KR102296181B1 - Cell culture system using complex stimulus - Google Patents

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Abstract

본 발명은 복합 자극을 이용한 세포 배양 시스템 에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 배양액 펌핑부 및 클램프부를 포함하여 튜브 내에서 배양되는 세포에 배양액 흐름에 따른 전단 응력 및 주기적인 수축 이완의 압력 등의 복합 자극을 인가하면서 세포를 배양할 수 있는 세포 배양 시스템에 관한 것이다.
본 발명에 의한 세포 배양 시스템은 생체 내 환경과 유사한 환경을 제공하여 줄기 세포의 심근 세포로의 분화를 촉진하는 효과를 나타낸다.The present invention relates to a cell culture system using a complex stimulus, and more particularly, to a cell cultured in a tube, including a culture medium pumping unit and a clamp unit, a complex stimulus such as shear stress and periodic contraction/relaxation pressure according to the flow of the culture medium. It relates to a cell culture system capable of culturing cells while applying.
The cell culture system according to the present invention provides an environment similar to an in vivo environment and exhibits an effect of promoting differentiation of stem cells into cardiomyocytes.

Description

복합 자극을 이용한 세포 배양 시스템{CELL CULTURE SYSTEM USING COMPLEX STIMULUS}Cell culture system using complex stimulation {CELL CULTURE SYSTEM USING COMPLEX STIMULUS}

본 발명은 복합 자극을 이용한 세포 배양 시스템 에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 배양액 펌핑부 및 클램프부를 포함하여 튜브 내에서 배양되는 세포에 배양액 흐름에 따른 전단 응력 및 주기적인 수축 이완의 압력 등의 복합 자극을 인가하면서 세포를 배양할 수 있는 세포 배양 시스템에 관한 것이다.
The present invention relates to a cell culture system using a complex stimulus, and more particularly, to a cell cultured in a tube, including a culture medium pumping unit and a clamp unit, a complex stimulus such as shear stress and periodic contraction/relaxation pressure according to the flow of the culture medium. It relates to a cell culture system capable of culturing cells while applying.

심장 질환은 서양 세계에서 가장 심각한 건강 관심사 중 하나이다. 6100만 미국인들 (거의 5명의 남성 및 여성 중에 한명) 이 한 가지 이상의 유형의 심혈관 질환을 가진 것으로 추산된다 (National Health and Nutrition Examination Survey III, 1988-94, Center of Disease Control and the American Heart Association). 널리 알려진 병상에는 관상동맥질환 (1240만명), 선천성 심혈관 결함 (100만명), 및 울혈성 심부전 (470만명)이 포함된다. 재생 의약의 연구에 대한 집중적인 도전은 상기 병상에서 심장 기능을 재건하는 것을 도울 수 있는 세포 조성물을 개발하는 것이다.Heart disease is one of the most serious health concerns in the Western world. It is estimated that 61 million Americans (nearly one in five men and women) have one or more types of cardiovascular disease (National Health and Nutrition Examination Survey III, 1988-94, Center of Disease Control and the American Heart Association) . Popular conditions include coronary artery disease (12.4 million), congenital cardiovascular defects (1 million), and congestive heart failure (4.7 million). An intensive challenge for the study of regenerative medicine is to develop cellular compositions that can help rebuild cardiac function in these conditions.

급성심근경색 이후에 진행하는 심부전의 발생률은 지속해서 늘어나는 추세이나, 현재까지의 치료는 이미 비가역적인 상태로 경색상태에 이른 심근을 재생할 수 없다는 점에 한계가 있어, 심부전이 진행하는 경우 심장이식 이외에는 특별한 대안이 없는 상태이다. Although the incidence of heart failure that progresses after acute myocardial infarction continues to increase, current treatments have limitations in that they cannot regenerate myocardium that has already reached an irreversible and infarcted state. There is no special alternative.

