KR102105244B1

KR102105244B1 - Method for identifying cultivation region of Agaricus bisporus using isotope ratio

Info

Publication number: KR102105244B1
Application number: KR1020180039810A
Authority: KR
Inventors: 김승현; 정일민; 손나영; 박성규; 이지희; 안민정
Original assignee: 건국대학교 산학협력단
Priority date: 2018-04-05
Filing date: 2018-04-05
Publication date: 2020-05-29
Also published as: KR20190116788A

Abstract

본 발명은 국내산 양송이버섯의 원산지를 판별하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 양송이버섯 자실체 내의 질소, 탄소, 산소 및 황 동위원소 비율을 분석하여, 양송이버섯의 원산지 판별 기준을 제공한다. 구체적으로, 국내 총 6 개 지역에서 재배된 양송이버섯을 대상으로 탄소, 질소, 산소 및 황 동위원소 비율을 측정하여 각각의 동위원소지수를 계산하였을 때, 양송이버섯 새도 품종 및 새한 품종에 대하여, 질소 동위원소 및 황 동위원소의 지수를 통해 유의적인 신뢰도를 가지는 수준에서 원산지 판별이 가능하므로, 본 발명에서 제공하는 원산지 구분 기준을 적용해 국내산 양송이버섯의 보다 정확한 원산지를 판별할 수 있는 기준을 제공할 수 있다.The present invention relates to a method for determining the origin of domestic mushrooms, more specifically, by analyzing the nitrogen, carbon, oxygen and sulfur isotope ratios in the mushrooms fruit body, provides the criteria for determining the origin of mushrooms. Specifically, when the isotope index was calculated by measuring the ratio of carbon, nitrogen, oxygen, and sulfur isotopes for mushrooms cultivated in six regions in Korea, for the mushrooms and cultivars, Since the origin of nitrogen isotopes and sulfur isotopes can be determined at a level with significant reliability, the criteria for classification of origin provided by the present invention is applied to provide a more accurate origin of domestic mushrooms. can do.

Description

Method for identifying cultivation region of Agaricus bisporus using isotope ratio}

본 발명은 국내산 양송이버섯의 원산지를 판별하는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 양송이버섯 자실체 내의 질소, 탄소, 산소 및 황 동위원소 비율을 분석하여, 양송이버섯의 원산지 판별 기준을 제공한다.The present invention relates to a method for determining the origin of domestic mushrooms, more specifically, by analyzing the nitrogen, carbon, oxygen and sulfur isotope ratios in the mushrooms fruit body, provides the criteria for determining the origin of mushrooms.

버섯은 탄수화물, 소화성 단백질, 필수 아미노산, 비타민, 미네랄, 폴리페놀계 화합물 및 향료 화합물 등을 풍부하게 포함하고 있어, 인류 역사에 있어서 식용 및 약용 자원으로서 널리 사용되고 있다. 국제 식량 농업기구의 조사에 따르면, 2016년 전 세계 버섯 생산량은 1100만 톤이며, 이 중 약 72%가 중국을 포함하는 아시아 지역에서 생산된 것으로 보고된 바 있다. 유럽 및 미주 지역에서는 각각 약 15% 및 약 5%의 버섯 생산량을 담당하고 있다. 버섯은 웰빙 식단의 재료로서 각광받고 있어, 최근 전 세계적으로 버섯 시장은 점차 증가할 것으로 예상되고 있다. 그러나, 세계적인 버섯 시장의 추세에 따르면, 버섯의 원산지 정보가 정확히 제공되지 못하는 것으로 보고된 바 있다. 따라서, 버섯의 원산지를 명확하게 분별하는 것은 소비자 및 생산자 양 쪽에게 민감한 문제로 떠오르고 있다.Mushrooms are rich in carbohydrates, digestible proteins, essential amino acids, vitamins, minerals, polyphenolic compounds and flavor compounds, and are widely used as edible and medicinal resources in human history. According to a survey by the International Food and Agriculture Organization, worldwide mushroom production in 2016 was 11 million tonnes, of which about 72% were reported to be produced in Asia, including China. In Europe and the Americas, mushroom production is about 15% and about 5%, respectively. Mushrooms are in the spotlight as a well-being diet ingredient, and the mushroom market is expected to gradually increase worldwide. However, according to the trend of the global mushroom market, it has been reported that the origin information of the mushroom cannot be provided accurately. Therefore, clearly discriminating the origin of mushrooms has emerged as a sensitive problem for both consumers and producers.

최근, Lentinula edodes, Tricholoma matsutake, Boletus edulis, Auricularia auricular, Wolfiporia extensa, Ganoderma lucidum, Flammulina velutipes와 같은 식용 또는 약용 버섯의 원산지를 구분 하는 방법에 대한 연구가 보고된 바 있다(비특허문헌 1 내지 비특허문헌 3). 보고된 방법에 따르면, 분광학적 조사, 인공적 후각 지수 및/또는 크로마토그래피 기술을, 다양한 화학계량적 접근과 혼합하여, 버섯의 자실체 내의 화학 성분 또는 영양 성분의 함량을 측정하는 방법이 주로 제시되고 있다.Recently, studies have been reported on methods of classifying the origin of edible or medicinal mushrooms such as Lentinula edodes , Tricholoma matsutake , Boletus edulis , Auricularia auricular , Wolfiporia extensa , Ganoderma lucidum , Flammulina velutipes (Non-Patent Documents 1 to Non-Patent Documents) Document 3). According to the reported method, methods for measuring the content of chemical or nutrient components in the fruiting body of mushrooms are mainly suggested by mixing spectroscopic investigation, artificial olfactory index and / or chromatographic techniques with various stoichiometric approaches. .

예를 들면, 푸리에 변환-적외선 스펙트럼(Fourier transform-infrared spectra) 분석을 통해 중국 유남성의 6 개 원산지에서 각각 재배된 W. Extensa 버섯을 분석하였을 때, 각각의 원산지에 따라 차이를 나타내어, 자실체의 내측면을 시료로 분석하였을 때 보다 명확하게 원산지 구분이 가능할 수 있음이 보고된 바 있다(비특허문헌 3). 또한, W. extensa 버섯에 포함된 화합물인 pachymic acid 또한 재배 지역에 의해 함량이 변화되는 성분인 것으로 보고된 바 있다. For example, when analyzing W. Extensa mushrooms cultivated in six different origins of China's Yunnan Province through Fourier transform-infrared spectra analysis, the differences are shown according to each origin, and It has been reported that when analyzing the inner surface with a sample, it may be possible to more clearly distinguish the origin (Non-Patent Document 3). In addition, pachymic acid, a compound contained in W. extensa mushrooms, has also been reported to be a component whose content varies depending on the cultivation area.

이 뿐 아니라, 유기 생명체는 자연 환경으로부터 물리화학적 및/또는 미생물 반응에 의해 동위원소 분별 작용을 받아, 특유의 동위원소 조성을 나타낼 수 있으므로, 유기 생물체 내에 풍부한 원소인 수소, 탄소, 질소, 산소 및 황 원소에 대한 안정 동위원소의 함량을 분석하는 기술을 통해, 농작물의 원산지를 구분하는 등 식자재 정보를 명확하게 구분할 수 있는 방법이 제시되고 있다. 예를 들어, 재배 작물에서 H, C, N, O 또는 S 안정 동위원소 비율을 분석하는 것은 식물의 광합성 형태, 지역의 재배 방법, 재배 토지 기후의 조건 또는 지질학적 형태와 밀접한 관련을 가지는 것으로 보고된 바 있다(비특허문헌 04 내지 비특허문헌 06). 이에 따라, 곡물, 감자 및 인삼 뿌리와 같은 다양한 농작물에서 안정 동위원소의 비율을 분석하는 것을 통해, 원산지를 명확하게 구분할 수 있음이 보고된 바 있다(비특허문헌 07 내지 비특허문헌 11).In addition, since organic organisms undergo isotope fractionation by physicochemical and / or microbial reactions from the natural environment, they can exhibit unique isotopic composition, and thus, hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen and sulfur, which are abundant elements in organic organisms Through the technique of analyzing the content of stable isotopes for elements, a method for clearly classifying food material information such as classifying the origin of agricultural crops has been proposed. For example, analyzing H, C, N, O or S stable isotope ratios in cultivated crops is reported to be closely related to photosynthetic morphology of plants, local cultivation methods, conditions of cultivated land climate, or geological morphology. It has been done (non-patent document 04 to non-patent document 06). Accordingly, it has been reported that the origin can be clearly distinguished by analyzing the ratio of stable isotopes in various crops such as grain, potato, and ginseng roots (Non-patent Documents 07 to 11).

