KR102496833B1 - Composition for Antibacterial comprising peptide, Scolopendrasin-12 isolated from Scolopendra subspinipes mutilans - Google Patents

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Abstract

본 발명은 왕지네 유래의 MLRLLTYKLKK-NH2의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 스콜로펜드라신-12 및 이의 용도에 관한 것으로, 스콜로펜드라신-12는 항균 또는 항진균 효과가 우수하므로, 항균 또는 항진균 제제용 약학적 조성물, 항생제, 식품 방부제, 사료 방부제, 화장료 보존제 또는 의약품 보존제로서 사용이 가능하다.The present invention relates to a peptide scolopendrasin-12 having an amino acid sequence of MLRLLTYKLKK-NH 2 derived from king centipede and a use thereof. Since scolopendrasin-12 has excellent antibacterial or antifungal effects, antibacterial or antifungal agents It can be used as a pharmaceutical composition, antibiotic, food preservative, feed preservative, cosmetic preservative or pharmaceutical preservative.

Description

왕지네 유래 펩타이드 스콜로펜드라신-12를 포함하는 항균 조성물{Composition for Antibacterial comprising peptide, Scolopendrasin-12 isolated from Scolopendra subspinipes mutilans}Antibacterial composition comprising peptide scolopendrasin-12 isolated from Scolopendra subspinipes mutilans}

본 발명은 왕지네(Scolopendra subspinipes mutilans) 유래의 펩타이드 스콜로펜드라신-12를 포함하는 항균 또는 항진균용 조성물에 관한 것이다. The present invention is a king centipede ( Scolopendra subspinipes mutilans ) It relates to an antibacterial or antifungal composition containing the derived peptide scolopendracin-12.

병원성 미생물의 감염은 인간의 질병에서 가장 흔하고 치명적인 원인 중의 하나인데, 불행하게도 항생제의 남용으로 인하여 병원성 미생물의 항생제 저항성(resistance)이 야기되었다. 실제로, 병원성 미생물이 새로운 항생제에 저항성을 나타내는 속도는 새로운 항생제의 유사체가 개발되는 속도보다 훨씬 더 빠르다. 예를 들면, 생명에 위협을 가할 수 있는 엔테로코쿠스 패칼리스(Enterococcus faecalis), 마이코박테리움 투버쿨로시스(Mycobacterium tuberculosis), 슈도모나스 아루지노사(Pseudomonas aeruginosa) 등의 병원성 미생물 종들은 지금까지 알려진 모든 항생제에 대한 저항력을 키워왔다.Infection with pathogenic microorganisms is one of the most common and fatal causes of human disease. Unfortunately, due to the overuse of antibiotics, resistance of pathogenic microorganisms to antibiotics has been caused. In fact, the rate at which pathogenic microorganisms develop resistance to new antibiotics is much faster than the rate at which analogues of new antibiotics are developed. For example, Enterococcus faecalis , which can pose a threat to life, Mycobacterium tuberculosis , Pseudomonas aruginosa ( Pseudomonas ) aeruginosa ) have developed resistance to all known antibiotics.

항생제에 대한 내성(tolerance)은 항생제에 대한 저항성(resistance)과는 구별되는 현상인데, 1970년대에 뉴모코커스(Pneumococcus sp.)에서 최초로 발견이 되었으며 페니실린의 작용 기작에 대한 중요한 단서를 제공하였다. 내성을 보이는 종은 통상적인 농도의 항생제 존재 하에서는 성장을 멈추지만 결과적으로 죽지는 않는다. 이러한 내성은 항생제가 세포벽 합성 효소를 저해할 때 오토라이신(autolysin) 등과 같은 세균의 자가분해(autolytic) 효소의 활성이 일어나지 않기 때문에 발생되는데, 이로 인해 페니실린이 내인성 가수분해 효소 (endogenous hydrolytic enzyme)를 활성화시킴으로써 세균을 죽이며 세균은 또한 이들의 활성을 억제해서 항생제 치료 시에도 생존하는 결과를 나타내게 된다.Tolerance to antibiotics is a phenomenon distinct from resistance to antibiotics, which was first discovered in Pneumococcus sp. in the 1970s and provided important clues to the mechanism of action of penicillin. Resistant species stop growing in the presence of normal concentrations of antibiotics, but do not die as a result. This resistance occurs because when antibiotics inhibit cell wall synthase, the activity of bacterial autolytic enzymes such as autolysin does not occur. By activating, it kills bacteria, and bacteria also suppress their activity, resulting in survival even when treated with antibiotics.

병원성 미생물이 항생제에 대한 내성을 가지는 것은 임상적으로 대단히 중요한데, 내성 미생물을 박멸하는 것이 불가능하게 되면 임상적인 감염에서 항생제 치료의 효용이 떨어지기 때문이다. 아울러 내성이 생기는 것은 항생제에 대한 저항성이 생기게 되는 선행 조건이라고 간주되며, 이것은 항생제 치료에도 불구하고 살아남는 균주가 생기기 때문이다. 이러한 균주는 항생제에 저항성을 가지는 새로운 유전 요소를 획득해서 항생제의 존재 하에서도 계속 성장하게 된다. 실제적으로 모든 저항성을 보이는 병원성 미생물들은 내성도 가지고 있는 것으로 알려져 있기에, 이러한 항생제 저항성을 가지는 병원성 미생물을 죽일 수 있는 신규의 항생제의 개발은 시급한 실정이다.It is very important clinically that pathogenic microorganisms have resistance to antibiotics, because if it is impossible to eradicate resistant microorganisms, the effectiveness of antibiotic treatment in clinical infections is reduced. In addition, development of resistance is considered a prerequisite for development of resistance to antibiotics, as it results in strains that survive antibiotic treatment. These strains acquire new genetic elements that are resistant to antibiotics and continue to grow in the presence of antibiotics. Since virtually all pathogenic microorganisms showing resistance are known to have resistance, the development of novel antibiotics capable of killing pathogenic microorganisms having such antibiotic resistance is urgent.