이러한 기존 치료의 한계를 극복하고자 줄기세포를 이용한 혈관 재생 및 심근 재생이 그 대안으로 모색되기 시작하였다(Myeong-Chan Cho). 심근경색 모델을 이용한 동물실험에서는 골수 유래 중간엽 줄기세포가 심근에서 심근 특이 단백질을 발현하며 심근기능을 향상시킨다고 보고되었고(Hainan Piao et al., Korean Circulation J., 2004, 34(11), 1113-212), 몇몇 임상 연구에서는 심근경색 후 골수 유래 또는 말초혈액 줄기세포를 주입한 결과 심근기능의 호전을 보인다는 사실이 보고되었다(Sang Hong Baek).To overcome the limitations of these existing treatments, vascular regeneration and myocardial regeneration using stem cells began to be sought as alternatives (Myeong-Chan Cho). In animal experiments using a myocardial infarction model, it was reported that bone marrow-derived mesenchymal stem cells express myocardial-specific proteins in the myocardium and improve myocardial function (Hainan Piao et al., Korean Circulation J., 2004, 34(11), 1113). -212), some clinical studies have reported that myocardial function is improved as a result of injection of bone marrow-derived or peripheral blood stem cells after myocardial infarction (Sang Hong Baek).

그러나, 중간엽 줄기세포는 원천 조직에 따라서 그의 세포 생리학적 및 분화적 특성에 차이가 있다고 알려져 있으므로(Kern et al., Stem Cells, 2006, 24, 1294-1301), 모든 중간엽 줄기세포가 이러한 특성을 가진다고는 단정할 수 없다. 또한, 심근으로 주입된 배아줄기세포의 분화 효율은 매우 낮은 것으로 알려져, 골수 유래 줄기 세포로부터 대량의 심혈관 세포를 획득하거나 높은 효율로 심혈관 세포를 얻기에는 한계가 있는 실정이다.However, since mesenchymal stem cells are known to have differences in their cell physiology and differentiation characteristics depending on the source tissue (Kern et al., Stem Cells, 2006, 24, 1294-1301), all mesenchymal stem cells It cannot be concluded that there is a characteristic. In addition, the differentiation efficiency of embryonic stem cells injected into the myocardium is known to be very low, so there is a limit to obtaining a large amount of cardiovascular cells from bone marrow-derived stem cells or obtaining cardiovascular cells with high efficiency.

이에 본 발명자들은 생체 내 심근 세포의 물리적, 화학적 환경을 시험관 내(in vitro)에서 구현하여 배양액 흐름에 의한 전단 응력 및 주기적으로 변화되는 압력을 가하면 골수 유래 중간엽 줄기세포가 심혈관 세포로의 우수한 분화능을 나타낸다는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
Therefore, the present inventors implemented the physical and chemical environment of cardiomyocytes in vivo and applied shear stress and periodically changed pressure due to the flow of the culture medium to induce excellent differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells into cardiovascular cells. was found to indicate that and completed the present invention.

본 발명은 상기와 같은 과제를 해결하기 위하여 배양액 펌핑부 및 클램프부를 포함하여 튜브 내에서 배양되는 세포에 전단 응력 및 주기적인 수축 이완의 압력등의 복합 자극을 인가할 수 있는 세포 배양 시스템을 제공하는 것을 목적으로 한다.
The present invention provides a cell culture system capable of applying complex stimuli such as shear stress and periodic contraction and relaxation pressure to cells cultured in a tube, including a culture medium pumping unit and a clamp unit, in order to solve the above problems aim to

본 발명은 상기와 같은 과제를 해결하기 위하여 The present invention in order to solve the above problems

세포 배양액 이동 튜브; cell culture transfer tube;

세포 배양액을 보관하는 배양 용기 보관부; Culture vessel storage unit for storing the cell culture solution;

상기 배양 용기 보관부로부터 상기 세포 배양액 이동 튜브로 배양액을 펌핑하기 위한 펌프부; a pump unit for pumping the culture medium from the culture vessel storage unit to the cell culture medium transfer tube;

상기 세포 배양액 이동 튜브 내로 펌핑된 배양액의 흐름을 개폐하는 클램프부; 및a clamp unit for opening and closing the flow of the culture solution pumped into the cell culture solution moving tube; and

