KR102109274B1 - Composition for skin regeneration and wound healing containing absolute of digitaria sanguinalis flower - Google Patents
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Abstract
본 발명은 바랭이 꽃으로부터 추출된 앱솔루트를 포함하는 피부재생용 조성물 및 화장료에 관한 것으로, 상기 앱솔루트는 피부세포 수준에서 세포 증식과 이동 및 콜라겐 합성 유도효과를 통하여 우수한 피부 재생, 피부 탄력 증진 및 상처 치유 효과를 제공한다.The present invention relates to a composition and cosmetic composition for skin regeneration, including absolutum extracted from barley flowers, wherein the absolute is excellent in skin regeneration, skin elasticity enhancement and wound healing through the effect of cell proliferation and migration and collagen synthesis at the skin cell level. It provides an effect.
Description
본 발명은 바랭이 꽃(Digitaria sanguinalis)으로부터 추출된 앱솔루트를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치료용 조성물 및 이의 화장료 및 피부 외용제 용도에 대한 것이다.The present invention relates to a composition for the treatment of skin regeneration and wounds containing absolut extracted from the dried flowers ( Digitaria sanguinalis ) as an active ingredient, and a cosmetic and skin external use thereof.
피부는 크게 3개의 층(표피, 진피, 피하지방)으로 구성되어 있으며 외부의 유해한 자극으로 부터 몸을 보호하고, 수분을 유지하며 감각기능을 수행하고 체온을 조절하는 등 다양한 기능을 하는 기관이다. 표피층은 피부의 가장 바깥층에 위치하며 대부분이 각징형성세포로 이루어져 있다. 진피층은 여러 세포외기질 등으로 구성되어 있으며 그 중 콜라겐은 α-chain에 따라 20종 이상이 있으며, 사람의 피부에는 type I, III, IV, V, VI 및 VII 형 콜라겐이 분포하고 있다. 주로 type I 콜라겐은 피부 진피층의 85% 이상을 구성하고, type IV 콜라겐은 기저막(basement membrane)의 주요 구조 단백질로서, type I 및 IV 콜라겐의 합성은 피부의 탄력을 증진시키고, 기저막 형성을 향상시켜 피부 세포들의 부착과 증식이 조절되고, 유해물질을 선택적으로 투과하는 장벽기능의 향상과 표피와 진피의 상호작용 등을 제공하는 것으로 알려졌다. 이로 인해, 피부 진피세포의 이동과 증식, 그리고 콜라겐 합성의 유도는 피부 재생과 상처치유 뿐만 아니라 피부 탄력을 증진시키고 건강한 피부가 유지되도록 도와준다. The skin is composed of three layers (epidermis, dermis, subcutaneous fat) and is an organ that performs various functions such as protecting the body from harmful external stimuli, maintaining moisture, performing sensory functions, and controlling body temperature. The epidermal layer is located on the outermost layer of the skin, and most of it consists of keratinocytes. The dermal layer is composed of several extracellular matrix, and among them, there are more than 20 types of collagen according to α-chain, and type I, III, IV, V, VI and VII type collagen is distributed in human skin. Mainly, type I collagen constitutes more than 85% of the dermal layer of the skin, and type IV collagen is the main structural protein of the basement membrane, and the synthesis of type I and IV collagen enhances skin elasticity and improves basement membrane formation. It is known that the adhesion and proliferation of skin cells are regulated, and the barrier function to selectively penetrate harmful substances and the interaction between the epidermis and the dermis are provided. For this reason, the movement and proliferation of dermal cells of the skin and the induction of collagen synthesis promote skin elasticity as well as skin regeneration and wound healing and help maintain healthy skin.
현대 사회에 생활수준의 향상과 소비자들의 인식 변화 등으로 기존에 사용되어온 합성향료가 인체에 대한 높은 독성과 호르몬 교란 등의 문제가 인식되면서 천연 향료가 다시금 주목을 받고 있다. 특히 천연 향료는 향기뿐만 아니라 항균 및 항염 작용과 아로마 테라피 효과까지 알려지면서 천연물 유래 천연 향료에 대한 연구가 더욱 중요해지고 있다. 천연 향료(香料)는 추출물, 추출법, 용도 및 목적에 따라 다양하게 분류되며, 식물 유래 천연향료는 추출법에 따라 에센셜 오일(essential oil), 엡솔루트(absolute), 콘크리트(concrete) 등으로 분류된다. 식물 유래 천연 향료는 식물의 2차 대사 산물 중 인체에 약리효과를 나타내는 휘발성 화학물질로, 주로 테르펜, 알코올, 알데하이드, 에스테르, 케톤 등의 여러가지 유기화합물로 구성되어 있다. 이러한 천연 향료의 방향성 성분이 피부, 순환계, 후각계를 통해 스트레스 해소, 피로 회복, 근육 이완 등의 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항균작용, 면역 증진, 항알러지 작용 등의 치료효과를 나타내어 오래전부터 질병의 치료와 예방에 활용되어왔을 뿐만 아니라, 식품 향료와 향장품 원료로 사용되고 있다. 최근에 들어 환경오염과 오존층 파괴와 같은 지구 환경의 변화와 스트레스로 인해 피부 건강이 위협을 받고 있는 현대인들에게 부작용을 일으키지 않는 천연 소재가 주목을 받으면서, 천연물 유래 기능성 소재 개발 관련 연구가 요구되고 있다. Natural fragrances are gaining attention once again, as problems such as high toxicity to the human body and hormonal disturbances have been recognized by synthetic fragrances that have been used in the modern society due to improved living standards and changes in consumer perception. In particular, research on natural flavors derived from natural products is becoming more important as natural flavors are known as well as antibacterial and anti-inflammatory and aromatherapy effects. Natural fragrances are classified in various ways according to the extract, extraction method, use and purpose, and natural fragrances derived from plants are classified into essential oils, absolute, concrete, etc. according to the extraction method. Plant-derived natural flavorings are volatile chemicals that show pharmacological effects on the human body among secondary metabolites of plants, and are mainly composed of various organic compounds such as terpene, alcohol, aldehyde, ester, and ketone. The aromatic ingredients of these natural fragrances not only show the effects of stress relief, fatigue recovery, muscle relaxation, etc. through the skin, circulatory system, or olfactory system, but also have therapeutic effects such as antibacterial action, immunity enhancement, and anti-allergic action. It has been used for prevention and prevention, and is used as a raw material for food flavoring and cosmetics. Recently, as natural materials that do not cause side effects have been attracting attention to modern people who are under threat of skin health due to changes in the environment and stress such as environmental pollution and destruction of the ozone layer, research related to the development of functional materials derived from natural products is required. .
바랭이(Digitaria sanguinalis)는 벼과 (Gramineae)에 속하는 한해살이 초본으로 말에게 먹이면 말은 사탕을 먹는 것처럼 좋아한다고 하여 마당으로도 불려진다. 7~8월경에 연한 녹색 또는 자주색 꽃이 핀다. 높이는 40~70 cm이고 잎은 선상피침형이며 줄기의 마디에서 뿌리가 난다. 예로부터 물을 넣고 달여서 복용하면 눈과 귀를 맑아지게 하고 소화력이 증진된다고 알려져있다. 최근 생리활성에 관한 연구는 알팔파(Alfalfa)식물에 대한 타감작용(allelopathy)이 보고되었다. Digitaria sanguinalis is a herbaceous perennial plant belonging to the rice family (Gramineae). Light green or purple flowers bloom from July to August. The height is 40 ~ 70 cm, the leaves are linear lanceolate, and the roots come from the nodes of the stem. It has been known since ancient times that adding water and decoction clears eyes and ears and improves digestion. A recent study on physiological activity has reported allelopathy on alfalfa plants.
