KR102420820B1 - Tretinoin Potassium Salt를 유효성분으로 포함하는 피부염증 억제용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명의 Potassium all-trans retinoate(PATRA)를 포함하는 피부로부터 분비되는 염증 단백질 및 잔여피부성분이 높은 여드름 및 광노화 환자를 대상으로 하는 피부 염증억제용 조성물은 높은 피부 흡수 및 잔류도 향상과 소수성이 낮아 액 및 직접적 적용에 따른 피부에 자극이 적은 피부염증 억제 효과를 갖는다.

Description

Tretinoin Potassium Salt를 유효성분으로 포함하는 피부염증 억제용 조성물{Composition for inhibiting skin inflammation comprising Tretinoin Potassium Salt as an active ingredient.}

본 발명은 신규 화합물 Potassium all-trans retinoate(PATRA)를 포함하는 피부로부터 분비되는 염증 단백질 및 잔여피부성분이 높은 여드름 및 광노화 환자를 대상으로 하는 피부 염증억제용 조성물에 관한 것이다. 상세하게는 Potassium all-trans retinoate(Tretinoin Potassium Slat)를 포함하는 높은 피부 흡수 및 잔류도 향상과 소수성이 낮아 액 및 직접적 적용에 따른 피부에 자극이 적은 피부염증 억제를 위한 조성물에 관한 것이다.

Potassium all-trans retinoate는 all-trans 및 9-cis retinoic acid의 OH기를 때어내고 K⁺이온을 붙인 형태이다. all-trans retinoic acid는 Tretinoin이라는 명칭으로 급성 전 골수성 백혈병치료제와 여드름 치료제의 원료로 사용되고 있다. 매우 친유성 화합물로 암세포 또는 종양세포제에 직접 적용하거나 혈액을 통해 적용된 적이 없으며, 일반적으로는 경구투여제 형태로 적용되고 있다.

여드름성 질환은 나이에 국한되지 않고 세계적으로 널리 분포하고 있으며 22~24세 사이의 성인 남자 중 40%, 성인 여자 중에는 54% 정도가 경험이 있다고 한다. 여드름은 흔한 질환임에도 아직까지 발생 원인이 정확히 밝혀지지 않았는데 사춘기 이후에 호르몬 영향에 의한 피지의 분비 증가, 비정상적으로 증가한 모낭표피의 각화증 (infundibular hyperkeratosis), 모낭 내에 상주하는 박테리아인 Propionibacterium acnes (P. acnes) 등이 주요 원인으로 추측되고 있다.

2016년 10월 the University of California, San Diego의 Dr. Richard Gallo는 the journal Science Immunology에 개제된 논문 “Acne Yields Up Secret That Points to New Treatments”을 통해 P. acnes가 선천면역에 중요한 세포인 조직구와 호중구에 작용하여 염증성 사이토카인을 발생시키며 이러한 과정에는 Toll-like receptor 2 (TLR2)가 작용한다고 보고하였다.

현재 피부 염증질환 치료제는 화학적 구조에 따라 3세대 Retinoid까지 개발되었다. 1세대는 Retinol, Retinal, Tretinoin, Isotretinoin, Alitretinoin. 2세대는 Etretinate, Acitretin. 3세대는 Tazarotene, Bexarotene, Adapalene 등이다. 이 중 1세대는 주로 외용제로 사용된다

여드름 치료를 위한 국소 제형에는 clindamycin, tretinoin, 및 adapalene을 포함한 국소 항생제가 포함된다. 가장 대표적인 여드름 치료제는 retinoid이다. Retinoid 치료제에는 tretinoin과 adapalene가 여기에 포함된다. Retinoid로서 All trans Retinoic Acid (tretinoin)과 adapalene은 모두 면포 추출, 상피 각질화에 영향을 미치고 항염증 특성을 가지고 있다. 가장 최근의 여드름 치료제는 adapalene과 benzoyl peroxide의 혼합물이다.

