KR102224110B1 - Composition for reducing the skin pore containing a substance related to regulation of ABH antigen expression - Google Patents
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Abstract
본 발명은 모공을 축소시키는 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 항산화 효과를 제공하고, 이에 의하여 모공이 넓어지는 것을 예방하며, 또한 피부 자극의 생성을 방어할 수 있는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for shrinking pores, and more specifically, a composition capable of providing an antioxidant effect by controlling the expression of ABH antigen, thereby preventing the pores from widening, and also preventing the generation of skin irritation. It is about.
Description
본 발명은 모공을 축소시키는 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 항산화 효과를 제공하고, 이에 의하여 모공이 넓어지는 것을 예방하며, 또한 피부 자극의 생성을 방어할 수 있는 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for shrinking pores, and more specifically, a composition capable of providing an antioxidant effect by controlling the expression of ABH antigen, thereby preventing the pores from widening, and also preventing the generation of skin irritation. It is about.
혈액형 항원은 혈액의 적혈구 표면의 당단백질 혹은 당지질에서 발견된 특정한 항원성을 띄는 구조를 말한다. 대표적으로 ABO식 혈액형 항원(ABH 항원), 루이스(Lewis)식 혈액형 항원 등이 있으며, 특정구조의 당질화 말단기 구조에 따라 혈액형이 결정된다. ABO식 혈액형 항원 및 루이스식 혈액형 항원은 적혈구에서만 발현되는 것이 아니라, 인체의 다양한 부위에서 발견되며, 특히 ABO식 혈액형 항원은 개인의 혈액형에 따라 몸 안의 식도, 위장, 소장 등의 상피에서도 발현되는 것이 알려져 있고, 피부에서는 표피의 과립층에서 발현된다. Blood type antigen refers to a structure with specific antigenicity found in glycoproteins or glycolipids on the surface of red blood cells in blood. Representatively, there are ABO type blood type antigen (ABH antigen), Lewis type blood type antigen, and the like, and the blood type is determined according to the structure of the glycosylation end group of a specific structure. ABO-type blood-type antigen and Lewis-type blood-type antigen are not only expressed in red blood cells, but are found in various parts of the human body. It is known and is expressed in the granular layer of the epidermis in the skin.
이러한 ABO식 혈액형 항원의 표피의 과립층에서의 발현은, 해부학적인 위치상 피부의 가장 바깥층에서 나타나므로, 피부관련 질환, 특히 염증 질환과 밀접한 관계가 있다.Since the expression of the ABO type blood type antigen in the granular layer of the epidermis appears in the outermost layer of the skin in an anatomical position, it is closely related to skin-related diseases, particularly inflammatory diseases.
이와 같이, ABO식 혈액형 항원은 수혈과 장기이식의 거부반응의 주원인이 되는 매우 중요한 항원이지만, 1900년에 발견된 이래로 아직까지 거부반응 이외의 생리적 기능에 대해서는 연구된 바가 거의 없다.
As described above, ABO-type blood type antigen is a very important antigen that is the main cause of rejection of blood transfusion and organ transplantation, but since its discovery in 1900, little has been studied on physiological functions other than rejection.
이에 본 발명자들은 ABH 항원 발현의 조절이 항산화 효능, 모공 확대 예방, 피부 노화 예방과 관련이 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, the present inventors confirmed that the regulation of ABH antigen expression is related to antioxidant efficacy, pore enlargement prevention, and skin aging prevention, and completed the present invention.
따라서, 본 발명의 목적은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 모공 축소 및 모공 확대 예방 또는 피부 노화 예방에 효과적인 조성물을 제공하는 것이다.
Accordingly, it is an object of the present invention to provide a composition effective in preventing pore shrinkage and pore expansion or preventing skin aging by controlling the expression of ABH antigen.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 모공 축소용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for shrinking pores comprising, as an active ingredient, a substance that regulates the expression of the ABH antigen.
또한, 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 모공 확대 예방용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for preventing pore expansion comprising a substance that regulates the expression of the ABH antigen as an active ingredient.
또한, 본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 포함하는 피부 노화 예방용 조성물을 제공한다.
In addition, the present invention provides a composition for preventing skin aging, comprising as an active ingredient a substance that regulates the expression of the ABH antigen.
본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 함유하여, 활성 산소 제거와 콜라겐 합성 촉진을 통하여 모공을 축소시키며, 우수한 항산화력으로 인해 피부 자극의 생성을 방어하는 효과가 탁월하다.
The composition of the present invention contains a substance that regulates the expression of ABH antigen as an active ingredient, reduces pores by removing active oxygen and promoting collagen synthesis, and has an excellent effect of preventing the generation of skin irritation due to its excellent antioxidant power. .
도 1은 ABH 항원 및 루이스식 혈액형 항원의 구조를 나타낸 것이다.
도 2는 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질에 의해 HaCaT 세포주에서 B 항원의 발현이 증가되는 것을 나타내는 것이다. 1 shows the structure of the ABH antigen and Lewis type blood type antigen.
Figure 2 shows that the expression of the B antigen in the HaCaT cell line is increased by substances that regulate the expression of the ABH antigen.
