KR102156214B1 - Lipid biomarker composition for diagnosing of lung cancer and uses thereof - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 폐암 진단용 지질 바이오마커 및 이의 용도에 관한 것이다. 구체적으로, 지질 발현 수준을 이용하여 폐암 의 진단을 위한 바이오마커, 이를 포함하는 진단키트 및 폐암을 진단하는 용도에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 상기 지질 발현 수준 분석을 이용한 폐암 치료제의 모니터링 및 스크리닝 방법을 제공한다. The present invention relates to a lipid biomarker for lung cancer diagnosis and a use thereof. Specifically, it relates to a biomarker for diagnosis of lung cancer, a diagnostic kit including the same, and a use for diagnosing lung cancer using the lipid expression level. Furthermore, the present invention provides a method for monitoring and screening a therapeutic agent for lung cancer using the lipid expression level analysis.
신체를 구성하는 가장 작은 단위인 세포는 자체조절기능에 의해 분열 및 성장하고, 수명이 다하거나 손상 되면 스스로 사멸하여 전반적인 수의 균형을 유지한다. 하지만 자체조절 기능을 하지 못해 세포가 죽지 않고 비정상적으로 증식하여 생기는 질병인 암은 전 세계 주요 사망원인으로써 해마다 발병률과 사망률이 증가하는 추세를 보이고 있다. 현재까지 암의 발병원인으로는 유전적 요인, 환경적 요인, 생활습관이나 식습관 등이 다양하고 복합적으로 작용하는 것으로 알려져 있으며, 발병원인을 보다 더 명확하게 파악하기 위해 분자수준의 정교한 접근의 필요성이 대두되고 있다.Cells, the smallest unit that composes the body, divide and grow by self-regulatory function, and when their lifespan is over or damaged, they die by themselves to maintain the overall balance of numbers. However, cancer, which is a disease caused by abnormal proliferation of cells without dying due to its lack of self-regulation, is a major cause of death worldwide, and the incidence and mortality rate are increasing year by year. To date, genetic factors, environmental factors, lifestyle and eating habits, etc. are known to act in various and complex ways as causes of cancer, and the need for a sophisticated approach at the molecular level is necessary to more clearly identify the causes of cancer. It is emerging.
암을 진단하는 방법으로는 주로 CT,MRI 등 영상진단 촬영 후 의심부위를 조직 검사하여 확진 하는 방법이 쓰이고 있으나, 이는 암을 조기에 진단하는 방법이 아니고 암세포가 어느 정도 성장하고 발전한 후에야 진단이 가능한 한계가 존재하는 방법이다. 이에 따라, 최근에는 유전자 검사와 단백질 검사 등을 통해 암을 조기에 진단 하는 방법이 활용되며, 특히 폐암의 경우 이를 활용한 조기진단 방법이 널리 사용되고 있다.As a method of diagnosing cancer, CT, MRI, etc. are mainly used to confirm the suspected area by biopsy after imaging, but this is not a method to diagnose cancer early, and diagnosis is possible only after the cancer cells grow and develop to some extent. This is how limits exist. Accordingly, in recent years, a method of early diagnosis of cancer through genetic testing and protein testing has been utilized, and in particular, in the case of lung cancer, an early diagnosis method utilizing this has been widely used.
지질체학(Lipidomics)은 생체 내에서 발생하는 여러 지질체군(lipidome)들의 대사과정에서 생기는 총체적인 현상 및 변화를 정성 및 정량하여 그 생물학적, 생화학적 중요성을 알아내는 것에 초점을 맞춘 학문 분야로써, 각종 질환 관련 표지물질(biomarker)을 찾는 연구에도 그 목적을 두고 있다. 특히, 최근 전자분무이온화-탠덤질량 분석법(ESI-MS-MS)의 비약적인 발전으로, 지질 분자들의 구조적 분석이 가능하게 되었고, 샷건 지질학(shotgun lipidomics) 분야가 생물학적 조직의 분석에도 활용될 수 있다.Lipidomics is an academic field focused on qualitative and quantifying the overall phenomena and changes occurring in the metabolic process of various lipid bodies occurring in vivo to find out their biological and biochemical significance. The purpose of research is also to find a biomarker. In particular, with the recent rapid development of electrospray ionization-tandem mass spectrometry (ESI-MS-MS), structural analysis of lipid molecules has become possible, and the field of shotgun lipidomics can be used for analysis of biological tissues.
또한, 여러 종류의 지질들 중, 인지질(phospholipid, PL)은 세포 내의 신호전달(cell signaling), 세포증식(proliferation) 및 사멸(apoptosis) 등의 생체 내 여러 기능에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 암세포는 이러한 정상적인 세포주기의 균형이 깨져 비정상적으로 증식하는 질병인 바, 지질체학을 활용하여 암의 조기 진단 및 예후 예측을 위한 연구가 요구되고 있다.In addition, among various types of lipids, phospholipids (PL) are known to play an important role in various functions in vivo such as cell signaling, proliferation, and apoptosis. . Cancer cells are diseases in which the balance of the normal cell cycle is broken and proliferate abnormally, and thus, studies for early diagnosis and prognosis of cancer are required using geology.
본 발명의 목적은 폐암 진단용 지질 바이오마커 조성물을 제공하는 것이다. An object of the present invention is to provide a lipid biomarker composition for diagnosis of lung cancer.
본 발명의 다른 목적은 상기 지질 바이오마커 조성물을 포함하는 폐암 진단용 키트를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a kit for diagnosis of lung cancer comprising the lipid biomarker composition.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 지질 바이오마커 조성물을 이용한 폐암 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method of providing information necessary for lung cancer diagnosis using the lipid biomarker composition.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 지질 바이오마커 조성물을 이용한 폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 모니터링 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for monitoring a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent using the lipid biomarker composition.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 지질 바이오마커 조성물을 이용한 폐암 치료제의 스크리닝 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for screening a therapeutic agent for lung cancer using the lipid biomarker composition.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 측면은 특정 지질 종의 발현량 증감을 분석함으로써 폐암을 진단하거나, 폐암의 예후를 예측 가능하도록 하는 지질 바이오마커 조성물에 관한 것이다.An aspect of the present invention for achieving the above object relates to a lipid biomarker composition capable of diagnosing lung cancer or predicting the prognosis of lung cancer by analyzing an increase or decrease in the expression level of a specific lipid species.
상기 지질 바이오마커 조성물은, 스핑고미엘린(Sphingomyelin, SM), 리소포스파티딜이노시톨(lysophosphatidylinositol, LPI) 및 트리아실글리세롤(Triacylglycerol, TG)로 이루어진 a) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질; 및The lipid biomarker composition includes at least one lipid selected from the group a) consisting of sphingomyelin (SM), lysophosphatidylinositol (LPI), and triacylglycerol (TG); And
포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine, PE) 및 헥소실세라마이드(Hexosylceramide, HexCer)로 이루어진 b) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질을 포함하는, 폐암 진단용 지질 바이오마커 조성물에 관한 것이다.It relates to a lipid biomarker composition for lung cancer diagnosis comprising at least one lipid selected from the group b) consisting of phosphatidylethanolamine (PE) and hexosylceramide (HexCer).
