KR102623565B1 - Composition for improving skin comprising β-pinene as active ingredient - Google Patents

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Abstract

본 발명은 피부 개선용 조성물에 관한 것으로, 베타피넨(β- pinene)을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과가 우수한 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 피부에 안전하면서도 적은 유효량으로 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과를 현저하게 발휘하여 의약, 화장료 또는 피부외용제 조성물에 유용하게 이용될 수 있다.The present invention relates to a composition for improving skin, and to a composition containing beta-pinene as an active ingredient and having excellent skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion, and skin moisturizing effects. The composition according to the present invention is safe for the skin and significantly exhibits skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing effects in a small effective amount, and can be usefully used in medicine, cosmetics, or external skin compositions.

Description

베타피넨을 유효성분으로 포함하는 피부 개선용 조성물{Composition for improving skin comprising β-pinene as active ingredient}Composition for improving skin comprising beta-pinene as active ingredient}

본 발명은 피부 미백, 피부 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과를 나타내는 피부 개선용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for skin improvement that exhibits skin whitening, skin wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing effects.

피부의 색깔 또는 밝기는 사람의 피부 내 멜라닌(Melanin)의 농도와 분포에 따라 유전적으로 결정되나, 태양 자외선, 피로 또는 스트레스 등의 환경적 또는 생리적 조건에 의해서도 영향을 받는다. 멜라닌은 아미노산의 일종인 티로신(Tyrosine)에 티로시나제(Tyrosinase)라는 효소가 촉매로 작용하여 도파(DOPA) 및 도파퀴논(Dopaquinone)으로 순차적으로 바뀐 후, 비효소적인 산화반응을 거쳐 만들어진다. 이와 같이 멜라닌이 만들어지는 경로는 알려져 있으나, 멜라닌 합성을 유도하는 메커니즘에서 티로시나제가 촉발되는 원인이 무엇인지에 대해서는 아직까지 자세히 밝혀지지 않았다.Skin color or brightness is genetically determined by the concentration and distribution of melanin in a person's skin, but is also affected by environmental or physiological conditions such as solar ultraviolet rays, fatigue, or stress. Melanin is produced by sequentially converting tyrosine, a type of amino acid, into DOPA and dopaquinone through the enzyme tyrosinase as a catalyst, followed by a non-enzymatic oxidation reaction. Although the path by which melanin is produced is known, the cause of tyrosinase triggering in the mechanism that induces melanin synthesis has not yet been revealed in detail.

한편, 일반적으로 알려진 미백 성분으로는, 코지산(Kojic acid) 또는 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 C(L-Ascorbic acid) 또는 이들의 유도체와 각종 식물 추출물 등이 있다. 이들은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써, 피부 톤을 밝게 하여 피부 미백 효과를 나타낼 뿐만 아니라 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착증을 개선시킬 수 있다. 그러나 피부 적용 시, 자극 또는 발적 등의 피부 안전성의 문제로 사용량의 제한이 있거나, 효과가 미미하여 실질적인 효과를 기대할 수 없는 문제점이 있다.Meanwhile, commonly known whitening ingredients include substances that inhibit tyrosinase enzyme activity such as kojic acid or arbutin, hydroquinone, vitamin C (L-Ascorbic acid), or their derivatives. There are various plant extracts, etc. By inhibiting the synthesis of melanin pigment, they not only brighten skin tone and have a skin whitening effect, but can also improve skin hyperpigmentation such as spots and freckles caused by ultraviolet rays, hormones, or genetics. However, when applied to the skin, there is a limit to the amount used due to skin safety issues such as irritation or redness, or the effect is so small that no practical effect can be expected.

콜라겐(Collagen)은 피부의 섬유아세포(Fibroblast)에서 생성되는 주요 기질 단백질로서 세포 외 간질에 존재하고, 중요한 기능으로는 피부의 기계적 견고성, 결합조직의 저항력과 조직의 결합력, 세포접착의 지탱, 세포분할과 분화(유기체의 성장 혹은 상처 치유시)의 유도 등이 알려져 있다. 이러한 콜라겐은 연령 및 자외선 조사에 의한 광 노화에 의해 감소하며, 콜라겐을 분해하는 콜라게나제 효소 활성으로 콜라겐 감소가 촉진된다. 이는 피부의 주름 형성과 밀접한 연관이 있다고 알려져 있다. Collagen is a major matrix protein produced by fibroblasts in the skin and exists in the extracellular matrix. Its important functions include mechanical rigidity of the skin, resistance and adhesion of connective tissue, support for cell adhesion, and cell adhesion. Induction of division and differentiation (during organism growth or wound healing) is known. Collagen decreases due to age and photoaging caused by ultraviolet irradiation, and collagen reduction is promoted by collagenase enzyme activity that decomposes collagen. This is known to be closely related to the formation of wrinkles on the skin.

현재, 주름개선 화장료로는 레티노이드(retinoid), 아데노신(adenosine), 동물태반유래 단백질, 또는 클로렐라(chlorella) 추출물 등이 알려져 있다. 가장 잘 알려져 있는 레티놀(retinol)은 콜라겐 합성을 촉진하며 엘라스테이즈(elastase) 효소를 저해하는 물질이지만 불안정하며, 피부 적용시 자극 또는 발적 등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부주름 개선효과를 기대하기가 어렵다고 알려져 있다.Currently, retinoids, adenosine, protein derived from animal placenta, or chlorella extract are known as wrinkle-improving cosmetics. The most well-known retinol is a substance that promotes collagen synthesis and inhibits the elastase enzyme, but it is unstable and its usage is limited due to safety issues such as irritation or redness when applied to the skin. Chlorella extract, etc. It is known that the effect is so small that it is difficult to actually expect an improvement in skin wrinkles.

