KR102545843B1 - Screening method of functional material improving allergy, atopy and itch - Google Patents
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Abstract
본 발명에 따른 기능성 소재 스크리닝 방법은, 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계, 상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계, 상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계, 및 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계를 포함한다.The functional material screening method according to the present invention includes the steps of treating a capture protein on a substrate coated with a linker material, processing a functional material candidate on the capture protein-treated substrate, and the substrate treated with the functional material candidate. processing biotin-coupled IgE, and treating the biotin-coupled IgE-treated substrate with fluorescently labeled streptavidin.
Description
본 발명은 알러지, 아토피 및 가려움 개선 활성을 갖는 기능성 소재의 스크리닝 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a screening method for a functional material having allergy, atopy and itching activity.
최근 미세먼지, 황사 및 급격한 계절변화와 생활 패턴의 급격한 변화로 빈번한 피부 트러블로 불편함을 호소하는 민감성 피부가 급증하고 있다. 전체 인구의 약 30~40%가 불편함을 느끼며, 국내 여성의 55%, 남성의 38.9%로 보고된 바 있다.Recently, sensitive skin complaining of discomfort due to frequent skin troubles due to fine dust, yellow dust, and rapid changes in seasons and lifestyles is rapidly increasing. About 30-40% of the total population feels uncomfortable, and 55% of domestic women and 38.9% of men have reported it.
민감성 피부는 자극감을 느끼게 되는데 이는 피부 신경의 분포나 개수 감도의 차이 또는 장벽 기증에 따라 나타나며, 피부 자극감은 신경섬유는 Aδ와 C 섬유(fiber)가 관련되어 있고, 이는 따가움, 화끈거림 등 피부에서 약한 불쾌감을 느끼는데 관여한다. 또한, 장벽 기능의 저하도 많은 민감성 피부에서 관찰되는 특징 중 하나로 자극감 외에 홍조, 알레르기 등이 나타난다.Sensitive skin feels a sense of irritation, which is caused by differences in the distribution or number of skin nerves, sensitivity, or barrier donation. Contributes to feeling mild discomfort. In addition, a decrease in barrier function is also one of the characteristics observed in many sensitive skin, and redness, allergy, etc. appear in addition to irritation.
게다가 우리나라는 인구 대비 성형인구 세계 최고 비율로 성형인구가 증가(77명당 1명꼴)하였고 성형 및 미용시술 이후 민감해진 피부 관리를 위한 케어 제품 개발이 필요한 실정이다.In addition, in Korea, the plastic surgery population has increased with the world's highest ratio of plastic surgery population to population (1 out of 77 people), and it is necessary to develop care products for skin care that has become sensitive after plastic surgery and cosmetic procedures.
한편, 민감성 피부염의 대표적인 질환인 아토피 피부염 치료제는 스테로이드 제제, 면역억제제, 항생제 등이 사용되나 장기간 사용 시 면역기능 이상 등 부작용이 발생하여 단기간만 사용할 수 있다는 단점이 있다.On the other hand, the treatment of atopic dermatitis, which is a representative disease of sensitive dermatitis, uses steroid preparations, immunosuppressants, antibiotics, etc., but has the disadvantage that it can only be used for a short period of time due to side effects such as abnormal immune function when used for a long time.
따라서, 독성과 부작용이 적은 알러지, 아토피 및 피부 가려움을 개선할 수 있는 효과적이면서 안전한 소재의 개발이 필요한 실정이다.Therefore, there is a need to develop an effective and safe material capable of improving allergy, atopy, and skin itching with less toxicity and side effects.
본 발명의 목적은, 알러지, 아토피 및 피부 가려움을 개선할 수 있는 소재를 스크리닝 할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a method for screening a material capable of improving allergy, atopy and skin itchiness.
