KR19980071950A - Extraction and Separation of Peryl alcohol and D-limonene from Korean Tangerine Peel - Google Patents
Extraction and Separation of Peryl alcohol and D-limonene from Korean Tangerine Peel Download PDFInfo
- Publication number
- KR19980071950A KR19980071950A KR1019980027170A KR19980027170A KR19980071950A KR 19980071950 A KR19980071950 A KR 19980071950A KR 1019980027170 A KR1019980027170 A KR 1019980027170A KR 19980027170 A KR19980027170 A KR 19980027170A KR 19980071950 A KR19980071950 A KR 19980071950A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- alcohol
- ethanol
- limonene
- peryl
- mobile phase
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C29/00—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom not belonging to a six-membered aromatic ring
- C07C29/74—Separation; Purification; Use of additives, e.g. for stabilisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C33/00—Unsaturated compounds having hydroxy or O-metal groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C33/05—Alcohols containing rings other than six-membered aromatic rings
- C07C33/14—Alcohols containing rings other than six-membered aromatic rings containing six-membered rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
본 발명은 최근 유방암, 대장암, 췌장암, 폐암 등에 대해 항암제로서 관심을 모으고 있는 페릴릴알코올(perillyl alcohol)과 디-리모넨(d-limonene)을 한국산 귤껍질로부터 얻기 위한 추출 및 분리·정제 공정에 관한 것이다. 귤껍질로부터 용매를 사용하여 추출하는 공정, 헥산을 사용하여 층 분리에 의해 분배하는 공정, 유리 칼럼을 사용하여 페릴릴알코올을 농축하는 공정 및 역상 액체 크로마토그래피를 이용하여 페릴릴알코올을 분리·정제하는 공정으로 구성되어 있다. 추출 공정에서는 순수한 에탄올 100㎖에 귤껍질 분말 5g을 넣고 50∼55℃의 온도로 유지되고 있는 교반기에서 3시간 이상 교반하여 추출하였다. 이후에 추출물/헥산(1/5, 부피비)의 비율로 혼합하여 교반기에서 30분간 교반한 후 분별 깔대기로 층 분리를 하였다.The present invention relates to an extraction, separation and purification process for obtaining perillyl alcohol and d-limonene from Korean tangerine peels, which have recently been attracting attention as anticancer agents for breast cancer, colon cancer, pancreatic cancer, lung cancer, . A process of extracting from the tangerine peel using a solvent, a process of dividing by layer separation using hexane, a process of concentrating perillic alcohol using a glass column, and a process of separating and purifying perillic alcohol using reversed phase liquid chromatography . In the extraction process, 5 g of tangerine peel powder was added to 100 ml of pure ethanol, and the mixture was stirred for 3 hours or more in an agitator maintained at a temperature of 50 to 55 ° C. Then, the mixture was mixed at a ratio of extract / hexane (1/5, volume ratio), stirred for 30 minutes in a stirrer, and layered with a separating funnel.
층 분리가 이루어진 에탄올층과 헥산층에서 각기 페릴릴알코올 및 디-리모넨과 불순물들이 분배되었다. 페릴릴알코올이 포함된 에탄올 추출물을 C18충전물이 채워진 유리 칼럼에 순수한 에탄올을 사용하여 페릴릴알코올을 농축하였다. 이러한 방법으로 얻어진 시료 농축액을 역상 액체 크로마토그래피에서 물, 아세토나이트릴, 에탄올을 이동상으로 사용하고, 이동상의 유속을 0.5∼1.0㎖/min, UV 검지기를 205nm로 고정하고 시료 10㎕를 분석용 μ-Bondapak(3.9×300㎜, 10㎛) 칼럼에 주입하여 페릴릴알코올을 분석하였다. 또한 페릴릴알코올과 디-리모넨을 상업적 규모로 확장하기 위해서 분석용 칼럼에서와 동일한 조건으로 시료 10, 50, 100㎕를 15㎛ 크기의 C18충전물로 충진되어 있는 제조용 칼럼(3.9×300㎜)에 주입하여 페릴릴알코올을 분취하였다.In the layered ethanol and hexane layers, peryl alcohol and di-limonene and impurities were distributed, respectively. Peryl alcohol was concentrated using a pure ethanol on a glass column filled with C 18 packing material and an ethanol extract containing peryl alcohol. Water, acetonitrile and ethanol were used as mobile phase in reverse phase liquid chromatography, and the flow rate of the mobile phase was fixed at 0.5 to 1.0 ml / min and the UV detector was fixed at 205 nm. -Bondapak (3.9 x 300 mm, 10 [mu] m) column to analyze the perillic alcohol. In order to expand peryl alcohol and D-limonene on a commercial scale, 10, 50 and 100 μl of the sample were added to a preparation column (3.9 × 300 mm) filled with a C 18 filling material having a size of 15 μm under the same conditions as in the analytical column, To prepare perillic alcohol.