본 발명은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition containing as an active ingredient a substance that regulates the expression of the ABH antigen.
특히, 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절함으로써 모공 축소, 모공 확대 예방 또는 피부 노화 예방 효과를 나타낸다.In particular, the composition of the present invention exhibits an effect of reducing pores, preventing pore expansion, or preventing skin aging by controlling the expression of the ABH antigen.
본 명세서에서, "ABH 항원"은 혈액의 적혈구 표면의 당단백질 혹은 당지질에서 발현된 특정한 항원성을 띄는 구조를 말하며, 대표적으로 ABH 항원은 도 1에 표현된 ABH 항원, 루이스식 혈액형 항원 등 ABH 항원 유사체의 집합체를 모두 포함하는 의미로 사용한다. ABH 항원 유사체는 단당류, 아미노산 등이 추가로 결합되어 있는 물질로서 ABH 항원 본래의 기능과 동일한 기능을 하는 물질을 의미한다. 도 1에 ABH 항원 및 루이스식 혈액형 항원의 구조를 나타내었다. In the present specification, "ABH antigen" refers to a structure having a specific antigenicity expressed in glycoproteins or glycolipids on the surface of red blood cells of blood, and representatively, ABH antigens are ABH antigens represented in FIG. 1, ABH antigens such as Lewis type blood type antigens, etc. It is used in the sense of including all the aggregates of analogues. The ABH antigen analog is a substance to which monosaccharides, amino acids, etc. are additionally bound, and refers to substances that have the same function as the original function of the ABH antigen. Figure 1 shows the structure of the ABH antigen and Lewis type blood type antigen.
본 명세서에서 "유효성분"은 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미하는 것이다.In the present specification, "active ingredient" refers to an ingredient that exhibits a desired activity by itself or can exhibit activity together with a carrier that does not have its own activity.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질을 포함한다. 이러한 ABH 항원의 발현 증가는 구체적으로 HaCaT 세포주에서의 B 항원의 발현 증가를 통하여 나타나는 것일 수 있다. In the composition of the present invention, the substance that modulates the expression of the ABH antigen includes a substance that increases the expression of the ABH antigen. The increase in the expression of the ABH antigen may be specifically caused by the increase in the expression of the B antigen in the HaCaT cell line.
본 발명의 조성물에 있어서, 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 1,3-디카페오일퀴닉산(1,3-dicaffeoylquinic acid)(화학식 1), 1,5-디카페오일퀴닉산(1,5-dicafeoylquinic acid)(화학식 2) 및 아멘토플라본(amentoflavone)(화학식 3)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물, 이의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염을 포함한다. In the composition of the present invention, the substance that regulates the expression of the ABH antigen is 1,3-dicaffeoylquinic acid (Formula 1), 1,5-dicafeoylquinic acid (1 ,5-dicafeoylquinic acid) (Chemical Formula 2) and amentoflavone (Chemical Formula 3) at least one compound selected from the group consisting of, a derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
본 명세서에서 "유도체"는 상기 화합물의 치환 가능한 위치에서 다른 치환기로 변경되는 모든 화합물을 의미하는 것이며, 이러한 치환기의 종류에는 제한이 없다. In the present specification, "derivative" refers to all compounds that are changed with other substituents at the position where the compound can be substituted, and there is no limitation on the kind of such a substituent.
본 명세서에서 "약학적으로 허용가능"이란 통상의 의약적 복용량(medicinal dosage)으로 이용할 때 상당한 독성 효과를 피함으로써, 동물, 더 구체적으로는 인간에게 사용할 수 있다는 정부 또는 이에 준하는 규제 기구의 승인을 받을 수 있거나 승인 받거나, 또는 약전에 열거되거나 기타 일반적인 약전으로 인지되는 것을 의미한다.As used herein, "pharmaceutically acceptable" means approval of the government or equivalent regulatory body for use in animals, more specifically in humans, by avoiding significant toxic effects when used in conventional medicinal dosages. It means available or approved, listed in the pharmacopoeia, or recognized as other general pharmacopoeia.
