KR102639432B1 - Medicinal suture coated with plant-derived polydeoxyribonucleotide and method for manufacturing the same - Google Patents

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Abstract

본 발명의 일 측면은, 봉합사 기재; 및 상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부에 형성되고, 식물의 캘러스 추출물에서 유래한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, PDRN)를 포함하는 코팅층;을 포함하는 의료용 봉합사 및 그 제조방법을 제공한다.One aspect of the present invention is a suture substrate; and a coating layer formed on at least a portion of the surface of the suture base and containing polydeoxyribonucleotide (PDRN) derived from plant callus extract. It provides a medical suture and a method of manufacturing the same.

Description

식물 유래 폴리디옥시리보뉴클레오타이드가 코팅된 의료용 봉합사 및 그 제조방법{MEDICINAL SUTURE COATED WITH PLANT-DERIVED POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDE AND METHOD FOR MANUFACTURING THE SAME}Medical suture coated with plant-derived polydeoxyribonucleotide and method for manufacturing the same {MEDICINAL SUTURE COATED WITH PLANT-DERIVED POLYDEOXYRIBONUCLEOTIDE AND METHOD FOR MANUFACTURING THE SAME}

본 발명은 식물 유래 폴리디옥시리보뉴클레오타이드가 코팅된 의료용 봉합사 및 그 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a medical suture coated with plant-derived polydeoxyribonucleotide and a method for manufacturing the same.

봉합사(suture)는 손상된 근육, 혈관, 신경, 조직 또는 상처나 수술 절개부를 연결 또는 봉합하는데 사용되는 실 또는 그와 유사한 물건이다.A suture is a thread or similar material used to connect or close damaged muscles, blood vessels, nerves, tissues, or wounds or surgical incisions.

봉합사는 원료 물질에 따라 합성 봉합사와 천연 봉합사로 구분될 수 있고, 생체 내 흡수 여부에 따라 상처 부위에 봉합된 후 일정 기간이 지나면 자연 분해되어 제거되는 흡수성(분해성) 봉합사와 봉합된 상처 부위의 조직이 봉합된 뒤에도 분해되지 않아 재수술을 통해 봉합사를 제거해야 하는 비흡수성(비분해성) 봉합사로 구분될 수 있다.Sutures can be divided into synthetic sutures and natural sutures depending on the raw materials. Depending on whether they are absorbed in the body, absorbable (degradable) sutures, which naturally decompose and are removed after a certain period of time after being sutured to the wound area, and the sutured tissue of the wound area. It can be classified as a non-absorbable (non-degradable) suture that does not decompose even after being sutured, so the suture must be removed through reoperation.

봉합사를 사용하는 시술에서 중요하게 고려해야 할 사항 중 하나는 봉합, 조직의 밀착 또는 지지, 고정 효과를 안정적이고 오래 지속되도록 하기 위해 시술 부위에서 봉합사를 견고하게 유지, 고정시켜야 하고, 봉합이 임의로 풀리지 않도록 하는 견고한 마감, 처리가 필요하다.One of the important considerations in procedures using sutures is that the suture must be firmly maintained and fixed at the treatment site to ensure that the suture, tissue adhesion, support, and fixation effect is stable and long-lasting, and that the suture must not be released arbitrarily. A solid finish and treatment is required.

흡수성 봉합사로 합성 고분자인 폴리디옥사논(PDO) 봉합사가 널리 사용되고 있다. 다만, 폴리디옥사논 봉합사가 내과 및/또는 외과 수술용 소재로 사용되는 경우, 기존의 비흡수성 봉합사에 비해 체액 등에 대한 안정성이 낮기 때문에 물성이 저하되는 등의 문제가 있어 사용에 제한이 따른다.Polydioxanone (PDO) suture, a synthetic polymer, is widely used as an absorbable suture. However, when polydioxanone suture is used as a material for medical and/or surgical procedures, there are problems such as deterioration of physical properties due to lower stability against body fluids compared to existing non-absorbable sutures, which limits its use.

또한, 내과 수술용 및/또는 리프팅용 봉합사로서 안면 피부 등에 사용되는 경우, 봉합 및/또는 삽입 후 초기의 체내 이물 반응에 의한 조직 거부 반응이 일어날 수 있고, 중장기적으로는 분해 잔여물이 흡수, 배출을 저해하는 등의 부작용이 발생할 수 있다. 특히, 성형외과적 리프팅 시술에 적용된 흡수성 봉합사가 이러한 부작용을 야기하는 경우 환자가 의도한 미용 효과를 기대하기 어려울 뿐만 아니라 오히려 시술 부위에 상처, 흉터, 시술 흔적 등이 남는 문제가 있다.In addition, when used as a suture for internal surgery and/or lifting on facial skin, tissue rejection may occur due to a foreign body reaction in the early stages after suture and/or insertion, and in the mid to long term, decomposition residues may be absorbed, Side effects such as impeded excretion may occur. In particular, when absorbable sutures applied in plastic surgery lifting procedures cause these side effects, not only is it difficult for patients to expect the intended cosmetic effect, but there is also the problem of wounds, scars, and traces of the procedure remaining at the treatment site.

이에 대해, 흡수성 봉합사의 제조 시 항균, 항염 기능을 가지는 성분이나 기계적 물성을 개선하기 위한 첨가제 등을 사용하는 기술이 지속적으로 개발되고 있다. 예를 들어, 한국등록특허 제10-1586212호, 한국공개특허 제10-2019-0116647호, 한국공개특허 제10-2019-0012958호 등은 DNA 단편 혼합물, 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(PDRN)와 같은 성분이 표면에 코팅된 봉합사를 개시하며, 이를 통해 봉합사의 세포재생능과 수명을 개선할 수 있음을 개시한다.In response, technologies that use ingredients with antibacterial and anti-inflammatory properties or additives to improve mechanical properties are continuously being developed when manufacturing absorbable sutures. For example, Korean Patent No. 10-1586212, Korean Patent Publication No. 10-2019-0116647, and Korean Patent Publication No. 10-2019-0012958 contain ingredients such as DNA fragment mixture and polydeoxyribonucleotide (PDRN). Disclosed is a suture coated on the surface, and that the cell regeneration ability and lifespan of the suture can be improved through this.

다만, 코팅에 사용되는 기능성 물질인 PDRN은 일반적으로 연어, 송어와 같은 어류의 정액으로부터 얻어지므로, 이를 확보할 수 있는 기간이 어류의 산란기에 국한되어 수급이 원활하지 않은 문제가 있다. 또한, 원료 물질의 품질 유지와 관리를 위해 동종의 개체를 대량 확보하기 어렵고, 동물에서 유래한 DNA 단편 혼합물에는 바이러스, 중금속과 같은 유해 물질이 혼입될 수 있어 안전성 측면에서도 문제가 있다.However, since PDRN, a functional material used in coatings, is generally obtained from the semen of fish such as salmon and trout, the period in which it can be secured is limited to the fish's spawning season, which poses a problem of smooth supply and demand. In addition, it is difficult to secure large quantities of the same species to maintain and manage the quality of raw materials, and the mixture of DNA fragments derived from animals may contain harmful substances such as viruses and heavy metals, which poses a safety problem.

이에 대해, 한국공개특허 제10-2014-0091456호 등은 식물 조직으로부터 유전자 혼합물을 분리하고, 이를 물리적, 화학적, 생물학적으로 처리하여 일정 범위의 분자량을 가지는 유전자 단편 혼합물을 제조하는 방법을 개시한다. 다만, 유전자 혼합물을 분리하기 전 원료인 브로콜리 등을 세척하여 이물질을 제거하고 염과 계면활성제를 포함하는 용액으로 처리하여 불순물을 제거하더라도 생장 과정에서 유입된 오염 물질, 농약 등이 잔류할 수 있고, PDRN의 회수 시 셀룰로오스, 리그닌, 수베린, 큐틴과 같은 세포벽 성분을 선택적으로 분리, 제거하기 위해 다량의 유기 용매가 사용되는 문제가 있다.In response, Korean Patent Publication No. 10-2014-0091456 and others disclose a method of producing a mixture of gene fragments having a certain range of molecular weight by separating a gene mixture from plant tissue and treating it physically, chemically, and biologically. However, before separating the genetic mixture, even if the raw materials such as broccoli are washed to remove foreign substances and treated with a solution containing salt and surfactant to remove impurities, contaminants and pesticides introduced during the growth process may remain. When recovering PDRN, there is a problem in that a large amount of organic solvent is used to selectively separate and remove cell wall components such as cellulose, lignin, suberin, and cutin.