상기와 같은 문제를 해소하기 위해, 본 발명은 바랭이 꽃에서 앱솔루트를 추출하여 이의 구성 성분을 규명하고, 이의 피부 탄력증진, 피부재생 및 상처 치유 효능을 확인하여, 본 발명을 완성하였다. In order to solve the above problems, the present invention has been completed by completing the present invention by extracting absolut from the flowers of barley, identifying its constituents, and enhancing its skin elasticity, skin regeneration and wound healing efficacy.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 바랭이(Digitaria sanguinalis) 꽃으로부터 추출된 앱솔루트를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for skin regeneration and wound healing, comprising as an active ingredient an absolute extracted from a flower of Digitaria sanguinalis .
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 앱솔루트는 휘발성 용제를 이용하여 유기용매 추출법에 의해 추출될 수 있으며, 유기용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the absolute may be extracted by an organic solvent extraction method using a volatile solvent, and may be an absolute that removes insoluble wax by extracting the concrete extracted by the organic solvent extraction method with alcohol.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 앱솔루트는 휘발성 유기 화합물을 포함하며, 예를 들어, 리놀렌산 (Linolenic acid), 시토스테논(Sitostenone), 사이클로옥타코산(Cyclooctacosane), 헥사데카노익산(Hexadecanoic acid), 스티그마스테롤(Stigmasterol), 멀티플로라-7,9(11)-dien-3β-ol(Multiflora-7,9(11)-dien-3β-ol), 펜타코산(Pentacosane), 메틸레네비스(Phenol, 2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethyl)-4-methyl-), 스테아르산(Octadecanoic acid), 캄페스테롤(Campesterol), 헵타코산(Heptacosane), 노나데칸(Nonadecane), 스쿠알렌(Squalene), 옥타코산(Octacosane), 1-도코센(1-Docosene), 1-노나데센(1-Nonadecene), 아이코산(Eicosane), 자이카인(Xycaine), 라노스테롤(Lanosterol)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 휘발성 유기 화합물을 포함할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the absolute contains a volatile organic compound, for example, linolenic acid, cytostenone, cyclooctacosane, hexadecanoic acid ), Stigmasterol, Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol (Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol), Pentacosane, Methylenebis ( Phenol, 2,2'-methylenebis [6- (1,1-dimethylethyl) -4-methyl-), Stearic Acid, Campesterol, Heptacosane, Nonadecane , Squalene, Octacosane, 1-Docosene, 1-Nonadecene, Eicosane, Xycaine, Lanosteol It may include one or more volatile organic compounds selected from the group consisting of.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 앱솔루트는 0.1~100 μg/mL의 범위로 포함될 수 있으며, 예를 들어 1~50 μg/mL의 범위로 포함될 수 있다.In one embodiment of the invention, the absolute may be included in the range of 0.1 ~ 100 μg / mL, for example, may be included in the range of 1 ~ 50 μg / mL.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 앱솔루트는 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식 및 이동을 유도할 수 있다. 구체적으로, 상기 앱솔루트는 인체피부 유래 각질형성세포주(HaCat) 및 인체피부 유래 진피세포(CCD986skt)의 증식과 이동 및 콜라겐 합성을 유도할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the absolute may induce proliferation and migration of epidermal keratinocytes and dermal cells. Specifically, the absolute may induce proliferation, migration, and collagen synthesis of human skin-derived keratinocyte cell lines (HaCat) and human skin-derived dermal cells (CCD986skt).
또한, 본 발명은 바랭이 꽃으로부터 추출한 앱솔루트를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a cosmetic composition comprising as an active ingredient the absolute extracted from the flowers of the barley.
또한, 본 발명은 바랭이 꽃으로부터 추출한 앱솔루트를 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a composition for external application for skin comprising absolute as an active ingredient extracted from dried flowers.
본 발명은 바랭이 꽃으로부터 추출된 앱솔루트의 성분을 규명하고, 이의 피부 탄력증진, 피부재생 및 상처 치유 효능을 입증한 것으로, 피부세포 수준에서 세포 증식 및 이동을 유도하여 피부 재생 및 상처 치유에 우수한 효과를 갖는다.The present invention is to characterize the components of the absolute extracted from the flowers of barang, and demonstrate its skin elasticity enhancement, skin regeneration and wound healing efficacy, and induces cell proliferation and migration at the skin cell level, thereby providing excellent effects on skin regeneration and wound healing Have
도 1은 본 발명의 일 실시예에 있어서 바랭이 꽃으로부터 앱솔루트(absolute)를 추출하는 과정을 나타내는 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 있어서 바랭이 꽃의 앱솔루트가 피부 각질형성세포(A) 및 진피세포(B)의 증식에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 있어서 바랭이 꽃의 앱솔루트가 피부 각질형성세포(A) 및 진피세포(B)의 이동에 미치는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 있어서 바랭이 꽃의 앱솔루트의 피부 각질형성세포(A) 및 진피세포(B)에서의 콜라겐 type I 및 IV 합성에 미치는 효과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 있어서 바랭이 꽃의 앱솔루트의 (A) 진피세포에서 콜라젠 맹아(sprouting) 자연성장(out growth)에 미치는 효과를 나타낸 이미지 및 (B) 콜라젠 맹아(sprouting) 자연성장(out growth)에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.
도 6은 일 실시예에 있어서 바랭이 꽃의 앱솔루트의 (A) 진피세포 내 세포외 신호조절 키나제(Erk1/2) 및 세포내 세린/트레오닌 단백질 키나제(p38)의 인산화에 미치는 영향을 나타낸 이미지, (B) 진피세포 내 세포외 신호 조절 키나제(Erk1/2)의 인산화에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프 및 (C) 진피세포 내 세린/트레오닌 단백질 키나제(p38)의 인산화에 미치는 결과를 정량화하여 나타낸 그래프이다.1 is a flow chart showing the process of extracting the absolute (absolute) from the flowers of the barley in one embodiment of the present invention.
Figure 2 is a graph showing the effect of the absolute color of flowers in the basal flower on the proliferation of skin keratinocytes (A) and dermal cells (B) in one embodiment of the present invention.
Figure 3 is a graph showing the effect of the absolute color of flowers in the basal flower on the movement of skin keratinocytes (A) and dermal cells (B) in one embodiment of the present invention.
FIG. 4 is a graph quantifying the effect of collagen type I and IV synthesis on skin keratinocytes (A) and dermal cells (B) of Absolut of Abalone flowers in one embodiment of the present invention.
Figure 5 is an image showing the effect on the natural growth (out) growth of collagen sprouting (A) in the dermal cells of the Absolut (A) of the barley flower in one embodiment of the present invention and (B) collagen sprouting (sprouting) natural growth It is a graph showing quantified results on (out growth).
FIG. 6 is an image showing the effect on the phosphorylation of Absolute (A) extracellular signal regulation kinase (Erk1 / 2) and intracellular serine / threonine protein kinase (p38) in dermal cells in one embodiment, ( B) A graph showing the result of quantifying the phosphorylation of the extracellular signal regulation kinase (Erk1 / 2) in the dermal cell and (C) a graph showing the result of quantifying the effect on the phosphorylation of the serine / threonine protein kinase (p38) in the dermal cell to be.
이하 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예들을 상세히 설명한다. 이하의 설명에 있어, 당업자에게 주지 저명한 기술에 대해서는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 용어(terminology)들은 본 발명의 바람직한 실시예를 적절히 표현하기 위해 사용된 용어들로서, 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 본 발명이 속하는 분야의 관례 등에 따라 달라질 수 있다.Hereinafter, exemplary embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings. In the following description, detailed descriptions of techniques well known to those skilled in the art can be omitted. In addition, in describing the present invention, when it is determined that detailed descriptions of related known functions or configurations may unnecessarily obscure the subject matter of the present invention, detailed descriptions thereof may be omitted. In addition, terms used in the present specification (terminology) are terms used to properly represent a preferred embodiment of the present invention, which may vary according to a user, an operator's intention, or a custom in a field to which the present invention pertains.