상기에서 살펴본 바와 같이, 항생제에 저항성을 나타내는 병원성 미생물들에 의한 피해를 막기 위하여 새로운 항생제의 개발이 필요하며, 아울러 오토라이신 활성과는 독립적으로 작용하는 새로운 항생제의 개발이 필요하다. 또한, 그러한 새로운 항생제를 병원성 미생물의 감염을 효과적으로 치료하기 위한 약학적 조성물을 제공하는 것이 필요하다. As described above, it is necessary to develop new antibiotics to prevent damage caused by pathogenic microorganisms that are resistant to antibiotics, and also to develop new antibiotics that act independently of autolysin activity. In addition, it is necessary to provide a pharmaceutical composition for effectively treating infections of pathogenic microorganisms with such new antibiotics.

한편, 생물체의 항상성(homeostasis)을 유지하기 위한 과정에서 중요한 역할을 담당하고 있는 물질들 중 일부가 각종 생물체 유래의 생리 활성 물질이다. 지금까지 수많은 생리 활성 물질에 대해 많은 연구가 진행되고 있으며, 그 중, 각종 생물체에서 분리된 항균 펩타이드는 박테리아, 곰팡이 및 바이러스에 이르기까지 다양하게 작용하는 것으로 알려져 있다. 또한 항균 펩타이드들은 숙주 방어 및 선천적 면역계에 있어서 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 관련 선행기술로 한국등록특허 제10-0964136호(울도하늘소유충으로부터 분리한 항균 또는 항진균 펩타이드 유전자 및 항균 또는 항진균 활성을 가지는 합성펩타이드)와 한국등록특허 제10-1953828호(왕귀뚜라미에서 유래한 항균 펩타이드 테레오그릴루신 1 및 그의 조성물)가 공지되어 있으나, 현재까지 왕지네로부터 분리한 신규 펩타이드 및 이들의 신규 용도에 대한 연구는 부족한 실정이다.On the other hand, some of the substances that play an important role in the process for maintaining the homeostasis of living organisms are physiologically active substances derived from various living organisms. Until now, many studies have been conducted on numerous physiologically active substances, and among them, antibacterial peptides isolated from various living organisms are known to act in a variety of ways, ranging from bacteria, fungi and viruses. Antimicrobial peptides are also known to play an important role in host defense and the innate immune system. As related prior art, Korean Patent No. 10-0964136 (antibacterial or antifungal peptide gene isolated from Uldo larvae and synthetic peptide having antibacterial or antifungal activity) and Korean Patent No. 10-1953828 (antibacterial peptide derived from king cricket) terogryleucine 1 and compositions thereof) are known, but studies on novel peptides isolated from king centipede and new uses thereof are lacking.

본 발명이 해결하고자 하는 과제는 그람 음성균, 그람 양성균 및 진균 등과 같은 균으로부터 발생하는 질환의 예방 또는 치료와 항균, 살균 및 항진균 활성이 필요한 용도에 유용하게 사용될 수 있는 왕지네로부터 분리한 항균 또는 항진균 특성을 가지는 펩타이드 스콜로펜드라신-12 및 이의 용도를 제공하는데 있다. The problem to be solved by the present invention is to prevent or treat diseases caused by bacteria such as gram-negative bacteria, gram-positive bacteria and fungi, and antibacterial or antifungal properties isolated from centipede, which can be usefully used for applications requiring antibacterial, bactericidal and antifungal activity It is to provide the peptide scolopendracin-12 having and its use.

본 발명은 왕지네(Scolopendra subspinipes mutilans) 유래의 항균 또는 항진균 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다. The present invention is a king centipede ( Scolopendra subspinipes mutilans ) and its use.

상기 과제를 해결하기 위해 본 발명은 왕지네(Scolopendra subspinipes mutilans)의 전사체로부터 분리한 항균 또는 항진균 유전자에서 합성된 하기 서열번호 1로 표현되는 펩타이드를 제공한다. In order to solve the above problems, the present invention is a king centipede ( Scolopendra subspinipes mutilans ) Provided is a peptide represented by SEQ ID NO: 1 synthesized from an antibacterial or antifungal gene isolated from the transcript.

서열번호 1: MLRLLTYKLKK-NH2 SEQ ID NO: 1: MLRLLTYKLKK-NH 2

본 발명에 따른 상기 펩타이드를 제공하는 방법은 하기와 같다. 왕지네 (Scolopendra subspinipes mutilans) 유래의 항균 또는 항진균 유전자를 확인하기 위하여 먼저, 왕지네를 액체질소로 급속 동결하고 전체 DNA를 분리하고 Genome seq 분석법을 이용해서 왕지네 유전체들의 정보를 확인 후, 각각의 유전체들로부터 번역된 아미노산의 서열을 바탕으로 항균 또는 항진균 활성 실험을 통해 후보물질을 선별하는 방법을 포함한다.A method for providing the peptide according to the present invention is as follows. Centipede ( Scolopendra subspinipes ) mutilans ) in order to identify the derived antibacterial or antifungal gene, first, rapidly freeze king centipede in liquid nitrogen, isolate the entire DNA, check the information of king centipede genomes using genome seq analysis, and determine the amino acid translation from each genome. It includes a method of selecting a candidate substance through an antibacterial or antifungal activity test based on the sequence.

본 발명에서, "펩타이드", 및 "단백질"은 호환적으로 사용되며 아미노산 잔기의 중합체에 대한 언급을 포함한다. 상기 용어들을 천연 아미노산 중합체들뿐만 아니라, 하나 이상의 아미노산 잔기가 상응하는 천연 아미노산의 인공적인 화학적 유사체인 아미노산 중합체들에 적용한다. 상기 용어들을 또한 단백질이 작용성으로 남아있도록 보존적인 아미노산 치환을 함유하는 상기 중합체들에 적용한다. 본 발명에서 펩타이드는 유전자 재조합과 단백질 발현 시스템을 이용하여 합성된 것일 수 있고, 바람직하게는 펩타이드 합성기 등을 통하여 시험관 내에서 합성된 것일 수 있다.In the present invention, "peptide" and "protein" are used interchangeably and include reference to polymers of amino acid residues. The terms apply to natural amino acid polymers as well as amino acid polymers in which one or more amino acid residues are artificial chemical analogues of the corresponding natural amino acids. The terms also apply to those polymers that contain conservative amino acid substitutions such that the protein remains functional. In the present invention, the peptide may be synthesized using genetic recombination and a protein expression system, preferably synthesized in vitro through a peptide synthesizer or the like.

