KR102195910B1 - Tumorigenic-specific enzyme sensitive-nanofiber coated gastrointestinal stent for eluting vorinostat and manufacturing method the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 및 그 제조방법에 있어서, 카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드를 이용하여 생분해성 고분자 블록공중합체를 합성하는 단계와; 상기 생분해성 고분자 블록공중합체와 보리노스탯(vorinostat)을 유기용매에 녹여 방사용액을 형성하고, 상기 방사용액을 스텐트본체에 방사 하는 단계를 포함하는 것을 기술적 요지로 한다. 이에 의해 히스톤 디아세틸라아제 억제 효과가 있는 보리노스탯을 담지한 나노섬유를 제조하여 담관용 스텐트에 코팅하는 것으로, 인체 내 소화기관 중 하나인 담관 내에서 발생한 담도암에 보다 활용도가 높은 효과를 얻을 수 있다. 또한, 생분해성 고분자를 카텝신 B에 의해 분해되는 펩타이드로 다른 고분자와 공유결합하여 블록공중합체로 제조하고, 이를 이용하여 보리노스탯이 담지된 나노섬유로 만들어 담도용 스텐트에 고정할 수 있다.The present invention relates to a vorinostat-release digestive tract stent coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber and a method for manufacturing the same, in which glycine-phenylalanine-leucine-glycine is specifically degraded to cathepsin B ( Synthesizing a biodegradable polymer block copolymer using Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide; The technical gist of the present invention is to dissolve the biodegradable polymer block copolymer and vorinostat in an organic solvent to form a spinning solution, and spin the spinning solution onto the stent body. As a result, nanofibers carrying a vorinostat that has an effect of inhibiting histone deacetylase are prepared and coated on a stent for bile ducts, which is more useful for biliary cancer occurring in the bile duct, one of the digestive organs of the human body. Can be obtained. In addition, a biodegradable polymer is prepared as a block copolymer by covalently bonding with other polymers as a peptide degraded by cathepsin B, and using this, it can be made into a vorinostat-supported nanofiber and fixed to a stent for biliary tract.

Description

종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 및 그 제조방법 {Tumorigenic-specific enzyme sensitive-nanofiber coated gastrointestinal stent for eluting vorinostat and manufacturing method the same}Tumor-specific enzyme sensitive-nanofiber coated gastrointestinal stent for eluting vorinostat and manufacturing method the same}

본 발명은 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 및 그 제조방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 종양 조직 또는 암세포에 특이적으로 발현하는 히스톤 디아세틸라아제를 저해하는 효과가 있는 보리노스탯을 담지한 스텐트로, 특히 보리노스탯의 약물방출조절 능력이 보다 향상된 나노섬유에 보리노스탯을 담지하고 나노섬유 필름을 소화기용 스텐트에 코팅하여 소화기암을 효과적으로 억제할 수 있는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 및 그 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a vorinostat-releasing digestive tract stent coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber and a method for producing the same, and more particularly, to inhibit histone deacetylase specifically expressed in tumor tissues or cancer cells. It is a stent carrying a vorinostat that has an effective effect, and in particular, a vorinostat is supported on nanofibers with improved drug release control ability, and a nanofiber film is coated on the digestive stent to effectively inhibit gastrointestinal cancer. It relates to a vorinostat-release digestive tract stent coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber and a method of manufacturing the same.

인간의 식생활 및 생활패턴의 변화로 국내의 암 발병률 중 특히 위암, 식도암, 대장암, 담도암, 췌장암, 간암 등과 같은 소화기암의 발병률이 급증하고 있으며, 이는 매년 상위 10대 암 중에 포함되고 있다. 소화기암의 치료법은 수술, 화학 치료법, 면역요법, 방사선 치료법 등 다양한 치료법이 있지만, 조기 발견되어 외과적 수술이 가능한 경우를 제외하고는 대부분의 치료법이 예후가 나쁜 편이다. 또한 상당히 많은 예에서 이미 진행된 상태로 발견되며 수술이 불가능한 경우가 상당수이다. 진행된 소화기암은 위장관, 식도 또는 담관과 같이 소화기관을 막아 연하곤란, 구토, 황달과 같은 증상을 일으킨다. 따라서 환자생존이나 삶의 질 향상을 위해서 막힌 관을 개통시켜야 하는데, 과거의 바이패스(bypass) 수술을 이용한 치료법보다는 내시경 또는 방사선중재 스텐트 삽입술이 1차 치료법으로 인정받고 있다. The incidence of gastrointestinal cancers such as gastric cancer, esophageal cancer, colon cancer, biliary tract cancer, pancreatic cancer, liver cancer, and the like, among cancer incidence rates in Korea are rapidly increasing due to changes in human diet and lifestyle patterns, which are included among the top 10 cancers every year. There are various treatments for gastrointestinal cancer such as surgery, chemotherapy, immunotherapy, and radiation therapy, but most of the treatments have a poor prognosis, except for cases where surgical operation is possible due to early detection. In addition, many cases are found to have already progressed and surgery is not possible in many cases. Advanced gastrointestinal cancer blocks the digestive system such as the gastrointestinal tract, esophagus, or bile duct, causing symptoms such as difficulty swallowing, vomiting, and jaundice. Therefore, in order to survive or improve the quality of life, a blocked tube must be opened. Endoscopic or radiation-mediated stent implantation is recognized as the primary treatment rather than a conventional bypass surgery.

소화기용 스텐트는 협착된 소화관 내에 삽입 및 장착되어 협착부위를 원래의 크기로 다시 확장시키는 의료장치이며, 소화기암에 사용되는 스텐트는 스테인레스스틸(stainless steel), 니켈티타늄(nickel titanium, nitinol), 코발트크로뮴(cobalt chromium) 등의 금속으로 제조되어 얇은 직경의 방출도구를 통해 체내에 삽입된다. 이와 같이 협착된 자리에 삽입된 스텐트가 스스로 팽창하는 경우를 자가 팽창형 금속 스텐트(self-expandable bare metal stent)라고 하며, 이는 담관계나 기도, 위장관 등의 비혈관계에 사용되고 있다. 이러한 금속 스텐트는 직접적인 암세포 사멸 효과가 없기 때문에 스텐트 삽입 후 일정 기간이 흐른 뒤 암세포의 성장으로 인한 스텐트의 재협착이 발생하는 단점이 있다. 따라서 기존의 스텐트에 항암제와 같은 약물을 코팅하여 약물이 서서히 방출되게 함으로써 스텐트가 삽입된 곳에 항암제를 전달하여 암세포 성장을 억제하는 국소약물전달(local drug delivery) 개념을 가진 약물방출 스텐트(drug eluting stent, DES)의 개발이 소화기암의 극복을 위해 시급한 상황이다.The digestive stent is a medical device that is inserted and installed in the constricted digestive tract to expand the constricted area back to its original size, and the stent used for digestive cancer is stainless steel, nickel titanium (nitinol), and cobalt. It is made of metal such as chromium (cobalt chromium) and is inserted into the body through a thin-diameter release device. A case in which the stent inserted in such a constricted site expands by itself is called a self-expandable bare metal stent, which is used for non-vascular systems such as the bile tract, airways, and gastrointestinal tract. Since these metal stents do not have a direct cancer cell killing effect, there is a disadvantage that restenosis of the stent occurs due to the growth of cancer cells after a certain period of time after the stent is inserted. Therefore, a drug-eluting stent with the concept of local drug delivery that suppresses the growth of cancer cells by delivering the anticancer agent to the place where the stent is inserted by coating a drug such as an anticancer agent on the existing stent to release the drug slowly. , DES) is an urgent situation to overcome gastrointestinal cancer.

한편 최근 연구가 활발하게 진행되고 있는 전기방사에 의한 나노섬유(nanofiber)의 경우, 상온, 상압의 환경에서 단백질이나 약물을 손상 없이 나노크기의 섬유 내에 방사와 동시에 담지할 수 있으므로, 금속 스텐트와 같은 지지체에 직접 방사하여 코팅하거나 후처리를 통하여 약물이 함유된 고분자 나노섬유를 지지체에 부착시킬 수 있는 방법이 고안되고 있다. 이러한 전기방사 기법에 의해 제조된 나노섬유는 섬유의 직경, 두께, 약물 담지량 등을 손쉽게 조절가능하며, 섬유상 구조를 하고 있어 약물방출형 스텐트와 같은 다양한 분야에 적용이 가능한 장점을 가지고 있다.On the other hand, in the case of nanofibers by electrospinning, which has been actively researched recently, proteins or drugs can be simultaneously spun and supported in nano-sized fibers without damage in an environment at room temperature and pressure, such as metal stents. A method has been devised in which polymer nanofibers containing drugs can be attached to the support through direct spinning and coating or post-treatment. The nanofibers manufactured by this electrospinning technique can easily control the diameter, thickness, and drug loading amount of the fibers, and have a fibrous structure, so they can be applied to various fields such as drug-releasing stents.

