KR102616008B1 - 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명의 양성대조군 핵산은 기존의 PCR 방법을 바탕으로 하여 유전자변형생물체의 스크리닝에 소요되는 시간, 비용 및 노동력을 절감할 수 있으므로, 유전자변형생물체의 국내 유입을 방지하기 위한 국경검사나 유전자변형생물체의 불법 재배 및 유통 관리와 소비자 안전성 확보를 위해 유용하게 활용될 수 있을 것이다.
Description
본 발명은 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물 및 이의 용도에 관한 것이다.
유전자변형생물체(Living Modified Organism, LMO)는 인류가 직면한 식량부족, 환경변화, 대체에너지 개발 등 각종 문제점의 해결방안으로, 고부가가치 창출이 가능하여 다양한 작물 개발에 대한 연구가 진행되어 왔다. 유전자변형 토마토가 처음으로 개발되어 상업화된 이후 다양한 작물을 대상으로 LMO가 개발되어 왔으며 현재는 의약품, 기능성 등의 가치를 지니는 LMO 개발로 확대되고 있다. 2008년 '유전자변형생물체의 국가간 이동에 관한 법률(LMO법)'이 시행됨에 따라 LMO 수입의 용도별 수입 승인이 소관부처별로 의무화되고, 국가차원에서 사후관리 등의 조치를 취하고 있다. 또한, LMO 원료 및 생산물의 안전성 확보와 소비자의 알권리 제공의 일환으로 환경위해성 및 인체안전성 평가를 의무화하고 있다.
최근들어 미승인 LMO의 불법생산, 불법유통 또는 환경방출(environmental release)이 국가적인 이슈가 되고 있는 상황에서, LMO 작물의 재배 및 유통 관리와 소비자의 안전성 확보를 위하여 신속하고 효율적인 LMO 검출 기법에 대한 개발이 요구되고 있다. 최근 개발되고 있는 대부분의 LMO는 후대 교배종으로, 이에 대한 신속한 검출방법의 필요성이 증가되고 있다. LMO의 모니터링을 위해서는 이벤트(계통) 검사 이전에 LMO 여부를 확인해야 한다. 현재 LMO를 검출할 수 있는 방법으로는 단백질의 항원항체반응을 이용한 스트립(strip) 및 ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) 분석법과 보다 정확하고 안정적으로 검출할 수 있는 PCR(Polymerase Chain Reaction) 분석법이 있다. LMO 분석을 위해 다양한 LMO 이벤트들에 널리 활용되는 프로모터, 터미네이터, 제초제 저항성 유전자 등의 존재 여부를 확인할 수 있다. 특히 PCR 분석법을 이용한 LMO 스크리닝 검사에서는 양성 시료가 필요한데, LMO 양성 시료는 구매가 어렵거나 고가이며, 반복 사용으로 인한 실험실 오염 및 분석결과 해석에 관한 오류 문제가 우려되므로, 인위적으로 설계된 합성 핵산 형태의 양성대조군 확보가 요구된다.
한편, 한국등록특허 제0376796호에 35S 프로모터의 특정부위와 하이브리드화할 수 있는 프라이머 세트를 이용한 '유전자변형생물체 검출 키트 및 이에 사용되는 PCR용 프라이머'가 개시되어 있으나, 본 발명의 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 특이적인 프라이머 세트 23개를 모두 포함하고 있는 '유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물 및 이의 용도'에 대해서는 기재된 바가 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 유전자변형생물체(LMO)에서 도입 유전자의 발현 조절을 위한 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 프라이머 세트 23개를 이용하여 유전자변형생물체의 효율적인 스크리닝을 위한 양성대조군 핵산을 제작하였다. 상기 양성대조군 핵산을 주형으로 하여 PCR을 수행한 결과, 양성대조군 핵산 제작에 활용된 23개의 프라이머 세트가 다중 및 단일반응 모두에서 비특이적 반응없이 예상되는 크기의 PCR 산물을 증폭하는 것을 확인하였고, 이를 통해 본 발명의 양성대조군 핵산은 농림축산업용 유전자변형생물체의 국경검사를 위한 PCR 검사법에서 양성대조군으로 효과적으로 기능할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 10종의 프로모터, 9종의 터미네이터 및 4종의 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 23개의 프라이머 세트를 포함하는, 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물(construct)을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 포함하는, 유전자변형생물체 검정용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 포함하는, 유전자변형생물체 검정용 키트를 제공한다.