본 발명에서, "생물학적으로 활성이 있는"은 상기 서열번호 1의 폴리펩타이드와 유사한 구조적 기능, 및/또는 유사한 조절 기능, 및/또는 유사한 생화학적 기능을 갖는 펩타이드 단편 또한 본 발명에 따른 펩타이드를 의미한다.In the present invention, "biologically active" means a peptide fragment having a structural function similar to that of the polypeptide of SEQ ID NO: 1, and/or a similar regulatory function, and/or a similar biochemical function, as well as a peptide according to the present invention. do.

본 발명은 상기 서열번호 1의 서열의 변이체를 포함할 수 있다. 구체적으로, 서열번호 1의 펩타이드 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 서열 상동성을 가지는 것으로, 생물학적 활성이 유지되는 서열을 본 발명의 범주에서 포함할 수 있다. The present invention may include a variant of the sequence of SEQ ID NO: 1. Specifically, at least 80%, at least 85%, at least 90%, at least 91%, at least 92%, at least 93%, at least 94%, at least 95%, at least 96%, at least 97% with the peptide sequence of SEQ ID NO: 1, Sequences that have at least 98%, or at least 99% sequence homology, that retain biological activity may be included within the scope of the present invention.

본 발명에서, "결실"은 야생형 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드와 비교하여 각각 하나 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기가 없는 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열에서의 변화로 정의된다. In the present invention, a "deletion" is defined as a change in a nucleotide or amino acid sequence that is missing one or more nucleotides or amino acid residues, respectively, compared to the wild-type polynucleotide or polypeptide.

본 발명에서, "삽입" 또는 "부가"는 야생형 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드와 비교하여 각각 하나 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산 잔기의 부가로 인한 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열에서의 변화이다.In the present invention, an "insertion" or "addition" is a change in a nucleotide or amino acid sequence due to the addition of one or more nucleotides or amino acid residues, respectively, compared to a wild-type polynucleotide or polypeptide.

본 발명에서, "치환"은 야생형 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드와 비교하여 각각 다른 뉴클레오타이드 또는 아미노산에 의해 하나 이상의 뉴클레오타이드 또는 아미노산의 교체에서 비롯된다. In the present invention, a "substitution" results from the replacement of one or more nucleotides or amino acids by a different nucleotide or amino acid, respectively, compared to the wild-type polynucleotide or polypeptide.

한편, 치환 위치에서 바람직한 아미노산 변이는 잔기의 극성, 전하, 용해성, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성 특성의 유사성에 기반하여 수행되는 것일 수 있다. 예를 들어, 이에 한정되는 것은 아니나, 음으로 하전된(negatively charged) 아미노산으로서는 아스파르트산 및 글루타민산을 포함하며; 양으로 하전된(positively charged) 아미노산으로서는 리신 및 아르기닌을 포함하고; 그리고 유사한 친수성값을 가지는 비하전성 극성 헤드기를 가지는 아미노산으로서는 류신, 이소류신 및 발린; 글리신 및 알라닌; 아스파라긴 및 글루타민; 세린, 트레오닌, 페닐알라닌 및 티로신;을 들 수 있다. 상기 변이는 보존적 치환을 포함할 수 있다. '보존적 치환'이란, 어느 아미노산이 유사한 특성을 가지는 다른 아미노산으로 치환되어 당업자라면 그 폴리펩타이드의 2차 구조 및 감수성질(hydropathic nature, 소수성 또는 친수성 성질)이 실질적으로 비변화되었다고 예측할 수 있는 치환이다. 일반적으로 하기 아미노산 군이 보존성 변화를 나타낸다: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; 및 (5) phe, tyr, trp, his. On the other hand, a preferred amino acid change at a substitution site may be one performed based on the similarity of polarity, charge, solubility, hydrophobicity, hydrophilicity and/or amphiphilic properties of the residues. For example, but not limited to, negatively charged amino acids include aspartic acid and glutamic acid; Positively charged amino acids include lysine and arginine; And amino acids having uncharged polar head groups having similar hydrophilicity values include leucine, isoleucine and valine; glycine and alanine; asparagine and glutamine; serine, threonine, phenylalanine and tyrosine; Such mutations may include conservative substitutions. A 'conservative substitution' is a substitution in which an amino acid is substituted with another amino acid having similar properties, and those skilled in the art can predict that the secondary structure and hydropathic nature (hydropathic nature, hydrophobic or hydrophilic nature) of the polypeptide are substantially unchanged. am. In general, the following groups of amino acids exhibit conservative changes: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; and (5) phe, tyr, trp, his.

경우에 따라서는, 상기 변이체는 인산화(phosphorylation), 황화(sulfation), 아크릴화(acrylation), 당화(glycosylation), 메틸화(methylation), 파네실화(farnesylation), 아세틸화(acetylation) 및 아밀화(amidation) 등으로 수식(modification)될 수도 있다.In some cases, the variant is phosphorylation, sulfation, acrylation, glycosylation, methylation, farnesylation, acetylation and amylation It can also be modified as

또한, 본 발명에 따른 서열은 세포 내 투과를 위해 세포 투과성 펩타이드 서열을 더 포함할 수도 있다. 세포 투과성 펩타이드란 일종의 신호 펩타이드로써 세포 내로 물질 전달을 목적하는 펩타이드 서열이다. 주로 7-30 개 정도의 아미노산 펩타이드 서열로 이루어지며, 세포 내로 전달될 수 있는 신호 펩타이드를 가지는 서열이라면 어떠한 서열이라도 본 발명에서 포함될 수 있다. In addition, the sequence according to the present invention may further include a cell penetrating peptide sequence for intracellular penetration. A cell-penetrating peptide is a kind of signal peptide, which is a peptide sequence intended to transmit substances into cells. It mainly consists of 7-30 amino acid peptide sequences, and any sequence may be included in the present invention as long as it has a signal peptide that can be delivered into cells.