본 발명은 전술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 본 발명의 목적은 원료의 수급을 다변화, 확대할 수 있고, 인체에 대한 안전성을 확보함과 동시에 피부 재생능이 우수하고, 과민 반응으로 인한 홍조 현상을 진정시킬 수 있는 의료용 봉합사 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.The present invention is intended to solve the problems of the prior art described above. The purpose of the present invention is to diversify and expand the supply and demand of raw materials, ensure safety for the human body, have excellent skin regeneration ability, and prevent skin damage caused by hypersensitivity reactions. The aim is to provide a medical suture that can soothe flushing and a manufacturing method thereof.

본 발명의 일 측면은, 봉합사 기재; 및 상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부에 형성되고, 식물의 캘러스 추출물에서 유래한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, PDRN)를 포함하는 코팅층;을 포함하는 의료용 봉합사를 제공한다.One aspect of the present invention is a suture substrate; and a coating layer formed on at least a portion of the surface of the suture base and containing polydeoxyribonucleotide (PDRN) derived from plant callus extract.

일 실시예에 있어서, 상기 봉합사 기재는 흡수성 봉합사일 수 있다.In one embodiment, the suture substrate may be an absorbable suture.

일 실시예에 있어서, 상기 식물은 인삼의 뇌두, 주근, 병풀의 뿌리 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있다.In one embodiment, the plant may be one selected from the group consisting of ginseng head, main root, centella asiatica root, and a combination of two or more of these.

일 실시예에 있어서, 상기 코팅층은 수용성 고분자로 이루어진 바인더를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the coating layer may further include a binder made of a water-soluble polymer.

일 실시예에 있어서, 상기 수용성 고분자는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴산, 폴리아크릴아마이드, 폴리하이드록시에틸메타크릴레이트 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있다.In one embodiment, the water-soluble polymer may be one selected from the group consisting of polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyacrylamide, polyhydroxyethyl methacrylate, and combinations of two or more thereof.

본 발명의 다른 일 측면은, (a) 전처리된 식물 원료를 MS(Murashige & Skoog) 배지에 접종하여 캘러스를 유도 및 배양하는 단계; (b) 상기 캘러스를 효소로 처리하는 단계; (c) 상기 (b) 단계의 생성물을 추출 용매로 처리하여 캘러스 추출물을 얻는 단계; (d) 상기 캘러스 추출물에 초음파를 인가하여 PDRN을 분리하는 단계; (e) 상기 PDRN을 용매에 용해시켜 코팅 용액을 제조하는 단계; 및 (f) 상기 코팅 용액으로 봉합사 기재를 도포한 후 건조하는 단계;를 포함하는 의료용 봉합사의 제조방법을 제공한다.Another aspect of the present invention includes the steps of (a) inoculating pretreated plant material into MS (Murashige & Skoog) medium to induce and cultivate callus; (b) treating the callus with enzymes; (c) obtaining a callus extract by treating the product of step (b) with an extraction solvent; (d) separating PDRN by applying ultrasound to the callus extract; (e) preparing a coating solution by dissolving the PDRN in a solvent; and (f) applying the coating solution to the suture base and drying it.

일 실시예에 있어서, 상기 식물 원료는 인삼의 뇌두, 주근, 병풀의 뿌리 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있다.In one embodiment, the plant raw material may be one selected from the group consisting of ginseng head, taproot, centella asiatica root, and a combination of two or more thereof.

일 실시예에 있어서, 상기 MS 배지는 2,4-다이클로로페녹시아세트산 및 카이네틴을 포함할 수 있다.In one embodiment, the MS medium may contain 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and kinetin.

일 실시예에 있어서, 상기 효소는 리보뉴클레아제 및 프로테이나아제를 포함할 수 있다.In one embodiment, the enzyme may include ribonuclease and proteinase.

일 실시예에 있어서, 상기 (c) 단계는, (c1) 상기 (b) 단계의 생성물을 제1 추출 용매로 처리하여 제1 캘러스 추출물을 얻는 단계; 및 (c2) 상기 (c1) 단계의 생성물을 상기 제1 추출 용매와 상이한 제2 추출 용매로 처리하여 제2 캘러스 추출물을 얻는 단계;를 포함할 수 있다.In one embodiment, step (c) includes: (c1) treating the product of step (b) with a first extraction solvent to obtain a first callus extract; And (c2) treating the product of step (c1) with a second extraction solvent different from the first extraction solvent to obtain a second callus extract.

일 실시예에 있어서, 상기 제1 및 제2 추출 용매는 각각 클로로포름, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나를 포함할 수 있다.In one embodiment, the first and second extraction solvents may each include one selected from the group consisting of chloroform, alcohol with 1 to 6 carbon atoms, and combinations of two or more thereof.

일 실시예에 있어서, 상기 캘러스 추출물 중 상기 PDRN의 농도는 80~120μg/mL일 수 있다.In one embodiment, the concentration of PDRN in the callus extract may be 80 to 120 μg/mL.

일 실시예에 있어서, 상기 캘러스의 중량에 대한 상기 PDRN의 중량의 비율은 0.03~0.1%일 수 있다.In one embodiment, the ratio of the weight of the PDRN to the weight of the callus may be 0.03 to 0.1%.

일 실시예에 있어서, 상기 코팅 용액은 수용성 고분자로 이루어진 바인더를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the coating solution may further include a binder made of a water-soluble polymer.

일 실시예에 있어서, 상기 코팅 용액 중 상기 바인더의 농도는 0.1~3%(w/v)일 수 있다.In one embodiment, the concentration of the binder in the coating solution may be 0.1 to 3% (w/v).

일 실시예에 있어서, 상기 수용성 고분자는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴산, 폴리아크릴아마이드, 폴리하이드록시에틸메타크릴레이트 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있다.In one embodiment, the water-soluble polymer may be one selected from the group consisting of polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyacrylamide, polyhydroxyethyl methacrylate, and combinations of two or more thereof.

일 실시예에 있어서, 상기 용매는 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올, 메톡시에탄올, 에톡시에탄올, 락톤, 아세토니트릴, n-메틸-2-피롤리돈(NMP), 포름산, 니트로메탄, 아세트산, 디메틸술폭시드 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있다.In one embodiment, the solvent is water, alcohol having 1 to 6 carbon atoms, methoxyethanol, ethoxyethanol, lactone, acetonitrile, n-methyl-2-pyrrolidone (NMP), formic acid, nitromethane, acetic acid. , dimethyl sulfoxide, and a combination of two or more thereof.

본 발명의 일 측면에 따른 의료용 봉합사는, 봉합사 기재; 및 상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부에 형성되고, 식물의 캘러스 추출물에서 유래한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, PDRN)를 포함하는 코팅층;을 포함함으로써, PDRN을 얻기 위한 원료를 종래 동물에서 식물로 다변화, 확대하여 수급을 안정화시킬 수 있고, 인체에 대한 안전성을 확보함과 동시에 피부 재생능이 우수하고, 과민 반응으로 인한 홍조 현상을 효과적으로 진정시킬 수 있다.A medical suture according to one aspect of the present invention includes a suture base; and a coating layer formed on at least a portion of the surface of the suture base and containing polydeoxyribonucleotide (PDRN) derived from plant callus extract, thereby diversifying the raw materials for obtaining PDRN from conventional animals to plants, It can be expanded to stabilize supply and demand, ensure safety for the human body, have excellent skin regeneration ability, and effectively calm the flushing phenomenon caused by hypersensitivity reactions.

본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.The effects of the present invention are not limited to the effects described above, and should be understood to include all effects that can be inferred from the configuration of the invention described in the detailed description or claims of the present invention.

이하에서는 본 발명을 설명하기로 한다. 다만, 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 여기에서 설명하는 실시예로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described. However, the present invention may be implemented in various different forms and is not limited to the embodiments described herein.

명세서 전체에서, 어떤 부분이 다른 부분과 "연결"되어 있다고 할 때, 이는 "직접적으로 연결"되어 있는 경우뿐 아니라, 그 중간에 다른 부재를 사이에 두고 "간접적으로 연결"되어 있는 경우도 포함한다. 또한, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 구비할 수 있다는 것을 의미한다.Throughout the specification, when a part is said to be “connected” to another part, this includes not only cases where it is “directly connected,” but also cases where it is “indirectly connected” with another member in between. . In addition, when a part is said to “include” a certain component, this does not mean that other components are excluded, but that other components can be added, unless specifically stated to the contrary.