따라서 본 용어들에 대한 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.Therefore, the definition of these terms should be made based on the contents throughout this specification. Throughout the specification, when a part “includes” a certain component, it means that the component may further include other components, not to exclude other components, unless otherwise stated.
본 발명은 바랭이 꽃으로부터 추출된 앱솔루트를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처 치유용 조성물, 이를 포함하는 화장료 조성물 및 피부 외용제 조성물에 대한 것이다The present invention relates to a composition for skin regeneration and wound healing, comprising an absolute extracted from a barley flower as an active ingredient, a cosmetic composition comprising the same, and an external composition for skin.
상기 앱솔루트는 건조하지 않은 바랭이 꽃으로부터 얻는 것이 바람직하며, 유기용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트(concrete)를 알코올로 추출하여 불용성 왁스(wax)를 제거한 앱솔루트(absolute)일 수 있다.The absolute is preferably obtained from dried dried flowers, and may be an absolute which removes insoluble wax by extracting concrete extracted with an organic solvent extraction method with alcohol.
구체적으로, 상기 앱솔루트는 바랭이 꽃을 휘발성 용제를 이용한 유기용매 추출법으로 추출하여 콘크리트(concrete)를 얻는 단계; 및 상기 얻은 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스(wax)를 제거하고 앱솔루트(absolute)를 얻는 단계에 의해 추출될 수 있다.Specifically, the absolute is the step of obtaining a concrete (concrete) by extracting the barley flower by an organic solvent extraction method using a volatile solvent; And extracting the obtained concrete with alcohol to remove insoluble wax and obtaining an absolute.
일 예로서, 상기 앱솔루트는 도 1의 흐름도와 같이 추출할 수 있다. 우선, 건조하지 않은 바랭이 꽃을 헥산(n-hexane)에 침전시킨 뒤, 얻은 추출물을 회전식 증발기(rotary evaporation)를 이용하여 농축시켜서 콘크리트를 얻은 다음, 상기 얻은 콘크리트에 에틸알코올(ethyl alcohol)을 넣고 -20℃에서 12시간 동안 보관하여 용해시킨 후, 진공 냉각 필터(vacuum cooling filtration) 및 회전식 증발기를 이용하여 분리/정제함으로써, 본 발명에 따른 바랭이 꽃 앱솔루트를 제조할 수 있다.As an example, the absolute may be extracted as shown in the flowchart of FIG. 1. First, after drying the dried flowers, precipitated in hexane (n-hexane), the obtained extract is concentrated using a rotary evaporator to obtain concrete, and then ethyl alcohol is added to the obtained concrete. After storing and dissolving at -20 ° C for 12 hours, separation / purification using a vacuum cooling filtration and a rotary evaporator can be used to prepare a barley flower absolute according to the present invention.
상기 유기용매 추출법과 추출물로부터 앱솔루트를 분리하는 방법은 이 기술 분야에서 보통의 지식을 가진 자가 변형할 수 있는 모든 방법을 포함하는 것이 가능하다.The organic solvent extraction method and the method of separating absolute from the extract may include all methods that can be modified by those skilled in the art.
바랭이 꽃에서 추출한 상기 앱솔루트는 다양한 생리활성을 나타내는 성분을 함유하고 있는데, 보다 구체적으로 리놀렌산 (Linolenic acid), 시토스테논(Sitostenone), 사이클로옥타코산(Cyclooctacosane), 헥사데카노익산(Hexadecanoic acid), 스티그마스테롤(Stigmasterol), 멀티플로라-7,9(11)-dien-3β-ol(Multiflora-7,9(11)-dien-3β-ol), 펜타코산(Pentacosane), 메틸레네비스(Phenol, 2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethyl)-4-methyl-), 스테아르산(Octadecanoic acid), 캄페스테롤(Campesterol), 헵타코산(Heptacosane), 노나데칸(Nonadecane), 스쿠알렌(Squalene), 옥타코산(Octacosane), 1-도코센(1-Docosene), 1-노나데센(1-Nonadecene), 아이코산(Eicosane), 자이카인(Xycaine), 라노스테롤(Lanosterol)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 휘발성 유기 화합물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The absolut extracted from the dried flowers contains various physiologically active ingredients, more specifically, linolenic acid, cytostenone, cyclooctacosane, hexadecanoic acid, Stigmasterol, Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol (Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol), Pentacosane, Methylenebis (Phenol, 2,2'-methylenebis [6- (1,1-dimethylethyl) -4-methyl-), Stearic Acid, Campesterol, Heptacosane, Nonadecane, Squalene Group consisting of (Squalene), Octacosane, 1-Docosene, 1-Nonadecene, Eicosane, Xycaine, Lanosterol It may include one or more volatile organic compounds selected from, but is not limited thereto.
또한, 이들 성분의 함량은 구체적으로 리놀렌산 (Linolenic acid) 56~57 중량%, 시토스테논(Sitostenone) 7~8 중량%, 사이클로옥타코산(Cyclooctacosane) 6~7 중량%, 헥사데카노익산(Hexadecanoic acid) 4~5 중량%, 스티그마스테롤(Stigmasterol) 4~5 중량%, 멀티플로라-7,9(11)-dien-3β-ol(Multiflora-7,9(11)-dien-3β-ol) 2~3 중량%, 펜타코산(Pentacosane) 2~3 중량%, 메틸레네비스(Phenol, 2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethyl)-4-methyl-) 1~2 중량%, 스테아르산(Octadecanoic acid) 1~2 중량%, 캄페스테롤(Campesterol) 1~2 중량%, 헵타코산(Heptacosane) 1~2 중량%, 노나데칸(Nonadecane) 1~2 중량%, 스쿠알렌(Squalene) 1~2 중량%, 옥타코산(Octacosane) 1~2 중량%, 1-도코센(1-Docosene) 1~2 중량%, 1-노나데센(1-Nonadecene) 1~2 중량%, 아이코산(Eicosane) 1~2 중량%, 자이카인(Xycaine) 0~1 중량%, 라노스테롤(Lanosterol) 0~1 중량% 범위 안에서 포함될 수 있다.In addition, the content of these components is specifically linolenic acid (Linolenic acid) 56-57% by weight, Cytostenone (Sitostenone) 7-8% by weight, cyclooctacoic acid (Cyclooctacosane) 6-7% by weight, hexadecanoic acid (Hexadecanoic) acid) 4-5% by weight, Stigmasterol 4-5% by weight, Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol (Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol) 2-3% by weight, Pentacosane 2-3% by weight, Phenyl, 2,2'-methylenebis [6- (1,1-dimethylethyl) -4-methyl-) 1-2% by weight , Stearic acid (Octadecanoic acid) 1 to 2% by weight, Campesterol (1 to 2% by weight), Heptacosane (Heptacosane) to 1 to 2% by weight, Nonadecan (Nonadecane) 1 to 2% by weight, Squalene (Squalene) ) 1 ~ 2% by weight, Octacosane 1 ~ 2% by weight, 1-
본 발명에서는 바랭이에서 추출한 앱솔루트가 상기에서 기술한 생리활성을 나타내는 성분들을 포함하고 있고, 이러한 성분들에 의해 표피 각질형성세포의 증식과 이동의 효과를(도 2, 3 및 5 참조) 나타낸다는 것을 규명하였다. 또한, 바랭이 꽃에서 추출한 앱솔루트는 진피세포 내 세린/트레오닌 키나제(p38) 및 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 인산화 과정 또는 신호전달 과정을 유도할 수 있다.In the present invention, the absolute extracted from the barley contains the components exhibiting the physiological activity described above, and shows the effect of proliferation and migration of epidermal keratinocytes by these components (see FIGS. 2, 3 and 5). Clarified. In addition, the absolute extracted from the flowers of barang can induce at least one phosphorylation process or signaling process selected from the group consisting of serine / threonine kinase (p38) and extracellular signal regulation kinase (ERK1 / 2) in dermal cells.