또한, 본 발명은 유전자변형생물체의 핵산을 주형으로 하고, 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 양성대조군으로 이용하여 상기 유전자변형생물체의 특이적 염기서열을 증폭하는 PCR 프라이머 세트를 이용하여 표적 핵산을 증폭하는 단계를 포함하는, 유전자변형생물체 여부를 검정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 양성대조군 핵산은 기존의 PCR 방법을 바탕으로 하여 유전자변형생물체의 스크리닝에 소요되는 시간, 비용 및 노동력을 절감할 수 있으므로, 유전자변형생물체의 국내 유입을 방지하기 위한 국경검사나 유전자변형생물체의 불법 재배 및 유통 관리와 소비자 안전성 확보를 위해 유용하게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1 및 2는 본 발명의 양성대조군 핵산을 주형으로 이용하여 PCR을 수행한 결과이다. No template: 프라이머가 반응할 수 있는 양성대조군 무처리군.
각 도면에서 대조군으로 사용된 레인 2의 positive control(old version)은 프로모터(Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 또는 act promoter); 터미네이터(Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, Hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, G7 terminator 또는 ORF25 terminator); 또는 제초제 저항성 유전자(mepsps, cp4 epsps, bar 또는 pat);의 시퀀스 정보를 바탕으로 인공적으로 합성된 핵산을 양성대조군으로 처리한 것을 의미한다.
각 도면에서 대조군으로 사용된 레인 2의 positive control(old version)은 프로모터(Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 또는 act promoter); 터미네이터(Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, Hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, G7 terminator 또는 ORF25 terminator); 또는 제초제 저항성 유전자(mepsps, cp4 epsps, bar 또는 pat);의 시퀀스 정보를 바탕으로 인공적으로 합성된 핵산을 양성대조군으로 처리한 것을 의미한다.
본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 10종의 프로모터, 9종의 터미네이터 및 4종의 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 23개의 프라이머 세트를 포함하는, 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물(construct)을 제공한다.
본 발명에서 용어 '유전자변형생물체'는 자연상태의 생리적 증식·재조합 또는 전통적인 교배·선발에서 사용되지 않는 현대생명공학기술을 이용하여 생물종의 유전물질을 인위적으로 변형시킨 LMO(Living modified organisms) 또는 GMO(Genetically modified organism) 식물을 의미한다.
본 발명의 양성대조군 핵산 구조물에 있어서, 상기 프로모터는 Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 및 act promoter이고, 상기 터미네이터는 Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, Hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, G7 terminator 및 ORF25 terminator이며, 상기 제초제 저항성 유전자는 mepsps, cp4 epsps, bar 및 pat이다.
본 발명의 양성대조군 핵산 구조물은 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 서열번호 1의 양성대조군 핵산 구조물은 유전자변형생물체에서 도입 유전자의 발현 조절을 위한 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 프라이머 세트 총 23개의 염기서열(표 1 및 2 참고)에 대한 표적 부위를 포함하여 인공적으로 합성한 것으로, 다중 및 단일반응 모두에서 비특이적 반응없이 각 프라이머 세트의 예측되는 증폭 산물 크기와 동일한 크기의 증폭 산물을 생산할 수 있도록 합성되었다.
구체적으로 상기 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 양성대조군 핵산 구조물은 유전자변형생물체에 도입되는 프로모터(Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 및 act promoter), 터미네이터(Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, Hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, G7 terminator 및 ORF25 terminator) 및 제초제 저항성 유전자(mepsps, cp4 epsps, bar 및 pat)에 특이적인 프라이머 세트 23개에 대한 표적 부위의 염기서열과 인위적인 염기서열을 추가하여 인공적으로 합성한 염기서열로, 서열번호 1의 양성대조군 핵산 구조물은 표 1 및 2에 개시된 총 23개의 프라이머 세트에 대한 양성대조군으로 기능할 수 있다.