한편, tretinoin과 adapalene에서 보고된 이상반응으로는 광 과민성, 자극, 홍반, 건조, 가려움증, 작열감 등이 있다. adapalene은 RAR TLR2 등 염증단백질과의 결합 효과를 증가시키기 위해 Retinoid의 보다 높은 소수성 형태로 합성하였다. 그러나 홍조, 박편, 작열감 및 발적과 같은 부작용은 잔여피부성분이 높으면 높을수록 부작용이 더욱 심하게 나타난다.

본 출원인에 의해 선출원 등록된 특허번호 제10-2271364 호는 "신규화합물 Potassium all-trans retinoate 및 Potassium 9-cis retinoate의 합성방법"을 개시하고있고, 등록 특허번호 제10-2311539호는 신규 화합물 Potassium all-trans retinoate 및 Potassium 9-cis retinoate를 포함하는 혈액응고 억제용 약학적 조성물을 개시한다.

본 발명은 본 출원인에 의해 개발된 Potassium all-trans retinoate의 높은 피부 흡수 및 잔류도 향상성을 활용하여 피부로부터 분비되는 염증 단백질 및 잔여피부성분이 높은 여드름 및 광노화 환자를 대상으로 피부 염증 억제 효과와 관련된 여러 실험을 실시하였다.

Candance K. Kimbrough-Green, MD; Christopher E. M. Griffiths, MD, MRCP; Lawrence J. Finkel, MD; et al, Topical retinoic acid (Tretinoin) for Melasma in Black patients, A vehicle-controlled clinical trial, Arch Dermatol. 1994;130(6):727-733. doi:10.1001/archderm.1994.01690060057005

Siddharth Mukherjee, Abhijit Date, Vandana Patravale, Hans Christian Korting, Alexander Roeder, and Gnther Weindl, Effects of topical tretinoin on non-cum-exposed protected skin of the elderly, Clinical Interventions in Aging 2006:1(4) 327-348 Satyajit S. Shetage,Matthew J. Traynor,Marc B. Brown,Mahad Raji,Diepiriye Graham-Kalio,Robert P. Chilcott, Effect of ethnicity, gender and age on the amount and composition of residual skin surface components derived from sebum, sweat and epidermal lipids, Skin Research and Technology 2014;20:97-107, doi: 10.1111/srt.12091. Ewa Jablonsk, Marzena Garley, TLRs and Bcl-2 family proteins in neutrophils of oral cavity cancer patients, PMID: 20430729 DOI: 10.2478/v10042-008-0118-8 Ratajczak-Wrona W, Jablonska E, Marcinczyk M, Grabowska Z, Piotrowski L., Role of p38 MAPK pathway in induction of iNOS expression in neutrophils and peripheral blood mononuclear cells in patients with squamous cell carcinoma of the oral cavity, J Oral Maxillofac Surg. 2009 Nov;67(11):2354-63. doi: 10.1016/j.joms.2009.04.030. Wenjie Xie, Yongsheng Wang, Yafang Huang, Hongzhen Yang, Jiaping Wang, Zhuowei Hu, Toll-like receptor 2 mediates invasion via activating NF-kappaB in MDA-MB-231 breast cancer cells, Biochem Biophys Res Commun . 2009 Feb 20;379(4):1027-32. doi: 10.1016/j.bbrc.2009.01.009. Yueh-Hsiung Kuo, Chien-Wen Chen, Yin Chu, Ping Lin, Hsiu-Mei Chiang, In Vitro and In Vivo Studies on Protective Action of N-Phenethyl Caffeamide against Photodamage of Skin, September 14, 2015, PLOS ONE | DOI:10.1371/journal.pone.0136777 Carmen Moccia and Kristina Haase, Engineering Breast Cancer On-chip―Moving Toward Subtype Specific Models, European Molecular Biology Laboratory, European Molecular Biology Laboratory Barcelona, Barcelona, Spain, published: 23 June 2021, doi: 10.3389/fbioe.2021.694218 Kirsten E. L. Garner, Nathan J. Hull, Andrew H. Sims, Rebecca Lamb & Robert B. Clarke, The Milk Protein Alpha-Casein Suppresses Triple Negative Breast Cancer Stem Cell Activity Via STAT and HIF-1alpha Signalling Pathways in Breast Cancer Cells and Fibroblasts Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia volume 24, pages245-256 (2019) Shankar Sellappan; Rebecca Grijalva; Xiaoyan Zhou; Wentao Yang; Menashe Bar Eli; Gordon B. Mills; Dihua Yu, Lineage Infidelity of MDA-MB-435 Cells: Expression of Melanocyte Proteins in a Breast Cancer Cell Line, CELL AND TUMOR BIOLOGY| MAY 17 2004