본 명세서에서 "약학적으로 허용가능한 염"은 약학적으로 허용가능하고 모 화합물(parent compound)의 바람직한 약리 활성을 갖는 본 발명의 일 관점에 따른 염을 의미한다. 상기 염은 (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 아세트산, 프로파이온산, 헥사노산, 시클로펜테인프로피온산, 글라이콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 3-(4-히드록시벤조일) 벤조산, 신남산, 만델산, 메테인설폰산, 에테인설폰산, 1,2-에테인-디설폰산, 2-히드록시에테인설폰산, 벤젠설폰산, 4-클로로벤젠설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 4-톨루엔설폰산, 캄퍼설폰산, 4-메틸바이시클로 [2,2,2]-oct-2-엔-1-카르복실산, 글루코헵톤산, 3-페닐프로파이온산, 트리메틸아세트산, tert-부틸아세트산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 히드록시나프토산, 살리실산, 스테아르산, 뮤콘산과 같은 유기산으로 형성되는 산 부가염(acid addition salt); 또는 (2) 모 화합물에 존재하는 산성 프로톤이 치환될 때 형성되는 염을 포함할 수 있다.In the present specification, "pharmaceutically acceptable salt" refers to a salt according to one aspect of the present invention that is pharmaceutically acceptable and possesses a desirable pharmacological activity of a parent compound. The salt is (1) formed of an inorganic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, or the like; Or acetic acid, propionic acid, hexanoic acid, cyclopentanepropionic acid, glycolic acid, pyruvic acid, lactic acid, malonic acid, succinic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, tartaric acid, citric acid, benzoic acid, 3-(4-hydroxybenzoyl) Benzoic acid, cinnamic acid, mandelic acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, 1,2-ethane-disulfonic acid, 2-hydroxyethanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, 4-chlorobenzenesulfonic acid, 2-naphthalenesulfonic acid, 4-Toluenesulfonic acid, camphorsulfonic acid, 4-methylbicyclo [2,2,2]-oct-2-ene-1-carboxylic acid, glucoheptonic acid, 3-phenylpropionic acid, trimethylacetic acid, tert -Acid addition salts formed from organic acids such as butyl acetic acid, lauryl sulfuric acid, gluconic acid, glutamic acid, hydroxynaphthoic acid, salicylic acid, stearic acid, muconic acid; Or (2) a salt formed when an acidic proton present in the parent compound is substituted.
본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 조성물 총 중량에 대하여 0.001중량% 내지 20중량%의 양으로 포함할 수 있다. The composition of the present invention may contain a substance that modulates the expression of the ABH antigen in an amount of 0.001% to 20% by weight based on the total weight of the composition.
상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 상기 범위로 사용할 경우, 본 발명이 의도하는 모공 축소, 모공 확대 예방 또는 피부 자극 생성 방어 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서 유용하다. 상기와 같은 관점에서, 본 발명의 조성물은 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질을 조성물 총 중량에 대하여 0.005중량% 내지 19.5중량%, 0.01중량% 내지 19중량%, 0.015중량% 내지 18.5중량%, 0.02중량% 내지 18중량%, 0.025중량% 내지 17.5중량%, 0.03중량% 내지 17중량%, 0.035중량% 내지 16.5중량%, 0.04중량% 내지 16중량% 또는 0.045중량% 내지 15.5중량%의 양으로 포함할 수 있다. When the substance that regulates the expression of the ABH antigen is used within the above range, it is not only suitable for exhibiting the intended pore reduction, pore expansion prevention, or skin irritation generation protective effect of the present invention, but also satisfies both the stability and safety of the composition. , It is useful in terms of cost-effectiveness. In view of the above, the composition of the present invention contains a substance that controls the expression of the ABH antigen, based on the total weight of the composition, from 0.005% to 19.5% by weight, from 0.01% to 19% by weight, from 0.015% to 18.5% by weight, and 0.02. Included in an amount of from weight% to 18% by weight, from 0.025% to 17.5% by weight, from 0.03% to 17% by weight, from 0.035% to 16.5% by weight, from 0.04% to 16% by weight, or from 0.045% to 15.5% by weight can do.
본 발명의 조성물은 활성 산소 제거와 콜라겐 합성을 촉진하여 모공을 축소시키고, 모공 확대 또는 피부 노화를 예방할 수 있으며, 또한 우수한 항산화력으로 인해 활성 산소종의 생성을 억제하여 피부 염증을 억제함으로써 피부 자극의 생성을 방어할 수 있다. The composition of the present invention can reduce pores by promoting active oxygen removal and collagen synthesis, and can prevent pore enlargement or skin aging. Also, due to its excellent antioxidant power, the composition of the present invention inhibits the production of reactive oxygen species, thereby inhibiting skin inflammation, thereby irritating the skin You can defend against the creation of.
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다. In the composition of one aspect of the present invention, the composition may be a cosmetic composition.
상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 유연화장수(스킨로션 및 밀크로션), 영양화장수, 에센스, 영양크림, 마사지크림, 팩, 젤, 에센스, 아이크림, 아이에센스, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 파우더, 보디로션, 보디크림, 보디오일 및 보디 에센스로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 아울러, 상기 화장료 조성물은 연고, 패치 등의 형태로 피부 외용제의 제형으로 사용하는 것을 포함할 수 있다.The formulation of the cosmetic composition is not particularly limited, and may be appropriately selected depending on the intended purpose. For example, softening lotion (skin lotion and milk lotion), nutritional lotion, essence, nutrition cream, massage cream, pack, gel, essence, eye cream, eye essence, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, powder, It may be prepared in one or more formulations selected from the group consisting of body lotion, body cream, body oil, and body essence, but is not limited thereto. In addition, the cosmetic composition may include use as an external preparation for skin in the form of an ointment, patch, or the like.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention can be provided in any formulation suitable for topical application. For example, it may be provided in the form of a solution, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in an aqueous phase, an emulsion obtained by dispersing an aqueous phase in an oil phase, a suspension, a solid, a gel, a powder, a paste, a foam, or an aerosol composition. Compositions of such formulations can be prepared according to conventional methods in the art.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 보습제, 에몰리언트제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및 무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한제를 더 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.01중량 내지 5중량%, 구체적으로 0.01중량 내지 3중량%일 수 있다.The cosmetic composition according to the present invention may include other ingredients that can give a synergistic effect to the main effect, preferably within a range that does not impair the main effect in addition to the above-described substances. In addition, the cosmetic composition according to the present invention may further include a moisturizing agent, an emollient agent, an ultraviolet absorber, a preservative, a disinfectant, an antioxidant, a pH adjuster, an organic and inorganic pigment, a fragrance, a cooling agent or a limiting agent. The blending amount of the ingredients can be easily selected by a person skilled in the art within a range that does not impair the object and effect of the present invention, and the blending amount is 0.01 to 5% by weight, specifically 0.01 to 3% by weight, based on the total weight of the composition. Can be
본 발명의 일 관점인 조성물에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물일 수 있다. In the composition of one aspect of the present invention, the composition may be a pharmaceutical composition.