비혈관 스텐트는 식도, 담관계 등 소화관 이외에도 기관과 기관지 등에서도 흔하게 사용되고 있으며, 공통적으로 두 가지 문제를 예방해야 한다. 첫째는 삽입된 스텐트에 대한 이물반응으로 조직의 양성 과형성이 발생하여 내강을 좁게 하는 내증식이다. 둘째는 암에 의한 체내 통로의 폐쇄를 치료하기 위해 삽입된 스텐트에서 악성 과증식이 일어나는 것이다. 소화기용 약물방출 스텐트의 주요 목표는 종양의 과증식으로 인한 소화관의 폐쇄를 예방하는 것이다. 소화관 스텐트는 베어메탈 스텐트(bare metal stent) 혹은 비분해성 고분자가 코팅된 커버드 스텐트(covered stent)로 나뉘고, 약물방출 스텐트는 이러한 스텐트 표면에 항암효과가 있는 약물을 고분자와 함께 코팅하여 약물이 제어방출되도록 한 것이다. 약물을 소화기용 스텐트에 코팅하는 방법은 크게 세 가지로 구분할 수 있다. Non-vascular stents are commonly used in organs and bronchi in addition to the digestive tract such as the esophagus and bile ducts, and two problems in common must be prevented. First, a foreign body reaction to the inserted stent causes benign hyperplasia of the tissue, resulting in a narrowing of the lumen. Second, malignant hyperproliferation occurs in the stent inserted to treat the obstruction of the body passage by cancer. The main goal of gastrointestinal drug-releasing stents is to prevent obstruction of the digestive tract due to tumor overgrowth. Digestive tract stents are divided into bare metal stents or covered stents coated with non-degradable polymers, and drug-releasing stents are controlled by coating drugs with anticancer effect on the surface of these stents with polymers. To be released. There are three methods of coating drugs on the digestive stent.

1) 고분자와 약물을 금속스텐트 메쉬 위에 동시에 직접 코팅하는 방법, 2) 고분자 없이 약물을 다공성의 금속 스텐트의 다공에 약물을 부착하는 방법, 3) 마지막으로 약물을 담지한 고분자를 필름 형태로 제조하고 스텐트에 고정하는 방법이 있다. 이때 고분자는 비분해성과 생분해성 고분자를 모두 사용할 수 있으며 약물이 비분해성 고분자에 녹아 있는 경우 확산에 의해 약물이 방출되는데, 코팅된 고분자의 두께에 의해 약물방출 경향이 제어되며, 혈관용 약물방출 스텐트인 CYPHERTM이나 TAXUSTM등이 해당된다. 생분해성 고분자를 사용할 경우, 약물이 담지된 고분자의 생분해가 시간이 지남에 따라 발생하며 이에 따라 약물이 용출되게 된다. 여기서 고분자는, Polyurethane(PU), polyethylene, Teflon, polytetrafluoroethylene(PTFE), polycarprolactone(PCL), poly(lactic acid-co-glycolic acid)(PLGA), polyvinylalcohol(PVA) 등과 같은 고분자를 약물을 담지하는 매체로 사용하며, 이는 많은 양의 약물을 스텐트에 코팅할 수 있다.1) A method of directly coating a polymer and a drug on the metal stent mesh at the same time, 2) A method of attaching the drug to the pores of a porous metal stent without a polymer, and 3) Finally, a polymer carrying the drug is prepared in the form of a film. There is a way to fix it to the stent. At this time, both non-degradable and biodegradable polymers can be used as the polymer, and when the drug is dissolved in the non-degradable polymer, the drug is released by diffusion. The drug release tendency is controlled by the thickness of the coated polymer, and the drug release stent for blood vessels These include CYPHER TM and TAXUS TM . When a biodegradable polymer is used, biodegradation of the drug-carrying polymer occurs over time, and the drug is thus eluted. Here, the polymer is a medium containing a drug such as polyurethane (PU), polyethylene, Teflon, polytetrafluoroethylene (PTFE), polycarprolactone (PCL), poly(lactic acid-co-glycolic acid) (PLGA), polyvinylalcohol (PVA), etc. It is used as, which can coat a large amount of drug on the stent.

그러나 지금까지 사용된 대부분의 항암제는 소화기암에 효과가 없는 파클리탁셀(paclitaxel), 시스플라틴(cisplatin) 등 일반 항암제를 담지한 경우가 대부분이였으며, 이러한 항암제를 단순한 비다공성/다공성 고분자 필름에 담지하여 스텐트에 코팅하였다. 이는 약물의 조절 방출이 어렵고, 단순 고분자 필름은 표면적이 작아서 소화관 내에 발생한 종양에 충분히 밀착시키기가 어려웠던 것이 사실이다. 반면에 나노섬유는 일반 필름에 비하면 표면적이 수천 배 넓기 때문에 종양에 대한 약물 방출 효과가 훨씬 더 클 것으로 기대할 수 있다.However, most of the anticancer drugs used so far have been loaded with general anticancer drugs such as paclitaxel and cisplatin, which have no effect on gastrointestinal cancer, and these anticancer drugs are supported on a simple non-porous/porous polymer film to prevent stents. Coated on. It is true that the controlled release of the drug is difficult, and the simple polymer film has a small surface area, which makes it difficult to sufficiently adhere to the tumor generated in the digestive tract. On the other hand, nanofibers have a surface area that is thousands of times larger than that of ordinary films, so it can be expected that the drug release effect on tumors is much greater.

이와 같은 스텐트에 따른 종래기술은 '대한민국특허청 등록특허 제10-1049871호 맥관 스텐트용 실 및 이 실을 이용한 맥관용 스텐트'가 있는데, 종래기술의 경우에는 생분해성 고분자 소재를 사용하여 나노섬유를 제작하고 있으나 고분자 소재가 주로 사슬 형태로 이루어져 있기 때문에 빠른 생분해가 힘들며, 소화기암에 선택적으로 생분해되는 것이 아니기 때문에 암 치료에 특별한 효과를 기대할 수 없다. The prior art for such a stent is'Korean Patent Office Registration Patent No. 10-1049871, a vascular stent thread and a vascular stent using this thread'. In the case of the prior art, nanofibers are manufactured using a biodegradable polymer material. However, since the polymer material is mainly composed of chains, it is difficult to rapidly biodegrade, and since it is not selectively biodegraded to gastrointestinal cancer, special effects cannot be expected in cancer treatment.

이러한 상황들을 고려해 볼 때, 항암제 등의 약물의 항암활성을 그대로 유지하면서 소화기관에서 약물이 일정하게 방출되고, 종양조직에 충분히 밀착하여 약물을 방출할 수 있도록 약물이 담지된 나노섬유를 소화기용 스텐트에 코팅하는 기술의 개발이 필요하다. Considering these circumstances, the drug-carrying nanofiber is used as a digestive stent so that the drug is constantly released from the digestive tract while maintaining the anticancer activity of drugs such as anticancer drugs, and sufficiently adheres to the tumor tissue to release the drug. It is necessary to develop a coating technology.

대한민국특허청 등록특허 제10-1477517호Korean Intellectual Property Office Registration Patent No. 10-1477517 대한민국특허청 등록특허 제10-1049871호Korean Intellectual Property Office Registration Patent No. 10-1049871

따라서 본 발명의 목적은, 히스톤 디아세틸라아제 억제 효과가 있는 보리노스탯을 담지한 나노섬유를 제조하여 담관용 스텐트에 코팅하는 것으로, 인체 내 소화기관 중 하나인 담관 내에서 발생한 담도암에 보다 활용도가 높은 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.Therefore, an object of the present invention is to prepare a nanofiber carrying a vorinostat having a histone deacetylase inhibitory effect and coat it on a stent for bile ducts, and to prevent bile duct cancer occurring in the bile duct, one of the digestive organs of the human body. It is to provide a vorinostat-release digestive tract stent coated with a highly useful tumor-specific enzyme-responsive nanofiber and a method for manufacturing the same.

또한, 생분해성 고분자를 카텝신 B에 의해 분해되는 펩타이드로 다른 고분자와 공유결합하여 블록공중합체로 제조하고, 이를 이용하여 보리노스탯이 담지된 나노섬유로 만들어 담도용 스텐트에 고정한 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 및 그 제조방법을 제공하는 것이다.In addition, a biodegradable polymer is a peptide that is degraded by cathepsin B, which is covalently bonded with other polymers to form a block copolymer, which is used to make a vorinostat-supported nanofiber, which is a tumor-specific enzyme fixed to a stent for biliary tract. It is to provide a responsive nanofiber-coated vorinostat release-type digestive tract stent and a method of manufacturing the same.