상기 펌프부와 상기 클램프부 사이의 상기 세포 배양액 이동 튜브에 포함되는 세포 배양 스캐폴드; 를 포함하는 세포 배양 시스템을 제공한다. a cell culture scaffold included in the cell culture medium transfer tube between the pump unit and the clamp unit; It provides a cell culture system comprising a.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템은 상기 펌프부 및 상기 클램프부에 연결되는 제어부를 더 포함하는 것을 특징으로 한다. The cell culture system according to the present invention further comprises a control unit connected to the pump unit and the clamp unit.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 펌프는 페리스탈틱 펌프 인 것을 특징으로 한다. In the cell culture system according to the present invention, the pump is characterized in that the peristaltic pump.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 제어부는 상기 세포 배양 스캐폴드에 주기적인 펌핑 압력을 인가하도록 상기 펌프부의 펌핑과 상기 클램프부에 의한 펌프의 개폐를 조절하는 것을 특징으로 한다. 즉, 본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 제어부는 상기 페리스탈틱 펌프에 의한 배양 튜브로의 배양액의 공급 압력 및 상기 클램프부의 개폐를 조절함으로써 상기 세포 배양 스캐폴드에 주기적인 압력이 인가되도록 조절하는 것을 특징으로 한다. In the cell culture system according to the present invention, the controller controls the pumping of the pump unit and opening and closing of the pump by the clamp unit to apply a periodic pumping pressure to the cell culture scaffold. That is, in the cell culture system according to the present invention, the control unit controls the supply pressure of the culture solution to the culture tube by the peristaltic pump and the opening and closing of the clamp unit so that periodic pressure is applied to the cell culture scaffold. characterized by regulating.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 제어부는 상기 세포 배양 부의 내경 및 멤브레인 등을 고려하여 0.3 ~ 300 dyne/cm2 범위의 유체 전단 응력 및 상기 세포 배양부에 진자식(oscillating) 압력 변화를 나타내도록 상기 펌프부의 펌핑과 상기 클램프부에 의한 배양액 흐름의 개폐를 조절하는 것을 특징으로 한다. In the cell culture system according to the present invention, the control unit considers the inner diameter and membrane of the cell culture unit, and the fluid shear stress in the range of 0.3 to 300 dyne/cm 2 and the oscillating pressure change in the cell culture unit. It characterized in that to control the opening and closing of the culture medium flow by the pumping and the clamp unit to show the pump.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템은 사용자 인터페이스를 더 포함할 수 있다. 일실시예에서, 조작자는 사용자 인터페이스에 명령함으로써 세포 배양부에 공급될 배양액의 양을 특정할 수 있다. 상기 사용자 인터페이스는 세포 배양부에 원하는 양의 액체를 정확하게 채우기 위해 펌핑율(pumping rate)을 제어하는 제어부에 연결될 수 있다. The cell culture system according to the present invention may further include a user interface. In one embodiment, the operator may specify the amount of culture medium to be supplied to the cell culture unit by instructing the user interface. The user interface may be connected to a control unit for controlling a pumping rate to precisely fill the cell culture unit with a desired amount of liquid.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에서 배양되는 세포는 골수유래 중간엽 줄기세포, 배아줄기세포, 역분화 줄기세포, 제대혈 유래 중간엽 줄기세포 등 분화능을 가진 줄기 세포라면 제한없이 배양할 수 있다.
Cells cultured in the cell culture system according to the present invention can be cultured without limitation as long as they have differentiation ability, such as bone marrow-derived mesenchymal stem cells, embryonic stem cells, dedifferentiated stem cells, and cord blood-derived mesenchymal stem cells.

이하에서는 본 발명을 도면에 의하여 더욱 상세히 설명한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the drawings.

도 1은 본 발명에 의한 세포 배양 시스템을 모식적으로 나타낸다. 도 1에서 보는 바와 같이 본 발명에 의한 세포 배양 시스템은 세포 배양액 이동 튜브(100), 세포 배양액을 보관하는 배양 용기 보관부(200), 상기 배양 용기 보관부로부터 상기 세포 배양액 이동 튜브로 배양액을 펌핑하기 위한 펌프부(300), 상기 세포 배양액 이동 튜브 내로 펌핑된 배양액의 흐름을 개폐하는 클램프부(400), 및 상기 펌프부와 상기 클램프부 사이의 상기 세포 배양액 이동 튜브에 포함되는 세포 배양부(500)를 포함한다. 1 schematically shows a cell culture system according to the present invention. As shown in FIG. 1 , the cell culture system according to the present invention pumps a cell culture medium transfer tube 100 , a culture vessel storage unit 200 for storing the cell culture medium, and the culture medium from the culture vessel storage unit to the cell culture medium transfer tube. A pump unit 300 for doing so, a clamp unit 400 for opening and closing the flow of the culture medium pumped into the cell culture medium transfer tube, and a cell culture unit included in the cell culture medium transfer tube between the pump unit and the clamp unit ( 500).

