KR19980059983A - 간암 세포를 갖는 랫드 모델 및 그 제조방법 - Google Patents
간암 세포를 갖는 랫드 모델 및 그 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
인체 간암과 발생 장기 위치가 동일하며 암 전이 및 간암 진전 양상이 인체의 간암을 최적으로 모방하는 간암 세포 직생 모델 동물을 제조하기 위한 연구 결과 간암이 인체 간암과 같이, 조직학적 발생 양상에 있어서 미분화 악성 종양의 특징인 왕성한 핵분열, 빈번한 고사체, 응고 괴사 그리고 심한 데스모플라시아의 조직학적 양상을 나타내는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델을 제공함으로써 정상면역 능력을 갖으면서 인체 고형 간암과 같이 알파-페토프로틴을 분비하는 간암 세포를 갖는 인체와 유사하며 더 나아가 간암 발생 위치, 간암 전이 양상 및 간암 진전 양상이 인체와 매우 흡사한 양상을 보이고 초음파나 그밖의 의료기기에 의해 용이하게 간암의 크기를 계측하고 관찰할 수 있는 등의 여러 장점을 가지고 있으면서 누드 마우스의 종양 이식 모델보다 더 실용적인 가치를 지닌 동물 모델을 제공할 수 있게 된다.
Description
제1도는 간암 세포의 견갑하 이식 주사후 종양이 형성됨을 보여주는 랫드의 사진.
제2도는 간암 세포의 견갑하 이식 주사후 종양 형성의 성장 곡선을 나타내는 그래프.
제3도는 간암 종괴의 간내 종양 이식을 보여주는 사진.
제4도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 초음파 조영술을 통한 하이퍼에코익 매스(hyperechoic mass)의 간내 종양을 보여주는 사진.
제5도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 초음파 조영술을 통한 하이포에코의 매스(hypoechoic mass)의 간내 종양을 보여주는 또다른 사진.
제6도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 초음파 조영술을 통한 간내 종양의 성장 곡선을 보여주는 그래프.
제7도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 혈관 조영술을 통한 간내 종양을 보여주는 사진.
제8도는 간암 종괴 두 조각의 간내 종양 이식후 초음파 조영술을 통한 한계가 명료한 두개의 하이퍼에코익 매스의 간내 종양을 보여주는 사진.
제9도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 초기의 간암을 포함하는 간 조직의 육안적 절편을 보여주는 사진.
제10도는 제9도의 한계가 명료한 조직학적 사진이고,
제11도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 후기의 간암이 간 조직의 대부분을 차지하는 간 조직의 육안적 사진이고,
제12도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 후기의 간암이 복강내로 전이하여 매스들을 형성하고 있는 육안적 사진이고,
제13도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 간내 혈관을 통하여 전이중에 있는 간암 세포를 보여주는 조직학적 사진.
제14도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 심한 데스모플라시아(desmoplasia)을 보여주는 조직학적 사진.
제15도는 간암 종괴의 간내 종양 이식후 간암 세포가 폐장으로 전이된 후 색전(emboli)를 형성하고 전이성 세엽(acini)을 형성한 것을 보여주는 조직학적 사진.
[산업상 이용분야]
본 발명은 인체 원발성 간암 질환에 대한 비인체 포유동물 모델(non-human mammalian model)인 랫드(rat)에서의 간암 세포를 갖는 랫드 모델과 그 제조 방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 본 발명은 랫드로부터 유래된 간암 세포주를 동질 유전자형 랫드의 견갑하에 이식하여 견갑하에 고형화된 간암을 형성시킨 후 동질 유전자형의 또다른 랫드에 간내 종양 이식하여 인체 및 동물의 암 발생 장기에 상응하는 간내 직생의 간암 종괴를 갖고 그에 따라 인체의 암 전이 양상 및 병의 진전과 유사한 양상으로 기타 전이 암종을 유발하는 간암 세포를 갖는 랫드 모델과 그 제조 방법에 관한 것이다.