Description
산업의 발달에 따른 대기 및 수질오염으로 인해 각종 난치성 질병들이 늘어나고 생활수준의 향상으로 건강에 대한 관심이 증대되고 있다. 따라서 각종 불치병들을 치료하기 위한 연구가 광범위하게 진행되어 왔다. 식물의 잎 혹은 열매에는 여러 가지 필수적인 성분들이 존재한다. 이러한 성분(주로 오일상태)들은 향기를 갖고 있어서 인간 생활에 광범위하게 사용되어 왔으며 품질, 신선도의 향상, 독특한 성질을 상업적으로 이용하기 위한 연구가 폭넓게 진행되고 있다. 그러나 불포화된 여러 성분들이 많이 포함되어 있고 휘발성이 있는 화학적 물질로 혼합되어 있기 때문에 일반적으로 불안정하고 보관의 조건과 시간 그리고 장소에 따라 성질이 변하게 된다. 이러한 성분들은 공기와의 접촉으로 산화되거나 보관중 열, 빛, 습도에 노출되거나 촉매의 영향에 의해서 중합과 재배열이 일어나게 된다.Due to the development of industry, air pollution and water pollution increase the incidence of various intractable diseases. Therefore, a wide range of studies have been conducted to treat various incurable diseases. There are many essential components in the leaves or fruits of plants. These components (mainly oil) have a fragrance and have been extensively used in human life. Researches for commercial use of quality, freshness improvement, and unique properties have been widely carried out. However, because it contains many unsaturated components and is mixed with volatile chemical substances, it is generally unstable and its properties change depending on the storage condition, time and place. These components can be oxidized by contact with air, exposed to heat, light, humidity during storage, or polymerized and rearranged due to the effect of the catalyst.
귤이나 오렌지등의 감귤류의 표피에 포함된 성분 중에서 리모넨은 식물을 구성하는 필수적인 성분으로서 화학적 구조식은 C10H16이며 monoterpene으로 부터 자연적으로 생성된다. 레몬과 같은 향기가 있기 때문에 음료, 제과, 제약, 화장품 산업에 주로 사용되었으나 최근에는 CFC 113 및 1,1,1 TCE의 고급 세정제가 오존층을 파괴하는 규제물질로 지정이 되어 유망한 대체 세정제의 주성분으로 사용되고 있다. 리모넨의 광학 이성질체에는d,l이 있다.d체는 등피유, 레몬유, 베르가모트유, 회향유 등에 포함되어 있으며,l체는 송엽유, 박하유 등에 많이 들어 있다. 또한 최근의 연구에서는 디-리모넨이 항암제로서의 효능이 있다고 밝혀졌다[M. A. Morse and A. L. Toburen, Cancer Letters,104, 211 (1996)]. 감귤류를 구성하고 있는 성분들에는 리모넨뿐만 아니라 여러 가지 성분들이 포함되어 있다. 이 중에서 페릴릴알코올은 의학적으로 항암제로서의 치료 효과가 입증되고 있다[U. S. Patent-5,487,988, 1/1996, H. C. Chang, et al.: WO-95/24895, 9/1995, M. N. Gould, et a1.]. 페릴릴알코올은 유방암, 백혈병, 대장암, 췌장암, 폐암 등의 치료효과가 뛰어나기 때문에 사용범위가 확대되고 많은 연구가 진행되고 있다.Among the components contained in the epidermis of citrus fruits such as mandarins and oranges, limonene is an essential constituent of plants and has a chemical structure of C 10 H 16 and is naturally produced from monoterpene. It has been used mainly in the beverage, confectionery, pharmaceutical and cosmetic industries because of its lemon-like aroma. Recently, however, the advanced cleaning agent of CFC 113 and 1,1,1 TCE has been designated as a regulatory substance to destroy the ozone layer. . There are d and l in optical isomers of limonene. d sieve is included like deungpiyu, lemon oil, bergamot oil, hoehyangyu, l body is a lot like Pine oil, peppermint oil. Recent studies have also shown that di-limonene has efficacy as an anticancer agent [MA Morse and AL Toburen, Cancer Letters, 104 , 211 (1996)]. The constituents of citrus include not only limonene but also various components. Among them, peryl alcohol is medically proved to have therapeutic effect as an anticancer drug [US Pat. No. 5,487,988, Jan. 1996, HC Chang, et al .: WO-95/24895, 9/1995, MN Gould, et al. . Since perillail alcohol has excellent therapeutic effects such as breast cancer, leukemia, colorectal cancer, pancreatic cancer, and lung cancer, the scope of use has been expanded and many studies have been conducted.
