는 항암 기능성 배추김치. According to claim 1 or 2, wherein the final salt component is baked salt, saenggeum, anticancer functional Kimchi, characterized in that the selection of any one or more of the gagongyeom made of bamboo salt.
  5. 절인배추 100에 대해 무 13.0%, 파 2.0%, 고춧가루를 7%, 마늘을 2.8%, 생강 0.6%, 멸치액젓 2.2%, 설탕 1.0%, 최종염 2.5%, 초피 0.1%, 갓 5%를 배합하고 15℃에서 1차 발효시키고 pH 4.3일 될 때까지 5℃ 저온에서 재차 발효시킴을 특징으로 하는 항암 기능성 배추김치 제조방법. A non-13%, par 2.0%, red pepper powder for pickled Chinese cabbage 100 blended with 7% garlic and 2.8%, ginger, 0.6%, anchovy fish sauce 2.2%, sugar 1.0%, 2.5% final salt, Chopi 0.1%, freshly 5% and method for producing anti-cancer functional Kimchi, characterized by at 15 ℃ until the primary fermentation pH 4.3 and is fermented at a low temperature re-il Sikkim 5 ℃.
  6. 제 1 항 기재의 배추김치를 4 ~ 8%, 카제인 18 ~ 20, DL-메티오닌 11%, 옥수수 전분 15%, 슈크로오스 49 ~ 50%, 섬유질 1 ~ 3, 옥수수유 4 ~ 5%, 미네랄 혼합물 3.5%, 비타민 혼합물 1.0%로 구성된 항암 기능성 배추김치 식이조성물. The 14-8% of the cabbage, wherein a substrate, casein, 18 ~ 20, 11% DL- methionine, 15% corn starch, 49-50% agarose as sucrose, fibers 1-3, 4-5% corn oil, mineral mixture of 3.5% vitamin mixture anticancer functional Kimchi dietary composition consisting of 1.0%.
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