[종래기술]
국내에 호발하는 암으로서 간압(hepatocellular carcinoma, HCC)은 전세계적으로 볼 때도 1년에 1,250,000명이 사망하는 가장 흔한 암 중의 하나이며(Ravoet 등, 1993; Venook, 1994), 특히 한국인의 10대 암으로서 남자에 있어서 그 발생 빈도가 위암(26.0%), 폐암(16.2%)에 이어 15.7%로서 3위에 이른다(보건복지부, 1996). 더구나 한국인 간암 사망률은 인구 10만명당 23.4명으로 세계보건통계연감에 수록된 주여 15개국과 비교시 가장 높아 세계 제1위에 이른다(통계청, 1995).
간암의 치료에 있어서는 현재까지 수술적 제거에 가장 효과적인 것으로 알려져 있으나, 세계적으로 이와 같은 수술적 제거가 가능한 환자는 전체 간암 환자수의 20% 미만만이 대상이 되며(Ravoet 등, 1993; Venook, 1994), 국내에서는 국내 암전문 3차 의료 기관인 원자력 병원의 통계에 따르면 수술적 제거가 가능한 환자는 전체 간암 환자의 5% 미만에 머무르고 있다(원자력병원, 1993). 상기한 수술적 제거 이외의 경간동맥 화학색전술, 에탄올 주입법 등의 치료 방법이 알려져 있기는 하나 이들의 치료 효과는 진행성 암에 대해서는 크게 도움이 되지 않는 실정이다. 이러한 간암을 효과적으로 연구하고 치료제 및 치료 전략을 성공적으로 개발하기 위해서는 인체 간암을 가장 적절하게 모방하는 동물 모델이 절실히 요구되나 현재는 이러한 간암 동물 모델 개발이 극히 미약한 상태이다.
상기한 인체의 원발성 간암을 가장 적절하게 모방하는 간암 모델 동물의 유용한 목적을 다시 언급한다면, 첫째로는 우선 간암 진전 양상의 연구에 활용될 수 있으며, 두번째로는 새로운 치료 전략의 탐색 및 기존 치료 전략의 적절한 결합에 따른 연구에 활용될 수 있으며, 셋째로 새로운 항종양 물질의 효능 검색에 사용되는 등 이러한 동물의 존재로서 신약의 검색 및 평가에 유용한 가치가 있다는 것이다.
현재까지의 간암 동물 모델로서는 주로 마우스나 랫드를 사용하고 있다. 초기에는 견갑하 이식(Novikoff, 1957; Morris와 Slaughter, 1978; Looney와 Hopkins, 1982)과 복강내 이식(Yoshida, 1956; Odashima와 Morris, 1966; Sato 등, 1966; Watabe와 Hirai, 1973)에 의한 동물 모델이 개발되었으나, 인체의 간암은 대개 간에서 국한적으로 발생, 팽창하며 전이하는 양상을 나타내는 것(Okuda 등, 1984; 박영년 등, 1991)과 비교할 때 상기 동물 모델은 간암이 간 이외의 부위에서 발생하므로 인체에 적용하는 데 있어서 분명한 문제점이 있다. 따라서 인체의 간암에 관한 연구를 위해서는 간내 직생의 암 동물 모델이 요구되고 있다.
현재 인체의 암을 모방하는 직생의 암 동물 모델은 미국 NCI의 생체내 항암제 스크린 원칙(in vivo antitumor drug screening principle)에서 추천되는 동물 모델의 새로운 리드(new lead)로서 현재 폐암, 신장암, 뇌암 등이 가장 잘 정립되어 있으나(Boyd, 1989), 아직 간암에 대해서는 잘 확립된 예가 극히 드믈다.