히알루론산(hyaluronic acid)은 글리코사미노글리칸(glycosaminoglycans)의 일종으로 글루쿠론산(glucuronic acid)과 N-아세틸글루코사민(N-acetylglucosamine) 잔기가 반복적으로 연결되어 있는 사슬모양의 고분자 다당류 물질이다. 다량의 물과 결합하여 겔을 만드는 성질이 있어 높은 점성과 탄성을 가진다. 히알루론산은 세포외 기질의 주요 성분으로, 수분 보유, 세포 간 간격 유지, 세포성장인자 및 영양성분의 저장과 확산에 관여할 뿐만 아니라, 세포의 분열과 분화 또는 이동 등에도 관여하는 것으로 보고된 바 있다.Hyaluronic acid is a type of glycosaminoglycans and is a chain-shaped polymer polysaccharide in which glucuronic acid and N-acetylglucosamine residues are repeatedly linked. It has the property of forming a gel by combining with a large amount of water, so it has high viscosity and elasticity. Hyaluronic acid is a major component of the extracellular matrix and has been reported to be involved in water retention, maintenance of intercellular space, storage and diffusion of cell growth factors and nutrients, as well as cell division, differentiation, and migration. there is.

포유류의 체내에 존재하는 히알루론산의 50% 이상이 피부, 특히 표피의 세포 간 간격과 진피의 결체 조직에 분포한다고 보고되었고, 이러한 히알루론산은 주로 각질형성세포와 섬유아세포에 의해 합성되는 것으로 알려져 있다. 인간 피부에서 히알루론산의 양은 노화와 함께 감소되는 것으로 보고되었고, 피부 내 히알루론산의 감소는 노화에 따른 피부 탄력 저하 및 수분 함유량 감소의 직접적인 원인 중 하나라고 여겨지고 있다(비특허문헌 1 내지 3). 또한 히알루론산은 각질층의 구조유지와 피부장벽 기능을 유지하는 데에도 관여한다고 알려져 있다(비특허문헌 4). 따라서 히알루론산은 피부 보습에 직접적인 관련이 있다.It has been reported that more than 50% of the hyaluronic acid present in the mammalian body is distributed in the skin, especially in the intercellular spaces of the epidermis and the connective tissue of the dermis. It is known that such hyaluronic acid is mainly synthesized by keratinocytes and fibroblasts. . The amount of hyaluronic acid in human skin has been reported to decrease with aging, and the decrease in hyaluronic acid in the skin is believed to be one of the direct causes of decreased skin elasticity and decreased moisture content due to aging (Non-Patent Documents 1 to 3). In addition, hyaluronic acid is known to be involved in maintaining the structure of the stratum corneum and skin barrier function (Non-patent Document 4). Therefore, hyaluronic acid is directly related to skin moisturization.

그러나, 상기와 같은 효과를 가진 히알루론산은 분자량이 커서 피부에 흡수가 잘 되지 않는다. 또한, 히알루론산을 피부로 주입하는 방법이 현재 시술되고 있으나, 피부 세포 내의 히알루론산 합성을 증가시키는 방법이 더 효과적이다. 따라서 인체 내의 히알루론산의 생성을 증가시킬 수 있는 방법에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으나, 괄목할 만한 연구 결과는 아직 알려진 바가 없는 실정이다.However, hyaluronic acid, which has the above effects, has a large molecular weight and is not easily absorbed into the skin. In addition, a method of injecting hyaluronic acid into the skin is currently being used, but a method of increasing hyaluronic acid synthesis within skin cells is more effective. Therefore, research is being actively conducted on methods to increase the production of hyaluronic acid in the human body, but no notable research results are yet known.

따라서, 생체에 안전하고, 유효성분이 안정하며, 무엇보다도 기존의 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 또는 보습 효과가 있는 물질보다 효과가 우수한 성분의 개발이 절실히 요망되고 있다.Therefore, there is an urgent need to develop ingredients that are safe for the living body, have stable active ingredients, and, above all, are more effective than existing substances that have skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion, or moisturizing effects.

Biochem Biophys Acta 279, 265-275Biochem Biophys Acta 279, 265-275 Carbohydr Res 159, 127-136Carbohydr Res 159, 127-136 Int J Dermatol 33, 119-122Int J Dermatol 33, 119-122 J Cosmet Dermatol. 2007 Jun, 6(2), 75-82J Cosmet Dermatol. 2007 Jun, 6(2), 75-82

이에, 본 발명자들은 베타피넨이 피부의 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하여 주름을 개선하고 탄력을 증진시키며, 멜라닌 합성을 억제하여 미백 효과를 나타내고, 각질 형성 세포에서 히알루론산 생성을 증가시켜 피부 보습 효과를 나타내는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors found that beta-pinene improves wrinkles and improves elasticity by promoting collagen synthesis in skin fibroblasts, exhibits a whitening effect by inhibiting melanin synthesis, and increases hyaluronic acid production in keratinocytes to moisturize the skin. The present invention was completed by confirming that .

따라서, 본 발명의 목적은 인체에 안전하여 부작용이 적으면서도 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 보습 효과가 우수한 베타피넨의 신규 용도를 제공하는 것이다. Therefore, the purpose of the present invention is to provide a new use for beta-pinene that is safe for the human body, has fewer side effects, and has excellent skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion, and moisturizing effects.

본 발명의 다른 목적은 상기 베타피넨을 유효성분으로 포함하는 의약, 화장료 또는 피부외용제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a medicine, cosmetic, or external skin preparation containing the beta-pinene as an active ingredient.

상기 과제를 해결하기 위한 수단으로서, 본 발명은 의약, 화장료 또는 피부외용제의 제조를 위한, 베타피넨을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습용 조성물을 제공한다.As a means to solve the above problems, the present invention provides a composition for skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion and skin moisturizing containing beta-pinene as an active ingredient for the production of medicines, cosmetics or external skin preparations.