본 발명의 일 실시예에 따른 기능성 소재 스크리닝 방법은, 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계 상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계 상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계 및 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계를 포함할 수 있다.Functional material screening method according to an embodiment of the present invention, comprising the steps of processing a capture protein on a substrate coated with a linker material, processing a functional material candidate on the substrate treated with the capture protein, processing the functional material candidate The biotin-bound IgE substrate may be treated with the biotin-bound IgE, and the biotin-bound IgE-treated substrate may be treated with fluorescently labeled streptavidin.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 캡처 단백질을 처리하는 단계 이후에, 비특이적 결합을 막기 위해 BSA를 처리하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, after the step of processing the capture protein, the step of treating BSA to prevent non-specific binding may be further included.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이전에, 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, before the step of treating the fluorescently labeled streptavidin, the step of washing and drying the biotin-coupled IgE-treated substrate may be further included.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계 이전에, 상기 캡처 단백질이 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, before processing the functional material candidate, the step of washing and drying the substrate treated with the capture protein may be further included.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이후에, 상기 IgE와 상기 캡처 단백질 사이의 결합 정도를 분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the step of analyzing the degree of binding between the IgE and the capture protein may be further included after the step of treating the fluorescently labeled streptavidin.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 캡처 단백질은 FcεR1일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the capture protein may be FcεR1.
본 발명의 실시예들에 따른 스크리닝 방법은 타겟 단백질인 IgE와 수용체 사이의 상호작용을 직접적으로 분석함으로써 실제 결합 여부를 간편하게 확인할 수 있다는 장점이 있고, ELISA 플레이트 등 다른 방법에 비해 상대적으로 저비용으로 고효율을 나타낼 수 있는 효과가 있다.The screening method according to the embodiments of the present invention has the advantage of being able to easily confirm the actual binding by directly analyzing the interaction between the target protein, IgE, and the receptor, and is relatively low-cost and highly efficient compared to other methods such as ELISA plates. There is an effect that can represent.
도 1은 본 발명의 스크리닝 방법에 사용되는 단백질 결합의 모식도이다.
도 2는 본 발명의 실험예 1에 따른 결과를 나타내는 표 및 그래프이다.
도 3은 본 발명의 실험예 2에 따른 결과를 나타내는 표 및 그래프이다.
도 4는 본 발명의 실험예 3에 따른 결과를 나타내는 그래프이다.1 is a schematic diagram of protein binding used in the screening method of the present invention.
2 is a table and a graph showing the results according to Experimental Example 1 of the present invention.
3 is a table and a graph showing the results according to Experimental Example 2 of the present invention.
4 is a graph showing the results according to Experimental Example 3 of the present invention.
다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미이다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미인 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. Terms such as those defined in commonly used dictionaries should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related art, and unless explicitly defined in this application, they are not interpreted in an ideal or excessively formal meaning. .
본 발명은 링커 물질이 코팅된 기판에 캡처 단백질을 처리하는 단계, 상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계, 상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계, 및 상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계를 포함하는 기능성 소재 스크리닝 방법을 제공한다.The present invention includes the steps of processing a capture protein on a substrate coated with a linker material, processing a functional material candidate on the substrate treated with the capture protein, and biotin-bound IgE on the substrate treated with the functional material candidate. It provides a functional material screening method comprising the step of treating, and the step of treating the biotin-coupled IgE-treated substrate with fluorescently labeled streptavidin.
사람의 생체 내에서 알러지 반응을 일으키는 주된 면역 항체인 IgE와 비만세포(Dendritic cell)의 표면에 존재하는 IgE 수용체(FcεR1)가 결합하면서 세포 내 신호전달 과정을 통해 히스타민이 방출되고 이로 인해 여러 자극들이 나타나게 된다. 즉, IgE와 FcεR1 사이의 상호작용(interaction)을 방해할 수 있는 소재를 발굴할 경우, 아토피 피부염의 예방, 개선 또는 치료용 유효성분으로 사용이 가능하다.When IgE, the main immune antibody that causes allergic reactions in the human body, and IgE receptor (FcεR1) present on the surface of mast cells (Dendritic cells) combine, histamine is released through intracellular signal transduction, which causes various stimuli. will appear That is, when a material capable of interfering with the interaction between IgE and FcεR1 is discovered, it can be used as an active ingredient for preventing, improving or treating atopic dermatitis.
특히, 특정 알러젠(allergen)이 들어와서 IgE에 결합되더라도 FcεR1에 결합하는 것을 방해할 수 있다면 아토피 피부염 뿐만 아니라 알러지 반응이 나타나지 않을 것이다.In particular, even if a specific allergen enters and binds to IgE, if it can interfere with binding to FcεR1, allergic reactions as well as atopic dermatitis will not appear.