그러나, 이러한 연구에도 불구하고, 다른 농작물과 비교했을 때, 안정 동위원소의 비율을 분석하여 버섯의 재배 원산지를 구분하는 방법에 대하여는 극소수의 일부 보고만이 공지되어 있다. 예를 들어, 비특허문헌 12의 보고에 따르면, 일본, 중국, 한국 및 브라질에서 각각 재배한 표고 버섯(Lentinula eddes)을 대상으로 하여, C 및 N 동위원소의 비율을 통해 원산지 구분이 가능할 수 있음이 보고된 바 있다.However, despite these studies, only a small number of reports are known on how to identify the source of cultivation of mushrooms by analyzing the proportion of stable isotopes compared to other crops. For example, according to the report of Non-Patent Document 12, the origin of shiitake mushrooms ( Lentinula eddes ) cultivated in Japan, China, Korea, and Brazil can be distinguished by the ratio of C and N isotopes. This has been reported.

이에, 본 발명자들은 국내 재배 농가에서 재배된 양송이버섯의 원산지를 구분하기 위한 명확한 기준을 제시하기 위해 노력한 결과, 부여, 논산, 보령, 음성, 대구 및 경주의 총 6 개 지역에서 재배된 양송이버섯을 대상으로 탄소, 질소, 산소 및 황 동위원소 비율을 측정하여 각각의 동위원소지수를 계산하였을 때, 양송이버섯 새도 품종 및 새한 품종에 대하여, 질소 동위원소 및 황 동위원소의 지수를 통해 유의적인 신뢰도를 가지는 수준에서 원산지 판별이 가능할 것으로 확인하였으므로, 본 발명에서 제공하는 원산지 구분 기준을 적용해 국내산 양송이버섯의 보다 정확한 원산지를 판별할 수 있는 기준을 제공함으로써 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors tried to present a clear standard for distinguishing the origin of the mushrooms grown in domestically grown farms. As a result, the mushrooms grown in 6 areas in Buyeo, Nonsan, Boryeong, Eumseong, Daegu and Gyeongju When carbon, nitrogen, oxygen, and sulfur isotope ratios were measured and each isotope index was calculated, significant reliability was obtained through the indexes of nitrogen isotopes and sulfur isotopes for the oyster mushroom and Saehan varieties. Since it was confirmed that the origin can be discriminated at the level of having the present invention, the present invention was completed by providing a criterion for discriminating a more accurate origin of domestic mushrooms by applying the criteria for dividing the origin provided by the present invention.

Choong, Y.-K., Xu, C.-H., Lan, J., Chen, X.-D., & Jamal, J. A. (2014). Journal of Molecular Structure, 1069(Supplement C), 188-195. Choong, Y.-K., Xu, C.-H., Lan, J., Chen, X.-D., & Jamal, J. A. (2014). Journal of Molecular Structure, 1069 (Supplement C), 188-195. Li, Y., Zhang, J., Li, T., Liu, H., & Wang, Y. (2016). PLOS ONE, 11, e0168998. Li, Y., Zhang, J., Li, T., Liu, H., & Wang, Y. (2016). PLOS ONE, 11, e0168998. Li, Y., Zhang, J., Zhao, Y., Li, Z., Li, T., & Wang, Y. (2014). Journal of Analytical Methods in Chemistry, 2014, 9pages. Li, Y., Zhang, J., Zhao, Y., Li, Z., Li, T., & Wang, Y. (2014). Journal of Analytical Methods in Chemistry, 2014, 9 pages. Brugnoli, E., & Farquhar, G. D. (2000). Physiology and Metabolism, (pp. 399-434). Dordrecht: Kluwer. Brugnoli, E., & Farquhar, G. D. (2000). Physiology and Metabolism, (pp. 399-434). Dordrecht: Kluwer. Dawson, T., & Brooks, P. (2001). Stable Isotope Techniques in the Study of Biological Processes and Functioning of Ecosystems, vol. 40 (pp. 1-18): Springer Netherlands. Dawson, T., & Brooks, P. (2001). Stable Isotope Techniques in the Study of Biological Processes and Functioning of Ecosystems, vol. 40 (pp. 1-18): Springer Netherlands. Gremaud, G., & Hilkert, A. (2008). In D.-W. Sun (Ed.), Modern techniques for food authentication, (pp. 269-320). Burlington, USA Academic Press. Gremaud, G., & Hilkert, A. (2008). In D.-W. Sun (Ed.), Modern techniques for food authentication, (pp. 269-320). Burlington, USA Academic Press. Chung, I.-M., Kim, J.-K., Jin, Y.-I., Oh, Y.-T., Prabakaran, M., Youn, K.-J., & Kim, S.-H. (2016). Food Chemistry, 212, 48-57. Chung, I.-M., Kim, J.-K., Jin, Y.-I., Oh, Y.-T., Prabakaran, M., Youn, K.-J., & Kim, S. -H. (2016). Food Chemistry, 212, 48-57. Chung, I.-M., Kim, J.-K., Lee, J.-H., An, M.-J., Lee, K.-J., Park, S.-K., Kim, J.-U., Kim, M.-J., & Kim, S.-H. (2017). Journal of Ginseng Research. In Press. Chung, I.-M., Kim, J.-K., Lee, J.-H., An, M.-J., Lee, K.-J., Park, S.-K., Kim, J.-U., Kim, M.-J., & Kim, S.-H. (2017). Journal of Ginseng Research. In Press. Kelly, S., Baxter, M., Chapman, S., Rhodes, C., Dennis, J., & Brereton, P. (2002). European Food Research and Technology, 214, 72-78. Kelly, S., Baxter, M., Chapman, S., Rhodes, C., Dennis, J., & Brereton, P. (2002). European Food Research and Technology, 214, 72-78. Longobardi, F., Casiello, G., Sacco, D., Tedone, L., & Sacco, A. (2011). Food Chemistry, 124, 1708-1713. Longobardi, F., Casiello, G., Sacco, D., Tedone, L., & Sacco, A. (2011). Food Chemistry, 124, 1708-1713. Wu, Y., Luo, D., Dong, H., Wan, J., Luo, H., Xian, Y., Guo, X., Qin, F., Han, W., Wang, L., & Wang, B. (2015). Food Chemistry, 174, 553-557. Wu, Y., Luo, D., Dong, H., Wan, J., Luo, H., Xian, Y., Guo, X., Qin, F., Han, W., Wang, L., & Wang, B. (2015). Food Chemistry, 174, 553-557. Suzuki, Y., Nakashita, R., Ishikawa, N. K., Tabuchi, A., Sakuno, E., & Tokimoto, K. (2015). BUNSEKI KAGAKU, 64, 859-866. Suzuki, Y., Nakashita, R., Ishikawa, N. K., Tabuchi, A., Sakuno, E., & Tokimoto, K. (2015). BUNSEKI KAGAKU, 64, 859-866. Chung, I.-M., Kim, J.-K., Prabakaran, M., Yang, J.-H., & Kim, S.-H. (2016). Journal of the Science of Food And Agriculture, 96, 2433-2439. Chung, I.-M., Kim, J.-K., Prabakaran, M., Yang, J.-H., & Kim, S.-H. (2016). Journal of the Science of Food And Agriculture, 96, 2433-2439. Sharp, Z. (2007). Principles of stable isotope geochemistry. Upper Saddle River, NJ: Pearson/Prentice Hall Sharp, Z. (2007). Principles of stable isotope geochemistry. Upper Saddle River, NJ: Pearson / Prentice Hall