본 발명에 따른 베타피넨은 피부의 섬유아세포의 콜라겐 합성을 촉진하여 주름을 개선하고 탄력을 증진시키며, 멜라닌 합성을 억제하여 미백 효과를 나타내고, 각질 형성 세포에서 히알루론산 생성을 증가시켜 피부 보습 효과를 나타냄으로써, 의약, 화장료 또는 피부외용제의 제조에 사용할 수 있다.Beta-pinene according to the present invention improves wrinkles and improves elasticity by promoting collagen synthesis in skin fibroblasts, exhibits a whitening effect by inhibiting melanin synthesis, and increases hyaluronic acid production in keratinocytes to provide a skin moisturizing effect. As a result, it can be used in the production of medicines, cosmetics, or external skin preparations.

이하, 본 발명의 구성을 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in detail.

피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 성분이 실제 피부에 적용 시 우수한 효과를 발휘하기 위해서는 저농도에서 고활성의 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 활성을 나타내고, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 우수해야 한다. 또한, 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과를 나타내기에 충분한 시간 동안 머무를 수 있도록 휘발성이 낮고, 조성물이나 피부 상에서 활성 성분이 안정하게 유지되고, 의약, 화장료 또는 피부 외용제 등으로의 제조가 용이하며, 또한 피부에 안전한 것이 바람직하다. 그러나, 공지의 성분 중 상기 특성을 모두 만족시키는 성분은 흔치 않다. 예를 들어, 몇몇 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 성분들은 시험관 내 실험 시 저농도에서도 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 활성은 우수하나, 피부를 투과하여 흡수되는 능력이 떨어져 실제 피부에 적용하기엔 어렵다. 또 다른 활성 성분들은 친수성이 낮아 의약이나 화장품, 피부 외용제로 제형화가 어렵다. 또한, 몇몇 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 성분들은 열, 광, 또는 산소에 노출되었을 때 상기 활성 성분이 분해되거나 다른 화합물로 변형되어 피부에 적용하기 전에 이미 효과가 사라지는 경우도 있다.In order for skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing ingredients to have excellent effects when applied to actual skin, they exhibit highly active skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing activities at low concentrations, and are absorbed through the skin. Must have excellent ability. In addition, it has low volatility so that it can remain for a sufficient period of time to exhibit skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing effects, and the active ingredients remain stable in the composition or on the skin, and can be manufactured as medicine, cosmetics, or external skin preparations. It is desirable that it is easy and safe for the skin. However, among known components, components that satisfy all of the above characteristics are rare. For example, some skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing ingredients have excellent skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing properties even at low concentrations in in vitro experiments, but their ability to penetrate and absorb through the skin is low, so they are not effective in actual skin moisturizing. It is difficult to apply to the skin. Other active ingredients have low hydrophilicity, making them difficult to formulate as medicine, cosmetics, or external skin products. In addition, some skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing ingredients may lose their effectiveness before application to the skin because the active ingredients are decomposed or transformed into other compounds when exposed to heat, light, or oxygen.

하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 베타피넨은 저농도에서 월등히 우수한 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과를 나타내므로, 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습을 위한 의약, 화장료, 피부 외용제 조성물의 유효성분으로 사용할 수 있다.As can be seen in the examples below, beta-pinene exhibits significantly excellent skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion, and skin moisturizing effects at low concentrations, so it can be used in medicines, cosmetics, It can be used as an active ingredient in external skin compositions.

따라서, 본 발명은 베타피넨을 유효성분으로 포함하는 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습용 조성물을 제공한다.Therefore, the present invention provides a composition for skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion, and skin moisturization containing beta-pinene as an active ingredient.

본 발명의 조성물에서 유효성분으로 사용되는 베타피넨은 하기 화학식 1로 표현되는 화합물이 사용될 수 있다.Beta-pinene used as an active ingredient in the composition of the present invention may be a compound represented by the following formula (1).

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112016021404518-pat00001
Figure 112016021404518-pat00001

상기 화학식 1로 표현되는 화합물은 베타피넨(β-pinene), beta-pinene, 또는 6,6-Dimethyl-2-methylenebicyclo[3.1.1]heptane 등으로 명명될 수 있다. 또한, 상기 화합물의 분자식은 C10H16이며, 분자량은 136.23이다.The compound represented by Formula 1 may be named beta-pinene, beta-pinene, or 6,6-Dimethyl-2-methylenebicyclo[3.1.1]heptane. Additionally, the molecular formula of the compound is C 10 H 16 and the molecular weight is 136.23.

본 발명에 있어서, 상기 베타피넨의 획득 방법은 특별히 한정되는 것은 아니며, 당업계에 공지된 방법에 따라 화학적으로 합성하거나 또는 시판되는 물질을 사용할 수 있다.In the present invention, the method of obtaining beta-pinene is not particularly limited, and it can be chemically synthesized according to a method known in the art or a commercially available material can be used.

본 발명에 있어서, 상기 베타피넨은 수화물 또는 에탄올화물 등의 형태를 포함하는 용매화된 형태뿐만 아니라, 비-용매화된(unsolvated) 형태로 존재할 수도 있다. 상기 베타피넨은 결정형 또는 무정형 형태로 존재할 수 있으며, 이러한 모든 물리적 형태는 본 발명의 범위에 포함된다.In the present invention, the beta-pinene may exist in an unsolvated form as well as a solvated form including hydrate or ethanolate. The beta-pinene may exist in crystalline or amorphous form, and all such physical forms are included within the scope of the present invention.