본 발명은 신규 화합물 Potassium all-trans retinoate(PATRA)를 포함하는 피부로부터 분비되는 염증 단백질 및 잔여피부성분이 높은 여드름 및 광노화 환자를 대상으로 하는 피부염증 억제용 조성물을 제공하고자한다.

본 발명은 Tretinoin Potassium Salt(Potassium all-trans retinoate)를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 염증 억제용 조성물을 제공한다.

본 발명의 피부 염증 억제용 조성물은 여드름 (Acne), 광노화 (Photoaging), 한선염 (Hidradenitis suppurativa), 취한증 (Osmidrosis) 중에서 선택되는 어느 하나의 피부 염증 억제 효과가 확인되었다. 또한, 본 발명의 피부 염증 억제용 조성물은 바르는 크림 등으로 활용할 수 있다.

Potassium all-trans retinoate(Tretinoin Potassium Slat)를 포함하는 높은 피부 흡수 및 잔류도 향상과 소수성이 낮아 액 및 직접적 적용에 따른 피부에 자극이 적은 피부염증 억제 효과를 갖는다.

도 1 MTS assay를 통한 세포의 생존 및 사멸에 대한 비교(Tretinoin & Tretinoin Potassium Salt)의 분석결과
도 2 Tretinoin과 Tretinoin Potassium Salt에 MTS에서 확인된 약물 농도 별 PCR을 통한 BCL2의 유전자 억제 정도 분석 결과
도 3 MDA-MB-231과 fibroblast 사이에서 형성되는 0.04~0.3μm 크기의 milk protein Casein를 통한 암세포의 전계 정도를 파악하는 실험 결과
도 4 마이크로 피그 내 Tretinoin 잔류도 평가 결과
도 5 Hairless Mouse 피부 내 Tretinoin 잔류도 평가 결과
도 6 Tretinoin & Tretinoin Potassium Salt의 안정성 비교 평가 결과

약물 메커니즘 관점에서 tretinoin은 세포내 결합 단백질과 핵의 retinoic acid receptors (RAR)의 작용이다. RAR은 Retinoid 의존성 유전자 발현을 조절한다. RAR은 알파, 베타, 감마 이성질체로 나뉘며 각각 Retinoid의 종류에 따라 결합력이 다르다. 단백질인 retinoic acid receptors 알파는 세포 성장, 분화 및 배아 발달에서 기관 형성에 중요한 역할을 하는 비타민 A의 유도체인 retinoic acid (Tretinoin)와 상호작용한다. 이는 표피에 분포하는 RAR 유전자 (RARg)에 대한 결합력이 다른 RAR 이성질체보다 크기 때문이다. 본 발명에서 서술하고 있는 Tretinoin Potassium Salt의 메커니즘은 tretinoin과 유사하다. 하지만 각 약물의 적용범위 및 대상에서는 큰 차이를 보인다.

본 연구를 통해 해결하고자 하는 바는 보다 높은 피부 흡수 및 잔류도 향상과 소수성이 낮아 피부에 자극이 적은 원료의약품인 Tretinoin Potassium Salt 및 이에 적합한 제형 (Formulation)을 개발하여 tretinoin의 부작용이 높은 흑인과 유색인종에 보다 효과적으로 적용하고자 한다.

특히, 흑인과 유색인은 백인에 비해 Tretinoin에 대한 염증 부작용이 매우 높다. 흑인 환자의 기미에 대한 국소 Tretinoin의 완제형 대조 임상 시험에서 기미가 있는 30명의 아프리카계 미국인에게 Tretinoin을 적용했을 때 피험자의 60%에서 피부염 부작용이 발생했다. [1, 2] 실제로 한국과 일본에서는 retinoic acid 치료법이 광노화 제품으로만 일시적으로 사용하도록 처방하고 있는 것이 사실이며, 염증 부작용으로 인해 여드름 치료 목적으로 처방은 꺼리고 있다.

