KR102264514B1 - Lytic bacteriophage specific for klebsiella genus resistant to antibiotics - Google Patents

Lytic bacteriophage specific for klebsiella genus resistant to antibiotics Download PDF

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Abstract

본 발명은 항생제에 대한 내성을 갖는 클렙시엘라(Klebsiella)속 균을 용균시키는 박테리오파지에 관한 것으로, YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지 (기탁번호: [KCTC18573P])를 제공한다.
본 발명에서 제공하는 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 대하여 특이적 사멸능을 가지므로, 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 및 치료 목적으로 활용할 수 있다. The present invention relates to a bacteriophage that lyses bacteria of the genus Klebsiella with resistance to antibiotics, and provides a YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage (Accession No.: [KCTC18573P]).
Since it has a specific killing ability against antibiotic-resistant Klebsiella bacteria provided in the present invention, it can be used for the purpose of preventing and treating diseases caused by antibiotic-resistant Klebsiella bacteria.

Description

항생제 내성을 갖는 클렙시엘라(Klebsiella)속 균을 용균하는 박테리오파지{LYTIC BACTERIOPHAGE SPECIFIC FOR KLEBSIELLA GENUS RESISTANT TO ANTIBIOTICS}Bacteriophage lysing bacteria of the genus Klebsiella with antibiotic resistance {LYTIC BACTERIOPHAGE SPECIFIC FOR KLEBSIELLA GENUS RESISTANT TO ANTIBIOTICS}

본 발명은 항생제에 대한 내성을 갖는 클렙시엘라(Klebsiella)속 균을 용균시키는 박테리오파지에 관한 것이다.The present invention relates to a bacteriophage that lyses bacteria of the genus Klebsiella having resistance to antibiotics.

클렙시엘라(Klebsiella)속 균에 해당하는 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)는 그람 음성의 피막을 가진 혐기성 세균으로 입, 피부, 장 등의 정상세균총에서 발견된다. 병원 밖 클렙시엘라 세균에 의해 유발되는 가장 흔한 감염질환은 폐렴이 있으며, 전형적으로 기관지폐렴 및 기관지염의 형태로 나타난다. 클렙시엘라 뉴모니아는 감염 및 출혈을 통해 인간 폐를 파괴할 수 있고, 때로는 점액성 객담을 생성하기도 한다. 상기 세균은 전형적으로 구강 인두에 대량으로 서식하는 미생물 흡입에 의해 기도로 들어가 감염을 유발하는 것으로 알려져 있다.Klebsiella ( Klebsiella ) Corresponding to the genus Klebsiella pneumoniae ( Klebsiella pneumoniae ) is an anaerobic bacterium with a Gram-negative coating and is found in normal flora of the mouth, skin, and intestines. The most common infectious disease caused by Klebsiella bacteria outside the hospital is pneumonia, which typically appears in the form of bronchopneumonia and bronchitis. Klebsiella pneumoniae can destroy human lungs through infection and bleeding, sometimes producing mucous sputum. These bacteria are known to enter the airways and cause infections by inhalation of microorganisms that typically inhabit the oropharynx in large numbers.

상기 클렙시엘라속 균의 감염은 대부분 면역력이 약한 사람에게서 두드러지게 나타나며, 항균 치료를 수행하더라도 약 50%의 높은 사망률을 나타내고 있다. 특히, 클렙시엘라 뉴모니아는 구강 등의 흡입 이외에도 비뇨기관, 쓸개관 및 수술에 의한 상처 부위에서도 감염을 유발할 수 있다. 최근, 클렙시엘라 뉴모니아가 병원 내 감염에 있어서 매우 중요한 병원균으로 인식되고 있다.Infection of the genus Klebsiella is most noticeable in people with weak immunity, and even if antibacterial treatment is performed, it has a high mortality rate of about 50%. In particular, Klebsiella pneumoniae can cause infection in the urinary tract, bile duct, and surgical wounds in addition to oral inhalation. Recently, Klebsiella pneumoniae has been recognized as a very important pathogen in nosocomial infection.

항생제 오남용 및 이로 인한 내성균 출현 등으로 대표되는 기존 합성 항생제의 문제점이 세계적으로 크게 이슈화되어 있는 상황에서 이에 대한 해결책을 제시해 줄 수 있는 대상으로 주목을 받고 있는 것이 바로 박테리오파지(Bacteriophage) 및 박테리오파지 유래의 리신(Lysin) 단백질이다. 박테리오파지 및 리신 단백질은 기존 항생 물질과는 완전히 다른 계열이라 할 수 있으며 이에 따라 전혀 다른 항균(antibacterial) 작용 기작(mode of action)을 갖고 있다. 따라서 기존 항생제의 사용에서 나타나던 여러 부작용(side effect)이나 문제점을 개선할 수 있을 것으로 기대를 모으고 있다.Bacteriophage and lysin derived from bacteriophage are attracting attention as a target that can suggest a solution in a situation in which the problems of existing synthetic antibiotics, such as the misuse of antibiotics and the emergence of resistant bacteria, are a major issue around the world. (Lysin) protein. Bacteriophage and lysin protein can be said to be a completely different family from existing antibiotics, and thus have a completely different antibacterial mode of action. Therefore, it is expected that various side effects and problems that have been seen in the use of existing antibiotics can be improved.

박테리오파지는 박테리아를 감염시킬 수 있으며 보통 파지(phage)라고 줄여서 부르기도 한다. 박테리오파지는 핵산으로 이루어진 유전물질 중심부를 단백질 외피가 싸고 있는 단순한 구조의 유기체이며, 핵산은 단일 사슬이거나 이중 사슬인 DNA 또는 RNA로 되어있다. 박테리오파지는 생존에 숙주(host)가 반드시 필요하며, 모든 박테리아에는 특정 박테리오파지가 존재한다고 알려져 있다. 박테리오파지는 박테리아의 세포벽(cell wall)의 펩티도글리칸(peptidoglycan) 층(layer)을 공격하여 세포벽을 파괴함으로써 박테리아를 사멸시킬 수 있다. 박테리오파지는 1915년 영국의 세균학자 Twort와 1917년 프랑스의 dHerelle에 의해 독립적으로 규명되었으며 세균을 잡아먹는다는 뜻에서 박테리오파지라고 명명되었다. 박테리오파지의 항박테리아 활성(antibacterial activity) 때문에 발견 직후부터 인체와 동물의 질병 치료에 사용되었다. 그러나 Flemming에 의해 페니실린이 발견된 이후, 계속된 다양한 항생제의 등장 및 보급화로 인하여 서구에서는 관심이 점차 줄어들게 되었다. 그러나 러시아와 독일 등의 동구권 나라들은 박테리오파지 연구를 계속 해왔으며 관련하여 다수의 제품들이 산업화된 바도 있다. 하지만, 2000년대에 이르러 항생제 내성균 문제가 부각되면서 서구에서도 다시 박테리오파지에 대하여 관심을 갖게 되었으며 그 후 약 7~8년이 흐른 최근, 산업화 사례들이 속속 보고되고 있다. 즉, 박테리오파지가 세계적으로 새롭게 재조명되기 시작한 시기는 2000년대 초반으로, 실질적 산업화 노력이 약 7 ~ 8 여년 정도 진행된 신규한 분야로서, 생명공학기술의 발전과 맞물려 최근 매우 활발히 관련 개발이 진행되고 있는 분야라 할 수 있다.Bacteriophages can infect bacteria and are often called phages for short. Bacteriophage is an organism with a simple structure in which a protein coat surrounds the center of a genetic material consisting of nucleic acids, and nucleic acids are composed of single-stranded or double-stranded DNA or RNA. Bacteriophages require a host for survival, and it is known that certain bacteriophages exist in all bacteria. Bacteriophage can kill bacteria by attacking the peptidoglycan layer of the cell wall of the bacteria and destroying the cell wall. Bacteriophage was independently identified by British bacteriologist Twort in 1915 and French dHerelle in 1917, and was named bacteriophage in the sense of eating bacteria. Because of the antibacterial activity of bacteriophages, they have been used for the treatment of diseases in humans and animals immediately after their discovery. However, after penicillin was discovered by Flemming, interest in the West gradually declined due to the continued appearance and dissemination of various antibiotics. However, Eastern European countries such as Russia and Germany have continued to study bacteriophages, and many products have been industrialized in this regard. However, as the problem of antibiotic-resistant bacteria emerged in the 2000s, the West also became interested in bacteriophages again, and industrialization cases have been reported one after another after about 7 to 8 years have passed. That is, the time when bacteriophage began to be re-examined globally was in the early 2000s, a new field in which actual industrialization efforts were carried out for about 7 to 8 years. can be said

박테리오파지의 가장 큰 특징으로는, 감염성 박테리아 속에 침투한 다음 박테리아의 세포벽을 파괴하여 박테리아의 사멸을 유도한다는 것이며, 이러한 박테리오파지에 의한 세포 사멸의 기작은 세균의 세포벽 합성을 방해하는 방식의 기존 합성 항생제의 기작과는 완전히 다르다. 따라서 기존 합성 항생제에 대한 감수성에 관계없이 자신의 항균 활성을 발휘할 수 있다. 이로 인하여 특히 기존 항생제에 대하여 이미 내성을 획득한 내성균에 대해서도 항균 효과가 있다. 또한, 박테리아에 대해서는 매우 특이적인 항균 활성을 가지고 있기 때문에 인간을 포함한 동물을 구성하는 세포인 진핵세포(eukaryotic cell)에는 영향을 주지 않는다는 장점을 갖고 있다.The biggest characteristic of bacteriophage is that it penetrates into infectious bacteria and then destroys the cell wall of the bacteria to induce the death of the bacteria, and the mechanism of cell death by these bacteriophages is that of the existing synthetic antibiotics in a way that interferes with the synthesis of the cell wall of the bacteria. It is completely different from the mechanism. Therefore, it can exert its antibacterial activity regardless of sensitivity to existing synthetic antibiotics. Due to this, in particular, it has an antibacterial effect on resistant bacteria that have already acquired resistance to existing antibiotics. In addition, since it has a very specific antibacterial activity against bacteria, it has an advantage that it does not affect eukaryotic cells, which are cells constituting animals including humans.