본 발명에 따른 약학 조성물의 제형은 용액제, 현탁제, 유액제, 겔, 점적제, 좌제, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 부형제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.The formulation of the pharmaceutical composition according to the present invention may be a solution, a suspension, an emulsion, a gel, a drop, a suppository, a patch, or a spray, but is not limited thereto. The formulation can be easily prepared according to conventional methods in the art, and excipients, hydrating agents, emulsification accelerators, suspending agents, salts or buffers for controlling the osmotic pressure, coloring agents, spices, stabilizers, preservatives, preservatives or other compatible Adjuvants can be used in moderation.
본 발명의 약학 조성물의 유효 성분은 투여 받을 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 0.000025mg/g/일 내지 0.025mg/g/일, 보다 구체적으로는 0.00025mg/g/일 내지 0.01mg/g/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The active ingredient of the pharmaceutical composition of the present invention will vary depending on the age, sex, weight, pathological condition and severity of the subject to be administered, the route of administration, or the judgment of the prescriber. Determination of the application amount based on these factors is within the level of those skilled in the art, and its daily dose is, for example, from 0.000025 mg/g/day to 0.025 mg/g/day, more specifically from 0.00025 mg/g/day to 0.01 mg/day. It may be g/day, but is not limited thereto.
본 발명의 약학 조성물은 경구 또는 경피로 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or transdermally, but is not limited thereto.
또한, 본 발명은 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 가지고/가지거나, 피부 노화 억제 활성을 갖는 물질을 스크리닝하는 방법을 제공하며, 상기 방법은In addition, the present invention provides a method for screening a substance having pore-reducing or pore-enlarging inhibitory activity and/or skin aging inhibitory activity, the method comprising:
1) 시험 피부 세포에서 발현하는 ABH 항원의 발현 수준을 확인하는 단계; 1) checking the expression level of the ABH antigen expressed in the test skin cell;
2) 상기 시험 피부 세포에 후보 물질을 처리하는 단계; 2) treating the test skin cells with a candidate substance;
3) 상기 2) 단계의 세포에서 ABH 항원의 발현 수준을 확인하는 단계; 및 3) checking the expression level of the ABH antigen in the cells of step 2); And
4) 상기 1) 단계와 3) 단계의 결과를 비교하여 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질인지 여부를 결정하는 단계;4) comparing the results of steps 1) and 3) to determine whether or not it is a substance that increases the expression of the ABH antigen;
를 포함한다.Includes.
상기 방법에서, ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질이 모공 축소 또는 모공 확대 예방, 또는 피부 노화 예방에 효과가 있는 것으로 판단될 수 있다. In the above method, it may be determined that a substance that increases the expression of the ABH antigen is effective in reducing pores or preventing pore expansion, or preventing skin aging.
본 발명에 있어서, 상기 ABH 항원의 발현을 조절하는 물질은 1,3-디카페오일퀴닉산(1,3-dicaffeoylquinic acid), 1,5-디카페오일퀴닉산(1,5-dicafeoylquinic acid) 및 아멘토플라본(amentoflavone)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 화합물, 이의 유도체 또는 약학적으로 허용가능한 이의 염을 포함한다.In the present invention, the substance that regulates the expression of the ABH antigen is 1,3-dicafeoylquinic acid, 1,5-dicafeoylquinic acid. And at least one compound selected from the group consisting of amentoflavone, a derivative thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are for illustrative purposes only, and it will be apparent to those of ordinary skill in the art that the scope of the present invention is not construed as being limited by these examples.