본 발명의 양성대조군 핵산 구조물에 있어서, 상기 구조물은 표 1 및 2에 개시된 프라이머 세트 총 23개에 대한 표적 부위의 염기서열과 인위적인 염기서열을 추가하여 합성된 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 핵산 그 자체를 의미하는 것일 수 있고, 상기 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 양성대조군 핵산 서열을 포함하는 벡터(vector) 또는 카세트(cassette)의 형태인 것을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명은 또한, 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 포함하는, 유전자변형생물체 검정용 조성물을 제공한다.
본 발명의 유전자변형생물체 검정용 조성물에 있어서, 상기 양성대조군 핵산 구조물은 유전자변형생물체에서 도입 유전자의 발현 조절을 위한 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 특이적인 프라이머 세트에 대한 표적 부위를 포함하며, 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 유전자변형생물체 검정용 조성물에 있어서, 상기 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자는 상기 전술한 것과 같다.
본 발명은 또한, 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 포함하는, 유전자변형생물체 검정용 키트를 제공한다.
본 발명의 키트에서, 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물은 전술한 것과 같다.
상기 키트는 구체적으로, 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물; 유전자변형생물체 특이적 프라이머 세트; 및 증폭반응을 수행하기 위한 시약;을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 키트에 있어서, 상기 유전자변형생물체 특이적 프라이머 세트는 유전자변형생물체의 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자의 특이적 염기서열을 증폭하는 PCR 프라이머 세트일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 프라이머 세트는 표 1 및 2에 개시된 프라이머 세트일 수 있으나, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 증폭 반응을 수행하기 위한 시약은 DNA 폴리머라제, dNTPs 및 버퍼를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 키트는 또한 최적의 반응 수행 조건을 기재한 사용자 안내서를 추가로 포함할 수 있다. 안내서는 키트 사용법, 예를 들면, 역전사 완충액 및 PCR 완충액 제조 방법, 제시되는 반응 조건 등을 설명하는 인쇄물이다. 안내서는 팜플렛 또는 전단지 형태의 안내 책자, 키트에 부착된 라벨, 및 키트를 포함하는 패키지의 표면상에 설명을 포함한다. 또한, 안내서는 인터넷과 같이 전기 매체를 통해 공개되거나 제공되는 정보를 포함한다.
본 발명은 또한, 유전자변형생물체의 핵산을 주형으로 하고, 상기 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 양성대조군으로 이용하여 상기 유전자변형생물체의 특이적 염기서열을 증폭하는 PCR 프라이머 세트를 이용하여 표적 핵산을 증폭하는 단계를 포함하는, 유전자변형생물체 여부를 검정하는 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 유전자변형생물체 여부를 검정하는 방법에 있어서, 상기 유전자변형생물체의 특이적 염기서열을 증폭하는 PCR 프라이머 세트는 유전자변형생물체의 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자의 특이적 염기서열을 증폭하는 PCR 프라이머 세트일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 유전자변형생물체 여부를 검정하는 방법에 있어서, 상기 시료는 유전자변형생물체와 관련된 식물, 식물 종자, 식물 세포, 후대 식물, 농업 생산물 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