본 발명의 일 목적은 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 대하여 특이적인 감염 및 세포 사멸 능력을 갖는 신규한 박테리오파지를 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide a novel bacteriophage having a specific infection and apoptosis ability for antibiotic-resistant Klebsiella genus bacteria.

본 발명의 다른 목적은 클렙시엘라속 균에 대하여 특이적인 세포 사멸 능력을 갖는 신규한 박테리오파지를 유효성분으로 포함하여, 상기 클렙시엘라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to include, as an active ingredient, a novel bacteriophage having a specific apoptosis ability for the genus Klebsiella bacteria, and a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by the genus Klebsiella bacteria and improvement To provide a food composition for use.

본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 상기 박테리오파지를 포함하는 항생제 및 소독제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide an antibiotic and disinfectant comprising the bacteriophage according to the present invention.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical task to be achieved by the present invention is not limited to the tasks mentioned above, and other tasks not mentioned will be clearly understood by those of ordinary skill in the art from the following description.

본 발명의 발명자들은 항생제 내성 세균 감염증 치료의 대안 물질로 기존의 화학 용법 제제를 보완할 수 있는 박테리오파지를 검토하던 중 항생제 내성 클렙시엘라(Klebsiella)속 균을 선택적으로 사멸시킬 수 있는 박테리오파지를 분리하고, 분리된 박테리오파지의 형태적 및 유전적 특성을 분석하여 이를 타 박테리오파지와 구별하여 특정 지을 수 있는 유전체(genome)의 유전자 서열을 제공하며, 더 나아가 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 특이적 사멸능을 갖는 분리된 박테리오파지를 이용하여 상기 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 및 치료 목적으로 이용함으로써 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention and remove the bacteriophage capable of selectively killing the spp antibiotic resistance keulrep when Ella (Klebsiella) While reviewing a bacteriophage that can complement existing chemical usage agents as an alternative material of the antibiotic-resistant bacterial infection therapy , by analyzing the morphological and genetic characteristics of the isolated bacteriophage, it provides a gene sequence of the genome that can be specified and differentiated from other bacteriophages, and furthermore, has a specific killing ability for antibiotic-resistant Klebsiella bacteria The present invention was completed by using the isolated bacteriophage having a bacteriophage to prevent and treat diseases caused by the antibiotic-resistant Klebsiella genus.

구체적으로, 본 발명자들은 항생제 내성 클렙시엘라속 균을 선택적으로 사멸시키기 위해 예의 노력한 결과, 병원체로부터 카바페넴 내성을 갖는 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)를 분리하였고, 상기 카바페넴 내성 클렙시엘라 뉴모니아를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 신규한 박테리오파지를 선별하여 이를 'YMC15/11/N137_KPN_BP'로 명명하였다. 이렇게 선별된 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 2017년 5월 11일자로 한국생명공학연구원 미생물자원센터 (기탁번호: [KCTC18573P])에 기탁하였다.Specifically, the present inventors made intensive efforts to selectively kill antibiotic-resistant Klebsiella bacteria, and as a result, Klebsiella pneumoniae having carbapenem resistance was isolated from the pathogen, and the carbapenem-resistant Klebsi A novel bacteriophage capable of specifically killing Ela pneumoniae was selected and named 'YMC15/11/N137_KPN_BP'. The thus-selected bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP was deposited at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Microbial Resource Center (accession number: [KCTC18573P]) on May 11, 2017.

본 발명의 일 구현 예에 따르면 항생제 내성 클렙시엘라(Klebsiella)속 균에 대하여 선택적 사멸능을 갖는 박테리오파지를 제공한다. According to one embodiment of the present invention provides antibiotic resistance keulrep when bacteriophage having selective killing ability against spp Ella (Klebsiella).

본 발명에서 상기 클렙시엘라(Klebsiella)속 균은 장내세균과의 한 속으로, 협막을 지니며 점액을 생산하고, 탄소원으로서 구연산염을 이용하는 균으로, 자연계에 널리 존재하며 사람의 호흡기, 장관 및 비뇨기에서 검출된다. 일반적으로 상기 균은 비병원성이지만 다양한 질병의 2차 감염과 폐렴 등의 질환의 원인이 될 수 있다. The keulrep when Ella (Klebsiella) Species In the present invention, in one genus of Enterobacteriaceae, said Genie the capsular producing mucus, a fungus using a citrate as a carbon source, widely present in the natural world, and respiratory tract of the person, secretary and urinary is detected in In general, the bacteria are non-pathogenic, but may cause secondary infections of various diseases and diseases such as pneumonia.

본 발명에서, 상기 클렙시엘라속 균은 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae), 클렙시엘라 옥시토카(Klebsiella oxytoca), 클렙시엘라 플란티콜라(Klebsiella planticola) 및 클렙시엘라 테리게나(Klebsiella terrigena)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 1종 이상일 수 있으며, 바람직하게는 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the Klebsiella genus bacteria Klebsiella pneumoniae ( Klebsiella pneumoniae ), Klebsiella oxytoca ( Klebsiella ) oxytoca ), Klebsiella planticola ( Klebsiella planticola ) and Klebsiella terrigena ( Klebsiella terrigena ) It may be any one or more selected from the group consisting of, preferably Klebsiella pneumoniae ( Klebsiella pneumoniae ) However, it is not limited thereto.

또한, 본 발명에서 상기 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)는 간균으로도 불리우며, 아종으로 뉴모니아(Pneumoniae), 아자니아(Azaenae) 및 리노스틸레로마티스(Rhinoscleromatis)가 존재하며, 상기 균은 급성폐렴, 취비증, 비경종증을 유발할 수 있다. 또한, 항생물질에 내성이 존재하고, 건조하지 않는 경우 실온에서 수개월 동안 생존할 수 있다. In addition, in the present invention, the Klebsiella pneumoniae ( Klebsiella pneumoniae ) is also called bacillus, and subspecies of pneumoniae ( Pneumoniae ), azania ( Azaenae ) and rhinoscleromatis ) exist, and the bacteria can cause acute pneumonia, emphysema, and rhinoplasty. . It is also resistant to antibiotics and can survive for months at room temperature if not dried.

본 발명에서 상기 "항생제 내성"은 특정 항생제에 내성을 보여 약효가 듣지 않는 것을 의미하며, 본 발명의 목적상 상기 항생제는 카바페넴(Carbapenem)의 구조를 갖는 항생제일 수 있다. 구체적으로, 아미카신(Amicacin), 앰피실린(Ampicillin), 엠피실린/설벡탐(Ampicillin/Sulbactam), 아즈트레오남(Aztreonam), 세즈타지딤(Ceftazidime), 세파졸린(Cefazolin), 에르타페넴(Ertapenem), 세페핌(Cefepime), 세폭시틴(Cefoxitin), 세포탁심(Cefotaxime), 젠타마이신(Gentamicine), 레보플록세신(Levoflocacin), 메로페넴(Meropenem), 피페라실린/타조박탐(Piperacillin/Tazobactam), 코트리목사(Cotrimoxa), 및 티게틸린(Tigecyline)으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 목적상 상기 클렙시엘라 뉴모니아는 항생제 내성을 갖는 것일 수 있고, 상기 항생제 내성은 상기 카바페넴을 분해하여 효과의 발휘를 억제하는 카바페넴아제 효소(carbapenemase)를 생산함으로써 발생될 수 있다.In the present invention, the "antibiotic resistance" means that the drug is not effective because it shows resistance to a specific antibiotic, and for the purpose of the present invention, the antibiotic may be an antibiotic having a carbapenem structure. Specifically, amikacin, ampicillin, ampicillin/sulbactam, aztreonam, ceftazidime, cefazolin, ertapenem (Ertapenem), Cefepime, Cefoxitin, Cefotaxime, Gentamicine, Levoflocacin, Meropenem, Piperacillin/Tazobactam (Piperacillin) /Tazobactam), Cotrimoxa (Cotrimoxa), and may be at least one selected from the group consisting of Tigecyline (Tigecyline), but is not limited thereto. For the purpose of the present invention, the Klebsiella pneumoniae may have antibiotic resistance, and the antibiotic resistance may be generated by producing a carbapenemase enzyme that inhibits the effect of the carbapenem by decomposing it. .

본 발명에서 상기 “박테리오파지”는 세균을 숙주세포로 하는 바이러스 일군의 총칭으로, 숙주에 감염된 후 증식하여 자손 파지를 방출하는 용균성을 갖는 회로 또는 숙주 염색체와 공존한 상태에서 숙주는 생존하고, 파지 DNA는 복제하는 회로를 갖는다. In the present invention, the "bacteriophage" is a generic term for a group of viruses using bacteria as a host cell, and the host survives in a coexistence with a lytic circuit or host chromosome that proliferates after infection with a host to release progeny phage, and the phage DNA has circuits that replicate.

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또한, 본 발명에서 상기 박테리오파지는 시포비리데(siphoviridae)에 속하는 박테리오파지일 수 있다. In addition, in the present invention, the bacteriophage may be a bacteriophage belonging to siphoviridae.

단, 본 발명에서 상기 “시포비리데(siphoviridae)”는 박테리오파지를 전자현미경을 통한 형태 관찰에 의해 분류 및 동정하는 방법에 의해 분류된 것으로, 수축성이 없는 수축성이 없는 긴 꼬리(a long non-contractile tail)를 갖는 복합형의 형태를 나타낸 것일 수 있다.However, in the present invention, the "siphoviridae" is classified by a method of classifying and identifying bacteriophages by morphological observation through an electron microscope, and a long non-contractile without contractility (a long non-contractile). tail) may be shown in the form of a complex type.

본 발명의 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에 따른 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 유효성분으로 포함하는 항생제 내성 클렙시엘라속 균 유발성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.According to another embodiment of the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for preventing or treating an antibiotic-resistant Klebsiella genus disease-induced disease, comprising the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP according to the present invention as an active ingredient.

본 발명의 약학 조성물은 1 × 103 내지 1 × 1010 pfu/㎖의 박테리오파지를 포함하며, 바람직하게는 1 × 106 내지 1 × 109 pfu/㎖의 박테리오파지를 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may include 1 × 10 3 to 1 × 10 10 pfu/ml of bacteriophage, preferably 1 × 10 6 to 1 × 10 9 pfu/ml of bacteriophage.