페릴릴알코올의 화학적 구조식은 C10H16O이고 1-Hydroxymethyl-4-isopropenyl-cyclogexene, 4-isopropenyl-1-cyclohexene-1-met hanol, p-mentha 1,8-dien-7-ol로서 지칭되고 있다. (R)-(+)-페릴릴알코올, (S)-(-)-페릴릴알코올의 이성질체를 가지고 있다. 페릴릴알코올을 얻는 방법에는 식물로부터 직접 추출하는 방법, 화학적 구조가 비슷한 물질로부터 합성에 의한 방법[U.S. Pantent-5,487,988, 1/1996, H. C. Chang, et al.], 박테리아와 같은 세균들로부터 세포배양에 의해서 얻는 방법[H. C. Chang and P.Oriel, J. Food Sci.,59, 660(1994)]등이 있다. 최근의 연구에서는 추출 용매로 메탄올을 사용하여 페릴릴알코올과 디-리모넨을 한국산 귤껍질로부터 직접 추출하는 연구를 발표하여 현재 특허 출원중에 있다[한국특허-출원번호 : 40122(1997)].The chemical structure of peryl alcohol is C 10 H 16 O and is referred to as 1-Hydroxymethyl-4-isopropenyl-cyclogexene, 4-isopropenyl-1-cyclohexene-1-met hanol and p-mentha 1,8-dien- . (R) - (+) - peryl alcohol and the isomer of (S) - (-) - peryl alcohol. Methods for obtaining perillic alcohol include direct extraction from plants, methods by synthesis from materials having similar chemical structures [US Pantent-5,487,988, 1/1996, HC Chang, et al.], Cell culture from bacteria such as bacteria (HC Chang and P. Oriel, J. Food Sci., 59 , 660 (1994)). Recently, a study on extracting perillail alcohol and di-limonene directly from Korean tangerine peel using methanol as an extraction solvent has been filed and is currently under patent application [Korean Patent - Application No. 40122 (1997)].
본 발명에서는 가정 혹은 식품가공 공장등에서 페자원화되고 있는 한국산 귤로부터 페릴릴알코올과 리모넨의 추출 및 분리·정제 공정을 확립하는 것이 목적이다. 또한 최근 급속도로 신장하고 있는 국내 항암제시장에서의 수요의 충당과 국제 경쟁력의 우위, 의약과 관련된 산업분야의 활성화에 크게 기여할 것으로 생각된다.The objective of the present invention is to establish a process for the extraction, separation and purification of perillic alcohol and limonene from Korean mandarin oranges which are being recycled at domestic or food processing factories. In addition, it is expected to greatly contribute to the provision of demand in the domestic cancer drug market, which is rapidly expanding in recent years, the advantage of international competitiveness, and the activation of industrial fields related to medicine.
본 실험에서는 국내에서 재배된 귤껍질을 맑은 물로 잘 닦은 후 오븐(60∼65℃로 유지)에서 건조(4시간 이상)시켰다. 잘 건조된 귤껍질을 분말로 만들었다. 귤껍질 분말 5g에 용매인 에탄올 100㎖를 넣고 50∼55℃로 유지되고 있는 교반기에서 3시간 이상 교반하여 추출을 하였다. 이 추출물은 헥산과 함께 추출물/헥산=1/5∼1/3(부피비)의 비율로 혼합하여 30분간 교반하고 분별 깔대기로 층분리를 시켰다. 층분리가 이루어진 에탄올층과 헥산층을 각각 분리한 후 에탄올층의 용액을 회전식 증발기를 사용하여 농축하였다. 기체 크로마토그래피를 다음과 같은 실험조건에서 에탄올 농축액을 분석하였다. 시료의 주입량은 1㎕이고 N2의 유량 0.8㎖/min, 주입기 온도 250℃, 검지기 온도 300℃, 분할비율 1 : 50, 오븐 온도는 50℃에서 80℃까지 10℃/min, 80℃에서 250℃까지 5℃/min의 속도의 승온 온도프로그램을 적용하여 HP-5 (Crosslinked 5% PH ME Siloxane, 30m×0.32㎜) 모세관에서 분석하였다. 추출물/헥산에 의한 층 분리를 통해서 에탄올층에 페릴릴알코올과 디-리모넨이 모두 존재하였으며, 헥산에 의해서 많은 불필요한 성분들을 제거하였다. 이러한 방법으로 얻어진 추출액을 유리칼럼에서 이동상으로 순수한 에탄올을 사용하여 농축을 하였다. 전처리 및 유리칼럼에 의해 농축이 된 시료를 역상 액체 크로마토그래피에서 이동상으로 물, 에탄올, 아세토나이트릴을 사용하고, 이동상의 유량 0.5∼1.0㎖/min, 205nm의 UV 검지기 조건하에서 에탄올 농축액 10㎕를 주입하여 페릴릴알코올을 정제하였다. 아래 제1도에서는 귤껍질로부터 페릴릴알코올의 추출공정 이다.In this experiment, domestic peeled tangerine peel was washed well with clear water and then dried in oven (kept at 60 ~ 65 ℃) (more than 4 hours). A well-dried tangerine peel was made into powder. 100 ml of ethanol as a solvent was added to 5 g of the orange peel powder, and the mixture was stirred for 3 hours or more in an agitator maintained at 50 to 55 캜 for extraction. The extract was mixed with hexane at a ratio of extract / hexane = 1/5 to 1/3 (volume ratio), stirred for 30 minutes, and layered with a separating funnel. After separation of the layered and separated hexane layers, the solution of the ethanol layer was concentrated using a rotary evaporator. The ethanol concentrate was analyzed by gas chromatography under the following experimental conditions. The injection amount of the sample was 1 이고, the flow rate of N 2 was 0.8 ml / min, the injector temperature was 250 캜, the detector temperature was 300 캜, the division ratio was 1:50, the oven temperature was 50 캜 / (Crosslinked 5% PH ME Siloxane, 30 m × 0.32 mm) capillary tube at a rate of 5 ° C./min. Through layer separation by extract / hexane, both peryl alcohol and di - limonene were present in the ethanol layer and many unnecessary components were removed by hexane. The extract obtained by this method was concentrated on a glass column using mobile ethanol as pure mobile phase. A sample which had been pretreated and concentrated by a glass column was subjected to reversed-phase liquid chromatography using water, ethanol and acetonitrile as mobile phases and 10 μl of ethanol concentrate under the conditions of a mobile phase flow rate of 0.5 to 1.0 ml / min and a UV detector of 205 nm And the perillic alcohol was purified. Figure 1 below shows the extraction process of perillic alcohol from tangerine peel.