의료용 봉합사medical suture

본 발명의 일 측면은, 봉합사 기재; 및 상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부에 형성되고, 식물의 캘러스 추출물에서 유래한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, PDRN)를 포함하는 코팅층;을 포함하는 의료용 봉합사를 제공한다.One aspect of the present invention is a suture substrate; and a coating layer formed on at least a portion of the surface of the suture base and containing polydeoxyribonucleotide (PDRN) derived from plant callus extract.

상기 봉합사 기재는 흡수성 봉합사 및 비흡수성 봉합사 중 적어도 하나를 포함할 수 있고, 바람직하게는, 흡수성 봉합사일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The suture base may include at least one of an absorbable suture and a non-absorbable suture, preferably an absorbable suture, but is not limited thereto.

상기 흡수성 봉합사는 천연 흡수성 봉합사 및 합성 흡수성 봉합사로 구분될 수 있고, 상기 천연 흡수성 봉합사는 장선(catgut), 크롬 장선(chromic catgut) 등일 수 있으며, 상기 합성 흡수성 봉합사는 폴리글라이콜산, 폴리디옥사논(PDO) 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The absorbable suture may be divided into natural absorbable suture and synthetic absorbable suture, the natural absorbable suture may be catgut, chromic catgut, etc., and the synthetic absorbable suture may be polyglycolic acid, polydioxa. It may be rice paddy (PDO), etc., but is not limited thereto.

상기 비흡수성 봉합사는 천연 비흡수성 봉합사 및 합성 비흡수성 봉합사로 구분될 수 있고, 상기 천연 비흡수성 봉합사는 견사(silk) 등일 수 있으며, 상기 합성 비흡수성 봉합사는 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리아마이드, 폴리테트라플루오로에틸렌 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The non-absorbable suture may be divided into natural non-absorbable suture and synthetic non-absorbable suture, the natural non-absorbable suture may be silk, etc., and the synthetic non-absorbable suture may be polyester, polypropylene, polyamide, poly It may be tetrafluoroethylene, but is not limited thereto.

상기 코팅층은 상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부, 바람직하게는, 전체에 형성될 수 있고, 식물의 캘러스 추출물에서 유래한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, PDRN)를 포함할 수 있다.The coating layer may be formed on at least part of the surface of the suture substrate, preferably the entire surface, and may include polydeoxyribonucleotide (PDRN) derived from plant callus extract.

상기 코팅층에 포함되는 기능성 물질인 상기 PDRN은 일반적으로 연어, 송어와 같은 어류의 정액으로부터 얻어지므로, 이를 확보할 수 있는 기간이 어류의 산란기에 국한되어 수급이 원활하지 않은 문제가 있다. 또한, 원료 물질의 품질 유지와 관리를 위해 동종의 개체를 대량 확보하기 어렵고, 동물에서 유래한 DNA 단편 혼합물에는 바이러스, 중금속과 같은 유해 물질이 혼입될 수 있어 안전성 측면에서도 문제가 있다.The PDRN, which is a functional material included in the coating layer, is generally obtained from the semen of fish such as salmon and trout, so the period for securing it is limited to the spawning season of fish, and there is a problem of smooth supply and demand. In addition, it is difficult to secure large quantities of the same species to maintain and manage the quality of raw materials, and the mixture of DNA fragments derived from animals may contain harmful substances such as viruses and heavy metals, which poses a safety problem.

이에 대해, 상기 코팅층은 식물의 캘러스 추출물에서 유래한 PDRN을 포함함으로써, 종래 PDRN을 얻기 위한 원료로 사용된 어류 정소, 어류 정액과 같은 동물 조직을 식물 조직으로 전환, 다변화, 확대하여 수급을 더 안정화시킬 수 있고, 인체에 대한 안전성을 확보함과 동시에 피부 재생능이 우수하며, 과민 반응으로 인한 홍조 현상을 효과적으로 진정시킬 수 있다.In contrast, the coating layer contains PDRN derived from plant callus extract, thereby converting, diversifying, and expanding animal tissues such as fish testes and fish semen, which were previously used as raw materials for obtaining PDRN, into plant tissues, thereby further stabilizing supply and demand. It is safe for the human body, has excellent skin regeneration ability, and can effectively soothe flushing caused by hypersensitivity reactions.

상기 식물은 인삼의 뇌두, 주근, 병풀의 뿌리 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있고, 바람직하게는, 상기 PDRN의 수율과 같은 정량적 측면과, 순도와 같은 정성적 측면을 고려하여 인삼의 뇌두 및/또는 병풀의 뿌리일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The plant may be one selected from the group consisting of the head of ginseng, the main root, the root of Centella asiatica, and a combination of two or more thereof, preferably considering quantitative aspects such as the yield of the PDRN and qualitative aspects such as purity. Therefore, it may be the head of ginseng and/or the root of Centella asiatica, but is not limited thereto.

상기 코팅층은 수용성 고분자로 이루어진 바인더를 더 포함할 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "바인더"는, 상기 봉합사 기재에 잘 부착되는 성질을 가지므로 상기 코팅층과 상기 봉합사 기재 간 결착력을 향상시킬 수 있고, 상기 코팅층에 포함된 상기 PDRN 간 결착력을 부여하여 상기 PDRN이 상기 봉합사 기재로부터 임의로 탈리되는 것을 방지함으로써 상기 의료용 봉합사가 적용된 부위에서 상기 PDRN 에 기반한 효능이 지속되도록 하는 물질을 의미한다.The coating layer may further include a binder made of water-soluble polymer. The term "binder" used herein has the property of adhering well to the suture substrate, so it can improve the bonding force between the coating layer and the suture substrate, and provides bonding force between the PDRN included in the coating layer to the PDRN. This refers to a material that prevents arbitrary detachment from the suture substrate and thus maintains efficacy based on the PDRN in the area to which the medical suture is applied.

상기 바인더는 생체 적합성과 안전성이 우수한 수용성 고분자일 수 있다. 상기 수용성 고분자는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴산, 폴리아크릴아마이드, 폴리하이드록시에틸메타크릴레이트 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있고, 바람직하게는, 폴리비닐피롤리돈일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 수용성 고분자의 "조합"은 2 이상의 수용성 고분자의 혼합물 및/또는 이들의 공중합체를 의미한다.The binder may be a water-soluble polymer with excellent biocompatibility and safety. The water-soluble polymer may be one selected from the group consisting of polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyacrylamide, polyhydroxyethyl methacrylate, and combinations of two or more thereof, preferably polyvinyl It may be pyrrolidone, but is not limited thereto. The “combination” of the water-soluble polymer means a mixture of two or more water-soluble polymers and/or a copolymer thereof.

상기 바인더로 상기 수용성 고분자가 사용되는 경우, 상기 코팅층을 형성하기 위한 코팅 용액의 제조 시 유기 용매를 사용하지 않을 수 있고, 상기 PDRN을 포함하는 상기 코팅층을 균일한 두께로 코팅할 수 있다.When the water-soluble polymer is used as the binder, an organic solvent may not be used when preparing a coating solution for forming the coating layer, and the coating layer containing the PDRN may be coated with a uniform thickness.

의료용 봉합사의 제조방법Manufacturing method of medical suture

본 발명의 다른 일 측면은, (a) 전처리된 식물 원료를 MS(Murashige & Skoog) 배지에 접종하여 캘러스를 유도 및 배양하는 단계; (b) 상기 캘러스를 효소로 처리하는 단계; (c) 상기 (b) 단계의 생성물을 추출 용매로 처리하여 캘러스 추출물을 얻는 단계; (d) 상기 캘러스 추출물에 초음파를 인가하여 PDRN을 분리하는 단계; (e) 상기 PDRN을 용매에 용해시켜 코팅 용액을 제조하는 단계; 및 (f) 상기 코팅 용액으로 봉합사 기재를 도포한 후 건조하는 단계;를 포함하는 의료용 봉합사의 제조방법을 제공한다.Another aspect of the present invention includes the steps of (a) inoculating pretreated plant material into MS (Murashige & Skoog) medium to induce and cultivate callus; (b) treating the callus with enzymes; (c) obtaining a callus extract by treating the product of step (b) with an extraction solvent; (d) separating PDRN by applying ultrasound to the callus extract; (e) preparing a coating solution by dissolving the PDRN in a solvent; and (f) applying the coating solution to the suture base and drying it.