이에 따라 본 발명에 따른 바랭이 꽃에서 추출한 앱솔루트를 유효성분으로 포함하는 피부 재생 및 상처치유 조성물로 사용될 수 있으며, 약학적으로 유효한 양의 바랭이에서 추출한 앱솔루트를 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다.Accordingly, it can be used as a skin regeneration and wound healing composition comprising the absolute extracted from the flowers of barang according to the present invention as an active ingredient, and contains alone or one or more pharmaceutically acceptable absolutes extracted from the pharmaceutically effective amount of barang. Carriers, excipients or diluents.
본 발명의 상기 앱솔루트를 피부재생 및 상처치유 조성물로 사용하는 경우 앱솔루트는 0.1 ~ 100 μg/mL의 농도로 사용할 수 있다. 바랭이 꽃 앱솔루트를 0.1 μg/mL 이하의 농도로 사용할 경우에는 표피 각질형성세포의 증식과 이동의 효과가 미미하며, 앱솔루트를 100 μg/mL 이상의 농도로 사용할 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않고 오히려 감소하므로 바람직하지 않다.When the absolute of the present invention is used as a composition for skin regeneration and wound healing, absolute may be used at a concentration of 0.1 to 100 μg / mL. The effect of proliferation and migration of epidermal keratinocytes is insignificant when Absolute Absolute is used at a concentration of 0.1 μg / mL or less, and when Absolute is used at a concentration of 100 μg / mL or more, a marked increase in the effect of content increases. It is not desirable because it does not appear and decreases.
상기에서 "약학적으로 유효한 양"이란 상기 생리활성성분이 동물 또는 사람에게 투여되어 목적하는 생리학적 또는 약리학적 활성을 나타내기에 충분한 양을 말한다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.In the above, "a pharmacologically effective amount" refers to an amount sufficient for the physiologically active ingredient to be administered to an animal or human to exhibit a desired physiological or pharmacological activity. However, the pharmaceutically effective amount may be appropriately changed according to the severity of symptoms, the age of the patient, weight, health status, sex, administration route, and treatment period.
또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.In addition, "pharmaceutically acceptable" in the above refers to a physiologically acceptable, when administered to a human, usually does not cause an allergic reaction such as gastrointestinal disorder, dizziness, or a similar reaction. Examples of the carrier, excipients and diluents include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In addition, fillers, anti-coagulants, lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers and preservatives may be further included.
또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있으며, 경구 또는 비경구 투여를 위한 다양한 형태로 제형화 될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캡슐, 멸균 주사용액, 멸균 분말, 연고, 로션, 크림, 고약, 페이스트 등의 형태일 수 있다.In addition, the compositions of the present invention can be formulated using methods known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal, and can be formulated for oral or parenteral administration. It can be formulated in form. The formulation may be in the form of a powder, granule, tablet, emulsion, syrup, aerosol, soft or hard gelatin capsule, sterile injectable solution, sterile powder, ointment, lotion, cream, plaster, paste, and the like.
본 발명에 따른 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 목적하는 효과를 상승시킬 수 있는 공지의 화합물과도 병행하여 투여할 수 있다.The composition according to the present invention can be administered through several routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular, and the dosage of the active ingredient is a number of factors such as the route of administration, the patient's age, gender, weight and severity of the patient. It can be appropriately selected according to. In addition, the composition of the present invention can be administered in parallel with a known compound that can enhance the desired effect.
나아가 본 발명에 따른 항비만 조성물은 상기 기술한 바와 같이 약학적 조성물로 사용할 수 있을 뿐만 아니라, 건강기능식품으로도 사용할 수 있다. 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.Furthermore, the anti-obesity composition according to the present invention can be used not only as a pharmaceutical composition as described above, but also as a health functional food. For example, it can be easily utilized as a main raw material, an auxiliary raw material, a food additive, a functional food or beverage.
상기 “식품”이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다.The "food" refers to a natural product or a processed product that contains one or more nutrients, and preferably means a state that can be directly eaten through a certain processing process, and in a general sense, food It includes food additives, functional foods and beverages.
상기 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합체, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 특수영양식품(예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스낵류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.Foods to which the food composition can be added include, for example, various foods, beverages, gums, teas, vitamin complexes, and functional foods. In addition, special nutritional foods (e.g., dairy products, English, baby food, etc.), processed meat products, fish meat products, tofu, jelly, noodles (e.g., ramen, noodles, etc.), breads, health supplements, seasoned foods (e.g. soy sauce) , Miso, red pepper paste, mixed sauce, etc.), sauces, confectionery (e.g. snacks), candy, chocolate, gum, ice cream, dairy products (e.g. fermented milk, cheese, etc.), other processed foods, kimchi, pickled foods (various kimchis) , Pickles, etc.), beverages (eg, fruit drinks, vegetable drinks, soy milk, fermented drinks, etc.), natural seasonings (eg, ramen soup, etc.). The food, beverage or food additive may be prepared by a conventional manufacturing method.
또한, 상기 “기능성 식품”또는 “건강기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물 공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.In addition, the term “functional food” or “health functional food” refers to a food group or a living body having a food composition that provides added value to act and express the function of the food for a specific purpose by using physical, biochemical, or biotechnical techniques. Refers to foods designed and processed to sufficiently express the body's regulation functions for defense rhythm control, disease prevention and recovery, etc. Specifically, it may be a health functional food. The functional food may include a food-acceptable food supplement additive, and may further include suitable carriers, excipients, and diluents commonly used in the production of functional foods.
상기 건강보조식품의 종류로는 이에 제한되지는 않으나, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 형태 일 수 있다.The type of the dietary supplement is not limited thereto, but may be in the form of powder, granule, tablet, capsule or beverage.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예들은 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Advantages and features of the present invention, and methods for achieving them will be clarified with reference to embodiments described below in detail. Hereinafter, the present invention will be described in detail by examples. However, these examples are intended to illustrate the present invention in detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
[실시예][Example]
실시예 1: 바랭이 꽃 앱솔루트의 제조Example 1 Preparation of Basil Flower Absolute
도 1에 도시된 공정에 따라 바랭이 꽃 앱솔루트를 제조하였다.According to the process shown in Figure 1 to prepare a flower Absolut.
본 실시예에서 바랭이 꽃은 하나로농원(해남, 한국) 실습지 인근에서 자생된 바랭이 꽃을 채취하여 사용하였다. 건조되지 않은 바랭이 꽃 3 kg을 유기용매 추출법을 이용하여 추출하였다.In this example, the dried flowers were collected and used in the vicinity of the Hanaro Farm (Haenam, Korea) practice field. 3 kg of dried dried flowers were extracted using an organic solvent extraction method.
즉, 건조하지 않은 바랭이 꽃을 헥산(n-hexane)에 침전시켰고, 이렇게 얻은 침전물을 회전식 증발기(rotary evaporation)에서 증발시켜서 농축시킴으로서 고형의 콘크리트(concrete)를 획득하였다. 그 다음, 상기 콘크리트를 에틸알코올(ethyl alcohol)를 넣어서 용해시킨 후, 진공 냉각 필터(vacuum cooling filtration)를 거쳐서 불용성 왁스(wax)를 제거하였으며, 다시 회전식 증발기에서 증발시켜서 분리/정제함으로써 바랭이 꽃 앱솔루트를 제조하였다. 그리고 상기 제조한 바랭이 꽃 앱솔루트는 -80℃의 저온고에서 보관하였다.That is, the dried dried flowers were precipitated in hexane (n-hexane), and the obtained precipitate was concentrated by evaporation in a rotary evaporation to obtain solid concrete. Then, after dissolving the concrete by adding ethyl alcohol, the insoluble wax was removed through a vacuum cooling filtration, and then evaporated in a rotary evaporator to separate / purify the barley flower absolute. Was prepared. And the prepared flowers of the dried flowers were stored in a low-temperature high temperature of -80 ℃.