상기한 목적은, 카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드를 이용하여 생분해성 고분자 블록공중합체를 합성하는 단계와; 상기 생분해성 고분자 블록공중합체와 보리노스탯(vorinostat)을 유기용매에 녹여 방사용액을 형성하고, 상기 방사용액을 스텐트본체에 방사 하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 제조방법에 의해서 달성된다.The above object is a step of synthesizing a biodegradable polymer block copolymer using a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide that is specifically degraded in cathepsin B. Wow; Dissolving the biodegradable polymer block copolymer and vorinostat in an organic solvent to form a spinning solution, and spinning the spinning solution on the stent body, characterized in that the tumor-specific enzyme-responsive nanofibers Is achieved by the method of manufacturing a coated vorinostat release-type digestive tract stent.

여기서, 상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 상기 GFLG 펩타이드를 통해 폴리카프로락톤(PCL) 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 연결하여 형성되는 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체인 것이 바람직하다.Here, the biodegradable polymer block copolymer is preferably a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer formed by linking polycaprolactone (PCL) and polyethylene glycol (PEG) through the GFLG peptide.

상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 상기 GFLG 펩타이드의 카르복실산과 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)의 아민기를 공유결합시켜 형성되며, PCL-GFLG-NH-(CH2CH2O)n-[(CH2CH2O)n-NH-GFLG-PCL]3(단, n은 29 내지 227의 정수) 구조로 이루어지는 것이 바람직하며, 상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 분자량이 20,000 내지 200,000g/mol로 이루어지는 것이 바람직하다.The biodegradable polymer block copolymer is formed by covalently bonding the carboxylic acid of the GFLG peptide and the amine group of 4-Arm PEG-Amine, PCL-GFLG-NH-(CH 2 CH 2 O) n -[(CH 2 CH 2 O) n -NH-GFLG-PCL] 3 (however, n is an integer of 29 to 227) is preferably made of a structure, the biodegradable polymer block copolymer, the molecular weight It is preferable to consist of 20,000 to 200,000 g/mol.

또한, 상기 생분해성 고분자 블록공중합체를 합성하는 단계는, 상기 GFLG 펩타이드를 용매의 0.01 내지 30중량%가 되도록 준비하는 단계; 디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(EDC)와 N-하이드록시숙신이미드(NHS)를 0.01 내지 30중량%가 되도록 상기 GFLG 펩타이드와 혼합하여 반응시키는 단계; 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)을 0.01 내지 30중량%가 되도록 상기 용매 내에 첨가하여 반응하여 제1혼합물을 형성하는 단계; 상기 제1혼합물을 동결건조하여 펩타이드가 공유결합된 폴리에틸렌글리콜을 얻는 단계; 폴리카프로락톤, 디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드 및 N-하이드록시숙신이미드를 0.01 내지 30중량%가 되도록 유기용매에 녹이고, 상기 펩타이드가 공유결합된 폴리에틸렌글리콜을 첨가 및 반응하여 제2혼합물을 형성하는 단계; 상기 제2혼합물을 동결건조하여 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 공중합체를 형성하는 단계를 포함하는 것이 바람직하다.In addition, the step of synthesizing the biodegradable polymer block copolymer may include preparing the GFLG peptide to be 0.01 to 30% by weight of a solvent; Mixing and reacting dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) with the GFLG peptide to an amount of 0.01 to 30% by weight; Adding 4-Arm polyethylene glycol-amine (4-Arm PEG-Amine) to 0.01 to 30% by weight in the solvent and reacting to form a first mixture; Lyophilizing the first mixture to obtain polyethylene glycol to which the peptide is covalently bonded; Polycaprolactone, dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride, and N-hydroxysuccinimide are dissolved in an organic solvent to an amount of 0.01 to 30% by weight, and polyethylene glycol to which the peptide is covalently bonded is added and reacted. Forming a mixture; It is preferable to include the step of lyophilizing the second mixture to form a polycaprolactone-polyethylene glycol copolymer.

상기 방사용액은, 상기 생분해성 고분자 블록중합체 100중량% 기준으로 상기 보리노스탯의 함량이 0.01 내지 20중량% 혼합되며, 상기 방사용액은, 상기 방사용액 전체 100중량% 중 상기 생분해성 고분자 블록중합체 및 상기 보리노스탯이 총 3 내지 60중량% 포함된 것이 바람직하다.The spinning solution is a mixture of 0.01 to 20% by weight of the vorinostat based on 100% by weight of the biodegradable polymer block polymer, and the spinning solution is the biodegradable polymer block polymer in 100% by weight of the spinning solution. And it is preferred that the total 3 to 60% by weight of the vorinostat.

상기한 목적은 또한, 스텐트본체와; 카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드를 이용하여 형성된 생분해성 고분자 블록공중합체와, 보리노스탯(vorinostat)을 방사를 통해 상기 스텐트본체의 표면에 코팅되는 나노섬유를 포함하는 것을 특징으로 하는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트에 의해서도 달성된다.The above object is also, and the stent body; A biodegradable polymer block copolymer formed using a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide that specifically degrades in cathepsin B, and a vorinostat It is also achieved by a vorinostat-release digestive tract stent coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber, characterized in that it comprises nanofibers coated on the surface of the stent body through spinning.

여기서, 상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 상기 GFLG 펩타이드를 통해 폴리카프로락톤(PCL) 및 폴리에틸렌글리콜(PEG)을 연결하여 형성되는 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체인 것이 바람직하다.Here, the biodegradable polymer block copolymer is preferably a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer formed by linking polycaprolactone (PCL) and polyethylene glycol (PEG) through the GFLG peptide.

상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 상기 GFLG 펩타이드의 카르복실산과 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)의 아민기를 공유결합시켜 형성되며, PCL-GFLG-NH-(CH2CH2O)n-[(CH2CH2O)n-NH-GFLG-PCL]3(단, n은 29 내지 227의 정수) 구조로 이루어지는 것이 바람직하며, 상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 분자량이 20,000 내지 200,000g/mol로 이루어지는 것이 바람직하다.The biodegradable polymer block copolymer is formed by covalently bonding the carboxylic acid of the GFLG peptide and the amine group of 4-Arm PEG-Amine, PCL-GFLG-NH-(CH 2 CH 2 O) n -[(CH 2 CH 2 O) n -NH-GFLG-PCL] 3 (however, n is an integer of 29 to 227) is preferably made of a structure, the biodegradable polymer block copolymer, the molecular weight It is preferable to consist of 20,000 to 200,000 g/mol.

상술한 본 발명의 구성에 따르면, 히스톤 디아세틸라아제 억제 효과가 있는 보리노스탯을 담지한 나노섬유를 제조하여 담관용 스텐트에 코팅하는 것으로, 인체 내 소화기관 중 하나인 담관 내에서 발생한 담도암에 보다 활용도가 높은 효과를 얻을 수 있다.According to the configuration of the present invention described above, a nanofiber carrying a vorinostat having a histone deacetylase inhibitory effect is prepared and coated on a stent for bile ducts, and bile duct cancer occurs in the bile duct, one of the digestive organs of the human body. It is possible to obtain an effect with higher utilization.

또한, 생분해성 고분자를 카텝신 B에 의해 분해되는 펩타이드로 다른 고분자와 공유결합하여 블록공중합체로 제조하고, 이를 이용하여 보리노스탯이 담지된 나노섬유로 만들어 담도용 스텐트에 고정할 수 있다.In addition, a biodegradable polymer is prepared as a block copolymer by covalently bonding with other polymers as a peptide degraded by cathepsin B, and using this, it can be made into a vorinostat-supported nanofiber and fixed to a stent for biliary tract.