실시예 1. 에탄올 용매에 의한 페릴릴알코올과 디-리모넨의 추출EXAMPLES Example 1. Extraction of peryl alcohol and di-limonene by ethanol solvent
페릴릴알코올과 디-리모넨의 추출 수율이 가장 우수한 용매인 메탄올을 사용하여 귤껍질에 들어 있는 유용 성분들을 추출하고 인체에 사용하기 위해서는 독성이 강한 메탄올을 완전히 제거해야하는 문제점이 있다. 따라서 이러한 문제점을 해결하고자 본 연구에서는 인체에 무해한 용매인 에탄올을 사용하여 한국산 귤껍질로부터 페릴릴알코올과 디-리모넨을 추출하는 실험을 하였다. 우선 온도변화에 따른 에탄올 용매의 영향을 알아보기 위해서 귤껍질 분말 5g에 에탄올 100㎖를 넣고 추출온도를 상온, 40, 50, 60℃로 각각 변화시키면서 교반기에서 3시간 이상 교반하여 추출을 하였다. 추출액을 회전식 증발기를 사용하여 20㎖로 농축하였다. 농축액의 주입양을 1㎕, N2의 유량 0.8㎖/min, 주입기 온도 250℃, 검지기 온도300℃, 분할비율 1:50, 오븐 온도는 50℃에서 80℃까지 10℃/min, 80℃에서 250℃까지 5℃/min의 속도의 승온 온도프로그램을 적용하여 HP-5 모세관을 기체 크로마토그래피에서 사용하여 페릴릴알코올과 디-리모넨을 분석하였다. 실험결과 페릴릴알코올은 20, 40, 50, 60℃에서 각기 0.182, 0.225, 0.235, 0.279mg/㎖을 얻어 온도가 높아짐에 따라 페릴릴알코올의 용해도도 선형적으로 증가하였다. 하지만 추출온도가 60℃ 이상이 되면 인화점 때문에 본 연구에서는 추출온도를 60℃보다 낮은 50∼55℃로 유지하면서 페릴릴알코올과 디-리모넨을 추출하였다. 제2도에서는 에탄올을 사용하여 추출한 추출물을 이동상으로 물/아세토나이트릴(70/30, 부피비), 이동상의 유량 1.0㎖/min, UV 검지기를 205nm로 고정하고 추출시료 10㎕를 분석용칼럼에 주입하여 얻은 크로마토그램이다. 분석에 사용된 시료는 에탄올에 의해 추출한 시료를 사용하였기 때문에 많은 불필요한 성분들이 포함이 되어 있는 것을 /크로마토그램에서 확인할 수 있었다.The extraction efficiency of perillail and di-limonene is the most excellent solvent, and it is necessary to completely remove toxic methanol in order to extract the useful components contained in the peel of the tangerine and use in the human body. In order to solve these problems, this study was conducted to extract perillail alcohol and d - limonene from Korean tangerine peel using ethanol which is harmless to human body. First, 100 ml of ethanol was added to 5 g of tangerine peel powder and the extraction temperature was changed to 40, 50 and 60 ℃, respectively. The extract was concentrated to 20 ml using a rotary evaporator. The oven temperature was changed from 50 캜 to 80 캜 at a rate of 10 캜 / min and at 80 캜 for 1 minute at a flow rate of 0.8 ml / min of N 2 , an injector temperature of 250 캜, a detector temperature of 300 캜, Perillilla alcohol and d-limonene were analyzed using HP-5 capillaries in gas chromatography applying a temperature ramp at a rate of 5 ° C / min up to 250 ° C. As a result, perillail alcohol was increased to 0.182, 0.225, 0.235 and 0.279mg / ㎖ at 20, 40, 50 and 60 ℃, respectively, and the solubility of peryl alcohol increased linearly with increasing temperature. However, when the extraction temperature is above 60 ℃, the ferryl alcohol and di - limonene were extracted in this study because the flash point was maintained at 50 ~ 55 ℃, which is lower than 60 ℃. In FIG. 2, the extract extracted with ethanol was immobilized on a mobile phase of water / acetonitrile (70/30, volume ratio), the flow rate of the mobile phase was 1.0 ml / min, the UV detector was set at 205 nm, This is the chromatogram obtained by injection into the column. The sample used for the analysis was a sample extracted by ethanol, so it was confirmed that it contained many unnecessary components in the chromatogram.