상기 a) 군은 특정 1 종의 암에서 발현의 증가 또는 감소의 특징을 나타내는 지질 군이며, b) 군은 여러 형태의 암 질환에서 공통적으로 동시에 발현의 증가 또는 감소의 특징을 나타내는 지질 군이다.The group a) is a group of lipids showing an increase or decrease in expression in a specific type of cancer, and group b) is a group of lipids showing a combination of increase or decrease in expression in common in various types of cancer diseases.
본 발명에서는 a) 군에 포함되는 지질 종의 발현의 증가 또는 감소 및 b) 군에 포함되는 지질 종의 발현의 증가 또는 감소를 측정 및/또는 분석함으로써 암에 대한 진단 및 예후를 예측할 수 있도록 하였다.In the present invention, the diagnosis and prognosis of cancer can be predicted by measuring and/or analyzing the increase or decrease in expression of lipid species included in group a) and the increase or decrease in expression of lipid species included in group b). .
본 발명 내의 지질 표기는 지질체학(Lipidomics)에서 세계 응용화학, 생화학, 분자생물학 표준에 따른 시스템 이름 및 공통 이름(IUPAC-IUBMB)에 따라 표기하였다.Lipid labeling in the present invention is expressed according to the system name and common name (IUPAC-IUBMB) according to the world applied chemistry, biochemistry, and molecular biology standards in Lipidomics.
구체적으로, 상기 스핑고미엘린은 d18:1/20:0이고, 상기 리소포스파티딜이노시톨은 16:0 이고, 상기 트리아실글리세롤은 50:1 또는 54:4이고, 상기 포스파티딜에탄올아민은 38:3 또는 18:1p/20:4이고, 상기 헥소실세라마이드는 d18:1/20:0인 것일 수 있다.Specifically, the sphingomyelin is d18:1/20:0, the lysophosphatidylinositol is 16:0, the triacylglycerol is 50:1 or 54:4, and the phosphatidylethanolamine is 38:3 or 18:1p/20:4, and the hexosilceramide may be d18:1/20:0.
본 발명 일 실시예에서는 정상인 및 암 환자(간암, 위암, 폐암, 대장암 및 갑상선암)로부터 시료를 채취하여 지질 종을 분석하였으며, 스핑고미엘린 d18:1/20:0; 리소포스파티딜이노시톨 16:0; 트리아실글리세롤 50:1, 54:4; 포스파티딜에탄올아민 38:3, 18:1p/20:4; 헥소실세라마이드 d18:1/20:0의 AUC 값이 0.8 이상을 나타내어 폐암 진단 또는 예후 예측에 있어 바이오마커로서 효율적으로 활용될 수 있음을 확인하였다.In one embodiment of the present invention, samples were collected from normal persons and cancer patients (liver cancer, gastric cancer, lung cancer, colon cancer, and thyroid cancer) and analyzed for lipid species, sphingomyelin d18:1/20:0; Lysophosphatidylinositol 16:0; Triacylglycerol 50:1, 54:4; Phosphatidylethanolamine 38:3, 18:1p/20:4; It was confirmed that the AUC value of hexosilceramide d18:1/20:0 was 0.8 or higher, and thus can be effectively used as a biomarker in lung cancer diagnosis or prognosis.
본 발명의 다른 일 측면은 상기 지질 바이오마커 조성물을 포함하는 폐암 진단용 키트를 제공한다. 상기 키트는 본 발명의 지질 바이오마커를 검출할 수 있는 제제를 포함할 수 있으며, 상기 제제는 본 발명의 지질 바이오마커를 검출할 수 있는 것이면 제한없이 포함될 수 있다.Another aspect of the present invention provides a kit for diagnosing lung cancer comprising the lipid biomarker composition. The kit may include a formulation capable of detecting the lipid biomarker of the present invention, and the formulation may be included without limitation as long as it is capable of detecting the lipid biomarker of the present invention.
본 발명의 또 다른 일 측면은, 1) 환자의 시료에서 지질의 발현 수준을 측정하는 단계로서, 상기 지질은 상기 지질은 스핑고미엘린, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤로 이루어진 a) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질; 및Another aspect of the present invention is the step of 1) measuring the expression level of lipids in a sample of a patient, wherein the lipid is selected from the group a) consisting of sphingomyelin, lysophosphatidylinositol, and triacylglycerol. One or more lipids; And
포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드로 이루어진 b) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질을 포함하는 단계; 및 2) 상기 환자의 시료에서 상기 a) 군 및 b) 군의 지질의 발현 수준이 정상 시료에서의 발현 수준 대비 증가되거나 감소되는 경우 상기 환자를 폐암 환자로 판단하는 것을 특징으로 하는, 폐암 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. Comprising at least one lipid selected from the group b) consisting of phosphatidylethanolamine and hexosilceramide; And 2) when the expression levels of lipids in the a) group and b) in the patient sample increase or decrease compared to the expression level in the normal sample, the patient is determined as a lung cancer patient. It's about how to provide the necessary information.
구체적으로, 상기 폐암 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법은 1) 환자의 시료에서 지질의 발현 수준을 측정하는 단계로서, 상기 스핑고미엘린은 d18:1/20:0이고, 상기 리소포스파티딜이노시톨은 16:0 이고, 상기 트리아실글리세롤은 50:1 또는 54:4이고, 상기 포스파티딜에탄올아민은 38:3 또는 18:1p/20:4이고, 상기 헥소실세라마이드는 d18:1/20:0인 단계; 및Specifically, the method of providing information necessary for lung cancer diagnosis is the step of 1) measuring the expression level of lipids in a sample of a patient, wherein the sphingomyelin is d18:1/20:0, and the lysophosphatidylinositol is 16 :0, the triacylglycerol is 50:1 or 54:4, the phosphatidylethanolamine is 38:3 or 18:1p/20:4, and the hexosilceramide is d18:1/20:0 ; And
2) 상기 환자의 시료에서 지질의 발현 수준이 정상 시료에서의 발현 수준 대비 a) 군에서 스핑고미엘린이 감소하거나, 리소포스파티딜이노시톨 또는 트리아실글리세롤이 증가하고, b) 군에서 포스파티딜에탄올아민 또는 헥소실세라마이드가 감소한 경우 폐암 환자인 것으로 판단하는 것을 특징으로 할 수 있다.2) The expression level of lipids in the patient's sample was decreased in the group a), or increased in lysophosphatidylinositol or triacylglycerol, compared to the level in the normal sample, and phosphatidylethanolamine or hexol in group b). When the loss of ceramide is reduced, it may be characterized as being determined to be a patient with lung cancer.
본 발명에서의 "시료"는 폐암 질환이 있거나, 있을 것으로 추정 또는 예측되는 임의의 물질을 말한다. 시료는 천연 또는 합성된 것일 수 있고, 통상의 기술자에게 공지된 임의 수단을 통해 수득될 수 있다. 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 객담, 림프액, 뇌척수액, 세포간액 또는 뇨 뿐만 아니라, 시험관 내 세포 배양 성분의 시료, 예를 들면, 세포 성분, 세포배양배지, 재조합세포 등을 포함할 수 있다."Sample" in the present invention refers to any substance that has, is estimated to or is predicted to have a lung cancer disease. The sample may be natural or synthetic, and may be obtained through any means known to a person skilled in the art. Samples include tissues, cells, whole blood, plasma, serum, blood, saliva, sputum, lymph, cerebrospinal fluid, intercellular fluid or urine, as well as samples of in vitro cell culture components, for example, cell components, cell culture media, recombinant cells And the like.