본 발명의 약학 조성물에 포함되는 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP는 상술한 바와 같이, 항생제 내성 클렙시엘라속 균, 바람직하게는 카바페넴 내성 클렙시엘라속, 보다 바람직하게는 카바페넴 내성 클렙시엘라 뉴모니아를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 용균능 및 흡착능이 존재하므로, 본 발명의 약학 조성물을 사용하는 경우 상기 항생제 내성 클렙시엘라속 균을 용균 및 사멸시켜 인체 내에서 상기 항생제 내성 클렙시엘라 속 균의 감염으로 인하여 유발되는 다양한 질환을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다. As described above, the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP contained in the pharmaceutical composition of the present invention is an antibiotic-resistant Klebsiella bacterium, preferably a carbapenem-resistant Klebsiella genus, more preferably a carbapenem-resistant Klebsiella new Since there is a lytic ability and adsorption ability to specifically kill moniae, when the pharmaceutical composition of the present invention is used, the antibiotic-resistant Klebsiella genus is lysed and killed in the human body. Various diseases caused by bacterial infection can be effectively prevented or treated.

본 발명에서 상기 클렙시엘라속 균 유발성 질환은 패혈증, 폐렴 및 폐기종으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. In the present invention, the Klebsiella bacteria-induced disease may be any one selected from the group consisting of sepsis, pneumonia and emphysema, but is not limited thereto.

본 명세서에서 사용된 '치료'라는 용어는 (ⅰ) 클렙시엘라속 균 에 의해 유발된 질환의 예방; (ⅱ) 클렙시엘라속 균 에 의해 유발된 질환의 억제; 및 (ⅲ) 클렙시엘라속 균 에 의해 유발된 질환의 경감을 의미한다.As used herein, the term 'treatment' refers to (i) prevention of diseases caused by bacteria of the genus Klebsiella; (ii) inhibition of diseases caused by bacteria of the genus Klebsiella; and (iii) alleviation of diseases caused by Klebsiella genus bacteria.

본 발명에서 상기 약학 조성물은 캡슐, 정제, 과립, 주사제, 연고제, 분말 또는 음료 형태임을 특징으로 할 수 있으며, 상기 약학 조성물은 인간을 대상으로 하는 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the pharmaceutical composition may be characterized in the form of capsules, tablets, granules, injections, ointments, powders or beverages, and the pharmaceutical composition may be characterized in that it is targeted to humans.

본 발명에서 상기 약학 조성물은 이들로 한정되는 것은 아니지만, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 캡슐, 정제, 수성 현탁액 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사 용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 경구 투여 시에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있으며, 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있으며, 국소투여용의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등을 사용할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 제형은 상술한 바와 같은 약제학적으로 허용되는 담체와 혼합하여 다양하게 제조될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여시에는 정제, 트로키, 캡슐, 엘릭서(elixir), 서스펜션, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 제조할 수 있으며, 주사제의 경우에는 단위 투약 앰플 또는 다수회 투약 형태로 제조할 수 있다. 기타, 용액, 현탁액, 정제, 캡슐, 서방형 제제 등으로 제형화할 수 있다.In the present invention, the pharmaceutical composition is not limited thereto, but each can be formulated in the form of oral dosage forms such as powders, granules, capsules, tablets, aqueous suspensions, external preparations, suppositories, and sterile injection solutions according to conventional methods. can The pharmaceutical composition of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier. Pharmaceutically acceptable carriers may include binders, lubricants, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments, fragrances, etc., for oral administration, and in the case of injections, buffers, preservatives, pain-freezing agents A topical agent, solubilizer, isotonic agent, stabilizer, etc. may be mixed and used, and in the case of topical administration, a base, excipient, lubricant, preservative, etc. may be used. The dosage form of the pharmaceutical composition of the present invention can be prepared in various ways by mixing with a pharmaceutically acceptable carrier as described above. For example, in the case of oral administration, it can be prepared in the form of tablets, troches, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, etc., and in the case of injections, it can be prepared in the form of unit dose ampoules or multiple doses. have. In addition, it can be formulated as a solution, suspension, tablet, capsule, sustained release formulation, and the like.

한편, 제제화에 적합한 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말디톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유 등이 사용될 수 있다. 또한, 충진제, 항 응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.Meanwhile, examples of carriers, excipients and diluents suitable for formulation include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, malditol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, Cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil may be used. In addition, fillers, anti-agglomeration agents, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers, preservatives and the like may be further included.

본 발명에 상기 약학 조성물의 투여 경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만 구강, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장이 포함된다. 경구 또는 비경구 투하가 바람직하다.The route of administration of the pharmaceutical composition in the present invention is, but not limited to, oral, intravenous, intramuscular, intraarterial, intramedullary, intrathecal, intracardiac, transdermal, subcutaneous, intraperitoneal, intranasal, intestinal, topical, sublingual or rectal. Oral or parenteral administration is preferred.

본 발명에서 상기 "비경구"란, 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 활액낭내, 흉골내, 경막내, 병소내 및 두개골내 주사 또는 주입기술을 포함한다. 본 발명의 약학 조성물은 또한 직장 투여를 위한 좌제의 형태로 투여될 수 있다.In the present invention, the term "parenteral" includes subcutaneous, intradermal, intravenous, intramuscular, intraarticular, intrasynovial, intrasternal, intrathecal, intralesional and intracranial injection or injection techniques. The pharmaceutical composition of the present invention may also be administered in the form of a suppository for rectal administration.

본 발명의 상기 약학 조성물은 사용된 특정 화합물의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 정식, 투여 시간, 투여 경로, 배출율, 약물 배합 및 예방 또는 치료될 특정 질환의 중증을 포함한 여러 요인에 따라 다양하게 변할 수 있고, 상기 약학 조성물의 투여량은 환자의 상태, 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여 경로 및 기간에 따라 다르지만 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있고, 1일 0.0001 내지 50mg/kg 또는 0.001 내지 50mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명에 따른 의약 조성물은 환제, 당의정, 캡슐, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁제로 제형될 수 있다. The pharmaceutical composition of the present invention depends on several factors including the activity of the specific compound used, age, weight, general health, sex, formula, administration time, administration route, excretion rate, drug formulation, and the severity of the specific disease to be prevented or treated. The dosage of the pharmaceutical composition may vary depending on the patient's condition, body weight, degree of disease, drug form, administration route and period, but may be appropriately selected by those skilled in the art, and 0.0001 to 50 mg/kg per day Or 0.001 to 50 mg/kg may be administered. Administration may be administered once a day, or may be administered in several divided doses. The above dosage does not limit the scope of the present invention in any way. The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated as pills, dragees, capsules, solutions, gels, syrups, slurries, and suspensions.

본 발명의 또 다른 구현 예에 따르면, 본 발명에 따른 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 유효성분으로 포함하는 항생제 내성 클렙시엘라속 균 유발성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.According to another embodiment of the present invention, there is provided a food composition for preventing or improving antibiotic-resistant Klebsiella spp. induced diseases comprising the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP according to the present invention as an active ingredient.

본 발명의 식품 조성물은 1 × 103 내지 1 × 1010 pfu/㎖의 박테리오파지를 포함하며, 바람직하게는 1 × 106 내지 1 × 109 pfu/㎖의 박테리오파지를 포함할 수 있다.The food composition of the present invention may include 1 × 10 3 to 1 × 10 10 pfu/ml of bacteriophage, preferably 1 × 10 6 to 1 × 10 9 pfu/ml of bacteriophage.

본 발명의 식품 조성물에 포함되는 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP는 상술한 바와 같이, 항생제 내성 클렙시엘라속 균, 바람직하게는 카바페넴 내성 클렙시엘라속, 보다 바람직하게는 카바페넴 내성 클렙시엘라 뉴모니아를 특이적으로 사멸시킬 수 있는 용균능 및 흡착능이 존재하므로, 본 발명의 약학 조성물을 사용하는 경우 상기 항생제 내성 클렙시엘라속 균을 용균 및 사멸시켜 인체 내에서 상기 항생제 내성 클렙시엘라 속 균의 감염으로 인하여 유발되는 다양한 질환을 효과적으로 예방 또는 개선할 수 있다.As described above, the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP included in the food composition of the present invention is an antibiotic-resistant Klebsiella bacterium, preferably a carbapenem-resistant Klebsiella genus, more preferably a carbapenem-resistant Klebsiella new Since there is a lytic ability and adsorption ability to specifically kill moniae, when the pharmaceutical composition of the present invention is used, the antibiotic-resistant Klebsiella genus is lysed and killed in the human body. Various diseases caused by bacterial infection can be effectively prevented or improved.

본 발명에서 상기 클렙시엘라속 균 유발성 질환은 패혈증, 폐렴 및 폐기종으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the Klebsiella bacteria-induced disease may be any one selected from the group consisting of sepsis, pneumonia and emphysema, but is not limited thereto.

한편, 본 발명에서, “개선”은 본 발명의 식품 조성물을 이용하여 클렙시엘라속 균의 감염으로 인해 발생한 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위라면 제한없이 포함할 수 있다.On the other hand, in the present invention, "improvement" may include without limitation any action in which symptoms caused by infection of the genus Klebsiella using the food composition of the present invention are improved or beneficially changed.

본 발명의 상기 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물은 각종 식품류, 예를 들어, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 과자, 떡, 빵 등의 형태로 제조될 수 있다.The food composition comprising the bacteriophage of the present invention as an active ingredient can be prepared in the form of various foods, for example, drinks, gums, tea, vitamin complexes, powders, granules, tablets, capsules, sweets, rice cakes, breads, etc. have.

본 발명에서 상기 박테리오파지가 식품 조성물에 포함될 때 그 양은 전체 중량의 0.1 내지 50%의 비율로 첨가할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.When the bacteriophage is included in the food composition in the present invention, the amount may be added in a proportion of 0.1 to 50% of the total weight, but is not limited thereto.