실시예 2. 층 분리에 의한 귤껍질 추출물의 분배Example 2. Distribution of tangerine peel extract by layer separation
실시예 1의 제2도에서 확인한 것과 같이 추출 용매로서 에탄올을 사용하여 추출한 귤껍질 추출물 중에는 많은 성분들이 포함이 되어 있다. 불필요한 성분들을 제거하기 위해서 추출물의 분배공정을 적용하였다. 본 발명에서는 에탄올 추출물을 헥산과 일정 비율로 혼합하여 층 분리를 함으로써 많은 불순물들을 제거하였다. 에탄올에 의한 추출물과 헥산을 1:1의 부피비로 혼합하여 층분리를 하여 추출물중에서 많은 불순물들을 제거하였다. 또한 혼합하는 헥산의 양을 조절해 가며 실험을 한 결과 추출물/헥산의 비율이 1/5(부피비) 이상에서 많은 불순물들을 제거할 수 있었다. 분배 후 추출물에 포함되어 있는 페릴릴알코올과 디-리모넨은 에탄올 층에 존재하였다. 제3도는 헥산을 사용하여 층분리가 이루어진 에탄올 층을 이동상으로 물/아세토나이트릴(70/30, 부피비), 이동상의 유량 1.0㎖/min, UV 검지기를 205nm로 고정하고 추출시료 10㎕를 분석용 μ-Bondapak 칼럼에 주입하고 제2도에서와 동일한 조건으로 분석한 크로마토그램이다. 제2도와 비교했을 때 시료가 주입이 되고 분석이 이루어지는 10분사이에서 많은 불순물들이 제거되었다. 헥산에 의해 층 분리가 된 에탄올 층을 충진물의 크기가 40∼63㎛인 C1816g이 유리 칼럼에 충진되어 있는 유리 칼럼에 이동상으로 순수한 에탄올 용매를 사용하여 통과시킴으로써 추출물에 존재하는 많은 불순물들을 효과적으로 제거할 수 있었다.As shown in FIG. 2 of Example 1, the orange peel extract extracted with ethanol as an extraction solvent contains many components. To remove the unnecessary components, the extraction process was applied. In the present invention, the ethanol extract was mixed with hexane at a predetermined ratio to remove the impurities. Ethanol extracts and hexane were mixed at a volume ratio of 1: 1 and layer separation was performed to remove many impurities in the extract. As a result of the experiment, it was possible to remove many impurities at a ratio of 1/5 (volume ratio) of extract / hexane. The perillail alcohol and di - limonene contained in the extract after the distribution were present in the ethanol layer. 3 shows the results of analyzing the ethanol layer having the layer separation using hexane as the mobile phase with water / acetonitrile (70/30, volume ratio), the flow rate of the mobile phase at 1.0 ml / min, the UV detector at 205 nm, Bondapak column and analyzed under the same conditions as in Fig. 2. Compared with the second method, many impurities were removed during the 10 minutes of sample injection and analysis. The hexane-partitioned ethanol layer was passed through a glass column filled with 16 g of C 18 , having a size of 40 to 63 μm, as a mobile phase, using a pure ethanol solvent, thereby effectively removing a large amount of impurities present in the extract I could remove it.