본 발명에 있어서, 상기 베타피넨은 전체 조성물 중량에 대하여 0.00001 내지 10 중량%, 예를 들어 0.0001 내지 10 중량%로 포함될 수 있다. 본 발명의 조성물이 상기 베타피넨을 0.00001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 피부 안전성에 문제가 있을 수 있다. In the present invention, the beta-pinene may be included in an amount of 0.00001 to 10% by weight, for example, 0.0001 to 10% by weight, based on the total weight of the composition. If the composition of the present invention contains less than 0.00001% by weight of beta-pinene, sufficient skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement and skin moisturizing effects cannot be expected, and if it contains more than 10% by weight, it may cause unwanted side effects such as allergies. Reactions may occur or skin safety issues may arise.

본 발명의 조성물은 의약 제형 제조를 위해 사용할 수 있다.The compositions of the present invention can be used for preparing pharmaceutical formulations.

상기 조성물은 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 예컨대, 공지의 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 성분을 포함할 수 있을 것이다. 추가적인 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 성분을 포함하게 되면 본 발명의 조성물의 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이다. 상기 성분 추가 시에는 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 당업계에 공지된 피부 미백 성분으로서, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제(tyrosinase) 효소 활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid); 당업계에 공지된 주름 개선 및 탄력 증진 성분으로서, 레티노산, TGF, 동물 태반 유래의 단백질, 베툴린산 및 클로렐라 추출물; 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물로 구성되는 군으로부터 선택되는 1종 또는 2종 이상의 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가의 성분은 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 내지 10 중량%로 포함될 수 있을 것이며, 상기 함량 범위는 피부 안전성, 상기 베타피넨의 제형화 시의 용이성 등의 요건에 따라 조절될 수 있을 것이다.The composition may further contain one or more active ingredients that exhibit the same or similar functions. For example, it may include known skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement, and skin moisturizing ingredients. If additional skin whitening, wrinkle improvement, elasticity improvement, and skin moisturizing ingredients are included, the skin whitening, wrinkle improvement, elasticity improvement, and skin moisturizing effects of the composition of the present invention can be further improved. When adding the above ingredients, skin safety due to combined use, ease of formulation, and stability of the active ingredients can be taken into consideration. In one embodiment of the present invention, the composition is a skin whitening ingredient known in the art, a substance that inhibits tyrosinase enzyme activity such as kojic acid, arbutin, etc., and hydroquinone. , Vitamin-C (L-Ascorbic acid); Wrinkle improvement and elasticity enhancement ingredients known in the art include retinoic acid, TGF, protein derived from animal placenta, betulinic acid, and chlorella extract; and one or two or more ingredients selected from the group consisting of their derivatives and various plant extracts. Additional ingredients may be included in an amount of 0.0001 to 10% by weight based on the total weight of the composition, and the content range may be adjusted according to requirements such as skin safety and ease of formulation of the beta-pinene.

또한, 본 발명의 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 더 포함할 수 있다.Additionally, the composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier.

약학적으로 허용가능한 담체는 완충액, 주사용 멸균수, 일반 식염수 또는 인산염 완충 식염수, 슈크로스, 히스티딘, 염 및 폴리솔베이트 등과 같은 여러 성분을 함유할 수 있다.Pharmaceutically acceptable carriers may contain various ingredients such as buffers, sterile water for injection, normal saline or phosphate buffered saline, sucrose, histidine, salts and polysorbates.

본 발명의 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있으며, 일반 약학 제제의 형태, 예를 들어, 임상 투여 시 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. The composition of the present invention can be administered orally or parenterally, and can be administered in the form of a general pharmaceutical preparation, for example, various oral and parenteral formulations during clinical administration. When formulated, commonly used fillers and extenders are used. It can be prepared using diluents or excipients such as binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 의약 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다.Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, and water, in the pharmaceutical composition of the present invention. It can be prepared by mixing sucrose, lactose, gelatin, etc.

단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, oral solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to the commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.Preparations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, tween 61, cacao, laurin, glycerogeratin, etc. can be used.

또한, 본 발명의 조성물은 바람직하게 비경구용 제제로 이용될 수 있으며, 상기 비경구용 제제는 예를 들어, 바세린 또는 스테아릴알콜 등의 약제학적으로 허용가능한 기제; 폴리솔베이트 또는 솔르비탄 세스퀴올레이트 등의 약제학적으로 허용가능한 계면활성제; 글리세린 등의 약제학적으로 허용가능한 보습제; 약제학적으로 허용가능한 용제; 착향제, 착색제, 안정화제 또는 점성화제 등을 균질하게 혼합하는 통상의 비경구용 제제의 제조방법에 의해 제조될 수 있다.In addition, the composition of the present invention can preferably be used as a parenteral preparation, and the parenteral preparation may include, for example, a pharmaceutically acceptable base such as vaseline or stearyl alcohol; Pharmaceutically acceptable surfactants such as polysorbate or sorbitan sesquioleate; Pharmaceutically acceptable moisturizers such as glycerin; pharmaceutically acceptable solvent; It can be manufactured by a conventional parenteral preparation method of homogeneously mixing flavoring agents, colorants, stabilizers, or viscosifiers.

본 발명에 있어서, '미백 효과'라 함은 멜라닌 색소의 합성을 저해함으로써 피부 톤을 밝게 할 뿐만 아니라, 자외선, 호르몬 또는 유전에 기인한 기미나 주근깨 등의 피부 과색소 침착을 개선하는 것을 말한다.In the present invention, 'whitening effect' refers to not only brightening skin tone by inhibiting the synthesis of melanin pigment, but also improving skin hyperpigmentation such as spots and freckles caused by ultraviolet rays, hormones, or genetics.

본 발명에 있어서, '주름 개선 효과'라 함은 유전자에 의한 원인, 피부 진피에 존재하는 콜라겐의 감소 또는 외부 환경에 의해 유발되는 피부 주름이 생성되는 것을 억제 또는 저해하거나, 이미 생성된 주름을 완화시키는 것을 말한다.In the present invention, the 'wrinkle improvement effect' refers to suppressing or inhibiting the formation of skin wrinkles caused by genes, reduction of collagen present in the skin dermis, or external environment, or alleviating wrinkles that have already been formed. It says what to do.