구체적으로 상기 시료는 감자(Solanum tuberosum), 까마중(Solanum nigrum), 담배(Nicotiana tabacum), 렌즈콩(Lens culinaris), 멜론(Cucumis melo), 면화(Gossypium hirsutum), 밀(Triticum aestivum), 벤트그라스(Agrostis stolonifera), 벼(Oryza sativa), 사과(Malus domestica), 사탕무(Beta vulgaris), 아마(Linum usitatissimum), 알파파(Medicago sativa), 옥수수(Zea mays), 유채(Brassica napus, Brassica rapa), 자두(Prunus domestica), 장미(Rosa×hybrida), 치커리(Cichorium intybus), 카네이션(Dianthus caryophyllus), 콩(Glycine max), 토마토(Lycopersicon esculentum), 파파야(Carica papaya), 호박(Cucurbita pepo), 가지(Solanum melongena), 강낭콩(Phaseolus vulgaris), 사탕수수(Saccharum sp.), 유칼립투스(Eucalyptus sp.), 페튜니아(Petunia hybrida), 포플라(Populus sp.), 피망/파프리카(Capsicum annuum) 또는 홍화(Carthamus tinctorius) 등의 유전자변형생물체 국경검사 대상 식물, 또는 전 세계적으로 개발·승인되어 상업적으로 유통되거나 유통 가능성이 있는 품목으로 종자용, 사료용 또는 농업가공용으로 수입되어 원형상태로 환경에 방출될 우려가 있는 농림축산업용 유전자변형생물체일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에 따른 방법에 있어서, 상기 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물은 PCR 방법을 이용하여 유전자변형생물체를 검정하는 과정에서, 프로모터 10개(Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 및 act promoter), 터네미네터 9개(Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, Hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, G7 terminator 및 ORF25 terminator) 및 제초제 저항성 유전자 4개(mepsps, cp4 epsps, bar 및 pat)를 특이적으로 검출할 수 있는 프라이머 세트에 대한 양성대조군으로 이용 가능하다.
본 발명의 일 구현 예에 있어서, 상기 유전자변형생물체를 검정하는 방법은 유전자변형생물체의 핵산을 주형으로 하고, 각 유전자변형생물체 여부를 확인할 수 있는 특이적 염기서열을 증폭하는 단계를 통해 이루어질 수 있다. 상기 염기서열의 증폭은 당업계에 공지된 방법을 통해 수행될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
재료 및 방법
1. 양성대조군 핵산을 제작하기 위한 염기서열 설계 및 검증
본 발명자는 농림축산업용 유전자변형생물체의 국경검사를 위한 스크리닝 PCR 검사 시 양성대조군으로 사용될 수 있는 양성대조군 서열(이하, 양성대조군 핵산)을 제작하였다. 상기 양성대조구 핵산은, 본 발명의 농림축산업용 유전자변형생물체 여부를 검정하는 프라이머 세트 23개(표 1 및 2)가 각각 다중 및 단일반응 모두에서 비특이적 반응 없이 각 프라이머 세트의 예측되는 증폭 산물 크기와 동일한 크기의 증폭산물을 생산할 수 있도록 프라이머 염기서열과 인위적인 염기서열을 추가하여 설계한 염기서열(서열번호 1; 표 3)이다. 본 발명에서는 양성대조구 염기서열을 설계한 후, 설계된 핵산 서열 그 자체를 사용하였다.
구체적으로, 양성대조군 핵산(서열번호 1)은 농림축산업용 유전자변형생물체 제작에 활용되는 프로모터(Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 및 act promoter), 터미네이터(Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, Hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, G7 terminator 및 ORF25 terminator) 및 제초제 저항성 유전자(mepsps, cp4 epsps, bar 및 pat)에 특이적인 23개의 프라이머 세트 염기서열과 인위적인 염기서열을 추가하여 합성한 염기서열이다.
2. PCR(Polymerase Chain Reaction)
양성대조군 핵산의 농도(copy number)를 105 copy number로 하여, PCR 반응 주형을 만들었다. PCR에 사용한 프라이머 세트 23개는 유전자변형생물체(LMO)에서 도입 유전자의 발현 조절을 위한 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 프라이머 세트로 구성되었다.
PCR 과정은 전변성 95℃ 15분; 변성(denaturation) 95℃ 30초, 결합(annealing) 각 프라이머별 특정 온도(표 1 및 2 참고)에서 30초, 신장(extension) 72℃ 30초의 과정을 총 35회 반복; 최종 신장 72℃ 5분의 조건으로 수행하였다.
실시예 1. 유전자변형생물체 검정용 양성대조군 핵산의 검증
본 발명의 양성대조군 핵산은 농림축산업용 유전자변형 식물체 제작에 널리 활용되는 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 특이적인 23개의 프라이머 세트에 대한 표적 부위의 염기서열과 인위적인 염기서열을 추가하여 합성한 염기서열이다.