간이 직생하는 모델 동물로서는 우선 화학적 발암제의 장기간의 투여로 간암을 발생시킨 동물 모델(Kojima 등, 1980; Morita 등, 1982; Ahluwalia 등, 1983; Farber, 1984; Ackerman과 Makohon, 1984; Danielson등, 1988; Brauw 등, 1988)과 문정맥(portal vein)으로 간암 세포를 주입하여 간암을 발생시킨 동물 모델(Fisher 등, 1961; Odashima, 1964; Burgener와 Violante, 1979; Kopper 등, 1982; Skolnik와 Bagge, 1983; Marquet과 Jeelel, 1985; Lafreniere와 Rosenberg, 1986; Weese 등, 1987; Brauw 등, 1988; Cameron 등, 1998; Archer와 Gray, 1989)이 있다. 그러나 이와 같은 간암은 간 전체에 산발적으로 종괴를 형성하기 때문에 간의 일부에서 국부적으로 발생하는 인체의 간암과는 그 양상이 다를 뿐만 아니라, 암 종괴의 판독 및 평가가 힘들고 특히 화학적 발암제로 간암을 유발할 경우에 있어서는 그 발생 기간이 상당히 오래 걸린다는 문제점이 있다. 최근에는 간암 세포주 또는 대장암 세포주를 비장에 주입하여 간접적으로 간암을 발생시키는 랫드 모델이 개발되었으나(Anderson 등, 1995)이에 따라 발생된 간암 세포 동물 모델로 간내 간암이 산발적으로 발생하는 전이성 간암 동물 모델이므로 이는 간에서 직생하는 인체의 원발성 간암과는 근본적으로 다르다.
또한 누드 마우스와 같이 세포성 면역 기능이 결핍된 모델 동물(Fogh와 Giovanella, 1982; Fidler, 1986)을 사용하는 경우에는 인체의 암 세포주를 대상으로 연구를 진행할 수 있는 장점이 있으나, 상기 마우스는 T-세포 면역 체계가 결핍된 동물로서 정상적인 인체와 차이가 있으며 특히 면역 시스템 자극에 의한 치료 효과를 관찰하는 데는 분명한 한계가 있다.
최근 들어 선천성 감염에 의한 간암 직생 모델 동물로서 LEC 랫드(Mori 등, 1994)와 우드척 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus)에 의한 우드척 간암 발생 모델(Gerin, 1990) 그리고 HBV(hepatitis B virus) 항원이나 혹은 HBV의 HBx 유전자에 의한 형질전환 간암 마우스 모델(transgenic liver cancer mouse mode)(Chisari 등, 1987; Dunsford 등, 1990; Kim 등, 1991; Toshkov 등, 1994)이 있는데, 선천성 간염에 의하여 간암이 발생하는 LEC 랫드 모델은 장시간의 만성 간염 상태에 빠진 전체 랫드의 60% 정도만 간암이 발생하기 때문에 일반적인 인체 간암 모델로서는 재현성 있게 적용하기가 곤란하다. 또한 HBx 유전자 유발 형질전환 간암 모델이나 그밖의 HBV 항원에 의한 형질전환 마우스 모델(transgenic mouse mode)은 간암이 6개월에서 1년 이상의 장시간 경과 후에 발생하고 대부분의 마우스 모델이 그렇듯이 간암의 발생 양상이 산발적인 데에 그 문제점이 있다. 또한 우드척 모델은 우드척 간염 바이러스를 배양할 수 있다는 장점이 있으나 간암 발생 기간이 최장 기간인 3년이나 소요됨으로 연구의 진행이 장기화되어 동물 실험의 시간적, 경제적 측면에서 어려움이 존재한다. 그리고 ACI 랫드에 Morris hepatoma 3924A 세포주를 이식한 간암 직생 모델이 개발되었으나(Yang 등, 1992) 이들은 본 발명의 동물종과 간암세포주와 다른 것이 인체의 간암에 대부분 특징적으로 발견되는 알파 페토프로테인의 분비에 대한 기초 연구가 없다.
[본 발명이 해결하려 하는 과제]
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 정상면역능력을 갖으면서 인체 고형 간암과 같이 알파-페토프로틴을 분비하는 간암 세포를 갖는 인체와 유사한 동물 모델 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 또한 본 발명은 더 나아가 간암 발생 위치, 간암 전이 양상 및 간암 진전 양상이 인체와 가장 유사한 동물 모델 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
즉 본 발명은 간내에서 국소적으로 발생하여 팽창 전이하는 사람의 간암과 매우 흡사한 형태와 양상을 보이고 초음파나 그밖의 의료기기에 의해 용이하게 간암의 크기를 계측하고 관찰할 수 있는 여러 가지 장점을 갖고 있는 정상 면역 능력의 동물 모델 및 그 제조방법을 제공하는데 그 목적이 있다.
