KR102332846B1 - Method for Manufacturing Animal Model of Gastroesophageal Reflux Disease Induced by Overeating - Google Patents
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Abstract
본 발명은 위식도역류질환 동물모델의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 비수술적인 방법인 과식에 의해 유도된 위식도역류질환 마우스 모델의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 과식에 의해 유도된 위식도역류질환 마우스 모델은 제조가 용이하고, 장기간 생존율이 우수하므로 위식도역류질환 연구 및 치료제 개발에 매우 유용하다.The present invention relates to a method for manufacturing an animal model of gastroesophageal reflux disease, and more particularly, to a method for manufacturing a mouse model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating, which is a non-surgical method. Gastroesophageal reflux disease mouse model induced by overeating according to the present invention is easy to manufacture and has excellent long-term survival rate, so it is very useful for gastroesophageal reflux disease research and development of therapeutic agents.
Description
본 발명은 위식도역류질환 동물모델의 제조방법에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 비수술적인 방법인 과식에 의해 유도된 위식도역류질환 마우스 모델의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for manufacturing an animal model of gastroesophageal reflux disease, and more particularly, to a method for manufacturing a mouse model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating, which is a non-surgical method.
위식도역류질환이란 위산이나 위 속의 내용물이 식도로 역류하여 가슴 안쪽으로 타는 듯한 통증이나 쓰림을 일으키는 질환으로, 역류가 지나치게 많이 일어나 식도로 넘어온 위산과 위 속 내용물이 식도점막을 자극하여 쓰리고 아픈 증상을 일으키고, 심할 경우 식도염, 식도궤양, 협착 등을 일으키는 질병이다. 이러한 증상으로 인한 진단 방법은 가슴 쓰림과 산 역류라는 특징적인 증상이 있으면 위산역류질환을 의심할 수 있다. 이러한 증상은 눕거나 앞으로 구부릴 때 심해지고, 물을 마시거나 제산제를 복용하면 좋아지는 효과를 나타낸다. 현재까지 이용되는 진단 방법인 내시경 검사는 위산역류로 인해 일어난 식도손상을 확인하는 가장 객관적인 방법이지만, 위식도역류질환 환자의 반 수 이상에서는 미란성 식도염이 관찰되지 않는 정상소견을 나타낸다는 제한점이 있다 (Dent J et al., Gut 54:710-717, 2005; Fujiwara Y et al., Am J Gastroenterol 100:754-758, 2005; Okamoto K et al., Dig Dis and Sci 48:2237-2241, 2003). Gastroesophageal reflux disease (GERD) is a disease in which stomach acid or contents from the stomach reflux into the esophagus, causing burning pain or soreness in the chest. It is a disease that causes esophagitis, esophageal ulcer, stricture, etc. in severe cases. As for the diagnosis method due to these symptoms, if there are characteristic symptoms such as heartburn and acid reflux, acid reflux disease can be suspected. These symptoms worsen when lying down or bending forward, and are improved by drinking water or taking antacids. Endoscopy, the diagnostic method used so far, is the most objective method to confirm esophageal damage caused by acid reflux, but has a limitation that erosive esophagitis is not observed in more than half of patients with gastroesophageal reflux disease. (Dent J et al., Gut 54:710-717, 2005; Fujiwara Y et al., Am J Gastroenterol 100:754-758, 2005; Okamoto K et al., Dig Dis and Sci 48:2237-2241, 2003 ).
현재까지 보고된 바에 따르면, 위식도역류질환 동물모델로 수술적인 방법을 이용하여 발생시킨 역류성 식도염 모델의 제시가 있었다 (Hai-Qing Hu et al., J Thorac Dis . 10(3): 1607-1613, 2018; He J et al., JoVE 102:e53012, 2015; Koji Takeuchi et al., Biomed Res Int . 2014; 532594, 2014). 마우스와 같은 동물에서는 자연적으로 발생하는 위식도역류질환의 존재에 대한 기록이 없기 때문에 인위적으로 모델을 제작해야 한다. 그러나, 수술적인 방법을 이용한 모델은 생존율이 낮기 때문에 장기간의 연구를 하기에는 어려움이 있다는 단점이 있다.According to reports so far, a model of gastroesophageal reflux disease generated using a surgical method as an animal model for gastroesophageal reflux disease has been presented (Hai-Qing Hu et al., J Thorac Dis . 10(3): 1607-1613). , 2018; He J et al., JoVE 102:e53012, 2015; Koji Takeuchi et al., Biomed Res Int . 2014; 532594, 2014). Since there is no record of the existence of naturally occurring gastroesophageal reflux disease in animals such as mice, artificial models must be created. However, the surgical method has a disadvantage in that it is difficult to conduct a long-term study because the survival rate is low.