본 발명에서 상기 식품 조성물이 음료 형태로 제조되는 경우 지시된 비율로 상기 식품 조성물을 포함하는 것 외에 특별한 제한점은 없으며, 통상의 음료와 같이 다양한 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 구체적으로, 천연 탄수화물로서 포도당 등의 모노사카라이드, 과당 등의 디사카라이드, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜 등을 포함할 수 있다. 상기 향미제로서는 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등) 등일 수 있다.In the present invention, when the food composition is prepared in the form of a beverage, there is no particular limitation other than including the food composition in the indicated ratio, and it may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional ingredients, like a conventional beverage. . Specifically, as natural carbohydrates, monosaccharides such as glucose, disaccharides such as fructose, and polysaccharides such as sucrose, common sugars such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol are used as natural carbohydrates. may include The flavoring agent may be a natural flavoring agent (taumartin, stevia extract (eg, rebaudioside A, glycyrrhizin, etc.) and synthetic flavoring agent (saccharin, aspartame, etc.).

본 발명에서, 그 외 본 발명의 상기 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 포함할 수 있다.In the present invention, the food composition of the present invention in addition to various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavoring agents and flavoring agents such as natural flavoring agents, coloring agents, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids , protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonation agents used in carbonated beverages, and the like.

본 발명에서 상기 성분은 독립적 또는 조합하여 사용할 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 핵심적인 요소에 해당하지 아니하지만, 본 발명의 식품 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 약 50 중량부의 범위에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the present invention, the components may be used independently or in combination. The proportion of the additive is not a key element of the present invention, but may be selected from 0.1 to about 50 parts by weight per 100 parts by weight of the food composition of the present invention, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 구현 예는 본 발명에 따른 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 유효성분으로 포함하는 항생제를 제공한다.Another embodiment of the present invention provides an antibiotic comprising the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP according to the present invention as an active ingredient.

본 발명에서 상기 항생제는, 대부분의 다른 항생 물질들은 대상체인 균주의 내성이 증가함에 따라 갈수록 사용범위가 줄어들 수 밖에 없는데에 반하여, 본 발명의 상기 항생제는 상기와 같은 문제점과 무관하게 사용될 수 있으므로 항생제로 사용될 수 있는 수명이 길어질 수 있다.In the present invention, the antibiotic, most of the other antibiotics, as the resistance of the subject strain increases, the range of use is inevitably reduced, whereas the antibiotic of the present invention can be used irrespective of the above problems. The usable lifespan can be extended.

단, 본 발명에서 상기 "항생제"는 방부제, 살균제 및 항균제를 총칭하는 의미를 나타낸다.However, in the present invention, the term "antibiotic" refers to a generic term for preservatives, bactericides and antibacterial agents.

본 발명의 또 다른 구현 예는 본 발명에 따른 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 유효성분으로 포함하는 소독제를 제공한다.Another embodiment of the present invention provides a disinfectant comprising the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP according to the present invention as an active ingredient.

본 발명에서 상기 소독제는 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 대하여 특이적 사멸능을 갖는 박테리오파지를 유효성분으로 하고 있으므로, 병원에서의 감염을 방지하기 위한 병원 및 보건용 도구 등의 소독제로 유용하게 사용될 수 있고, 일반 생활 소독제, 식품 및 조리 장소 및 설비의 소독제, 축산 산업의 축사 소독제로 유용하게 사용될 수 있다.In the present invention, the disinfectant is a bacteriophage having a specific killing ability against an antibiotic-resistant Klebsiella genus as an active ingredient, so it can be usefully used as a disinfectant for hospitals and health tools to prevent infection in hospitals. It can be usefully used as a disinfectant for general living, a disinfectant for food and cooking places and equipment, and a disinfectant for livestock in the livestock industry.

본 발명에 따른 신규한 박테리오파지는 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 대하여 특이적 사멸능을 가지므로, 항생제 내성 클렙시엘라속 균에 의해 유발되는 질환의 예방 및 치료 목적으로 활용할 수 있다.Since the novel bacteriophage according to the present invention has a specific killing ability against antibiotic-resistant bacteria of the genus Klebsiella, it can be used for prevention and treatment of diseases caused by bacteria of the genus antibiotic-resistant.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 박테리오파지의 전자 현미경 촬영 사진을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라속 균에 대한 용균성 박테리오파지의 흡창능을 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라속 균에 대한 용균성 박테리오파지의 1단 증식 곡선을 나타낸 것이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 생체 외에서 박테리오파지의 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라속 균에 대한 용균능을 그래프로 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라속 균에 대한 용균성 박테리오파지의 pH 안정성을 그래프로 나타낸 것이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라속 균에 대한 용균성 박테리오파지의 온도 안정성을 그래프로 나타낸 것이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라속 균에 대한 용균성 박테리오파지의 전체 유전체 서열 분석 결과를 나타낸 것이다.1 shows an electron microscope photograph of a bacteriophage according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a graph showing the absorption capacity of the lytic bacteriophage for Klebsiella genus bacteria having antibiotic resistance according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 shows the one-stage proliferation curve of the lytic bacteriophage for the genus Klebsiella having antibiotic resistance according to an embodiment of the present invention.
Figure 4 is a graph showing the lytic ability of the bacteriophage in vitro bacteriophage antibiotic resistance against the genus Klebsiella according to an embodiment of the present invention.
Figure 5 is a graph showing the pH stability of the lytic bacteriophage for the bacteria of the genus Klebsiella having antibiotic resistance according to an embodiment of the present invention.
Figure 6 is a graph showing the temperature stability of the lytic bacteriophage for the genus Klebsiella having antibiotic resistance according to an embodiment of the present invention.
Figure 7 shows the whole genome sequence analysis result of the lytic bacteriophage for the genus Klebsiella having antibiotic resistance according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples. However, the following examples are only illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following examples.

실시예Example

[[ 실시예Example 1] 임상검체 분리 및 항생제 내성 균주 선별 1] Isolation of clinical specimens and selection of antibiotic-resistant strains

세브란스 병원 환자들로부터 환자의 분변 내 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae) 균을 배양하여 분리하였다. 그 뒤, 감수성 결과는 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2009)를 기준으로 판독하였다. 감수성 시험은 뮬러-힌튼(Mueller-Hinton) 아가를 사용하여 외기 37℃에서 하룻밤 동안 배양하는 CLSI 디스크 확산 시험방법을 사용하였다. 클렙시엘라 뉴모니아 균에 대한 시험 항생제는 아미카신(Amicacin), 앰피실린(Ampicillin), 엠피실린/설벡탐(Ampicillin/Sulbactam), 아즈트레오남(Aztreonam), 세즈타지딤(Ceftazidime), 세파졸린(Cefazolin), 에르타페넴(Ertapenem), 세페핌(Cefepime), 세폭시틴(Cefoxitin), 세포탁심(Cefotaxime), 젠타마이신(Gentamicine), 레보플록사신(Levofloxacin), 메로페넴(Meropenem), 피페라실린/타조박탐(Piperacillin/Tazobactam), 코트리목사(Cotrimoxa), 및 티게틸린(Tigecyline)을 사용하였다. 수집된 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae) 53개 주의 항생제 내성 프로파일은 하기 표 1에 나타내었다. 단, 하기 표 1에서 S, I 및 R은 항균제에 대한 감수성을 평가한 결과로, 'S'는 민감(Susceptible), 'I'는 중간(Intermediate), 'R'은 내성(Resistant)를 의미한다. Klebsiella pneumoniae in the feces of patients from Severance Hospital patients was cultured and isolated. Thereafter, the sensitivity results were read based on the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2009). Sensitivity test was performed using a Mueller-Hinton agar, using the CLSI disk diffusion test method incubated overnight at 37 ° C. outside air. Test antibiotics for Klebsiella pneumoniae are Amikacin, Ampicillin, Ampicillin/Sulbactam, Aztreonam, Ceftazidime, Cefazolin, Ertapenem, Cefepime, Cefoxitin, Cefotaxime, Gentamicine, Levofloxacin, Meropenem, Ppi Peracillin/Tazobactam (Piperacillin/Tazobactam), Cotrimoxa, and Tigecyline were used. Collected Klebsiella pneumoniae pneumoniae ) Antibiotic resistance profiles of 53 strains are shown in Table 1 below. However, in Table 1 below, S, I and R are the results of evaluating the sensitivity to antibacterial agents, 'S' means sensitive (Susceptible), 'I' means intermediate, and 'R' means resistance. do.