유색인종에게 부작용이 발생하는 이유는 아직 명확하지 않다. 그러나 이러한 부작용이 흑인 및 유색인종과 백인의 피지세포 밀도에 있을 것으로 예상한다. 유색 피부, 특히 흑인의 경우 피지세포(피지선)가 많고 밀도가 높다. 반면에 백인의 경우 피지 세포의 수가 상대적으로 적고 밀도가 낮다. 피지선이 조밀하다고 여드름 균이나 염증에 취약하다는 의미는 아니다. 하지만 피지선의 밀도가 높으면 이로부터 분비되는 잔여피부성분이라고 하는 residual skin surface components (RSSC)가 더 많이 분비된다. 즉, 흑인이나 유색인종이 보다 백인은 RSSC가 적게 분비된다. 아래의 표는 인종별 RSSC 수치를 나타내는 표이다. [3]

Summary of residual skin surface components (RSSC) collection in three population subgroups based on ethnicity

Groups	n	RSSC (mg/cm 2 ), mean　±　SD
		Males	Females	All
African	34	0.18　±　0.07	0.12　±　0.07	0.13　±　0.07
White	135	0.09　±　0.05	0.10　±　0.07	0.10　±　0.06
Asian	97	0.12　±　0.07	0.13　±　0.08	0.12　±　0.07

흑인 및 유색인에게 보다 효과 높은 여드름 치료제 약물은 피지세포(피지선)에 자극이 적거나 없어야 하며, 피지에서 분비되는 단백질 성분과 결합력이 적으며, 표피나 진피층에서 지속성이 높아, 빛이나 열에 의해 약물이 변형되지 않아야 한다는 점이 본 연구발명의 목표이다.

1. Tretinoin과 Tretinoin Potassium Salt의 에스토로겐 비활성 세포 적용 시험

기존 Retinoid 제품의 API인 Tretinoin과 Tretinoin Potassium Salt에 대해 여드름균에서 발현되는 TLR2와 같은 cytokine protein mRNA를 발현하는 estrogen-independent cancer cells (MDA-MB-231) application test를 통해 실험을 진행하였다. 결과는 Tretinoin Potassium Salt가 기존 Tretinoin보다 관련 유전자에 더 효과적인 것으로 확인하였다.

세포사멸 PCR test를 통해 Propionibacterium acnes (P. acnes)과 한선염 (Hidradenitis suppurativa)에서 주 매체인 TLR2와 BCL2 유전자가 관여한다. TLR2는 BCL2와 같은 계열의 피부 염증단백질로 이것의 발현은 p38 mitogen-activated protein kinases (p38s)와 관련된 전사 신호 전달 경로를 활성화함으로써 조절된다. [4, 5], 즉, BCL2의 억제와 TLR2의 억제는 세포 침습 (invasive) 효과에서 유사한 메커니즘이다. [6]

본 연구발명에서는 Tretinoin과 Tretinoin Potassium Salt의 MTS assay를 통해 세포 생존 및 독성을 확인하고 PCR 검사를 통해 기존의 TLR2 유전자 억제 정도분석보다는 보다 포괄적은 피부 적용범위인 여드름 (Acne), 한선염 (Hidradenitis suppurativa), 취한증 (Osmidrosis)에서 찾아볼 수 있는 TLR2와 같은 Family gene인 BCL2의 억제 정도를 비교하여 피부세균 및 박테리아에서 분비되는 Cytokine 단백질의 발현 정도에 적용하고자 하였다.

또한 p38s는 삼투압 스트레스, 열 쇼크 및 전염증성 사이토카인과 같은 다양한 자극에 대한 세포 반응을 지시하는 데 관여하는 mitogen-activated protein kinase (MAPK)의 하위 계열 키나제로 광노화와 관련되는 UVB에 대한 염증발현 유전자 COX-2, iNOX, β-actin의 조절과 관련된다. [7] 특히 이러한 작용은 여드름 및 광노화에 의한 염증반응은 BCL2 유전자의 억제와 가장 크게 관련된다.