본 발명의 목적은 국내산 양송이버섯의 원산지를 판별할 수 있는 간단하고 정확한 방법을 제공하고자 하는 것에 있다.An object of the present invention is to provide a simple and accurate method for determining the origin of domestic mushrooms.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하기 단계 i) 내지 iii)을 포함하는, 양송이버섯의 원산지 판별 방법을 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides a method for determining the origin of matsutake mushrooms, comprising the following steps i) to iii):

i) 양송이버섯(Agaricus bisporus) 자실체 시료의 질소 동위원소(δ¹⁵N) 비율 및 황 동위원소(δ³⁴S ) 비율을 각각 측정하는 단계;i) measuring the nitrogen isotope (δ ¹⁵ N) ratio and the sulfur isotope (δ ³⁴ S) ratio of the mushroom mushroom ( Agaricus bisporus ) fruiting sample, respectively;

ii) 상기 단계 i)에서 각각 측정한 질소 동위원소 비율 및 황 동위원소 비율을 이용하여 질소 동위원소지수 및 황 동위원소 지수를 각각 하기 [수학식 1]에 따라 측정하는 단계; 및ii) measuring the nitrogen isotope index and the sulfur isotope index using the nitrogen isotope ratio and the sulfur isotope ratio measured in step i), respectively, according to the following [Equation 1]; And

iii) 상기 단계 ii)에서 측정한 동위원소 지수를 비교하여 양송이버섯의 원산지를 판별하는 단계.iii) Comparing the isotope index measured in step ii) to determine the origin of the mushrooms.

[수학식 1][Equation 1]

δ, ‰ = [(R _unknown - R _standard)/R _standard]δ, ‰ = [( R _unknown - R _standard ) / R _standard ]

(상기 수학식 1에서, R _unknown은 대상 시료의 안정 동위원소 비를 나타내며, R _standard는 국제 표준값의 안정 동위원소 비를 나타낸다. 상기 안정 동위원소로 질소 또는 황 원소를 적용할 수 있으며, 이 때 안정 동위원소 비율은 각각 ¹⁵N/¹⁴N 또는 ³⁴S/³²S를 나타낸다.)(In Equation 1, R _unknown represents the stable isotope ratio of the target sample, and R _standard represents the stable isotope ratio of the international standard value. Nitrogen or sulfur elements can be applied as the stable isotope. Stable isotope ratios represent ¹⁵ N / ¹⁴ N or ³⁴ S / ³² S, respectively.)

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 양송이버섯의 원산지는 부여, 논산, 보령, 음성, 대구 및 경주로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있다.In a preferred embodiment of the present invention, the origin of the mushrooms may be any one selected from the group consisting of Buyeo, Nonsan, Boryeong, Eumseong, Daegu and Gyeongju.

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 단계 i)의 양송이버섯은 새도 품종, 새한 품종 또는 둘 다인 것일 수 있다.In a preferred embodiment of the present invention, the mushroom mushroom of step i) may be a new dog breed, a new dog breed, or both.

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 단계 iii)의 판별은 다음과 같은 기준으로 수행하는 것일 수 있다:In a preferred embodiment of the present invention, the determination of step iii) may be performed based on the following criteria:

질소 동위원소지수가 7.0 내지 12.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 9.0 내지 11.0 ‰인 경우 부여산 양송이버섯으로 판별하고;When the nitrogen isotope index is 7.0 to 12.0 ‰ and the sulfur isotope index is 9.0 to 11.0 ‰, it is determined as a mushroom of the mushroom of Buyeosan;

질소 동위원소지수가 11.0 내지 13.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 6.0 내지 8.0 ‰인 경우 논산산 양송이버섯으로 판별하며;When the nitrogen isotope index is 11.0 to 13.0 ‰ and the sulfur isotope index is 6.0 to 8.0 ‰, it is determined as a mushroom of Nonsan Mountain;

질소 동위원소지수가 12.0 내지 15.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 3.0 내지 10.0 ‰인 경우 보령산 양송이버섯으로 판별하고;When the nitrogen isotope index is 12.0 to 15.0 ‰ and the sulfur isotope index is 3.0 to 10.0 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms;

질소 동위원소지수가 18.0 내지 20.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 14.5 내지 15.5 ‰인 경우 음성산 양송이버섯으로 판별하며;When the nitrogen isotope index is 18.0 to 20.0 ‰ and the sulfur isotope index is 14.5 to 15.5 ‰, it is determined as a mushroom of Mt.

질소 동위원소지수가 10.0 내지 11.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 7.0 내지 11.0 ‰인 경우 대구산 양송이버섯으로 판별하고; 및When the nitrogen isotope index is 10.0 to 11.0 ‰ and the sulfur isotope index is 7.0 to 11.0 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu; And

질소 동위원소지수가 17.0 내지 19.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 8.0 내지 9.0 ‰인 경우 경주산 양송이버섯으로 판별한다.When the nitrogen isotope index is 17.0 to 19.0 ‰ and the sulfur isotope index is 8.0 to 9.0 ‰, it is determined as a mushroom from Gyeongjusan.

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 단계 i)의 동위원소 비율은 동위원소비율 질량 분석기(Isotope ratio mass spectrometry, IRMS)를 이용하여 측정하는 것일 수 있다.In a preferred embodiment of the present invention, the isotope ratio of step i) may be measured using an isotope ratio mass spectrometry (IRMS).

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 양송이버섯 원산지 판별 방법은 하기 a) 및 b) 단계를 추가로 포함하는 것일 수 있다:In a preferred embodiment of the present invention, the method for determining the origin of the mushrooms mushroom may further include the following steps a) and b):

a) 양송이버섯 자실체 시료의 산소 동위원소(δ¹⁸O) 비율 및 탄소 동위원소(δ¹³C) 비율을 각각 측정하는 단계;a) measuring the oxygen isotope (δ ¹⁸ O) ratio and the carbon isotope (δ ¹³ C) ratio of the mushroom mushroom fruiting body sample, respectively;

b) 상기 단계 a)에서 각각 측정한 산소 동위원소 비율 및 탄소 동위원소 비율을 이용하여 산소 동위원소지수 및 탄소 동위원소 지수를 각각 하기 [수학식 2]에 따라 측정하는 단계:b) measuring the oxygen isotope index and the carbon isotope index using the oxygen isotope ratio and the carbon isotope ratio measured in step a), respectively, according to the following [Equation 2]:

[수학식 1][Equation 1]

(상기 수학식 1에서, R _unknown은 대상 시료의 안정 동위원소 비를 나타내며, R _standard는 국제 표준값의 안정 동위원소 비를 나타낸다. 상기 안정 동위원소로 탄소 또는 산소 원소를 적용할 수 있으며, 이 때 안정 동위원소 비율은 각각 ¹³C/¹²C 또는 ¹⁸O/¹⁶O를 나타낸다.)(In Equation 1, R _unknown represents the stable isotope ratio of the target sample, R _standard represents the stable isotope ratio of the international standard value. Carbon or oxygen elements can be applied as the stable isotope. The stable isotope ratio represents ¹³ C / ¹² C or ¹⁸ O / ¹⁶ O, respectively.)