숙주 균주host strain 아미카균신amica bacteria 엠피실린ampicillin 엠피실린/설벡탐Ampicillin/Sulvectam 아즈트레오남Aztreonam 세즈타지딤Sez Tajidim 세파졸린cefazoline 에르타페넴Ertapenem 세페핌cefepime 세폭시틴cepoxythin 세포탁심cefotaxime 젠타마이신gentamicin 레보플록사신Levofloxacin 메로페넴Meropenem 피페라실린/타조박탐piperacillin/tazobactam 코트리목사졸Cotry Moksasol 티게틸린Tigetilin YMC15/11/P488YMC15/11/P488 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) YMC15/11/P546YMC15/11/P546 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/09/U2874YMC15/09/U2874 =2 (S)=2 (S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥16 (R)≥16 (R) 40 (S)40 (S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/N45YMC15/11/N45 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/P756YMC15/11/P756 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≤40 (S)≤40(S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/N55YMC15/11/N55 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/T741YMC15/11/T741 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≤40 (S)≤40(S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/U4318YMC15/11/U4318 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≤40 (S)≤40(S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/P860YMC15/11/P860 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/C1052YMC15/11/C1052 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/10/N12YMC15/10/N12 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/10/U1383YMC15/10/U1383 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≤40 (S)≤40(S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/10/P776YMC15/10/P776 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/10/N150YMC15/10/N150 ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N1073YMC15/11/N1073 ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/G57YMC15/11/G57 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 25 (S)25 (S) 2 (S)2 (S) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) 4 (I)4 (I) 29 (S)29 (S) ≥128 (R)≥128 (R) ≤20 (S)≤20 (S) ≤0.5 (S)≤0.5 (S) YMC15/11/B4059YMC15/11/B4059 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/U2284YMC15/11/U2284 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/N45YMC15/11/N45 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N53YMC15/11/N53 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N54YMC15/11/N54 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/N96YMC15/11/N96 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N98YMC15/11/N98 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N101YMC15/11/N101 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N107YMC15/11/N107 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N115YMC15/11/N115 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/N137YMC15/11/N137 =2 (S)=2 (S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≤40 (S)≤40(S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/R3218YMC15/11/R3218 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/N154YMC15/11/N154 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC15/11/R3705YMC15/11/R3705 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/11/G223YMC15/11/G223 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/12/P746YMC15/12/P746 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≤40 (S)≤40(S) ≥8 (R)≥8 (R) YMC15/12/C910YMC15/12/C910 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/R859YMC16/01/R859 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC16/01/N136YMC16/01/N136 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/N133YMC16/01/N133 ≤2 (S)≤2(S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/N141YMC16/01/N141 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/N164YMC16/01/N164 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/N233YMC16/01/N233 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/N359YMC16/01/N359 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/R3917YMC16/01/R3917 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/01/R3958YMC16/01/R3958 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC16/02/B372YMC16/02/B372 ≤2 (S)≤2(S) ≥32 (R)≥32 (R) ≥32 (R)≥32 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64≥64 ≥8 (R)≥8 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≤1 (S)≤1 (S) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) ≥320 (R)≥320 (R) ≥8 (R)≥8 (R) YMC16/02/N11YMC16/02/N11 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/02/N162YMC16/02/N162 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/02/N394YMC16/02/N394 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/02/N393YMC16/02/N393 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/02/N499YMC16/02/N499 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/02/N726YMC16/02/N726 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/03/N942YMC16/03/N942 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/04/R1602YMC16/04/R1602 ≤2 (S)≤2(S) ≥64 (R)≥64 (R) ≥64 (R)≥64 (R) ≥8 (R)≥8 (R) ≥32 (R)≥32 (R) 8 (I)8 (I) ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) ≥128 (R)≥128 (R) YMC16/05/N235YMC16/05/N235 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R) YMC16/05/N151YMC16/05/N151 ≥8 (R)≥8 (R) ≥16 (R)≥16 (R)

상기 표 1에서 보는 바와 같이, 수집된 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae) 53개 균주는 다양한 카바페넴계 항생제에 대하여 내성을 가지며, 특히 클렙시엘라 뉴모니아 YMC15/11/N137는 이후 PCR을 수행한 결과 bla KPC 유전자를 갖는 다재내성 균주임을 알 수 있었다.As shown in Table 1, the collected Klebsiella pneumoniae 53 strains have resistance to various carbapenem-based antibiotics, and in particular, Klebsiella pneumoniae YMC15/11/N137 is PCR As a result of performing the bla KPC gene was found to be a multi-resistant strain.

[[ 실시예Example 2] 박테리오파지 검체 수집 2] Bacteriophage sample collection

2-1. 파지 은행 구축을 위한 검체 수집2-1. Specimens collection to build phage banks

세브란스 병원의 하수 처리시설에서 최초 침전지 거친 후 부유물질 및 침사물이 제거된 원수를 확보하였다. 이는 화학 처리 시설 전 단계의 하수로 제한하였다. 수집한 시료에 1L 당 염화나트륨 58g을 첨가한 후 10,000g에서 10분간 원심 분리하여 220nm 밀리포어 필터로 여과하였다. 얻어진 여과액에 폴리에틸렌글리콜(PEG, 분자량 8000)을 10% W/V으로 첨가하고 4에서 12시간 동안 냉장 보관하였다. 12시간 냉장 보관된 여과액을 12,000g에서 20분간 원심 분리하여 침전물을 파지 희석 완충액 (SM 완충액)에 재부유한 뒤, 동일한 양의 클로로포름을 첨가하여 냉동 보관하였다. 이를 3회 반복하여 300mL의 박테리오파지 부유액을 채취하였다.After going through the first sedimentation pond at Severance Hospital's sewage treatment facility, raw water from which suspended matter and sediment were removed was obtained. This was limited to sewage from the pre-chemical treatment plant. After adding 58 g of sodium chloride per 1 L to the collected sample, centrifugation was performed at 10,000 g for 10 minutes, followed by filtration through a 220 nm Millipore filter. Polyethylene glycol (PEG, molecular weight 8000) was added to the obtained filtrate at 10% W/V, and the mixture was refrigerated for 4 to 12 hours. The filtrate stored in refrigeration for 12 hours was centrifuged at 12,000 g for 20 minutes to resuspend the precipitate in phage dilution buffer (SM buffer), and then the same amount of chloroform was added and stored frozen. This was repeated three times to collect 300 mL of bacteriophage suspension.

2-2 2-2 용균성lytic 파지 선별 및 phage screening and 용균역가lysis titer 측정 Measure

용균성 파지의 분리 정제는 스팟 테스트(Spot Test)법 (Mazzocco A et al. In Bacteriophages, Clokie and Kropinski AM, eds. Humana Press. 2009)으로 실행하였다. 확보된 균주를 맥콘키 한천배지에서 접종 후 외기 35에서 하룻밤 동안 배양하였다. 배양 후, 투명한 플라크 형성을 보고 파지에 감수성인 균주를 선별하였다. 감수성인 균주를 맥콘키 한천 배지에 접종하여 35에서 12시간 동안 배양하였다. 살린 1ml 튜브에 McFarland 0.5 탁도로 각 균주의 현탁액 제조하고 H 탑 아가 (3 ml), 감수성 박테리아 100ul 및 파지 용액 (각각 1ul, 10ul 및 50ul)을 섞어 LB 아가에 도포한 후, 35에서 12시간 동안 배양하였다. 플라크 관찰한 후에 파스퇴르 파이펫으로 플라크를 채취하여 SM 완충 용액에 희석하고, 다시 감수성인 균주 현탁액을 이용하여 3회 반복 정제하였다. 이렇게 얻어진 순수한 박테리오파지는 SM 완충 용액에 희석하고 다시 감수성인 균주 현탁액을 이용하여 3회 반복 정제하였다. 이렇게 얻어진 순수한 박테리오파지는 SM 완충 용액에 희석하여 보관하였다.Separation and purification of lytic phage was performed by the Spot Test method (Mazzocco A et al. In Bacteriophages, Clokie and Kropinski AM, eds. Humana Press. 2009). The obtained strain was inoculated on McConkie agar medium and then cultured overnight at 35 outside air. After incubation, strains susceptible to phage were selected by looking at the formation of transparent plaques. Sensitive strains were inoculated on McConkey agar medium and cultured for 12 hours at 35°C. A suspension of each strain was prepared in a saline 1ml tube with McFarland 0.5 turbidity, mixed with H top agar (3 ml), 100ul of susceptible bacteria and phage solution (1ul, 10ul and 50ul, respectively) and applied to LB agar, and then applied to LB agar for 35 to 12 hours. cultured. After observing the plaque, the plaque was collected with a Pasteur pipette, diluted in SM buffer solution, and purified three times using a suspension of the susceptible strain again. The pure bacteriophage thus obtained was diluted in SM buffer solution and purified three times using a suspension of a susceptible strain again. The pure bacteriophage thus obtained was diluted and stored in SM buffer solution.

실시예 1에서 확인한 항생제 내성 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae) 53개 균주 각각을 맥콘키 한천배지에서 접종하여 배양한 후, 상기 과정에 의해 정제된 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 도말된 각각의 내성 균주에 5ul로 접종하여 플라그 형성을 확인하고, 역가 범위를 확인하여, 용균성을 하기 표 2에 나타내었다. Antibiotic-resistant Klebsiella pneumoniae confirmed in Example 1 After inoculating and culturing each of 53 strains on McConkie agar medium, the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP purified by the above process was plated on each By inoculating the resistant strain with 5ul, the formation of plaque was confirmed, the titer range was confirmed, and the lytic properties are shown in Table 2 below.

단, 상기 표 2에서 + 및 -는 수집된 균주에 대한 플라크 활성을 평가한 것으로, '+'는 투명한 플라크(clear plaque)를 의미하고, '-'는 용균이 일어나지 않은 것을 의미한다.However, in Table 2, + and - indicate the evaluation of plaque activity against the collected strain, '+' means clear plaque, and '-' means no lysis.

숙주 균주host strain 용균 여부lysis or not 숙주 균주host strain 용균 여부lysis or not YMC15/09/P488YMC15/09/P488 ++ YMC15/11/R3218YMC15/11/R3218 ++ YMC15/09/P546YMC15/09/P546 ++ YMC15/11/N154YMC15/11/N154 ++ YMC15/09/U2874YMC15/09/U2874 ++ YMC15/11/R3705YMC15/11/R3705 ++ YMC15/09/N45YMC15/09/N45 -- YMC15/11/G223YMC15/11/G223 ++ YMC15/09/P756YMC15/09/P756 ++ YMC15/12/P746YMC15/12/P746 ++ YMC15/09/N55YMC15/09/N55 ++ YMC15/12/C910YMC15/12/C910 ++ YMC15/09/T741YMC15/09/T741 ++ YMC16/01/R859YMC16/01/R859 ++ YMC15/09/U4318YMC15/09/U4318 -- YMC16/01/N136YMC16/01/N136 ++ YMC15/09/P860YMC15/09/P860 ++ YMC16/01/N133YMC16/01/N133 ++ YMC15/09/C1052YMC15/09/C1052 ++ YMC16/01/N141YMC16/01/N141 ++ YMC15/10/N12YMC15/10/N12 ++ YMC16/01/N164YMC16/01/N164 ++ YMC15/10/U1383YMC15/10/U1383 ++ YMC16/01/N233YMC16/01/N233 ++ YMC15/10/P776YMC15/10/P776 ++ YMC16/01/N359YMC16/01/N359 ++ YMC15/10/N150YMC15/10/N150 ++ YMC16/01/R3917YMC16/01/R3917 ++ YMC15/11/N1073YMC15/11/N1073 ++ YMC16/01/R3958YMC16/01/R3958 ++ YMC15/11/G57YMC15/11/G57 ++ YMC16/02/B372YMC16/02/B372 ++ YMC15/11/B4059YMC15/11/B4059 ++ YMC16/02/N11YMC16/02/N11 ++ YMC15/11/U2284YMC15/11/U2284 -- YMC16/02/N162YMC16/02/N162 -- YMC15/11/N45YMC15/11/N45 -- YMC16/02/N394YMC16/02/N394 ++ YMC15/11/N53YMC15/11/N53 ++ YMC16/02/N393YMC16/02/N393 ++ YMC15/11/N54YMC15/11/N54 ++ YMC16/02/N499YMC16/02/N499 -- YMC15/11/N96YMC15/11/N96 ++ YMC16/02/N726YMC16/02/N726 -- YMC15/11/N98YMC15/11/N98 ++ YMC16/03/N942YMC16/03/N942 ++ YMC15/11/N101YMC15/11/N101 ++ YMC16/04/R1602YMC16/04/R1602 ++ YMC15/11/N107YMC15/11/N107 ++ YMC16/05/N235YMC16/05/N235 ++ YMC15/11/N115YMC15/11/N115 ++ YMC16/05/N151YMC16/05/N151 ++ YMC15/11/N137YMC15/11/N137 ++

상기 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP는 항생제 내성 클렙시엘라 뉴모니아 53개 균주 중 46개 균주(87%)를 용균 시키는 것을 확인할 수 있었다.As shown in Table 2, the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP according to the present invention was confirmed to lyse 46 strains (87%) of 53 strains of antibiotic-resistant Klebsiella pneumoniae.