본 발명에서 "환자의 시료"는 폐암 질환의 발병 여부를 판단할 대상개체로부터 얻어진 생물학적 시료를 말하며, 조직, 세포, 전혈, 혈장, 혈청, 혈액, 타액, 객담, 림프액, 뇌척수액, 세포간액 또는 뇨일 수 있다.In the present invention, "patient's sample" refers to a biological sample obtained from a subject subject to determine whether or not a lung cancer disease has occurred, and tissue, cells, whole blood, plasma, serum, blood, saliva, sputum, lymph, cerebrospinal fluid, intercellular fluid or urine I can.
본 발명에서 "정상 시료"는 폐암 질환이 발병하지 않은 개체로부터 얻어진 생물학적 시료를 말한다.In the present invention, the "normal sample" refers to a biological sample obtained from an individual who has not developed lung cancer disease.
본 발명 일 실시예에서는 폐암에서 a) 군의 스핑고미엘린 d18:1/20:0의 감소가 나타나고, 리소포스파티딜이노시톨 16:0, 트리아실글리세롤 50:1 또는 54:4의 증가가 나타나며, b) 군의 포스파티딜에탄올아민 38:3 또는 18:1p/20:4, 헥소실세라마이드 d18:1/20:0의 감소가 나타남을 확인하였으며, 특히 상기 각 지질 종들은 모두 AUC 값이 0.8 이상임을 나타내어 각각 폐암에 대한 지질 바이오마커로써 활용될 수 있음을 확인하였다.In one embodiment of the present invention, a decrease in group a) sphingomyelin d18:1/20:0, lysophosphatidylinositol 16:0, triacylglycerol 50:1 or 54:4 increase in lung cancer, b ) Group of phosphatidylethanolamine 38:3 or 18:1p/20:4, hexosylceramide d18:1/20:0 was confirmed to be reduced, and in particular, each of the lipid species showed an AUC value of 0.8 or more. It was confirmed that each can be used as a lipid biomarker for lung cancer.
본 발명의 또 다른 일 측면은 폐암 환자 시료에 폐암 억제제 또는 폐암 치료제를 처리하는 단계; 및 상기 시료에서 폐암 억제제 또는 폐암 치료제를 처리하기 전과 처리한 후의 지질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 모니터링 방법을 제공한다.Another aspect of the present invention is the step of treating a lung cancer patient sample with a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent; And it provides a method for monitoring a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent comprising measuring the expression level of lipids before and after the treatment of the lung cancer inhibitor or the lung cancer therapeutic agent in the sample.
구체적으로, 상기 지질은 스핑고미엘린, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤로 이루어진 a) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질; 및Specifically, the lipid is at least one lipid selected from a) group consisting of sphingomyelin, lysophosphatidylinositol, and triacylglycerol; And
포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드로 이루어진 b) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질일 수 있다.It may be one or more lipids selected from the group b) consisting of phosphatidylethanolamine and hexosilceramide.
본 발명에서 폐암 억제제 또는 폐암 치료제는 소분자, 화합물, 항체, 면역항암제, 바이러스 등의 형태일 수 있으며, 암의 증식이나 전이를 억제하거나 암 세포를 사멸하는 등의 효과를 통해 폐암 질환을 치료 또는 개선시킬 수 있는 제제이면 제한없이 모두 적용될 수 있다. In the present invention, the lung cancer inhibitor or the lung cancer therapeutic agent may be in the form of a small molecule, a compound, an antibody, an immune anticancer agent, a virus, and the like, and treat or ameliorate a lung cancer disease through an effect such as inhibiting the proliferation or metastasis of cancer or killing cancer cells. Any formulation that can be made can be applied without limitation.
본 발명에서는 폐암 억제제 또는 폐암 치료제를 처리한 시료에 대하여 본 발명의 지질 바이오마커의 발현 수준 변화를 측정함으로써, 해당 폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 암 억제능 및 암 치료 효과를 모니터링 할 수 있다. 예를 들어, 폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 처리에 따라 시료 내 지질 바이오마커의 발현 수준이 유의적으로 정상 시료의 범위 내에 포함되는 경우, 해당 폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 암 억제능 및 암 치료효과가 우수한 것으로 판단할 수 있다.In the present invention, by measuring the change in the expression level of the lipid biomarker of the present invention with respect to a sample treated with a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent, the cancer inhibitory ability and the cancer treatment effect of the lung cancer inhibitor or the lung cancer therapeutic agent can be monitored. For example, if the expression level of a lipid biomarker in a sample is significantly within the range of a normal sample according to the treatment of a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent, the cancer inhibitory effect or the cancer treatment effect is excellent. I can judge.
본 발명의 또 다른 일 측면은 폐암 환자 시료에 폐암 치료제 후보 물질을 처리하는 단계; 및 상기 시료에서 후보물질을 처리하기 전과 처리한 후의 지질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 폐암 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.Another aspect of the present invention is a method comprising: treating a lung cancer patient sample with a candidate substance for treating lung cancer; And measuring the expression level of lipids before and after the treatment of the candidate substance in the sample.
구체적으로, 상기 지질은 스핑고미엘린, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤로 이루어진 a) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질; 및Specifically, the lipid is at least one lipid selected from a) group consisting of sphingomyelin, lysophosphatidylinositol, and triacylglycerol; And
포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드로 이루어진 b) 군에서 선택되는 하나 이상의 지질일 수 있다.It may be one or more lipids selected from the group b) consisting of phosphatidylethanolamine and hexosilceramide.
본 발명에서는 폐암 치료제 후보물질을 처리한 시료에 대하여 본 발명의 지질 바이오마커의 발현 수준 변화를 측정함으로써, 해당 후보물질의 폐암 억제능 및 폐암 치료 효과를 판단할 수 있다. 예를 들어, 후보물질의 처리에 따라 시료 내 지질 바이오마커의 발현 수준이 유의적으로 정상 시료의 범위 내에 포함되는 경우, 해당 후보물질을 폐암 질환 치료제로 선별할 수 있다.In the present invention, by measuring the change in the expression level of the lipid biomarker of the present invention with respect to a sample treated with a candidate substance for treating lung cancer, the ability of the candidate substance to inhibit lung cancer and the effect of treating lung cancer can be determined. For example, when the expression level of a lipid biomarker in a sample is significantly within the range of a normal sample according to the treatment of the candidate substance, the candidate substance may be selected as a treatment for lung cancer disease.