기존에 개발된 피부 민감성 개선 효능평가를 위한 방법인 염증억제 분석방법은 nitric oxide(NO) 생성 억제, 분비된 염증관련인자(INF-r, IL-1b)를 ELISA법으로 측정하는 기술을 사용하였으나, 이 같은 ELISA 방법은 kit를 활용하여 60~90만 원 이상으로 최대 20개 샘플을 활용할 수 있지만, 이러한 방법은 한 번에 여러 샘플을 분석하기에 많은 비용이 소요되는 문제점이 있다.The inflammation inhibition analysis method, which is a method for evaluating the efficacy of improving skin sensitivity developed previously, used a technique of inhibiting nitric oxide (NO) production and measuring secreted inflammation-related factors (INF-r, IL-1b) by ELISA method. , This ELISA method can utilize up to 20 samples at more than 600,000 to 900,000 won using a kit, but this method has a problem in that it is expensive to analyze several samples at once.
본 발명의 기능성 소재 스크리닝 방법은 타겟 단백질인 IgE와 이의 수용체 사이의 상호작용을 직접적으로 분석함으로써 실제 결합 여부를 신속하고 편리하게 분석할 수 있는 특징이 있으며, peptide가 아닌 실제 in vivo에서도 작용이 가능한 인간 whole protein을 사용함으로써 in vitro 활성이 실제 in vivo에서도 똑같이 적용될 수 있다는 장점이 있다.The functional material screening method of the present invention is characterized in that it can quickly and conveniently analyze the actual binding by directly analyzing the interaction between IgE, the target protein, and its receptor, and can act in vivo rather than a peptide. The advantage of using human whole protein is that the in vitro activity can be equally applied in vivo.
뿐만 아니라 소형화 및 고집적화가 가능하기 때문에 ELISA plate 등 다른 방법에 비해 상대적으로 저비용으로 고효율을 나타낼 수 있다는 장점이 있다.In addition, since miniaturization and high integration are possible, it has the advantage of being able to show high efficiency at a relatively low cost compared to other methods such as ELISA plate.
즉, 본 발명의 기능성 소재 스크리닝 방법을 이용할 경우, 약 400개에 가까운 시료의 분석이 한 번에 가능하며, 매우 소량의 시료로 정확한 분석결과를 도출할 수 있고, 3시간~12시간 이내의 짧은 시간 안에 분석을 완료할 수 있다는 장점이 있다.That is, when using the functional material screening method of the present invention, it is possible to analyze nearly 400 samples at once, and accurate analysis results can be derived with a very small amount of samples, and a short time of 3 to 12 hours is possible. It has the advantage of being able to complete the analysis in a timely manner.
도 1은 본 발명의 스크리닝 방법에 사용되는 단백질 결합의 모식도이다. 도 1을 참조하면, 본 발명에 따른 기능성 소재 스크리닝 방법은, 기판(110)에 캡처 단백질(130)을 고정할 수 있는 링커(120) 물질이 코팅되어 있고, 링커(120) 물질이 코팅된 기판(110)에 캡처 단백질(130)을 처리하는 단계를 거쳐 링커(120)와 캡처 단백질(130)이 특이적 결합을 한다. 이후, 바이오틴이 결합된 IgE(140)를 처리하여 캡처 단백질(130)과 바이오틴이 결합된 IgE(140)가 상호 결합하고, 형광 표지된 스트렙트아비딘(150)을 처리하여 바이오틴 부위에 형광 표지된 스트렙트아비딘(150)이 결합하게 된다. 도 1과 같은 구조로 모든 결합이 이루어질 경우, 형광을 나타내게 된다.1 is a schematic diagram of protein binding used in the screening method of the present invention. Referring to FIG. 1, in the functional material screening method according to the present invention, a