상기 (a) 단계에서 전처리된 식물 원료를 MS(Murashige & Skoog) 배지에 접종하여 캘러스를 유도 및 배양할 수 있다. 상기 식물 원료는 인삼의 뇌두, 주근, 병풀의 뿌리 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있고, 바람직하게는, 상기 PDRN의 수율과 같은 정량적 측면과, 순도와 같은 정성적 측면을 고려하여 인삼의 뇌두 및/또는 병풀의 뿌리일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 전처리는 상기 식물 원료를 세척, 소독하는 공정과, 필요에 따라, 이를 필요한 크기로 절단하는 공정에 의해 수행될 수 있다. 상기 세척, 소독은 물리적, 화학적, 생물학적 방법으로 이루어질 수 있고, 바람직하게는, 물, 용매, 소독제 등을 이용한 화학적 방법으로 이루어질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Callus can be induced and cultured by inoculating the plant material pretreated in step (a) into MS (Murashige & Skoog) medium. The plant raw material may be one selected from the group consisting of ginseng head, taproot, centella asiatica root, and a combination of two or more thereof, and preferably, quantitative aspects such as yield of the PDRN and qualitative aspects such as purity Considering this, it may be the head of ginseng and/or the root of Centella asiatica, but is not limited thereto. The pretreatment may be performed by a process of washing and disinfecting the plant raw material and, if necessary, cutting it into a required size. The cleaning and disinfection may be performed by physical, chemical, or biological methods, and preferably, may be performed by chemical methods using water, solvents, disinfectants, etc., but are not limited thereto.

상기 MS 배지는 식물 조직의 배양 및 성장을 위해 널리 사용되는 배지로서, 질산염, 한천, 설탕, 비타민 및 성장 조절제와 같은 유기 첨가제를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 MS 배지는 2,4-다이클로로페녹시아세트산 및 카이네틴을 포함할 수 있다. 상기 2,4-다이클로로페녹시아세트산은 옥신(auxin)의 유도체로서, 식물 세포 배양 시 캘러스를 유도하기 위한 호르몬으로 작용할 수 있다. 상기 카이네틴은 세포 분열을 촉진하는 식물 호르몬의 일종인 사이토키닌의 일종으로서, 상기 2,4-다이클로로페녹시아세트산과 함께 식물 캘러스의 형성을 유도, 촉진할 수 있다.The MS medium is a widely used medium for cultivating and growing plant tissues, and may further contain organic additives such as nitrate, agar, sugar, vitamins, and growth regulators. For example, the MS medium may contain 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and kinetin. The 2,4-dichlorophenoxyacetic acid is a derivative of auxin and can act as a hormone for inducing callus during plant cell culture. The kinetin is a type of cytokinin, a type of plant hormone that promotes cell division, and can induce and promote the formation of plant callus together with the 2,4-dichlorophenoxyacetic acid.

상기 MS 배지 중 상기 2,4-다이클로로페녹시아세트산의 농도는 1~10μM, 바람직하게는, 2~8μM, 더 바람직하게는, 3~6μM일 수 있고, 상기 카이네틴의 농도는 0.1~1μM, 바람직하게는, 0.2~0.8μM, 더 바람직하게는, 0.3~0.6μM일 수 있다.The concentration of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid in the MS medium may be 1 to 10 μM, preferably 2 to 8 μM, more preferably 3 to 6 μM, and the concentration of kinetin may be 0.1 to 6 μM. It may be 1 μM, preferably 0.2 to 0.8 μM, more preferably 0.3 to 0.6 μM.

상기 (b) 단계에서 상기 캘러스를 효소로 처리할 수 있다. 상기 효소는 리보뉴클레아제(Ribonuclease, RNase) 및 프로테이나아제를 포함할 수 있다.In step (b), the callus may be treated with enzymes. The enzyme may include ribonuclease (RNase) and proteinase.

상기 리보뉴클레아제는 상기 캘러스 중 핵산을 분해하여 올리고뉴클레오타이드, 단일 핵산과 같은 DNA 단편(절편)으로 전환시킬 수 있다. 상기 프로테이나아제(Proteinase)는 일반적으로 단백질을 분해하고 상기 캘러스로부터 오염을 제거하는데 사용될 수 있다. 상기 캘러스에 상기 프로테이나아제를 첨가하면 정제 과정에서 DNA 또는 RNA를 분해할 수 있는 뉴클레아제(DNase 및/또는 RNase)가 빠르게 비활성화될 수 있고, 이에 따라, 상기 캘러스 중 단백질 파괴 및 핵산 방출에 적용될 수 있다. The ribonuclease can decompose nucleic acids in the callus and convert them into DNA fragments (fragments) such as oligonucleotides and single nucleic acids. The proteinase can generally be used to break down proteins and remove contamination from the callus. When the proteinase is added to the callus, nucleases (DNase and/or RNase) that can degrade DNA or RNA during the purification process can be quickly deactivated, thereby destroying proteins and releasing nucleic acids in the callus. can be applied to

상기 (c) 단계에서 상기 (b) 단계의 생성물을 추출 용매로 처리하여 캘러스 추출물을 얻을 수 있다. 상기 (c) 단계에서, 상기 (b) 단계의 생성물, 또는 이후의 중간물 및/또는 생성물을 상기 추출 용매에 침지시킨 다음, 원심분리하고, 상층액을 회수(재회수) 또는 폐기하는 일련의 과정이 2회 이상 반복될 수 있다.In step (c), a callus extract can be obtained by treating the product of step (b) with an extraction solvent. In step (c), the product of step (b), or subsequent intermediates and/or products, is immersed in the extraction solvent, centrifuged, and the supernatant is recovered (recovered) or discarded. The process may be repeated two or more times.

상기 (c) 단계는, (c1) 상기 (b) 단계의 생성물을 제1 추출 용매로 처리하여 제1 캘러스 추출물을 얻는 단계; 및 (c2) 상기 (c1) 단계의 생성물을 상기 제1 추출 용매와 상이한 제2 추출 용매로 처리하여 제2 캘러스 추출물을 얻는 단계;를 포함할 수 있다.Step (c) includes the step of (c1) treating the product of step (b) with a first extraction solvent to obtain a first callus extract; And (c2) treating the product of step (c1) with a second extraction solvent different from the first extraction solvent to obtain a second callus extract.

상기 제1 및 제2 추출 용매는 각각 클로로포름, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나를 포함할 수 있다.The first and second extraction solvents may each include one selected from the group consisting of chloroform, alcohol with 1 to 6 carbon atoms, and combinations of two or more thereof.

예를 들어, 상기 (c1) 단계에서 상기 (b) 단계의 생성물을 클로로포름 및 이소아밀알코올을 10~30 : 1의 부피비로 포함하는 혼합 용매로 처리한 다음 원심분리하고 상층액을 회수할 수 있고, 상기 (c2) 단계에서 상기 (c1) 단계에서 회수된 상기 상층액을 이소프로판올로 처리한 다음 원심분리하고 상층액을 폐기하고 침전물을 회수할 수 있다. 또한, 상기 (c2) 단계에서 회수된 상기 침전물을 에탄올로 처리한 다음 원심분리하여 상층액을 폐기한 다음 잔류 용액을 건조시켜 고형분을 회수할 수 있다.For example, in step (c1), the product of step (b) may be treated with a mixed solvent containing chloroform and isoamyl alcohol in a volume ratio of 10 to 30:1, then centrifuged, and the supernatant may be recovered. , in step (c2), the supernatant recovered in step (c1) may be treated with isopropanol, then centrifuged, the supernatant may be discarded, and the precipitate may be recovered. Additionally, the precipitate recovered in step (c2) may be treated with ethanol, then centrifuged, the supernatant may be discarded, and the remaining solution may be dried to recover the solid content.