이에, 본 발명자들은 위식도역류질환의 한계 개선 연구에 사용할 수 있는 장기간 생존율이 우수한 동물모델을 제조하기 위해 예의 노력한 결과, 비수술적인 방법이며, 위식도역류질환의 원인으로 알려진 과식을 유발하여 위식도역류질환 마우스 모델을 확립하였다.Accordingly, the present inventors have made intensive efforts to prepare an animal model with excellent long-term survival rate that can be used for limit improvement studies of gastroesophageal reflux disease. A reflux disease mouse model was established.
본 발명의 목적은 위식도역류질환의 연구, 치료제 및 치료방법을 개발하기 위하여, 실험동물에서 과식을 유도하는 비수술적인 방법으로 생존율이 우수한 위식도역류질환 동물모델을 제조하는 방법 및 상기 방법으로 제조된 위식도역류질환 동물모델을 제공하는데 있다.It is an object of the present invention to prepare an animal model for gastroesophageal reflux disease with excellent survival rate by a non-surgical method for inducing overeating in experimental animals, in order to develop a study, therapeutic agent and treatment method for gastroesophageal reflux disease To provide an animal model of gastroesophageal reflux disease.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법으로 제조된 위식도역류질환 동물모델을 이용하여 위식도역류질환 치료제를 스크리닝하는 방법을 제공하는데 있다.Another object of the present invention is to provide a method for screening a gastroesophageal reflux disease therapeutic agent using the gastroesophageal reflux disease animal model prepared by the above method.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 금식과 식이를 반복하여 실험동물의 과식을 유도하는 단계; 및 (b) 과식에 의해 위식도역류질환이 유발된 실험동물을 위식도역류질환 동물모델로 선별하는 단계를 포함하는 위식도역류질환 동물모델의 제조방법을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention comprises the steps of (a) inducing overeating of experimental animals by repeating fasting and dieting; And (b) provides a method for producing an animal model of gastroesophageal reflux disease, comprising the step of selecting an experimental animal induced by gastroesophageal reflux disease as a gastroesophageal reflux disease animal model.
본 발명은 또한, 상기 방법으로 제조된 위식도역류질환 동물모델을 제공한다.The present invention also provides an animal model of gastroesophageal reflux disease prepared by the above method.
본 발명은 또한, (a) 상기 위식도역류질환 동물모델에 위식도역류질환 치료제 후보물질을 투여하는 단계; (b) 상기 위식도역류질환 치료제 후보물질이 투여된 동물모델의 위 식도 조직 손상을 확인하는 단계; 및 (c) 후보물질 미처리 동물모델의 위 식도 조직과 비교하여 조직 손상이 완화되는 경우의 후보물질을 위식도역류질환 치료제로 선별하는 단계를 포함하는 위식도역류질환 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.The present invention also comprises the steps of (a) administering a gastroesophageal reflux disease drug candidate to the gastroesophageal reflux disease animal model; (b) checking the gastroesophageal tissue damage of the animal model to which the gastroesophageal reflux disease drug candidate is administered; and (c) selecting a candidate substance as a therapeutic agent for gastroesophageal reflux disease when tissue damage is alleviated compared to the gastric esophageal tissue of an animal model untreated with the candidate substance.
본 발명에 따른 과식에 의해 유도된 위식도역류질환 마우스 모델은 제조가 용이하고, 장기간 생존율이 우수하므로 위식도역류질환 연구 및 치료제 개발에 매우 유용하다.The mouse model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating according to the present invention is easy to manufacture and has excellent long-term survival rate, so it is very useful for research on gastroesophageal reflux disease and development of therapeutic agents.
도 1은 위식도역류질환 동물모델 확립을 위한 4개 그룹의 식이 조건을 나타낸 모식도이다.
도 2는 위식도역류질환 동물모델 각 그룹의 체중 변화를 확인한 것이다.
도 3은 과식으로 유발시킨 위식도역류질환 동물모델의 하부 식도를 H&E 염색으로 관찰한 것이다.
도 4는 과식으로 유발시킨 위식도역류질환 동물모델의 위와 식도 변화를 확인한 것이다.1 is a schematic diagram showing the dietary conditions of four groups for establishing an animal model of gastroesophageal reflux disease.