실시예 2. 바랭이 꽃 앱솔루트의 성분 분석Example 2. Component analysis of barley flower absolute
바랭이 꽃 앱솔루트의 성분 분석은 KBSI(Korea Basic Science Institute, Seoul Center)에 의뢰하였다. 가스 크로마토그래피/질량분석계(6890N GC/5975i MS, Agilent, USA)를 사용하였고, GC/MS의 컬럼(column)은 DB5-MS (30 m×50 μm, 0.25 μm)를 사용하였으며, 캐리어 가스(carrier gas)는 헬륨을 사용하여 1 mL/분으로 흐르게 하여 분석하였다. 오븐의 온도는 40℃-2℃/분-230℃-5℃/분-300℃(5분)으로 유지하였으며, injection의 온도는 280℃에서 분석하였다. 또한 Interface의 온도는 300℃, ion source의 온도는 230℃, analyzer의 온도는 150℃에서 분석하였으며, Mass range는 40~800 m/z에서 분석하였다.The analysis of the ingredients of the barley flower absolute was commissioned by KBSI (Korea Basic Science Institute, Seoul Center). A gas chromatography / mass spectrometer (6890N GC / 5975i MS, Agilent, USA) was used, and a column of GC / MS was DB5-MS (30 m × 50 μm, 0.25 μm), and carrier gas ( carrier gas) was analyzed by flowing at 1 mL / min using helium. The temperature of the oven was maintained at 40 ° C-2 ° C / min-230 ° C-5 ° C / min-300 ° C (5 minutes), and the injection temperature was analyzed at 280 ° C. In addition, the interface temperature was analyzed at 300 ℃, the ion source temperature at 230 ℃, and the analyzer temperature at 150 ℃, and the mass range was analyzed at 40 ~ 800 m / z.
바랭이 꽃 앱솔루트 성분의 확인은 휘발성분의 지체시간(retention indices, RI)과 표준물질의 지체시간과 일치하거나 휘발물질의 질량 스펙트럼과 Wiley 7Nist 05 library의 질량 스펙트럼을 비교하여 물질을 확인하였다. RI는 C6 ~ C24 (nalkane)를 이용하여 시료와 동일 조건에서 결정하였다. 그 결과, 총 19개의 성분으로 구성되어 있음을 확인할 수 있었으며, 리놀렌산 (Linolenic acid), 시토스테논(Sitostenone), 사이클로옥타코산(Cyclooctacosane), 헥사데카노익산(Hexadecanoic acid), 스티그마스테롤(Stigmasterol), 멀티플로라-7,9(11)-dien-3β-ol(Multiflora-7,9(11)-dien-3β-ol), 펜타코산(Pentacosane), 메틸레네비스(Phenol, 2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethyl)-4-methyl-), 스테아르산(Octadecanoic acid), 캄페스테롤(Campesterol), 헵타코산(Heptacosane), 노나데칸(Nonadecane), 스쿠알렌(Squalene), 옥타코산(Octacosane), 1-도코센(1-Docosene), 1-노나데센(1-Nonadecene), 아이코산(Eicosane), 자이카인(Xycaine), 라노스테롤(Lanosterol) 순으로 높은 함량을 나타내었다.(표 1).Confirmation of the component of the flower Absolute was confirmed by comparing the retention time of volatile components (retention indices, RI) and the retention time of standard materials or by comparing the mass spectrum of volatiles with the mass spectrum of the Wiley 7Nist 05 library. RI was determined under the same conditions as the samples using C 6 to C 24 (nalkane). As a result, it was confirmed that it was composed of a total of 19 components, linolenic acid, cytostenone, cyclooctacosane, hexadecanoic acid, and stigmasterol. , Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol (Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol), Pentacosane, Methylenebis (Phenol, 2,2'- methylenebis [6- (1,1-dimethylethyl) -4-methyl-), stearic acid, campesterol, heptacosane, nonadecane, squalene, octane Octacosane, 1-dococene (1-Docosene), 1-nonadecene (1-Nonadecene), eicosane (Xycaine), lanosterol (Lanosterol) showed the highest content in this order. (Table 1).
실시예 3. 바랭이 꽃 앱솔루트가 피부 각질형성세포 및 진피세포의 증식에 미치는 효과Example 3. Effect of barley flower absolute on the proliferation of skin keratinocytes and dermal cells
상기 실시예 1에서 얻은 바랭이 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 및 진피세포 증식에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 조사하였다.In order to confirm the effect of the barley flower absolut obtained in Example 1 on epidermal keratinocytes and dermal cell proliferation, it was investigated as follows.
사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실시예에 활용하였다. 표피 각질형성세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포수 3 X 103 cells/100 μL/well이 되도록 주입하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 부착시켰다.Human skin-derived epidermal keratinocytes (HaCat) were cultured using DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and utilized in the examples of the present invention. Epidermal keratinocytes were injected into a 96 well microtiter plate so that the number of cells per well was 3
바랭이 꽃 앱솔루트 0.1 ~ 100 μg/mL 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하여 36시간 동안 배양시켰다. Ez-cytox와 DMEM를 1:1로 혼합하여 각 well 당 20 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시켰다. ELISA plate reader(Synerge2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정 후, 백분율로 환산하여 바랭이 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포 증식에 대한 결과를 확보하였다. Basin flower absolute was treated with 100 μL in each well at a concentration of 0.1 to 100 μg / mL to incubate for 36 hours. Ez-cytox and DMEM were mixed 1: 1 and treated with 20 μL per well, and reacted for 30 minutes in an incubator. After measuring the absorbance at 450 nm using an ELISA plate reader (Synerge2, BioTek, USA), it was converted to a percentage to secure the results for epidermal keratinocyte proliferation of barley flower absolute.
사람 피부 유래 진피세포 (CCD986skt)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 RPMI1940 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실험예에 활용하였다. 진피세포를 96 well microtiter plate에 각 well 당 세포수 3 X 103 cells/100 μL/well이 되도록 주입하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 부착시켰다.Human skin-derived dermal cells (CCD986skt) were cultured using RPMI1940 medium containing 10% fetal bovine serum and utilized in experimental examples of the present invention. Dermal cells were injected into a 96-well microtiter plate so that the number of cells per well was 3
바랭이 꽃 앱솔루트 0.1 ~ 100 μg/mL 농도로 각 well에 100 μL씩 처리하여 36시간 동안 배양시켰다. Ez-cytox와 RPMI1640를 1:1로 혼합하여 각 well 당 20 μL씩 처리한 후 배양기에서 30분간 반응시켰다. ELISA plate reader(Synerge2, BioTek, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정 후, 백분율로 환산하여 바랭이 꽃 앱솔루트의 피부 진피세포 증식에 대한 결과를 확보하였다. 도 3A 및 3B는 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 바랭이 꽃 앱솔루트의 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식 효과를 나타낸 그래프이다. 여기서, 음성 대조군은 바랭이 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래에 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되고 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.Basin flower absolute was treated with 100 μL in each well at a concentration of 0.1 to 100 μg / mL to incubate for 36 hours. Ez-cytox and RPMI1640 were mixed 1: 1 and treated with 20 μL per well, and reacted for 30 minutes in an incubator. After measuring the absorbance at 450 nm using an ELISA plate reader (Synerge2, BioTek, USA), it was converted to a percentage to secure the results for skin dermal cell proliferation of barley flower absolute. 3A and 3B are graphs showing the proliferative effect of epidermal keratinocytes and dermal cells of barley flower absolute extracted by Example 1 of the present invention. Here, the negative control is not using the barley flower absolute, and the positive control is using epidermal growth factor (
그 결과, 도 2A 및 2B에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 바랭이 꽃 앱솔루트는 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식을 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다.As a result, as shown in FIGS. 2A and 2B, it was shown that the barley flower absolute according to the present invention induces the proliferation of epidermal keratinocytes and dermal cells in a concentration-dependent manner.