도 1은 본 발명의 실시예에 따른 소화관 스텐트 제조방법의 순서도이고,
도 2는 본 발명의 실시예에 따른 4-암 폴린에틸렌글리콜-아민에 cathepsin B 펩타이드를 공유결합시킨 합성방법을 나타낸 순서도이고,
도 3은 본 발명의 실시예에 따른 cathepsin B 펩타이드가 공유결합된 4-암 폴린에틸렌글리콜과 폴리카프로락톤을 공유결합시켜 블록공중합체를 합성한 방법을 나타낸 순서도이고,
도 4는 본 발명에 의한 나노섬유가 코팅된 스텐트의 전자 현미경 사진이고,
도 5는 본 발명에 의한 도 4에서 제조된 나노섬유가 코팅된 스텐트에서 보리노스탯의 방출속도를 나타낸 그래프이고,
도 6은 본 발명에 의한 도 5에서 제조된 나노섬유가 코팅된 스텐트에서 블록공중합체의 분자량 변화를 나타낸 그래프이고,
도 7는 본 발명에 의한 도 5에서 방출된 보리노스탯의 항암 성능을 웨스턴 블롯 방식에 의해 단백질 발현을 나타낸 사진이고,
도 8은 본 발명에 의한 담도암 세포주(HuCC-T1)를 종양 모델로 한 쥐에서 항암성능을 비교한 사진 및 그래프이다.1 is a flow chart of a method for manufacturing a digestive tract stent according to an embodiment of the present invention,
Figure 2 is a flow chart showing a synthesis method in which cathepsin B peptide is covalently bonded to 4-ampolineethylene glycol-amine according to an embodiment of the present invention,
Figure 3 is a flow chart showing a method of synthesizing a block copolymer by covalently bonding a cathepsin B peptide covalently bonded 4-ampolineethylene glycol and polycaprolactone according to an embodiment of the present invention,
4 is an electron micrograph of a stent coated with nanofibers according to the present invention,
Figure 5 is a graph showing the release rate of the vorinostat in the nanofiber-coated stent prepared in Figure 4 according to the present invention,
Figure 6 is a graph showing the molecular weight change of the block copolymer in the nanofiber-coated stent prepared in Figure 5 according to the present invention,
7 is a photograph showing protein expression by Western blot method of anticancer performance of the vorinostat released in FIG. 5 according to the present invention,
8 is a photograph and graph comparing anticancer performance in mice using the biliary tract cancer cell line (HuCC-T1) according to the present invention as a tumor model.

이하 본 발명의 실시예에 따른 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 제조방법을 도면을 통해 상세히 설명한다.Hereinafter, a method of manufacturing a vorinostat release-type digestive tract stent coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber according to an embodiment of the present invention will be described in detail with reference to the drawings.

스텐트(stent)에 결합되는 고분자 담지체를 통해 약물방출형 치료용 스텐트를 제작하기 위해서 고분자 담지체의 형상은 두 가지가 가능하다. 첫째, 필름형상이나 나노섬유웹(부직포)형상으로 제작하여 스텐트의 외면에 부착시켜 사용하는 방법이다. 둘째는, 약물이 담지된 고분자 담지체를 방사용액으로 준비하고 이를 직접 스텐트 외면에 방사하여 나노섬유가 직접코팅 되도록 하는 방법이 가능하다. 본 발명의 특징은 보리노스탯이 고분자 나노섬유 담지체를 형성하는 것이 주안점이므로 위에서 열거한 필름형상, 나노섬유웹(부직포)형성 또는 나노섬유 직접코팅 어느 것으로 만드는 것이 가능하다. 그 중 대조 실험을 위하여 필름형상으로 제조하는 것을 실시예로서 설명하기로 한다. 이는 기존 사용되는 스텐트 중 내증식을 억제하기 위하여 약물이 담지되지 않은 폴리카프로락톤(PCL)필름이 스텐트 외면에 부착되어 사용되므로 이와 비교 결과를 나타내기 위하여 동일한 필름형상으로 제작하는 것이다. 이하에서는 필름의 형태로 모든 실시예가 이루어져 있으나, 나노섬유웹 또는 나노섬유 직접코팅도 본 발명의 범주에 속하는 것이다.In order to fabricate a drug-releasing therapeutic stent through a polymer carrier bonded to the stent, two shapes of the polymer carrier are possible. First, it is a method of using it by making it in the form of a film or a nanofiber web (nonwoven) and attaching it to the outer surface of the stent. Second, it is possible to prepare a drug-carried polymer carrier as a spinning solution and spin it directly on the outer surface of the stent so that the nanofibers are directly coated. The feature of the present invention is that the vorinostat forms a polymeric nanofiber carrier, so it is possible to make any of the above-listed film shapes, nanofiber web (nonwoven fabric) formation, or nanofiber direct coating. Among them, to be prepared in the form of a film for the control experiment will be described as an example. This is because a polycaprolactone (PCL) film that is not loaded with a drug is attached to the outer surface of the stent and is used in order to suppress the internal proliferation of the existing stents, and thus the same film shape is produced to show the comparison result. Hereinafter, all examples are made in the form of a film, but nanofiber web or nanofiber direct coating is also within the scope of the present invention.

기본적으로 본 발명은 소화기암의 일종인 담도암 세포에서 발현되는 히스톤 디아세틸라아제(histone deacetylase)를 특이적으로 억제하여 항암 효과를 발휘할 수 있는 보리노스탯(vorinostat) 방출형 나노섬유가 코팅된 비혈관 스텐트를 개발하는 것이다. 또한 담도암 세포가 분비하는 효소에 의해 효과적으로 분해되는 생분해성 고분자 블록 공중합체를 포함하는 나노섬유를 스텐트에 코팅하여 담도암에 선택적으로 반응하여, 생분해 및 치료에 따른 주변 조직의 괴사 등 부작용이 최소화될 수 있는 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트를 제조하는 것이 목적이다.Basically, the present invention is coated with vorinostat release-type nanofibers capable of exhibiting anticancer effects by specifically inhibiting histone deacetylase expressed in biliary tract cancer cells, which is a type of gastrointestinal cancer. To develop a non-vascular stent. In addition, nanofibers containing biodegradable polymer block copolymers that are effectively degraded by enzymes secreted by biliary tract cancer cells are coated on the stent to selectively react to biliary tract cancer, thereby minimizing side effects such as biodegradation and necrosis of surrounding tissues due to treatment. The purpose is to manufacture a vorinostat release-type digestive tract stent that can be.

본 발명의 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트는, 스텐트본체와, 카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드를 이용하여 형성된 생분해성 고분자 블록공중합체와, 보리노스탯(vorinostat)을 전기 방사를 통해 상기 스텐트의 표면에 코팅되는 나노섬유를 포함한다.The vorinostat release-type digestive tract stent of the present invention uses a stent body and a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide that is specifically degraded to cathepsin B (cathepsin B). And a biodegradable polymer block copolymer formed as a result, and nanofibers coated on the surface of the stent through electrospinning a vorinostat.

이러한 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트의 제조방법으로는, 보리노스탯이 담지된 나노섬유를 스텐트본체에 코팅하는 방법에 있어서, 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly) 펩타이드를 이용하여 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 합성하는 단계; 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체와 보리노스탯을 유기용매에 녹여 스텐트본체 위에 전기 방사 하는 단계로 나뉜다.In the method of manufacturing such a vorinostat release-type digestive tract stent, in the method of coating a vorinostat-supported nanofiber on the stent body, glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly) peptide is used. Synthesizing a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer using; It is divided into the steps of dissolving polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer and vorinostat in an organic solvent and electrospinning it on the stent body.

이러한 단계를 상세히 설명하면 도 1에 도시된 바와 같이 먼저, 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신 펩타이드를 이용하여 고분자 블록공중합체를 합성한다(S1).When this step is described in detail, as shown in FIG. 1, first, a polymer block copolymer is synthesized using a glycine-phenylalanine-leucine-glycine peptide (S1).

담도암 세포가 분비하는 효소 중 하나인 카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 펩타이드 구조에 해당하는 펩타이드로는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드가 있는데, 이러한 펩타이드로 각각 다른 두 개의 고분자를 연결하여 생분해성 고분자인 고분자 블록공중합체를 합성한다. 여기서 고분자 블록공중합체는 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체가 가장 바람직한데, 이는 펩타이드를 통해 폴리에틸렌글리콜(PEG)과 폴리카프로락톤(PCL)을 연결하여 생분해성 고분자인 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 형성한다. S1 단계는 카텝신 B에 의해 폴리에틸렌글리콜과 폴리카프로락톤이 분해되면서 약물이 방출되도록 하는데 주안점을 두었다.The peptide corresponding to the peptide structure that is specifically degraded by cathepsin B, one of the enzymes secreted by biliary tract cancer cells, is a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide. There is, by connecting two different polymers with these peptides, a polymer block copolymer, a biodegradable polymer, is synthesized. Here, the polymer block copolymer is most preferably a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer, which is a biodegradable polymer polycaprolactone-polyethylene glycol block by connecting polyethylene glycol (PEG) and polycaprolactone (PCL) through a peptide. To form a copolymer. The S1 stage focused on the release of the drug as polyethylene glycol and polycaprolactone were decomposed by cathepsin B.

폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체는 GFLG 펩타이드의 카르복실산과 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)의 아민기를 공유결합시켜 형성되며, PCL-GFLG-NH-(CH2CH2O)n-[(CH2CH2O)n-NH-GFLG-PCL]3(단, n은 29 내지 227의 정수) 구조로 이루어지게 된다. 이러한 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체는 분자량이 20,000 내지 200,000g/mol로 이루어지는 것이 바람직한데, 분자량이 20,000g/mol 미만일 경우 나노섬유를 형성하기 어려우며, 200,000g/mol를 초과할 경우 용매에 녹이기 어렵다는 단점이 있다. 특히 분자량이 본 발명보다 작으면 나노섬유가 형성이 잘 되지 않기 때문에 스텐트본체의 표면에 나노섬유를 코팅하기 어려우며, 분자량이 작은 것은 그 만큼 암(arm) 이 적다는 것을 의미하기 때문에 생분해가 충분히 이루어지지 않을 수 있다. 본 발명과 같이 4-암으로 이루어진 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 사용할 경우 카텝신 B와 반응하여 분해되는 GFLG 펩타이드의 양이 많아져 암 치료에 우수한 스텐트가 된다.Polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer is formed by covalently bonding the carboxylic acid of GFLG peptide with the amine group of 4-Arm PEG-Amine, and PCL-GFLG-NH-(CH 2 CH 2 O) n -[(CH 2 CH 2 O) n -NH-GFLG-PCL] 3 (where n is an integer of 29 to 227) structure. These polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymers preferably have a molecular weight of 20,000 to 200,000 g/mol. If the molecular weight is less than 20,000 g/mol, it is difficult to form nanofibers, and if it exceeds 200,000 g/mol, The disadvantage is that it is difficult to melt. In particular, if the molecular weight is smaller than the present invention, it is difficult to coat the nanofibers on the surface of the stent body because nanofibers are not formed well, and a small molecular weight means that there is less arm, so biodegradation is sufficiently achieved. You can't lose. When using a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer composed of 4-arm as in the present invention, the amount of GFLG peptide that reacts with cathepsin B and decomposes increases, making it an excellent stent for cancer treatment.

폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 합성하는 단계는 다음과 같이 이루어진다. 첫 번째 단계는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신 펩타이드를 용매의 0.01 내지 30 중량%가 되도록 준비하는 단계; 디메틸아미노 프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC)와 N-하드록시숙신이미드(N-hydroxysuccinimide, NHS)를 0.01 내지 30 중량%가 되도록 펩타이드 용액과 혼합하여 12시간 동안 반응시키는 단계; 4-암(arm) 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)을 0.01 내지 30 중량 %가 되도록 혼합하여 24시간 동안 반응하는 단계; 반응한 혼합물을 투석하여 정제하고 동결건조하여 펩타이드가 공유결합된 폴리에틸렌글리콜을 얻는 단계; 폴리카프로락톤과 디메틸아미노 프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC)와 N-하드록시숙신이미드(N-hydroxysuccinimide, NHS)를 0.01 내지 30 중량%가 되도록 유기용매에 녹이고, 동일한 몰농도의 펩타이드가 공유결합된 폴리에틸렌글리콜을 첨가하여 24시간 동안 반응하는 단계; 반응한 혼합물을 투석하여 정제하고 동결건조하여 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 얻는 단계;로 이루어진다.The step of synthesizing the polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer is performed as follows. The first step is to prepare a glycine-phenylalanine-leucine-glycine peptide to be 0.01 to 30% by weight of the solvent; Dimethylamino propyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) to be 0.01 to 30% by weight) Mixing with the peptide solution and reacting for 12 hours; Reacting for 24 hours by mixing 4-arm polyethylene glycol-amine (4-Arm PEG-Amine) to an amount of 0.01 to 30% by weight; Dialysis, purification, and lyophilization of the reaction mixture to obtain polyethylene glycol to which the peptide is covalently bonded; 0.01 to 30 polycaprolactone, dimethylamino propyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS)) Dissolving in an organic solvent so as to be a weight %, and reacting for 24 hours by adding polyethylene glycol to which a peptide of the same molar concentration is covalently bonded; The reaction mixture is purified by dialysis and lyophilized to obtain a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer.

경우에 따라서 고분자 블록공중합체는 폴리카프로락톤 이외에, 폴리락타이드글리콜라이드(Polylactide-co-glycolide), 폴리락타이드카프로락톤(Polylactide-co-caprolactone), 폴리락타이드-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체, 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체, 폴리락티드(Poly(lactide), PLA), 폴리클로코라이드(Poly(glycolide), PGA), 폴리에틸렌글리콜(Poly(ethylene glycol)), 폴리프로필렌글리콜(Poly(propylene glycol)), 폴리비닐알코올(poly(vinyl alcohol), PVA), 폴리비닐피롤리돈(poly(vinylpirrolidone), PVP), 덱스트란(dextran), 히아루론산(hyaluronic acid), 풀루란(Pullulan), 셀룰로오스(cellulose), 키토산 (chitosan), 셀룰로오스(cellulose), 베타글루칸(beta-glucan), 후코이단 (Fucoidan)을 단독 또는 복합화(blend)하여 사용할 수 있으나 상기 물질에 한정하는 것은 아니며, 펩타이드를 이용하여 블록공중합체를 합성할 수 있는 물질이면 특별한 제한이 없다.In some cases, polymer block copolymers include polylactide-co-glycolide, polylactide-co-caprolactone, polylactide-polyethylene glycol block copolymer, polylactide, in addition to polycaprolactone. Caprolactone-polyethylene glycol block copolymer, Poly(lactide, PLA), Poly(glycolide, PGA), Poly(ethylene glycol)), Polypropylene glycol (Poly( propylene glycol)), poly(vinyl alcohol), PVA), poly(vinylpirrolidone), PVP), dextran, hyaluronic acid, pullulan, Cellulose (cellulose), chitosan (chitosan), cellulose (cellulose), beta-glucan (beta-glucan), fucoidan (Fucoidan) can be used alone or in combination (blend), but is not limited to the above material, using a peptide There is no particular limitation as long as it is a material capable of synthesizing the block copolymer.

고분자 블록공중합체와 보리노스탯을 유기용매에 녹여 스텐트본체 위에 전기 방사한다(S2).The polymer block copolymer and the vorinostat are dissolved in an organic solvent and electrospun onto the stent body (S2).

고분자 블록공중합체와 보리노스탯을 유리용매에 녹여 서로 혼합시킨 다음, 이를 스텐트본체 위에 전기방사하여 보리노스탯이 방출형 스텐트를 제조한다. 즉 고분자 블록공중합체를 이용하여 보리노스탯을 담지한 나노섬유를 전기 방사를 통해 제조하여 담도용 스텐트본체에 코팅함으로써 스텐트본체에 고정된 나노섬유가 담도암 조직에 최대한 밀착되도록 하고, 보리노스탯이 방출시에 암세포의 생리적인 작용에 반응하여 방출이 조절되도록 함으로써 주변 정상 조직에는 부작용을 최소화하고 항암성능은 최대화 할 수 있는 치료용 스텐트를 개발 할 수 있게 된다.The polymer block copolymer and the vorinostat are dissolved in a glass solvent, mixed with each other, and then electrospun onto the stent body to prepare a vorinostat-release stent. That is, by using a polymer block copolymer, nanofibers carrying a vorinostat are manufactured through electrospinning and coated on the biliary stent body so that the nanofibers fixed on the stent body adhere to the biliary tract cancer tissue as closely as possible, and the vorinostat By controlling the release in response to the physiological action of cancer cells during this release, it is possible to develop a therapeutic stent capable of minimizing side effects in surrounding normal tissues and maximizing anticancer performance.

전기 방사를 통한 나노섬유 제조를 위해서는 고분자 블록공중합체와 보리노스탯을 동일 용매를 사용하여 방사 가능한 농도로 용해하여 방사용액을 준비한다. 방사용액을 이루는 고분자 블록공중합체와 보리노스탯의 함량비에 관하여는 고분자 블록공중합체 전체를 100중량% 기준으로 보리노스탯의 함량이 0.01 내지 20중량%의 범위가 적당하다. 보리노스탯의 비율이 0.01중량% 미만의 경우 보리노스탯의 함량이 낮아 최종 제품의 약효가 발휘하지 못하는 경우가 발생할 수 있으며, 20중량% 초과인 경우에는 보리노스탯의 함량이 너무 많아 최종제품의 가격이나 약효 등의 역효과를 발생할 가능성이 있는 경우가 있다. 또한, 본 발명의 나노섬유의 제조시에는 섬유상 구조를 형성하기 위해 방사용액(고분자 블록공중합체와 보리노스탯이 담지된 혼합용액)의 농도를 3 내지 60중량%로 제조하여 섬유의 모폴러지(morphology)를 제어하는 것이 바람직하다. 이때 방사용액의 농도는 3중량% 미만의 경우 섬유상의 형성이 곤란하며, 60중량% 초과할 경우 점도가 상승하여 방사가 곤란하다.For the production of nanofibers through electrospinning, a spinning solution is prepared by dissolving a polymer block copolymer and a vorinostat at a spinnable concentration using the same solvent. With respect to the content ratio of the polymer block copolymer and the vorinostat constituting the spinning solution, the content of the vorinostat is suitable in the range of 0.01 to 20% by weight based on 100% by weight of the entire polymer block copolymer. If the ratio of vorinostat is less than 0.01% by weight, the content of the vorinostat may be low, so that the medicinal effect of the final product may not be exhibited. If it exceeds 20% by weight, the content of the vorinostat is too high and the final product There is a possibility that adverse effects such as the price or efficacy of In addition, in the manufacture of the nanofibers of the present invention, the concentration of the spinning solution (a mixed solution in which a polymer block copolymer and a vorinostat are supported) to form a fibrous structure is prepared to be 3 to 60% by weight, so that the morphology of the fiber ( It is desirable to control morphology). At this time, when the concentration of the spinning solution is less than 3% by weight, it is difficult to form a fibrous shape, and when it exceeds 60% by weight, the viscosity increases and spinning is difficult.