본 발명의 지질 바이오마커는 암 질환의 진단 및 예후 예측에 활용될 수 있다. 구체적인 지질 종의 발현 양상에 따라 세부적인 암 종류의 진단이 가능하다. 이에 따라, 본 발명의 지질 바이오마커 세트를 특정하여 조합함으로써 각 암에 대한 조기 진단 및 예후 예측에 광범위하게 활용될 수 있고, 진단 및 예측된 예후에 따라 적절한 치료방향을 결정할 수 있어 암 재발 및 사망률을 감소시킬 수 있다.The lipid biomarker of the present invention can be used for diagnosis and prognosis of cancer diseases. Detailed cancer types can be diagnosed according to the expression pattern of specific lipid species. Accordingly, by specifying and combining the lipid biomarker set of the present invention, it can be widely used for early diagnosis and prognosis for each cancer, and an appropriate treatment direction can be determined according to the diagnosis and predicted prognosis, and thus cancer recurrence and mortality Can be reduced.
도 1은 액체크로마토그래피-전기분무이온화-질량분석기 시스템을 간략히 도식화하여 나타낸 것이다.
도 2는 지질 표준물질을 검출한 크로마토그램을 나타낸 것으로, a)는 양이온모드(positive ion mode)에서 분석한 것이고, b)는 음이온 모드(negative ion mode)에서 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 분석한 219개의 지질 종을 대상으로 정상군과 종류별 암 환자군 간의 비교 결과를 fold change와p-value 값으로 표시한 volcano plot을 나타낸 것이다.
도 4는 정상군과 비교했을 때 암 환자군에서 3배 이상의 차이가 발생하고, p-value 값이 0.01 미만인 지질 종들을 표시한 Principal component analysis(PCA) plot을 나타낸 것이다.
도 5는 정상군과 비교했을 때 암 환자군에서 3배 이상의 차이가 발생하고, p-value 값이 0.01 이하인 지질 종들로 heatmap을 표현한 것을 나타낸 것이다.
도 6은 각 지질군 별 고발현된 종들의 조성 변화를 중첩막대그래프(stacked bar graph)로 나타낸 것이다.
도 7은 정상군 대비 high abundance lipid가 2배 이상 차이나고 p-value값이 0.05미만인 지질 종을 선정한 막대그래프로, a)는 5 종의 암에서, b)는 4 종, c)는 3 종, d)는 2 종, e)는 1 종의 암에서 특징을 보이는 지질 종을 나타낸 것이다.
도 8은 암 종별 지질 바이오마커로 선정된 지질 종의 ROC(Receiver operating characteristic) 커브를 나타낸 것이다.
도 9는 암 종별 AUC 값이 0.8 이상인 지질 바이오마커 목록표를 나타낸 것으로, a) 군은 1 가지 암에서만 특징을 보이는 지질 종이며, b) 군은 여러 종류의 암에서 동시에 특징을 보이는 지질 종이다. ↑는 2배 이상 증가, ↓는 2배 이상 감소를 의미한다.1 is a schematic diagram of a liquid chromatography-electrospray ionization-mass spectrometer system.
Figure 2 shows a chromatogram of detecting a lipid standard, a) is an analysis in the positive ion mode (positive ion mode), b) shows the analysis results in the anion mode (negative ion mode).
FIG. 3 shows a volcano plot in which the comparison results between the normal group and the cancer patient group for each type of analyzed 219 lipid species are expressed as fold change and p-value values.
FIG. 4 shows a Principal component analysis (PCA) plot showing lipid species with a difference of 3 times or more in the cancer patient group and with a p-value value of less than 0.01 when compared to the normal group.
FIG. 5 shows that a difference of more than 3 times occurs in the cancer patient group when compared to the normal group, and the heatmap is expressed with lipid species having a p-value of 0.01 or less.
6 shows the composition change of highly expressed species for each lipid group as a stacked bar graph.
FIG. 7 is a bar graph for selecting lipid species with a p-value of less than 0.05 and a difference of more than two times in high abundance lipid compared to the normal group. , d) represents two species, and e) represents a lipid species that is characterized in one species.
8 shows a ROC (Receiver operating characteristic) curve of a lipid species selected as a lipid biomarker for each cancer type.
9 shows a list of lipid biomarkers with an AUC value of 0.8 or more for each cancer type. Group a) is a lipid species that is characterized only in one cancer, and group b) is a lipid species that is characterized simultaneously in several types of cancer. ↑ means more than 2 times increase, and ↓ means more than 2 times decrease.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples. However, the following examples are only illustrative of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.
실시예 1. 혈장 샘플의 준비Example 1. Preparation of plasma sample
혈장샘플은 임상시험심사위원회(institutional review board; IRB)의 승인을 얻어 대학제휴 종합병원(university affiliated general hospital)에서 제공받았다. 혈장 샘플은 평균나이 50세 남성들을 대상으로 하여 각각 정상인(n=20), 간암(n=21), 위암(n=20), 폐암(n=17), 대장암(n=16), 갑상선암 환자(n=10)에게서 수득하였고, 각 환자에 대한 인구통계학적 정보는 아래 표 1에 나타내었다.Plasma samples were provided by a university affiliated general hospital with approval from the institutional review board (IRB). Plasma samples were collected from men aged 50 years of average, and normal (n=20), liver cancer (n=21), stomach cancer (n=20), lung cancer (n=17), colon cancer (n=16), and thyroid cancer. It was obtained from patients (n=10), and demographic information for each patient is shown in Table 1 below.
단계(Cancer
stage)Progress
Step (Cancer
stage)
(vs.control) p -value
(vs.control)
실시예 2. 혈장 내 지질의 정량 및 정성 분석Example 2. Quantitative and qualitative analysis of lipids in plasma
실시예 1의 혈장샘플로부터 얻어낸 지질의 분석은 모두 초고성능 액체크로마토그래피-전기분무이온화-질량분석기 시스템(nanoflow ultrahigh performance liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry, nUHPLC-ESI-MS/MS)을 이용하여 정성 및 정량분석 두 단계로 수행되었다. 정성분석의 경우 액체크로마토그래피(Liquid Chromatography, LC) 모델은 Dionex Ultimate 3000 RSLC nano system을 사용하였고, 질량분석기는 Thermo Scientific (San Jose, CA, USA)사의 LTQ Velos ion trap 질량분석기를 사용하였다. Analysis of the lipids obtained from the plasma samples of Example 1 was performed using a nanoflow ultrahigh performance liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry, nUHPLC-ESI-MS/MS). Thus, qualitative and quantitative analysis was performed in two steps. In the case of qualitative analysis, the Dionex Ultimate 3000 RSLC nano system was used as the liquid chromatography (LC) model, and the LTQ Velos ion trap mass spectrometer of Thermo Scientific (San Jose, CA, USA) was used as the mass spectrometer.
각 군 별로 풀링(Pooling)한 샘플의 혈장 내 지질 추출물을 각 지질 종마다 특징적으로 나타나는 CID fragment pattern에 따라서 지질 종을 식별하게 되는데, 본 발명자들이 개발한 컴퓨터 소프트웨어 프로그램인 LiPilot을 사용해 정성 분석하였다(등록특허 10-1502694). The lipid extracts in the plasma of the samples pooled for each group were identified according to the CID fragment pattern characteristic of each lipid species, and qualitative analysis was performed using LiPilot, a computer software program developed by the present inventors ( Registered Patent 10-1502694).