아울러, 상기 단계 b)에서 측정한 결과, 다음과 같은 기준으로 양송이버섯의 원산지를 판별할 수 있다:In addition, as a result of measurement in step b), the origin of the mushrooms can be determined based on the following criteria:

산소 동위원소지수가 21.0 내지 23.0 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.2 내지 -24.7 ‰인 경우 부여산 양송이버섯으로 판별하고;When the oxygen isotope index is 21.0 to 23.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.2 to -24.7 ‰, it is determined as a mushroom of the mushroom of Buyeosan;

산소 동위원소지수가 21.5 내지 22.5 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -25.0 내지 -24.4 ‰인 경우 논산산 양송이버섯으로 판별하며;When the oxygen isotope index is 21.5 to 22.5 ‰ and the carbon isotope index is -25.0 to -24.4 ‰, it is determined as a mushroom of Nonsan Mountain;

산소 동위원소지수가 22.5 내지 25.0 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.6 내지 -23.6 ‰인 경우 보령산 양송이버섯으로 판별하고;When the oxygen isotope index is 22.5 to 25.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.6 to -23.6 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms;

산소 동위원소지수가 21.6 내지 22.0 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.2 내지 -23.9 ‰인 경우 음성산 양송이버섯으로 판별하며;When the oxygen isotope index is 21.6 to 22.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.2 to -23.9 ‰, it is determined as a mushroom of Mt.

산소 동위원소지수가 21.0 내지 22.5 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.5 내지 -24.0 ‰인 경우 대구산 양송이버섯으로 판별하고; 및When the oxygen isotope index is 21.0 to 22.5 ‰ and the carbon isotope index is -24.5 to -24.0 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu; And

산소 동위원소지수가 21.0 내지 22.4 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.6 내지 -24.4 ‰인 경우 경주산 양송이버섯으로 판별한다.When the oxygen isotope index is 21.0 to 22.4 ‰ and the carbon isotope index is -24.6 to -24.4 ‰, it is determined as a mushroom from Gyeongjusan.

또한, 본 발명은 하기 단계 i) 내지 iv)를 포함하는, 양송이버섯의 원산지 판별 방법을 제공한다:In addition, the present invention provides a method for determining the origin of matsutake mushrooms, comprising the following steps i) to iv):

ii) 상기 단계 i)에서 각각 측정한 질소 동위원소 비율 및 황 동위원소 비율을 이용하여 질소 동위원소지수 및 황 동위원소 지수를 각각 하기 [수학식 1]에 따라 측정하는 단계;ii) measuring the nitrogen isotope index and the sulfur isotope index using the nitrogen isotope ratio and the sulfur isotope ratio measured in step i), respectively, according to the following [Equation 1];

iii) 상기 단계 ii)에서 측정한 동위원소 지수에 대하여 다변량 통계 분석을 수행하는 단계; 및iii) performing a multivariate statistical analysis on the isotope index measured in step ii); And

iv) 상기 단계 iii)에서 수행한 다변량 통계 분석 결과를 이용해 양송이버섯의 원산지를 판별하는 단계.iv) using the multivariate statistical analysis result performed in step iii) to determine the origin of the mushrooms.

[수학식 1][Equation 1]

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 단계 iii)의 다변량 통계 분석은 주성분 분석(principal component analysis, PCA) 및 부분최소자승판별 분석(partial least-squares discriminate analysis, PLS-DA) 중 어느 하나 또는 둘 다 인것일 수 있다.In one preferred embodiment of the present invention, the multivariate statistical analysis of step iii) is performed on one or both of principal component analysis (PCA) and partial least-squares discriminate analysis (PLS-DA). It can be all.

본 발명은 재배된 양송이버섯의 자실체 내 안정 동위원소 비를 이용하여, 양송이버섯의 원산지를 판별하는 방법을 제공한다.The present invention provides a method for determining the origin of a mushroom by using a stable isotope ratio in the fruiting body of the mushroom.

본 발명의 방법에 따르면 탄소, 질소, 산소 및/또는 황 동위원소 비율을 이용해, 부여, 논산, 보령, 음성, 대구 및 경주의 총 6 개 지역에서 재배된 양송이버섯의 원산지를 판별할 수 있다. 특히 본 발명에서는 상기 판별 기준의 신뢰도를 확인함에 있어서, 양송이버섯 새도 품종 및 새한 품종에 대하여, 질소 동위원소 및 황 동위원소의 지수가 유의적인 신뢰도를 가지는 판별 기준이 될 수 있을 것으로 다변량 통계 분석을 통해 확인하였으므로, 본 발명에서 제공하는 원산지 구분 기준을 적용해 국내산 양송이버섯의 보다 정확하고 간편한 원산지를 판별 기준을 제공할 수 있다.According to the method of the present invention, the origin of the mushrooms cultivated in six regions of Buyeo, Nonsan, Boryeong, Eumseong, Daegu and Gyeongju can be determined using carbon, nitrogen, oxygen and / or sulfur isotope ratios. In particular, in the present invention, in confirming the reliability of the discrimination criterion, multivariate statistical analysis that the indices of nitrogen isotopes and sulfur isotopes can be used as discriminant criteria with significant reliability for the new mushroom cultivars and saehan cultivars Since it has been confirmed through, the criteria for classification of origin provided by the present invention can be applied to provide a more accurate and simple criterion of origin for domestic mushrooms.