실시예 3. 역상 액체크로마토그래피에서 분석용 칼럼에 의한 에탄올 및 매탄올 추출물로부터 폐릴릴알코올의 분석Example 3. Analysis of Pyridyl Alcohol from Ethanol and Methanol Extracts by Analytical Column in Reversed Phase Liquid Chromatography
귤껍질 분말을 메탄올을 사용하여 추출하고 추출물을 물과 클로로포름을 사용하여 층 분리에 의해 분배를 하였다. 물층에 포함된 페릴릴알코올을 유리 칼럼에서 농축하여 얻어진 추출물을 역상 액체 크로마토그래피에서 분석하였다. 제4도는 국내산 귤껍질로터 메탄올에 의해 추출된 추출액을 이동상으로 물/아세토나이트릴(65/35, 부피비), 이동상의 유량 1.0㎖/min, UV 검지기를 205nm로 고정하고 분석용칼럼에 10㎕를 주입하여 분석한 크로마토그램이다. 분석에 사용된 메탄올 추출물 시료는 앞에서 전처리 및 농축 단계를 모두 거쳤기 때문에 많은 양의 불순물들이 제거되어 페릴릴알코올의 분리가 쉽게 이루어졌다. 또한 농도가 10ppm인 페릴릴알코올 표준시료를 동일한 조건에서 액체 크로마토그래피에 주입하여 페릴릴알코올의 정성분석을 하였다. 페릴릴알코올의 정성분석에 사용된 표준시약은 Aldrich Co.에서 구입하였다. 본 조건에서 페릴릴알코올의 체류시간은 21분이었으며 건조한 귤껍질 1g 당 0.218㎎의 페릴릴알코올을 얻었다. 독성이 있는 메탄올과 아세토나이트릴을 사용하지 않고 에탄올만을 사용하여 추출, 분배 및 이동상에서 실험하였다. 제5도에서는 에탄올을 물과 함께 물/에탄올(55/45, 부피비)으로 이동상으로 사용하고 이동상의 유량 0.5㎖/min으로 하여 분석을 하였다. 이동상으로 에탄올을 사용하게 되면 압력이 높아져서 이동상의 유량을 0.5㎖/min로 하였다. 용매를 사용하여 귤껍질로부터 추출, 유리칼럼에 의한 농축 및 액체 크로마토그래피에 의한 페릴릴알코올의 분리, 정제의 전 공정에서 무해한 에탄올을 사용하여 페릴릴알코올을 분리하였다. 건조한 귤껍질 1g을 기준으로 0.281㎎의 페릴릴알코올을 얻었다.The orange peel powder was extracted with methanol, and the extract was distributed by layer separation using water and chloroform. The extract obtained by concentrating the perillail alcohol contained in the water layer in a glass column was analyzed by reversed phase liquid chromatography. In Figure 4, the extracts from domestic tangerine peel rotor methanol were immobilized on mobile phase with water / acetonitrile (65/35, volume ratio), mobile phase flow rate 1.0 ml / min, UV detector at 205 nm, This is a chromatogram obtained by injecting 10 μl into the column. The methanol extracts used in the analysis were subjected to both the pretreatment and the concentration step, so that a large amount of impurities were removed and the separation of the perillic alcohol was easy. In addition, a standard sample of perillail alcohol having a concentration of 10 ppm was injected into liquid chromatography under the same conditions to perform qualitative analysis of perillic alcohol. Standard reagents used for qualitative analysis of peryl alcohol were purchased from Aldrich Co. In this condition, the retention time of peryl alcohol was 21 minutes, and 0.218 mg of peryl alcohol was obtained per 1 g of dried tangerine peel. Extraction, distribution and migration experiments were carried out using only ethanol without using toxic methanol and acetonitrile. In FIG. 5, ethanol was analyzed using water / ethanol (55/45, volume ratio) as a mobile phase with water and a mobile phase flow rate of 0.5 ml / min. When ethanol was used as the mobile phase, the pressure increased and the flow rate of the mobile phase was set at 0.5 ml / min. The perillic alcohol was separated from the orange peel using a solvent, concentrated by a glass column, and separated by liquid chromatography. 0.281 mg of peryl alcohol was obtained based on 1 g of dried tangerine peel.
실시예 4. 역상 액체크로마토그래피에서 제조용 칼럼에 의한 에탄올 및 메탄올 추출물로부터 페릴릴알코올의 분석Example 4. Analysis of perillic alcohol from ethanol and methanol extracts by preparative column in reversed-phase liquid chromatography
실시예 3에서는 분석용칼럼에서 메탄올 및 에탄올에 의해 추출된 추출액으로부터 페릴릴알코올을 분석하였다. 그러나 상업적 규모로 많은 양의 페릴릴알코올을 분리하기 위해서는 제조용 규모로 확대할 필요성이 있다. 제6도에서는 메탄올 추출액을 이동상으로 물/아세토나이트릴(65/35, 부피비), 이동상의 유량 1.0㎖/min, UV 검지기를 205nm로하고 15㎛ 크기의 C18충전물로 충진되어 있는 칼럼(3.9×300)에 추출액을 10, 50, 100㎕를 주입하여 분석한 크로마토그램이다. 주입되는 시료의 양이 증가함에 따라 페릴릴알코올의 양도 증가되었으며 페릴릴알코올의 피크 앞부분에서 프론팅이 생겼지만 분리가 잘 이루어 졌으며 체류시간은 38분이었다. 에탄올 추출물인 경우 이동상으로 물/에탄올(58/42, 부피비), 이동상의 유량 0.7㎖/min, UV 검지기 205nm, 10, 50㎕ 시료를 제조용 칼럼에 주입하였다. 제7도에서는 이에 대한 크로마토그램을 나타내고 있다. 제6도에서와 마찬가지로 주입되는 시료의 양이 증가됨에 따라서 분리되어 나오는 페릴릴알코올의 양도 증가되었으며 체류시간은 49분이었다.In Example 3, In the column, peryl alcohol was analyzed from the extracts extracted by methanol and ethanol. However, in order to separate a large amount of perillic alcohol on a commercial scale, there is a need to expand the production scale. In FIG. 6, a methanol extract was used as a mobile phase (water / acetonitrile (65/35, volume ratio), a flow rate of the mobile phase of 1.0 ml / min, a UV detector of 205 nm and a column filled with a C 18 packing × 300) was injected with 10, 50 and 100 μl of the extract. As the amount of injected sample increased, the amount of peryl alcohol was increased, and the fronting occurred at the front of the peak of peryl alcohol, but the separation was good and the residence time was 38 minutes. In the case of the ethanol extract, water / ethanol (58/42, volume ratio), mobile phase flow rate 0.7 ml / min, UV detector 205 nm, 10 and 50 μl samples were injected into the preparation column as a mobile phase. FIG. 7 shows the chromatogram therefor. As in FIG. 6, as the amount of injected sample was increased, the amount of peryl alcohol separated was increased and the residence time was 49 minutes.