상기 (d) 단계에서 상기 캘러스 추출물에 초음파를 인가하여 PDRN을 분리할 수 있고, 이 때, 상기 캘러스 추출물 중 상기 PDRN의 농도는 80~120μg/mL, 바람직하게는, 85~120μg/mL, 더 바람직하게는, 100~120μg/mL 일 수 있다. 상기 캘러스 추출물 중 상기 PDRN의 농도가 80μg/mL 미만이면 상기 코팅층 중 상기 PDRN의 함량이 적어 의도한 효능을 구현하기 어렵고, 120μg/mL 초과이면 상기 코팅 용액 중 상기 PDRN의 용해성, 분산성이 저하될 수 있다.In step (d), PDRN can be separated by applying ultrasound to the callus extract. At this time, the concentration of PDRN in the callus extract is 80 to 120 μg/mL, preferably 85 to 120 μg/mL, more Preferably, it may be 100 to 120 μg/mL. If the concentration of the PDRN in the callus extract is less than 80 μg / mL, the content of the PDRN in the coating layer is small, making it difficult to implement the intended effect, and if it is more than 120 μg / mL, the solubility and dispersibility of the PDRN in the coating solution will decrease. You can.

상기 (a) 단계에서 유도, 배양된 상기 캘러스의 중량에 대한 상기 (d) 단계에서 분리, 회수된 상기 PDRN의 중량의 비율, 즉, 상기 캘러스의 중량을 기준으로 한 상기 PDRN의 수율(%)은 0.03~0.1%, 바람직하게는, 0.04~0.1%, 더 바람직하게는, 0.05~0.1%일 수 있다.The ratio of the weight of the PDRN isolated and recovered in the step (d) to the weight of the callus induced and cultured in the step (a), that is, the yield (%) of the PDRN based on the weight of the callus It may be 0.03 to 0.1%, preferably 0.04 to 0.1%, more preferably 0.05 to 0.1%.

상기 (e) 단계에서 상기 PDRN을 용매에 용해시켜 코팅 용액을 제조할 수 있다. 상기 코팅 용액은 수용성 고분자로 이루어진 바인더를 더 포함할 수 있다. 상기 수용성 고분자의 종류, 작용효과 등에 대해서는 전술한 것과 같다.In step (e), a coating solution can be prepared by dissolving the PDRN in a solvent. The coating solution may further include a binder made of water-soluble polymer. The types, effects, etc. of the water-soluble polymer are the same as described above.

상기 코팅 용액 중 상기 PDRN의 농도는 0.5~5%(w/v), 바람직하게는, 1~3%(w/v), 더 바람직하게는, 1~2.5%(w/v)일 수 있고, 상기 바인더의 농도는 0.1~3%(w/v), 바람직하게는, 0.3~1.5%(w/v)일 수 있다. 상기 코팅 용액 중 상기 PDRN의 농도가 0.5%(w/v) 미만이면 상기 코팅층 중 상기 PDRN의 함량이 적어 의도한 효능을 구현하기 어렵고, 5%(w/v) 초과이면 상기 코팅 용액 중 상기 PDRN의 용해성, 분산성이 저하될 수 있다. 또한, 상기 코팅 용액 중 상기 바인더의 농도가 0.1%(w/v) 미만이면 상기 코팅층과 상기 봉합사 기재, 및 상기 코팅층 중 상기 PDRN 간 결착력이 저하될 수 있고, 3%(w/v) 초과이면 상기 바인더의 함량이 상기 PDRN에 비해 상대적으로 많아져 상기 PDRN의 과잉 결착에 의해 목적 부위로의 확산과 그에 따른 효능이 저해될 수 있다.The concentration of the PDRN in the coating solution may be 0.5 to 5% (w/v), preferably 1 to 3% (w/v), more preferably 1 to 2.5% (w/v), , the concentration of the binder may be 0.1 to 3% (w/v), preferably 0.3 to 1.5% (w/v). If the concentration of the PDRN in the coating solution is less than 0.5% (w/v), the content of the PDRN in the coating layer is small, making it difficult to achieve the intended efficacy, and if it is more than 5% (w/v), the PDRN in the coating solution is difficult to achieve. Solubility and dispersibility may decrease. In addition, if the concentration of the binder in the coating solution is less than 0.1% (w/v), the binding force between the coating layer, the suture substrate, and the PDRN in the coating layer may be reduced, and if it is more than 3% (w/v), the binding force between the PDRN in the coating layer may be reduced. Since the content of the binder is relatively large compared to the PDRN, diffusion to the target site and the resulting efficacy may be inhibited by excessive binding of the PDRN.

상기 용매는 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올, 메톡시에탄올, 에톡시에탄올, 락톤, 아세토니트릴, n-메틸-2-피롤리돈(NMP), 포름산, 니트로메탄, 아세트산, 디메틸술폭시드 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6의 알코올은, 예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The solvent is water, alcohol with 1 to 6 carbon atoms, methoxyethanol, ethoxyethanol, lactone, acetonitrile, n-methyl-2-pyrrolidone (NMP), formic acid, nitromethane, acetic acid, dimethyl sulfoxide and these. It may be one selected from the group consisting of a combination of two or more of the following. The alcohol having 1 to 6 carbon atoms may be, for example, methanol, ethanol, propanol, butanol, etc., but is not limited thereto.

상기 코팅 용액이 상기 수용성 고분자를 포함하는 경우, 상기 용매는 물일 수 있고, 필요에 따라, 탄소수 1 내지 6의 알코올과 같은 친수성 유기 용매를 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 코팅 용액이 상기 수용성 고분자를 포함하지 않는 경우, 상기 용매는 탄소수 1 내지 6의 알코올과 같은 친수성 유기 용매일 수 있고, 필요에 따라, 물 및/또는 기타 유기 용매를 더 포함할 수 있다.When the coating solution contains the water-soluble polymer, the solvent may be water, and, if necessary, may further include a hydrophilic organic solvent such as an alcohol having 1 to 6 carbon atoms. In addition, when the coating solution does not contain the water-soluble polymer, the solvent may be a hydrophilic organic solvent such as an alcohol having 1 to 6 carbon atoms, and, if necessary, may further include water and/or other organic solvents. .

상기 (f) 단계에서 상기 코팅 용액으로 봉합사 기재를 도포한 후 건조하여 상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부에 상기 PDRN이 코팅된 의료용 봉합사를 최종적으로 얻을 수 있다.In step (f), the coating solution is applied to the suture base and then dried to finally obtain a medical suture coated with the PDRN on at least a portion of the surface of the suture base.

상기 도포는 딥(dip), 스프레이(spray), 롤(roll), 바(bar) 등의 수단에 의해 이루어질 수 있고, 바람직하게는, 딥(dip)에 의해 상기 봉합사 기재를 상기 코팅 용액에 기설정된 시간 동안 함침시키는 방식으로 이루어질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The application may be accomplished by means such as dip, spray, roll, bar, etc., and preferably, the suture base is applied to the coating solution by dip. This may be accomplished by impregnating for a set time, but is not limited to this.

상기 건조를 통해 상기 코팅 용액 중 상기 용매를 제거함과 동시에 상기 PDRN을 상기 봉합사 기재의 표면에 결착시킬 수 있고, 상기 PDRN을 상호 결착시킬 수 있다. 상기 건조에 필요한 조건, 예를 들어, 온도와 시간은 상기 코팅 용액의 농도, 상기 코팅층의 두께 및/또는 면적, 상기 용매의 끓는점 등을 고려하여 적절히 제어될 수 있다.Through the drying, the solvent in the coating solution can be removed and the PDRN can be bonded to the surface of the suture base, and the PDRN can be bonded to each other. Conditions required for the drying, such as temperature and time, can be appropriately controlled considering the concentration of the coating solution, the thickness and/or area of the coating layer, the boiling point of the solvent, etc.

이하, 본 발명의 실시예에 관하여 상세히 설명하기로 한다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail.

실시예 1 내지 2Examples 1 to 2

1. 세척 및 소독(전처리)1. Cleaning and disinfection (pretreatment)

인삼의 주근을 물로 세척한 후 약 5cm 길이로 절단하였다. 절단된 주근을 70% 에탄올에 30초 간 침지시킨 후, 0.1%의 트윈-20을 포함하는 6% 차아염소산나트륨 용액에 침지시켜 15분 간 주근의 표면을 소독하였다. 소독된 주근을 물로 세척한 후 70% 에탄올에 30초 간 침지시킨 후, 수크로오스 3%, 2,4-다이클로로페녹시아세트산 1mg/mL를 포함하는 용액에 약 30분 간 침지시켰다.The main root of ginseng was washed with water and cut into pieces about 5cm long. The cut taproot was immersed in 70% ethanol for 30 seconds, and then immersed in a 6% sodium hypochlorite solution containing 0.1% Tween-20 to disinfect the surface of the taproot for 15 minutes. The disinfected taproot was washed with water, dipped in 70% ethanol for 30 seconds, and then dipped in a solution containing 3% sucrose and 1 mg/mL of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid for about 30 minutes.