예컨대, 세포 투과성 펩타이드는 라이신/아르기닌 등 기본 아미노산 잔기들을 주로 포함하고 있어서 이와 융합된 단백질들을 세포막을 투과하여 세포내로 침투시키는 역할을 한다. 상기 세포 투과성 펩타이드는 HIV-1 Tat 단백질, 드로소필라 안테나페디아의 호메오도메인(페네트라틴), HSV VP22 전사조절단백질, vFGF에서 유도된 MTS 펩타이드, PTD-5, 트랜스포탄 또는 Pep-1 펩타이드에서 유래된 서열 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이와 같이, 바이러스 또는 양이온성 펩타이드로부터 동정/합성된 다양한 CPPs(예를 들어, TAT48-60, 페네트라틴(pAntp)43-58, 폴리아르기닌, Pep-1, 트랜스포탄, 등)은 생물학적 활성 물질은 약물운반체들의 이동을 매개하기 위해 세포 내재화(internalization)가 가능한 활성을 가진다.For example, cell-penetrating peptides mainly contain basic amino acid residues such as lysine/arginine, and thus allow proteins fused thereto to permeate cell membranes and enter cells. The cell-penetrating peptide is HIV-1 Tat protein, Drosophila antennapedia homeodomain (Penetratin), HSV VP22 transcriptional regulatory protein, vFGF-derived MTS peptide, PTD-5, transportan or Pep-1 peptide Including sequences derived from, and the like, but are not limited thereto. As such, various CPPs (e.g., TAT48-60, penetratin (pAntp) 43-58, polyarginine, Pep-1, transportan, etc.) identified/synthesized from viruses or cationic peptides are biologically active substances. has an activity capable of internalizing cells to mediate the movement of drug carriers.

상기 펩타이드의 아미노산 서열은 MLRLLTYKLKK-NH2로 11개의 아미노산으로 구성되며, 이를 스콜로펜드라신-12(Scolopendrasin-12)라고 명명한다.The amino acid sequence of the peptide is MLRLLTYKLKK-NH 2 and is composed of 11 amino acids, which is named Scolopendrasin-12.

본 발명에 의하면, 상기 펩타이드는 그람 양성균, 그람 음성균 또는 진균에 대해 우수한 항균 또는 항진균 활성을 나타낼 수 있으므로, 항균 또는 항진균 제제용 약학적 조성물로 유용하다. 상기 그람 양성균 또는 그람 음성균은 예컨대 대장균(Escherichia coli), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 페렴간균(Klebsiella pneumoniae), MRSA균(Staphylococcus aureus subsp. aureus), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 프로피오니박테리움 아크니스(Propionibacterium acnes), 쥐티투스균(Salmonella typhimurium) 또는 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri) 등일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. According to the present invention, the peptide can exhibit excellent antibacterial or antifungal activity against gram-positive bacteria, gram-negative bacteria or fungi, so it is useful as a pharmaceutical composition for antibacterial or antifungal preparations. The gram-positive or gram-negative bacteria are, for example, Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus , Klebsiella pneumoniae , MRSA ( Staphylococcus aureus subsp. aureus ), Bacillus subtilis ( Bacillus subtilis ), Vibrio parahaemolyticus , Propionibacterium acnes , Salmonella typhimurium , or Shigella flexneri , but is not limited thereto.

상기 진균은 예컨대 칸디다 알비칸스(Candida albicans)일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.The fungus may be, for example, Candida albicans , but is not limited thereto.

본 발명에 의하면 상기 펩타이드는 세포에 대해 무독성인 것이 특징이다. 상기 세포는 예컨대, 휴먼 각질형성세포 또는 마우스 섬유아세포일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 일 구현예에서, 본 발명에 따른 펩타이드를 휴먼 각질형성세포인 HacaT (human keratinocyte)와 마우스 섬유아세포인 NIH3T3 (mouse fibroblast)에 처리한 결과 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다. 따라서 본 발명의 펩타이드는 안전한 항균제 또는 항진균제로서 유용하게 사용될 수 있다. According to the present invention, the peptide is characterized in that it is non-toxic to cells. The cells may be, for example, human keratinocytes or mouse fibroblasts, but are not limited thereto. In one embodiment of the present invention, it was confirmed that the peptide according to the present invention did not exhibit cytotoxicity as a result of treating human keratinocytes (HacaT) and mouse fibroblasts (NIH3T3). Therefore, the peptide of the present invention can be usefully used as a safe antibacterial or antifungal agent.

본 발명은 하기 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드인 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)을 포함하는 항균 또는 항진균용 조성물을 제공한다. The present invention provides an antibacterial or antifungal composition comprising Scolopendrasin-12, which is a peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 below.

서열번호 1: MLRLLTYKLKK-NH2 SEQ ID NO: 1: MLRLLTYKLKK-NH 2

본 발명에서, 상기 "항균용 조성물", 또는 "항진균용 조성물"은 항미생물제를 총칭하는 의미인 항생제와 같은 의미일 수 있고, 항균제, 항진균제, 살균제, 방부제, 보존제 또는 제균제와 같은 의미일 수 있으며, 일예로 식중독을 일으키거나 화농성 감염증의 원인이 되는 세균, 수술, 화상 등 생체의 저항력이 저하되어 있는 경우 감염으로 인해 질환을 악화시킬 수 있는 세균, 구강 질환이나 질염의 원인이 되는 세균을 포함하는, 병원성 미생물의 발육과 생활 기능을 저지, 억제 또는 사멸할 수 있는 물질을 의미한다.In the present invention, the "antibacterial composition" or "antifungal composition" may mean the same as antibiotics, which is a generic term for antimicrobial agents, and may mean the same as antibacterial agents, antifungal agents, bactericides, preservatives, preservatives, or disinfectants. For example, bacteria that cause food poisoning or cause purulent infections, bacteria that can aggravate diseases due to infection when the body's resistance is lowered, such as surgery and burns, and bacteria that cause oral disease or vaginitis It means a substance capable of inhibiting, suppressing or killing the growth and life function of pathogenic microorganisms.

또한, 본 발명은 상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드, 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 유효성분으로 포함하는 항생제를 제공한다. 본 발명에 따른 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 병원성 미생물, 특히 항생제 내성을 갖는 병원성 미생물에 대해 항균 또는 항진균 활성을 가지므로 항생제로서 유용하게 사용될 수 있다. In addition, the present invention provides an antibiotic containing the peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, scolopendrasin-12 (Scolopendrasin-12) as an active ingredient. Since the peptide scolopendracin-12 according to the present invention has antibacterial or antifungal activity against pathogenic microorganisms, particularly pathogenic microorganisms having antibiotic resistance, it can be usefully used as an antibiotic.