[과제를 해결하기 위한 수단]
이에 본 발명자들은 인체 간암과 발생 장기 위치가 동일하며 암 전이 및 간암 진전 양상이 인체의 간암을 최적으로 모방하는 간암 세포 직생 모델 동물을 제조하기 위해 연구 노력하였고, 그 결과 인체의 간암과 유사한 랫드 유래 간암 세포주인 McA-RH7777(ATCC No. CRL-1601, USA)를 동질의 유전자형의 랫드 즉 버팔로 랫드(Buffalo rat)(BUF/NHsd, Harlan Spraue Dawley, USA)이 견갑 피하 조직에서(이하 '견갑하 조직'이라 함) 고형화한 견갑화 간암 동물 모델을 제조하고 이를 다시 상기 종의 버팔로 랫드(Buffalo rat)의 간 조직에 이식하여 그 간암종이 초기에는 간내 이식부위를 기점으로 국소적으로 성장하다가 암의 진전에 따라 인접 간 조직 및 복강 그리고 말기에는 폐장 등에까지 기타 암종을 유발하는 간암 세포 직생 동물 모델을 제조함으로서 본 발명을 완성하였다.
본 발명은, 간암이 인체 간암과 같이, 조직학적 발생 양상에 있어서 미분화 악성 종양의 특징인 왕성한 핵분열, 빈번한 고사체(apoptotic body), 응고 괴사(coagulative necrosis), 그리고 심한 데스모플라시아(desmoplasia)의 조직학적 양상을 나타내는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델을 제공한다.
또 본 발명은 간암이 인체 간암과 같이, 간암의 전이에 있어서 초기에는 국한적으로 성장하다가 말기(8주째)에는 간내 주변조직으로의 전이, 혈관, 복강 및 그 인접장기로의 전이 그리고 폐장으로의 전이를 나타내는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델을 제공한다.
그리고 본 발명은 간암이 인체 간암과 같이, 간내 간암, 주위 조직 및 혈관의 계측이나 관찰에 있어서 비수술적인 방법인 초음파 조영술에 의한 계측이나 관찰 또는 수술적인 혈관 조영술에 의한 계측이나 관찰이 가능한 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델을 제공한다.
상기한 본 발명의 간암 세포 직생 동물모델은 정상 면역 능력의 버팔로 랫드의 견갑하에 McA-RH7777 간암 세포주 또는 그 유래의 간암 세포주를 주입하여 견갑하 고형 간암을 유발하고; 상기 견갑하 고형 간암의 세절을 직접 동질 유전자형의 정상 면역 능력의 버팔로 랫드 간내에 종양 이식하는; 공정을 포함하는 방법에 의하여 제조된 것이 바람직하다.
또 본발명은 정상 면역 능력의 버팔로 랫드의 견갑하에 McA-RH7777 간암 세포주 또는 그 유래의 간암 세포주를 주입하여 견갑하 고형 간암을 유발하고; 상기 견갑하 고형 간암의 세절을 직접 동질 유전자형의 정상면역 능력의 버팔로 랫드 간내에 종양 이식하는; 공정을 포함하는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델의 제조 방법을 제공한다. 이때 상기 랫드의 간내에 고형 간암이 형성되는 것이 바람직하다.
이하 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.
이에 따라 본 발명은 간내에서 국소적으로 발생하여 팽창 전이하는 사람의 간암과 매우 흡수한 형태와 양상을 보이고 앞서도 언급한 초음파나 그밖의 의료기기에 의해 용이하게 간암의 크기를 계측하고 관찰할 수 있는 여러 가지의 장점을 갖고 있는 정상 면역 능력의 간암 세포 직생 동물 모델과 그 제조 방법을 제공한다.
랫드나 마우스는 간 발암성 및 간암 연구에 흔히 사용되는 실험 동물로서 실험 동물의 간암이 인체의 간암과 병리학적 특성에서 유사하다. 본 발명에서는 실험 동물로서 랫드를 선택하는데 랫드의 간암은 자연적으로 유발되는 것과 실험적으로 유발되는 간암이 조직학적으로 비교적 일치함으로(Newberne, 1985), 인체의 간암 연구에 더욱 적절한 동물종이라고 판단되어 이를 선택하였다. 또한 랫드는 마우스보다 약 10배의 체중 차이로 커서 간암에 대한 외과적 수술 기법의 적용과 각종 진단 장비, 예를 들면 초음파 진단기, 혈관 조영기, CT 촬영기, X-선 기기, MRI 측정기 등의 의료 기기를 사용한 실험을 할 때 적합한 적절한 크기를 갖고 있어 실험의 오차를 줄이는데 용이하다는 장점이 있다는 또다른 이유에서 랫드를 실험 동물로 선택하였다.