2. 캘러스 배양2. Callus culture

멸균된 여과지 상에서 전처리된 주근을 건조시켜 수분을 제거한 후 2~3mm2의 크기로 절단하여 시료를 얻었다. 상기 시료를 2,4-다이클로로페녹시아세트산, 카이네틴, 수크로오스, 겔라이트(Gelrite)를 포함하는 MS 배지(pH 5.8)에 접종하였고, 20~26℃, 암조건에서 4~8주 간 배양하여 캘러스를 유도하였다. 상기 MS 배지의 조성은 하기 표 1과 같다.Samples were obtained by drying the pretreated taproot on sterilized filter paper to remove moisture and cutting it into pieces of 2 to 3 mm 2 in size. The sample was inoculated into MS medium (pH 5.8) containing 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, kynetin, sucrose, and Gelrite, and incubated at 20-26°C in dark conditions for 4-8 weeks. Callus was induced by culturing. The composition of the MS medium is shown in Table 1 below.

성분ingredient 함량(농도)Content (concentration) MS 배지(Murashige & Skoog medium)MS medium (Murashige & Skoog medium) 4.66g/L4.66g/L 2,4-다이클로로페녹시아세트산2,4-dichlorophenoxyacetic acid 4.5μM4.5μM 카이네틴kinetin 0.46μM0.46μM 수크로오스sucrose 30g/L30g/L 겔라이트Gelite 1.4g/L1.4g/L

유도된 캘러스를 약 2~4주 간격으로 계대 배양하여 증식하였다. 유도된 캘러스를 잘게 절단하여 겔라이트를 제외한 액체상 MS 배지에 접종하고 25℃에서 배양하여 지속적인 생장이 유지되도록 하였다.The induced callus was subcultured at intervals of approximately 2 to 4 weeks and proliferated. The induced callus was cut into small pieces, inoculated into liquid MS medium excluding gelite, and cultured at 25°C to maintain continuous growth.

3. PDRN 추출3. PDRN extraction

인삼 주근 캘러스 5g을 액체 질소를 이용하여 막자사발로 분쇄하였다. 계속적으로 액체 질소를 추가하여 명월초 캘러스가 완전히 분쇄될 때까지 반복하였다. 분쇄된 인삼 주근 캘러스 분말의 질량을 측정한 후, 캘러스 100mg 당 0.5mL의 CTAB(Cetyltrimethyl ammonium bromide) 버퍼로 처리하여 혼합하였고, 이를 60℃ 항온 수조에 30분 간 방치하였다.5 g of ginseng main root callus was ground in a mortar and pestle using liquid nitrogen. Liquid nitrogen was continuously added and repeated until the Myeongwolcho callus was completely pulverized. After measuring the mass of the pulverized ginseng root callus powder, it was treated with 0.5 mL of CTAB (Cetyltrimethyl ammonium bromide) buffer per 100 mg of callus, mixed, and left in a constant temperature water bath at 60°C for 30 minutes.

14,000g로 5분 간 원심분리한 다음 상층액을 회수하였고, 상기 상층액에 RNase A 용액 5μL를 넣고 37℃에서 30분 간 방치하였다. 이후, 농도가 20mg/mL인 Proteinase K 용액 50μL를 추가로 넣은 다음 37℃에서 60분간 방치하였다. 클로로포름 및 이소아밀알코올이 각각 24 : 1의 부피비로 혼합된 용액을 동량으로 넣어 혼합하였고, 14,000g로 5분 간 원심분리한 다음 상층액을 재회수하였다.After centrifugation at 14,000g for 5 minutes, the supernatant was recovered. 5 μL of RNase A solution was added to the supernatant and left at 37°C for 30 minutes. Afterwards, 50 μL of Proteinase K solution with a concentration of 20 mg/mL was added and left at 37°C for 60 minutes. Equal amounts of chloroform and isoamyl alcohol were added and mixed at a volume ratio of 24:1, centrifuged at 14,000 g for 5 minutes, and the supernatant was recovered.

재회수된 상층액의 0.7배의 양으로 냉장 보관된 이소프로판올을 추가하여 혼합하였고, 20℃에서 20분 간 방치하였다. 14,000g로 10분 간 원심분리한 다음 상층액을 폐기하였고, 침전물에 냉장보관된 70% 에탄올을 추가하였다.Refrigerated isopropanol was added in an amount 0.7 times the amount of the recovered supernatant, mixed, and left at 20°C for 20 minutes. After centrifugation at 14,000g for 10 minutes, the supernatant was discarded, and refrigerated 70% ethanol was added to the precipitate.

14,000g로 1분 간 원심분리한 다음 상층액을 폐기하였고, 잔류 용액을 건조시킨 후 정제수 100μL를 추가하였다. 이후, 초음파를 인가하여 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(PDRN)가 분획된 용액(이하, PDRN 용액)을 얻었다. 상기 PDRN 용액을 건조한 후 분쇄하여, 분말상의 PDRN 시료(이하, PDRN 분말)를 제조하였다. 전술한 방법과 동일한 방법으로 2개의 PDRN 분말을 얻었고, 이들 각각을 실시예 1 및 2로 명명하였다.After centrifugation at 14,000 g for 1 minute, the supernatant was discarded, the remaining solution was dried, and 100 μL of purified water was added. Afterwards, ultrasound was applied to obtain a solution in which polydeoxyribonucleotide (PDRN) was fractionated (hereinafter referred to as PDRN solution). The PDRN solution was dried and then pulverized to prepare a powdery PDRN sample (hereinafter referred to as PDRN powder). Two PDRN powders were obtained in the same manner as described above, and each of them was named Example 1 and 2.

실시예 3 내지 5Examples 3 to 5

인삼의 주근 부위를 뇌두 부위로 대체한 것을 제외하면 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 3개의 PDRN 분말을 제조하였고, 이들 각각을 실시예 3 내지 5로 명명하였다.Three PDRN powders were prepared in the same manner as Example 1, except that the main root part of ginseng was replaced with the brain head part, and each of them was named Examples 3 to 5.

실시예 6 내지 10Examples 6 to 10

인삼의 주근 부위를 병풀의 뿌리 부위로 대체한 것을 제외하면 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 5개의 PDRN 분말을 제조하였고, 이들 각각을 실시예 6 내지 10으로 명명하였다.Five PDRN powders were prepared in the same manner as Example 1, except that the main root part of ginseng was replaced with the root part of Centella asiatica, and each of them was named Examples 6 to 10.

실험예 1Experimental Example 1

상기 실시예 1 내지 10에서 제조된 PDRN 분말을 10mM Tris-HCl 및 1mM EDTA를 포함하는 버퍼(pH 8.0)에 용해시켜 농도가 1mg/mL인 시료를 제조하였다.The PDRN powder prepared in Examples 1 to 10 was dissolved in a buffer (pH 8.0) containing 10mM Tris-HCl and 1mM EDTA to prepare a sample with a concentration of 1mg/mL.

상기 시료의 흡광도를 Nanodrop(Thermo ND-100 Nanodrop Spectrophotometer) 기기를 이용하여 측정하였고, 측정된 흡광도에 기반하여 상기 시료 중 PDRN의 농도와 수율을 산출하였으며, 그 결과를 하기 표 2 및 표 3에 나타내었다.The absorbance of the sample was measured using a Nanodrop (Thermo ND-100 Nanodrop Spectrophotometer) device, and the concentration and yield of PDRN in the sample were calculated based on the measured absorbance. The results are shown in Tables 2 and 3 below. It was.