이후, 정성 분석한 지질 종들만 선택적으로 정량하는 selected reaction monitoring (SRM) 모드로 정량분석을 수행하였고, LC는 Waters (Milford, MA)사의 nanoACQUITY UPLC를 사용하였으며, 질량분석은 Thermo Scientific 사의 TSQ Vantage triple stage quadrupole 질량분석기를 사용하여 분석하였다.Subsequently, quantitative analysis was performed in the selected reaction monitoring (SRM) mode, which selectively quantifies only the qualitatively analyzed lipid species, and the LC was performed using NanoACQUITY UPLC from Waters (Milford, MA), and the mass analysis was performed by TSQ Vantage triple of Thermo Scientific Analysis was performed using a stage quadrupole mass spectrometer.
총 7 cm 길이의 homemade 모세관 컬럼을 분석컬럼으로 사용하였고, Polymicro Technologies, LLC (Pheonix, AZ)에서 구입한 내경이 100μm인 (외경 360μm) 모세관을 torch를 이용하여 길게 뽑아낸 후 끝 부분을 잘라 콘모양으로 만들어 전기분무이온화가 가능하도록 해주었다. 또한 높은 압력에서도 컬럼의 충진제가 빠져나가지 않도록 Isu Industry Corp.(서울, 대한민국)사에서 구입한 3μm 크기의 Watchers® ODS-P C18 particles (2.1mm x 100 mm) 충진물을 질소가스로 압력을 가하면서 0.5cm 정도의 길이로 채워주었다. 상기 과정을 간략하게 도 1에 나타내었다.A homemade capillary column with a total length of 7 cm was used as the analysis column, and a capillary with an inner diameter of 100 μm (outer diameter 360 μm) purchased from Polymicro Technologies, LLC (Pheonix, AZ) was pulled out long using a torch, and the end was cut off. It made it possible to make electrospray ionization. In addition, to prevent the column filler from escaping even under high pressure, a 3μm-sized Watchers® ODS-P C18 particle (2.1mm x 100 mm) packing material purchased from Isu Industry Corp. (Seoul, Korea) is applied with nitrogen gas. It was filled with a length of about 0.5cm. The process is briefly shown in FIG. 1.
지질 분리방법Lipid separation method
지질 분리는 기울기 용리법을 통해 극성이 높은 순서대로 분리하였다. 사용된 이동상A와 B의 조성은 각각H2O:ACN (9:1, v/v), CH3OH:ACN:IPA (2:2:6, v/v/v)이며, 이온화 매개체(ionization modifier)로 5mM Ammonium formate와 0.05% Ammonium hydroxide 혼합액을 두 이동상에 각각 첨가하였다.Lipid separation was performed in order of polarity by gradient elution. The compositions of the mobile phases A and B used are H 2 O:ACN (9:1, v/v), CH 3 OH:ACN:IPA (2:2:6, v/v/v), respectively, and the ionization mediator ( ionization modifier) was added to each of the two mobile phases with a mixture of 5 mM Ammonium formate and 0.05% Ammonium hydroxide.
정성분석Qualitative Analysis
정성분석을 위하여 IDEX Health & Science (Oak Harbor, WA, USA)사에서 구입한 stainless steel 소재의 micro cross에 분석 컬럼과 펌프로부터 flow가 오도록 하는 모세관을 연결하고, 다른 한쪽에는 ESI voltage가 형성이 되도록 전압을 걸어주는 Pt wire 그리고 나머지 한쪽에는 split flow를 조절할 수 있는 on-off valve를 연결해 주었다. 이후, 시료의 loading을 위하여 on-off 밸브를 닫은 후 14분 동안 550 nL/min의 유속으로 이동상A 100%를 분석 컬럼에 흘려준 다음 on-off valve를 열어 펌프로부터 오는 유속을 7 μL/min으로 증가시켜 분석 컬럼에는 약300 nL/min의 유속으로 흐르도록 하였다. 또한, 이동상 B를 4분 동안 75%에서 80%로 변화시킨 후, 8분 동안 80%조건으로 유지하였다. 이후 18분 동안 90%까지 올려 준 후 5분 동안 100%까지 올려주고 100%를 다시 5분 동안 유지하였다. 이와 같은 조건의 기울기 용리법으로 지질 표준물질을 분리한 크로마토그램을 도 2에 나타내었다.For qualitative analysis, connect a capillary tube that allows flow from the analysis column and pump to a micro cross made of stainless steel purchased from IDEX Health & Science (Oak Harbor, WA, USA), and to form an ESI voltage on the other side. A Pt wire to apply voltage and an on-off valve that can control split flow was connected to the other side. Thereafter, after closing the on-off valve for loading of the sample, 100% of mobile phase A was flowed into the analysis column at a flow rate of 550 nL/min for 14 minutes, and then opened the on-off valve to reduce the flow rate from the pump to 7 μL/min. Was increased to flow at a flow rate of about 300 nL/min through the analytical column. In addition, the mobile phase B was changed from 75% to 80% for 4 minutes, and then maintained at 80% condition for 8 minutes. After that, the mixture was raised to 90% for 18 minutes, then to 100% for 5 minutes, and 100% was maintained for 5 minutes. Fig. 2 shows a chromatogram obtained by separating the lipid standard by gradient elution under these conditions.
정량분석Quantitative analysis
지질은 종류에 따라 질량분석기의 음이온 모드 또는 양이온 모드에서 관찰되므로 LPC, PC, LPE, PE, PEp, DG, TG, Cer, SM, HexCer, SulfoHexCer의 정량분석은 양이온 모드에서, LPG, PG, LPI, PI, LPA, PA의 경우는 음이온 모드에서 분석하였다. Lipids are observed in anion mode or cation mode of mass spectrometry depending on the type, so quantitative analysis of LPC, PC, LPE, PE, PEp, DG, TG, Cer, SM, HexCer, SulfoHexCer is performed in cationic mode, LPG, PG, LPI. , PI, LPA, and PA were analyzed in anion mode.
충돌에너지는 각 지질 종 마다 표준물질을 사용해 최적화된 값을 찾아 아래 표 2와 같이 설정하였다. The collision energy was set as shown in Table 2 below by finding an optimized value using a standard material for each geological species.
또한, 정량 및 오차를 보정해 주기 위해서 생체 내에서는 존재하지 않는 홀수 체인을 가지고 있는 지질 물질을 각 종류별로 시료에 첨가해 주어 내부 표준물질(Internal standard, IS)로 사용하였고 개별 지질이 갖는 면적을 내부 표준물질의 피크 면적으로 나누어 보정하고 지질의 양을 계산하여 정량하였다.상기 기술한 방법대로 총 335 개의 개별 지질 종을 정성분석하였고, 이를 바탕으로 총 219종의 개별 지질 종을 정량분석 한 결과를 아래 표 3에 나타내었다.In addition, in order to correct the quantification and error, a lipid substance having an odd chain that does not exist in the living body was added to the sample for each type and used as an internal standard (IS). The amount of lipid was calculated and quantified by dividing it by the peak area of the internal standard. As a result of qualitative analysis of a total of 335 individual lipid species according to the method described above, a total of 219 individual lipid species were quantitatively analyzed. Is shown in Table 3 below.