상기의 식별자가 없습니다.The above identifier is missing.
도 1은 한국산 귤껍질로부터 에탄올에 의한 페릴릴알코올과 리모넨의 추출 공정의 개요도1 is an outline of the extraction process of peryl alcohol and limonene from Korean tangerine peel by ethanol
도 2는 에탄올에 의한 추출물로부터 역상 액체 크로마토그래피를 사용한 페릴릴알코올의 분석Figure 2 shows the analysis of perillic alcohol using reverse phase liquid chromatography from ethanol extracts.
도 3는 추출물/헥산의 층 분리에 의한 역상 액체 크로마토그래피를 사용한 페릴릴알코올의 분석Figure 3 shows the analysis of perillic alcohol using reversed phase liquid chromatography by layer separation of extract / hexane
도 4는 메탄올 추출물의 역상 액체 크로마토그래피의 분석용 칼럼을 사용한 페릴릴알코올의 분석Figure 4 shows the analysis of perillic alcohol using an analytical column for reversed phase liquid chromatography of methanol extracts
도 5는 에탄올 추출물의 역상 액체 크로마토그래피의 분석용 칼럼을 사용한 페릴릴알코올의 분석Figure 5 shows the analysis of perillic alcohol using an analytical column for reversed phase liquid chromatography of ethanol extracts
도 6는 메탄올 추출물을 역상 액체 크로마토그래피의 제조용 칼럼과 이동상으로 물/에탄올 사용하여 페릴릴알코올의 분석FIG. 6 shows the analysis of perillic alcohol by using methanol / water extract / ethanol column as a mobile phase and a preparative column for reversed phase liquid chromatography
도 7는 역상 액체 크로마토그래피를 사용한 이동상으로 물/에탄올을 사용하여 에탄올 추출물을 제조용 칼럼에 주입하여 페릴릴알코올을 분석7 shows the results of analysis of perillic alcohol by injecting an ethanol extract into a preparation column using water / ethanol as a mobile phase using reverse phase liquid chromatography
상기의 식별자가 없습니다.The above identifier is missing.
상기의 식별자가 없습니다.The above identifier is missing.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019980027170A KR100324895B1 (en) | 1998-07-07 | 1998-07-07 | A method of extraction and seperation of perillyl alcohol using ethanol from orange peel |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1019980027170A KR100324895B1 (en) | 1998-07-07 | 1998-07-07 | A method of extraction and seperation of perillyl alcohol using ethanol from orange peel |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR19980071950A true KR19980071950A (en) | 1998-10-26 |
| KR100324895B1 KR100324895B1 (en) | 2002-11-29 |
Family
ID=37478122
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1019980027170A KR100324895B1 (en) | 1998-07-07 | 1998-07-07 | A method of extraction and seperation of perillyl alcohol using ethanol from orange peel |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100324895B1 (en) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100452467B1 (en) * | 2002-01-10 | 2004-10-12 | 주식회사 고센바이오텍 | Extraction of functional materials and removal of oxidation compounds from citrus junos using subcritical and supercritical carbon dioxide |
| WO2015026138A1 (en) * | 2013-08-22 | 2015-02-26 | 전남대학교산학협력단 | Method for removing limonene and device for removing limonene in biomass saccharification liquid, and bioethanol production method using the removal method |
| CN116003221A (en) * | 2022-11-16 | 2023-04-25 | 辽宁蒽进生物技术有限公司 | Method for enriching and purifying sclareol from sclareol microbial fermentation liquor |
| CN116559307A (en) * | 2023-01-10 | 2023-08-08 | 江南大学 | High performance liquid chromatography detection method for perillyl alcohol in bacterial strain fermentation liquor |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102241557A (en) * | 2010-05-10 | 2011-11-16 | 孙志高 | Process for supercritical extraction of limonene from sweet orange peel essential oil |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR970069961A (en) * | 1997-08-22 | 1997-11-07 | 노경호 | Extraction and Concentration Process of Peryl Alcohol and Limonene from Korean Tangerine Peel |
-
1998
- 1998-07-07 KR KR1019980027170A patent/KR100324895B1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100452467B1 (en) * | 2002-01-10 | 2004-10-12 | 주식회사 고센바이오텍 | Extraction of functional materials and removal of oxidation compounds from citrus junos using subcritical and supercritical carbon dioxide |
| WO2015026138A1 (en) * | 2013-08-22 | 2015-02-26 | 전남대학교산학협력단 | Method for removing limonene and device for removing limonene in biomass saccharification liquid, and bioethanol production method using the removal method |
| CN116003221A (en) * | 2022-11-16 | 2023-04-25 | 辽宁蒽进生物技术有限公司 | Method for enriching and purifying sclareol from sclareol microbial fermentation liquor |