2. MTS assay

MTS assay를 통한 세포의 생존 및 사멸에 대한 비교(Tretinoin & Tretinoin Potassium Salt)의 분석 (표 2, 도 1)을 통해 약물이 세포에 미치는 영향과 차이점을 분석하였다.

상기 MTS assay 및 통계분석 결과를 통해 Tretinoin Potassium Salt가 Tretinoin 보다 최소 100μm(micro mole)이상에서는 세포에 안전하다는 평가를 할 수 있다. 즉, Tretinoin 보다 Tretinoin Potassium Salt가 보다 안전한 물질이다고 판명되며, 세포독성이 적다는 의미가 된다.

3. BCL2 gene PCR test

Tretinoin과 Tretinoin Potassium Salt에 MTS에서 확인된 약물 농도 100μm을 적용하여 PCR을 통한 BCL2의 유전자 억제 정도를 ANOVA. P<0.1 ~ 0.001까지 시험 Data를 통계 분석하였다(표 3, 도 2).

상기의 결과에서 아무 처리를 하지 않은 Control 군 또는 DMSO군보다도 Tretinoin을 처리한 군에서 세포사멸 및 염증반응을 발생시키는 BCL2 유전자의 발현이 상승하였다. 이 결과에서 표현하는 바는 Tretinoin은 염증반응을 발생시키는 세포와 반응하여 염증 및 정상 세포를 사멸케 한다는 것을 의미한다. 반면, Tretinoin Potassium Salt의 경우는 Control 및 DMSO군 그리고 같은 Retinoid 종인 Tretinoin 모두에 비해 BCL2 유전자의 발현을 억제한다는 것을 증명한다.

4. Migration assay

피부에서의 염증 확산 억제에 대한 시험으로 세포 Migration assay를 진행을 통해 Tretinoin과 Tretinoin Potassium Salt의 48시간(48h) 동안 3회에 거처 피부 암세포 억제 정도를 확인하였다(표 4, 도 3). 이번 시험에서 MDA-MB-231 Migration 시험은 fibroblast 세포를 Base로 배양하고 그 상단에 MDA-MB-231세포의 전계정도를 확인하는 시험으로 Organ On-Chip 형태의 chip 모형과 유사하다. [8] 이번에 실험한 Migration assay는 MDA-MB-231과 fibroblast 사이에서 형성되는 0.04~0.3μm 크기의 milk protein Casein를 통한 암세포의 전계 정도를 파악하는 실험이다.

상기의 결과를 통해 Tretinoin보다 Tretinoin Potassium Salt가 24시간에서는 약 1.5배 암세포를 억제함을 확인할 수 있었다. 무엇보다도 실험에서 Control군과 DMSO군이 Tretinoin을 적용한 군보다 적은 세포 전계(Migration) 효과를 보였다. 하지만 Tretinoin Potassium Salt는 모든 시험군 중에 가장 적은 Migration 억제 효과를 보였다.

Estrogen-independent cancer cell (MDA-MB-231)는 유방암을 발병원인 세포이기도 하다. 유방의 mammary gland뿐만 아니라 피부의 피지선에서도 milk Protein 다량 발견된다. 이와 같은 현상은 “MDA-MB-231는 milk Protein과 결합하여 염증 반응을 형성한다.”[9] 따라서 동양인, 중동 및 아프리카인과 같은 유색인종의 피부의 피지선이 많고 밀도가 조밀하다. “피부의 피지세포와 MDA-MB-231의 피부 섬유아세포 (fibroblast)에서의 염증반응과 유사하다.”[10]

이러한 결과는 본 연구에서 주장하는 유색인종의 밀도 높은 피지선이 백인에 비해 피부모공에서 발현되는 milk protein Casein과 접목되는 염증현상이라고 할 수 있으며, Tretinoin 즉, Retinoid가 milk protein Casein과 결합하여 염증반응을 증가시킨다는 것을 증명한다.