[[ 실시예Example 3] 항생제 내성 3] Antibiotic resistance 클렙시엘라Klebsiella 뉴모니아균에in pneumonia 대한 About 용균성lytic 박테리오파지의 전자 현미경 분석 Electron Microscopy Analysis of Bacteriophages

상기 실시예 2의 방법에 의해 정제된 박테리오파지를 감수성 균주 배양 배지(20ml LB 배지)에 접종 및 배양한 뒤 220nm 밀리포어 필터로 여과하고, 상청액에 폴리에틸렌글리콜(MW 8,000)을 10%(w/v)의 양으로 첨가한 후 밤새 냉장 보관하였다. 이후 12,000g의 조건으로 20분 동안 원심 분리한 뒤, 에너지 여과 투과 전자현미경(Energy-Filtering Transmission Electron Microscope)을 이용하여 박테리오파지의 형태를 분석하여, 그 결과를 도 1에 나타내었다.The bacteriophage purified by the method of Example 2 was inoculated and cultured in a sensitive strain culture medium (20ml LB medium) and then filtered through a 220nm Millipore filter, and polyethylene glycol (MW 8,000) in the supernatant was 10% (w / v) ) and then refrigerated overnight. After centrifugation for 20 minutes under the conditions of 12,000 g, and then using an energy-filtering transmission electron microscope (Energy-Filtering Transmission Electron Microscope) to analyze the shape of the bacteriophage, the results are shown in FIG.

도 1에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지를 모양으로 분류하는 기준으로 보았을 때, 파지가 수축성이 없는 긴 꼬리(a long non-contractile tail)를 갖고, 시스(sheath)가 없으므로 시포비리대(Siphoviridae)에 속하는 것으로 분류하였다.As shown in FIG. 1, when viewed as a criterion for classifying the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention by shape, the phage has a long non-contractile tail without contractility, and a sheath It was classified as belonging to Siphoviridae.

[[ 실시예Example 4] 4] 박페리오파지의Bacteriophage 흡착능adsorption capacity 및 1단 증식 곡선(One-step growth curve) 분석 and One-step growth curve analysis

항생제 내성을 갖는 클렙시엘라 뉴모니아균을 OD 값이 0.5가 되도록 배양한 뒤, 클렙시엘라 뉴모니아균에 상기 실시예 2에서 정제된 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 MOI 0.001로 넣고 상온에서 배양한 뒤, 100ul 시료를 1, 2, 3, 4, 5분에 1ml씩 채취하여 LB 배지에 희석한 뒤 플라그 분석을 통해 상기 박테리오파지의 흡착능을 평가하여, 그 결과를 도 2에 나타내었다.After culturing Klebsiella pneumoniae having an antibiotic resistance to an OD value of 0.5, the bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP purified in Example 2 was added to Klebsiella pneumoniae at an MOI of 0.001 and cultured at room temperature. Then, 100ul samples were collected by 1ml every 1, 2, 3, 4, 5 minutes, diluted in LB medium, and then the adsorption capacity of the bacteriophage was evaluated through plaque analysis, and the results are shown in FIG. 2 .

또한, 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라 뉴모니아균을 OD 값이 0.3이 되도록 배양한 뒤, 4에서 5분 동안 7,000g로 원심 분리하여 세포를 침전시킨 후, 0.5ml의 LB 배지에 희석시키고, 상기 실시예 2에서 정제된 박테리오파지를 MOI 0.001(titer 108pfu/cells)를 넣고 37에서 5분 동안 배양하였다. 배양된 혼합 시료를 13,000g에서 1분 동안 원심 분리하여 얻어진 펠렛을 10ml의 LB 배지에 희석시키고 37에서 배양하였다. 배양 도중 10분 마다 시료를 채취하여 플라그 분석을 통해 상기 박테리오파지의 1단 증식 곡선을 평가하여, 그 결과를 도 3에 나타내었다.In addition, after culturing Klebsiella pneumoniae having an antibiotic resistance to an OD value of 0.3, centrifugation at 7,000 g for 4 to 5 minutes to precipitate the cells, diluted in 0.5 ml of LB medium, and The bacteriophage purified in Example 2 was put into MOI 0.001 (titer 10 8 pfu/cells) and incubated at 37 for 5 minutes. The pellet obtained by centrifuging the cultured mixed sample at 13,000 g for 1 minute was diluted in 10 ml of LB medium and incubated at 37 °C. Samples were collected every 10 minutes during culture to evaluate the single-stage proliferation curve of the bacteriophage through plaque analysis, and the results are shown in FIG. 3 .

도 2에서 보는 바와 같이, 상기 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지의 접종 후 5분 이내에 박테리오파지의 94% 정도가 클렙시엘라 뉴모니아균에 흡착하였다.As shown in Figure 2, within 5 minutes after inoculation of the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage, about 94% of the bacteriophage was adsorbed to Klebsiella pneumoniae.

또한, 도 3에서 보는 바와 같이, 1단 증식 곡선 결과 17PFU/감염 세포의 높은 버스트 사이즈를 나타내었다.In addition, as shown in FIG. 3, the result of the single-stage proliferation curve showed a high burst size of 17 PFU/infected cells.

상기 결과를 통해 본 발명에 따른 상기 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지는 항생제 내성을 갖는 클렙시엘라 뉴모니아균에 비교적 빠른 시간 내에 흡착할 수 있고, 17 PFU/감염 세포의 높은 버스트 사이즈를 나타내 항생제 내성 균주의 용균 효과를 발휘하는 것을 알 수 있다.Through the above results, the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention can adsorb in a relatively fast time to Klebsiella pneumoniae having antibiotic resistance, and 17 PFU/infected cells exhibit a high burst size of antibiotic-resistant strains. It can be seen that the lytic effect of

[[ 실시예Example 5] 생체 외 항생제 내성 5] In vitro antibiotic resistance 클렙시엘라Klebsiella 속 균에 대한 박테리오파지의 용균능 검증 Verification of the lytic ability of bacteriophages against genus bacteria

항생제 내성 클렙시엘라 뉴모니아균 1 X 109 CFU/ml에 준비된 박테리오파지 YMC15/11/N137_KPN_BP를 1 X 108 CFU/ml(MOI: 0.1), 1 X 109 PFU/ml(MOI: 1), 1 X 1010 PFU/ml(MOI: 10)의 양으로 각각 처리하고 시간 별로 OD 값(파장 600nm)을 측정하였다. 단, 음성 대조군으로는 PBS+SM 버퍼를 처리하여, 그 값을 도 4에 나타내었다.Antibiotic-resistant Klebsiella pneumoniae 1 X 10 9 CFU/ml of bacteriophage YMC15/11/N137_KPN_BP prepared in 1 X 10 8 CFU/ml (MOI: 0.1), 1 X 10 9 PFU/ml (MOI: 1), Each treatment was performed in an amount of 1 X 10 10 PFU/ml (MOI: 10), and the OD value (wavelength 600 nm) was measured for each time. However, as a negative control, PBS+SM buffer was treated, and the values are shown in FIG. 4 .

도 4에서 보는 바와 같이, 음성 대조군과 비교할 때, 클렙시엘라 뉴모니아균에 대하여 박테리오파지를 처리한 경우 OD 값이 감소하였고, MOI 값이 증가할수록 OD 값은 더욱 감소하였다.As shown in FIG. 4 , when compared to the negative control group, when the bacteriophage was treated for Klebsiella pneumoniae, the OD value was decreased, and as the MOI value increased, the OD value was further decreased.

상기 결과를 통해, 본 발명에 따른 박테리오파지는 항생제 내성 클렙시엘라 뉴모니아균에 대하여 용균성을 갖는 것을 알 수 있다.Through the above results, it can be seen that the bacteriophage according to the present invention has lytic properties against antibiotic-resistant Klebsiella pneumoniae.

[[ 실시예Example 6] 항생제 내성 6] Antibiotic resistance 클렙시엘라Klebsiella 속 균에 대한 박테리오파지의 안정성 평가 Stability evaluation of bacteriophages against genus bacteria

본 발명에 따른 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지가 온도 및 알칼리에서 파괴되지 않고 안정성을 유지하는지 확인하였다.It was confirmed whether the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention maintains stability without being destroyed in temperature and alkali.

상기 실시예 2의 방법에 의해 정제된 박테리오 파지 1 ㎕를 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10의 pH로 맞춘 SM 버퍼 40 ㎕에 넣은 뒤, 37℃에서 1시간 동안 배양한 뒤 항생제 내성 클렙시엘라 뉴모니아균과 함께 상기 실시예 4의 방법으로 플라크 분석을 실시하여 그 결과를 도 5에 나타내었다.1 μl of the bacteriophage purified by the method of Example 2 was placed in 40 μl of SM buffer adjusted to a pH of 4, 5, 6, 7, 8, 9 and 10, followed by incubation at 37° C. for 1 hour and then antibiotics Plaque analysis was performed by the method of Example 4 together with resistant Klebsiella pneumoniae, and the results are shown in FIG. 5 .