본 발명에서는 여러 랫드중에서도 특히 버팔로 랫드를 선택하여 사용하였는데, 그 이유는 여러 랫드 동물종과 동질 또는 이질의 유전자형을 지난 간암 세포주를 통한 견갑하 간암 형성 및 간내 간암 형성 제작 시험을 통하여 확인한 결과, 암 이식률이 100%로서 간암 고형암의 형성률이 탁월하고 재현성이 있고 활발한 성장률을 보이므로 실제 발암 진전, 촉진 연구, 항암 연구, 약효 검색 연구 등의 간암 연구에 실용적으로 사용될 수 있는 간암 세포주의 숙주 동물로서 판단되며, 상용화되어 구입이 용이하며, 비교적 온순하여 취급이 쉽기 때문이다.
그리고 본 발명에서는 여러 간암 세포주중 랫드 유래 McA-RH7777 간암 세포주를 선택 사용하는데 그 이유는 앞서와 같이 랫드 간암 세포종과 동질 또는 이질의 유전자형을 지닌 랫드종을 통한 견갑하 간암 형성 및 간내 간암 형성 제작 시험을 통하여 간암 고형암의 형성률이 탁월하고 재현성이 있고 활발한 성장률을 보이며 실제 발암 진전, 촉진 연구, 항암 연구, 약효 검색 연구 등의 간암 연구에 실용적으로 사용될 수 있는 간암 세포주로서 판정되고, 상용화되어 구입이 용이하며, 인 비트로(in vitro)상에서 유지가 쉽고, 특히 대부분의 인체의 간암 세포와 같이 알파-페토프로테인(alpha-fetoprotein)을 분비함(Catalogue of Cell Line Hybridomas, 1992)으로 인체 간암의 연구 및 그 치료 연구를 위해 활용 가치와 연관성이 매우 높기 때문이다.
이하 본 발명에 따른 간암 랫드 모델의 제조 과정을 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 하기한 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 본 발명의 바람직한 일 실시예일 뿐 본 발명이 하기한 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 랫드 간암 세포주의 배양
랫드 간암 세포주로서 McA-RH7777(ATCC No. CRL-1601, USA)을 D-MEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco, USA)의 세포 배양 배지에 FBS(fetal bovine serum, Gibco)가 10%, 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin)이 각각 100unit/ml, 100ug/ml이 되도록 참가하여 배양하였는데 5% CO2, 37℃ 그리고 포화습도가 유지되는 CO2배양기내에서 배양하였다.
실시예 2 실험 동물
실험 동물로는 SPF 등급(specific pathogen free grade)의 버팔로 암수 랫드를 미국 Harlan Sprague-Dawley사 등으로부터 구입하여 사용하였다. 동물의 사육 조건은 양성 랙(positive rack)하에서 온도 23±2℃, 상대습도 55±5% 그리고 명암 교대 12시간을 각각 유지하였다. 또한 방사선 멸균 사료와 자외선 여과 음수를 자유로이 급식시켰으며, 멸균된 폴리카본 케이지(polycarbonate cage)에 고온 처리된 베타-칩(Beta-Chip) 깔집(Northeastern product corp., USA)을 깔아 3마리씩 넣은 SPF 환경에서 사육하였다.
실시예 3 랫드 견갑하 간암 동물 모델 제조
상기 실시예 1에서 준비한 랫드 유래 간암 세포주인 McA-RH7777을 생체내에서 고형암화시키기 위하여 1×107개 이상의 세포를 PBS(phosphate-buffered saline) 또는 D-MEM 배지만 있는 용액에 잘 현탁화시킨 다음, 상기 실시예 2에서 준비한 버팔로 랫드의 견갑하 조직에 주사하여 이식하였다. 간암 세포가 이식된 견갑하에서 고형암으로 성장함을 관측하였고(제1도), 그 활발한 성장을 측정하였다(제2도). 이식후 간암 세포의 성장을 버니어 캘리퍼스(vernier calipers)를 사용하여 계측하였는데 그 체적(tumor volume)은 다음의 공식에 의해 산출하였다.