상기 항생제로의 사용은 치료 또는 예방의 목적의 약학 조성물로의 이용을 포함한다. Use as the antibiotic includes use as a pharmaceutical composition for the purpose of treatment or prevention.

본 발명에서, "치료" 및 "치료하는"은 질병 또는 건강 관련 상태의 치료 이점을 얻을 목적의 대상체에의 치료제의 투여 또는 적용 또는 대상체에서의 절차 또는 방식의 수행을 지칭한다. "예방", "예방하는" 등은 질환 또는 병태의 발생 또는 재발 가능성을 예방하거나, 저해하거나 또는 감소시키기 위한 접근을 나타낸다. 또한 질환 또는 병태의 개시 또는 재발을 지연시키거나 또는 질환 또는 병태의 발생 또는 재발을 지연시키는 것을 지칭한다. As used herein, "treatment" and "treating" refer to the administration or application of a therapeutic agent to a subject or the performance of a procedure or modality in a subject for the purpose of obtaining a therapeutic benefit for a disease or health-related condition. "Prevention", "preventing" and the like refer to an approach for preventing, inhibiting or reducing the likelihood of occurrence or recurrence of a disease or condition. It also refers to delaying the onset or recurrence of a disease or condition or delaying the development or recurrence of a disease or condition.

본 발명에서, "대상체" 및 "환자"는 인간 또는 비 인간, 예컨대 영장류, 포유류, 척추동물을 지칭한다. 특정 실시형태에서, 대상체는 인간이다.In the present invention, “subject” and “patient” refer to humans or non-humans, such as primates, mammals, and vertebrates. In certain embodiments, the subject is a human.

본 발명에서, "치료 이점" 또는 "치료적으로 유효한"은 이러한 상태의 의학적 치료와 관련하여 대상체의 건강을 촉진하거나 증대시키는 임의의 것을 지칭한다. 이는 이에 제한되는 것은 아니나, 질병의 징후 또는 증상의 빈도 또는 중증도의 감소를 포함한다.In the present invention, "therapeutic benefit" or "therapeutically effective" refers to anything that promotes or enhances the health of a subject with respect to medical treatment of such a condition. This includes, but is not limited to, a reduction in the frequency or severity of signs or symptoms of a disease.

본 발명에 따른 상기 스콜로펜드라신-12는 본 발명의 약학 조성물에 0.001~95 중량%로 하여 첨가될 수 있다. 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 펩타이드 스콜로펜드라신-12에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The scolopendracin-12 according to the present invention may be added in an amount of 0.001 to 95% by weight in the pharmaceutical composition of the present invention. The pharmaceutical composition may be formulated and used in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories and sterile injection solutions according to conventional methods, respectively. Carriers, excipients, and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, and cellulose. , methylcellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. When formulated, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations contain the peptide scolopendracin-12 of the present invention and at least one excipient, for example, starch or carbonic acid. It is prepared by mixing calcium, sucrose or lactose, and gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions for oral use, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried formulations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspensions. As a base for the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin fat, glycerogeratin and the like may be used.

본 발명의 약학 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathological condition to be treated, the severity of the disease or pathological condition, the route of administration, and the prescriber's judgment. Determination of dosage based on these factors is within the level of those skilled in the art, and generally dosages range from 0.01 mg/kg/day to approximately 2000 mg/kg/day. A more preferred dosage is 1 mg/kg/day to 500 mg/kg/day. Administration may be administered once a day, or may be administered in several divided doses. The dosage is not intended to limit the scope of the present invention in any way.

본 발명의 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 정맥 내 투여 또는 체강 내 투여를 포함하여 비경구 투여에 적합하다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, livestock, and humans through various routes. All modes of administration are contemplated, eg oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine intrathecal or intracerebrovascular injection. The pharmaceutical composition of the present invention is suitable for parenteral administration, including intravenous administration or intracorporeal administration.

또한, 본 발명은 상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드, 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 항균 또는 항진균용 피부 외용제를 제공한다. 본 발명에 따른 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 그람 양성균 또는 그람 음성균에 대해 항균 활성을 갖고, 진균에 대해 항진균 활성을 가지므로, 항균 또는 항진균용 피부 외용제로서 유용하게 사용될 수 있다.In addition, the present invention provides an antibacterial or antifungal skin external preparation comprising the peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, scolopendrasin-12 (Scolopendrasin-12). Since the peptide scolopendracin-12 according to the present invention has antibacterial activity against gram-positive bacteria or gram-negative bacteria and antifungal activity against fungi, it can be usefully used as an external skin preparation for antibacterial or antifungal use.

아울러, 본 발명은 펩타이드 스콜로펜드라신-12를 포함하는 식품 방부제, 사료 방부제, 화장료 보존제, 의약품 보존제를 제공한다. 이때, 식품 방부제, 사료 방부제, 화장료 보존제, 의약품 보존제는 식품이나 사료, 의약품, 화장료의 변질, 부패, 변색 및 화학변화를 방지하기 위해 사용되는 첨가물로서 살균제, 산화방지제가 포함되며, 세균, 곰팡이, 효모 등 미생물의 증식을 억제하여 식품 또는 의약품에서 부패미생물의 발육저지 또는 살균작용을 하는 등의 기능성 항생제도 포함된다. 이러한 식품 방부제, 화장품 또는 의약품 보존제의 이상적인 조건으로는 독성이 없어야 하며, 미량으로도 효과가 있어야 한다.In addition, the present invention provides a food preservative, a feed preservative, a cosmetic preservative, and a pharmaceutical preservative containing the peptide scolopendracin-12. At this time, food preservatives, feed preservatives, cosmetic preservatives, and pharmaceutical preservatives are additives used to prevent deterioration, decay, discoloration, and chemical changes in food, feed, medicines, and cosmetics, and include disinfectants and antioxidants, and include bacteria, fungi, Also included are functional antibiotics, such as suppressing the growth of microorganisms such as yeast, inhibiting the growth of spoilage microorganisms in food or medicine, or sterilizing action. Ideal conditions for such food preservatives, cosmetics or pharmaceutical preservatives should be non-toxic and effective even in small amounts.

특히, 본 발명의 신규한 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 항균 또는 항진균 활성을 나타내고 독성이 미미하므로 식품 또는 사료의 방부제, 화장품 또는 의약품 보존제로 유용하게 사용될 수 있다.In particular, since the novel peptide scolopendracin-12 of the present invention exhibits antibacterial or antifungal activity and has minimal toxicity, it can be usefully used as a preservative for food or feed, or as a preservative for cosmetics or pharmaceuticals.