본 발명에 있어서, '탄력 증진 효과'라 함은 진피층에 존재하는 엘라스틴(elastin)과 콜라겐을 이어주는 히알루론산의 감소를 억제하여 피부에 대한 탄력성을 증가시키는 것을 말한다. In the present invention, the 'elasticity enhancing effect' refers to increasing the elasticity of the skin by suppressing the decrease in hyaluronic acid, which connects elastin and collagen present in the dermal layer.

본 발명에 있어서, '보습 또는 피부 보습 효과'라 함은 피부의 수분 손실(수분 증발) 등을 적절히 조절하여 피부의 수분 항상성을 유지하여 수분감을 증가시켜주고 촉촉한 상태를 유지시키는 것을 말한다. 피부 내 히알루론산 또는 콜라겐이 감소되면 수분이 손실되고, 히알루론산 또는 콜라겐이 증가되면 수분이 증가할 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서 피부 보습은 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 증진에도 도움을 줄 수 있다.In the present invention, 'moisturizing or skin moisturizing effect' refers to maintaining moisture homeostasis of the skin by appropriately controlling moisture loss (water evaporation) of the skin, thereby increasing moisture and maintaining a moist state. When hyaluronic acid or collagen in the skin decreases, moisture can be lost, and when hyaluronic acid or collagen increases, moisture can increase. Additionally, in the present invention, skin moisturizing can help improve skin wrinkles or improve skin elasticity.

본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 미백 효과를 나타내거나, 주름을 개선하거나, 탄력을 증진시키거나, 보습 효과를 나타낼 수 있는 베타피넨의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물이 유효량의 상기 베타피넨을 포함할 때, 바람직한 피부 미백 효과, 주름 개선 효과, 탄력 증진 효과 및 보습 효과를 제공할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함되는 상기 베타피넨의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 조성물이 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 베타피넨을 포함할 수 있을 것이다. 따라서, 일일 투여량은 유효성분인 상기 베타피넨의 양을 기준으로 0.1 내지 100 mg/kg, 바람직하게는 30 내지 80 mg/kg, 더욱 바람직하게는 50 내지 60 mg/kg으로 투여될 수 있으며, 하루 1~6회 투여될 수 있다.In the present invention, 'effective amount' refers to the amount of beta-pinene that can exhibit a whitening effect, improve wrinkles, improve elasticity, or exhibit a moisturizing effect. When the composition of the present invention contains an effective amount of beta-pinene, it can provide desirable skin whitening effects, wrinkle improvement effects, elasticity enhancement effects, and moisturizing effects. The effective amount of beta-pinene included in the composition of the present invention will vary depending on the form in which the composition is manufactured, the method in which the compound is applied to the skin, and the time it remains on the skin. For example, when the composition is commercialized as a pharmaceutical, it may contain beta-pinene at a higher concentration than when it is commercialized as a cosmetic that is routinely applied to the skin. Therefore, the daily dosage may be 0.1 to 100 mg/kg, preferably 30 to 80 mg/kg, and more preferably 50 to 60 mg/kg, based on the amount of beta-pinene, which is the active ingredient. It may be administered 1 to 6 times a day.

본 발명의 조성물은 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The composition of the present invention can be used alone or in combination with surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemical therapy, and methods using biological response modifiers.

본 발명의 의약 제형은 피부 외용제 제형을 포함할 수 있다. The pharmaceutical formulation of the present invention may include a skin topical formulation.

상기 베타피넨을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다. When the beta-pinene is used as an external skin agent, it is additionally added with fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softeners, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, and water. , ionic or non-ionic emulsifiers, fillers, sequestering agents and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles, or commonly used in external preparations for the skin. It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as any other ingredients. Additionally, the ingredients may be introduced in amounts commonly used in the field of dermatology.

상기 베타피넨이 피부 외용제 제형으로 제공될 경우, 이에 제한되는 것은 아니나, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제와 같은 제형을 가질 수 있다.When the beta-pinene is provided in an external skin formulation, it is not limited thereto, but may have a formulation such as ointment, patch, gel, cream, or spray.

또한, 본 발명의 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습용 조성물은 화장료 제형 제조를 위해 사용될 수 있다.Additionally, the composition for skin whitening, wrinkle improvement, elasticity promotion, and skin moisturizing of the present invention can be used to prepare cosmetic formulations.

상기 화장료 제형은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태일 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등과 같은 화장수, 훼이셜 로션, 바디로션 등과 같은 유액, 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등과 같은 크림, 에센스, 화장연고, 스프레이, 젤, 팩, 선 스크린, 메이크업 베이스, 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션, 파우더, 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일과 같은 메이크업 제거제, 클렌징 폼, 비누, 바디 워쉬 등과 같은 세정제 등의 제형을 가질 수 있다. The cosmetic formulation may be in the form of a general emulsified formulation or solubilized formulation. For example, lotion such as flexible lotion or nourishing lotion, emulsion such as facial lotion, body lotion, cream, essence, cosmetic ointment, spray, gel, pack, sunscreen, makeup base, liquid such as nutritional cream, moisture cream, eye cream, etc. It may have a formulation such as foundation type, solid type or spray type, powder, makeup remover such as cleansing cream, cleansing lotion, cleansing oil, cleansing foam, soap, body wash, etc.

또한, 상기 화장품은 베타피넨에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.In addition to beta-pinene, the cosmetics contain fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softeners, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, and ionic agents. or non-ionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or any other commonly used in cosmetics. It may contain auxiliaries commonly used in the field of cosmetics, such as ingredients.

상기 보조제는 제형에 따라 다양하게 함유될 수 있다.The auxiliaries may be contained in various ways depending on the formulation.