정량분석 한 지질 종들은 Minitap과 SPSS (version 24.0, IBM Corp., Armonk, NY, USA) 소프트웨어를 사용하여 PCA와 일원 분산 분석(one-way analysis of variance, ANOVA), 회귀분석, Receiver operating characteristic(ROC) 커브와 같은 통계분석을 진행하였다.Quantitatively analyzed lipid species were analyzed using Minitap and SPSS (version 24.0, IBM Corp., Armonk, NY, USA) software with PCA and one-way analysis of variance (ANOVA), regression analysis, and Receiver operating characteristic ( Statistical analysis such as ROC) curve was performed.
실시예 3. 지질 종의 증감비율 비교분석 결과Example 3. Results of comparative analysis of increase/decrease ratio of lipid species
volcano plot 분석volcano plot analysis
실시예 2에서 분석한 219 개의 지질 종을 대상으로 정상군과 암 종류별 환자군을 비교하여 개별 암 환자군에서 어떤 지질 종이 얼만큼 증감하였는지를 나타내는 비율인 fold change와 이 결과가 신뢰할만한 데이터인지 의미하는 p-value 값을 각각x, y축으로 나타낸 volcano plot을 도 3에 나타내었다.The fold change, which is the ratio of which lipid species increased and decreased by how much, in the individual cancer patient group by comparing 219 lipid species analyzed in Example 2 with the normal group and the patient group by cancer type, and p- which means whether this result is reliable data. A volcano plot in which value values are represented by x and y axes, respectively, is shown in FIG.
도 3의 x축은 fold change에 관한 수치로, 0값에 가까이 존재할수록 정상군과 비교하여 큰 차이가 없다는 것을 의미하며, 절대값으로 1만큼 증가할수록 정상군과 비교하여 수치가 2배 이상 감소하거나 증가하는 것을 나타낸다. y축은 p-value에 관한 값으로 그 값이 클수록 정상군과 환자군 간의 유의미한 차이가 있다는 것을 의미한다.The x-axis in FIG. 3 is a value for fold change, which means that there is no significant difference compared to the normal group as the value is closer to 0, and as the absolute value increases by 1, the value decreases more than two times compared to the normal group Indicates increasing. The y-axis is a value related to the p-value, which means that there is a significant difference between the normal group and the patient group as the value increases.
Volcano plot을 이용한 비교분석 결과 간암과 갑상선암에서 혈장 내 지질 변화가 증가하는 경향과 감소하는 경향을 모두 보이고 있으며, 위암과 폐암, 대장암의 경우 증가하는 지질 종들에 비해 감소하는 지질 종들이 더 많은 것을 확인할 수 있었다.As a result of comparative analysis using volcano plot, plasma lipid changes tended to increase and decrease in liver cancer and thyroid cancer, and in gastric cancer, lung cancer, and colon cancer, there were more decreasing lipid species than increasing lipid species. I could confirm.
주성분 분석(Principal component analysis; PCA)Principal component analysis (PCA)
실시예 2에서 분석한 219개의 지질 종 중에서 정상군과 비교했을 때 암 환자군에서 3배 이상의 차이가 발생하고, p-value 값이 0.01 미만인 지질 종들을 표시한 Principal component analysis(PCA) plot을 도 4에 나타내었다.Figure 4 shows a Principal component analysis (PCA) plot showing lipid species with a p-value of less than 0.01 and a difference of 3 times or more in the cancer patient group when compared to the normal group among 219 lipid species analyzed in Example 2 Shown in.
PCA plot은 각각의 개별 환자가 갖는 데이터 행렬에 고유벡터를 곱해 하나의 점으로 나타내어 2차원으로 표현함으로써 데이터가 갖는 패턴을 해석 가능하게 해준다. 정상군을 기준으로 봤을 때, 각각의 암 종류별로 정상군과 다른 패턴을 보이는 것을 나타내고 있으며, 암 종류별로도 서로 다른 패턴을 보이는 것을 확인할 수 있었다.The PCA plot makes it possible to interpret the pattern of data by multiplying the data matrix of each individual patient by an eigenvector and expressing it as a single point in two dimensions. Based on the normal group, each cancer type showed a different pattern from that of the normal group, and it was confirmed that each cancer type showed a different pattern.
히트맵(heatmap) 분석Heatmap analysis
PCA plot과 같은 조건으로 정상군과 비교했을 때 암 환자군에서 3배 이상의 차이가 발생하고, p-value 값이 0.01 이하인 지질 종들만 선택하여 구성한 heatmap을 도 5에 나타내었다.A heatmap constructed by selecting only lipid species with a p-value of 0.01 or less occurred in the cancer patient group when compared to the normal group under the same conditions as the PCA plot is shown in FIG. 5.
Heatmap은 데이터 행렬을 z-score로 바꿔주어 표현한 것으로 음의 값을 가질 경우 파란색, 양의 값을 가질 경우 빨간색으로 표현하였다.Heatmap is expressed by converting the data matrix to z-score, and it is expressed in blue when it has a negative value, and in red when it has a positive value.
LPC의 경우 정상군과 비교했을 때 간암과 갑상선암에서 증가하는 경향을 보이고 있으며, 위암의 경우 환자간에 차이는 있지만 전반적으로 증가하는 경향을 확인할 수 있었다. 또한, LPI는 갑상선암에서만 증가하는 패턴을 보이고 있으며, PI는 간암에서만 증가하는 경향을 보임을 확인하였다. 이와는 반대로 PC, LPE, PE의 경우 갑상선암을 제외한 대부분의 암환자에게서 감소하는 경향을 보이는 것을 확인할 수 있었다.In the case of LPC, compared with the normal group, there was a tendency to increase in liver cancer and thyroid cancer. In the case of gastric cancer, although there was a difference between patients, it was confirmed that the overall tendency to increase. In addition, it was confirmed that LPI showed an increasing pattern only in thyroid cancer, and that PI showed a tendency to increase only in liver cancer. On the contrary, in the case of PC, LPE, and PE, it was found that most of the cancer patients except thyroid cancer showed a tendency to decrease.
고발현(high abundance) 지질 종 분석Analysis of high abundance lipid species
본 발명자들은 PCA plot과 Heatmap에서 보이는 경향들을 조금 더 자세하게 확인하기 위해서 High abundance한 종들의 조성변화를 비교하였고, 그 결과를 도 6에 나타내었다.The present inventors compared the composition change of the high abundance species in order to confirm the trends seen in the PCA plot and the heatmap in more detail, and the results are shown in FIG. 6.