Figure 2 confirms the weight change of each group of gastroesophageal reflux disease animal model.
3 is an observation of the lower esophagus of an animal model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating by H&E staining.
Figure 4 confirms the changes in the stomach and esophagus of the gastroesophageal reflux disease animal model induced by overeating.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In general, the nomenclature used herein is those well known and commonly used in the art.
본 발명에서는 위식도역류질환 연구 및 치료제 개발을 위한 위식도역류질환 동물모델을 제작하였다. 기존의 수술적인 방법을 이용한 동물모델은 생존율이 낮기 때문에 장기간의 연구를 하기에는 어려움이 있으므로, 이러한 한계를 극복할 수 있는 비수술적인 방법인 과식을 유발하여 위식도역류질환 동물모델을 제작하였다. 구체적으로 살펴보면 도 1에 나타낸 것과 같이, 마우스에 금식과 식이를 8주 이상 반복하여 과식에 의해 유도되는 위식도역류질환을 유발시켰다. 그 결과, 24시간 금식과 24시간 식이를 8주 이상 반복하여 과식을 유도한 마우스 그룹에서 위식도역류질환이 유발되었다. 이는 수술적인 방법을 이용하여 유발시킨 위식도역류질환 동물모델의 결과와 유사하였다.In the present invention, an animal model of gastroesophageal reflux disease was prepared for the study of gastroesophageal reflux disease and the development of therapeutic agents. Animal models using conventional surgical methods have a low survival rate, making it difficult to conduct long-term studies. Therefore, a non-surgical method that can overcome these limitations, overeating, was induced to produce an animal model for gastroesophageal reflux disease. Specifically, as shown in FIG. 1 , fasting and feeding were repeated in mice for 8 weeks or more to induce gastroesophageal reflux disease induced by overeating. As a result, gastroesophageal reflux disease was induced in the mouse group inducing overeating by repeating 24-hour fasting and 24-hour dieting for more than 8 weeks. This was similar to the results of an animal model of gastroesophageal reflux disease induced using a surgical method.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, (a) 금식과 식이를 반복하여 실험동물의 과식을 유도하는 단계; 및 (b) 과식에 의해 위식도역류질환이 유발된 실험동물을 위식도역류질환 동물모델로 선별하는 단계를 포함하는 위식도역류질환 동물모델의 제조방법에 관한 것이다.Accordingly, the present invention, in one aspect, (a) inducing overeating of the experimental animal by repeating fasting and diet; And (b) relates to a method of manufacturing an animal model of gastroesophageal reflux disease, comprising the step of selecting an experimental animal induced by gastroesophageal reflux disease as a gastroesophageal reflux disease animal model.
본 발명에서는 과식을 유발하기 위해 금식 시간을 각각 다르게 하여 과식에 의한 위식도역류질환을 유도하였다. In the present invention, gastroesophageal reflux disease caused by overeating was induced by different fasting times to induce overeating.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계는 20 ~ 28시간 동안 금식과 20 ~ 28시간 식이를 반복하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 24시간 금식과 24시간 식이를 반복하는 것이나, 이에 한정되는 것은 아니다. In the present invention, in the step (a), it is preferable to repeat the fasting for 20 to 28 hours and the diet for 20 to 28 hours, and more preferably repeat the fasting for 24 hours and the diet for 24 hours, but is limited thereto no.
본 발명에 있어서, 상기 (a) 단계의 금식과 식이의 반복은 8주 이상 진행하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the fasting and repetition of the diet in step (a) is preferably performed for 8 weeks or more, but is not limited thereto.
또한, 본 발명에서 금식 시간이 24시간으로 동일한 경우에도 식이 시간이 24시간 이상일 경우, 과식에 의한 위식도역류질환 정도가 미미하였다. 마찬가지로, 본 발명에서 금식과 식이가 반복 진행되는 기간이 8주 이하일 경우에는 과식에 의한 위식도역류질환 정도가 미미하였다. In the present invention, even when the fasting time was the same as 24 hours, when the fasting time was 24 hours or more, the degree of gastroesophageal reflux disease caused by overeating was insignificant. Similarly, in the present invention, when the period of repeated fasting and dieting was 8 weeks or less, the degree of gastroesophageal reflux disease caused by overeating was insignificant.
본 발명의 식이는 일반적인 정상 식이를 공급하였다.The diet of the present invention supplied a normal normal diet.