3 내지 60중량%의 농도로 제조된 방사용액을 정량펌프(metering pump)를 사용하여 방사노즐로 이송하고, 고전압 조절장치를 사용하여 방사노즐에 전압을 인가하여 전기 방사를 실시한다. 이때 사용되는 전압은 0.5 내지 100kV의 범위에서 방사가 가능한 전압으로 실시하며, 집전판은 접지를 하거나 (-)극으로 대전하여 사용할 수 있다. 집전판은 전기전도성 금속이나 박리지 등으로 구성되는 것이 바람직하다. 집전판의 경우 방사시 섬유의 집속을 원활하게 하기 위해 포집장치(suction collector)를 부착하여 사용하는 것이 바람직하며, 방사노즐과 집전 판까지의 거리는 5 내지 50㎝로 조절하여 사용하는 것이 바람직하다. 방사시 토출량은 정량펌프를 사용하여 홀당 0.01 내지 5cc/hole×min으로 토출하여 방사하고, 방사시 온도 및 습도를 조절할 수 있는 챔버 내에서 상대습도 10 내지 90%의 환경에서 방사하는 것이 바람직하다.The spinning solution prepared at a concentration of 3 to 60% by weight is transferred to the spinning nozzle using a metering pump, and electric spinning is performed by applying a voltage to the spinning nozzle using a high voltage regulator. The voltage used at this time is a voltage capable of radiation in the range of 0.5 to 100 kV, and the current collector plate can be grounded or charged with a (-) pole. The current collector plate is preferably made of an electrically conductive metal or release paper. In the case of the current collector plate, it is preferable to attach a suction collector to facilitate the collection of fibers during spinning, and the distance between the spinning nozzle and the current collector plate is preferably adjusted to 5 to 50 cm. When spinning, it is preferable to discharge by discharging at 0.01 to 5 cc/hole×min per hole using a metering pump, and to radiate in an environment of 10 to 90% relative humidity in a chamber capable of controlling temperature and humidity during spinning.

회전체에 스텐트본체를 고정할 수 있는 지지층에 스텐트본체를 끼운 후 약물함유 나노섬유를 직접 방사하여 스텐트본체 상에 방사 코팅한다. 이때 나노섬유의 균일성을 확보하기 위해 방사노즐의 간격이 일정하도록 하고, 좌우 반복이동이 가능하며, 회전체의 속도는 나노섬유가 부착하기 용이한 속도로 회전시켜 방사하는 것이 바람직하다. 또한, 본 발명에서 방사방법으로는 전기방사(electro-spinning), 전기분사(electro-spray), 전기분사방사(electro-brown spinning), 원심 전기방사(centrifugal electro-spinning), 플래쉬 전기방사(flash-electrospinning), 버블전기방사(bubble electrospinning), 자장전기방사(magnetic electrospinning) 등의 다양한 방식의 방사법을 적절히 채택하여 사용할 수 있다.After inserting the stent body into the supporting layer that can fix the stent body to the rotating body, the drug-containing nanofibers are directly spun and coated on the stent body. At this time, in order to secure the uniformity of the nanofibers, the spacing of the spinning nozzles is made constant, the left and right repetitive movement is possible, and the speed of the rotating body is preferably rotated at a speed that facilitates attachment of the nanofibers. In addition, the spinning method in the present invention includes electro-spinning, electro-spray, electro-brown spinning, centrifugal electro-spinning, and flash electrospinning. -Electrospinning), bubble electrospinning, magnetic electrospinning, etc. various methods of radiation can be appropriately adopted and used.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 그러나 아래의 실시예들은 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 하기의 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니며, 하기의 실시예는 본 발명의 범위 내에서 당업자에 의해 적절히 변경될 수 있다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, the following examples are for explaining the present invention more specifically, and the scope of the present invention is not limited by the following examples, and the following examples are appropriately changed by those skilled in the art within the scope of the present invention. I can.

<실시예 1> 펩타이드와 폴리에틸렌글리콜의 합성<Example 1> Synthesis of peptide and polyethylene glycol

도 2는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly) 펩타이드의 카르복실산(carboxylic acid)과 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)의 아민기를 공유결합시킨 방법을 나타낸 것이다. 도시된 바와 같이 클로린 e6을 디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC)와 N-하드록시숙신이미드(N-hydroxysuccinimide, NHS)로 활성화시켜 펩타이드-NHS 결합물을 얻고 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)의 아민기에 결합하는 과정을 거쳤다. 이의 과정을 좀 더 상세히 설명하면, 펩타이드 200mg을 디메칠술폭사이드 (Dimethylsulfoxide, DMSO)에 녹이고 여기에 디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC) 77mg, N-하드록시숙신이미드 46mg을 첨가하고 약 12시간 동안 교반한 다음, 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine) 1000mg을 넣고 추가로 24시간 동안 교반한 뒤 증류수에 대하여 2일 동안 투석하고 동결건조하여 분말을 수득하여 펩타이드가 결합된 폴리에틸렌글리콜을 얻었다. Figure 2 is a covalently bonded amine group of a carboxylic acid of a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly) peptide and a 4-arm polyethylene glycol-amine (4-Arm PEG-Amine) It shows how. As shown, chlorine e6 was converted to dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS)). By activation, a peptide-NHS conjugate was obtained, and a process of binding to the amine group of 4-Arm PEG-Amine was carried out. To explain the process in more detail, 200 mg of the peptide is dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO), and there is dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC) 77mg, N-Hardoxysuccinimide 46mg was added and stirred for about 12 hours, then 4-Am Polyethyleneglycol-amine (4-Arm PEG-Amine) 1000mg was added and stirred for an additional 24 hours, and then distilled water The powder was dialyzed for 2 days and freeze-dried to obtain a polyethylene glycol to which the peptide was bound.

<실시예 2> 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체 합성<Example 2> Synthesis of polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer

도 3은 펩타이드가 결합된 폴리에틸렌글리콜에 폴리카프로락톤을 결합하여 블록공중합체를 얻는 방법을 나타낸 도이다. 좀 더 상세히 설명하면 펩타이드가 결합된 폴리에틸렌글리콜 1200mg을 DMSO 50ml에 녹이고 디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC) 77mg, N-하드록시숙신이미드 46mg을 첨가하고 약 12시간 동안 교반한 다음, 폴리카프로락톤(분자량 10,000g/mol) 4000mg을 첨가하고 24시간 동안 교반하여 반응하였다. 반응물을 디에틸에테르에 침전하여 침전물을 얻은 뒤, 실온에서 데시게이터에 넣고 진공 상태에서 약 3일간 건조하여 백색의 분말 상태로 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 얻었다.3 is a diagram showing a method of obtaining a block copolymer by binding polycaprolactone to polyethylene glycol to which a peptide is bound. In more detail, 1200 mg of polyethylene glycol with peptides was dissolved in 50 ml of DMSO, and dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC) 77 mg, N-hardoxy After adding 46 mg of succinimide and stirring for about 12 hours, 4000 mg of polycaprolactone (molecular weight 10,000 g/mol) was added and stirred for 24 hours to react. The reaction product was precipitated in diethyl ether to obtain a precipitate, placed in a desiccator at room temperature, and dried for about 3 days in a vacuum to obtain a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer in a white powder state.