Tretinoin 및 Tretinoin Potassium Salt는 일반적으로 여드름 박테리아 (P. acnes)에 따르는 염증을 억제 및 UVB에 의한 염증 억제는 기존의 개념과 동일하다. 하지만, 이번 estrogen-independent cancer cell (MDA-MB-231) migration시험에서 Tretinoin Potassium Salt의 Potassium 이온이 Tretinoin과 milk protein과의 Binding하여 염증반응이 발생하는 현상을 억제함을 확인하였다. 즉, Tretinoin과 합성된 Potassium 이온이 Tretinoin과 반응하는 milk protein 즉, cytokine protein과 염증반응을 억제함을 증명한다.

5. Tretinoin Potassium Salt의 제형 개발 및 In vitro, In vivo 피부흡수 및 잔류도 비교평가

이번 시험에서는 Tretinoin 제품과 Tretinoin Potassium Salt 제품의 피부에서의 물리화학적 성질을 분석하여 각 약물 적용 후 피부 속에 남게 되는 잔류량을 분석하여 약물의 지속성과 유지도를 파악하고, 일반 및 열에 의한 대기환경에서 제품의 안정성을 파악하기 위한 연구를 진행하였다

Tretinoin 제품은 시중에서 가장 많이 알려진 Retinoid 제품으로 'G''사의 Stieva-A Cream 0.05% 외용제를 비교시험용으로 구매하였으며, Tretinoin Potassium Salt는 0.05%를 함유한 제형 F1(보존제 Free) 및 F2(보존제 첨가)를 아래 표와 같이 제조하였다. 특히, 보존제는 사럼에게 감염을 일으키는 Influenzavirus A형 속을 예방효과가 있는 벤조산 및 벤조산나트륨과 같은 벤조에이드를 사용하여, 총 0.2%이하로 조성을 특징으로 한다. 이번 제형에서 사용한 보존제는 Propyl-p-hydroxybenzoate과 Methyl-4-hydroxybenzoate를 사용하였다.

결과적으로 제형을 개발하여 'G'사의 Tretinoin 제품과 Tretinoin Potassium Salt F1, F2의 In vitro 및 In vivo비교 피부 잔존 평가에서 약 70% 이상 더 높은 결과를 얻었다. 그리고, 실온에서 3주간 안정성 평가에서 안정성이 약 2배 높았다.

Tretinoin Potassium Salt 크림 제형

Material	Formulation 1		Formulation 2
	무게 (g)	함량 (%)	무게 (g)	함량 (%)
Distrilled water (D.W)	35.28	70.57	35.19	70.37
Petrolatum	4.69	9.39	4.69	9.39
EDTA	0.005	0.01	0.005	0.01
Butylated Hydroxytoluene	0.005	0.01	0.005	0.01
Polyoxyethylene 40 Stearate	2.35	4.7	2.35	4.7
Stearic acid	2.35	4.7	2.35	4.7
Stearyl alcohol	2.35	4.7	2.35	4.7
Propylene glycol	2.35	4.7	2.35	4.7
Isopropyl palmitate	0.59	1.17	0.59	1.17
Propyl-p-hydroxybenzoate	-	-	0.02	0.04
Methyl-4-hydroxybenzoate	-	-	0.08	0.16
Tretinoin Potassium Salt	0.025	0.05	0.025	0.05
Total	50	100	50	100

6. 마이크로 피그 내 Tretinoin 잔류도 평가

도 4는 마이크로 피그 내 Tretinoin 잔류도 평가 결과를 나타낸다. 실험은 Tretinoin으로 분류되는 약물이 빛에 약한 성질을 가지므로 호일로 감싸 빛을 차단한 후 실험 진행하였으며, p value < 0.05 (p=0.002)로 통계적으로 유의한 차이를 보였다. 분석법은 메탄올 내 Tretinoin 농도 정량 분석법을 적용하였다.