도 1은 본 발명에서 대상으로 한 양송이버섯 재배지의 지리적 위치를 나타낸다.
도 2는 부여, 논산, 보령, 음성, 대구 및 경주의 총 6 지역에서 재배된 양송이버섯 간 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S의 안정 동위원소 값을 나타내는 박스 플롯이다:
도 2a는 양송이버섯 시료 내 δ¹³C 동위원소 함량 분포를 나타내며;
도 2b는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁵N 동위원소 함량 분포를 나타내고;
도 2c는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 동위원소 함량 분포를 나타내며; 및
도 2d는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 동위원소 함량 분포를 나타낸다.
도 3은 6 개 지역에서 각각 재배된 양송이버섯의 자실체 내 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소에 대한 2D 플롯이다:
도 3a는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁵N 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고;
도 3b는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 및 δ¹⁵N 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이며;
도 3c는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고;
도 3d는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹⁵N 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이며;
도 3e는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고; 및
도 3f는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹⁸O 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이다.
도 4는 부여, 논산, 음성 및 경주의 4 지역에서 각각 재배된 양송이버섯 새도 품종의 자실체 내 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소에 대한 2D 플롯이다:
도 4a는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁵N 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고;
도 4b는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 및 δ¹⁵N 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이며;
도 4c는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고;
도 4d는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹⁵N 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이며;
도 4e는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고; 및
도 4f는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹⁸O 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이다.
도 5는 부여, 보령 및 경주의 3 지역에서 각각 재배된 양송이버섯 새한 품종의 자실체 내 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소에 대한 2D 플롯이다:
도 5a는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁵N 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고;
도 5b는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 및 δ¹⁵N 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이며;
도 5c는 양송이버섯 시료 내 δ¹⁸O 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고;
도 5d는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹⁵N 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이며;
도 5e는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹³C 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이고; 및
도 5f는 양송이버섯 시료 내 δ³⁴S 및 δ¹⁸O 동위원소 비율에 대한 2차원 플롯이다.
도 6는 양송이버섯의 자실체 내 δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소에 대한 3차원 플롯이다:
도 6a는 새도 품종의 시료 내 δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소 비율에 대한3차원 플롯이고; 및
도 6b는 새한 품종의 시료 내 δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소 비율에 대한3차원 플롯이다.
도 7은 6 개의 재배지에서 재배된 양송이버섯의 전체 동위원소 값 분석 결과를 이용한 다변량 통계분석 결과를 나타낸다:
도 7a는 주성분 분석(PCA)을 수행한 주성분 1 및 2의 스코어 플롯이고;
도 7b는 부분최소자승판별 분석(PLS-DA)을 수행한 스코어 플롯이며; 및
도 7c는 PLS-DA 모델을 이용해 산출한 VIP(variable importance in the projection) 점수를 나타낸다.
도 7a 및 도 7b에서, 스코어 플롯의 타원형은 호텔링 T(Hotelling's T ²)에 대한 95% 신뢰 구간을 나타낸다.
도 8은 동일 품종에 따른 양송이버섯의 동위원소 값 분석 결과를 이용한 PLS-DA 분석 결과를 나타낸다:
도 8a는 새도 품종에 대한 PLS-DA 스코어 플롯이고;
도 8b는 새한 품종에 대한 PLS-DA 스코어 플롯이며; 및
도 8c는 새도 품종에 대해 재배 농가 구분을 위한 PLS-DA 모델 결과를 나타낸다. Figure 1 shows the geographic location of the mushroom cultivation plant targeted in the present invention.
FIG. 2 is a box plot showing the stable isotope values of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S between mushrooms grown in all 6 regions of Buyeo, Nonsan, Boryeong, Eum, Daegu and Gyeongju:
Figure 2a shows the δ ¹³ C isotope content distribution in the mushroom mushroom sample;
Figure 2b shows the δ ¹⁵ N isotope content distribution in the mushroom mushroom sample;
Figure 2c shows the δ ¹⁸ O isotope content distribution in the mushroom mushroom sample; And
Figure 2d shows the δ ³⁴ S isotope content distribution in the mushroom mushroom sample.
FIG. 3 is a 2D plot of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S isotopes in fruiting bodies of mushrooms cultivated in 6 regions, respectively:
3A is a two-dimensional plot of the δ ¹⁵ N and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
3B is a two-dimensional plot of the δ ¹⁸ O and δ ¹⁵ N isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
3C is a two-dimensional plot of the δ ¹⁸ O and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
3D is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹⁵ N isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
3E is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample; And
Figure 3f is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹⁸ O isotope ratio in the mushroom mushroom sample.
FIG. 4 is a 2D plot of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S isotopes in the fruiting body of the oyster mushroom cultivar respectively grown in 4 regions of Buyeo, Nonsan, Eumseong and Gyeongju:
4A is a two-dimensional plot of the δ ¹⁵ N and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
4B is a two-dimensional plot of δ ¹⁸ O and δ ¹⁵ N isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
4C is a two-dimensional plot of the δ ¹⁸ O and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
4D is a two-dimensional plot of δ ³⁴ S and δ ¹⁵ N isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
4E is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample; And
Figure 4f is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹⁸ O isotope ratio in the mushroom mushroom sample.
FIG. 5 is a 2D plot of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S isotopes in fruiting bodies of oyster mushroom cultivars grown in 3 regions of Buyeo, Boryeong and Gyeongju respectively:
5A is a two-dimensional plot of the δ ¹⁵ N and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
5B is a two-dimensional plot of δ ¹⁸ O and δ ¹⁵ N isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
5C is a two-dimensional plot of the δ ¹⁸ O and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
5D is a two-dimensional plot of δ ³⁴ S and δ ¹⁵ N isotope ratios in the mushroom mushroom sample;
5E is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹³ C isotope ratios in the mushroom mushroom sample; And
Figure 5f is a two-dimensional plot of the δ ³⁴ S and δ ¹⁸ O isotope ratio in the mushroom mushroom sample.
Figure 6 is a three-dimensional plot of δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S isotopes in the fruiting body of the mushroom:
FIG. 6A is a three-dimensional plot of δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S isotope ratios in samples of the Sado variety; And
6B is a three-dimensional plot of δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S isotope ratios in samples of the Saehan variety.
Figure 7 shows the results of multivariate statistical analysis using the results of the analysis of total isotope values of mushrooms cultivated in six cultivated fields:
7A is a score plot of Principal Components 1 and 2 performing Principal Component Analysis (PCA);
7B is a score plot of partial least squares analysis (PLS-DA); And
7C shows a variable importance in the projection (VIP) score calculated using the PLS-DA model.
In FIGS. 7A and 7B, the oval of the score plot represents the 95% confidence interval for Hotelling's T ² .
Figure 8 shows the results of PLS-DA analysis using the isotope value analysis results of the mushrooms according to the same variety:
8A is a PLS-DA score plot for Saedo variety;
8B is a PLS-DA score plot for Saehan variety; And
Figure 8c shows the results of the PLS-DA model for the classification of cultivated farm for Saedo varieties.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 하기 단계 i) 내지 iii)을 포함하는, 양송이버섯의 원산지 판별 방법을 제공한다:The present invention provides a method for determining the origin of matsutake mushrooms, comprising the following steps i) to iii):

[수학식 1][Equation 1]

상기 [수학식 1]에서, 상기 국제 표준값은 다음과 같이 Sharp, Z. (2007). Principles of stable isotope geochemistry. Upper Saddle River, NJ: Pearson/Prentice Hall(비특허문헌 14)에서 공지된 값을 사용하는 것이 바람직하다. 구체적으로, 탄소 동위원소의 국제 표준값은 Vienna PeeDee Belemnite의 값인 것이 바람직하고, 질소 동위원소의 국제 표준값은 대기 중 질소 가스의 값인 것이 바람직하며, 산소 동위원소의 국제 표준값은 Vienna Standard Mean Ocean Water의 값인 것이 바람직하고, 및 황 동위원소의 국제 표준값은 Vienna Canyon Diablo Troilite의 값인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.In [Equation 1], the international standard value is as follows: Sharp, Z. (2007). Principles of stable isotope geochemistry . It is preferable to use values known from Upper Saddle River, NJ: Pearson / Prentice Hall (Non-Patent Document 14). Specifically, the international standard value of the carbon isotope is preferably the value of Vienna PeeDee Belemnite, the international standard value of the nitrogen isotope is preferably the value of nitrogen gas in the atmosphere, and the international standard value of the oxygen isotope is the value of Vienna Standard Mean Ocean Water It is preferable, and the international standard value of the isotope of sulfur is preferably the value of Vienna Canyon Diablo Troilite, but is not limited thereto.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 양송이버섯는 대한민국에서 재배된 것이 바람직하며, 구체적으로 양송이버섯의 원산지는 부여, 논산, 보령, 음성, 대구 및 경주로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.In the method of the present invention, the mushroom mushroom is preferably cultivated in Korea, specifically, the origin of the mushroom mushroom is more preferably any one selected from the group consisting of Buyeo, Nonsan, Boryeong, Eum, Daegu and Gyeongju, It is not limited to this.

본 발명의 방법에 있어서, 양송이버섯의 원산지를 판별하기 위해 안정 동위원소 비율을 측정하기 위해 먼저 유전적 특징 및/또는 재배 환경의 차이에 대한 영향을 최소화하는 것이 바람직하다.In the method of the present invention, in order to determine the stable isotope ratio in order to determine the origin of the mushrooms, it is desirable to minimize the effect on differences in genetic characteristics and / or cultivation environment.

즉, 구체적인 예로서 상기 유전적 특징의 영향을 최소화하기 위해, 동일 품종을 대상으로 판별하는 것에서 본 발명의 방법에 따른 신뢰도를 보다 높힐 수 있다. 이에 따른 양송이버섯의 품종과 관련하여, 상기 단계 i)의 양송이버섯은 새도 품종, 새한 품종 또는 둘 다인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.That is, in order to minimize the influence of the genetic characteristics as a specific example, it is possible to increase the reliability according to the method of the present invention in discriminating the same cultivars. Regarding the varieties of mushrooms according to this, it is most preferable that the mushrooms of step i) are saedo varieties, saehan varieties, or both, but are not limited thereto.