암 체적(Tumor volume)(mm3)=(L×W2)/2
L; 최장축(mm), W; 폭, 최장축과의 수직(mm)
실시예 4 랫드 간암 세포 직생 동물 모델 제조
상기한 실시예 3에서 형성된 생체내 견갑하의 고형암의 최장축 크기가 2-3cm 이상되는 종괴가 형성될 때 이를 무균적으로 적출하여 차가운 PBS에서 2-3회 세척한 후 D-MEM 배지에서 괴사된 조직을 제거하면서 2×1×1mm의 크기로 세절하여 이 세절조각을 가지고 간내 종양 이식수술(intrahepatic tumor implantation, IHTI)을 시행하였다. 그 수술 방법으로서 실험동물을 에테르와 케타민·HC1(Ketamine·HCl)로 마취시킨 후 복강을 열어 간의 좌측 외엽을 노출시켰다. 좌측 외엽의 표면에 가늘고 날카로운 수술 도구를 가지고 미세한 간내 포켓(pocket)을 만들고 여기에 세절 조각을 이식하고(제3도) 봉합없이 겔폼(gelfoam) 또는 멸균 거즈 조각으로 지혈시켰다. 간을 원래의 복강속으로 조심스럽게 위치시키고, 복강과 피부를 봉합했다.
실시예 5 랫드 간암 세포 직생 동물 모델의 간내 종양의 초음파 조영 관찰
상기한 실시예 4에서 형성된 간내 고형암의 관찰은 IHTI를 실시한 후 약 3일 간격으로 계속 초음파 조영술을 통하여 관찰하였으며, 그 결과 하이퍼에코익 매스로 관찰할 경우 간암 부분이 밝게 나타났으며(제4도), 하이포에코익 매스로 관찰한 결과 간암 부분이 어둡게 나타났으며(제5도), 간암 종괴의 양상이 인체의 것과 동일하게 덤벨 형상으로도 나타났으며(제8도), 그에 따른 활발한 성장을 관찰하였다(제6도).
실시예 6 랫드 간암 세포 직생 동물 모델의 간내 종양의 혈관 조영 관찰
상기한 실시예 4에서 형성된 간내 고형암의 관찰은 IHTI를 실시한 후 혈관 조영술을 통하여 관찰하였으며, 그에 따른 간암의 활발한 혈관 분포를 관찰하였다(제7도).
실시예 7 랫드 간암 세포 직생 동물 모델의 간내 종양의 육안적 및 조직학적 관찰
상기한 실시예 4에서 형성된 간내 고형암을 초기에 육안적 관찰 및 조직학적 관찰을 실시하였을 때, 한계가 정상 조직과 명료한 국한된 간암 조직을 관찰할 수 있었다(제9, 10도). 또한 말기에는 간암이 간 조직의 거의 대부분을 차지하였고(제11도), 간암이 주변조직 및 복강내로 전이하여 복강내에서 고형암들을 형성하고 있었다(제12도). 더구나 간암 조직 사진에서는 간내 혈관속에서 전이중에 있는 간암 세포를 관찰할 수 있었으며(제13도), 간의 심한 데스모플라시아(desmoplasia)를 관찰할 수 있었다(제14도). 그리고 말기 폐장에서는 전이에 따른 종양 색전(tumor emboli)을 형성하여 형성된 종양색전 세포의 증식으로 폐장 혈관내에서 세엽 형성(acinar formation)을 이루는 것이 관찰되었다(제15도).
실시예 8 랫드와 간암 세포주의 암종 형성율
상기한 실시예 3과 실시예 4에서 형성된 견갑하 간암 동물 모델과 간암 세포 직생동물 모델에서의 각각의 암종의 형성율(tumor take rate)이 다음과 같았다.