대조군으로(이하, old version의 양성대조군)는 상기 표 1 및 2에 개시된 23개의 프로모터, 터미네이터 또는 제초제 저항성 유전자의 시퀀스 정보를 바탕으로 인공적으로 합성된 핵산을 사용하였다.
본 발명의 양성대조군 핵산 또는 old version의 양성대조군을 주형으로 하여 PCR을 수행한 결과, 양성대조군 핵산 제작에 활용된 프라이머 세트 23개가 다중 및 단일반응 모두에서 비특이적 반응 없이 예상되는 크기의 PCR 산물을 증폭하는 것을 확인하였다(도 1 및 2).
다만, 기존의 old version 양성대조군(대조군)을 이용하여 유전자변형생물체를 스크리닝하기 위해서는 23개의 프로모터, 터미네이터 또는 제초제 저항성 유전자의 핵산을 인공적으로 각각 합성하여 양성대조군을 제작하는 번거로움이 있고, 기존 old version 양성대조군은 검사 시료 유래 증폭산물과 동일한 염기서열로 되어 있어 old version 양성대조군 핵산의 실험실 오염 시 분석 결과의 해석에 오류가 발생할 수 있다.
반면, 본 발명의 양성대조군 핵산은 23개의 프로모터, 터미네이터 및 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 프라이머 세트 23개에 대한 표적 부위를 모두 포함하고 있는 하나의 양성대조군으로 제작된 것으로, 23개의 염기서열 이외에 LMO와 관련이 없는 인위적인 서열로 구성되어 있어 오염 확인이 용이할 뿐만 아니라 간소화된 방법으로 유전자변형식물체의 스크리닝이 가능한 장점이 있고, 다양한 프로모터, 터미네이터 및 제조제 저항성 유전자에 특이적인 프라이머 세트가 모두 포함되어 있음에도 불구하고 비특이적 반응 없이 23개의 프라이머 세트들이 각각 모두 예상되는 크기의 PCR 산물을 증폭하는 것이 가능하므로, 본 발명의 양성대조군 핵산은 기존의 양성대조군에 비해 유전자변형생물체를 정확하고 보다 효율적으로 스크리닝할 수 있는 양성대조군임을 알 수 있었다.
따라서, 본 발명의 양성대조군 핵산 구조물은 표 1 및 표 2에 개시된 농림축산업용 유전자변형생물체의 국경검사를 위한 PCR 검사용 23개 프라이머 세트에 대한 양성대조군으로 사용할 수 있으므로, 본 발명의 양성대조군 핵산 구조물은 PCR 검사법을 이용하여 다양한 유전자변형생물체를 검정하는데 유용하게 이용될 수 있을 것으로 예상되었다.