구분division PDRN 농도
(μg/mL)
PDRN concentration
(μg/mL)
A260A260 A280A280 A260/A280A260/A280 A260/A230A260/A230
실시예 1Example 1 116.37116.37 2.332.33 1.231.23 1.891.89 2.342.34 실시예 2Example 2 104.81104.81 2.102.10 1.111.11 1.891.89 2.332.33 실시예 3Example 3 115.01115.01 2.302.30 1.221.22 1.881.88 2.332.33 실시예 4Example 4 87.3587.35 1.751.75 0.930.93 1.871.87 2.282.28 실시예 5Example 5 100.51100.51 2.012.01 1.081.08 1.871.87 2.312.31 실시예 6Example 6 88.3288.32 1.771.77 0.930.93 1.891.89 2.332.33 실시예 7Example 7 88.9588.95 1.781.78 0.950.95 1.881.88 2.332.33 실시예 8Example 8 102.94102.94 2.062.06 1.091.09 1.891.89 2.342.34 실시예 9Example 9 103.67103.67 2.072.07 1.111.11 1.871.87 2.302.30 실시예 10Example 10 88.8888.88 1.781.78 0.960.96 1.861.86 2.282.28

-A230: 230nm 파장에 대한 페놀, EDTA, 기타 유기물의 흡광도-A230: Absorbance of phenol, EDTA, and other organic substances at a wavelength of 230 nm

-A260: 260nm 파장에 대한 PDRN의 흡광도-A260: Absorbance of PDRN for 260nm wavelength

-A280: 280nm 파장에 대한 단백질(트립신, 트립토판 등)의 흡광도-A280: Absorbance of proteins (trypsin, tryptophan, etc.) at a wavelength of 280 nm

구분division 캘러스 분말 중량 (mg)Callus powder weight (mg) 핵산 총 중량 (mg)Nucleic acid total weight (mg) PDRN 총 중량 (mg)PDRN total weight (mg) 원료 기준 핵산 수율 (%)Nucleic acid yield based on raw material (%) 핵산 기준 PDRN 수율 (%)PDRN yield based on nucleic acid (%) 원료 기준 PDRN 수율 (%)PDRN yield based on raw material (%) 실시예 1Example 1 5,2005,200 2.932.93 1.711.71 0.0560.056 58.3658.36 0.0330.033 실시예 2Example 2 4,9004,900 2.222.22 1.631.63 0.0450.045 73.4273.42 0.0330.033 실시예 3Example 3 4,5004,500 3.313.31 2.422.42 0.0740.074 73.1173.11 0.0540.054 실시예 4Example 4 6,0006,000 3.583.58 2.462.46 0.0600.060 68.7268.72 0.0410.041 실시예 5Example 5 6,8006,800 3.593.59 2.832.83 0.0530.053 78.8378.83 0.0420.042 실시예 6Example 6 4,7004,700 2.622.62 2.262.26 0.0560.056 86.2686.26 0.0480.048 실시예 7Example 7 5,0005,000 2.382.38 1.871.87 0.0480.048 78.5778.57 0.0370.037 실시예 8Example 8 5,3005,300 3.373.37 1.841.84 0.0640.064 54.6054.60 0.0350.035 실시예 9Example 9 6,2006,200 2.912.91 2.352.35 0.0470.047 80.7680.76 0.0380.038 실시예 10Example 10 5,5005,500 2.832.83 1.691.69 0.0510.051 59.7259.72 0.0310.031

-원료 기준 핵산 수율(%)={(핵산 총 중량)/(캘러스 분말 중량)}*100-Nucleic acid yield based on raw materials (%)={(total nucleic acid weight)/(callus powder weight)}*100

-핵산 기준 PDRN 수율(%)={(PDRN 총 중량)/(핵산 총 중량)}*100-PDRN yield based on nucleic acid (%)={(Total PDRN weight)/(Total nucleic acid weight)}*100

-원료 기준 PDRN 수율(%)={(PDRN 총 중량)/(캘러스 분말 중량)}*100-PDRN yield based on raw materials (%)={(PDRN total weight)/(callus powder weight)}*100

상기 표 1을 참고하면, 인삼 주근과 뇌두, 및 병풀 뿌리 캘러스에서 유래한 PDRN의 농도는 각각 85μg/mL 이상, 바람직하게는, 100μg/mL 이상이며, 특히, 인삼 주근과 뇌두 캘러스 중 일부에서 유래한 PDRN의 농도는 110μg/mL 이상으로 나타나 봉합사의 표면을 코팅하고, 유효한 효능을 발휘하는데 충분한 양의 PDRN을 얻을 수 있음을 알 수 있다. 또한, 실시예 1 내지 10에 따른 시료, 즉, PDRN 분말의 A260/A280 값은 1.8 이상, 바람직하게는, 1.85 이상이고, A260/A230 값은 2.2 이상, 바람직하게는, 2.3 이상으로 나타나, 시료 중 PDRN의 순도 또한 양호한 수준임을 알 수 있다.Referring to Table 1 above, the concentration of PDRN derived from ginseng main root, cerebellum, and centella asiatica root callus is each 85 μg/mL or more, preferably 100 μg/mL or more, and in particular, some of the ginseng main root and eurycephalus callus. The concentration of one PDRN was found to be over 110 μg/mL, indicating that a sufficient amount of PDRN could be obtained to coat the surface of the suture and exert effective efficacy. In addition, the A260/A280 value of the samples according to Examples 1 to 10, that is, PDRN powder, is 1.8 or more, preferably 1.85 or more, and the A260/A230 value is 2.2 or more, preferably 2.3 or more, so that the sample It can be seen that the purity of PDRN is also at a good level.

한편, PDRN을 추출하기 위해 사용된 캘러스 분말의 중량을 기준으로 최종적으로 얻은 PDRN의 수율을 살펴보면, 인삼 주근 캘러스를 사용한 경우에 비해 인삼 뇌두 캘러스를 사용한 경우의 수율이 0.04% 이상, 바람직하게는, 0.05% 이상으로 상대적으로 높게 나타났으며, 병풀 뿌리 캘러스를 사용한 경우에도 최대 0.045% 이상의 수율을 기록하여, 이러한 수율과 원료 수급의 용이성의 측면에서 PDRN의 생산성 또한 동물 조직에서 유래한 PDRN과 유사한 수준임을 알 수 있다.Meanwhile, looking at the yield of PDRN finally obtained based on the weight of the callus powder used to extract PDRN, the yield when using ginseng callus callus is 0.04% or more compared to when using ginseng main root callus, preferably, It was relatively high at over 0.05%, and even when using Centella asiatica root callus, a maximum yield of over 0.045% was recorded. In terms of this yield and the ease of supply of raw materials, the productivity of PDRN is also at a similar level to that of PDRN derived from animal tissue. can be seen.

제조예 1Manufacturing Example 1

실시예 2에서 얻은 PDRN 분말을 99.5%(w/v)의 메탄올에 첨가한 후, 호모게나이저를 이용하여 1,500rpm으로 2.5시간 동안 교반시켜 PDRN 분말의 농도가 2%(w/v)인 용액을 제조하였다.The PDRN powder obtained in Example 2 was added to 99.5% (w/v) methanol, and then stirred at 1,500 rpm for 2.5 hours using a homogenizer to prepare a solution with a PDRN powder concentration of 2% (w/v). was manufactured.

25℃의 상온에서 폴리디옥사논(PDO) 봉합사를 상기 용액에 침지시키고, 30rpm의 속도로 1시간 동안 교반하여 상기 폴리디옥사논 봉합사의 표면에 PDRN을 도포한 다음, 건조 오븐을 이용하여 40℃에서 4시간 동안 진공 건조시켰다. 끝으로, 봉합사의 표면을 에틸렌옥사이드 가스로 소독하여 PDRN이 코팅된 봉합사를 제조하였다.Polydioxanone (PDO) sutures were immersed in the solution at room temperature of 25°C, stirred at a speed of 30 rpm for 1 hour to apply PDRN to the surface of the polydioxanone sutures, and then dried for 40 minutes using a drying oven. It was vacuum dried at ℃ for 4 hours. Finally, the surface of the suture was disinfected with ethylene oxide gas to prepare PDRN-coated suture.

제조예 2Production example 2

실시예 2 대신 실시예 3에서 얻은 PDRN 분말을 사용한 것을 제외하면, 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 PDRN이 코팅된 봉합사를 제조하였다.PDRN-coated sutures were manufactured in the same manner as Preparation Example 1, except that the PDRN powder obtained in Example 3 was used instead of Example 2.

제조예 3Production example 3

실시예 2 대신 실시예 6에서 얻은 PDRN 분말을 사용한 것을 제외하면, 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 PDRN이 코팅된 봉합사를 제조하였다.PDRN-coated sutures were manufactured in the same manner as Preparation Example 1, except that the PDRN powder obtained in Example 6 was used instead of Example 2.