상기 화장료 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물 등이 보조제로 이용될 수 있다.When the cosmetic formulation is an ointment, paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracant, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide or mixtures thereof, etc. This can be used as a supplement.

상기 화장료 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는, 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물 등이 보조제로 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르 등과 같은 추진제를 포함할 수 있다.When the cosmetic formulation is a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silcate, polyamide powder, or mixtures thereof may be used as auxiliaries. In particular, when the cosmetic formulation is a spray, chlorofluorocarbons may be added. May contain propellants such as lohydrocarbon, propane/butane or dimethyl ether.

상기 화장료 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 용매, 용해화제, 또는 유탁화제 등이 보조제로 이용될 수 있고, 예컨대, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일 등이 이용될 수 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the cosmetic formulation is a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent, or emulsifying agent may be used as an auxiliary agent, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil may be used, and in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol, or sorbitan fatty acid ester are used. It can be.

상기 화장료 제형이 현탁액인 경우에는, 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜 등과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등과 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 보조제로 이용될 수 있다.When the cosmetic formulation is a suspension, liquid diluents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline cellulose, Aluminum metahydroxide, bentonite, agar, or tracant may be used as auxiliaries.

상기 화장료 제형이 비누인 경우에는 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 또는 당 등이 이용될 수 있다.When the cosmetic formulation is soap, alkali metal salts of fatty acids, fatty acid hemiester salts, fatty acid protein hydrolysates, isethionates, lanolin derivatives, fatty alcohols, vegetable oils, glycerol, or sugars may be used.

상기 화장료 제형은 유효성분이 단기간 내에 피부에 머무르게 되는 메이크업 제거제, 세정제 등과 같은 워쉬-오프(wash-off) 타입의 화장품의 경우에는 비교적 높은 농도의 상기 베타피넨을 포함할 수 있을 것이다. 반면, 유효성분이 장기간 동안 피부에 머무르게 되는 화장수, 유액, 크림, 에센스 등의 리브-온(leave-on) 타입의 화장품의 경우에는 워쉬-오프 타입의 화장품에 비해 낮은 농도의 상기 베타피넨을 포함해도 무방할 것이다. 이에 제한되는 것은 아니나, 본 발명의 한 구체예에서, 상기 조성물은 상기 베타피넨을 전체 조성물 중량에 대하여 0.0001 중량% 내지 10 중량%, 예를 들어 0.0001 중량% 내지 1 중량%로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물이 상기 베타피넨을 0.0001 중량% 미만으로 포함할 경우에는 충분한 피부 미백, 주름 개선, 탄력 증진 및 피부 보습 효과를 기대할 수 없고, 10 중량%를 초과하여 포함할 경우에는 알러지 등 원치 않는 반응이 발생하거나 피부 안전성에 문제가 있을 수 있으므로 이를 방지하기 위한 것이다.The cosmetic formulation may contain a relatively high concentration of beta-pinene in the case of wash-off type cosmetics such as makeup removers and detergents in which the active ingredient stays on the skin for a short period of time. On the other hand, in the case of leave-on type cosmetics such as lotions, emulsions, creams, and essences, where the active ingredients stay on the skin for a long period of time, even if they contain a lower concentration of beta-pinene than wash-off type cosmetics, It will be fine. Although not limited thereto, in one embodiment of the present invention, the composition may include beta-pinene in an amount of 0.0001% by weight to 10% by weight, for example, 0.0001% by weight to 1% by weight, based on the total weight of the composition. If the composition of the present invention contains less than 0.0001% by weight of beta-pinene, sufficient skin whitening, wrinkle improvement, elasticity enhancement and skin moisturizing effects cannot be expected, and if it contains more than 10% by weight, it may cause unwanted side effects such as allergies. This is to prevent reactions that may occur or problems with skin safety.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be explained in detail by the following examples. However, the following examples only illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to the following examples.

참조예Reference example 1: One: 베타피넨beta-pinene (β- (β- pinenepinene ) 물질 정보) substance information

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112016021404518-pat00002
Figure 112016021404518-pat00002

물질명: β- pineneSubstance name: β-pinene

CAS No.: 18172-67-3CAS No.: 18172-67-3

분자식: C10H16 Molecular formula: C 10 H 16

분자량: 136.23Molecular Weight: 136.23

실시예 1: 콜라겐 총량 증가 효과Example 1: Effect of increasing total collagen amount

베타피넨을 인간 유래 섬유아세포의 배양액에 첨가한 후, 세포수준에서 합성된 콜라겐 총량을 측정하였다. 합성된 콜라겐 총량의 측정은 PICP EIA kit(Procollagen Type I C-Peptide Enzyme ImmunoAssay KIT)를 이용하여 정량하였다.After beta-pinene was added to the culture medium of human-derived fibroblasts, the total amount of collagen synthesized at the cellular level was measured. The total amount of synthesized collagen was quantified using the PICP EIA kit (Procollagen Type I C-Peptide Enzyme ImmunoAssay KIT).

실험전 인간 유래 섬유아세포를 대상으로 실험물질의 농도 0.001 ppm, 0.01 ppm, 0.1 ppm, 1 ppm, 10 ppm에서 세포독성을 평가(섬유아세포를 배양하여 MTT 시험을 하는 방법)[참고문헌: Mossman T. (1983). Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth & Survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55-63] 하였으며, 세포독성이 없는 농도를 선정하여 콜라겐 총량을 측정하였다. Before the experiment, cytotoxicity was evaluated on human-derived fibroblasts at concentrations of 0.001 ppm, 0.01 ppm, 0.1 ppm, 1 ppm, and 10 ppm (method of performing MTT test by culturing fibroblasts) [Reference: Mossman T (1983). Rapid Colorimetric Assay for Cellular Growth & Survival: application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods 65, 55-63], and a non-cytotoxic concentration was selected to measure the total amount of collagen.