또다른 구체적인 예로서 상기 재배 환경의 차이에 의한 영향을 최소화하기 위해, 양송이버섯의 재배용 배지의 조성, 배지 내 수분 함량, 재배 시설 내 이산화탄소 농도 및 환기 조건과 같은 조건이 동일한 환경에서 재배된 양송이버섯을 대상으로 판별하는 것에서 본 발명의 방법에 따른 신뢰도를 보다 높일 수 있다.As another specific example, in order to minimize the effect of the difference in the cultivation environment, the mushroom cultivation mushrooms cultivated in the same environment, such as the composition of the cultivation medium of the mushrooms, moisture content in the medium, carbon dioxide concentration in the cultivation facility and ventilation conditions Reliability according to the method of the present invention can be further improved by determining the target.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 단계 iii)의 판별은 다음과 같은 기준으로 수행하는 것일 수 있다:In the method of the present invention, the determination of step iii) may be performed based on the following criteria:

질소 동위원소지수가 7.0 내지 12.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 9.0 내지 11.0 ‰인 경우 부여산 양송이버섯으로 판별하고; 질소 동위원소지수가 11.0 내지 13.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 6.0 내지 8.0 ‰인 경우 논산산 양송이버섯으로 판별하며; 질소 동위원소지수가 12.0 내지 15.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 3.0 내지 10.0 ‰인 경우 보령산 양송이버섯으로 판별하고; 질소 동위원소지수가 18.0 내지 20.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 14.5 내지 15.5 ‰인 경우 음성산 양송이버섯으로 판별하며; 질소 동위원소지수가 10.0 내지 11.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 7.0 내지 11.0 ‰인 경우 대구산 양송이버섯으로 판별하고; 및 질소 동위원소지수가 17.0 내지 19.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 8.0 내지 9.0 ‰인 경우 경주산 양송이버섯으로 판별한다.When the nitrogen isotope index is 7.0 to 12.0 ‰ and the sulfur isotope index is 9.0 to 11.0 ‰, it is determined as a mushroom of the mushroom of Buyeosan; When the nitrogen isotope index is 11.0 to 13.0 ‰ and the sulfur isotope index is 6.0 to 8.0 ‰, it is determined as a mushroom of Nonsan Mountain; When the nitrogen isotope index is 12.0 to 15.0 ‰ and the sulfur isotope index is 3.0 to 10.0 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms; When the nitrogen isotope index is 18.0 to 20.0 ‰ and the sulfur isotope index is 14.5 to 15.5 ‰, it is determined as a mushroom of Mt. When the nitrogen isotope index is 10.0 to 11.0 ‰ and the sulfur isotope index is 7.0 to 11.0 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu; And when the nitrogen isotope index is 17.0 to 19.0 ‰ and the sulfur isotope index is 8.0 to 9.0 ‰, it is determined as a mushroom from Gyeongjusan.

보다 구체적으로, 질소 동위원소지수가 7.5 내지 11.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 10.0 내지 11.0 ‰인 경우 부여산 양송이버섯으로 판별하고; 질소 동위원소지수가 11.5 내지 12.5 ‰ 및 황 동위원소지수가 7.0 내지 8.0 ‰인 경우 논산산 양송이버섯으로 판별하며; 질소 동위원소지수가 13.0 내지 15.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 4.0 내지 9.5 ‰인 경우 보령산 양송이버섯으로 판별하고; 질소 동위원소지수가 19.0 내지 20.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 14.8 내지 15.5 ‰인 경우 음성산 양송이버섯으로 판별하며; 질소 동위원소지수가 10.5 내지 11.0 ‰ 및 황 동위원소지수가 7.0 내지 10.5 ‰인 경우 대구산 양송이버섯으로 판별하고; 및 질소 동위원소지수가 17.5 내지 18.5 ‰ 및 황 동위원소지수가 8.5 내지 9.0 ‰인 경우 경주산 양송이버섯으로 판별하는 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.More specifically, when the nitrogen isotope index is 7.5 to 11.0 ‰ and the sulfur isotope index is 10.0 to 11.0 ‰, it is determined to be a mushroom from Buyeosan; When the nitrogen isotope index is 11.5 to 12.5 ‰ and the sulfur isotope index is 7.0 to 8.0 ‰, it is determined as Nonsan mushrooms; When the nitrogen isotope index is 13.0 to 15.0 ‰ and the sulfur isotope index is 4.0 to 9.5 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms; When the nitrogen isotope index is 19.0 to 20.0 ‰ and the sulfur isotope index is 14.8 to 15.5 ‰, it is determined as Eumsan mushroom; When the nitrogen isotope index is 10.5 to 11.0 ‰ and the sulfur isotope index is 7.0 to 10.5 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu; And when the nitrogen isotope index is 17.5 to 18.5 ‰ and the sulfur isotope index is 8.5 to 9.0 ‰, it is more preferable to identify them as mushrooms from Gyeongju, but is not limited thereto.

본 발명의 방법에 있어서, 상기 단계 i)의 동위원소 비율은 당업계에서 통상적으로 이용되는 동위원소비율 질량 분석기(Isotope ratio mass spectrometry, IRMS)를 이용하여 측정하는 것이 바람직하다.In the method of the present invention, it is preferable to measure the isotope ratio of step i) using an isotope ratio mass spectrometry (IRMS) commonly used in the art.

또한, 본 발명의 방법에 있어서, 상기 양송이버섯 원산지 판별 방법은 하기 a) 및 b) 단계를 추가로 포함하는 것으로서, 판별 기준에 대한 신뢰도를 보다 상승시킬 수 있다:In addition, in the method of the present invention, the method for determining the origin of the mushroom mushrooms may further include steps a) and b), thereby further increasing the reliability of the discrimination criteria:

[수학식 1][Equation 1]

산소 동위원소지수가 21.0 내지 23.0 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.2 내지 -24.7 ‰인 경우 부여산 양송이버섯으로 판별하고; 산소 동위원소지수가 21.5 내지 22.5 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -25.0 내지 -24.4 ‰인 경우 논산산 양송이버섯으로 판별하며; 산소 동위원소지수가 22.5 내지 25.0 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.6 내지 -23.6 ‰인 경우 보령산 양송이버섯으로 판별하고; 산소 동위원소지수가 21.6 내지 22.0 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.2 내지 -23.9 ‰인 경우 음성산 양송이버섯으로 판별하며; 산소 동위원소지수가 21.0 내지 22.5 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.5 내지 -24.0 ‰인 경우 대구산 양송이버섯으로 판별하고; 및 산소 동위원소지수가 21.0 내지 22.4 ‰ 및 탄소 동위원소지수가 -24.6 내지 -24.4 ‰인 경우 경주산 양송이버섯으로 판별한다.When the oxygen isotope index is 21.0 to 23.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.2 to -24.7 ‰, it is determined as a mushroom of the mushroom of Buyeosan; When the oxygen isotope index is 21.5 to 22.5 ‰ and the carbon isotope index is -25.0 to -24.4 ‰, it is determined as a mushroom of Nonsan Mountain; When the oxygen isotope index is 22.5 to 25.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.6 to -23.6 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms; When the oxygen isotope index is 21.6 to 22.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.2 to -23.9 ‰, it is determined as a mushroom of Mt. When the oxygen isotope index is 21.0 to 22.5 ‰ and the carbon isotope index is -24.5 to -24.0 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu; And when the oxygen isotope index is 21.0 to 22.4 ‰ and the carbon isotope index is -24.6 to -24.4 ‰, it is determined as a mushroom from Gyeongjusan.

[수학식 1][Equation 1]

본 발명의 방법에 있어서, 상기 단계 iii)의 다변량 통계 분석은 주성분 분석(principal component analysis, PCA) 및 부분최소자승판별 분석(partial least-squares discriminate analysis, PLS-DA) 중 어느 하나 또는 둘 다 인것이 바람직하다.In the method of the present invention, the multivariate statistical analysis of step iii) is one or both of principal component analysis (PCA) and partial least-squares discriminate analysis (PLS-DA). It is preferred.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. These examples are only for illustrating the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as limited by these examples.