Tretinoin 분석을 위해 Tretinoin Potassium Salt 제형 F2 50-5,000 ng/mL 농도의 메탄올 표준시료를 제조하여 전처리 후 HPLC-UV로 분석하고 Tretinoin의 피크면적으로 검량선 작성을 하고, 선형성 우수: r2 = 0.9998, 감도: 최저정량한계 50 ng/mL을 적용하였다.

마이크로피그 피부 내에서 제형 적용 시 Stieva-A 크림은 1.96 ± 0.28 μg/cm2, F2는 3.85 ± 0.40 μg/cm2 측정되어 F2의 잔류가 높게 평가되었다.

7. Hairless Mouse 피부 내 Tretinoin 잔류도 평가

도 5는 Hairless Mouse 피부 내 Tretinoin 잔류도 평가 결과를 나타낸다. 실험은 Tretinoin으로 분류되는 약물이 빛에 약한 성질을 가지므로 호일로 도포부위의 빛을 차단한 후 실험 진행하였으며, p value < 0.05 (p=0.009)로 통계적으로 유의한 차이를 보였다. 분석법은 피부조직 파쇄물 내 Tretinoin 농도 정량 분석법을 적용하였다.

Tretinoin 분석을 위해 Tretinoin Potassium Salt 제형 F2 20-5,000 ng/mL 농도의 피부조직 파쇄물 표준시료를 제조하여 전처리 후 HPLC-UV+FLD로 분석하고 Tretinoin 및 내부표준물질의 피크면적으로 검량선 작성을 작성하고, 선형성 우수: r2 = 0.9997, 감도: 최저정량한계 20 ng/mL을 적용하였다. Hairless Mouse 피부 내에서 제형 적용 시 Stieva-A 크림은 2.86 ± 0.55 μg/cm2, F2는 5.02 ± 0.57 μg/cm2 측정되어 F2의 잔류가 높게 평가되었다.

상기의 In vitro 및 In vivo Tretinoin의 잔류도 평가를 통해 얻어진 결과는 Tretinoin Potassium Salt가 Tretinoin보다 피부침투효과가 높다는 결과로 여드름 (Acne) 및 광노화 (Photoaging)뿐만 아니라 겨드랑이 및 귀바퀴, 항문주위, 유두 및 배콥주위에 도포하여 피부내 지방산과 암모니아를 배출하는 아포크린선 (Apocrine gland)에서 세균에 의해 발생하는 한선염 (Hidradenitis suppurativa) 및 취한증 (Osmidrosis)에도 적용할 수 있다.

8. Tretinoin & Tretinoin Potassium Salt의 안정성 비교 평가

도 6은 Tretinoin & Tretinoin Potassium Salt의 안정성 비교 평가 결과를 나타낸다. Stieva-A 크림과 발명 제형 F1 및 F2를 제조하여 3주 동안 실온 (23℃) 및 상온 (40℃)에서 Tretinoin의 함량변화를 분석하였다. 결과는 Stieva-A 크림은 12.4%, Tretinoin Potassium Salt F2 제형은 6.4% 감소로 Stieva-A 크림 보다 약 2배 안정적으로 평가되었다.

본 발명의 Potassium all-trans retinoate(PATRA)를 포함하는 피부로부터 분비되는 염증 단백질 및 잔여피부성분이 높은 여드름 및 광노화 환자를 대상으로 하는 피부 염증억제용 조성물은 높은 피부 흡수 및 잔류도 향상과 소수성이 낮아 액 및 직접적 적용에 따른 피부에 자극이 적은 피부염증 억제 효과를 가지므로 관련 산업상 이용가능성이 있다.

Claims (3)

1. 하기 화학식 1로 표시되는 Tretinoin Potassium Salt(Potassium all-trans retinoate)를 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 염증 억제용 조성물
   [화학식 1]
   

   

   
   
2. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 여드름 (Acne), 광노화 (Photoaging), 한선염 (Hidradenitis suppurativa), 취한증 (Osmidrosis) 중에서 선택되는 어느 하나의 피부 염증을 억제시키는 것을 특징으로 하는 피부 염증 억제용 조성물
   
3. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물은 크림제, 액제, 분말제, 캡슐제중에서 선택되는 어느 하나의 형태로 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 염증 억제용 조성물

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