[시험예 1] HaCaT 세포주에서 B 항원의 발현증가 효과[Test Example 1] Effect of increasing the expression of B antigen in HaCaT cell line
다양한 종류의 화합물이 ABH 항원의 발현에 미치는 영향을 실험하였다. 이를 위하여, HaCaT 세포(provided by Prof. Dr. N.E. Fusenig, DKFZ Heidelberg, Germany)를 35mm 디쉬에서 10% FBS-DMEM으로 24시간 동안 배양한 후, 24시간 동안 0% FBS-DMEM으로 배양하여 기아 상태로 만들었다. 다시 0% FBS-DMEM으로 배지를 갈아주면서 시험 물질로서 다양한 종류의 화합물을 각각 2μg/ml의 농도로 HaCaT 세포에 처리한 후, 48시간 동안 배양하였다. 이 때 비교를 위하여 대조군은 DMSO를 시료와 동일한 농도로 처리하였다. 시험 물질 중 ABH 항원의 발현을 유의적으로 증가시키는 3가지 물질, 즉 1,3-디카페오일퀴닉산(1,3-dicaffeoylquinic acid), 1,5-디카페오일퀴닉산(1,5-dicafeoylquinic acid) 및 아멘토플라본(amentoflavone)을 확인하였으며(데이터 미제시), 이들 3가지 화합물을 처리한 경우에 있어서 세포에서 단백질을 추출하여 세포 용해물을 동량으로 로딩하여 웨스턴 블랏으로 B형 항원의 발현을 조사하였다. 대조군으로는 알파-튜블린 단백질을 사용하였다. 측정 결과는 도 2에 나타내었다.The effects of various types of compounds on the expression of ABH antigen were tested. To this end, HaCaT cells (provided by Prof. Dr. NE Fusenig, DKFZ Heidelberg, Germany) were incubated in a 35 mm dish with 10% FBS-DMEM for 24 hours, and then incubated with 0% FBS-DMEM for 24 hours to starvation. Made with While changing the medium with 0% FBS-DMEM again, various kinds of compounds as test substances were treated on HaCaT cells at a concentration of 2 μg/ml, respectively, and cultured for 48 hours. At this time, for comparison, the control group was treated with DMSO at the same concentration as the sample. Among the test substances, three substances that significantly increase the expression of the ABH antigen, namely 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicafeoylquinic acid (1,5- dicafeoylquinic acid) and amentoflavone were identified (data not shown). In the case of treatment with these three compounds, proteins were extracted from the cells and the cell lysate was loaded in the same amount, Expression was examined. As a control, alpha-tubulin protein was used. The measurement results are shown in FIG. 2.
도 2를 보면, 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본 모두 HaCaT 세포에서 B형 항원의 발현을 증가시키는 효과가 있음을 확인할 수 있다.
Referring to FIG. 2, it can be seen that 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone all have the effect of increasing the expression of type B antigen in HaCaT cells.
[시험예 2] 활성 산소종(reactive oxygen species) 생성 억제 효과[Test Example 2] Effect of inhibiting production of reactive oxygen species
사람의 표피 조직에서 분리한 각질형성세포(keratinocyte)를 24웰(well) 세포배양 플레이트의 각 웰에 5×104개를 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 배양액을 제거한 후, 각 웰에 100㎕의 인산완충염액(PBS)을 넣었다. 이 각질형성세포에 자외선 B(UV B) 램프(Model: F15T8,UV B 15W, Sankyo Dennki社, Japan)를 이용하여 자외선 30mJ/㎠를 조사한 후, PBS를 덜어내고 각 웰에 각질형성세포 배양액 200㎕를 첨가하였다. 여기에 시험 물질로서 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본을 각각 2μg/ml 처리하고 일정 시간대별로 자외선 자극에 의해 증가한 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 양을 정량하였다. 이 때, 비교를 위하여 시험 물질을 처리하지 않고(무처리) 자외선 자극도 하지 않은 것 및 시험 물질을 처리하지 않고 자외선 자극을 한 것에 대한 활성 산소종의 양도 측정하였다. ROS의 양은 ROS에 의해 산화되는 DCF-DA(dichlorofluorescin diacetate)의 형광을 측정하는 Tan의 방법을 참고하여 정량하였으며(Tan et al.,1998, J. Cell Biol. Vol. 141, pp1423-1432), 대조군의 ROS에 대한 비율을 하기 표 1에 나타내었다.The keratinocytes (keratinocyte) isolated from the skin tissue of the person into a 5 × 10 4 are in each well of a 24 well (well) cell culture plate was attached for 24 hours. After removing the culture solution, 100 µl of phosphate buffered saline (PBS) was added to each well. After irradiating the keratinocytes with UV rays of 30 mJ/
상기 표 1에 나타낸 결과로부터, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 자외선에 의해 피부 세포 손상을 일으키는 것으로 알려진 ROS의 생성을 효과적으로 억제한다는 것을 확인할 수 있으며, 따라서, 이들 물질은 항산화 효능이 뛰어나다는 것을 알 수 있다.From the results shown in Table 1 above, the 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavones of the present invention effectively inhibit the production of ROS, which is known to cause skin cell damage by ultraviolet rays. It can be confirmed that it inhibits, and thus, it can be seen that these substances have excellent antioxidant efficacy.
따라서, 본 발명의 조성물에 함유되는 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 산화를 억제하고 노화를 막음으로써 모공이 넓어지는 것을 예방할 수 있으며, 이와 함께 피부 자극의 생성을 방어할 수 있다는 것을 알 수 있다.
Therefore, 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone contained in the composition of the present invention can prevent widening of pores by inhibiting oxidation and preventing aging, In addition, it can be seen that the production of skin irritation can be prevented.