[표 1]
상기한 표 1에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 랫드 모델과 McA-RH7777은 매우 우수한 적합성을 나타낸다.
[효과]
본 간암 세포 직생 동물 모델은 견갑하 이식에서 비롯하는 암 세포의 조직내 침윤성과 전이성의 한계를 인체의 발생 장기와 같이 동물에서도 상응하는 장기에 직생으로(orthotopically) 이식함으로써 극복한 동물 모델이며, 100%의 암 이식율(tumor take rate)을 가졌고 그 간암의 발생 시간도 매우 짧고, 간암의 성장률도 높은 장점이 있다.
또한 본 발명의 간암 세포 직생 동물 모델은 누드 마우스와는 달리 그 가치를 지니는데 그 이유는 간암을 지닌 대부분의 인체의 면역 상태가 누드마우스와 같이 선천성 T-세포결핍의 상태, 즉 면역결핍의 상태가 아니기 때문이다. 따라서 본 발명의 간암 세포 직생 랫드 모델은 이러한 면에서 누드 마우스의 종양 이식 모델 보다 한층 더 실용적인 가치를 지닌다.
이하 본 명세서에서 언급한 문헌들을 정리하면 다음과 같다.
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Claims (8)
- 간암이 인체 간암과 같이, 조직학적 발생 양상에 있어서 미분화 악성 종양의 특징인 왕성한 핵분열, 빈번한 고사체(apoptotic body), 응고 괴사(coagulative necrosis), 그리고 심한 데스모플라시아(desmoplasia)의 조직학적 양상을 나타내는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델
- 제1항에 있어서, 상기 간암 세포 직생 동물 모델은, 정상 면역 능력의 버팔로 랫드의 견갑하에 McA-RH7777 간암 세포주 또는 그 유래의 간암 세포주를 주입하여 견갑하 고형 간암을 유발하고; 상기 견갑하 고형 간암의 세절을 직접 동질 유전자형인 정상면역 능력의 버팔로 랫드 간내에 종양 이식하는; 공정을 포함하는 방법에 의하여 제조된 것인 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델
- 간암이 인체 간암과 같이, 간암의 전이에 있어서 간내 주변조직으로의 전이, 혈관, 복강 및 그 인접장기로의 전이 그리고 폐장으로의 전이를 나타내는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델.
- 제3항에 있어서, 상기 간암 세포 직생 동물 모델은, 정상 면역 능력의 버팔로 랫드의 견갑하에 McA-RH7777 간암 세포주 또는 그 유래의 간암 세포주를 주입하여 견갑하 고형 간암을 유발하고; 상기 견갑하 고형 간암의 세절을 직접 동질 유전자형의 정상 면역 능력의 버팔로 랫드 간내에 종양 이식하는; 공정을 포함하는 방법에 의하여 제조된 것인 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델.
- 간암이 인체 간암과 같이, 간내 간암, 주위 조직 및 혈관의 계측이나 관찰에 있어서 비수술적인 방법인 초음파 조영술에 의한 계측이나 관찰 또는 수술적인 혈관 조영술에 의한 계측이나 관찰이 가능한 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델
- 제5항에 있어서, 상기 간암 세포 직생 동물 모델은 정상 면역 능력의 버팔로 랫드의 견갑하에 McA-RH7777 간암 세포주 또는 그 유래의 간암 세포주를 주입하여 견갑하 고형 간암을 유발하고; 상기 견갑하 고형 간암의 세절을 직접 동질 유전자형의 정상 면역 능력의 버팔로 랫드 간내에 종양 이식하는; 공정을 포함하는 방법에 의하여 제조된 것인 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델.
- 정상 면역 능력의 버팔로 랫드의 견갑하에 McA-RH7777 간암 세포주 또는 그 유래의 간암 세포주를 주입하여 견갑하 고형 간암을 유발하고; 상기 견갑하 고형 간암의 세절을 직접 동질 유전자형의 정상 면역 능력의 버팔로 랫드 간내에 종양 이식하는; 공정을 포함하는 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델의 제조 방법.
- 제7항에 있어서, 상기 랫드의 간내에 고형 간암이 형성된 정상 면역 능력의 랫드 간암 세포 직생 동물 모델의 제조 방법.
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1996
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