즉, 표피성장인자(50 ng/mL)에 의한 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식은 각각 169.87±1.91%, 117.79±3.58%, 유도가 되었으며, 음성 대조군과 비교하여 바랭이 꽃 앱솔루트 1 μg/mL 농도에서 각각 103.90±5.32%, 102.49±2.52%,의 증식 유도율을 나타내었고, 100 μg/mL의 농도에서 각각 185.32±5.13%, 127.20±4.46%,의 증식 유도율을 나타내어, 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다. That is, the proliferation of epidermal keratinocytes and dermal cells by epidermal growth factor (50 ng / mL) was induced 169.87 ± 1.91%, 117.79 ± 3.58%, respectively, and compared to the negative control group, baransis flower absolute 1 μg / mL The concentrations showed 103.90 ± 5.32% and 102.49 ± 2.52%, respectively, and the concentrations of 100 μg / mL showed 185.32 ± 5.13%, 127.20 ± 4.46%, respectively, and epidermal keratinocytes. And it has been shown to effectively induce proliferation of dermal cells.
실시예 4. 바랭이 꽃 앱솔루트가 피부 각질형성세포 및 진피세포 이동에 미치는 효과Example 4. Effect of barley flower absolut on skin keratinocytes and dermal cell migration
상기 실시예 1에서 얻은 바랭이 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 및 진피세포 이동에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 실험하였다.In order to confirm the effect of barley flower absolute obtained in Example 1 on epidermal keratinocytes and dermal cell migration, experiments were conducted as follows.
사람 피부 유래 표피 각질형성세포(HaCat)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 DMEM 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실시예에 활용하였다. 48 well Boyden microchemotaxis chamber를 사용하여 표피 각질형성세포의 이동률을 조사하였으며, 먼저 lower chamber에 바랭이 꽃 앱솔루트를 각각 0.1 ~ 100 μg/mL 의 농도를 처리하고, type I 콜라겐 코팅이 된 8 μm pore의 polycarbonate membrane을 올려 주었다. 이후, upper chamber에 표피 각질형성세포를 well당 5×104 cell/50μL씩 처리하였다. Chamber를 37℃ 배양기에서 3시간 30분 배양시킨 후, membrane을 Diff-Quick solution으로 염색 및 고정하였다. Human skin-derived epidermal keratinocytes (HaCat) were cultured using DMEM medium containing 10% fetal bovine serum and utilized in the examples of the present invention. The mobility of epidermal keratinocytes was investigated using a 48 well Boyden microchemotaxis chamber. First, the concentration of 0.1 to 100 μg / mL in each of the flowers in the lower chamber was treated in the lower chamber, and polycarbonate of 8 μm pore coated with type I collagen was applied. The membrane was loaded. Subsequently, epidermal keratinocytes were treated in the upper chamber at 5 × 10 4 cells / 50 μL per well. After incubating the chamber for 3 hours and 30 minutes in a 37 ° C incubator, the membrane was stained and fixed with a Diff-Quick solution.
Membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어, 백분율로 환산하여 바랭이 꽃 앱솔루트의 피부 표피 각질형성세포 이동에 대한 결과를 확보하였다.The number of cells that passed through the membrane was counted and converted to a percentage to secure the results of the movement of the skin epidermal keratinocytes of the flower Absolute.
사람 피부 유래 진피세포(CCD986sk)를 10%의 우태아 혈청(fetal bovine serum)이 포함된 RPMI1640 배지를 이용하여 배양하고 본 발명의 실시예에 활용하였다. 48 well Boyden microchemotaxis chamber를 사용하여 진피세포의 이동률을 조사하였으며, 먼저 lower chamber에 바랭이 꽃 앱솔루트를 각각 0.1 ~ 100 μg/mL 의 농도를 처리하고, type I 콜라겐 코팅이 된 8 μm pore의 polycarbonate membrane을 올려 주었다. 이후, upper chamber에 진피세포를 well당 5×104 cell/50μL씩 처리하였다. Chamber를 37℃ 배양기에서 90분 배양시킨 후, membrane을 Diff-Quick solution으로 염색 및 고정하였다. Human skin-derived dermal cells (CCD986sk) were cultured using RPMI1640 medium containing 10% fetal bovine serum and utilized in the examples of the present invention. The flow rate of dermal cells was investigated using a 48 well Boyden microchemotaxis chamber. First, the concentration of 0.1 to 100 μg / mL in basal flower absolute was treated in the lower chamber, and a polycarbonate membrane of 8 μm pore coated with type I collagen was applied. I uploaded it. Subsequently, dermal cells were treated in the upper chamber at 5 × 10 4 cells / 50 μL per well. After incubating the chamber in a 37 ° C incubator for 90 minutes, the membrane was stained and fixed with a Diff-Quick solution.
Membrane을 통과하여 이동한 세포의 수를 세어, 백분율로 환산하여 바랭이 꽃 앱솔루트의 피부 진피세포 이동에 대한 결과를 확보하였다.The number of cells that passed through the membrane was counted and converted to a percentage to obtain the results for the skin dermal cell migration of the dried flowers Absolute.
도 3A 및 3B는 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 바랭이 꽃 앱솔루트의 피부 각질형성세포 및 진피세포의 이동효과를 나타내는 그래프이다. 음성 대조군은 바랭이 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래에 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 5 ng/mL)를 이용한 것이다.3A and 3B are graphs showing the migration effect of cutaneous keratinocytes and dermal cells of the dried flowers Absolute extracted by Example 1 of the present invention. Negative control was not used for the flower Absolute, and positive control was used for epidermal growth factor (EGF 5 ng / mL), which is conventionally used for wound healing and / or skin regeneration.
그 결과, 도 3B에 나타난 바와 같이, 본 발명의 실시예 1에 따른 바랭이 꽃 앱솔루트는 진피세포의 이동을 농도 의존적으로 유도하였으며, 특히, 바랭이 꽃 앱솔루트 1 μg/mL의 농도에서 104.92±1.78%의 이동 유도율을 나타내었고, 100 μg/mL의 농도에서 156.83±9.07%의 최대 이동률을 나타내어, 바랭이 꽃 앱솔루트가 진피세포의 이동을 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다.As a result, as shown in FIG. 3B, the basal flower absolut according to Example 1 of the present invention induced concentration of dermal cells in a concentration-dependent manner, and in particular, it was 104.92 ± 1.78% at a concentration of 1 μg / mL of barracus flower absolute. It showed the rate of induction of migration, and the maximum rate of migration of 156.83 ± 9.07% at a concentration of 100 μg / mL, so that it was found that barley flower absolute effectively induces the movement of dermal cells.
실시예 5. 바랭이 꽃 앱솔루트가 피부 각질형성세포 및 진피세포의 콜라겐 TypeⅠ또는 Ⅳ 합성과 분비에 미치는 영향 조사Example 5. Investigation of the effects of barley flower absolute on collagen Type I or IV synthesis and secretion of skin keratinocytes and dermal cells
상기 실시예 1에 의해 얻은 바랭이 꽃 앱솔루트가 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식과 이동에 필요한 ECM 구성 성분인 콜라겐 TypeⅠ,Ⅳ 합성에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 하기와 같이 실험하였다.In order to confirm the effect on the synthesis of collagen Type I, IV, which is an ECM component required for the proliferation and migration of epidermal keratinocytes and dermal cells, the barley flower absolute obtained in Example 1 was tested as follows.
96 well microtiter plate에 monoclonal anti-collagen Ⅰ 또는 Ⅳ Ab, (2 μg/well/PBS)를 주입 후 12시간 동안 RT에서 코팅하였다. Blocking buffer로 1시간 동안 blocking 후, 샘플을 well당 100μL 씩 처리하여 RT에서 90분 동안 반응시켰다. 샘플은 바랭이 앱솔루트를 처리하지 않은 표피 각질형성세포의 배양액(CM)과 바랭이 앱솔루트 10 μg/mL 농도로 처리된 표피 각질형성세포의 배양액(CM)과 바랭이 앱솔루트 100 μg/mL 농도로 처리된 표피 각질형성세포의 배양액(CM)을 처리하였다. 그 후, polyclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 각 well에 처리하여 RT에서 90분 동안 반응시킨 다음, avidin-HRP를 각 well에 처리하여 RT에서 60분 동안 반응시켰다. Supersignal ELISA pico chemiluminescent substrate를 각 well 당 100μL 씩 주입하여 10분 동안 반응시킨 후, ELISA platereader를 이용하여 luminescence 정도를 측정하였고, 바랭이 앱솔루트의 표피 각질형성세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성과 분비에 대한 결과를 확보하였다(도 4A).Monoclonal anti-collagen I or IV Ab, (2 μg / well / PBS) was injected into a 96 well microtiter plate and coated at RT for 12 hours. After blocking with blocking buffer for 1 hour, the sample was processed at 100 μL per well and reacted at RT for 90 min. Samples were cultured (CM) of epidermal keratinocytes that were not treated with basal absolut and cultured (CM) of epidermal keratinocytes treated with basal absolute 10 μg / mL and epidermal keratin treated with basal absolute 100 μg / mL. Culture medium (CM) of forming cells was treated. Thereafter, polyclonal anti-collagen I or IV Ab was treated in each well to react for 90 minutes at RT, and then avidin-HRP was treated for each well to react for 60 minutes at RT. Supersignal ELISA pico chemiluminescent substrate was injected for 100 μL per well and reacted for 10 minutes, and then the luminescence degree was measured using an ELISA platereader. Results for type I or IV collagen synthesis and secretion of epidermal keratinocytes of BABY Absolute Was secured (FIG. 4A).
96 well microtiter plate에 monoclonal anti-collagen Ⅰ 또는 Ⅳ Ab, (2 μg/well/PBS)를 주입 후 12시간 동안 RT에서 코팅하였다. Blocking buffer로 1시간 동안 blocking 후, 샘플을 well당 100μL 씩 처리하여 RT에서 90분 동안 반응시켰다. 샘플은 바랭이 앱솔루트를 처리하지 않은 진피세포의 배양액(CM)과 바랭이 앱솔루트 10 μg/mL 농도로 처리된 진피세포의 배양액(CM)과 바랭이 앱솔루트 100 μg/mL 농도로 처리된 진피세포의 배양액(CM)을 처리하였다. 그 후, polyclonal anti-collagen I 또는 IV Ab를 각 well에 처리하여 RT에서 90분 동안 반응시킨 다음, avidin-HRP를 각 well에 처리하여 RT에서 60분 동안 반응시켰다. Supersignal ELISA pico chemiluminescent substrate를 각 well 당 100μL 씩 주입하여 10분 동안 반응시킨 후, ELISA platereader를 이용하여 luminescence 정도를 측정하였고, 바랭이 앱솔루트의 진피세포의 type I 또는 IV 콜라겐 합성과 분비에 대한 결과를 확보하였다.Monoclonal anti-collagen I or IV Ab, (2 μg / well / PBS) was injected into a 96 well microtiter plate and coated at RT for 12 hours. After blocking with blocking buffer for 1 hour, the sample was processed at 100 μL per well and reacted at RT for 90 min. Samples are cultures of dermal cells (CM) that have not been treated with Absolute Absolute and cultures of dermal cells (CM) treated with concentration of 10 μg / mL Absolut and cultures of dermal cells treated with concentration of 100 μg / mL Absolut (CM) ). Thereafter, polyclonal anti-collagen I or IV Ab was treated in each well to react for 90 minutes at RT, and then avidin-HRP was treated for each well to react for 60 minutes at RT. After injecting 100 μL of each supersignal ELISA pico chemiluminescent substrate for 10 minutes and reacting for 10 minutes, the degree of luminescence was measured using an ELISA platereader, and the results for type I or IV collagen synthesis and secretion of dermal cells of BABY Absolute were obtained. Did.
그 결과 도 4B에 나타낸 바와 같이, 바랭이 엡솔루트는 진피세포의 type I 콜라겐과 type IV 콜라겐의 합성과 분비를 유의하게 촉진시키는 것으로 나타났다. 특히 진피세포의 배양액(CM)에서 type I 콜라겐의 합성은 100 μg/mL의 농도에서 169.39±11.96% 유도되었으며 type IV 콜라겐의 합성은 100 μg/mL의 농도에서 196.33±17.36% 유도되어, 바랭이 앱솔루트는 진피세포의 type I과 IV 콜라겐 합성과 분비를 효과적으로 유도하는 것으로 확인되었다. As a result, as shown in FIG. 4B, it was shown that barley absolut significantly promotes the synthesis and secretion of type I collagen and type IV collagen in dermal cells. In particular, the synthesis of type I collagen in dermal cell culture (CM) was induced by 169.39 ± 11.96% at a concentration of 100 μg / mL, and the synthesis of type IV collagen was induced by 196.33 ± 17.36% at a concentration of 100 μg / mL, so that Absolute Absolute Was found to effectively induce type I and IV collagen synthesis and secretion of dermal cells.
실시예 6. 바랭이 꽃 앱솔루트가 진피세포 콜라겐 sprouting의 out growth에 미치는 영향Example 6. Effect of barley flower absolute on out growth of dermal cell collagen sprouting
상기 실시예 1에 의해 얻은 바랭이 꽃 앱솔루트가 진피세포 콜라겐 sprouting의 out growth에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 하기와 같이 조사하였다.In order to measure the effect on the outgrowth of collagen sprouting dermal cell collagen obtained by Example 1, the flowers of barley flowers were investigated as follows.
Type I 콜라겐과 진피세포를 2.5×107 cells/mL이 되도록 섞은 후, NaOH (1 N)용액을 처리하여 중화한 후, 24 well plate에 10 μL씩 spoting하고, 10분 정도 37℃, 5% CO2 배양기에서 건조한 뒤 상온에서 10분 정도 건조하여 인공피부조직을 형성하였다. 샘플을 처리하고, 48시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 배양액을 제거하고, Diff-Quik solution을 이용하여 세포와 조직을 고정 및 염색하였으며, 염색된 세포와 조직을 촬영하여 결과를 확보하였다.After mixing Type I collagen and dermal cells to 2.5 × 10 7 cells / mL, neutralize by treating with NaOH (1 N) solution, spotting 10 μL in a 24 well plate, 37 ° C for 5 minutes, 5% After drying in a CO 2 incubator, it was dried at room temperature for about 10 minutes to form artificial skin tissue. Samples were processed and incubated for 48 hours at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator. The culture solution was removed, and cells and tissues were fixed and stained using Diff-Quik solution, and the stained cells and tissues were photographed to obtain results.