High abundance는 정상군을 기준으로 하여 계산하였으며, 한 종류의 지질군 안에서 검출된 개별 지질 종의 피크면적을 지질군 안에서 검출된 모든 종들의 피크면적 합으로 나누어 상대적인 abundance를 계산하였다. 그 결과, Heatmap에서 나타난 것처럼 LPC는 간암과 위암에서 증가하는 것으로 나타났으며, LPI 역시 갑상선암에서 4배 이상으로 크게 증가하는 것을 확인할 수 있었다. PE의 경우 모든 종류의 암에서 모두 감소하는 경향을 나타내고 있다. 또한, PI는 Heatmap의 결과와 마찬가지로 간암에서만 2배 이상 증가하는 특징을 보이고 있으며 TG에서도 2배 이상 증가하는 모습을 확인하였다. 간암과는 반대로 위암의 경우 TG에서 2배 이상 감소하는 특징을 보이고 있음 또한 확인할 수 있었다.High abundance was calculated based on the normal group, and the relative abundance was calculated by dividing the peak area of each lipid species detected in one type of lipid group by the sum of the peak areas of all species detected in the lipid group. As a result, as shown in Heatmap, LPC was found to increase in liver and gastric cancer, and it was confirmed that LPI also increased more than 4 times in thyroid cancer. In the case of PE, all types of cancer tend to decrease. In addition, it was confirmed that PI increased more than twice as much in liver cancer as in the result of heatmap, and increased more than twice in TG. It was also confirmed that gastric cancer, contrary to liver cancer, showed a characteristic of more than twice the decrease in TG.
분석결과 종합Synthesis of analysis results
본 발명자들은 상기 분석결과를 종합하여 정상군 대비 high abundance lipid가 2배 이상 차이나고 p-value값이 0.05미만인 지질 종들을 선정하여 총 50종의 지질 종을 선별하였다.The present inventors synthesized the above analysis results and selected lipid species with a difference of more than two times in high abundance lipid compared to the normal group and a p-value value of less than 0.05 to select a total of 50 lipid species.
선별된 지질 종들을 도 7에 막대그래프로 나타내었다. a)는 5 종의 암 모두에서 의미있는 변화를 보이는 지질 종이며, b)는 4 종, c)는 3 종, d)는 2 종, e)는 1 종의 암에서만 특징을 보이는 지질 종이다. The selected lipid species are shown in a bar graph in FIG. 7. a) is a lipid species showing significant changes in all 5 types of cancer, b) is 4 species, c) is 3 species, d) is 2 species, and e) is a lipid species that is characteristic only of 1 cancer. .
PI 18:1/18:0의 경우 유일하게 모든 암에서 변화를 보였으며 간암에서만 2배 이상 증가하는 반면에 나머지 4가지 암에서는 감소하는 특징이 있다. 간암에서만 유의미하게 변하는 나머지 PI종들도 18:1/18:0과 마찬가지로 증가하는 경향을 보이며 이는 heatmap의 결과와도 일치하는 것을 확인하였다.In the case of PI 18:1/18:0, it was the only one that showed a change in all cancers, and increased more than doubled in liver cancer, while it was decreased in the other four cancers. The remaining PI species, which change significantly only in liver cancer, also showed a tendency to increase as in 18:1/18:0, which was confirmed to be consistent with the results of the heatmap.
b)와 c), d)에서 의미 있는 변화를 보이는 PE는 대부분의 암 종에서 감소하는 특징을 보임을 확인하였고, 위암의 경우 LPC 16:0, 18:2가 증가하는 특징을, 갑상선암의 경우 역시 heatmap의 결과와 일치하게 LPI가 증가하는 것을 확인하였다. 따라서 도 7에 선정된 지질 종들을 암 예후 예측을 위한 지질 바이오마커로 선정하였다. It was confirmed that PE showing significant changes in b), c), and d) showed a decreasing characteristic in most carcinomas. In gastric cancer, LPC 16:0, 18:2 increased, and in thyroid cancer. Also, it was confirmed that the LPI increased consistent with the results of the heatmap. Therefore, the lipid species selected in FIG. 7 were selected as lipid biomarkers for predicting cancer prognosis.
또한, 도 8에 나타낸 Receiver operating characteristic(ROC) curve를 통해서 선별된 지질 종들의 진단 효율을 평가하였다. ROC curve의 아래 면적(area under curve, AUC) 값에 따라서 효율성이 평가되며 값이 1에 가까울수록 높은 효율성을 나타내는 것으로 판단하였다. 선별된 지질 종들은 각각의 암 종류별로 선정된 50개의 지질 종들을 대상으로 하였으며, AUC값이 0.8 이상인 종들을 도 9에 나타내었다.In addition, the diagnostic efficiency of the selected lipid species was evaluated through the Receiver operating characteristic (ROC) curve shown in FIG. 8. The efficiency was evaluated according to the area under curve (AUC) value of the ROC curve, and the closer the value was to 1, the higher the efficiency was determined. The selected lipid species targeted 50 lipid species selected for each cancer type, and species with an AUC value of 0.8 or higher are shown in FIG. 9.
그 결과 선정된 50개의 지질 중에 간암은 8종, 위암은 9종, 폐암은 7종, 대장암은 8종, 갑상선 암은 6종의 지질이 AUC 값이 0.8 이상으로 효율이 좋은 것을 확인하였다. 구체적으로, AUC 값이 0.8 이상인 지질 종은 포스파티딜이노시톨(phosphatidylinositol, PI) 16:0/18:2, 16:0/20:4, 18:0/20:3, 18:1/18:0; 디아실글리세롤(Diacylglycerol, DG) 16:1_18:0; 포스파티딜콜린(phosphatidylcholine, PC) 34:2, 36:2, 36:3, 36:4; 리소포스파티딘 산(lysophosphatidic acid, LPA) 18:2; 스핑고미엘린(Sphingomyelin, SM) d18:1/20:0 ; 리소포스파티딜이노시톨(lysophosphatidylinositol, LPI) 16:0, 18:0, 18:1; 트리아실글리세롤(Triacylglycerol, TG) 50:1, 54:4; 리소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine, LPC) 16:0, 18:2; 리소포스파티딜에탄올아민(lysophosphatidylethanolamine, LPE) 16:0, 18:0, 18:1, 18:2; 포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine, PE) 36:1, 38:3, 38:4, 38:6, 16:0p/20:4, 16:1p/22:6, 18:0p/20:4, 18:1p/18:1, 18:1p/20:4, 18:1p/22:4; 헥소실세라마이드(Hexosylceramide, HexCer) d18:1/20:0 로서, 상기 지질들이 암 진단 또는 예후 예측에 있어 바이오마커로 활용될 수 있음을 확인하였다. 특히, 스핑고미엘린 d18:1/20:0, 리소포스파티딜이노시톨 16:0, 트리아실글리세롤 50:1 및/또는 54:4, 포스파티딜에탄올아민 38:3 및/또는 18:1p/20:4, 헥소실세라마이드 d18:1/20:0는 폐암에 대한 진단 또는 예후 예측에 바이오마커로서 활용될 수 있음을 확인하였다.As a result, it was confirmed that among the selected 50 lipids, 8 types of liver cancer, 9 types of gastric cancer, 7 types of lung cancer, 8 types of colon cancer, and 6 types of thyroid cancer have good AUC values of 0.8 or higher. Specifically, the lipid species with an AUC value of 0.8 or higher are phosphatidylinositol (PI) 16:0/18:2, 16:0/20:4, 18:0/20:3, 18:1/18:0; Diacylglycerol (DG) 16:1_18:0; Phosphatidylcholine (PC) 34:2, 36:2, 36:3, 36:4; Lysophosphatidic acid (LPA) 18:2; Sphingomyelin (SM) d18:1/20:0; Lysophosphatidylinositol (LPI) 16:0, 18:0, 18:1; Triacylglycerol (TG) 50:1, 54:4; Lysophosphatidylcholine (LPC) 16:0, 18:2; Lysophosphatidylethanolamine (LPE) 16:0, 18:0, 18:1, 18:2; Phosphatidylethanolamine (PE) 36:1, 38:3, 38:4, 38:6, 16:0p/20:4, 16:1p/22:6, 18:0p/20:4, 18: 1p/18:1, 18:1p/20:4, 18:1p/22:4; As hexosylceramide (HexCer) d18:1/20:0, it was confirmed that the lipids can be used as biomarkers in cancer diagnosis or prognosis. In particular, sphingomyelin d18:1/20:0, lysophosphatidylinositol 16:0, triacylglycerol 50:1 and/or 54:4, phosphatidylethanolamine 38:3 and/or 18:1p/20:4, It was confirmed that hexosilceramide d18:1/20:0 can be used as a biomarker for diagnosis or prediction of prognosis for lung cancer.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.The above description of the present invention is for illustrative purposes only, and those of ordinary skill in the art to which the present invention pertains can understand that it is possible to easily transform it into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not limiting. For example, each component described as a single type may be implemented in a distributed manner, and similarly, components described as being distributed may also be implemented in a combined form.