[시험예 3] 콜라겐 생합성 촉진[Test Example 3] Promoting collagen biosynthesis
본 발명에서 사용되는 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본의 콜라겐 생합성 촉진 효과를 TGF-베타와 비교하여 측정하였다.The effect of promoting collagen biosynthesis of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid and amentoflavone used in the present invention was measured by comparing with TGF-beta.
우선, 섬유아세포(fibroblast)를 24웰 플레이트의 각 웰에 105개씩 파종 (seeding)하여 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이를 24시간 동안 무혈청 DMEM 배지로 배양한 후, 여기에 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본과 TGF-베타를 각각 2μg/ml 로 처리하고 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 이들의 상층액을 떠내어 프로콜라겐 형(I) ELISA 키트(procollagen type(I))를 이용하여 프로콜라겐(procollagen)의 증감여부를 보았다. 그 결과를 표 2에 나타내었으며, 콜라겐의 합성능은 비처리군을 100으로 하여 대비하였다. First, fibroblasts were seeded 10 5 in each well of a 24-well plate and cultured until about 90% growth. After incubating this in a serum-free DMEM medium for 24 hours, 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, amentoflavone and TGF-beta were treated with 2 μg/ml, respectively, and Incubated in a CO 2 incubator for 24 hours. The supernatant was removed and the increase or decrease of procollagen was examined using a procollagen type (I) ELISA kit (procollagen type (I)). The results are shown in Table 2, and the synthesis ability of collagen was compared with the untreated group as 100.
상기 표 2에 나타낸 결과로부터, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 양성대조군인 TGF-베타와 같이 높은 콜라겐 합성능을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.From the results shown in Table 2 above, 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone of the present invention show high collagen synthesis ability like the positive control TGF-beta. I could confirm.
따라서, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 모공 주변의 콜라겐 생성량을 증가시켜 넓어진 모공을 축소시킬 수 있다는 것을 알 수 있다.
Therefore, it can be seen that the 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavones of the present invention can reduce enlarged pores by increasing the amount of collagen produced around the pores.
[시험예 4] 피부 모공 수축 효과 평가[Test Example 4] Evaluation of skin pore contraction effect
1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본의 모공축소 효과를 토코페롤 및 EGCG와 비교하여 측정하였다. 리노마우스 60마리를 10마리씩 6개 군으로 나누고, 각 군의 리노마우스에 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본, 토코페롤 또는 EGCG의 1% 용액(용매로는 1,3-부틸렌글리콜:에탄올=7:3 사용)을 0.5㎖씩 도포하였다. 이 때 비교를 위하여 하나의 군에는 용매만을 0.5㎖ 도포하였다. 1주 동안 물질을 처리하고 마지막 처리 24시간 후 등쪽 부분을 생검하였다. 표피를 분리하여 0.5%의 아세트산에 담근 후 10% 포르말린에 고정한 후 6mm로 수직으로 잘랐다. 헤마톡실린과 에오신으로 염색한 후, 기계 접안 마이크로미터(Mechanical eyepiece micrometer)를 이용하여 모공의 크기를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.The pore-reducing effect of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone was measured in comparison with tocopherol and EGCG. Divide 60 rhino mice into 6 groups of 10 mice each, and a 1% solution of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid and amentoflavone, tocopherol or EGCG in each group of rhino mice (As a solvent, 1,3-butylene glycol:ethanol=7:3 was used) was applied by 0.5 ml each. At this time, only 0.5 ml of the solvent was applied to one group for comparison. The material was treated for 1 week and the dorsal portion was biopsied 24 hours after the last treatment. The epidermis was separated, immersed in 0.5% acetic acid, fixed in 10% formalin, and cut vertically into 6 mm. After staining with hematoxylin and eosin, the size of the pores was measured using a mechanical eyepiece micrometer. The results are shown in Table 3 below.
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본은 토코페롤 및 EGCG와 비교하여 모공의 크기를 감소시키는 효과가 뛰어남을 알 수 있다.
As shown in Table 3, 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone of the present invention have excellent effect of reducing the size of pores compared to tocopherol and EGCG. Can be seen.
[참고예] 실시예 및 비교예의 제조[Reference Example] Preparation of Examples and Comparative Examples
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 유연화장수(스킨로션) 제형의 실시예 1~3 및 비교예 1을 통상적인 제조 방법으로 제조하였다(단위: 중량%).According to the composition shown in Table 4 below, Examples 1 to 3 and Comparative Example 1 of a soft lotion (skin lotion) formulation were prepared by a conventional manufacturing method (unit:% by weight).