| CN116559307A (en) * | 2023-01-10 | 2023-08-08 | 江南大学 | High performance liquid chromatography detection method for perillyl alcohol in bacterial strain fermentation liquor |
| CN116559307B (en) * | 2023-01-10 | 2024-03-15 | 江南大学 | High performance liquid chromatography detection method for perillyl alcohol in bacterial strain fermentation liquor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR100324895B1 (en) | 2002-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vetter et al. | Enantioselective determination of chiral organochlorine compounds in biota by gas chromatography on modified cyclodextrins | |
| Ben Salha et al. | A status review of terpenes and their separation methods | |
| EP2212004B1 (en) | Method to recover bioactive compounds | |
| JP2004501757A (en) | Separation method | |
| CN100482657C (en) | Process for purifying (-)-delta 9-trans-tetrahydrocannabinol | |
| Rajabi et al. | Ionic liquid-based ultrasound-assisted surfactant-emulsified microextraction for simultaneous determination of three important flavoring compounds in plant extracts and urine samples | |
| Suto et al. | Determination of berberine and palmatine in Phellodendri Cortex using ion-pair supercritical fluid chromatography on-line coupled with ion-pair supercritical fluid extraction by on-column trapping | |
| Braddock et al. | Extraction parameters and capillary electrophoresis analysis of limonin glucoside and phlorin in citrus byproducts | |
| KR19980071950A (en) | Extraction and Separation of Peryl alcohol and D-limonene from Korean Tangerine Peel | |
| Howard et al. | Feasibility of thiocarbamate pesticide analysis in apples by supercritical fluid extraction and high-performance liquid chromatography | |
| CN106226426A (en) | A kind of high performance liquid chromatography splits the method for canagliflozin five-membered ring impurity enantiomer | |
| Shadabi et al. | Selective separation of essential phenolic compounds from olive oil mill wastewater using a bulk liquid membrane | |
| KR101196639B1 (en) | A novel single purification column kit for simultaneously removing sulfur, water and polar organic chemical materials containing sample | |
| Suto et al. | Determination of magnolol and honokiol in Magnoliae Cortex using supercritical fluid chromatography on-line coupled with supercritical fluid extraction by on-column trapping | |
| CN112010832A (en) | High-efficiency preparation method and application of high-purity amide alkaloid component | |
| de Paiva et al. | Isolation of secondary metabolites from roots of Plumbago auriculata Lam. by countercurrent chromatography | |
| Chu | Isolation of altenuisol and altertoxins I and II, minor mycotoxins elaborated byalternaria | |
| Ashraf-Khorassani et al. | Supercritical fluid extraction of michellamines A and B from ancistrocladus korupensis leaves | |
| Surve et al. | Flash Chromatography and Semi-Preparative HPLC: Review on the Applications and Recent Advancements over the Last Decade | |
| KR100352561B1 (en) | Extraction of Perillyl Alcohol from Orange Peel by Supercritical Carbon Dioxide | |
| Al-Sheibany et al. | Qualitative and quantitative evaluation of some organic compounds in Iraqi Thyme | |
| CN113698309A (en) | Method for extracting and separating betaine ester from bolete | |
| KR20030010011A (en) | A process of extraction of epigallocatechin gallate from green tea | |
| CN101085794B (en) | Method for preparing 10-deacetyl asperulosidic acid methyl ester | |
| Kumar et al. | Efficient protocols of extraction, isolation and structural determination of active compounds from medicinal plants |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| G15R | Request for early opening | ||
| N231 | Notification of change of applicant | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| AMND | Amendment | ||
| E601 | Decision to refuse application | ||
| J201 | Request for trial against refusal decision | ||
| AMND | Amendment | ||
| B701 | Decision to grant | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130123 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140117 Year of fee payment: 13 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150121 Year of fee payment: 14 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160201 Year of fee payment: 15 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20161220 Year of fee payment: 16 |
|
| LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |