KR102353942B1 - Drugs for alleviating or treating influenza virus infections, including Salicornia herbacea L. - Google Patents
Drugs for alleviating or treating influenza virus infections, including Salicornia herbacea L. Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 함초 (Salicornia herbacea L.) 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 함초 추출물은 인플루엔자 바이러스에 대한 항-바이러스 효능이 우수한바, 다양한 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료, 개선에 유용한 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로 이용될 수 있다.The present invention relates to a composition for alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease comprising an extract of green tea ( Salicornia herbacea L. ) and a method for preparing the same, and the green tea extract according to the present invention is anti-virus against influenza virus Since the effect is excellent, it can be used as a pharmaceutical composition or a food composition useful for alleviation, suppression, treatment, and improvement of various influenza virus infection diseases.
Description
본 발명은 함초 (Salicornia herbacea L.) 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 인플루엔자 바이러스 또는 오셀타미비르 (oseltamivir) 내성 인플루엔자 바이러스에 대한 항-바이러스 효능이 우수한 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease comprising an extract of green tea ( Salicornia herbacea L. ) and a method for preparing the same, and more particularly, influenza virus or oseltamivir resistance It relates to a composition having excellent anti-viral efficacy against influenza virus and a method for preparing the same.
인플루엔자 바이러스는 사람을 비롯한 포유류 및 조류에서 호흡기 감염을 일으키며 항원 소변이에 의해 매년 겨울철마다 유행성 독감을 전 세계에 걸쳐 일으킨다. Influenza viruses cause respiratory infections in mammals and birds, including humans, and cause influenza pandemics throughout the world every winter by antigenic excretion.
20세기에는 세 차례의 팬더믹 인플루엔자가 발생하였고 이로 인해 수천만 명에 이르는 사람들이 사망했다. 또한 2009년 4월에 21세기 들어 첫 번째 팬더믹 신종 인플루엔자가 발생하여 2010년 7월 기준으로 214개 국가에서 18,398명이 사망하였으며, 감염자수는 전 세계적으로 최소 백만 명 이상이 될 것으로 추정한다. 이러한 팬더믹 신종 인플루엔자는 현재까지도 국내를 포함한 세계 각 국가들에서 계절형 인플루엔자의 형태로 산발적으로 발생하고 있는 상황이다.In the 20th century, there were three pandemic influenza outbreaks that killed tens of millions of people. Also, in April 2009, the first pandemic swine influenza in the 21st century occurred, killing 18,398 people in 214 countries as of July 2010, and the number of infected people is estimated to be at least 1 million worldwide. This pandemic swine influenza is still occurring sporadically in the form of seasonal influenza in countries around the world, including Korea.
현재 가장 효과적인 인플루엔자 예방법은 예방접종이나, 바이러스가 빠른 속도로 변이하여 이전에 접종했던 백신에 의한 면역성으로 예방되지 않는 바이러스가 지속적으로 출현하고 있다. 인플루엔자 치료제의 경우 NA 저해제로 알려진 오셀타미비르 (oseltamivir) 가 있지만 오셀타미비르 내성 바이러스가 발생하고 있는 상황이다.Currently, the most effective influenza prevention method is vaccination, but viruses that are not prevented due to immunity by previously inoculated vaccines are continuously emerging as the virus mutates rapidly. In the case of influenza treatment, there is oseltamivir, known as an NA inhibitor, but an oseltamivir-resistant virus is occurring.
한편, 천연물로부터 질병을 예방 또는 억제할 수 있는 생리활성 물질에 대한 연구가 증대되고 있으며, 특히, 생리활성물질의 보고 알려진 해양식물의 탐색에 관한 연구 및 해조류로부터 질병을 억제하거나 개선시킬 수 있는 소재를 찾으려는 연구가 활발히 진행되고 있다. On the other hand, research on physiologically active substances that can prevent or suppress diseases from natural products is increasing. Research to find out is being actively conducted.
함초 (Salicornia herbacea L.)는 명아주과의 한해살이 풀로 국내 자생하는 대표적인 식용 및 약용 염생식물이다. 함초에 관한 연구는 주로 항비만, 항산화 효능, 당뇨개선, 항염증 효과가 있음이 과학적으로 입증되고 있으나, 함초 추출물의 인플루엔자 바이러스 감염 예방 또는 치료 효과를 대상으로 한 구체적인 연구는 알려진 바가 없는 실정이다.Green tea ( Salicornia herbacea L. ) is a representative edible and medicinal halophyte that is native to Korea as an annual grass of the Apiaceae family. Studies on green tea have been scientifically proven to mainly have anti-obesity, antioxidant effects, diabetes improvement, and anti-inflammatory effects, but specific studies on the prevention or treatment effect of green tea extract for influenza virus infection are not known.
이에 본 발명자들은 함초 (Salicornia herbacea L.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제조하였고, 본 발명에 따른 조성물의 인플루엔자 바이러스 및 오셀타미비르 (oseltamivir)에 대한 내성을 가진 인플루엔자 바이러스에 대한 항-바이러스 효능이 월등히 우수한 것을 확인하였다. Accordingly, the present inventors prepared a composition containing a green tea ( Salicornia herbacea L. ) extract as an active ingredient, and the influenza virus and oseltamivir of the composition according to the present invention. Anti-virus against influenza virus with resistance to It was confirmed that the efficacy was remarkably excellent.
이에, 본 발명의 목적은, 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 제공하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition containing a green tea extract as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적은, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료, 개선 또는 예방용 조성물을 제조하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preparing a composition for alleviation, suppression, treatment, improvement or prevention of influenza virus infection disease.
본 발명의 또 다른 목적은, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 개선 또는 예방방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for alleviating, suppressing, ameliorating or preventing influenza virus infection disease.
본 발명의 또 다른 목적은, 함초 추출물의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 개선 또는 예방을 위한 용도를 제공하는 것이다.Another object of the present invention, to provide a use for alleviation, suppression, improvement or prevention of influenza virus infection disease of the green tea extract.
본 발명은 함초 (Salicornia herbacea L.) 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 함초 추출물을 포함하는 조성물은 인플루엔자 바이러스에 대해 높은 항-바이러스 효능을 나타낸다. The present invention relates to a composition for alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease comprising an extract of green tea ( Salicornia herbacea L. ) and a method for preparing the same, and the composition comprising the green tea extract according to the present invention is an influenza virus. It shows high anti-viral efficacy against
본 발명자들은 이에 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 인플루엔자 바이러스 및 오셀타미비르 (oseltamivir)에 내성을 갖는 인플루엔자 바이러스에 대해서 높은 항-바이러스 효과를 나타내는 것을 확인하였다. 그리고, 본 발명에 따른 함초 추출물과 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 함께 세포에 처리했을 때, 세포생존율을 향상시키며 인플루엔자 바이러스의 복제를 억제하는 것을 확인하였다. The present inventors have confirmed that the composition containing the green tea extract as an active ingredient exhibits a high anti-viral effect against influenza virus and influenza virus resistant to oseltamivir. And, when cells were treated with a composition comprising a green tea extract and oseltamivir according to the present invention together with influenza virus, it was confirmed that the cell viability was improved and the replication of influenza virus was inhibited.
본 명세서에서 용어 "유효성분으로 포함하는"이란, 함초 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물에 포함된 함초 추출물의 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 함초 추출물을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로서 실시될 수 있다.As used herein, the term "comprising as an active ingredient" means including an amount sufficient to achieve the efficacy or activity of the green tea extract. The upper limit of the quantity of green tea extract contained in the composition of the present invention can be selected by those skilled in the art within an appropriate range. According to one embodiment of the present invention, the composition of the present invention may be implemented as a pharmaceutical composition or a food composition comprising a green tea extract as an active ingredient.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
본 발명에 따른 함초는 한해살이 풀인 퉁퉁마디 (Salicornia herbacea L.) 로서, 함초의 뿌리, 줄기, 및 잎을 모두 사용할 수 있다.The green tea according to the present invention is an annual grass, Salicornia herbacea L. , and all of the roots, stems, and leaves of green tea can be used.
함초는 염습지, 간척지, 염전에 생육하는 한해살이풀로 지중해 지방이 원산지이며, 전세계의 해안지대 염습지에 분포한다. 함초에는 콜린 (Choline)과 비테인 (Betain), 식이섬유 및 미네랄 등이 포함돼 간의 독소 해소와 지방간 치유, 항비만, 항산화, 당뇨개선, 면역기능 증강 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다. 다만, 전술한 바와 같이 함초를 이용한 인플루엔자 바이러스 감염의 치료 또는 예방에 대한 연구는 알려진 바가 없다.Green tea is an annual plant that grows in salt marshes, reclaimed land, and salt fields. Green tea contains choline, betaine, dietary fiber and minerals, and is known to be effective in resolving toxins in the liver, healing fatty liver, anti-obesity, antioxidant, improving diabetes, and enhancing immune function. However, as described above, studies on the treatment or prevention of influenza virus infection using green tea are not known.
본 명세서 상의 용어 "인플루엔자 바이러스"는, Orthomyxoviridae 과 Influenzavirus 속에 속하는 바이러스로 평균 80 내지 120 nm의 입자 직경을 가지며, 단일 가닥의 분절화된 (-) NRA 유전자가 캡시드 (capsid)에 의해 싸여 있고, 단백질의 항원성 차이에 의해 A, B 및 C형으로 구분되는 바이러스를 의미한다.As used herein, the term "influenza virus" is a virus belonging to the genus Orthomyxoviridae and Influenzavirus , has an average particle diameter of 80 to 120 nm, and a single-stranded segmented (-) NRA gene is surrounded by a capsid, and the protein It refers to a virus that is classified into A, B and C types by antigenic differences.
본 발명의 일 양태는, 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료, 개선 또는 예방용 조성물이다.One aspect of the present invention is a composition for alleviation, suppression, treatment, improvement or prevention of influenza virus infection disease containing a green tea extract as an active ingredient.
본 발명에 따른 함초 추출물은 용매 조추출물, 특정 용매 가용 추출물 (용매 분획물) 및 용매 조추출물의 용매 분획물을 포함하며, 함초 추출물은 용액, 농축물 또는 분말 상태일 수 있다.The green tea extract according to the present invention includes a solvent fraction of a crude solvent extract, a specific solvent soluble extract (solvent fraction), and a solvent fraction of a crude solvent extract, and the green tea extract may be in a solution, concentrate or powder state.
함초 추출물은 함초의 잎, 줄기 및 뿌리로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상을, 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물일 수 있다.The green tea extract may be a crude extract obtained by extracting one or more selected from the group consisting of leaves, stems and roots of green tea with one or more solvents selected from the group consisting of water and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms. .
함초의 조추출물 제조에 물과 알코올의 혼합물을 사용하는 경우에는 70% 이상 내지 100% 미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다. When a mixture of water and alcohol is used to prepare the crude extract of green tea, it may be an aqueous solution of 70% or more to less than 100% of a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms.
또한, 알코올 수용액은 메탄올 수용액, 에탄올 수용액, 프로판올 수용액, 및 부탄올 수용액으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.In addition, the aqueous alcohol solution may be at least one selected from the group consisting of a methanol aqueous solution, an ethanol aqueous solution, a propanol aqueous solution, and a butanol aqueous solution.
본 발명에 따른 함초 추출물은 용매 조추출물을 추가의 용매로 분획한 용매 분획물일 수 있으며, 예를 들어, 용매 조추출물에 클로로포름, 아세트산에틸, 및 헥세인로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물일 수 있다. The green tea extract according to the present invention may be a solvent fraction obtained by fractionating the crude solvent extract with an additional solvent, for example, using one or more solvents selected from the group consisting of chloroform, ethyl acetate, and hexane in the crude solvent extract. It may be a solvent fraction.
예를 들어, 용매 분획물은 함초를 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 용매 조추출물을 클로로포름, 아세트산에틸, 및 헥세인으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용한 용매 분획물일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.For example, the solvent fraction is a crude solvent extract obtained by extracting green tea with one or more solvents selected from the group consisting of water and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, chloroform, ethyl acetate, and 1 selected from the group consisting of hexane It may be a solvent fraction using more than one type of solvent, but is not limited thereto.
본 발명에 따른 함초의 용매 분획물은 하기 용매 분획물을 포함할 수 있다.The solvent fraction of green tea according to the present invention may include the following solvent fraction.
1) 함초의 용매 조추출물에 아세트산에틸을 첨가하여 수득한 아세트산에틸 분획물1) An ethyl acetate fraction obtained by adding ethyl acetate to a crude solvent extract of green tea
2) 함초의 용매 조추출물에 클로로포름을 첨가하여 수득한 클로로포름 분획물2) A chloroform fraction obtained by adding chloroform to a crude solvent extract of seaweed
3) 함초의 용매 조추출물에 헥세인을 첨가하여 수득한 헥세인 분획물.3) A hexane fraction obtained by adding hexane to the crude solvent extract of green tea.
본 발명의 일 구현예에서, 함초 추출물은 에탄올 용매 조추출물에 헥세인을 사용한 용매 분획물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the green tea extract may be a solvent fraction using hexane in the crude ethanol solvent extract.
특히, 함초의 에탄올 수용액 추출물, 아세트산에틸, 클로로포름 및 헥세인 분획물은 개신장세포에 바이러스와 함께 처리될 시, 세포의 생존률이 월등하게 향상되는 효과를 확인하였다. 따라서 본 발명은 함초 추출물 중에 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효과가 가장 우수한 함초 추출물을 제공한다.In particular, the ethanol aqueous solution extract, ethyl acetate, chloroform and hexane fractions of seaweed confirmed the effect of significantly improving the cell viability when treated with the virus in kidney cells. Therefore, the present invention provides a green tea extract having the best antiviral effect on influenza virus among the green tea extract.
본 발명의 다른 양태는, 다음 단계를 포함하는 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료, 예방 및 개선용 조성물 제조방법이다:Another aspect of the present invention is a method for preparing a composition for alleviation, suppression, treatment, prevention and improvement of influenza virus infection disease containing a green tea extract as an active ingredient, comprising the following steps:
함초에 제1용매를 가하여 추출물을 추출하는 추출 단계;An extraction step of extracting the extract by adding a first solvent to green tea;
본 발명의 일 구현예에서, 조성물 제조방법은 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 및 예방용 약제학적 조성물 제조방법일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the method for preparing the composition may be a method for preparing a pharmaceutical composition for alleviation, inhibition, treatment and prevention of influenza virus infection disease containing a green tea extract as an active ingredient.
본 발명의 일 구현예에서, 조성물 제조방법은 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제 및 개선용 식품 조성물 제조방법일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition preparation method may be a food composition preparation method for alleviation, suppression and improvement of influenza virus infection disease containing a green tea extract as an active ingredient.
제1용매는 물 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매일 수 있고, 예를 들어 물, 에탄올 또는 에탄올 수용액일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The first solvent may be one or more solvents selected from the group consisting of water and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, for example, water, ethanol, or an aqueous ethanol solution, but is not limited thereto.
본 발명의 일 구현예에서, 추출 단계는 냉침, 열수 추출법, 환류추출법, 상온 추출법 또는 초음파 추출법에 의해서 수행될 수 있고, 예를 들어, 열수 추출법을 이용하여 추출 단계가 수행될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the extraction step may be performed by cold chilling, hot water extraction method, reflux extraction method, room temperature extraction method or ultrasonic extraction method, for example, the extraction step may be performed using hot water extraction method, but limited thereto it's not going to be
본 발명의 일 구현예에서, 함초 추출물을 제조하는 방법은 다음 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the method for preparing a green tea extract may further include the following steps.
추출물을 여과하는 여과 단계;filtration step of filtering the extract;
본 발명의 일 구현예에서, 함초 추출물을 제조하는 방법은 다음 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the method for preparing a green tea extract may further include the following steps.
여과된 추출물을 농축하는 농축 단계;a concentration step of concentrating the filtered extract;
본 발명의 일 구현예에서, 함초 추출물을 제조하는 방법은 다음 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the method for preparing a green tea extract may further include the following steps.
추출물을 여과하는 여과 단계; 및filtration step of filtering the extract; and
여과된 추출물을 농축하는 농축 단계;a concentration step of concentrating the filtered extract;
여과 단계는 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 여과 방법으로 수행될 수 있고, 예를 들어, 가압 여과 방법으로 수행될 수 있으며, 구체적으로 감압장치에 여과막을 배치시키고 진공장치로 흡수하여 여과하는 흡수 여과방법으로 수행될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The filtration step may be performed by a filtration method commonly used in the art, for example, may be performed by a pressure filtration method, specifically, an absorption filtration method in which a filtration membrane is disposed in a pressure reducing device and absorbed by a vacuum device for filtration may be performed, but is not limited thereto.
농축 단계는 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 농축 방법으로 수행될 수 있으며, 예를 들어, 감압 농축법으로 수행될 수 있고, 구체적으로 히팅배스 내의 온도를 30 내지 40도로 설정한 뒤 감압농축기를 작동시킨 후 아스피레이터 (Aspirator)를 작동시켜 1차 농축하고, 같은 방법으로 2차 농축을 진행할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The concentration step may be carried out by a concentration method commonly used in the art, for example, it may be carried out by a reduced pressure concentration method, specifically, setting the temperature in the heating bath to 30 to 40 degrees and then operating the reduced pressure concentrator. After that, the primary concentration may be performed by operating an aspirator, and the secondary concentration may be performed in the same manner, but is not limited thereto.
본 발명의 일 구현예에서, 함초 추출물을 제조하는 방법은 다음 단계를 더 포함할 수 있다:In one embodiment of the present invention, the method for preparing a green tea extract may further include the following steps:
추출 단계에서 수득한 추출물에 제2용매를 가하여 분획물을 수득하는 분획 단계:A fractionation step of obtaining a fraction by adding a second solvent to the extract obtained in the extraction step:
제2용매는 아세트산에틸, 클로로포름, 및 헥세인으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상의 용매일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The second solvent may be one or more solvents selected from the group consisting of ethyl acetate, chloroform, and hexane, but is not limited thereto.
본 발명의 또 다른 양태는, 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방용 약제학적 조성물이다. Another aspect of the present invention is a pharmaceutical composition for alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease, containing a green tea extract as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 양태는, 함초 추출물을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방 용도이다. 본 발명에 따른 함초 추출물은 함초의 용매 조추출물 또는 분획물을 포함하며 이는 상술한 바와 같다.Another aspect of the present invention is the alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease of a pharmaceutical composition comprising a green tea extract as an active ingredient. Green tea extract according to the present invention includes a solvent crude extract or fraction of green tea, which is as described above.
본 발명의 일 구현예에서, 약제학적 조성물의 함초 추출물은 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물인 것일 수 있고, 예를 들어 물, 에탄올 또는 에탄올 수용액일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the green tea extract of the pharmaceutical composition may be a crude extract obtained by extraction with one or more solvents selected from the group consisting of water and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, for example For example, it may be water, ethanol, or an aqueous ethanol solution, but is not limited thereto.
본 발명의 일 구현예에서, 용매는 알코올 함량이 70% 이상 내지 100% 미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the solvent may be an aqueous solution of straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms and having an alcohol content of 70% or more to less than 100%.
인플루엔자 바이러스 감염 질환은 고열, 두통, 근육통 및 피로감 등의 전신 증상과 인후통, 기침, 객담 및 비염 등의 호흡기 질환일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. Influenza virus-infected diseases may be systemic symptoms such as high fever, headache, muscle pain and fatigue, and respiratory diseases such as sore throat, cough, sputum and rhinitis, but are not limited thereto.
또한, 인플루엔자 바이러스 감염 질환은 만성폐질환자, 심장질환자 및 면역저하자 등에게는 폐렴, 뇌증, 척수염 (transverse myelitis), Reye 증후군, 근염, 심근염 및 심낭염 등의 질환일 수 있으며, 소아에게는 경우 중이염, 위막성후두염 (croup) 및 근육통 등의 질환일 수 있다.In addition, influenza virus-infected diseases may be diseases such as pneumonia, encephalopathy, transverse myelitis, Reye syndrome, myositis, myocarditis and pericarditis for chronic lung disease patients, heart disease patients and immunocompromised persons, and in children, otitis media, It may be a disease such as pseudomembranous laryngitis (croup) and muscle pain.
본 발명의 일 구현예에서, 인플루엔자 바이러스는 오셀타미비르 내성 인플루엔자 바이러스일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the influenza virus may be an oseltamivir-resistant influenza virus.
본 명세서 상의 용어 "오셀타미비르 (Oseltamivir)"는 타미플루(Tamiflu)라는 상품명으로 일반적으로 알려져 있으며, IUPAC 명명법으로 ethyl (3R,4R,5S)-5-amino-4-acetamido-3-(pentan-3-yloxy)-cyclohex-1-ene-1-carboxylate 화합물을 의미하는 것으로, 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스제를 의미한다.As used herein, the term "oseltamivir (Oseltamivir)" is generally known under the trade name Tamiflu, and is ethyl (3R,4R,5S)-5-amino-4-acetamido-3-(pentan-) in the IUPAC nomenclature. 3-yloxy)-cyclohex-1-ene-1-carboxylate refers to a compound, and refers to an antiviral agent for influenza virus.
본 발명에 따른 조성물은 통상의 인플루엔자 바이러스에 항-바이러스 효능을 나타낼 뿐 아니라, 오셀타미비르에 대한 내성을 갖는 인플루엔자 바이러스에 대해서도 우수한 항-바이러스 효능을 보인다 (도 2 참조).The composition according to the present invention not only exhibits anti-viral efficacy against conventional influenza viruses, but also exhibits excellent anti-viral efficacy against influenza viruses resistant to oseltamivir (see FIG. 2 ).
본 발명의 일 구현예에서, 본 발명의 함초 추출물을 함유하는 약제학적 조성물은 오셀타미비르를 더 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the pharmaceutical composition containing the green tea extract of the present invention may further comprise oseltamivir.
본 발명에 따른 함초 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물은, 인플루엔자 바이러스가 감염된 세포의 생존율을 증가시키며, 세포내에서 바이러스 복제를 억제하는 효능이 있어, 인플루엔자 바이러스에 대한 항-바이러스 효과가 오셀타미비르 성분을 단독으로 포함하고 있는 약제학적 조성물에 비해 월등히 우수하다 (도 3 내지 9 참조).The composition comprising the green tea extract and oseltamivir according to the present invention increases the survival rate of influenza virus-infected cells and has the effect of inhibiting viral replication in cells, so that the anti-viral effect on influenza virus is exhibited by oseltami It is significantly superior to the pharmaceutical composition containing the vir component alone (see FIGS. 3 to 9).
본 발명에 따른 조성물 내의 유효성분으로서의 추출물의 함량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절될 수 있으며, 고형분 중량 기준으로 0.001 내지 99.9 중량%, 또는 0.1 내지 99.9 중량%, 예를 들어 1 내지 99 중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The content of the extract as an active ingredient in the composition according to the present invention may be appropriately adjusted depending on the type and purpose of use, the patient's condition, the type and severity of symptoms, etc., and 0.001 to 99.9 wt%, or 0.1 to 99.9 wt%, based on the solids weight %, for example, may be 1 to 99% by weight, but is not limited thereto.
본 발명에 따른 조성물의 1일 투여량은 사용 형태 및 목적, 환자 상태, 증상의 종류 및 경중 등에 의하여 적절하게 조절될 수 있으며 유효성분 함량 기준으로 1 내지 1000 μg/ml일 수 있고, 예를 들면 0.001 내지 10000 mg/kg일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The daily dosage of the composition according to the present invention may be appropriately adjusted depending on the form and purpose of use, the patient's condition, the type and severity of symptoms, etc., and may be 1 to 1000 μg/ml based on the active ingredient content, for example, It may be 0.001 to 10000 mg/kg, but is not limited thereto.
본 발명에 따른 조성물은 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여 방식은 통상적으로 사용되는 모든 방식일 수 있으며, 예컨대, 경구, 피부, 정맥, 근육, 피하 등의 경로로 투여될 수 있으며, 예를 들어 경구로 투여될 수 있다. The composition according to the present invention may be administered to mammals, including humans, by various routes. The mode of administration may be any method commonly used, for example, may be administered by routes such as oral, skin, intravenous, intramuscular, subcutaneous, and the like, for example, orally.
본 발명에 따른 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 연고제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 또는 경피제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태의 비경구 제형 등으로 제형화하여 사용될 수 있다.The composition according to the present invention can be administered in oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, ointments, suspensions, emulsions, syrups, and aerosols, or transdermal preparations, suppositories, and sterile injection solutions according to conventional methods, respectively. It can be used by formulating it in a formulation or the like.
본 발명의 일 구현예에서, 조성물은 혼합 추출물 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 및 희석제 등의 보조제를 추가로 함유하는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the composition may further contain adjuvants such as pharmaceutically suitable and physiologically acceptable carriers, excipients and diluents in addition to the mixed extract.
본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate , cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil, but is not limited thereto.
제제화할 경우에는 당업계에서 일반적으로 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용할 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형 제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스 (sucrose) 또는 락토오스 (lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있고, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the case of formulation, diluents or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants commonly used in the art may be used. Solid preparations for oral administration may include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations include at least one excipient in the extract, for example, starch, calcium carbonate, sucrose. It may be prepared by mixing sucrose, lactose, gelatin, etc., and lubricants such as magnesium stearate talc in addition to simple excipients may be used, but the present invention is not limited thereto.
경구를 위한 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 연고제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. Formulations for oral use include suspensions, solutions, emulsions, syrups, ointments, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives may be included. However, the present invention is not limited thereto.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제, 경피제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌 글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, suppositories, transdermal preparations, and the like. Non-aqueous solvents and suspending agents include, but are not limited to, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate.
좌제의 제제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The preparation of the suppository may include, but is not limited to, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like.
본 발명의 또 다른 양태는, 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제 또는 개선용 식품 조성물이다. Another aspect of the present invention, containing a green tea extract as an active ingredient, is a food composition for alleviation, suppression or improvement of influenza virus infection disease.
본 발명의 또 다른 양태는, 함초 추출물을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방 용도이다. 본 발명에 따른 함초 추출물은 함초의 용매 조추출물 또는 분획물을 포함하며 이는 상술한 바와 같다.Another aspect of the present invention is the alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease of a food composition comprising a green tea extract as an active ingredient. Green tea extract according to the present invention includes a solvent crude extract or fraction of green tea, which is as described above.
본 발명의 일 구현예에서, 식품 조성물의 함초 추출물은 물, 및 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하여 얻어진 조추출물인 것일 수 있고, 예를 들어 물, 에탄올 또는 에탄올 수용액일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the green tea extract of the food composition may be a crude extract obtained by extraction with one or more solvents selected from the group consisting of water and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, for example It may be water, ethanol, or an aqueous ethanol solution, but is not limited thereto.
본 발명의 일 구현예에서, 용매는 알코올 함량이 70% 이상 내지 100% 미만의 탄소수 1 내지 4개의 직쇄 또는 분지형 알코올 수용액일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the solvent may be an aqueous solution of straight-chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms and having an alcohol content of 70% or more to less than 100%.
본 발명의 일 구현예에서, 식품 조성물은 각종 식품, 음료, 식품 첨가제 등 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.In one embodiment of the present invention, the food composition may be various foods, beverages, food additives, etc., but is not limited thereto.
본 발명에 따른 식품 조성물은 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The food composition according to the present invention may include ingredients commonly added during food production, for example, proteins, carbohydrates, fats, nutrients, seasonings and flavoring agents, but is not limited thereto. .
본 발명에 따른 식품 조성물에 포함될 수 있는 탄수화물로는 포도당 과당 등의 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스, 올리고당 등의 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 폴리사카라이드 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 포함될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. Carbohydrates that may be included in the food composition according to the present invention include monosaccharides such as glucose fructose, disaccharides such as maltose, sucrose, and oligosaccharides, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and xylitol, sorbitol, and erythritol. Sugar alcohols such as may be included, but is not limited thereto.
본 발명에 따른 식품 조성물에 포함될 수 있는 향미제는 타우마틴, 스테비아 추출물 등의 천연 향미제 및 사카린, 아스파탐 등의 합성 향미제를 포함할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.Flavoring agents that may be included in the food composition according to the present invention may include, but are not limited to, natural flavoring agents such as tau martin and stevia extract and synthetic flavoring agents such as saccharin and aspartame.
본 발명의 또 다른 양태는, 함초 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 대상 (subject)에게 투여하는 단계를 포함하는, 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방방법이다.Another aspect of the present invention is a method for alleviating, suppressing, treating or preventing influenza virus infection, comprising administering to a subject a composition containing a green tea extract as an active ingredient.
본 명세서에서 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 대상에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미한다. 본 발명의 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방용 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다. As used herein, the term “administration” means providing a given substance to a subject by any suitable method. The administration route of the composition for alleviation, inhibition, treatment or prevention of influenza virus infection disease of the present invention may be administered orally or parenterally through any general route as long as it can reach the target tissue. In addition, the composition of the present invention may be administered using any device capable of delivering an active ingredient to a target cell.
본 명세서에서 용어 "대상"은, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 예를 들어, 포유류, 구체적으로는 인간을 의미하나, 이에 한정되는 것은 아니다.As used herein, the term "subject" includes humans, monkeys, cattle, horses, sheep, pigs, chickens, turkeys, quails, cats, dogs, mice, rats, rabbits or guinea pigs, for example, mammals, specifically means a human, but is not limited thereto.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 함초 추출물 조성물은 단독으로 투여될 수 있으나, 일반적으로 투여방식과 표준 약제학적 관행 (standard phamaceutical practice)을 고려하여 선택된 약제학적 담체와 혼합되어 투여될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the green tea extract composition of the present invention may be administered alone, but in general, it may be administered by mixing with a pharmaceutical carrier selected in consideration of the administration mode and standard pharmaceutical practice. have.
예를 들면, 본 발명의 생약 추출물 함유 조성물은 전분 또는 락토오즈를 함유하는 정제 형태로, 또는 단독 또는 부형제를 함유하는 캡슐 형태로, 또는 맛을 내거나 색을 띄게 하는 화학 약품을 함유하는 엘릭시르 또는 현탁제 형태로 경구, 구강 내 또는 혀 밑 투여될 수 있다. 이러한 액체 제제는 현탁제 (예를 들면, 메틸셀룰로오즈, 위텝솔(witepsol)과 같은 반합성 글리세라이드 또는 행인유 (apricot kernel oil)와 PEG-6 에스테르의 혼합물 또는 PEG-8과 카프릴릭/카프릭 글리세라이드의 혼합물과 같은 글리세라이드 혼합물)와 같은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 제형화 될 수 있다. For example, the composition containing the herbal extract of the present invention may be in the form of a tablet containing starch or lactose, or in the form of a capsule containing alone or an excipient, or an elixir or suspension containing a flavoring or coloring chemical. It can be administered orally, orally, or sublingually in the form of tablets. Such liquid formulations may contain suspending agents (eg, methylcellulose, semisynthetic glycerides such as witepsol or mixtures of apricot kernel oil and PEG-6 esters or PEG-8 and caprylic/capric glyceride mixtures, such as mixtures of glycerides).
본 발명의 생약 추출물 함유 조성물의 투여 용량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간간격으로 1일 1회 내지 수회로 분할 투여할 수도 있다. The dosage of the composition containing the herbal extract of the present invention may vary depending on the patient's age, weight, sex, dosage form, health condition, and disease level, and may be administered from once a day to several times a day at regular time intervals according to the judgment of a doctor or pharmacist. It may be administered in divided circuits.
예를 들어, 유효성분 함량을 기준으로 1일 투여량이 1 내지 1000 μg/ml 일 수 있으나, 이는 평균적인 경우를 예시한 것으로서 개인적인 차이에 따라 그 투여량이 높거나 낮을 수 있다.For example, the daily dose may be 1 to 1000 μg/ml based on the active ingredient content, but this is an example of an average case and the dose may be high or low depending on individual differences.
본 발명은 함초 (Salicornia herbacea L.) 추출물을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료 또는 예방용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 함초 추출물은 인플루엔자 바이러스에 대한 항-바이러스 효능이 우수한바, 다양한 인플루엔자 바이러스 감염 질환의 완화, 억제, 치료, 개선에 유용한 약제학적 조성물 또는 식품 조성물로 이용될 수 있다.The present invention relates to a composition for alleviation, suppression, treatment or prevention of influenza virus infection disease comprising an extract of green tea ( Salicornia herbacea L. ) and a method for preparing the same, and the green tea extract according to the present invention is anti-virus against influenza virus Since the effect is excellent, it can be used as a pharmaceutical composition or a food composition useful for alleviation, suppression, treatment, and improvement of various influenza virus infection diseases.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 추출물을 인플루엔자 바이러스와 반응시킨 후, 개 신장세포에 함께 처리했을 때의 세포 생존율을 보여주는 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르의 오셀타미비르 내성 바이러스에 대한 항 바이러스 효과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 동시에 개 신장세포에 처리했을 때의 세포 생존율을 보여주는 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 1.5 시간 반응시킨 후 개 신장세포에 처리했을 때의 세포 생존율을 보여주는 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르의 Plaque assay 실험 결과를 보여주는 사진이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 동시에 개 신장세포에 처리했을 때의 Plaque assay 결과를 보여주는 사진이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 1.5 시간 반응시킨 후 개 신장세포에 처리했을 때의 Plaque assay 결과를 보여주는 사진이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 동시에 개 신장세포에 처리했을 때의 Plaque assay 결과를 보여주는 그래프이다.
도 9은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물 및 오셀타미비르를 포함하는 조성물을 인플루엔자 바이러스와 1.5 시간 반응시킨 후 개 신장세포에 처리했을 때의 Plaque assay 결과를 보여주는 그래프이다.
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물을 부탄올, 물, 클로로포름, 아세트산에틸, 또는 헥세인 용매를 통해 각각 분획한 분획시료를 인플루엔자 바이러스와 함께 개 신장세포에 처리했을 때의 세포생장률을 나타내는 그래프이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 함초 에탄올 추출물을 클로로포름, 아세트산에틸, 또는 헥세인 용매를 통해 각각 분획한 분획시료와 오셀타미비르를 인플루엔자 바이러스와 함께 개 신장세포에 처리했을 때의 세포생장률을 나타내는 그래프이다.1 is a graph showing cell viability when treated with canine kidney cells after reacting a green tea extract according to an embodiment of the present invention with influenza virus.
2 is a graph showing the antiviral effect of an ethanol extract of green tea and oseltamivir on oseltamivir-resistant virus according to an embodiment of the present invention.
3 is a graph showing the cell viability when the composition comprising an ethanol extract of green tea and oseltamivir according to an embodiment of the present invention is simultaneously treated with influenza virus and canine kidney cells.
4 is a graph showing cell viability when treated with canine kidney cells after reacting a composition comprising an ethanol extract of green tea and oseltamivir with an influenza virus for 1.5 hours according to an embodiment of the present invention.
5 is a photograph showing the results of Plaque assay experiments of green tea ethanol extract and oseltamivir according to an embodiment of the present invention.
6 is a photograph showing the results of Plaque assay when a composition comprising an ethanol extract of green tea and oseltamivir according to an embodiment of the present invention was simultaneously treated with influenza virus and canine kidney cells.
7 is a photograph showing the results of Plaque assay when a composition comprising an ethanol extract of green tea and oseltamivir according to an embodiment of the present invention was reacted with influenza virus for 1.5 hours and then treated with canine kidney cells.
8 is a graph showing the results of Plaque assay when a composition comprising an ethanol extract of green tea and oseltamivir according to an embodiment of the present invention is simultaneously treated with influenza virus and canine kidney cells.
9 is a graph showing the results of Plaque assay when a composition comprising an ethanol extract of green tea and oseltamivir according to an embodiment of the present invention was reacted with influenza virus for 1.5 hours and then treated with canine kidney cells.
10 is a cell growth rate when treated with influenza virus in dog kidney cells with each fractionated sample obtained by fractionating the green tea ethanol extract according to an embodiment of the present invention through butanol, water, chloroform, ethyl acetate, or hexane solvent; is a graph representing
11 is a cell growth rate when treated with oseltamivir and influenza virus in dog kidney cells and a sample obtained by fractionation of a green tea ethanol extract according to an embodiment of the present invention through chloroform, ethyl acetate, or hexane solvent. is a graph representing
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, these examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited by these examples.
실시예 1: 함초 추출물의 제조Example 1: Preparation of green tea extract
1-1: 물추출물의 제조1-1: Preparation of water extract
함초는 주식회사 다사랑에서 구입한 것으로 추출물을 제조하였다.Green tea was purchased from Dasarang Co., Ltd. and an extract was prepared.
동결건조 함초 분말 200 g을 증류수 2L에 넣고 95℃의 온도로 중탕하여 15분 동안 추출한 다음, 여과지 (No. 2, Whatman)로 여과하여 함초 물 추출액을 얻었다. 이어 잔사에 증류수 1 L에 가하여 상기와 동일한 방법으로 재추출하였다. 상기 함초 물 추출액을 40℃에서 아스피레이터 (Aspirator)를 이용하여 감압 농축하여 함초 물 추출물을 제조하였다. 200 g of freeze-dried seaweed powder was placed in 2L of distilled water and extracted for 15 minutes by bathing at a temperature of 95°C, followed by filtration with filter paper (No. 2, Whatman) to obtain a water extract of seaweed. Then, the residue was added to 1 L of distilled water and re-extracted in the same manner as above. The green tea water extract was concentrated under reduced pressure using an aspirator at 40° C. to prepare a green tea water extract.
1-2: 알코올 추출물의 제조1-2: Preparation of alcohol extract
함초는 주식회사 다사랑에서 구입한 것으로 추출물을 제조하였다.Green tea was purchased from Dasarang Co., Ltd. and an extract was prepared.
함초 1 kg을 94% 에탄올 10 L에 가하여 상온에서 24시간 동안 추출한 다음, 여과지 (No. 2, Whatman)로 여과하여 에탄올 추출액을 얻었다. 이어 잔사에 94% 에탄올 5 L에 가하여 상기와 동일한 방법으로 재추출하였다. 이후, 함초 에탄올 추출액을 38도에서 아스피레이터 (Aspirator)를 이용하여 감압 농축하여 함초 에탄올 추출물을 제조하였다.1 kg of seaweed was added to 10 L of 94% ethanol, extracted at room temperature for 24 hours, and then filtered through filter paper (No. 2, Whatman) to obtain an ethanol extract. Then, 5 L of 94% ethanol was added to the residue, and re-extraction was performed in the same manner as above. Thereafter, the green tea ethanol extract was concentrated under reduced pressure at 38 degrees using an aspirator to prepare an herbal tea ethanol extract.
실시예 2: 함초 용매 분획물의 제조Example 2: Preparation of green tea solvent fraction
함초 용매 분획물은 함초 에탄올추출물을 증류수로 현탁시킨 다음, 헥세인, 클로로포름, 아세트산에틸, 그리고 수포화 부탄올로 순차 용매분획하여 각각의 용매 분획물을 제조하였다.For the green tea solvent fraction, each solvent fraction was prepared by suspending the green tea ethanol extract in distilled water, and then sequentially performing solvent fractionation with hexane, chloroform, ethyl acetate, and saturated butanol.
구체적인 용매분획의 제조는 다음과 같이 수행하였다.The specific solvent fraction was prepared as follows.
함초 헥세인 분획물: 함초 1kg을 94% 에탄올수용액 10L에 넣고 1주일 동안 25℃의 온도로 추출하고, 증류수 2L로 현탁시켜 분액여두에 넣은 다음 헥산 (n-hexane) 2L로 용매분획하여 헥산층을 얻었다. 이와 동일한 방법으로 실시하여 2차 및 3차 용매분획하여 헥산층을 얻은 후 1~3차 헥산층을 합한 다음, 감압농축하여 헥산 분획물을 제조하였다.Green tea hexane fraction: 1 kg of green tea is put in 10 L of 94% ethanol solution, extracted at a temperature of 25 ° C. for 1 week, suspended with 2 L of distilled water, put into a separatory funnel, and solvent fractionated with 2 L of hexane (n-hexane) to form a hexane layer got it After carrying out in the same way as the second and tertiary solvent fractionation to obtain a hexane layer, the first to tertiary hexane layers were combined, and then concentrated under reduced pressure to prepare a hexane fraction.
함초 클로로포름 분획물: 상기 헥산으로 용매분획한 다음 남은 현탁액 (수용액)에 클로로포름 (chloroform) 2 L으로 용매분획하여 클로로포름층을 얻었다. 이와 동일한 방법으로 실시하여 2차 및 3차의 클로로포름층을 얻었다. 상기 얻어진 1~3차의 클로로포름층을 합한 다음, 감압농축하여 클로로포름 분획물을 제조하였다.Green tea chloroform fraction: After solvent fractionation with hexane, the remaining suspension (aqueous solution) was solvent fractionated with 2 L of chloroform to obtain a chloroform layer. In the same manner as this, secondary and tertiary chloroform layers were obtained. The obtained 1st to 3rd chloroform layers were combined, and then concentrated under reduced pressure to prepare a chloroform fraction.
함초 아세트산에틸 분획물: 상기 클로로포름으로 용매분획한 다음 남은 현탁액 (수용액)에 아세트산에틸 (ethyl acetate) 2 L으로 용매분획하여 아세트산에틸 층을 얻었다. 이와 동일한 방법으로 실시하여 2차 및 3차의 아세트산에틸층을 얻었다. 상기 얻어진 1~3차의 아세트산에틸층을 합한 다음, 감압 농축하여 분획물을 제조하였다.Green tea ethyl acetate fraction: After solvent fractionation with chloroform, the remaining suspension (aqueous solution) was solvent fractionated with 2 L of ethyl acetate to obtain an ethyl acetate layer. It carried out in the same way as this, and the 2nd and 3rd ethyl acetate layer was obtained. The obtained 1st to 3rd ethyl acetate layers were combined, and then concentrated under reduced pressure to prepare fractions.
함초 부탄올 분획물: 상기 아세트산에틸로 용매분획한 다음 남은 현탁액(수용액)에 수포화된 부탄올 (water-saturated n-butanol) 1.5 L으로 용매분획하여 부탄올 층을 얻었다. 이와 동일한 방법으로 실시하여 2차 및 3차의 부탄올 층을 얻었다. 상기 얻어진 1~3차의 부탄올층을 합한 다음, 감압 농축하여 부탄올 분획물을 제조하였다.Seaweed butanol fraction: After solvent fractionation with ethyl acetate, the remaining suspension (aqueous solution) was solvent fractionated with 1.5 L of water-saturated n-butanol to obtain a butanol layer. In the same manner as this, secondary and tertiary butanol layers were obtained. The obtained 1st to 3rd butanol layers were combined, and then concentrated under reduced pressure to prepare a butanol fraction.
함초 물 분획물: 함초 에탄올추출물을 증류수에 현탁시킨 다음, 헥산, 클로로포름, 아세트산에틸, 그리고 수포화 부탄올로 분획한 후 남은 물층을 감압농축하여 물 분획물을 얻었다.Green tea water fraction: The green tea ethanol extract was suspended in distilled water, fractionated with hexane, chloroform, ethyl acetate, and saturated butanol, and the remaining water layer was concentrated under reduced pressure to obtain a water fraction.
실시예 3: 함초 추출물의 바이러스 감염 세포에 대한 생존율 향상 효능 평가 (MTT assay)Example 3: Evaluation of the viability improvement efficacy of the green tea extract against virus-infected cells (MTT assay)
개 신장세포를 96 웰 플레이트 (well plate)에 2x104/well의 밀도로 24 시간 배양하고, BSA, 1% PS가 첨가된 배지로 인플루엔자 바이러스를 희석하였다.Dog kidney cells were cultured in a 96-well plate at a density of 2x10 4 /well for 24 hours, and influenza virus was diluted with a medium supplemented with BSA and 1% PS.
이후 바이러스와 함초 물추출물 (100, 200, 400, 500 μg/ml) 및 에탄올 추출물 (100, 200, 400, 500 μg/ml)을 1.5 시간동안 반응시켜주었다. 이때 반응시킨 각각의 함초 물추출물 시료는 하기 표 1에 기재하였고, 함초 에탄올 추출물 시료는 하기 표 2에 기재하였다.Thereafter, the virus and water extracts of green tea (100, 200, 400, 500 μg/ml) and ethanol extracts (100, 200, 400, 500 μg/ml) were reacted for 1.5 hours. At this time, each of the green tea water extract samples reacted is described in Table 1 below, and the green tea ethanol extract samples are described in Table 2 below.
이후 반응시킨 바이러스와 함초 물추출물 및 에탄올 추출물을 개 신장세포에 처리하고 72 시간동안 배양하였다. 이후 세포생존율을 측정하는 방법인 MTT assay를 통하여 인플루엔자 바이러스를 단독 처리한 대조군(PR8)과 함초 물추출물 및 함초 에탄올 추출물을 처리한 세포의 생존율을 확인하였고, 그 결과를 하기 표 3, 표 4 및 도 1에 나타내었다.Afterwards, the reacted virus, green tea extract, and ethanol extract were treated with canine kidney cells and cultured for 72 hours. Thereafter, the viability of the cells treated with the influenza virus alone control (PR8) and the green tea water extract and the green tea ethanol extract were confirmed through the MTT assay, a method of measuring the cell viability, and the results are shown in Tables 3, 4 and 1 is shown.
실험결과, 상기 표 3, 표 4 및 도 1에서 확인할 수 있듯이, 함초 물추출물로 처리된 인플루엔자 바이러스 감염 세포의 생존율은 바이러스 단독 처리군의 생존율에 비해 다소 증가한 것을 확인할 수 있었다.As a result of the experiment, as can be seen in Tables 3, 4 and 1, the survival rate of the influenza virus-infected cells treated with the green tea water extract was confirmed to be slightly increased compared to the survival rate of the virus-only treatment group.
한편, 함초 에탄올 추출물 처리군의 개 신장세포 생존율은 추출물 처리에 의해 바이러스 단독 처리군(대조군)의 세포 생존율보다 현저히 증가함을 확인하였다. On the other hand, it was confirmed that the survival rate of dog kidney cells in the green tea ethanol extract treatment group significantly increased than the cell viability of the virus-only treatment group (control group) by the extract treatment.
특히, 함초 에탄올 추출물 500 μg/ml (E500) 및 400 μg/ml (E400) 처리했을 때의 세포 생존율이 대조군에 비해 각각 42% 및 52% 증가한 것으로 확인되어, 이들 농도로 함초 에탄올 추출물을 처리하였을 때의 세포 생존율이 가장 우수한 것을 확인할 수 있었다.In particular, it was confirmed that the cell viability increased by 42% and 52%, respectively, compared to the control when treated with 500 μg/ml (E500) and 400 μg/ml (E400) of the green tea ethanol extract, and the green tea ethanol extract was treated with these concentrations. It was confirmed that the cell viability was the best when
이들 결과로부터, 함초 추출물의 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 항바이러스 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 함초 에탄올 추출물의 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 항바이러스 효과가 월등히 우수함을 확인하였다. From these results, it was possible to confirm the antiviral effect on the influenza virus infection of the green tea extract, in particular, it was confirmed that the antiviral effect of the ethanol extract of the green tea extract against the influenza virus infection was significantly superior.
실시예 4: 함초 추출물의 오셀타미비르 내성 바이러스 감염세포에 대한 생존율 향상 효능 평가 (MTT assay)Example 4: Efficacy of improving viability of green tea extract against oseltamivir-resistant virus-infected cells (MTT assay)
개 신장세포를 96 웰 플레이트에 2x104/well의 밀도로 24 시간 배양하였으며 BSA, 1% PS가 첨가된 배지로 오셀타미비르 내성 바이러스를 희석한 후 바이러스와 상기 표 2의 함초 에탄올 추출물을 바이러스와 동시에 처리하거나 1.5 시간 동안 반응시킨 바이러스와 함초 에탄올 추출물을 개 신장세포에 처리하고, 72 시간 동안 배양하였다. 이후 세포생존율을 측정하는 방법인 MTT assay를 통하여 세포의 생존율을 확인하였고 그 결과를 하기 표 5 및 도 2에 나타내었다.Dog kidney cells were cultured in a 96-well plate at a density of 2x10 4 /well for 24 hours, and oseltamivir-resistant virus was diluted with a medium supplemented with BSA and 1% PS. Simultaneously treated or reacted for 1.5 hours with the virus and green tea ethanol extract were treated with canine kidney cells, and cultured for 72 hours. Thereafter, cell viability was confirmed through MTT assay, a method for measuring cell viability, and the results are shown in Table 5 and FIG. 2 below.