또한, 상기 박테리오파지 용액을 각각 40℃, 50℃, 60℃ 및 70℃에서 배양하는 1시간 동안 10분 단위로 각각의 샘플을 클렙시엘라 뉴모니아균과 함께 상기 실시예 4의 방법으로 플라크 분석을 실시하여 그 결과를 도 6에 나타내었다.In addition, the bacteriophage solution is incubated at 40 ° C., 50 ° C., 60 ° C. and 70 ° C. for 1 hour, each sample with Klebsiella pneumoniae. Plaque analysis by the method of Example 4 and the results are shown in FIG. 6 .

도 5에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 파지는 pH 7에 해당하는 중성에서 가장 안정성을 나타내었고, 14일 동안 산성에 비해서는 알칼리성에서 비교적 안정성을 나타내었다.As shown in FIG. 5 , the phage according to the present invention exhibited the most stability at a neutral pH corresponding to a pH of 7, and exhibited relatively stability in alkali compared to acid for 14 days.

또한, 도 6에서 보는 바와 같이, 상기 파지는 60℃에서 20분까지 30% 이상의 활성을 보일 정도로 높은 안정성을 보였다. In addition, as shown in FIG. 6 , the phage showed high stability enough to show 30% or more activity at 60° C. for 20 minutes.

[[ 실시예Example 7] 항생제 내성 7] Antibiotic resistance 클렙시엘라Klebsiella 속 균에 대한 박테리오파지의 전체 게놈 서열 분석 Whole genome sequence analysis of bacteriophages for genus bacteria

본 발명에 따른 상기 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지의 특성을 규명하기 위하여 전체 유전자 서열 분석을 Illumina sequencer(Roche)를 통하여 통상의 기술자에게 자명한 전체 게놈 서열 분석 방법을 기초로 분석하여, 그 결과를 도 7 및 표 3에 나타내었다.In order to characterize the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention, the whole genome sequence analysis is performed based on the whole genome sequence analysis method that is obvious to those skilled in the art through the Illumina sequencer (Roche), and the results are shown. 7 and Table 3.

유전체 번호dielectric number 범위(Range)Range 개시코돈start codon 스트랜드
(strand)strand
(strand) 길이
(bp)Length
(bp) 추정 기능
(Putative function)Estimation function
(Putative function) 주석 출처
(Annotation source)Annotation Source
(Annotation source) E-valueE-value NCBI blastP
identity (%)NCBI blastP
identity (%) NCBI-Bank accession numberNCBI-Bank accession number 시작start 종료End ORF1ORF1 951951 11361136 ATCATC ++ 186186 　 　 　 　 　 ORF2ORF2 11391139 15041504 ATCATC ++ 366366 　 　 　 　 　 ORF3ORF3 15071507 17821782 ATCATC ++ 276276 　 　 　 　 　 ORF4ORF4 17791779 19911991 ATCATC ++ 213213 putative DNA binding protein putative DNA binding protein [Salmonella phage 35][Salmonella phage 35] 1.00E-141.00E-14 53%53% AKJ74148.1 AKJ74148.1 ORF5ORF5 21542154 28072807 ATCATC ++ 654654 putative tail component K-like protein putative tail component K-like protein [Salmonella phage 35] [Salmonella phage 35] 9.00E-089.00E-08 43%43% AKJ74149.1 AKJ74149.1 ORF6ORF6 27972797 30483048 ATCATC ++ 252252 head outer capsid proteinhead outer capsid protein [Salmonella phage 35] [Salmonella phage 35] 2.00E-042.00E-04 47%47% AKJ74154.1 AKJ74154.1 ORF7ORF7 30573057 31823182 ATCATC ++ 126126 　 　 　 　 　 ORF8ORF8 31993199 34053405 ATCATC ++ 207207 　 　 　 　 　 ORF9ORF9 34023402 37013701 GTCGTC ++ 300300 　 　 　 　 　 ORF10ORF10 37133713 40574057 ATCATC ++ 345345 　 　 　 　 　 ORF11ORF11 42054205 47354735 ATCATC ++ 531531 　 　 　 　 　 ORF12ORF12 50875087 52005200 ATCATC ++ 114114 　 　 　 　 　 ORF13ORF13 52145214 78057805 ATCATC ++ 25922592 primase primase [Salmonella phage BP12C] [Salmonella phage BP12C] 00 62%62% YP_009300949.1YP_009300949.1 ORF14ORF14 78027802 80838083 ATCATC ++ 282282 putative transcriptional regulatorputative transcriptional regulator [Enterobacter phage Enc34] [Enterobacter phage Enc34] 2.00E-302.00E-30 52%52% WP_057524397.1WP_057524397.1 ORF15ORF15 83148314 87068706 ATCATC ++ 393393 RecT protein RecT protein [Salmonella phage 37] [Salmonella phage 37] 2.00E-042.00E-04 64%64% YP_009221371.1 YP_009221371.1 ORF16ORF16 88188818 91119111 ATCATC ++ 294294 Cas4-like protein Cas4-like protein [Escherichia phage Utah] [Escherichia phage Utah] 00 74%74% APD19328.1APD19328.1 ORF17ORF17 91049104 1045310453 ATCATC ++ 13501350 Cas4-like proteinCas4-like protein [Escherichia phage Utah] [Escherichia phage Utah] 00 74%74% APD19328.1 APD19328.1 ORF18ORF18 1050010500 1113811138 ATCATC ++ 639639 conserved phage protein conserved phage protein [Burkholderia phage BcepNazgul] [Burkholderia phage BcepNazgul] 1.00E-381.00E-38 41%41% NP_919004.1 NP_919004.1 ORF19ORF19 1120511205 1324713247 ATCATC ++ 20432043 DNA polymerase I DNA polymerase I [Salmonella phage FSL SP-124][Salmonella phage FSL SP-124] 00 78%78% AGF88048.1AGF88048.1 ORF20ORF20 1328613286 1358213582 ATCATC ++ 297297 VRR-NUC domain-containing protein VRR-NUC domain-containing protein [Salmonella phage SPN19][Salmonella phage SPN19] 2.00E-512.00E-51 79%79% YP_006990312.1YP_006990312.1 ORF21ORF21 1357513575 1511615116 ATCATC ++ 14881488 DNA helicaseDNA helicase [Escherichia phage Utah] [Escherichia phage Utah] 00 75%75% APD19332.1APD19332.1 ORF22ORF22 1510015100 1566915669 ATCATC ++ 570570 TerSTerS Salmonella phage Chi] Salmonella phage Chi] 2.00E-1082.00E-108 79%79% YP_009101106.1 YP_009101106.1 ORF23ORF23 1565915659 1773417734 ATCATC ++ 20762076 terminase large subunit terminase large subunit [Salmonella phage FSLSP030] [Salmonella phage FSLSP030] 00 80%80% YP_008239842.1YP_008239842.1 ORF24ORF24 1773717737 1799717997 ATCATC ++ 261261 head-tail joining protein lambda Whead-tail joining protein lambda W [Salmonella phage FSL SP-019] [Salmonella phage FSL SP-019] 8.00E-348.00E-34 80%80% AGF89268.1 AGF89268.1 ORF25ORF25 1799717997 196611961 ATCATC ++ 16651665 portal protein portal protein [Salmonella phage Chi] [Salmonella phage Chi] 00 77%77% YP_009101109.1 YP_009101109.1 ORF26ORF26 1968519685 2099820998 ATCATC ++ 13411341 prohead protease ClpPprohead protease ClpP [Salmonella phage FSL SP-019] [Salmonella phage FSL SP-019] 5.00E-1735.00E-173 65%65% AGF89266.1 AGF89266.1 ORF27ORF27 2101121011 2140021400 ATCATC ++ 390390 decorator proteindecorator protein [Salmonella phage FSLSP030] [Salmonella phage FSLSP030] 1.00E-581.00E-58 76%76% YP_008239846.1 YP_008239846.1 ORF28ORF28 2141321413 2247722477 ATCATC ++ 10651065 capsid proteincapsid protein [Salmonella phage FSLSP030] [Salmonella phage FSLSP030] 00 87%87% YP_008239847.1 YP_008239847.1 ORF29ORF29 2252822528 2279722797 ATCATC ++ 270270 　 　 　 　 　 ORF30ORF30 2279922799 2316423164 ATCATC ++ 366366 　 　 　 　 　 ORF31ORF31 2316423164 2378423784 ATCATC ++ 621621 　 　 　 　 　 ORF32ORF32 2378123781 2428424284 ATCATC ++ 504504 　 　 　 　 　 ORF33ORF33 2429824298 2543725437 ATCATC ++ 11401140 major tail proteinmajor tail protein [Escherichia phage Utah] [Escherichia phage Utah] 3.00E-1683.00E-168 65%65% APD19344.1 APD19344.1 ORF34ORF34 2554425544 2600226002 ATCATC ++ 459459 tail assembly chaperone tail assembly chaperone [Salmonella phage Chi] [Salmonella phage Chi] 4.00E-534.00E-53 57%57% YP_009101119.1YP_009101119.1 ORF35ORF35 2604426044 2624126241 ATCATC ++ 198198 pre-tape measure frameshift proteinpre-tape measure frameshift protein [Enterobacter phage Enc34] [Enterobacter phage Enc34] 7.00E-257.00E-25 71%71% YP_007007021.1YP_007007021.1 ORF36ORF36 2623426234 3054730547 ATCATC ++ 43144314 tape measure proteintape measure protein [Salmonella phage BP12C] [Salmonella phage BP12C] 00 66%66% YP_009300926.1YP_009300926.1 ORF37ORF37 3055130551 3333733337 ATCATC ++ 27872787 putative tail assembly protein putative tail assembly protein [Serratia marcescens SM39] [Serratia marcescens SM39] 3.00E-113.00E-11 24%24% BAO32272.1 BAO32272.1 ORF38ORF38 3334133341 3418934189 GTCGTC ++ 849849 putative FAD/FMN-containing dehydrogenase putative FAD/FMN-containing dehydrogenase [Pseudomonas phage vB_PaeS_PAO1_Ab18] [Pseudomonas phage vB_PaeS_PAO1_Ab18] 1.00E-381.00E-38 30%30% YP_009125171.1 YP_009125171.1 ORF39ORF39 3419834198 3442534425 ATCATC ++ 228228 tail assembly structural protein tail assembly structural protein [Pseudomonas phage MP1412] [Pseudomonas phage MP1412] 1.00E-081.00E-08 44%44% YP_006561081.1 YP_006561081.1 ORF40ORF40 3442234422 3462834628 ATCATC ++ 207207 　 　 　 　 　 ORF41ORF41 3462834628 3691336913 ATCATC ++ 22862286 virion structural protein virion structural protein [Pseudomonas phage PaMx11[Pseudomonas phage PaMx11 2.00E-1112.00E-111 33%33% YP_009196285.1YP_009196285.1 ORF42ORF42 3691636916 3769837698 ATCATC ++ 783783 tail fiber protein tail fiber protein [Providencia phage Redjac] [Providencia phage Redjac] 1.00E-131.00E-13 35%35% YP_006905987.1 YP_006905987.1 ORF43ORF43 3774537745 4035440354 ATCATC ++ 26102610 　 　 　 　 　 ORF44ORF44 4035940359 4145341453 ATCATC ++ 10951095 　 　 　 　 　 ORF45ORF45 4151541515 4167341673 ATCATC ++ 159159 　 　 　 　 　 ORF46ORF46 4180741807 4212942129 ATCATC ++ 323323 　 　 　 　 　 ORF47ORF47 4208642086 4222942229 ATCATC ++ 144144 　 　 　 　 　 ORF48ORF48 4222942229 4256142561 ATCATC ++ 333333 holinholin [Escherichia phage SerU-LTIIb] [Escherichia phage SerU-LTIIb] 4.00E-094.00E-09 34%34% ALP46943.1 ALP46943.1 ORF49ORF49 4257442574 4315843158 ATCATC ++ 585585 lys gene product lys gene product [Erwinia phage PEp14] [Erwinia phage PEp14] 2.00E-732.00E-73 56%56% YP_005098432.1 YP_005098432.1 ORF50ORF50 4315843158 4354743547 ATCATC ++ 390390 　 　 　 　 　 ORF51ORF51 4354443544 4380743807 ATCATC ++ 264264 　 　 　 　 　 ORF52ORF52 4383143831 4403144031 ATCATC -- 201201 　 　 　 　 　 ORF53ORF53 4402544025 4479844798 ATCATC -- 774774 　 　 　 　 　 ORF54ORF54 4479544795 4509445094 ATCATC -- 300300 　 　 　 　 　 ORF55ORF55 4509145091 4538745387 ATCATC -- 297297 　 　 　 　 　 ORF56ORF56 4538945389 4559845598 ATCATC -- 210210 　 　 　 　 　 ORF57ORF57 4560145601 4594845948 ATCATC -- 348348 　 　 　 　 　 ORF58ORF58 4595245952 4646446464 ATCATC -- 513513 　 　 　 　 　 ORF59ORF59 4654046540 4725347253 ATCATC -- 714714 　 　 　 　 　 ORF60ORF60 4725047250 4557045570 ATCATC -- -1679-1679 　 　 　 　 　 ORF61ORF61 4757247572 4832148321 ATCATC -- 750750 putative head morphogenesis proteinputative head morphogenesis protein [Salmonella phage FSLSP088] [Salmonella phage FSLSP088] 6.00E-466.00E-46 35%35% YP_008239932.1 YP_008239932.1 ORF62ORF62 4832148321 4955949559 ATCATC -- 12391239 　 　 　 　 　 ORF63ORF63 4962049620 5072650726 ATCATC -- 11071107 putative C-specific methylaseputative C-specific methylase [Escherichia phage K1-ind(3)] [Escherichia phage K1-ind(3)] 1.00E-1071.00E-107 55%55% ADA82477.1ADA82477.1 ORF64ORF64 5081950819 5121151211 ATCATC -- 393393 　 　 　 　 　 ORF65ORF65 5118951189 5145251452 ATCATC -- 264264 　 　 　 　 　 ORF66ORF66 5145651456 5167151671 ATCATC -- 216216 　 　 　 　 　 ORF67ORF67 5167451674 5238452384 GTCGTC -- 711711 putative DNA adenine methylaseputative DNA adenine methylase [Salmonella phage Chi] [Salmonella phage Chi] 8.00E-1048.00E-104 62%62% YP_009101147.1 YP_009101147.1 ORF68ORF68 5237752377 5269752697 ATCATC -- 321321 　 　 　 　 　 ORF69ORF69 5269452694 5301453014 ATCATC -- 321321 　 　 　 　 　 ORF70ORF70 5301153011 5349353493 ATCATC -- 483483 　 　 　 　 　 ORF71ORF71 5348353483 5389053890 ATCATC -- 408408 　 　 　 　 　 ORF72ORF72 5388753887 5465454654 ATCATC -- 768768 　 　 　 　 　 ORF73ORF73 5481154811 5508355083 ATCATC -- 273273 endolysin endolysin [Salmonella phage 37][Salmonella phage 37] 2.00E-222.00E-22 48%48% YP_009221448.1YP_009221448.1 ORF74ORF74 5508555085 5531255312 ATCATC -- 228228 tail fiber protein tail fiber protein [Salmonella phage 35] [Salmonella phage 35] 2.00E-142.00E-14 59%59% AKJ74137.1 AKJ74137.1 ORF75ORF75 5531455314 5638456384 ATCATC -- 10711071 exonuclease RdgC exonuclease RdgC [Salmonella phage FSL SP-124][Salmonella phage FSL SP-124] 2.00E-1622.00E-162 65%65% AGF87999.1 AGF87999.1 ORF76ORF76 5637456374 5670656706 ATCATC -- 333333 　 　 　 　 　 ORF77ORF77 5670356703 5701757017 ATCATC -- 315315 　 　 　 　 　 ORF78ORF78 5701457014 5724757247 ATCATC -- 234234 　 　 　 　 　 ORF79ORF79 5724057240 5768657686 ATCATC -- 447447 　 　 　 　 　 ORF80ORF80 5769957699 5804358043 ATCATC -- 345345 viral integrase family 4 viral integrase family 4 [Salmonella phage 37][Salmonella phage 37] 3.00E-243.00E-24 45%45% YP_009221453.1 YP_009221453.1 ORF81ORF81 5802158021 5848258482 ATCATC -- 462462 　 　 　 　 　 ORF82ORF82 5854258542 5891958919 ATCATC -- 378378 　 　 　 　 　