캡처 단백질(130)을 처리하는 단계 이후, 기능성 소재 후보물질을 처리하여 기능성 소재 후보물질이 바이오틴이 결합된 IgE(140)와 캡처 단백질(130)의 결합을 저해하는 경우, 형광의 정도가 감소하게 된다. 따라서 마이크로어레이 스캐너로 관찰하여 결과를 분석할 수 있다. 스캔 결과는 나타나는 형광값을 0 부터 216 값인 65535 사이의 수치로 표현하였다.After processing the
캡처 단백질(130)은 IgE에 특이적으로 결합하면서 비만세포 표면에서 히스타민 분비에 영향을 줄 수 있는 FcεR1일 수 있다.The
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are intended to explain the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
실험예 1Experimental Example 1
형광 특성이 도 1의 구조에서 특이적으로 검출되는 것을 확인하기 위하여, FcεR1 100 ㎍/ml, IgE(Biotin) 1:100 dil., Streptavidin(Cy5) 1: 100을 투입(+), 미투입(-)으로 구분하여 6가지 결과를 도 2에 개시하였다.In order to confirm that the fluorescence characteristics are specifically detected in the structure of Figure 1,
도 2를 참조하면, FcεR1 100 ㎍/ml, IgE(Biotin) 1:100 dil., Streptavidin(Cy5) 1: 100이 순차적으로 모두 처리된 왼쪽 첫 번째 결과에서 높은 형광이 확인되었고, 나머지 결과들은 일부 비특이적 결합에 의한 형광을 나타내기는 하지만 임계적으로 매우 낮은 형광을 나타내는 것을 확인할 수 있다.Referring to Figure 2,
따라서 도 1의 구성이 이루어졌을 때, 형광이 검출되는 것을 확인할 수 있다.Therefore, it can be confirmed that fluorescence is detected when the configuration of FIG. 1 is made.
실험예 2Experimental Example 2
FcεR1이 제대로 고정되었는지를 확인하기 위하여, FcεR1 100 ㎍/ml, Anti-FcεR1 Ab 1:100, Anti-Mouse IgG Ab 1:100을 투입(+), 미투입(-)으로 구분하여 4가지 결과를 도 3에 개시하였다.In order to confirm that FcεR1 was properly immobilized, four results were obtained by dividing
도 3을 참조하면, FcεR1을 처리한 뒤 FcεR1 특이적 항체인 Anti-FcεR1 Ab을 처리하고 이후 Anti-FcεR1 Ab에 특이적 항체(2차 항체)인 Anti-Mouse IgG Ab을 처리하여 Anti-Mouse IgG Ab에 결합된 형광이 검출되는지를 확인하는 것이다. 상기 3 가지가 모두 처리된 경우인 왼쪽 첫 번째 결과에서 높은 형광이 확인되었고, 나머지 결과들은 일부 비특이적 결합에 의한 형광을 나타내기는 하지만 임계적으로 매우 낮은 형광을 나타내는 것을 확인할 수 있다.Referring to FIG. 3, after processing FcεR1, Anti-FcεR1 Ab, an FcεR1-specific antibody, was treated, and then Anti-Mouse IgG Ab, a specific antibody (secondary antibody), was treated with Anti-FcεR1 Ab to obtain anti-Mouse IgG It is to confirm whether fluorescence bound to Ab is detected. High fluorescence was confirmed in the first result on the left, when all three of the above treatments were performed, and the remaining results show fluorescence due to some non-specific binding, but show critically very low fluorescence.