[시험예 5] 모공 수축에 대한 관능평가[Test Example 5] Sensory evaluation for pore shrinkage
시험 대상으로는 20~50세 여성층으로서 지성피부의 소유자 60명을 무작위로 15명씩 4개군으로 나누었다. 각 군에 대하여 세안 후 일정 시간이 지난 후 상기 실시예 1 내지 3 또는 비교예 1의 제품을 각각 도포하게 하였고, 이를 아침, 저녁으로 1일 2회 수행하게 한 후 4 주 후에 모공 크기를 육안으로 측정하였다. 그 결과는 하기의 표 5에 나타내었다(평가 등급 : 0. 전혀 축소 되지 않았다; 5. 매우 축소되었다)As the test subjects, 60 women aged 20-50 years old who had oily skin were randomly divided into 4 groups of 15 people each. For each group, after a certain period of time after washing, the products of Examples 1 to 3 or Comparative Example 1 were respectively applied, and the pore size was visually determined after 4 weeks after being performed twice a day in the morning and evening. It was measured. The results are shown in Table 5 below (evaluation grade: 0. Not reduced at all; 5. Very reduced)
상기 표 5의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본을 함유하는 조성물은 모공 수축 효과가 어느 것도 함유하지 않은 비교예의 조성물 보다 우수하다고 응답한 사용자가 유의하게 많았다.As can be seen from the results of Table 5, the composition containing 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone of the present invention does not contain any pore shrinking effect. There were significantly more users who answered that it was superior to the composition of the comparative example.
따라서, 본 발명의 1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본을 함유하는 피부 외용제 조성물의 모공 수축 효과가 우수함을 알 수 있었다.
Therefore, it was found that the pore-constricting effect of the composition for external application for skin containing 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavone of the present invention was excellent.
이하, 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하나, 약학 조성물 및 화장료 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, an example of the formulation of the composition according to the present invention will be described, but the pharmaceutical composition and the cosmetic composition can be applied in various formulations, and this is not intended to limit the present invention, but is intended to be described in detail.
[제형예 1] 화장수[Formulation Example 1] Lotion
아래 표 6에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 화장수를 제조한다.To prepare a lotion according to a conventional method with the composition shown in Table 6 below.
[제형예 2] 영양 크림[Formulation Example 2] Nourishing Cream
아래 표 7에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 영양 크림을 제조한다.To prepare a nourishing cream according to a conventional method with the composition shown in Table 7 below.
[제형예 3] 마사지 크림[Formulation Example 3] Massage Cream
아래 표 8에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 마사지 크림을 제조한다.To prepare a massage cream according to a conventional method with the composition shown in Table 8 below.
[제형예 4] 팩[Formulation Example 4] Pack
아래 표 9에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 팩을 제조한다.To prepare a pack according to a conventional method with the composition shown in Table 9 below.
[제형예 5] 젤[Formulation Example 5] Gel
아래 표 10에 기재된 조성으로 통상의 방법에 따라 젤을 제조한다.To prepare a gel according to a conventional method with the composition shown in Table 10 below.
[제형예 6] 연고[Formulation Example 6] Ointment
아래 표 11에 기재된 조성으로 통상적인 방법으로 연고를 제조하였다.An ointment was prepared by a conventional method with the composition shown in Table 11 below.
[제형예 7] 연질캅셀제[Formulation Example 7] Soft Capsule
1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 0.0025g, 비타민 C 0.0025g, 팜유 2mg, 팜경화유 8mg, 황납 4mg 및 레시틴 6mg을 혼합하고, 통상의 방법에 따라 1 캡슐당 400 mg씩 충진하여 연질캅셀을 제조하였다.
0.0025g of one or more compounds selected from the group consisting of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid and amentoflavones, vitamin C 0.0025g, palm oil 2mg, hydrogenated palm oil 8mg, sulfur wax 4mg and 6 mg of lecithin was mixed, and 400 mg per capsule was filled according to a conventional method to prepare a soft capsule.
[제형예 8] 정제[Formulation Example 8] Tablet
1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 0.0025g, 비타민 C 0.0025g, 포도당 100mg, 전분 96mg 및 마그네슘 스테아레이트 4mg을 혼합하고 30% 에탄올을 40mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하고 타정기를 이용하여 정제로 타정하였다.
0.0025g of one or more compounds selected from the group consisting of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid and amentoflavones, vitamin C 0.0025g, glucose 100mg, starch 96mg and magnesium stearate 4mg After mixing and adding 40 mg of 30% ethanol to form granules, dried at 60° C. and tableted into tablets using a tablet press.
[제형예 9] 과립제[Formulation Example 9] Granules
1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 150mg, 비타민 C 150mg, 포도당 100mg, 및 전분 600mg을 혼합하고 30% 에탄올을 100 mg 첨가하여 과립을 형성한 후, 60℃에서 건조하여 과립을 형성한 다음 포에 충진하였다. 내용물의 최종 중량은 1g으로 하였다.
150 mg of one or more compounds selected from the group consisting of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid, and amentoflavones, 150 mg of vitamin C, 100 mg of glucose, and 600 mg of starch were mixed and 30% ethanol 100 mg of was added to form granules, and then dried at 60° C. to form granules, and then filled into a cloth. The final weight of the contents was 1 g.
[제형예 10] 드링크제[Formulation Example 10] Drink agent
1,3-디카페오일퀴닉산, 1,5-디카페오일퀴닉산 및 아멘토플라본으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물 0.0025g, 비타민 C 0.0025g, 포도당 10g, 구연산 2g 및 정제수 187.8g을 혼합하고 병에 충진하였다. 내용물의 최종 용량은 200ml로 하였다.