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 펌프부(300)는 정량 이송 펌프를 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 경우 상기 정량 이송 펌프는 페리스탈틱 펌프인 것이 상기 세포 배양 스캐폴드에 심근 세포 배양을 위한 진자식(oscillating) 압력 인가를 위해 바람직하다.In the cell culture system according to the present invention, it is preferable that the pump unit 300 uses a quantitative transfer pump. In the present invention, it is preferable that the metering transfer pump is a peristaltic pump for applying an oscillating pressure for culturing cardiomyocytes to the cell culture scaffold.

상기 튜브형 정량이송펌프인 페리스탈틱 펌프는 병원 또는 실험실등에서 혈액과 같은 특정 용액속에 존재하는 물질 성분을 분석하기 위해 자동으로 검체 또는 용액등을 이송하는 장치로서, 탄성을 가진 상기 세포 배양액 이동 튜브를 통해 염화폴리비닐 등과 같은 가요성 플라스틱 재료로 통상 제조되는 탄성 관을 통해 배양액을 펌핑하도록 작동한다. 상기 탄성 관은 한정된 부분을 따라 반복적으로 압축 및 팽창된다. 관은 통상적으로 팽창되거나 내부 탄성에 의해 원상 복원되며, 이러한 과정을 통해서 세포 배양 스캐폴드에 주기적인 압력을 인가하게 된다.The peristaltic pump, which is a tubular quantitative transfer pump, is a device that automatically transfers a sample or solution to analyze a substance component present in a specific solution such as blood in a hospital or laboratory. It operates to pump the culture solution through an elastic tube usually made of a flexible plastic material such as polyvinyl chloride or the like. The elastic tube is repeatedly compressed and expanded along a defined portion. The tube is usually expanded or restored by internal elasticity, and through this process, periodic pressure is applied to the cell culture scaffold.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 클램프(400)는 상기 펌핑부의 동작에 따라 탄성관을 따라 흐르는 배양액의 흐름을 개폐하는 것으로서, 특별히 형상이 제한되는 것은 아니다. 도 2 에 본 발명의 일 실시예에 의한 클램프의 사시도, 도 3에는 본 발명의 일 실시예에 의한 클래프에 의한 배양액의 흐름을 개폐하는 과정을 나타내었다. 도 2 및 도 3 에서 보는 바와 같이 클램프부(400)는 배양액 이동 튜브 관통부와 홈을 포함하는 철부(410);와, 상기 홈으로 삽입 분리가능한 요부(420) 및 상기 요부와 철부를 주기적으로 움직이도록 하는 구동부(430)로 구성되고, 도 3에서 보는 바와 같이 상기 배양액 이동 튜브 관통부에 배양액 이동 튜브가 삽입된 상태에서 상기 요부와 철부가 결합시에는 배양액의 흐름이 멈춰지고, 상기 요부와 철부가 분리시에는 배양액의 흐름이 재개된다. In the cell culture system according to the present invention, the clamp 400 opens and closes the flow of the culture solution flowing along the elastic tube according to the operation of the pumping unit, and the shape is not particularly limited. FIG. 2 is a perspective view of a clamp according to an embodiment of the present invention, and FIG. 3 shows a process of opening and closing the flow of the culture solution by the clamp according to an embodiment of the present invention. As shown in FIGS. 2 and 3 , the clamp unit 400 includes a convex portion 410 including a culture medium moving tube penetrating portion and a groove; and a recess 420 that can be inserted and detached into the groove, and the recessed and convex portions periodically Consists of a driving unit 430 to move, as shown in FIG. 3 , when the recess and the convex part are coupled in a state in which the culture solution moving tube is inserted into the culture medium moving tube penetrating part, the flow of the culture medium stops, and the recess and the When the iron part is separated, the flow of the culture medium is resumed.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템에 있어서, 상기 세포배양부(500)는 관형태의 스캐폴드와 같은 형태이거나 플레이트와 같은 일반 챔버 형태일 수 있으며, 또한, 탄성 재료로 제조거나, 비탄성 재료로 제조되는 것이 모두 가능하다. 탄성 재료로 제조되는 경우 페리스탈틱 펌프 및 클램프부에 의한 세포배양부의 압력 변동에 따라 세포배양부 자체도 수축 이완되어 배양액의 이송에 따른 전단 응력뿐만 아니라, 심혈관에서처럼 수축 이완 자극을 인가하게 되고, 비탄성 재료로 제조되는 경우 배양액의 이송에 따라 전단 응력 및 페리스탈틱 펌프와 클램프 개폐에 의한 주기적인 압력을 인가하게 된다.
In the cell culture system according to the present invention, the cell culture unit 500 may be in the same form as a tubular scaffold or in a general chamber form such as a plate, and may be made of an elastic material or made of an inelastic material. everything is possible When it is made of an elastic material, the cell culture unit itself contracts and relaxes according to the pressure fluctuation of the cell culture unit by the peristaltic pump and the clamp unit, so that not only the shear stress caused by the transfer of the culture medium, but also the contraction and relaxation stimulation as in the cardiovascular system, When it is made of an inelastic material, shear stress and periodic pressure by opening and closing the peristaltic pump and clamp are applied according to the transfer of the culture medium.