실험결과, 상기 표 5 및 도 2에서 확인할 수 있듯이, 함초 에탄올 추출물 처리에 의해서 인플루엔자 바이러스가 내성을 가짐에도, 개 신장세포의 생존율이 증가함을 확인하였다. As a result of the experiment, as can be seen in Table 5 and FIG. 2, it was confirmed that the survival rate of dog kidney cells was increased even though the influenza virus was resistant to the treatment with the green tea ethanol extract.
대조군인 오셀타미비르 내성 바이러스와 오셀타미비르 처리 군에서는 세포생존율이 10% 미만이었으나, 함초 에탄올 추출물을 처리한 군은, 함초 에탄올 추출물을 바이러스와 동시에 처리한 군과 1.5 시간 반응 후 처리한 군 모두에서 생존율이 증가하였다. In the control group, oseltamivir-resistant virus and oseltamivir-treated group, the cell viability was less than 10%, but in the group treated with the green tea ethanol extract, both the group treated with the green tea ethanol extract simultaneously with the virus and the group treated after 1.5 hours of reaction survival rate was increased.
특히, 함초 에탄올 추출물을 각각 500, 400 μg/ml 농도로 바이러스와 1.5 시간 반응 후 처리했을 때의 세포의 생존율이 약 40%까지 증가함을 확인하였다. In particular, it was confirmed that the cell viability increased by about 40% when the green tea ethanol extract was treated with the virus at a concentration of 500 and 400 μg/ml, respectively, for 1.5 hours.
이들 결과로부터, 오셀타미비르에 내성을 갖지 않는 인플루엔자 바이러스뿐 아니라 오셀타미비르 내성 인플루엔자 바이러스에 대해서도 함초에탄올 추출물의 항 바이러스 효과는 유지되며, 그 효과도 월등히 우수한 것을 확인할 수 있다.From these results, it can be confirmed that the antiviral effect of the green tea ethanol extract is maintained not only for the influenza virus not resistant to oseltamivir but also to the oseltamivir-resistant influenza virus, and the effect is also significantly superior.
실시예 5: 함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르 조합 시 바이러스 감염세포의 생존율 향상 효능 및 바이러스 복제능력 억제 효능 평가 (MTT assay, Plaque assay)Example 5: Evaluation of the efficacy of improving the viability of virus-infected cells and the inhibition of virus replication ability when the ethanol extract of seaweed and oseltamivir are combined (MTT assay, Plaque assay)
함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르 조합의 세포생존율 향상 효능과 인플루엔자 바이러스 복제능력의 억제 효능을 확인하고자 하였다. The purpose of this study was to confirm the cell viability improvement effect and the inhibitory effect of influenza virus replication ability of the combination of green tea ethanol extract and oseltamivir.
개 신장세포는 96 웰 플레이트에 2x104/well의 밀도로 24 시간 배양하였다. 그리고, BSA, 1% PS가 첨가된 배지로 인플루엔자 바이러스를 희석하였다.Dog kidney cells were cultured in a 96-well plate at a density of 2x10 4 /well for 24 hours. Then, the influenza virus was diluted with a medium to which BSA and 1% PS were added.
이후 함초 에탄올 추출물과 바이러스를 동시처리 또는 1.5 시간 반응시킨 함초 에탄올 추출물과 바이러스를 개 신장세포에 오셀타미비르 0.1mM 또는 0.2mM와 함께 처리하였다. 72 시간 배양 후 배지를 수거하여 MTT assay를 통하여 개 신장세포의 생존율을 측정하고, plaque assay를 수행하였다. Thereafter, the green tea ethanol extract and the virus were co-treated or 1.5 hours of reaction with the green tea ethanol extract and virus were treated with oseltamivir 0.1mM or 0.2mM in dog kidney cells. After culturing for 72 hours, the medium was collected, and the viability of dog kidney cells was measured through MTT assay, and plaque assay was performed.
Plaque assay는 12 웰 플레이트에 3x105/well의 밀도로 24 시간 배양하였다. BSA, 1% PS가 첨가된 배지로 수거한 샘플을 희석한 후 1 시간 동안 세포에 처리한 후 bacto agar가 포함된 배지를 넣어서 굳힌 다음 72 시간 배양 후에 염색하였다. 염색이 완료되면 plaque 개수를 확인하여 바이러스 역가를 측정하였다.Plaque assay was incubated for 24 hours at a density of 3x10 5 /well in a 12-well plate. After diluting the collected sample with a medium supplemented with BSA and 1% PS, the cells were treated for 1 hour, then a medium containing bacto agar was added to harden, and incubated for 72 hours before staining. After staining was completed, the number of plaques was checked and the virus titer was measured.
함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르를 포함하는 조성물의 세포생존율을 실험한 결과, 표 6 내지 7 및 도 3 내지 4에서 확인할 수 있듯이, 함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르를 포함하는 조성물에 의하여 세포생존율이 90~100%까지 증가함을 확인하였다. 또한, 함초와 바이러스를 동시에 처리한 군과 1.5 시간 반응 후 처리한 군 모두에서 생존율이 증가하였다.As a result of testing the cell viability of the composition containing the green tea ethanol extract and oseltamivir, as can be seen in Tables 6 to 7 and FIGS. 3 to 4, the cell viability was 90 by the composition containing the green tea ethanol extract and oseltamivir. It was confirmed that the increase was up to ~100%. In addition, the survival rate was increased in both the group treated with green tea and the virus at the same time and the group treated after 1.5 hours of reaction.
이러한 결과로, 함초에탄올 추출물과 오세타미비르 조합의 항 바이러스 효능은 오셀타미비르를 단독으로 처리했을 때의 항 바이러스 효능보다 월등히 우수함을 확인하였다.As a result, it was confirmed that the antiviral efficacy of the green tea ethanol extract and osetamivir combination was significantly superior to the antiviral efficacy when oseltamivir was treated alone.
그리고, 표 8 내지 9 및 도 5 내지 9에서 확인할 수 있듯이, plaque assay를 통해 인플루엔자 바이러스 복제능력 억제 효능을 평가한 결과, 함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르 조합하여 처리한 군은 plaque 개수가 크게 감소하였다. 또한, 함초와 바이러스를 동시에 처리한 군과 1.5 시간 반응 후 처리한 군 모두에서 plaque 개수가 크게 감소하였다.And, as can be seen in Tables 8 to 9 and FIGS. 5 to 9, the influenza virus replication ability inhibitory efficacy was evaluated through plaque assay. As a result, the group treated with the green tea ethanol extract and oseltamivir combination significantly reduced the number of plaques. . In addition, the number of plaques was significantly reduced in both the group treated with green tea and virus at the same time and the group treated after 1.5 hours of reaction.
이들 결과로, 함초 에탄올 추출물과 오셀타미비르 조합은 오셀타미비르를 단독으로 처리한 것에 비하여 세포 생존율을 월등히 향상시키는 동시에, 인플루엔자 바이러스의 복제능력을 크게 억제하는 것으로 확인할 수 있다.From these results, it can be confirmed that the green tea ethanol extract and oseltamivir combination significantly improved the cell viability compared to treatment with oseltamivir alone, and at the same time greatly inhibited the replication ability of influenza virus.
실시예 6: 함초 용매 분획물의 바이러스 감염 세포에 대한 생존율 향상 효능 평가 (MTT assay)Example 6: Evaluation of the viability improvement efficacy of the green tea solvent fraction against virus-infected cells (MTT assay)
개 신장세포는 96 웰 플레이트에 2x104/well의 밀도로 24 시간 배양하였다. 그리고, BSA, 1% PS가 첨가된 배지로 인플루엔자 바이러스를 희석하였다.Dog kidney cells were cultured in a 96-well plate at a density of 2x10 4 /well for 24 hours. Then, the influenza virus was diluted with a medium to which BSA and 1% PS were added.