위와 같은 식품 또는 사료의 방부제로의 사용은 일반 식용 또는 사료용 물질에 추가로 첨가되는 것으로, 상기 식품 및 사료의 종류에는 제한이 없다. The use of the above food or feed as a preservative is added to general food or feed materials, and there is no limit to the type of food or feed.

위와 같은 화장품 또는 의약품 보존제로의 사용은 사용목적 등에 맞게 임의로 선정한 물질을 첨가할 수 있다. 예를 들어, 정제수, 유분, 계면활성제, 보습제, 고급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 지방산, 왁스, pH 조절제, 향료 등이 첨가될 수 있다.For use as a cosmetic or pharmaceutical preservative as above, a substance selected arbitrarily may be added according to the purpose of use. For example, purified water, oil, a surfactant, a moisturizer, a higher alcohol, a thickener, a chelating agent, a pigment, a fatty acid, a wax, a pH adjuster, and a flavoring agent may be added.

이외에도 본 발명에 따른 펩타이드는 항균, 살균 또는 항진균 활성이 요구되는 다양한 목적 및 용도로 사용될 수 있다. 구체적으로는 피부 세정제, 모발 세정제, 질 세정제, 구강 세정제, 욕실용 세정제, 주방용 세정제, 식품첨가제, 사료첨가제, 소독제 또는 가습기 살균제 소재 등으로 사용될 수 있다.In addition, the peptide according to the present invention can be used for various purposes and uses requiring antibacterial, bactericidal or antifungal activity. Specifically, it can be used as a skin cleaner, hair cleaner, vaginal cleaner, mouthwash, bathroom cleaner, kitchen cleaner, food additive, feed additive, disinfectant or humidifier sterilizer material.

위 언급한 식품 및/또는 사료의 방부제, 화장품 또는 의약품 보존제, 피부 세정제, 모발 세정제, 질 세정제, 구강 세정제, 욕실용 세정제, 주방용 세정제, 식품첨가제, 사료첨가제, 소독제 또는 가습기 살균제 소재 등으로 사용에 있어서는 펩타이드를 첨가제 총 중량에 대하여 0.00001 내지 50 중량%로 포함될 수 있고, 1 ㎍/㎖ 내지 10000 ㎍/㎖의 농도로 포함할 수 있다. 또한 추가의 항균 활성을 가지는 다른 공지 항균 물질이나 기타 기능성을 부여할 수 있는 물질을 더 포함할 수 있다.For use as above-mentioned food and/or feed preservatives, cosmetics or pharmaceutical preservatives, skin cleaners, hair cleaners, vaginal cleaners, mouthwashes, bathroom cleaners, kitchen cleaners, food additives, feed additives, disinfectants, or materials for humidifier disinfectants, etc. In the case, the peptide may be included in an amount of 0.00001 to 50% by weight based on the total weight of the additive, and may be included in a concentration of 1 μg / ml to 10000 μg / ml. In addition, other known antibacterial substances having additional antibacterial activity or substances capable of imparting other functionalities may be further included.

본 발명에 따른 왕지네로부터 유래한 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 세포 독성이 거의 없고, 우수한 항균 또는 항진균 활성을 나타내므로 항균 또는 항진균용 약학조성물, 항생제, 식품 또는 사료 방부제, 화장품 또는 의약품 보존제 등으로 유용하게 적용될 수 있다.Since the peptide scolopendracin-12 derived from king centipede according to the present invention has little cytotoxicity and exhibits excellent antibacterial or antifungal activity, it can be used in antibacterial or antifungal pharmaceutical compositions, antibiotics, food or feed preservatives, cosmetics or pharmaceutical preservatives, etc. can be usefully applied.

도 1은 본 발명에 따른 스콜로펜드라신-12의 항균 및 항진균 활성 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명에 따른 스콜로펜드라신-12의 세포독성 테스트 결과를 나타낸 것이다.
Figure 1 shows the antibacterial and antifungal activity results of scolopendracin-12 according to the present invention.
Figure 2 shows the results of the cytotoxicity test of scolopendracin-12 according to the present invention.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.Hereinafter, preferred embodiments are presented to aid understanding of the present invention, but the following examples are merely illustrative of the present invention, and various changes and modifications are possible within the scope and spirit of the present invention. It is obvious to those skilled in the art, It goes without saying that these variations and modifications fall within the scope of the appended claims.

<실시예 1. 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩타이드 스콜로펜드라신 -12 (Scolopendrasin-12)의 제조> < Example 1. Peptide having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 Preparation of Scolopendrasin -12 (Scolopendrasin-12)>

왕지네로부터 항균 활성을 나타내는 펩타이드 유전자를 확인하기 위해 먼저 왕지네를 액체질소로 급속 동결하여 전체 DNA를 분리하고, 이를 Genome seq 분석법을 이용하여 왕지네 유전체들에 관한 유전자 정보를 확인하였으며, 각각의 유전체들로부터 번역된 아미노산의 서열을 바탕으로 생물정보학을 활용해 후보물질을 선발하였다. 선별된 아미노산 서열은 MLRLLTYKLKK-NH2으로 11개의 아미노산 서열로 구성되어 있으며, 스콜로펜드라신-12(Scolopendrasin-12)로 명명하였다.In order to identify peptide genes showing antibacterial activity from king centipedes, first, centipede centipedes were rapidly frozen in liquid nitrogen to isolate all DNA, and genome seq analysis was used to confirm genetic information on king centipede genomes. Candidates were selected using bioinformatics based on the sequence of translated amino acids. The selected amino acid sequence was MLRLLTYKLKK-NH 2 , which consisted of 11 amino acid sequences, and was named Scolopendrasin-12.

<< 시험예test example 1. 병원성 미생물에 대한 항균/항진균 활성 평가> 1. Evaluation of antibacterial/antifungal activity against pathogenic microorganisms>

병원성 미생물에 대하여 펩타이드 스콜로펜드라신-12의 항균 활성을 평가하기 위해 RDA (radial diffusion assay)를 수행하였다. 본 발명에서 항균 펩타이드는 -20℃에 보관하며, 멸균된 3차 증류수에 녹여서 사용하였다.Radial diffusion assay (RDA) was performed to evaluate the antibacterial activity of the peptide scolopendracin-12 against pathogenic microorganisms. In the present invention, the antimicrobial peptide was stored at -20 ° C and used after being dissolved in sterilized tertiary distilled water.