양송이버섯(White Mushroom( Agaricus bisporusAgaricus bisporus ) 재배) Cultivation

분석 대상 시료의 양송이버섯은 하기 [표 1] 및 도 1에서 요약된 바에 따른 조건으로 준비하였다. 총 10 종의 품종을 재배하였으며, 대한민국 보령, 부여, 논산, 음성, 대구 및 경주의 총 6 개 지역에 위치한 버섯 재배 농가 15 곳에서 2017년 3월부터 6월 사이에 수득한 자실체를 분석 대상 시료로서 사용하였다.The mushrooms of the sample to be analyzed were prepared under the conditions as summarized in Table 1 below and FIG. 1. A total of 10 varieties were cultivated, and the fruit samples obtained between March and June 2017 were collected from 15 mushroom-cultivated farms located in six regions of Boryeong, Buyeo, Nonsan, Eumseong, Daegu and Gyeongju, Korea. It was used as.

구체적으로, 양송이버섯(A. bisporus)은, 90%(w/v) 짚 혼합물 및 10%(w/v) 가금류 배설물 비료를 혼합한 후 멸균한, 버섯 재배용 배지에 접종하여 배양하였다. 이 때, 상기 짚 혼합물은 볏짚 및 밀짚을 7:3(w:w)의 비율로 혼합한 것을 사용하였다. 배지 내 수분 함량(moisture), 온도, 습도, 이산화탄소 농도 및 환기 조건과 같은 재배 환경 조건은 각각의 버섯 재배 농가에서 사용하는 통상적인 조건으로 조절하였다. 상기 통상적인 조건으로서, 대부분의 버섯 재배 농가에서는 양송이버섯의 생장 단계에서 약 70% 미만의 습도 및 약 25℃ 미만의 온도 조건을 유지하였다. 추가로 필요한 경우 재배 하우스 내부의 환기 조건을 조절하여, 각각의 재배 농가에서 최적의 재배 조건으로 설정하는 습도 조건 및 온도 조건을 유지할 수 있도록 하였다. 재배 기간 후, 양송이버섯을 수확하여 고품질의 양송이버섯 만을 선별하여, 각각의 재배 농가 별로 30 개의 버섯 자실체를 분석 시료로서 무작위적으로 수득하였다.Specifically, mushrooms ( A. bisporus ), 90% (w / v) straw mixture and 10% (w / v) poultry manure fertilizer was mixed and cultured by inoculation into sterilized, mushroom cultivation medium. At this time, the straw mixture was used to mix rice straw and straw at a ratio of 7: 3 (w: w). Cultivation environment conditions such as moisture content, temperature, humidity, carbon dioxide concentration and ventilation conditions in the medium were adjusted to the usual conditions used by each mushroom cultivation farm. As the above general conditions, most mushroom cultivation farms maintained a humidity of less than about 70% and a temperature of less than about 25 ° C in the growth stage of the mushroom mushroom. If necessary, the ventilation conditions inside the cultivation house were adjusted to maintain the humidity conditions and temperature conditions that were set as optimal cultivation conditions in each cultivated farm. After the cultivation period, mushroom mushrooms were harvested to select only high-quality mushrooms, and 30 mushroom fruits for each cultivated farm were randomly obtained as an analysis sample.

본 발명의 양송이버섯 재배지 및 재배 일정의 정보Information of mushroom cultivation site and cultivation schedule of the present invention RegionRegion FarmFarm CultivarCultivar Color of PileusColor of Pileus Harvest dateHarvest date Location
(Latitude, °N/
Longitude, °E)Location
(Latitude, ° N /
Longitude, ° E) BuyeoBuyeo AA SaeDoSaeDo WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°22'/126°98'36 ° 22 '/ 126 ° 98' BB F599F599 WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°22'/126°98'36 ° 22 '/ 126 ° 98' CC Amycel DeltaAmycel Delta WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°22'/126°98'36 ° 22 '/ 126 ° 98' DD Sae HanSae Han WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°24'/127°00'36 ° 24 '/ 127 ° 00' EE SaeDoSaeDo WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°22'/126°98'36 ° 22 '/ 126 ° 98' FF SkybrownSkybrown BrownBrown 2017.03.282017.03.28 36°22'/126°98'36 ° 22 '/ 126 ° 98' NonsanNonsan GG SeolwonSeolwon WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°19'/127°08'36 ° 19 '/ 127 ° 08' HH SaeDoSaeDo WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°19'/127°15'36 ° 19 '/ 127 ° 15' BoryeongBoryeong II Sae HanSae Han WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°31'/126°65'36 ° 31 '/ 126 ° 65' FB30FB30 WhiteWhite 2017.03.282017.03.28 36°31'/126°65'36 ° 31 '/ 126 ° 65' JJ HogamHogam BrownBrown 2017.05.172017.05.17 36°29'/126°65'36 ° 29 '/ 126 ° 65' EumseongEumseong KK SaeDoSaeDo WhiteWhite 2017.05.222017.05.22 36°94'/127°75'36 ° 94 '/ 127 ° 75' DaeguDaegu LL A15A15 WhiteWhite 2017.06.232017.06.23 35°75'/128°49'35 ° 75 '/ 128 ° 49' MM Hanmaeum509Hanmaeum509 WhiteWhite 2017.06.232017.06.23 35°75'/128°49'35 ° 75 '/ 128 ° 49' NN DeltaDelta WhiteWhite 2017.06.222017.06.22 35°75'/128°49'35 ° 75 '/ 128 ° 49' GyeongjuGyeongju OO SaeDoSaeDo WhiteWhite 2017.06.222017.06.22 35°82'/129°25'35 ° 82 '/ 129 ° 25' SaeHanSaeHan WhiteWhite 2017.06.232017.06.23 35°82'/129°25'35 ° 82 '/ 129 ° 25'

IRMS 분석을 통한 양송이버섯 시료 내 동위원소 지수의 분석Analysis of the isotope index in the mushroom mushroom sample by IRMS analysis

<2-1> 원산지에 따른 양송이버섯 시료 내 동위원소 지수 분포 확인<2-1> Isotope Index Distribution in Mushroom Mushroom Samples by Origin

원산지에 따른 양송이 버섯 시료의 탄소(δ¹³C), 질소(δ¹⁵N), 산소(δ¹⁸O) 및 황(δ³⁴S) 동위원소지수 변화를 확인하기 위하여, IRMS 분석을 수행하였다.IRMS analysis was performed to confirm changes in carbon (δ ¹³ C), nitrogen (δ ¹⁵ N), oxygen (δ ¹⁸ O), and sulfur (δ ³⁴ S) isotope index of the mushroom mushroom samples according to the origin.