본 발명에 있어서, 상기 식이는 한 케이지 당 18g 마우스 5 마리를 기준으로 먹이 70g 및 물 200ml을 24시간 동안 공급하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. In the present invention, the diet is preferably supplied for 24 hours with 70 g of food and 200 ml of water based on 5 18 g mice per cage, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 상기 동물은 마우스, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지 및 염소로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 비인간 동물인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the animal is preferably at least one non-human animal selected from the group consisting of mouse, rat, guinea pig, monkey, dog, cat, rabbit, cow, sheep, pig and goat, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 마우스가 아닌 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지 및 염소로 구성된 군에서 선택된 하나 이상으로 진행할 경우, 먹이 및 물의 양을 몸무게에 비례하여 증가시킬 수 있다.In the present invention, when one or more selected from the group consisting of non-mouse rats, guinea pigs, monkeys, dogs, cats, rabbits, cows, sheep, pigs and goats, the amount of food and water can be increased in proportion to the body weight. have.
마우스, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 포유동물은 일정한 성질을 지닌 개체가 안정적으로 공급되고, 실험할 때에 사육이나 처리가 쉽다는 등의 이유 때문에 모델 동물로서 바람직하다. 본 발명의 구체적인 실시예에서는 마우스 (C57BL6, 6주령)를 사용하였으나 이에 제한되지 않는다. 모델 동물을 제작하기 전의 사육 조건은 통상적인 방법에 따라 선택하면 되고 특별히 한정되지 않지만, 균질의 모델 동물을 얻기 위해서는 가능한 한 각 개체를 동일한 조건하에서 사육하는 것이 바람직하다.Mammals such as mice, rats, guinea pigs, monkeys, dogs, cats, rabbits, cows, sheep, pigs, goats, etc. are stably supplied with individuals with certain characteristics and are easy to breed or handle during experiments. It is preferred as a model animal. In a specific embodiment of the present invention, a mouse (C57BL6, 6 weeks old) was used, but the present invention is not limited thereto. Breeding conditions prior to production of the model animal may be selected according to a conventional method and are not particularly limited, but in order to obtain a homogeneous model animal, it is preferable to breed each individual under the same conditions as much as possible.
본 발명은 다른 관점에서, 상기 과식에 의해 유도되는 위식도역류질환 동물모델 제조방법으로 제조된 위식도역류질환 동물모델에 관한 것이다.In another aspect, the present invention relates to an animal model of gastroesophageal reflux disease prepared by the method for preparing an animal model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating.
본 발명에 관한 모델 동물은 위식도역류질환 연구의 피험 약제의 약효 평가에 적합한 것이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 형태의 것이어도 사용할 수 있다. 예컨대, 마우스, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 소, 양, 돼지 및 염소로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 비인간동물 어느 것이나 사용할 수 있다.The model animal according to the present invention is not particularly limited as long as it is suitable for evaluation of the drug efficacy of a test drug in a gastroesophageal reflux disease study, and any type of animal can be used. For example, any one or more non-human animals selected from the group consisting of mouse, rat, guinea pig, monkey, dog, cat, rabbit, cow, sheep, pig and goat may be used.
본 발명의 과식에 의해 유도되는 위식도역류질환 동물모델은 종래의 수술로 유발시킨 위식도역류질환 동물모델에 비해 장기간 생존이 가능하므로, 장기간의 연구에 사용 가능하다. 따라서, 위식도역류질환 치료제 개발에서 약제의 효과를 평가할 수 있는 기간이 연장되고, 치료제의 효과를 안정적으로 평가할 수 있다.The animal model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating of the present invention can be used for a long-term study because it can survive for a long time compared to the animal model of gastroesophageal reflux disease induced by conventional surgery. Therefore, in the development of a treatment for gastroesophageal reflux disease, the period for evaluating the effect of the drug is extended, and the effect of the drug can be stably evaluated.
본 발명은 또 다른 관점에서, (a) 제5항의 위식도역류질환 동물모델에 위식도역류질환 치료제 후보물질을 투여하는 단계; (b) 상기 위식도역류질환 치료제 후보물질이 투여된 동물모델의 위 식도 조직 손상을 확인하는 단계; 및 (c) 후보물질 미처리 동물모델의 위 식도 조직과 비교하여 조직 손상이 완화되는 경우의 후보물질을 위식도역류질환 치료제로 선별하는 단계를 포함하는 위식도역류질환 치료제의 스크리닝 방법에 관한 것이다.In another aspect, the present invention comprises the steps of: (a) administering a gastroesophageal reflux disease drug candidate to the gastroesophageal reflux disease animal model of
본 발명의 모델 동물을 이용한 평가방법의 대상이 되는 피험 약제는 특별히 제한되지 않고, 위식도역류질환에 대한 치료 효과를 평가하는 목적을 갖는 것이면 어떠한 것이어도 된다. 위식도역류질환을 치유하는 것을 목적으로 조제된 1종류 이상의 유효성분을 함유하는 조성물은 그 대상에 포함된다. The test drug to be subjected to the evaluation method using the model animal of the present invention is not particularly limited, and any drug may be used as long as it has the purpose of evaluating the therapeutic effect on gastroesophageal reflux disease. Compositions containing one or more active ingredients formulated for the purpose of curing gastroesophageal reflux disease are included in the subject matter.