도 5는 본 발명의 실시예 1에 의해 추출된 바랭이 꽃 앱솔루트의 진피세포 콜라겐 sprouting의 out growth에 미치는 영향을 나타낸 결과이며, 음성 대조군은 바랭이 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.Figure 5 is a result showing the effect on the outgrowth of dermal cell collagen sprouting of the dried flowers Absolut extracted by Example 1 of the present invention, the negative control is not using the dried flowers Absolute, the positive control is a conventional wound It uses epidermal growth factor (
그 결과, 도 5A에 나타난 바와 같이, 바랭이 꽃 앱솔루트는 진피세포 콜라겐 sprouting의 out growth를 농도 의존적으로 유도하는 것으로 나타났다. 즉, 양성 대조군과 비교하여 바랭이 꽃 앱솔루트 100 μg/mL 농도에서 진피세포 콜라겐 sprouting의 out growth를 효과적으로 유도하는 것으로 나타났다. 특히, 도 5B에 나타난 바와 같이 바랭이 꽃 앱솔루트 1 μg/mL 농도에서 179.60±11.06%가 유도되었으며, 100 μg/mL 농도에서 572.82±2.51%가 유도되었다.As a result, as shown in FIG. 5A, it was shown that barley flower absolut induces concentration-dependent out growth of dermal cell collagen sprouting. In other words, compared to the positive control group, it was found that the inflorescence of inflorescence was effectively induced out of dermal cell collagen sprouting at a concentration of 100 μg / mL. In particular, as shown in FIG. 5B, 179.60 ± 11.06% was induced at a concentration of 1 μg / mL Absolut, and 572.82 ± 2.51% was induced at a concentration of 100 μg / mL.
실시예 7. 바랭이 꽃 앱솔루트가 진피세포내 신호전달 과정에 미치는 영향 조사Example 7. Investigation of the effect of barley flower absolut on the signaling process in dermal cells
상기 실시예 1에 의해 얻은 바랭이 꽃 앱솔루트가 진피세포의 증식과 이동을 조절하는 주요 신호전달과정인 세포외 신호조절 키나제(Erk1/2)와 세린/트레오닌 키나제(p38)의 인산화 과정에 미치는 효과를 측정하기 위해서, 상기 실시예 3에서 제시된 바랭이 꽃 앱솔루트의 농도를 처리하고, 각각의 특이항체(P-Erk1/2, Erk1/2, P-p38, p38)를 이용하여 면역블롯(Immuno Blot)법을 활용하였다.The effect of the basal flower absolute obtained in Example 1 on the phosphorylation process of the extracellular signal-regulating kinase (Erk1 / 2) and serine / threonine kinase (p38), which are the main signaling processes that regulate the proliferation and migration of dermal cells. In order to measure, the concentration of barley flower absolute presented in Example 3 was processed, and the immunoblot method was performed using each specific antibody (P-Erk1 / 2, Erk1 / 2, P-p38, p38). Was utilized.
도 6A는 본 발명의 일 실시예 1에 의해 추출된 바랭이 꽃 앱솔루트의 진피세포외 신호조절 키나제(Erk1/2)와 세포내 세린/트레오닌 키나제(p38)의 인산화 과정에 미치는 영향을 나타낸 결과이며, 음성 대조군은 바랭이 꽃 앱솔루트를 이용하지 않은 것이고, 양성 대조군은 종래의 상처치유 및/또는 피부 재생에 활용되는 있는 표피성장인자(epithermal growth factor, EGF 50 ng/mL)를 이용한 것이다.Figure 6A is a result showing the effect on the phosphorylation process of the intracellular dermal extracellular signal regulation kinase (Erk1 / 2) and intracellular serine / threonine kinase (p38) of the dried flowers Absolute extracted by Example 1 of the present invention, Negative control was not used for the flower Absolute, and positive control was used for epidermal growth factor (
그 결과, 도 6B, 및 6C에 나타난 바와 같이, 바랭이 꽃 앱솔루트는 농도 의존적으로 진피세포외 신호조절 키나제(Erk1/2)와 세포내 세린/트레오닌 키나제(p38)의 인산화를 유도하였으며, 특히, 바랭이 꽃 앱솔루트 100 μg/mL 농도에서 세포외 신호조절 키나제(ERK1/2)의 인산화가 205.82±28.43% 유도되었으며, 세포내 세린/트레오닌 키나제(p38)의 인산화는 212.34±9.90%가 유도되는 것으로 나타났다.As a result, as shown in Figs. 6B and 6C, barley flower absolut induced phosphorylation of intradermal extracellular signal regulatory kinase (Erk1 / 2) and intracellular serine / threonine kinase (p38) in a concentration-dependent manner. Phosphorylation of extracellular signal regulatory kinase (ERK1 / 2) was induced by 205.82 ± 28.43% at a concentration of 100 μg / mL flower absolute, and phosphorylation of intracellular serine / threonine kinase (p38) was found to be induced by 212.34 ± 9.90%.
이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.So far, the present invention has been focused on the preferred embodiments. Those skilled in the art to which the present invention pertains will appreciate that the present invention may be implemented in a modified form without departing from the essential characteristics of the present invention. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in terms of explanation, not limitation. The scope of the present invention is shown in the claims rather than the foregoing description, and all differences within the equivalent range should be interpreted as being included in the present invention.
Claims (8)
상기 앱솔루트는 휘발성 용제를 이용하여 유기용매 추출법에 의해 추출된 것인 피부 재생 및 상처 치료용 조성물.According to claim 1,
The absolute is a composition for skin regeneration and wound treatment that is extracted by an organic solvent extraction method using a volatile solvent.
상기 앱솔루트는 상기 유기 용매 추출법에 의해 추출된 콘크리트를 알코올로 추출하여 불용성 왁스를 제거한 앱솔루트인 것인 피부 재생 및 상처 치료용 조성물.According to claim 2,
The absolute is a composition for skin regeneration and wound treatment that is an absolute that removes insoluble wax by extracting the concrete extracted with the organic solvent extraction method with alcohol.
상기 앱솔루트는 리놀렌산 (Linolenic acid), 시토스테논(Sitostenone), 사이클로옥타코산(Cyclooctacosane), 헥사데카노익산(Hexadecanoic acid), 스티그마스테롤(Stigmasterol), 멀티플로라-7,9(11)-dien-3β-ol(Multiflora-7,9(11)-dien-3β-ol), 펜타코산(Pentacosane), 메틸레네비스(Phenol, 2,2'-methylenebis[6-(1,1-dimethylethyl)-4-methyl-), 스테아르산(Octadecanoic acid), 캄페스테롤(Campesterol), 헵타코산(Heptacosane), 노나데칸(Nonadecane), 스쿠알렌(Squalene), 옥타코산(Octacosane), 1-도코센(1-Docosene), 1-노나데센(1-Nonadecene), 아이코산(Eicosane), 자이카인(Xycaine), 라노스테롤(Lanosterol)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 휘발성 유기 화합물을 포함하는 것인 피부 재생 및 상처 치료용 조성물.According to claim 1,
The absolute is linolenic acid, cytostenone, cyclooctacosane, hexadecanoic acid, stigmasterol, multiflora-7,9 (11) -dien- 3β-ol (Multiflora-7,9 (11) -dien-3β-ol), Pentacosane, Methylenebis (Phenol, 2,2'-methylenebis [6- (1,1-dimethylethyl) -4 -methyl-), stearic acid, campesterol, heptacosane, nonadecane, squalene, octacoane, 1-docosene ), 1-Nonadecene (1-Nonadecene), Icosan (Eicosane), Xycaine (Xycaine), and contains one or more volatile organic compounds selected from the group consisting of Lanosteol (Lanosterol) for skin regeneration and wound treatment Composition.
상기 앱솔루트는 0.1 ~ 100 μg/mL의 범위로 포함되는 것인 피부 재생 및 상처 치료용 조성물.The method according to any one of claims 1 to 4,
The absolute is a composition for skin regeneration and wound treatment that is included in the range of 0.1 to 100 μg / mL.
상기 앱솔루트는 표피 각질형성세포 및 진피세포의 증식 및 이동을 유도하는 것인 피부 재생 및 상처 치료용 조성물.The method according to any one of claims 1 to 4,
The absolute is a composition for skin regeneration and wound treatment that induces proliferation and migration of epidermal keratinocytes and dermal cells.
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GRNT | Written decision to grant |