<110> REPUBLIC OF KOREA(Animal and Plant Quarantine Agency)
<120> Positive control nucleic acid construct for screening living
modified organism and uses thereof
<130> PN21247
<160> 1
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Positive control nucleic acid construct
<400> 1
aaagcagcat tccagattgg gttcattccg ttccgctcca ccgttggact tggcaatgac 60
gatgtgaccc aacaattccg atgggcgccg acatcgaagt aacttccaac aagtgtgcga 120
gttcttgcga gtcttcggag tgagggcctc atatcccaat tacggttata caattgccaa 180
aggttatcca cggctaatcg ccaacagatt cggactactg ttccagcaca tgcatcaacg 240
tgttgttcgg agcgcacaaa atgaacggtc tggaagaact ccaaccggag tattgatcga 300
cacggtcgaa attccagtcc ggtgtaagaa cggaaacgac aacgttcgtc aagttcaagt 360
gaccttaggc gacttttgca attcggtttg gtctagtgct ttggtcttag ggtcatgcga 420
tctttccaat tcccgttgct gagtggctcc ttcaacgtaa ccgcatctac ggcaatgtac 480
cagtttccgg aagggaaccg gtatggccgg cgccgaggag atccaatgaa atcgaactaa 540
tgtaaagctt ggactataat acctgactta attcgagacc cttatcggct tgaaccaagt 600
tatccgtgtt ctaagctagc ctggttcagt ggttgataac ctgctgaaat cgtggcctct 660
aatgaccgaa aagattaggc cagctacagc aaagaatcct gttgccggtc ttgaattcga 720
attccaactt attaagccgt caatcgtaag caattggagt gggcatcaaa gttgtgtgaa 780
gacgagttcg gatgtagtag aattaagcgg cgacataggc tcgaagtatg cacaattcta 840
aatgaatgtc acgtgtcttt attactagga taaattatcg cgcgcggaac ccgattattc 900
cttgacaatg atgtgtactt atcacgtgca tatgaggcaa accaattcca taactgaaat 960
cagggtgaga caattgctta agtctatgga ggcgttaaca ggactaacgt tgcctggatt 1020
gaaacacacc gagcggcgaa ctaaccaaga tgcctctgcc gacagtcgaa aaaacagcag 1080
gtgggtcgga ccactacatc gagacaagcg ttaatatgcg gcacatatgc aaccttaacg 1140
tgcaccgaaa caaaccggta caagccgggt aagggatgac gcacaatctt aacgagttaa 1200
atgcttaggg gcatcaaccc taccaccacc accaaatggg cgaagacgta agcactgacg 1260
aacgacaaat cgttgggcgg gtcttaagcg gttataacgc tttaacgtcc ctcagaaatt 1320
gaggcctgct ctacacccac ctgctgaaaa 1350
Claims (7)
10종의 프로모터, 9종의 터미네이터 및 4종의 제초제 저항성 유전자에 각각 특이적인 23개의 프라이머 세트를 포함하는, 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물(construct).
삭제
제1항에 있어서, 상기 프로모터는 Nos promoter, 35S promoter, FMV promoter, Rice actin promoter, Maize Ubiquitin promoter, Ta29 promoter, SsuAra promoter, PC1SV promoter, CsVMV promoter 및 act promoter이고, 상기 터미네이터는 Nos terminator, PinII terminator, E9 terminator, hsp17 terminator, ocs terminator, H4a748 terminator, tml terminator, g7 terminator 및 ORF25 terminator이며, 상기 제초제 저항성 유전자는 mepsps, cp4 epsps, bar 및 pat인 것을 특징으로 하는, 유전자변형생물체의 스크리닝을 위한 양성대조군 핵산 구조물.
제1항의 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 포함하는, 유전자변형생물체 검정용 조성물.
삭제
제1항의 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 포함하는, 유전자변형생물체 검정용 키트.
유전자변형생물체의 핵산을 주형으로 하고, 제1항의 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물을 양성대조군으로 이용하여 상기 유전자변형생물체의 특이적 염기서열을 증폭하는 PCR 프라이머 세트를 이용하여 표적 핵산을 증폭하는 단계를 포함하는, 유전자변형생물체 여부를 검정하는 방법.
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| KR1020210116240A KR102616008B1 (ko) | 2021-09-01 | 2021-09-01 | 유전자변형생물체 스크리닝용 양성대조군 핵산 구조물 및 이의 용도 |
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Citations (1)
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| WO2016099153A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Dongbu Farm Hannong Co., Ltd. | Methods for conferring or enhancing herbicide resistance on plants and/or alga with protoporphyrinogen oxidase variants |
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2021
- 2021-09-01 KR KR1020210116240A patent/KR102616008B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016099153A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Dongbu Farm Hannong Co., Ltd. | Methods for conferring or enhancing herbicide resistance on plants and/or alga with protoporphyrinogen oxidase variants |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| '미승인 LMO 진단 기술 개발', 경희대학교 산학협력단 , 농림축산검역본부 연구보소서, 2014. |
| 우희종 외 다수, 식물생명공학회지, 36(2), 페이지 106-114, 2009. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20230033359A (ko) | 2023-03-08 |
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| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right |