통상 의약품이나 의약부외품을 가리키는데, 특정 보건용 식품(기능성 식품), 특정 영양 보조 식품, 건강 식품 등과 같은 보조 식품 등도 포함된다. It usually refers to pharmaceuticals or quasi-drugs, but also includes food for specific health uses (functional food), specific nutritional supplements, and supplements such as health food.
당연히 기존의 작용 메커니즘을 갖는 약제뿐 아니라 신규 작용 메커니즘을 갖는 약제를 스크리닝할 수도 있다.Naturally, not only drugs having an existing mechanism of action but also drugs having a novel mechanism of action can be screened.
투여 시기나 투여 횟수 등의 투여 조건은 약제의 성질, 시험 및 평가 목적 등에 따라 적절하게 최적이 되도록 설정하면 되며 특별히 제한되지 않는다. 예컨대, 투여 시기에 대해서는 모델 동물 제작 직후부터 30분 마다 수회 투여한 후, 그 다음 1시간 마다 수회 투여하고, 그때마다 증상의 변화를 관찰, 평가하는 방법이 많이 이용될 수 있다. 투여 횟수에 대해서는 약제의 성질에 따라 다르고, 1회 이상 수회가 될 수도 있다. The administration conditions such as the administration time and the number of administrations may be set appropriately and optimally according to the properties of the drug, the purpose of testing and evaluation, and the like, and are not particularly limited. For example, as for the timing of administration, a method of administering several times every 30 minutes immediately after the production of the model animal, then administering several times every hour thereafter, and observing and evaluating the change in symptoms each time can be widely used. The frequency of administration varies depending on the nature of the drug, and may be one or more times.
[실시예][Example]
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, and it will be apparent to those of ordinary skill in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
실시예Example 1: 과식에 의한 위식도역류질환 유발 1: Induction of gastroesophageal reflux disease by overeating
과식을 유발하기 위해 마우스 (C57BL6, 6주령)를 4가지 조건의 그룹으로 나누었다. 그룹 1은 일반적인 조건으로 마우스를 사육한 대조군이며, 그룹 2 내지 4는 도 1의 모식도를 바탕으로 과식을 유발시켰다. 각 그룹당 6마리의 마우스로 실험하였으며, 2, 4, 8주뒤 안락사하여 결과를 확인하였다.To induce overeating, mice (C57BL6, 6 weeks old) were divided into groups of 4 conditions.
각 그룹별 먹이 섭취량 (70g) 및 음수량 (200ml)의 기준을 정하여 24시간 후, 줄어든 양을 측정하였으며, 마우스의 몸무게도 측정하였다. 이러한 측정은 하루에 한번씩 2주~8주 동안 실시하였다. After 24 hours, the amount of food intake (70g) and drinking water (200ml) for each group was determined and the reduced amount was measured, and the weight of the mouse was also measured. These measurements were performed once a day for 2 to 8 weeks.