도 7 및 상기 표 3에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지가 용균 효과를 나타내는 단백질을 코딩하는 유전자의 서열은 ORF48(holing), ORF49 및 ORF73(endolysin) 등에 해당하였다.As shown in Figure 7 and Table 3, the sequence of the gene encoding the protein showing the lytic effect of the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention corresponds to ORF48 (holing), ORF49 and ORF73 (endolysin) and the like.

삭제delete

본 발명에 따른 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지의 서열을 기존의 박테리오파지의 서열과 대조한 결과, 본 발명에 따른 박테리오파지와 유사성을 갖는 박테리오파지는 검출되지 않았다.As a result of comparing the sequence of the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention with the sequence of the existing bacteriophage, the bacteriophage having similarity to the bacteriophage according to the present invention was not detected.

상기 결과를 통해 본 발명에 따른 YMC15/11/N137_KPN_BP 박테리오파지는 기존에 발견되지 않은 신규한 박테리오파지에 해당함을 알 수 있다.Through the above results, it can be seen that the YMC15/11/N137_KPN_BP bacteriophage according to the present invention corresponds to a novel bacteriophage that has not been previously discovered.

이상에서 본 발명에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다는 것은 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에게는 자명할 것이다.Although the present invention has been described in detail above, the scope of the present invention is not limited thereto, and it is common in the art that various modifications and variations are possible without departing from the technical spirit of the present invention described in the claims. It will be self-evident to those who have the knowledge of

한국생명공학연구원Korea Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC18573PKCTC18573P 2017051120170511

Claims (15)

카바페넴(Carbapenem) 내성 클렙시엘라 뉴모니아(Klebsiella pneumoniae)에 대하여 특이적인 세포 사멸능을 갖고, 명칭은 YMC15/11/N137_KPN_BP이고, 기탁번호는 [KCTC18573P]인, 박테리오파지로,
상기 카바페넴은 앰피실린(Ampicillin), 엠피실린/설벡탐(Ampicillin/Sulbactam), 아즈트레오남(Aztreonam), 세즈타지딤(Ceftazidime), 세파졸린(Cefazolin), 에르타페넴(Ertapenem), 세페핌(Cefepime), 세폭시틴(Cefoxitin), 세포탁심(Cefotaxime), 젠타마이신(Gentamicine), 레보플록세신(Levoflocacin), 메로페넴(Meropenem), 피페라실린/타조박탐(Piperacillin/Tazobactam), 코트리목사(Cotrimoxa), 및 티게틸린(Tigecyline)으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상인, 박테리오파지.Carbapenem (Carbapenem) resistant Klebsiella pneumoniae has a specific cell killing ability, the name is YMC15/11/N137_KPN_BP, the accession number is [KCTC18573P], as a bacteriophage,
The carbapenem is ampicillin, ampicillin/sulbactam, aztreonam, ceftazidime, cefazolin, ertapenem, cefepime (Cefepime), Cefoxitin, Cefotaxime, Gentamicine, Levoflocacin, Meropenem, Piperacillin/Tazobactam, Cotri Pastor (Cotrimoxa), and Tigetyline (Tigecyline) at least one selected from the group consisting of, bacteriophage. 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 박테리오파지는 시포비리데(Siphoviridae)에 속하는, 박테리오파지.The method of claim 1,
The bacteriophage belongs to the Siphoviridae (Siphoviridae), bacteriophage. 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제 1항 또는 제 3항의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 항생제.An antibiotic comprising the bacteriophage of claim 1 or 3 as an active ingredient. 제 1항 또는 제 3항의 박테리오파지를 유효성분으로 포함하는 소독제.A disinfectant comprising the bacteriophage of claim 1 or 3 as an active ingredient.
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