<실시예 3> 보리노스탯이 담지된 나노섬유를 스텐트본체에 코팅<Example 3> Coating the vorinostat-supported nanofiber on the stent body

고분자 100중량%에 대하여 보리노스탯을 2 내지 10중량%가 되게 한 후 아세톤에 녹여 방사용액을 제조하였다. 이때 고분자와 보리노스탯으로 이루어진 방사용액은 약 15중량%의 용액이 되도록 한다. 방사용액을 사용하여 인가전압 25kV, 방사노즐과 집전체와의 거리 20㎝, 토출량 분당 0.05cc/g/hole이 되도록 30℃, 상대습도 60%에서 전기방사를 실시하여 나노섬유 웹을 얻었다. 이때 방사 용액은 회전체에 고정된 스텐트본체에 직접 방사하여 보리노스탯이 담지된 나노섬유가 형성됨과 동시에 스텐트본체에 코팅을 하여 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 스텐트를 얻었으며, 나노섬유 웹의 주사전자 현미경 사진을 도 4에 나타냈다. 섬유경의 분포는 약 200-600㎚이었고, 평균 섬유경은 약 300㎚인 것이 제조되었다.After making the vorinostat 2 to 10% by weight based on 100% by weight of the polymer, it was dissolved in acetone to prepare a spinning solution. At this time, the spinning solution consisting of a polymer and a vorinostat is about 15% by weight of a solution. Using the spinning solution, electrospinning was performed at 30° C. and 60% relative humidity so that an applied voltage of 25 kV, a distance between the spinning nozzle and a current collector was 20 cm, and a discharge amount of 0.05 cc/g/hole per minute was performed to obtain a nanofiber web. At this time, the spinning solution was directly spun onto the stent body fixed on the rotating body to form nanofibers carrying vorinostats, and at the same time, coated on the stent body to obtain a vorinostat-release stent coated with nanofibers. A scanning electron micrograph of the web is shown in FIG. 4. The distribution of fiber diameter was about 200-600 nm, and those having an average fiber diameter of about 300 nm were prepared.

<실시예 4> 보리노스탯의 방출실험<Example 4> Release test of vorinostat

실시예 3으로 제조된 나노섬유로부터 보리노스탯의 방출 속도는 인산완충용액(phosphate buffered saline(PBS) solution, 0.01M, pH7.4)에서 실시하였으며, 방출된 보리노스탯의 양은 HPLC를 이용하여 측정하였다.The release rate of vorinostat from the nanofibers prepared in Example 3 was carried out in a phosphate buffered saline (PBS) solution, 0.01M, pH 7.4, and the amount of vorinostat released was determined using HPLC. Measured.

도 5는 암세포에서 분비되는 카텝신 B가 나노섬유로부터 방출되는 보리노스탯의 방출속도에 미치는 영향을 나타낸 것이다. 도시된 바와 같이 인산완충용액 상에서는 클로린 e6의 방출속도가 느렸으며, 약 3일 동안 30% 미만이 방출되었으나 카텝신B가 있을 경우 3일 동안 60% 이상 방출되었음을 알 수 있었다. 이 결과에서 보는 바와 같이 나노섬유로부터 보리노스텟의 방출은 암세포 특이적인 효소인 카텝신 B에 반응하여 약물이 방출되어 암조직에 효과적으로 전달 시킬 수 있음을 알 수 있다.5 shows the effect of cathepsin B secreted from cancer cells on the release rate of vorinostat released from nanofibers. As shown, the release rate of chlorine e6 was slow in the phosphate buffer solution, and less than 30% was released for about 3 days, but in the presence of cathepsin B, it was found that more than 60% was released for 3 days. As can be seen from these results, it can be seen that the release of vorinostatt from the nanofibers reacts with cathepsin B, a cancer cell-specific enzyme, to release the drug and effectively deliver it to cancer tissues.

도 6은 카텝신 B에 따른 생분해성 고분자 블록중합체의 분자량을 확인한 그래프로, 카텝신 B와 접촉이 이루어지지 않은 블록중합체는 분자량이 유지된 반면 카텝신 B와 접촉이 이루어진 블록중합체는 분자량이 감소하는 것으로 보아 카텝신 B에 의해 블록중합체가 생분해되는 것을 알 수 있다.Figure 6 is a graph confirming the molecular weight of the biodegradable polymer block polymer according to cathepsin B. The molecular weight of the block polymer not in contact with cathepsin B is maintained, whereas the block polymer in contact with cathepsin B decreases the molecular weight. As a result, it can be seen that the block polymer is biodegraded by cathepsin B.

도 7은 나노섬유로부터 방출된 보리노스탯의 항암효과를 나타낸 것이다. 나노섬유로부터 방출된 보리노스탯은 기존의 약물과 동일하게 Ac-Histone H4를 발현시키는 것을 알 수 있었고, 또한 동일하게 HDAC1, HDAC2, HDAC3의 발현을 억제하는 것을 알 수 있었다. 이 결과에서 보는 바와 같이 나노섬유에서 방출된 보리노스탯이 효과적으로 암세포에서 특이적으로 발현하는 히스톤 디아세틸라아제(HDAC)의 발현을 억제하고 Histone에 acetylation(Ac-Histone) 시킬 수 있음을 알 수 있었다.7 shows the anticancer effect of vorinostat released from nanofibers. It was found that the vorinostat released from the nanofibers expressed Ac-Histone H4 in the same manner as the existing drugs, and it was also found that the expression of HDAC1, HDAC2, and HDAC3 was similarly suppressed. As can be seen from these results, it can be seen that the vorinostat released from the nanofibers can effectively inhibit the expression of histone deacetylase (HDAC), which is specifically expressed in cancer cells, and acetylation (Ac-Histone) in Histone. there was.

<실시예 5> 담도암 세포에 대한 나노섬유 스텐트의 항암성능 측정<Example 5> Measurement of anticancer performance of nanofibrous stent against biliary tract cancer cells

실시예 3으로 제조된 보리노스탯이 담지된 나노섬유를 인간 담도암 세포주인 HuCC-T1세포에 대하여 항암 성능을 검증하였다. The vorinostat-supported nanofibers prepared in Example 3 were tested for anticancer performance against HuCC-T1 cells, a human biliary tract cancer cell line.

도 8은 보리노스탯이 담지된 나노섬유가 인간 담도암 세포주인 HuCC-T1세포에 대한 항암 성능을 실험한 것이다. 누드 쥐에 종양을 심고 약 2-3주 후 종양이 성장하면 종양의 하단에 나노섬유를 심어서 항암 성능을 측정한 것이다. 도에서 보는 바와 같이 비교군에 비하여 보리노스탯을 담지한 나노섬유를 식립한 경우 종양의 크기가 절반 가까이 줄어든 것을 알 수 있었다.Figure 8 is a vorinostat-carrying nanofibers tested the anticancer performance of the human biliary tract cancer cell line HuCC-T1 cells. When the tumor grows about 2-3 weeks after planting a tumor in nude mice, nanofibers are planted at the bottom of the tumor to measure its anticancer performance. As shown in the figure, compared to the comparative group, when the nanofibers carrying the vorinostat were implanted, the size of the tumor was reduced by almost half.

<실시예 6> 보리노스탯이 담지된 나노섬유의 활용<Example 6> Utilization of vorinostat-supported nanofibers

상기와 같이 암세포에 효과가 있는 보리노스탯이 담지된 나노섬유는 보리노스탯 표적형 나노입자형 스텐트 제작도 가능하다. 이러한 스텐트 제작과정을 간략히 설명하기로 한다.As described above, the vorinostat-carrying nanofibers that are effective for cancer cells can also be prepared as a vorinostat-targeted nanoparticle-type stent. This stent manufacturing process will be briefly described.

먼저, 본 발명에 의래 제조된 블록공중합체와 보리노스탯을 나노입자 형성이 가능한 농도로 물(H2O), 에탄올, DMAc(dimethyl acetamide), DMF(N,N-dimethylformamide), NMP(N-methyl-2-pyrrolidinone), DMSO(dimethyl sulfoxide), acetone, THF(tetrahydrofuran), chloroform, Methyl chloride 등과 같은 적당한 용매에 용해한다. 이 용액은 제조시에는 나노입자상 구조를 형성하기 위해 용액(고분자와 약물이 담지된 혼합용액)의 농도를 0.1~60중량%로 제조하여 나노입자의 모폴러지(morphology)를 제어하는 것이 바람직하다. 이 용액을 증류수와 같은 수용액에 떨어뜨려 나노입자 용액을 만들고 투석막을 이용하여 투석하여 유기용매를 제거한 다음 스텐트본체 상에 직접 방사하여 스텐트본체의 표면에 나노입자가 코팅되도록 하는것이 가능할 것이다.First, water (H 2 O), ethanol, dimethyl acetamide (DMAc), DMF (N,N-dimethylformamide), NMP (N) at a concentration capable of forming nanoparticles with the block copolymer and vorinostat prepared according to the present invention. -Methyl-2-pyrrolidinone), DMSO(dimethyl sulfoxide), acetone, THF(tetrahydrofuran), chloroform, methyl chloride, etc. When preparing this solution, it is preferable to control the morphology of the nanoparticles by preparing the concentration of the solution (a mixed solution containing a polymer and a drug) to 0.1 to 60% by weight in order to form a nanoparticle structure. It would be possible to make a nanoparticle solution by dropping this solution in an aqueous solution such as distilled water, dialysis using a dialysis membrane to remove the organic solvent, and then spinning directly onto the stent body to coat the nanoparticles on the surface of the stent body.