실험에서 베타피넨의 최종 농도는 각각 1 ppm, 10 ppm 으로 하였고, 각각의 시료는 인간 섬유아세포의 배양배지에 첨가하여 1일간 배양한 후, 배양액을 취하여 PICP EIA 키트로 각 농도에서의 콜라겐 총량을 분광광도계를 이용하여 450 nm에서 측정하였다. 효과의 비교를 위하여 아무것도 첨가하지 않은 섬유아세포의 배양 배지(대조군)와 TGFb를 최종 농도 10 ppm이 되도록 첨가한 시료에 대하여 동일한 방법으로 콜라겐 총량을 측정하였다. 콜라겐 총량은 UV 흡광도로 측정하였으며, 콜라겐 총량의 증가율은 대조군에 대한 상대적인 콜라겐 총량 비율로 계산하고, 그 결과를 하기 표 1에 정리하였다.In the experiment, the final concentrations of beta-pinene were 1 ppm and 10 ppm, respectively. Each sample was added to the culture medium of human fibroblasts and cultured for 1 day, and then the culture medium was taken and the total amount of collagen at each concentration was measured using the PICP EIA kit. Measured at 450 nm using a spectrophotometer. To compare the effects, the total amount of collagen was measured in the same way for the fibroblast culture medium without any addition (control group) and the sample to which TGFb was added to a final concentration of 10 ppm. The total amount of collagen was measured by UV absorbance, and the rate of increase in the total amount of collagen was calculated as the ratio of the total amount of collagen relative to the control group, and the results are summarized in Table 1 below.

시료sample 흡광도 평균Absorbance average 콜라겐 증가율(%)Collagen increase rate (%) 베타피넨 (1 ppm)Beta-pinene (1 ppm) 510510 113113 베타피넨 (10 ppm)Beta-pinene (10 ppm) 577577 128128 대조군 (무첨가)Control group (no additives) 451451 -- TGFb (10 ppm)TGFb (10 ppm) 586586 130130

(반복수=6)(number of repetitions=6)

상기 표 1의 결과에서 볼 수 있듯이, 베타피넨 (10 ppm)은 콜라겐 합성 능력이 있는 것으로 알려진 TGFb(10ppm)과 대등하게 천연물질로써 우수한 콜라겐 합성 효과를 나타낸다. 따라서, 베타피넨은 주름 개선 및 탄력 증진을 위한 화장료, 약학 및 피부외용제의 효과적인 유효성분으로 사용할 수 있음을 확인하였다.As can be seen from the results in Table 1, beta-pinene (10 ppm) is a natural substance and has an excellent collagen synthesis effect on par with TGFb (10 ppm), which is known to have the ability to synthesize collagen. Therefore, it was confirmed that beta-pinene can be used as an effective active ingredient in cosmetics, pharmaceuticals, and external skin preparations for improving wrinkles and improving elasticity.

실시예Example 2: 인체 유래의 각질 형성 세포에서 히알루론산 농도 증가 효과 2: Effect of increasing hyaluronic acid concentration in human-derived keratinocytes

인체 유래 각질 형성 세포를 10% 우혈청(fetal bovin serum)을 포함한 DMEM 배지에서 1x105 cells/ml로 배양하여 24-well plate에 500㎕씩 분주하고 18시간 배양하였다. 그 다음, 우혈청이 포함되어 있지 않은 DMEM 배지로 2회 세척하고. 베타피넨을 농도별(1 ppm, 10 ppm)로 첨가하였다. 음성 대조군으로 동량의 에탄올을 처리하였고, 양성 대조군으로 히알루론산 생성을 촉진한다고 알려진 글루코사민 하이드로클로라이드(Glucosamine hydrochloride, Sigma-aldrich)를 100 ppm 처리하였다. 24시간 배양 후, 세포 배양액을 회수하여 Hyaluronan ELISA 키트(R&D Systems)를 이용하여 히알루론산 농도를 측정하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Human-derived keratinocytes were cultured at 1x10 5 cells/ml in DMEM medium containing 10% fetal bovin serum, distributed at 500 ㎕ each in a 24-well plate, and cultured for 18 hours. Then, washed twice with DMEM medium without bovine serum. Beta-pinene was added at different concentrations (1 ppm, 10 ppm). As a negative control, the same amount of ethanol was treated, and as a positive control, 100 ppm of glucosamine hydrochloride (Sigma-aldrich), which is known to promote hyaluronic acid production, was treated. After culturing for 24 hours, the cell culture medium was recovered and the hyaluronic acid concentration was measured using a Hyaluronan ELISA kit (R&D Systems), and the results are shown in Table 2 below.

시료sample 히알루론산 상대농도(%)Hyaluronic acid relative concentration (%) 베타피넨 (1 ppm)Beta-pinene (1 ppm) 118118 베타피넨 (10 ppm)Beta-pinene (10 ppm) 133133 글루코사민 (100ppm)Glucosamine (100ppm) 136136 대조군 (무첨가)Control group (no additives) 100100

(반복수=4) (number of repetitions=4)

상기 표 2에 나타난 히알루론산의 상대농도는 음성 대조군의 히알루론산 농도를 기준(100%)으로 베타피넨을 처리한 실험군의 히알루론산 농도를 수치화하였다.The relative concentration of hyaluronic acid shown in Table 2 was quantified based on the hyaluronic acid concentration of the negative control group (100%) in the experimental group treated with beta-pinene.