<항균 활성 검정><Antibacterial activity assay>

항균 활성 검정을 위해, 먼저 병원성 세균인 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 대장균(Escherichia coli), 여드름 원인균인 프로피오니박테리움 아크니스(Propionibacterium acnes), 항생제 내성균인 MRSA(Methicillin resistant Staphylococcus aureus)를 3 %(w/v) TSB (trypticase soy broth)에서 37℃, 200rpm조건으로 18시간 배양한 후, 다시 동일한 조건에서 4×106 CFU (colony forming units)/㎖ 농도가 되도록 2시간 30분간 2차 배양하였다. For the antibacterial activity test, first, pathogenic bacteria Staphylococcus aureus ( Staphylococcus aureus ), Escherichia coli ( Escherichia coli ), acne causative bacterium Propionibacterium acnes ( Propionibacterium acnes ), and antibiotic-resistant bacteria MRSA (Methicillin resistant Staphylococcus aureus ) were tested for 3 % (w / v) TSB (trypticase soy broth) after culturing at 37 ℃, 200rpm for 18 hours, and then again under the same conditions for 2 hours and 30 minutes to a concentration of 4 × 10 6 CFU (colony forming units) / ㎖ Secondary cultured.

다음으로 시트레이트 포스페이트 버퍼(Citrate phosphate buffer; 9 mM sodium phosphate, 1 mM sodium citrate, pH 7.4) 와 1%(w/v) typeⅠ(low electroendosmosis) 아가로스, 0.03 % TSB로 구성된 멸균된 언더레이 겔(underlay gel)에다 배양된 세균(4×106 colony forming units/㎖)을 넣고 혼합해준 뒤, 사각플레이트에 붓고, 언더레이 겔이 굳으면 지름 3 mm의 구멍을 내어 농도별(0, 12.5, 25, 50, 100 및 200 ㎍/㎖)로 펩타이드(스콜로펜드라신-12)를 5 ㎕씩 구멍에 넣었다. Next, a sterilized underlay gel consisting of citrate phosphate buffer (9 mM sodium phosphate, 1 mM sodium citrate, pH 7.4), 1% (w/v) type I (low electroendosmosis) agarose, and 0.03% TSB Cultured bacteria (4×10 6 colony forming units/ml) are added to the (underlay gel), mixed, poured into a square plate, and when the underlay gel hardens, a hole with a diameter of 3 mm is made and divided according to concentration (0, 12.5, 25, 50, 100 and 200 μg/ml) of the peptide (scolopendracin-12) was put into the hole at 5 μl each.

펩타이드가 확산되도록 37℃에서 3시간 배양한 후, 오버레이 겔(6 % TSB, 1 % agarose) 10 ㎖을 붓고, 37℃에서 다시 배양하여 클리어 존(clear zone)의 형성 여부를 확인하였으며 얻어진 결과를 도 1에 나타내었다.After incubation at 37°C for 3 hours to diffuse the peptide, 10 ml of overlay gel (6% TSB, 1% agarose) was poured and incubated again at 37°C to confirm the formation of a clear zone. shown in Figure 1.

도 1에 나타낸 바와 같이, 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 그람 양성균, 그람 음성균, 여드름 원인균, 항생제 내성균에 대한 활성이 있는 것으로 나타났으며, 항균 활성은 농도의존적으로 증가하는 것으로 나타났다. 이를 통해 본 발명에 따른 펩타이드 스콜로펜드라신-12가 알려진 유해 균주에 대한 치료제로서의 이용 가능성이 높고 항균 활성이 우수함을 확인하였다. As shown in Figure 1, the peptide scolopendracin-12 was found to have activity against gram-positive bacteria, gram-negative bacteria, acne-causing bacteria, and antibiotic-resistant bacteria, and the antibacterial activity was found to increase in a concentration-dependent manner. Through this, it was confirmed that the peptide scolopendracin-12 according to the present invention has high availability as a therapeutic agent for known harmful strains and excellent antibacterial activity.

< 항진균 활성 검정 >< Antifungal activity assay >

펩타이드의 항진균 활성의 측정을 위하여, 병원성 진균인 캔디다 알비칸스(Candida albicans)를 TSB 배지(trypticase soy broth)에서 30℃, 200 rpm 조건으로 밤새 키운 후, 이를 새 배지에 접종하여 3시간 동안 키워 대수기가 되도록 하였다. In order to measure the antifungal activity of the peptide, the pathogenic fungus Candida albicans was grown overnight in TSB medium (trypticase soy broth) at 30 ° C. and 200 rpm, and then inoculated into a new medium and grown for 3 hours. made it a breeze.

다음으로 시트레이트 포스페이트 버퍼(Citrate phosphate buffer; 9 mM sodium phosphate, 1 mM sodium citrate, pH7.4) 와 1%(w/v) type Ⅰ(low electroendosmosis) agarose, 0.03% TSB로 구성된 멸균된 언더레이 겔(underlay gel)에다 배양된 세균(4×106 colony forming units/㎖)을 넣고 혼합해준 뒤, 사각플레이트에 붓고, 언더레이 겔이 굳으면 지름 3 mm의 구멍을 내어 농도별(0, 12.5, 25, 50, 100 및 200 ㎍/㎖)로 펩타이드(스콜로펜드라신-12)를 5 ㎕씩 구멍에 넣었다. Next, a sterilized underlay consisting of citrate phosphate buffer (9 mM sodium phosphate, 1 mM sodium citrate, pH7.4), 1% (w/v) type I (low electroendosmosis) agarose, and 0.03% TSB Cultured bacteria (4×10 6 colony forming units/ml) are added to the gel (underlay gel), mixed, poured into a square plate, and when the underlay gel is hardened, a hole with a diameter of 3 mm is made and divided according to concentration (0, 12.5 , 25, 50, 100 and 200 μg/ml), and 5 μl of the peptide (scolopendracin-12) was put into the hole.