이후, 부탄올, 물, 클로로포름, 아세트산에틸, 헥세인 용매로 각각 분획한 분획시료 분획물 1 내지 15를 바이러스와 1.5 시간 동안 반응시켜주었다.Thereafter,
이때 반응시킨 각각의 함초 용매 분획물 시료 및 시료 각각의 농도는 하기 표 10에 기재하였다.At this time, each of the green tea solvent fraction samples and the concentrations of each of the samples reacted are shown in Table 10 below.
이후, 1.5 시간동안 반응시킨 각각의 함초 용매 분획시료와 바이러스를 개 신장세포에 처리하고 72 시간동안 배양하였다. 이후 MTT assay를 통해 인플루엔자 바이러스를 단독 처리한 대조군(PR8)과 각각의 함초 용매 분획시료를 처리한 세포의 생존율을 확인하였고, 그 결과를 하기 표 11 및 도 10에 나타내었다. Thereafter, each of the green tea solvent fraction samples and virus reacted for 1.5 hours were treated with canine kidney cells and cultured for 72 hours. Thereafter, the survival rate of the cells treated with the influenza virus alone control (PR8) and each glasswort solvent fraction sample was confirmed through MTT assay, and the results are shown in Table 11 and FIG. 10 below.
실험 결과, 상기 표 11 및 도 10에서 확인할 수 있듯이, 함초 용매 분획시료 중 부탄올 또는 물 분획시료인 분획물 1 내지 6은 세포의 생존율이 바이러스 단독 처리군과 차이가 없었다.As a result of the experiment, as can be seen in Table 11 and FIG. 10, the cell viability of
하지만, 클로로포름, 아세트산에틸, 또는 헥세인 분획시료인 분획물 7 내지 15를 처리한 실험군은 개 신장세포의 생존율이 증가함을 확인했다. However, it was confirmed that the experimental group treated with chloroform, ethyl acetate, or fractions 7 to 15, which is a hexane fraction sample, increased the survival rate of canine kidney cells.
특히, 헥세인 분획시료 (분획물 13 내지 15)에서 개 신장세포의 생존율이 농도 의존적으로 증가하였으며, 세포 생존율이 월등히 향상됨을 확인할 수 있었다. 따라서, 헥세인 분획시료의 인플루엔자 바이러스 감염에 대한 항바이러스 효과를 가짐을 확인하였다.In particular, in the hexane fraction sample (fractions 13 to 15), the survival rate of canine kidney cells increased in a concentration-dependent manner, and it was confirmed that the cell viability was significantly improved. Therefore, it was confirmed that the hexane fraction has an antiviral effect on influenza virus infection.
실시예 7: 함초 용매 분획물과 오셀타미비르 조합 시 바이러스 감염 세포에 대한 생존율 향상 효능 평가 (MTT assay)Example 7: Evaluation of the efficacy of improving the viability of virus-infected cells in combination with the green tea solvent fraction and oseltamivir (MTT assay)
개 신장세포는 96 웰 플레이트에 2x104/well의 밀도로 24 시간 배양하였다. 그리고, BSA, 1% PS가 첨가된 배지로 인플루엔자 바이러스를 희석하였다.Dog kidney cells were cultured in a 96-well plate at a density of 2x10 4 /well for 24 hours. Then, the influenza virus was diluted with a medium to which BSA and 1% PS were added.
이후, 클로로포름 용매 분획시료인 분획물 7 내지 9 및 헥세인 용매 분획시료인 분획물 13 내지 15 중 하나의 분획시료를 오셀타미비르와 함께 개신장세포에 바이러스와 동시에 처리하거나, 바이러스와 1.5 시간 동안 반응시킨 후 개신장세포에 처리하고, 72 시간동안 배양하였다. Thereafter, one of Fractions 7 to 9, which is a chloroform solvent fraction sample, and Fractions 13 to 15, which is a hexane solvent fraction sample, was simultaneously treated with oseltamivir in kidney cells with virus or reacted with the virus for 1.5 hours. Then, the kidney cells were treated and cultured for 72 hours.
이때, 처리한 오셀타미비르의 농도는 처리시 52 내지 56%의 세포생존율을 가지는 농도인 0.1 mM로 처리하였다. 이후 MTT assay를 통해 인플루엔자 바이러스를 단독 처리한 대조군(PR8)과 각각의 함초 용매 분획시료를 처리한 세포의 생존율을 확인하였고, 그리고 그 결과를 하기 표 12 및 도 11에 나타내었다. At this time, the concentration of the treated oseltamivir was treated with 0.1 mM, which is a concentration having a cell viability of 52 to 56% during the treatment. Thereafter, the survival rate of the cells treated with the influenza virus alone control (PR8) and each glasswort solvent fraction sample was confirmed through MTT assay, and the results are shown in Tables 12 and 11 below.
실험 결과, 상기 표 12 및 도 11에서 확인할 수 있듯이, 동시처리군 및 1.5시간 반응 후 처리군 모두에서 분획물 7 내지 9, 또는 분획물 13 내지 15를 오셀타미비르와 함께 처리했을 때 세포 생존률이 증가함을 확인하였으며, 세포 생존율은 분획물 7 내지 9를 처리한 군에서는 95 내지 117% 증가하였고, 분획물 13 내지 15를 처리한 군에서는 67 내지 108%까지 증가함을 확인하였다. As a result of the experiment, as can be seen in Table 12 and FIG. 11, cell viability increased when fractions 7 to 9, or fractions 13 to 15, were treated with oseltamivir in both the co-treatment group and the treatment group after 1.5 hours of reaction. was confirmed, and the cell viability increased by 95 to 117% in the group treated with fractions 7 to 9, and increased to 67 to 108% in the group treated with fractions 13 to 15.
소결sintering
이상의 결과로, 본 발명에 따른 함초 추출물은 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효과가 우수함을 알 수 있다. 그리고, 본 발명에 따른 함초 추출물은 오셀타미비르에 내성을 갖는 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효과 또한 우수하며, 본 발명에 따른 함초 추출물을 오셀타미비르와 조합할 경우 단독으로 처리된 오셀타미비르 보다 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효과가 크게 상승하는 것을 알 수 있다.As a result, it can be seen that the green tea extract according to the present invention has excellent antiviral effect against influenza virus. In addition, the green tea extract according to the present invention has excellent antiviral effect against influenza virus resistant to oseltamivir, and when the green tea extract according to the present invention is combined with oseltamivir, influenza than oseltamivir treated alone It can be seen that the antiviral effect against the virus is greatly increased.
또한, 본 발명에 따른 함초 용매 분획물, 특히 클로로포름, 아세트산에틸, 헥세인 분획물은 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효과가 우수하며, 이들 분획물을 오셀타미비르와 조합할 경우, 오셀타미비르를 단독으로 처리한 경우 보다 인플루엔자 바이러스에 대한 항바이러스 효과가 월등이 상승되는 것을 확인할 수 있었다. In addition, the green tea solvent fractions according to the present invention, particularly chloroform, ethyl acetate, and hexane fractions, have excellent antiviral effects against influenza virus, and when these fractions are combined with oseltamivir, oseltamivir alone It was confirmed that the antiviral effect on the influenza virus was significantly higher than that of the case.
따라서, 본 발명에 따른 함초 추출물은 인플루엔자 바이러스에 대한 항 바이러스 효과가 우수하여, 인플루엔자 바이러스 감염의 완화, 억제, 치료, 예방 및 개선용 조성물로써 사용이 기대된다.Therefore, the green tea extract according to the present invention has excellent antiviral effect on influenza virus, and is expected to be used as a composition for alleviation, suppression, treatment, prevention and improvement of influenza virus infection.
Claims (13)
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| Alex. J. Fd. Sci. & Technol., 2016, Vol.13, No.1, pp.1-7.* |
| Bulletin of Food Technology, 2007, Vol.20, No.4, pp.85-91.* |
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