또한, 본 발명에 의한 세포 배양 시스템은 상기 펌프부(300) 및 상기 클램프부(400)에 연결되고 상기 세포 배양 스캐폴드에 인가되는 펌핑 압력을 조절할 수 있도록 상기 펌프부의 펌핑과 상기 클램프부에 의한 배양액의 흐름을 조절하는 제어부(600)를 더 포함한다. In addition, the cell culture system according to the present invention is connected to the pump unit 300 and the clamp unit 400, and by pumping the pump unit and the clamp unit to control the pumping pressure applied to the cell culture scaffold. It further includes a control unit 600 for controlling the flow of the culture solution.

상기 제어부(600)에 의해 상기 클램프부가 배양액의 흐름을 막은 상태에서 상기 페리스탈틱 펌프에 의해 상기 세포 배양 스캐폴드로 유체가 공급되는 경우 상기 세포 배양 스캐폴드에서 배양되는 세포에 가장 높은 압력이 인가되고, 상기 클램프부에 의해 배양액이 자유롭게 흐르는 상태에서는 세포 배양 스캐폴드에 인가되는 압력은 작아지게 된다. When the fluid is supplied to the cell culture scaffold by the peristaltic pump in a state where the clamp unit blocks the flow of the culture solution by the controller 600, the highest pressure is applied to the cells cultured in the cell culture scaffold and, in a state in which the culture solution flows freely by the clamp unit, the pressure applied to the cell culture scaffold becomes small.

상기 제어부(600)는 펌프부의 펌핑과 상기 클램프부에 의한 펌프의 개폐를 조절하여 상기 세포 배양 스캐폴드 내의 압력 변화가 최저 압력 5 내지 30 mmHg 및 최고압력 120 내지 200 mmHg의 범위에서의 진자식(oscillating) 압력 변화를 나타내도록 상기 세포 배양 스캐폴드에 펌핑 압력을 인가하도록 제어하는 것이 가능하다.
The control unit 600 controls the pumping of the pump unit and the opening and closing of the pump by the clamp unit so that the pressure change in the cell culture scaffold is a pendulum type ( It is possible to control the application of the pumping pressure to the cell culture scaffold to indicate an oscillating pressure change.

본 발명에 의한 세포 배양 시스템은 배양액 펌핑부 및 클램프부를 포함하여 튜브 내에서 배양되는 세포에 주기적인 압력을 인가하여 생체 내 물리적, 화학적 환경을 시험관 내(in vitro)에서 구현함으로써 심근 세포로의 배양 효율 및 분화 효율을 높일 수 있다.
The cell culture system according to the present invention implements an in vivo physical and chemical environment in vitro by applying periodic pressure to cells cultured in a tube, including a culture medium pumping unit and a clamp unit, thereby culturing cardiomyocytes It is possible to increase the efficiency and differentiation efficiency.