상기 표 2에 나타난 결과를 볼 때, 베타피넨은 농도 의존적으로 인체 유래 각질 형성 세포에서 히알루론산 생성을 증가시키는 것을 확인하였다. 특히, 베타피넨은 양성 대조군보다 10배 더 적은 양으로도 유사한 히알루론산 상대 농도를 나타내어 히알루론산 촉진 효과가 현저하게 우수한 것을 알 수 있다.Looking at the results shown in Table 2 above, it was confirmed that beta-pinene increases hyaluronic acid production in human-derived keratinocytes in a concentration-dependent manner. In particular, beta-pinene showed a similar relative concentration of hyaluronic acid even in an amount 10 times smaller than that of the positive control, showing that the hyaluronic acid promoting effect was significantly excellent.

따라서, 베타피넨은 피부 보습을 위한 화장료, 약학 및 피부외용제의 효과적인 유효성분으로 사용될 수 있음을 확인하였으며, 피부 보습 효과를 통해 피부 주름 개선 및 탄력 증진 효과에도 보조적으로 도움을 줄 수 있음을 알 수 있다.Therefore, it was confirmed that beta-pinene can be used as an effective active ingredient in cosmetics, pharmaceuticals, and external skin preparations for skin moisturization, and that it can also help improve skin wrinkles and improve elasticity through the skin moisturizing effect. there is.

실시예Example 3: 미백효과-멜라닌 총량 감소 효과 3: Whitening effect - effect of reducing total melanin amount

베타피넨을 쥐의 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell)의 배양액에 첨가하여 세포 수준에서의 멜라닌 총량을 측정함으로써 미백 효과를 확인하였다(Lotan R., Lotan D. Cancer Res. 40:3345-3350, 1980). 실험 전 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 독성을 평가하여, 독성이 없는 농도를 선정한 후 미백평가를 수행하였다. Beta-pinene was added to the culture medium of B-16 mouse melanoma cells and the whitening effect was confirmed by measuring the total amount of melanin at the cellular level (Lotan R., Lotan D. Cancer Res. 40:3345- 3350, 1980). Before the experiment, toxicity was evaluated for rat melanoma cells, a non-toxic concentration was selected, and whitening evaluation was performed.

배양액에 베타피넨의 최종 농도가 1 ppm, 10 ppm, 이 되도록 첨가하였으며, 대조군인 알부틴은 100 ppm이 되도록 배지에 첨가한 후, B-16 멜라노마 세포에 각각 처리하여 3일간 배양하였다. Beta-pinene was added to the culture medium to a final concentration of 1 ppm and 10 ppm, and arbutin as a control was added to the medium to a final concentration of 100 ppm, and then treated with B-16 melanoma cells and cultured for 3 days.

이후, 배양된 세포들을 트립신(trypsin) 처리하여 배양용기로부터 떼어내고 원심분리한 후 멜라닌을 추출하였다. 떼어낸 세포는 수산화나트륨 용액(1N 농도) 1 ml를 가하여 10분간 끓여 멜라닌을 녹이고, 분광 광도계를 이용하여 400 nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 멜라닌의 양을 측정하였다. Afterwards, the cultured cells were treated with trypsin, removed from the culture vessel, centrifuged, and melanin was extracted. To the removed cells, 1 ml of sodium hydroxide solution (1N concentration) was added and boiled for 10 minutes to dissolve the melanin, and the amount of melanin produced was measured by measuring the absorbance at 400 nm using a spectrophotometer.

상기 멜라닌 양은 단위 세포수당(1×106 cell)의 흡광도로 나타내는 방법으로 측정하였으며, 대조군에 대한 상대적인 멜라닌 총량을 저해율(%)로 계산하고 결과를 하기 표 3에 정리하였다.The amount of melanin was measured by expressing the absorbance per unit cell (1×10 6 cell). The total amount of melanin relative to the control group was calculated as the inhibition rate (%), and the results are summarized in Table 3 below.

시료sample 멜라닌 생성량 (abs)Melanin production amount (abs) 저해율(%)Inhibition rate (%) 대조군 (DMSO, 10ppm)Control (DMSO, 10ppm) 0.310.31 -- 양성대조군 (알부틴, 100ppm)Positive control group (arbutin, 100ppm) 0.2000.200 35.635.6 베타피넨 (10ppm)Beta-pinene (10ppm) 0.1720.172 44.544.5 베타피넨 (1ppm)Beta-pinene (1ppm) 0.2500.250 19.119.1

(반복수=4)(number of repetitions=4)

상기 표 3의 결과에서 볼 수 있듯이, 베타피넨은 미백 물질로 알려진 알부틴(arbutin)과 비교할 때, 배양된 쥐의 멜라노마 세포에 대하여 훨씬 적은 농도를 적용하여도 멜라닌 총량이 더 낮게 나타나, 멜라닌 생성 저해 효과가 현저하게 우수한 것을 확인하였다.As can be seen from the results in Table 3, compared to arbutin, a known whitening substance, beta-pinene produces a lower total amount of melanin even when applied at a much lower concentration to cultured rat melanoma cells, thereby promoting melanin production. It was confirmed that the inhibitory effect was remarkably excellent.

따라서, 베타피넨은 피부 미백을 위한 화장료, 약학 및 피부외용제의 효과적인 유효성분으로 사용될 수 있음을 확인하였다.Therefore, it was confirmed that beta-pinene can be used as an effective active ingredient in cosmetics, pharmaceuticals, and external skin preparations for skin whitening.

Claims (7)

베타피넨을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.A composition for skin whitening containing beta-pinene as an active ingredient. 제 1 항에 있어서,
조성물은 피부 미백용 의약, 화장료 또는 피부외용제 제조를 위한 것인, 피부 미백용 조성물.
According to claim 1,
The composition is a skin whitening composition for manufacturing skin whitening medicines, cosmetics, or external skin preparations.
제 1 항에 있어서,
베타피넨은 조성물 전체 중량 대비 0.00001 내지 10 중량%로 포함되는 것인 피부 미백용 조성물.
According to claim 1,
A composition for skin whitening wherein beta-pinene is contained in an amount of 0.00001 to 10% by weight based on the total weight of the composition.
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