0.0025 g of one or more compounds selected from the group consisting of 1,3-dicaffeoylquinic acid, 1,5-dicaffeoylquinic acid and amentoflavone, vitamin C 0.0025g, glucose 10g, citric acid 2g and purified water 187.8g Mixed and filled into bottles. The final volume of the contents was 200 ml.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.As described above, specific parts of the present invention have been described in detail, and it is obvious that these specific techniques are only preferred embodiments for those of ordinary skill in the art, and the scope of the present invention is not limited thereby. something to do. Accordingly, it will be said that the substantial scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (10)
상기 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 1,3-디카페오일퀴닉산(1,3-dicaffeoylquinic acid), 1,5-디카페오일퀴닉산(1,5-dicafeoylquinic acid) 및 아멘토플라본(amentoflavone)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물, 이의 유도체 또는 이의 염임을 특징으로 하는, 모공 축소용 화장료 조성물.As a cosmetic composition for shrinking pores comprising a substance that increases the expression of ABH antigen as an active ingredient,
Substances that increase the expression of the ABH antigen include 1,3-dicafeoylquinic acid, 1,5-dicafeoylquinic acid, and amentoflavone ( amentoflavone), characterized in that at least one compound selected from the group consisting of, a derivative thereof, or a salt thereof, a cosmetic composition for shrinking pores.
상기 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질은 1,3-디카페오일퀴닉산(1,3-dicaffeoylquinic acid), 1,5-디카페오일퀴닉산(1,5-dicafeoylquinic acid) 및 아멘토플라본(amentoflavone)으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 화합물, 이의 유도체 또는 이의 염임을 특징으로 하는, 모공 확대 예방용 화장료 조성물.A cosmetic composition for preventing pore expansion comprising a substance that increases the expression of ABH antigen as an active ingredient,
Substances that increase the expression of the ABH antigen include 1,3-dicafeoylquinic acid, 1,5-dicafeoylquinic acid, and amentoflavone ( amentoflavone), characterized in that at least one compound selected from the group consisting of, a derivative thereof, or a salt thereof, a cosmetic composition for preventing pore enlargement.
2) 상기 시험 피부 세포에 후보 물질을 처리하는 단계;
3) 상기 후보 물질을 처리한 시험 피부 세포의 ABH 항원 발현 수준을 확인하는 단계; 및
4) 상기 1) 단계와 3) 단계의 확인 결과를 비교하여 상기 후보 물질이 ABH 항원의 발현을 증가시키는 물질이면 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 갖는 물질로 결정하는 단계;
를 포함하는, 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 갖는 물질을 스크리닝하는 방법.1) checking the ABH antigen expression level of the test skin cell;
2) treating the test skin cells with a candidate substance;
3) checking the ABH antigen expression level of the test skin cells treated with the candidate substance; And
4) comparing the confirmation results of steps 1) and 3), and if the candidate substance is a substance that increases the expression of the ABH antigen, determining a substance having pore-reduction or pore-enlargement inhibitory activity;
A method for screening a substance having an activity of reducing pores or inhibiting pore expansion, comprising a.
상기 1) 단계는 상기 시험 피부 세포의 콜라겐 합성 수준 및 시험 동물(단, 인간은 제외)의 피부 모공 크기를 확인하는 단계를 더 포함하고,
상기 2) 단계는 상기 시험 동물의 피부에 상기 후보 물질을 도포하는 단계를 더 포함하며,
상기 3) 단계는 상기 후보 물질을 처리한 시험 피부 세포의 콜라겐 합성 수준 및 상기 후보 물질을 도포한 시험 동물의 피부 모공 크기를 확인하는 단계를 더 포함하고,
상기 4) 단계는 상기 후보 물질 처리 전후의 시험 피부 세포의 ABH 항원 발현 수준 및 콜라겐 합성 수준과, 상기 후보 물질 도포 전후의 시험 동물의 피부 모공 크기의 확인 결과를 비교하여, 상기 후보 물질이 ABH 항원의 발현을 증가시키고, 콜라겐 합성을 촉진시키며, 피부 모공을 수축시키는 물질이면 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 갖는 물질로 결정하는 것을 특징으로 하는, 모공 축소 또는 모공 확대 억제 활성을 갖는 물질을 스크리닝하는 방법.The method of claim 7,
The step 1) further comprises the step of checking the collagen synthesis level of the test skin cells and the skin pore size of the test animal (except for humans),
The step 2) further comprises applying the candidate material to the skin of the test animal,
The step 3) further comprises confirming the collagen synthesis level of the test skin cells treated with the candidate substance and the skin pore size of the test animal to which the candidate substance was applied,
Step 4) compares the ABH antigen expression level and collagen synthesis level of the test skin cells before and after the candidate substance treatment, and the result of confirming the skin pore size of the test animal before and after application of the candidate substance, and the candidate substance is the ABH antigen. If it is a substance that increases the expression of, promotes collagen synthesis, and shrinks skin pores, it is determined as a substance having pore shrinking or pore expansion inhibiting activity. Way.
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