실시예 1 내지 28Examples 1 to 28
각 well 내부가 단백질이 고정될 수 있도록 표면이 Linker 물질로 코팅된 단백질칩(자체 제작)에 1X PBS(10% PEG-200, pH 7.4) 완충용액에 적당한 농도로 FcεR1을 희석한 용액을 가하여 4 ℃에서 8시간 이상 고정시키고, 1X PBST(0.5% Tween-20, pH 7.4) 용액으로 10분간 2회 세척하고 비특이적 결합을 방지하기 위하여 1% BSA(1X PBS, pH 7.4) 용액에 담가 상온에서 Shaking 하면서 1시간 동안 Blocking 한다. 이후 1X PBST(0.5% Tween-20, pH 7.4) 용액으로 10분간 2회 세척하고 증류수로 rinsing 한 다음 질소 가스를 이용하여 웰에 남아있는 물기를 건조한다. 천연 소재 리스트 중 28개의 추출물을 각 well에 0.5 ㎕씩 spotting 한 다음, 같은 위치에 biotin이 결합된 IgE 용액을 0.5 ㎕씩 spotting 하고 건조되지 않도록 wet box에 넣어 상온에서 1시간 동안 배양한다. 앞서 단계와 동일한 방법으로 wash & dry 한 다음 상기 biotin과 강하게 결합하는 Streptavidin(Cy5-labelled) 용액을 1 ㎕씩 spotting 하고 wet box에 넣어 상온에서 1시간 동안 배양하여 단백질칩을 처리하였다.A solution diluted with FcεR1 at an appropriate concentration in 1X PBS (10% PEG-200, pH 7.4) buffer was added to a protein chip (manufactured in-house) whose surface was coated with a linker material so that the protein could be immobilized on the inside of each well. After fixing for more than 8 hours at ℃, washing twice for 10 minutes with 1X PBST (0.5% Tween-20, pH 7.4) solution, soaking in 1% BSA (1X PBS, pH 7.4) solution to prevent non-specific binding, and shaking at room temperature. while blocking for 1 hour. Thereafter, the cells were washed twice for 10 minutes with 1X PBST (0.5% Tween-20, pH 7.4) solution, rinsed with distilled water, and dried with nitrogen gas to dry the water remaining in the wells. After spotting 0.5 μl of 28 extracts from the list of natural materials in each well, spotting 0.5 μl of biotin-coupled IgE solution at the same location, put in a wet box to prevent drying, and incubate for 1 hour at room temperature. After washing and drying in the same manner as in the previous step, 1 μl of Streptavidin (Cy5-labelled) solution that binds strongly to the biotin was spotted, put in a wet box, and incubated at room temperature for 1 hour to process the protein chip.
비교예 1(PC1)Comparative Example 1 (PC1)
천연 소재 추출물, IgE 및 스트렙트아비딘 대신 Anti-FcεR1 Ab 및 Anti-Mouse IgG Ab를 사용한 것 이외에 실시예와 동일한 방법으로 단백질칩을 처리하였다.Protein chips were treated in the same manner as in Example except that Anti-FcεR1 Ab and Anti-Mouse IgG Ab were used instead of the natural material extract, IgE and streptavidin.
비교예 2(NC1)Comparative Example 2 (NC1)
천연 소재 추출물 0.5 ㎕ 및 IgE 0.5 ㎕ 대신 DMSO buffer 1.0 ㎕를 사용한 것 이외에 실시예와 동일한 방법으로 단백질칩을 처리하였다.The protein chip was treated in the same manner as in Example except that 1.0 μl of DMSO buffer was used instead of 0.5 μl of natural material extract and 0.5 μl of IgE.
비교예 3(PC2)Comparative Example 3 (PC2)
천연 소재 추출물 0.5 ㎕ 대신 DMSO buffer 0.5 ㎕를 사용한 것 이외에 실시예와 동일한 방법으로 단백질칩을 처리하였다.The protein chip was treated in the same manner as in Example, except that 0.5 μl of DMSO buffer was used instead of 0.5 μl of natural material extract.
실험예 3Experimental Example 3
비교예 1, 비교예 2, 비교예 3 및 실시예 1 내지 28 각각의 단백질칩을 마이크로어레이 스캐너(microarray scanner)로 관찰하여 결과를 분석하였다. 스캔 결과는 각각의 well에서 나타나는 형광값을 0 부터 216 값인 65535 사이의 수치로 표현하였다.Each protein chip of Comparative Example 1, Comparative Example 2, Comparative Example 3, and Examples 1 to 28 was observed using a microarray scanner and the results were analyzed. The scan result expressed the fluorescence value appearing in each well as a numerical value between 0 and 2 16 , which is 65535.