도 1은 본 발명에 의한 세포 배양 시스템의 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 의한 클램프의사시도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 의한 클래프에 의한 배양액의 흐름을 개폐하는 과정을 나타낸다.1 is a schematic diagram of a cell culture system according to the present invention.
2 is a perspective view of a clamp according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 shows the process of opening and closing the flow of the culture solution by the clasp according to an embodiment of the present invention.

Claims (6)

골수 유래 중간엽 줄기세포의 심혈관 세포로의 분화를 위한 복합 자극을 이용한 세포 배양 시스템으로, 상기 세포 배양 시스템은:
세포 배양액 이동 튜브(100);
세포 배양액을 보관하는 배양 용기 보관부(200);
상기 배양 용기 보관부로부터 상기 세포 배양액 이동 튜브로 배양액을 펌핑하기 위한 페리스탈틱 펌프부(300);
상기 세포 배양액 이동 튜브 내의 배양액의 흐름을 개폐하는 클램프부(400);
상기 펌프부 및 상기 클램프부에 연결되는 제어부(600); 및
상기 펌프부와 상기 클램프부 사이의 상기 세포 배양액 이동 튜브에 포함되는 세포 배양부(500);로 구성되고,
상기 클램프부(400)는 배양액 이동 튜브 관통부와 홈을 포함하는 철부(410), 상기 홈으로 삽입 분리가능한 요부(420) 및 상기 요부와 철부를 주기적으로 움직이도록 하는 구동부(430)로 구성되어, 배양액 이동 튜브 관통부에 배양액 이동 튜브가 삽입된 상태에서 상기 요부와 철부가 결합시에는 배양액의 흐름이 멈춰지고, 상기 요부와 철부가 분리시에는 배양액의 흐름이 재개시키고,
상기 제어부는 상기 세포 배양부 내의 압력 변화가 최저압력 5 내지 30 mmHg 및 최고압력 120 내지 200 mmHg의 범위에서의 진자식 압력 변화를 나타내도록 상기 펌프부의 펌핑과 상기 클램프부의 개폐를 조절하고, 상기 세포 배양 스캐폴드에는 0.3 ~ 300 dyne/cm2의 유체 흐름에 의한 전단 응력이 인가되도록 상기 펌프부의 펌핑과 상기 클램프부에 의한 상기 튜브내의 배양액의 흐름을 조절하는 것을 특징으로 하는 복합 자극을 이용한 세포 배양 시스템.


A cell culture system using complex stimulation for differentiation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells into cardiovascular cells, the cell culture system comprising:
Cell culture medium transfer tube 100;
Culture vessel storage unit 200 for storing the cell culture solution;
a peristaltic pump unit 300 for pumping the culture medium from the culture vessel storage unit to the cell culture medium transfer tube;
a clamp unit 400 for opening and closing the flow of the culture solution in the cell culture solution moving tube;
a control unit 600 connected to the pump unit and the clamp unit; and
A cell culture unit 500 included in the cell culture medium transfer tube between the pump unit and the clamp unit; and
The clamp part 400 is composed of a convex part 410 including a culture medium moving tube penetrating part and a groove, a recessed part 420 that can be inserted and detached into the groove, and a driving part 430 for periodically moving the recessed part and the convex part. , The flow of the culture medium is stopped when the recess and the convex part are combined in a state where the culture solution moving tube is inserted into the culture medium moving tube penetration part, and the flow of the culture medium is resumed when the recess and the convex part are separated,
The control unit controls the pumping of the pump unit and the opening and closing of the clamp unit so that the pressure change in the cell culture unit represents a pendulum pressure change in the range of a minimum pressure of 5 to 30 mmHg and a maximum pressure of 120 to 200 mmHg, and the cells Cell culture using complex stimulation, characterized in that the pumping of the pump and controlling the flow of the culture medium in the tube by the clamp unit so that a shear stress due to a fluid flow of 0.3 to 300 dyne/cm 2 is applied to the culture scaffold system.


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