그 결과, 대조군 그룹 1의 몸무게는 꾸준히 증가하였으며, 과식을 유발시킨 그룹 2 내지 4의 몸무게는 안먹는 날에 비해 먹는 날의 무게가 증가하였다 (도 2). 하루 차이로 굶고, 먹는 그룹 2의 몸무게는 하루 평균 3~4g이 변하였으며, 이틀을 굶고 하루를 먹는 그룹 3의 무게 또한 3~4g이 변하였다. 즉, 하루 더 굶는 것에 비례하여 몸무게가 줄지는 않음을 확인한 것이다. 실험 결과의 경향은 종료 시점인 8주까지 동일하였다.As a result, the weight of the
실시예Example 2: 위식도역류질환 동물모델의 적합성 확인 2: Confirmation of suitability of gastroesophageal reflux disease animal model
실시예 1에서 과식을 유발한 그룹 1 내지 4의 마우스를 2, 4, 8주 각 종료 시점에 안락사시킨 후, 장기 위와 가까운 하부 식도를 적출하여 최적 표준 방법으로 알려진 H&E 염색 기법을 이용하여 조직학적 변화를 관찰하였다. After euthanizing the mice of
그 결과, 2주와 4주의 종료 시점에는 각 그룹별로 조직학적 변화가 관찰되지 않았다. 그러나, 8주 종료 시점에는 그룹 2의 하부 식도에서 상피세포의 손상이 관찰되었으며, 이러한 손상이 점막하층의 손상에도 영향을 미치는 것을 확인하였다 (도 3).As a result, no histological changes were observed for each group at the end of 2 weeks and 4 weeks. However, at the end of 8 weeks, damage to the epithelial cells was observed in the lower esophagus of
실시예Example 3: 위식도역류질환 동물모델의 최적 조건 확립 3: Establishment of optimal conditions for gastroesophageal reflux disease animal model
과식으로 유발시킨 위식도역류질환 동물모델의 최적 조건 확립 및 확인을 위해, 각 종료시점 이후 조직 변화를 유발할 수 있는 장기의 크기 및 조직 손상 유무에 대해 확인하였다.In order to establish and confirm the optimal conditions for an animal model of gastroesophageal reflux disease induced by overeating, the size of an organ that can cause tissue change after each end point and the presence or absence of tissue damage were checked.
그 결과, 2주 및 4주의 종료시점에서는 그룹 간의 차이점을 확인할 수 없었다. 그러나, 8주 종료시점에서 그룹 2의 장기 위의 크기가 커져 있는 것을 관찰할 수 있었으며, 식도 안쪽의 조직 손상이 유발됨을 확인하였다 (도 4). 이러한 식도 안쪽의 조직 손상 결과는 이전 보고된 수술로 유발시킨 위식도역류 질환 랫트 (Rat) 모델의 식도 손상 결과와 유사한 결과를 나타냈다.As a result, no differences were found between the groups at the end of 2 weeks and 4 weeks. However, at the end of 8 weeks, it was observed that the size of the stomach of the
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.As described above in detail a specific part of the content of the present invention, for those of ordinary skill in the art, it is clear that this specific description is only a preferred embodiment, and the scope of the present invention is not limited thereby. something to do. Accordingly, it is intended that the substantial scope of the present invention be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (7)
(a) 금식과 식이를 반복하여 실험동물의 과식을 유도하는 단계; 및
(b) 과식에 의해 위식도역류질환이 유발된 실험동물을 위식도역류질환 동물모델로 선별하는 단계;
여기서, 상기 동물은 마우스, 랫트, 모르모트, 원숭이, 개, 고양이 및 돼지로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 함.
A method for preparing an animal model of gastroesophageal reflux disease, comprising the following steps:
(a) inducing overeating of experimental animals by repeating fasting and feeding; and
(b) selecting an experimental animal induced with gastroesophageal reflux disease by overeating as an animal model for gastroesophageal reflux disease;
Here, the animal is characterized in that it is selected from the group consisting of a mouse, a rat, a guinea pig, a monkey, a dog, a cat and a pig.
The method according to claim 1, wherein in step (a), fasting for 20 to 28 hours and fasting for 20 to 28 hours are repeated for 8 to 12 weeks:
The method according to claim 2, wherein the diet is provided with 70 g of food and 200 ml of water for 24 hours based on 5 mice.
An animal model of gastroesophageal reflux disease prepared by the method of claim 1.
(a) 제5항의 위식도역류질환 동물모델에 위식도역류질환 치료제 후보물질을 투여하는 단계;
(b) 상기 위식도역류질환 치료제 후보물질이 투여된 동물모델의 위 식도 조직 손상을 확인하는 단계; 및
(c) 후보물질 미처리 동물모델의 위 식도 조직과 비교하여 조직 손상이 완화되는 경우의 후보물질을 위식도역류질환 치료제로 선별하는 단계.
A screening method for a therapeutic agent for gastroesophageal reflux disease, comprising the steps of:
(a) administering a gastroesophageal reflux disease drug candidate to the gastroesophageal reflux disease animal model of claim 5;
(b) checking the gastroesophageal tissue damage of the animal model to which the gastroesophageal reflux disease drug candidate is administered; and
(c) selecting a candidate substance as a therapeutic agent for gastroesophageal reflux disease when tissue damage is alleviated compared to the gastroesophageal tissue of an animal model untreated with the candidate substance.
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| 대한한의학회지 제39권 제2호 페이지 92-105 2018. |
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