도 4는 실험예 3에 따른 스캔 결과를 나타내는 그래프이다. 도 4를 참조하면, 비교예 1(PC1)은 FcεR1 특이적 항체인 Anti-FcεR1 Ab를 1차 항체로, Anti-FcεR1 Ab 특이적 항체인 Anti-Mouse IgG Ab를 2차 항체로 사용하여 형광 표지한 것이고, 비교예 2(NC1)는 IgE가 없는 경우의 형광 검출 수준이며, 비교예 3(PC2)은 IgE와 FcεR1 사이에 인위적인 방해요소가 없는 경우의 형광 검출 수준이다. 비교예 3이 스크리닝 하고자 하는 실시예 1 내지 28의 결과값들의 기준이 되고 비교예 3에 대한 상대적인 비교를 통해 IgE와 FcεR1의 결합 방해 효과를 확인할 수 있다.4 is a graph showing scan results according to Experimental Example 3; Referring to FIG. 4, Comparative Example 1 (PC1) uses the FcεR1-specific Anti-FcεR1 Ab as a primary antibody and the Anti-FcεR1 Ab-specific antibody, Anti-Mouse IgG Ab as a secondary antibody for fluorescence labeling Comparative Example 2 (NC1) is the fluorescence detection level in the absence of IgE, and Comparative Example 3 (PC2) is the fluorescence detection level in the absence of artificial interference between IgE and FcεR1. Comparative Example 3 is the standard for the results of Examples 1 to 28 to be screened, and the effect of inhibiting the binding of IgE and FcεR1 can be confirmed through a relative comparison with Comparative Example 3.
도 4에서는 실시예 9(3-20-92), 실시예 12(3-19-93) 및 실시예 6(3-20-80)의 천연 소재가 다른 소재들 대비 높은 IgE와 FcεR1의 결합 방해 효과를 나타내는 것으로 확인되고, 실시예 1(3-20-53) 및 실시예 13(3-19-104)는 오히려 IgE와 FcεR1의 결합을 증가시키는 것으로 알러지, 아토피 및 가려움을 유발하는 것으로 확인된다.In Figure 4, the natural materials of Example 9 (3-20-92), Example 12 (3-19-93), and Example 6 (3-20-80) interfere with the binding of IgE and FcεR1, which are higher than other materials. It is confirmed that the effect is shown, and Example 1 (3-20-53) and Example 13 (3-19-104) rather increase the binding of IgE and FcεR1, which is confirmed to cause allergy, atopy and itching .
상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.As described above, although it has been described with reference to the preferred embodiments of the present invention, those skilled in the art can make the present invention various without departing from the spirit and scope of the present invention described in the claims below. It will be understood that it can be modified and changed accordingly.
110: 기판 120: 링커
130: 캡처 단백질 140: 바이오틴 결합된 IgE
150: 형광 표지된 스트렙트아비딘110: substrate 120: linker
130
150: fluorescently labeled streptavidin
Claims (6)
상기 캡처 단백질이 처리된 기판에 기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계;
상기 기능성 소재 후보물질이 처리된 기판에 바이오틴이 결합된 IgE를 처리하는 단계; 및
상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판에 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.processing a capture protein on a substrate coated with a linker material;
processing a functional material candidate on the substrate treated with the capture protein;
processing biotin-bound IgE on the substrate treated with the functional material candidate; and
treating the biotin-coupled IgE-treated substrate with fluorescently labeled streptavidin;
Functional material screening method comprising a.
상기 캡처 단백질을 처리하는 단계 이후에,
비특이적 결합을 막기 위해 BSA를 처리하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.According to claim 1,
After processing the capture protein,
Functional material screening method characterized by further comprising the step of treating BSA to prevent non-specific binding.
상기 형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이전에,
상기 바이오틴이 결합된 IgE가 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.According to claim 1,
Prior to the step of treating the fluorescently labeled streptavidin,
The functional material screening method further comprising washing and drying the biotin-bound IgE-treated substrate.
기능성 소재 후보물질을 처리하는 단계 이전에,
상기 캡처 단백질이 처리된 기판을 세척 및 건조하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.According to claim 1,
Prior to the step of processing functional material candidates,
Functional material screening method characterized in that it further comprises the step of washing and drying the substrate treated with the capture protein.
형광 표지된 스트렙트아비딘(Streptavidin)을 처리하는 단계 이후에,
상기 IgE와 상기 캡처 단백질 사이의 결합 정도를 분석하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.According to claim 1,
After the step of treating fluorescently labeled streptavidin,
Functional material screening method further comprising the step of analyzing the degree of binding between the IgE and the capture protein.
상기 캡처 단백질은 FcεR1인 것을 특징으로 하는 기능성 소재 스크리닝 방법.According to claim 1,
The capture protein is a functional material screening method, characterized in that FcεR1.
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