또는, 별도의 집전판을 구비하여 나노섬유 웹(부직포 형태)을 먼저 제조하고, 상기 나노섬유 웹 상에 나노입자 용액을 재 방사하여 나노섬유 위에 부착되도록제조할 수 있다. 상기와 달리 나노입자를 이용하여 필름형태의 막으로 제조할 수도 있을 것이다. 이러한 필름형태의 막을 제조하여 스텐트본체의 외면에 접착시킴으로써 약물방출조절형 치료용 스텐트의 제작도 가능할 것이다.Alternatively, a separate current collecting plate may be provided to first prepare a nanofiber web (non-woven fabric type), and a nanoparticle solution may be re-spinned on the nanofiber web to adhere to the nanofibers. Unlike the above, nanoparticles may be used to form a film-type membrane. By preparing such a film-type film and bonding it to the outer surface of the stent body, it will be possible to manufacture a drug release-controlled therapeutic stent.

그리고, " 본 연구는 보건복지부 보건의료연구개발사업의 지원에 의하여 이루어진 것임을 밝힙니다. (과제 고유번호 : HI14C2220) "And, "It is revealed that this study was made with the support of the Ministry of Health and Welfare's Health and Medical Research and Development Project. (Task identification number: HI14C2220)"

Claims (11)

종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐 트 제조방법에 있어서,
카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드를 이용하여 생분해성 고분자 블록공중합체를 합성하는 단계와;
상기 생분해성 고분자 블록공중합체와 보리노스탯(vorinostat)을 유기용매에 녹여 방사용액을 형성하고, 상기 방사용액을 스텐트본체에 방사 하는 단계를 포함 하고,
상기 생분해성 고분자 블록공중합체를 합성하는 단계는
상기 GFLG 펩타이드를 용매의 0.01 내지 30중량%가 되도록 준비하는 단계;
디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드(EDC)와 N-하이드록시숙신이미드(NHS)를 0.01 내지 30중량%가 되도록 상기 GFLG 펩타이드와 혼합 하여 반응시키는 단계;
4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)을 0.01 내지 30중량%가 되도록 상기 용매 내에 첨가하여 반응하여 제1혼합물을 형성하는 단계;
상기 제1혼합물을 동결건조하여 펩타이드가 공유결합된 폴리에틸렌글리콜을 얻는 단계;
폴리카프로락톤, 디메틸아미노프로필-에틸카르보디이미드 하이드로클로라이드 및 N-하이드록시숙신이미드를 0.01 내지 30중량%가 되도록 유기용매에 녹이고, 상기 펩타이드가 공유결합된 폴리에틸렌글리콜을 첨가 및 반응하여 제2혼합물을 형성하는 단계; 및
상기 제2혼합물을 동결건조하여 폴리카프로락톤-폴리에틸렌글리콜 블록공중합체를 형성하는 단계;를 포함하며,
상기 폴리카프로락톤-폴리에틸렌 블록공중합체는 PCL-GFLG-NH-(CH2CH2O)n-[(CH2CH2O)n-NH-GFLG-PCL]3 (단, n은 29 내지 227의 정수) 구조로 이루어지는 것을 특징으로 하는,
종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 제조방법.In the method for producing a vorinostat-release digestive tract stent coated with tumor-specific enzyme-responsive nanofibers,
Synthesizing a biodegradable polymer block copolymer using a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide specifically degraded to cathepsin B;
Dissolving the biodegradable polymer block copolymer and a vorinostat in an organic solvent to form a spinning solution, and spinning the spinning solution onto the stent body,
The step of synthesizing the biodegradable polymer block copolymer
Preparing the GFLG peptide to be 0.01 to 30% by weight of the solvent;
Mixing and reacting dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydroxysuccinimide (NHS) with the GFLG peptide to an amount of 0.01 to 30% by weight;
Adding 4-Arm polyethylene glycol-amine (4-Arm PEG-Amine) to 0.01 to 30% by weight in the solvent and reacting to form a first mixture;
Freeze-drying the first mixture to obtain polyethylene glycol to which the peptide is covalently bonded;
Polycaprolactone, dimethylaminopropyl-ethylcarbodiimide hydrochloride, and N-hydroxysuccinimide are dissolved in an organic solvent to an amount of 0.01 to 30% by weight, and polyethylene glycol to which the peptide is covalently bonded is added and reacted. Forming a mixture; And
Freeze-drying the second mixture to form a polycaprolactone-polyethylene glycol block copolymer; includes,
The polycaprolactone-polyethylene block copolymer is PCL-GFLG-NH-(CH 2 CH 2 O) n -[(CH 2 CH 2 O) n -NH-GFLG-PCL] 3 (however, n is 29 to 227 Characterized in that consisting of an integer) structure,
Tumor-specific enzyme-responsive nanofiber-coated vorinostat release-type digestive tract stent manufacturing method. 삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 분자량이 20,000 내지 200,000g/mol로 이루어지는 것을 특징으로 하는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 제조방법.The method of claim 1,
The biodegradable polymer block copolymer has a molecular weight of 20,000 to 200,000 g/mol, wherein the vorinostat release digestive tract stent is coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber. 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 방사용액은, 상기 생분해성 고분자 블록중합체 100중량% 기준으로 상기 보리노스탯의 함량이 0.01 내지 20중량% 혼합된 것을 특징으로 하는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 제조방법.The method of claim 1,
The spinning solution is a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber-coated vorinostat release type, characterized in that the content of the vorinostat is mixed in an amount of 0.01 to 20% by weight based on 100% by weight of the biodegradable polymer block polymer. Digestive tract stent manufacturing method. 제 1항에 있어서,
상기 방사용액은, 상기 방사용액 전체 100중량% 중 상기 생분해성 고분자 블록중합체 및 상기 보리노스탯이 총 3 내지 60중량% 포함된 것을 특징으로 하는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트 제조방법.The method of claim 1,
The spinning solution is vorino coated with tumor-specific enzyme-responsive nanofibers, characterized in that the biodegradable polymer block polymer and the vorinostat are contained in a total of 3 to 60% by weight of the total 100% by weight of the spinning solution. Stat release type digestive tract stent manufacturing method. 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트에 있어서,
스텐트본체와;
카텝신 B(cathepsin B)에 특이적으로 분해되는 글라이신-페닐알라닌-류신-글라이신(Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) 펩타이드를 이용하여 형성된 생분해성 고분자 블록 공중합체와, 보리노스탯(vorinostat)을 방사를 통해 상기 스텐트본체의 표면에 코팅되는 나노섬유를 포함하는 것으로,
상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는,
상기 GFLG 펩타이드의 카르복실산과 4-암 폴리에틸렌글리콜-아민(4-Arm PEG-Amine)의 아민기를 공유결합시켜 형성되되,
PCL-GFLG-NH-(CH2CH2O)n-[(CH2CH2O)n-NH-GFLG-PCL]3 (단, n은 29 내지 227의 정수) 구조로 이루어지는 것을 특징으로 하는,
종양 특이적 효소 응답형 나노섬 유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트.In the vorinostat release digestive tract stent coated with tumor-specific enzyme-responsive nanofibers,
A stent body;
A biodegradable polymer block copolymer formed using a glycine-phenylalanine-leucine-glycine (Gly-Phe-Leu-Gly, GFLG) peptide that specifically degrades in cathepsin B, and a vorinostat To include nanofibers coated on the surface of the stent body through spinning,
The biodegradable polymer block copolymer,
Formed by covalently bonding the carboxylic acid of the GFLG peptide and the amine group of 4-Arm PEG-Amine,
PCL-GFLG-NH-(CH 2 CH 2 O) n -[(CH 2 CH 2 O) n -NH-GFLG-PCL] 3 (however, n is an integer of 29 to 227) ,
A vorinostat-release digestive tract stent coated with a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber. 삭제delete 삭제delete 제 8항에 있어서,
상기 생분해성 고분자 블록 공중합체는, 분자량이 20,000 내지 200,000g/mol로 이루어지는 것을 특징으로 하는 종양 특이적 효소 응답형 나노섬유가 코팅된 보리노스탯 방출형 소화관 스텐트.The method of claim 8,
The biodegradable polymer block copolymer, a tumor-specific enzyme-responsive nanofiber-coated vorinostat-release digestive tract stent, characterized in that consisting of a molecular weight of 20,000 to 200,000g/mol.
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