본 발명의 범위는 후술하는 청구범위에 의하여 나타내어지며, 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.The scope of the present invention is indicated by the claims to be described later, and all changes or modified forms derived from the meaning and scope of the claims and the concept of equivalents thereof should be construed as being included in the scope of the present invention.
Claims (10)
포스파티딜에탄올아민(phosphatidylethanolamine, PE) 및 헥소실세라마이드(Hexosylceramide, HexCer)로 이루어진 b) 군의 지질을 포함하는, 폐암 진단용 지질 바이오마커 조성물.Lipids of group a) consisting of sphingomyelin (SM), lysophosphatidylinositol (LPI) and triacylglycerol (TG); And
Phosphatidylethanolamine (phosphatidylethanolamine, PE) and hexosyl ceramide (Hexosylceramide, HexCer) comprising a group of lipids consisting of b), a lipid biomarker composition for lung cancer diagnosis.
상기 스핑고미엘린은 d18:1/20:0이고,
상기 리소포스파티딜이노시톨은 16:0 이고,
상기 트리아실글리세롤은 50:1 또는 54:4이고,
상기 포스파티딜에탄올아민은 38:3 또는 18:1p/20:4이고,
상기 헥소실세라마이드는 d18:1/20:0인 것인, 폐암 진단용 지질 바이오마커 조성물.The method of claim 1,
The sphingomyelin is d18:1/20:0,
The lysophosphatidylinositol is 16:0,
The triacylglycerol is 50:1 or 54:4,
The phosphatidylethanolamine is 38:3 or 18:1p/20:4,
The hexosilceramide is d18:1/20:0, which is a lipid biomarker composition for lung cancer diagnosis.
상기 지질은 스핑고미엘린, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤로 이루어진 a) 군의 지질; 및
포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드로 이루어진 b) 군의 지질을 포함하는 단계; 및
2) 상기 환자의 시료에서 상기 a) 군 및 b) 군의 지질의 발현 수준이 정상시료에서의 발현 수준 대비 증가되거나 감소되는 경우 상기 환자를 폐암 환자로 판단하는 것을 특징으로 하는, 폐암 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.1) measuring the expression level of lipids in the patient's sample,
The lipid is a lipid of group a) consisting of sphingomyelin, lysophosphatidylinositol and triacylglycerol; And
Comprising the lipids of the group b) consisting of phosphatidylethanolamine and hexosilceramide; And
2) When the expression level of lipids in the a) group and b) in the patient sample is increased or decreased compared to the expression level in the normal sample, the patient is determined as a lung cancer patient, which is necessary for lung cancer diagnosis. How to provide information.
1) 환자의 시료에서 지질의 발현 수준을 측정하는 단계로서,
상기 스핑고미엘린은 d18:1/20:0이고,
상기 리소포스파티딜이노시톨은 16:0 이고,
상기 트리아실글리세롤은 50:1 또는 54:4이고,
상기 포스파티딜에탄올아민은 38:3 또는 18:1p/20:4이고,
상기 헥소실세라마이드는 d18:1/20:0 인 단계; 및
2) 상기 환자의 시료에서 지질의 발현 수준이 정상 시료에서의 발현 수준 대비 a) 군에서 스핑고미엘린이 감소하며, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤이 증가하고, b) 군에서 포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드가 감소한 경우 폐암 환자인 것으로 판단하는 것을 특징으로 하는, 폐암 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.The method of claim 4,
1) measuring the expression level of lipids in the patient's sample,
The sphingomyelin is d18:1/20:0,
The lysophosphatidylinositol is 16:0,
The triacylglycerol is 50:1 or 54:4,
The phosphatidylethanolamine is 38:3 or 18:1p/20:4,
The hexosilceramide is d18:1/20:0; And
2) The expression level of lipids in the patient's sample was decreased in the group a) compared to the level in the normal sample, increased in lysophosphatidylinositol and triacylglycerol, and in group b) phosphatidylethanolamine and hexylated. A method for providing information necessary for lung cancer diagnosis, characterized in that it is determined that the loss of ceramide is reduced as a lung cancer patient.
상기 시료에서 폐암 억제제 또는 폐암 치료제를 처리하기 전과 처리한 후의 지질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는,
폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 모니터링 방법으로서,
상기 지질은 스핑고미엘린, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤로 이루어진 a) 군의 지질; 및 포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드로 이루어진 b) 군의 지질인 것인, 폐암 억제제 또는 폐암 치료제의 모니터링 방법.Treating a lung cancer patient sample with a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent; And
Comprising the step of measuring the expression level of lipids before and after treatment with a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent in the sample,
As a method of monitoring a lung cancer inhibitor or a lung cancer therapeutic agent,
The lipid is a lipid of group a) consisting of sphingomyelin, lysophosphatidylinositol and triacylglycerol; And phosphatidylethanolamine and hexoxyl ceramide b) group of lipids, lung cancer inhibitor or lung cancer monitoring method.
상기 시료에서 후보물질을 처리하기 전과 처리한 후의 지질의 발현 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 폐암 치료제의 스크리닝 방법으로서,
상기 지질은 스핑고미엘린, 리소포스파티딜이노시톨 및 트리아실글리세롤로 이루어진 a) 군의 지질; 및 포스파티딜에탄올아민 및 헥소실세라마이드로 이루어진 b) 군의 지질인 것인, 폐암 치료제의 스크리닝 방법.Treating a lung cancer patient sample with a candidate substance for treating lung cancer; And
A method for screening for a therapeutic agent for lung cancer, comprising measuring the expression level of lipids before and after treatment of the candidate substance in the sample,
The lipid is a lipid of group a) consisting of sphingomyelin, lysophosphatidylinositol and triacylglycerol; And a lipid of the group b) consisting of phosphatidylethanolamine and hexoxylceramide, a method for screening a therapeutic agent for lung cancer.
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2019
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