제조예 4Production example 4

실시예 3에서 얻은 PDRN 분말 및 폴리비닐피롤리돈을 정제수에 첨가한 후, 호모게나이저를 이용하여 1,500rpm으로 2.5시간 동안 교반시켜 PDRN 분말 및 폴리비닐피롤리돈의 농도가 각각 2%(w/v) 및 0.5%(w/v)인 용액을 제조한 것을 제외하면, 상기 제조예 2와 동일한 방법으로 PDRN이 코팅된 봉합사를 제조하였다.After adding the PDRN powder and polyvinylpyrrolidone obtained in Example 3 to purified water, it was stirred at 1,500 rpm for 2.5 hours using a homogenizer so that the concentrations of PDRN powder and polyvinylpyrrolidone were 2% (w), respectively. /v) and 0.5% (w/v), a PDRN-coated suture was prepared in the same manner as Preparation Example 2, except that the solution was prepared.

비교제조예 1Comparative Manufacturing Example 1

실시예 2 대신 연어 정액에서 얻은 PDRN 분말을 사용한 것을 제외하면, 상기 제조예 1과 동일한 방법으로 PDRN이 코팅된 봉합사를 제조하였다.PDRN-coated suture was manufactured in the same manner as Preparation Example 1, except that PDRN powder obtained from salmon semen was used instead of Example 2.

비교제조예 2Comparative Manufacturing Example 2

히알루론산나트륨을 99.5%(w/v)의 메탄올에 첨가한 후, 호모게나이저를 이용하여 1,500rpm으로 2.5시간 동안 교반시켜 히알루론산나트륨의 농도가 15%(w/v)인 용액을 제조하였다.Sodium hyaluronate was added to 99.5% (w/v) methanol, and then stirred at 1,500 rpm for 2.5 hours using a homogenizer to prepare a solution with a sodium hyaluronate concentration of 15% (w/v). .

25℃의 상온에서 폴리디옥사논(PDO) 봉합사를 상기 용액에 침지시키고, 100rpm의 속도로 1시간 동안 교반하여 상기 폴리디옥사논 봉합사의 표면에 히알루론산나트륨을 도포한 다음, 건조 오븐을 이용하여 60℃에서 4시간 동안 진공 건조시켰다. 끝으로, 봉합사의 표면을 에틸렌옥사이드 가스로 소독하여 히알루론산나트륨이 코팅된 봉합사를 제조하였다.Polydioxanone (PDO) sutures were immersed in the solution at room temperature of 25°C, stirred at a speed of 100 rpm for 1 hour, and sodium hyaluronate was applied to the surface of the polydioxanone sutures, followed by using a drying oven. It was vacuum dried at 60°C for 4 hours. Finally, the surface of the suture was disinfected with ethylene oxide gas to prepare a suture coated with sodium hyaluronate.

실험예 2Experimental Example 2

상기 제조예 및 비교제조예에서 제조된 각각의 봉합사를 사용하여 리프팅 시술을 받은 환자 10명씩을 대상으로 안면 홍조의 발생 여부를 관찰하였고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 하기 표 4에서 X는 안면 홍조가 매우 많음, △는 안면 홍조가 보통임, ○는 안면 홍조가 조금 있음, ◎은 안면 홍조가 없음을 의미한다.The occurrence of facial flushing was observed in 10 patients each who underwent lifting procedures using each suture manufactured in the above Preparation Example and Comparative Preparation Example, and the results are shown in Table 4 below. In Table 4 below,

구분division 제조예 1Manufacturing Example 1 제조예 2Production example 2 제조예 3Production example 3 제조예 4Production example 4 비교제조예 1Comparative Manufacturing Example 1 비교제조예 2Comparative Manufacturing Example 2 환자 1patient 1 환자 2patient 2 XX 환자 3patient 3 환자 4patient 4 XX 환자 5patient 5 환자 6patient 6 환자 7patient 7 XX 환자 8patient 8 환자 9patient 9 환자 10patient 10 XX

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.The description of the present invention described above is for illustrative purposes, and those skilled in the art will understand that the present invention can be easily modified into other specific forms without changing the technical idea or essential features of the present invention. will be. Therefore, the embodiments described above should be understood in all respects as illustrative and not restrictive. For example, each component described as single may be implemented in a distributed manner, and similarly, components described as distributed may also be implemented in a combined form.

본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.The scope of the present invention is indicated by the claims described below, and all changes or modified forms derived from the meaning and scope of the claims and their equivalent concepts should be construed as being included in the scope of the present invention.

Claims (17)

봉합사 기재; 및
상기 봉합사 기재의 표면 중 적어도 일부에 형성되고, 인삼의 뇌두의 캘러스 추출물에서 유래한 폴리디옥시리보뉴클레오타이드(polydeoxyribonucleotide, PDRN)를 포함하는 코팅층;을 포함하는, 의료용 봉합사에 있어서,
상기 의료용 봉합사는,
(a) 전처리된 인삼의 뇌두를 MS(Murashige & Skoog) 배지에 접종하여 캘러스를 유도 및 배양하는 단계;
(b) 상기 캘러스를 리보뉴클레아제 및 프로테이나아제를 포함하는 효소로 처리하는 단계;
(c) 상기 (b) 단계의 생성물을 클로로포름, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나로 처리하여 캘러스 추출물을 얻는 단계;
(d) 상기 캘러스 추출물에 초음파를 인가하여 PDRN 용액을 분리하고 건조한 후 분쇄하여 PDRN 분말을 얻는 단계;
(e) 상기 PDRN 분말을 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나에 용해시켜 코팅 용액을 제조하는 단계; 및
(f) 상기 코팅 용액으로 봉합사 기재를 도포한 후 건조하는 단계;를 포함하는 방법으로 제조되고,
상기 캘러스의 중량에 대한 상기 PDRN 분말의 중량의 비율은 0.04~0.1%인,
의료용 봉합사.
suture substrate; and
A coating layer formed on at least a portion of the surface of the suture base and containing polydeoxyribonucleotide (PDRN) derived from a callus extract of the ginseng head. In the medical suture, comprising:
The medical suture is,
(a) Inducing and culturing callus by inoculating pretreated ginseng heads into MS (Murashige & Skoog) medium;
(b) treating the callus with enzymes including ribonucleases and proteinases;
(c) obtaining a callus extract by treating the product of step (b) with one selected from the group consisting of chloroform, alcohol with 1 to 6 carbon atoms, and combinations of two or more thereof;
(d) applying ultrasound to the callus extract to separate the PDRN solution, drying it, and pulverizing it to obtain PDRN powder;
(e) preparing a coating solution by dissolving the PDRN powder in one selected from the group consisting of water, alcohol having 1 to 6 carbon atoms, and a combination of two or more thereof; and
(f) applying the coating solution to the suture base and drying it;
The ratio of the weight of the PDRN powder to the weight of the callus is 0.04 to 0.1%,
Medical suture.
제1항에 있어서,
상기 봉합사 기재는 흡수성 봉합사인, 의료용 봉합사.
According to paragraph 1,
The suture substrate is an absorbable suture, a medical suture.
삭제delete 제1항에 있어서,
상기 코팅 용액은 수용성 고분자로 이루어진 바인더를 더 포함하는, 의료용 봉합사.
According to paragraph 1,
The coating solution is a medical suture, further comprising a binder made of a water-soluble polymer.
제4항에 있어서,
상기 수용성 고분자는 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, 폴리아크릴산, 폴리아크릴아마이드, 폴리하이드록시에틸메타크릴레이트 및 이들 중 2 이상의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 하나인, 의료용 봉합사.
According to clause 4,
The water-soluble polymer is a medical suture selected from the group consisting of polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, polyacrylic acid, polyacrylamide, polyhydroxyethyl methacrylate, and combinations of two or more thereof.
삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 MS 배지는 2,4-다이클로로페녹시아세트산 및 카이네틴을 포함하는, 의료용 봉합사.
According to paragraph 1,
The MS medium contains 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and kinetin, a medical suture.
삭제delete 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 캘러스 추출물 중 상기 PDRN 분말의 농도는 80~120μg/mL인, 의료용 봉합사.
According to paragraph 1,
Medical suture, wherein the concentration of the PDRN powder in the callus extract is 80 to 120 μg/mL.
삭제delete 삭제delete 제4항에 있어서,
상기 코팅 용액 중 상기 바인더의 농도는 0.1~3%(w/v)인, 의료용 봉합사.
According to clause 4,
Medical suture, wherein the concentration of the binder in the coating solution is 0.1 to 3% (w/v).
삭제delete 삭제delete
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