펩타이드가 확산되도록 37℃에서 3시간 배양한 후, 오버레이 겔(6 % TSB, 1 % agarose) 10 ㎖을 붓고, 37℃에서 다시 배양하여 클리어 존(clear zone)의 형성 여부를 확인하였으며 얻어진 결과를 도 1에 나타내었다.After incubation at 37°C for 3 hours to diffuse the peptide, 10 ml of overlay gel (6% TSB, 1% agarose) was poured and incubated again at 37°C to confirm the formation of a clear zone. shown in Figure 1.

도 1에 나타낸 바와 같이, 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 칸디다 알비칸스에 대하여 클리어 존(CLEAR ZONE)이 형성되었으며, 농도의존적으로 증가하는 것으로 나타났다. 이를 통해 본 발명에 따른 펩타이드 스콜로펜드라신-12가 항진균 활성이 우수함을 확인하였다. As shown in FIG. 1, the peptide scolopendracin-12 formed a clear zone for Candida albicans and was found to increase in a concentration-dependent manner. Through this, it was confirmed that the peptide scolopendracin-12 according to the present invention has excellent antifungal activity.

<< 시험예test example 2. 세포 독성 검사> 2. Cytotoxicity test>

스콜로펜드라신-12 펩타이드에 대한 세포독성을 조사하기 위해 MTS assay를 수행하였다. 세포는 휴먼 각질형성세포인 HacaT (human keratinocyte)와 마우스 섬유아세포인 NIH3T3 (mouse fibroblast)을 이용하여 진행하였고, 펩타이드는 -20℃에 보관하며, 멸균된 3차 증류수에 녹여서 사용하였다. MTS assay was performed to investigate the cytotoxicity of the scolopendracin-12 peptide. Cells were carried out using human keratinocytes HacaT (human keratinocyte) and mouse fibroblasts NIH3T3 (mouse fibroblast), and the peptides were stored at -20 ° C and used after being dissolved in sterilized tertiary distilled water.

96-well 배양용기에 2 × 104 cell/well 세포를 100 ㎕ 씩 분주한 후 스콜로펜드라신-12를 농도별(0, 50, 100 및 200 ㎍/㎖)로 24시간 동안 처리하였다. 이후 10 ㎕ CellTiter 96® AQueous One Solution Reagent (MTS) (Promega, USA)를 첨가하고 3~4시간 동안 반응시켜 색의 변화를 확인하고 흡광도(590mm)를 측정하였다. After dispensing 2 × 10 4 cell/well cells by 100 μl in a 96-well culture vessel, scolopendracin-12 was treated for 24 hours at each concentration (0, 50, 100 and 200 μg/ml). Then, 10 μl of CellTiter 96® AQueous One Solution Reagent (MTS) (Promega, USA) was added and reacted for 3 to 4 hours to confirm color change and absorbance (590 mm) was measured.

도 2에 나타낸 바와 같이, 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 HacaT, NIH3T3 세포에 대해 200 ㎍/㎖까지 고농도로 처리하여도 세포 생존율의 변화가 미미함을 보여주었다. 이를 통해, 본 발명에 따른 펩타이드 스콜로펜드라신-12는 세포독성이 미미하므로 안전한 항균, 항진균제및 항생제로 이용가능할 뿐만 아니라, 식품 또는 사료 방부제, 및 화장품 또는 의약품 보존제로서 유용하게 적용이 가능함을 확인하였다. As shown in FIG. 2, the peptide scolopendracin-12 showed little change in cell viability even when HacaT and NIH3T3 cells were treated at high concentrations up to 200 μg/ml. Through this, the peptide scolopendracin-12 according to the present invention has minimal cytotoxicity, so it can be used as a safe antibacterial, antifungal, and antibiotic, as well as being useful as a food or feed preservative, and a cosmetic or pharmaceutical preservative. Confirmed.

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Composition for Antibacterial comprising peptide, Scolopendrasin-12 isolated from Scolopendra subspinipes <130> NSH1-152 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Scolopendra subspinipes <400> 1 Met Leu Arg Leu Leu Thr Tyr Lys Leu Lys Lys 1 5 10 <110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> Composition for Antibacterial Comprising Peptides, Scolopendrasin-12 isolated from Scolopendra subspinipes <130> NSH1-152 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> artificial sequence <220> 223 <Scolopendra subspinipes> <400> 1 Met Leu Arg Leu Leu Thr Tyr Lys Leu Lys Lys 1 5 10

Claims (12)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 항균 또는 항진균용 조성물.An antibacterial or antifungal composition comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. 제4항에 있어서,
상기 펩타이드는 대장균(Escherichia coli), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa), 황색포도상구균(Staphylococcus aureus), 페렴간균(Klebsiella pneumoniae), MRSA균(Staphylococcus aureus subsp. aureus), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 장염비브리오균(Vibrio parahaemolyticus), 프로피오니박테리움 아크니스(Propionibacterium acnes), 쥐티투스균(Salmonella typhimurium) 및 시겔라 플렉스네리(Shigella flexneri)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상에 대하여 항균 활성을 나타내는 것인, 항균 또는 항진균용 조성물.
According to claim 4,
The peptide is Escherichia coli , Pseudomonas aeruginosa , Staphylococcus aureus , Klebsiella pneumoniae , MRSA, Staphylococcus aureus subsp. aureus , Bacillus subtilis , enteritis Vibrio parahaemolyticus , Propionibacterium acnes , Propionibacterium acnes , Salmonella typhimurium , and Shigella flexneri Representing antibacterial activity against any one or more selected from the group consisting of Phosphorus, antibacterial or antifungal composition.
제4항에 있어서,
상기 펩타이드는 칸디다 알비칸스(Candida albicans)에 대하여 항진균 활성을 나타내는 것인, 항균 또는 항진균용 조성물.
According to claim 4,
The peptide exhibits antifungal activity against Candida albicans , an antibacterial or antifungal composition.
서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 유효성분으로 포함하는 항생제.An antibiotic comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 항균 또는 항진균용 피부 외용제.An external skin preparation for antibacterial or antifungal use comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 식품 방부제.A food preservative comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 사료 방부제.A feed preservative comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 화장료 보존제.A cosmetic preservative comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1. 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드 스콜로펜드라신-12 (Scolopendrasin-12)를 포함하는 의약품 보존제.A pharmaceutical preservative comprising the peptide scolopendrasin-12 consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
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