먼저, IRMS 분석 대상의 시료를 준비하였다. 구체적으로, 상기 <실시예 1>에서 재배 및 수확한 총 15개 양송이버섯 버섯의 자실체는 각각 -45℃에서 최대 5 일간 동결건조한 후, 입자 직경 400 ㎛ 미만 크기의 분말을 수득할 수 있도록 분쇄하였다. 그런 다음, 분쇄한 버섯 시료 분말을, 산소, 질소 및 황 동위원소지수 측정을 위한 시료로서 주석 캡슐(Sn, 3.5 mm ×17 mm, IVA Analysentechinik e.K., 독일)에 분주 및 밀폐하고, 산소 동위원소지수 측정을 위해 은 캡슐(Ag, 3.5 mm×5.0 mm, Elemental Microanalysis, 영국)에 분주 및 밀폐하였다. 그런 다음, 각각의 동위원소지수에 신뢰도를 더하기 위해, 0.25 mg 이하의 분쇄 버섯 시료를 사용하여 탄소 동위원소(δ¹³C) 및 질소 동위원소(δ¹⁵N) 분석을 동시에 수행하였으며, 0.2 mg 이하의 분쇄 버섯 시료를 사용하여 산소 동위원소(δ¹⁸O) 분석을 수행하였으며, 20 mg 이하의 분쇄 버섯 시료를 사용하여 황 동위원소(δ³⁴S) 분석을 수행하였다. 캡슐에 분주하고 밀폐한 각각의 시료는 IRMS 분석을 수행할 때 까지 데시케이터에서 보관하였다(비특허문헌 13).First, a sample for IRMS analysis was prepared. Specifically, the fruiting bodies of a total of 15 mushroom mushrooms grown and harvested in <Example 1> were lyophilized at -45 ° C for up to 5 days, respectively, and then pulverized to obtain a powder having a particle size of less than 400 μm. . Then, the crushed mushroom sample powder is dispensed and sealed in a tin capsule (Sn, 3.5 mm × 17 mm, IVA Analysentechinik eK, Germany) as a sample for measuring oxygen, nitrogen and sulfur isotope index, and oxygen isotope index For measurement, it was dispensed and sealed in a silver capsule (Ag, 3.5 mm x 5.0 mm, Elemental Microanalysis, UK). Then, in order to add reliability to each isotope index, carbon isotope (δ ¹³ C) and nitrogen isotope (δ ¹⁵ N) analyzes were simultaneously performed using a crushed mushroom sample of 0.25 mg or less, and 0.2 mg or less. Oxygen isotope (δ ¹⁸ O) analysis was performed using a crushed mushroom sample of, and sulfur isotope (δ ³⁴ S) analysis was performed using a crushed mushroom sample of 20 mg or less. Each sample dispensed in a capsule and sealed was stored in a desiccator until IRMS analysis was performed (non-patent document 13).

그런 다음, 이전에 공지된 바에 따라(비특허문헌 07 및 비특허문헌 13), 원소 분석기(elemental analyzer)가 부착된 IRMS 시스템을 이용해 보관한 양송이버섯 자실체의 분말 시료 내의 탄소, 질소, 산소 또는 황 동위원소의 값을 측정하였다. 구체적인 탄소 동위원소 및 질소 동위원소 측정 방법에 있어서, 버섯 시료를 분주하여 밀폐한 주석 캡슐을 산화 크로뮴(of chromium oxide) 및 은빛의 산화 구리(silvered copper oxide)로 구성된 반응기 내에 가하고, 1000 ℃에서 1차 연소시킨 다음, 온도를 650 ℃로 떨어뜨려 환원된 구리에 의한 환원된 반응기 내부로부터 산화물을 제거하였다. 분석 과정에서 시료에서 생산되는 질소 및 이산화탄소 가스는 분리 및 제거하였다. 산소 동위원소의 측정을 위해, 버섯 시료를 분주하여 밀폐한 은 캡슐을 유리상 탄소(glassy carbon) 및 흑연 펠트(graphite felt)로 충진된 유리상 탄소 반응기를 통해 1400 ℃에서 연소시킨 다음, 흡수 트랩을 이용하여 일산화탄소를 분리시킴으로써, 질소 가스의 간섭을 피할 수 있도록 하였다. 마지막으로 황 동위원소의 측정을 위해, 텅스텐 산화물로 충진된 반응기 내에 버섯 시료를 가하고, 1150 ℃에서 연소시킨 다음, 880 ℃에서 구리 원소를 이용해 생산된 가스를 제거시켰다. 분리한 이산화황은 바로 IRMS 시스템에 가해 황 동위원소 값을 분석하였다.Then, as previously known (non-patent document 07 and non-patent document 13), carbon, nitrogen, oxygen or sulfur in the powder sample of the mushroom fruit body stored using the IRMS system with an elemental analyzer attached Isotope values were measured. In a specific method for measuring carbon isotopes and nitrogen isotopes, a mushroom sample is dispensed and a sealed tin capsule is added into a reactor composed of chromium oxide and silvered copper oxide, and at 1000 ° C 1 After secondary combustion, the temperature was dropped to 650 ° C. to remove oxides from inside the reduced reactor with reduced copper. In the analysis process, nitrogen and carbon dioxide gas produced in the sample were separated and removed. For the measurement of the oxygen isotope, the mushroom sample was dispensed and the sealed silver capsule was burned at 1400 ° C. through a glassy carbon reactor filled with glassy carbon and graphite felt, and then an absorption trap was used. By separating the carbon monoxide, it was possible to avoid the interference of nitrogen gas. Finally, for the determination of the isotope of sulfur, a mushroom sample was added to a reactor filled with tungsten oxide, burned at 1150 ° C, and then the produced gas was removed using a copper element at 880 ° C. The separated sulfur dioxide was directly added to the IRMS system to analyze the sulfur isotope value.

측정한 값에 신뢰도를 얻기 위해, 분석 표적 물질과 연관적으로 합성된 실험실 수준의 표준 물질을 버섯 시료와 혼합하여, 함께 IRMS 분석을 수행하였다. 그런 다음, 상기 표준 물질의 값을 기준으로 분석된 IRMS 결과를 표준화하고, 분석상 발생될 수 있는 변수를 조정하여, 정확한 분석 결과값을 구하였다. 본 발명에서 수행한 통계 분석은 통계 분석 프로그램인 SAS(version 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)에서 일반적인 직선 모델을 사용하여 수행하였으며, 최소 유의차 검정(least significant difference) 분석은 0.05 신뢰도 수준에서 수행하였다.In order to obtain reliability in the measured values, IRMS analysis was performed together by mixing laboratory-level standard materials synthesized with the analyte target material with mushroom samples. Then, the IRMS results analyzed based on the values of the standard materials were standardized, and variables that could be generated in the analysis were adjusted to obtain accurate analysis results. The statistical analysis performed in the present invention was performed using a general linear model in a statistical analysis program SAS (version 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), and the least significant difference analysis was 0.05. It was performed at the reliability level.

최종적으로 계산된 버섯 시료 내 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S는 하기 [수학식 1]을 사용하여, 국제 규격의 표준값과 비교하여 천분율(‰) 단위로 나타내었다. 상기 국제 규격의 표준값은 각각 다음의 값을 사용하였다: 탄소값은 Vienna PeeDee Belemnite의 값, 질소값은 대기 중 질소 가스의 값, 산소값은 Vienna Standard Mean Ocean Water의 값 및 황 값은 Vienna Canyon Diablo Troilite의 값을 사용함(비특허문헌 14). 상기 실험실 수준의 표준 시료에 대해 IRMS 분석값의 상대 표준 편차의 백분율은 각각 δ¹³C =0.6%, δ¹⁵N =1.9%, δ¹⁸O =2.6% 및 δ³⁴S =2.7%인 것으로 보고되어 있다.Δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S in the finally calculated mushroom samples were expressed in thousands (‰) by using the following [Equation 1], compared to the standard values of international standards. The following values were used for the standard values of the above international standards: the carbon value is the value of Vienna PeeDee Belemnite, the nitrogen value is the nitrogen gas value in the atmosphere, the oxygen value is the Vienna Standard Mean Ocean Water value, and the sulfur value is the Vienna Canyon Diablo The value of Troilite is used (Non-Patent Document 14). The percentage of relative standard deviation of the IRMS analysis for the laboratory-level standard sample is reported to be δ ¹³ C = 0.6%, δ ¹⁵ N = 1.9%, δ ¹⁸ O = 2.6% and δ ³⁴ S = 2.7%, respectively. have.

[수학식 1][Equation 1]

상기 수학식 1에서, R _unknown은 대상 시료의 안정 동위원소 비를 나타내며, R _standard는 국제 표준값의 안정 동위원소 비를 나타낸다. 상기 안정 동위원소로 탄소(C), 질소(N), 산소(O) 또는 황(S) 원소를 적용할 수 있으며, 이 때 안정 동위원소 비율은 각각 ¹³C/¹²C, ¹⁵N/¹⁴N, ¹⁸O/¹⁶O 또는 ³⁴S/³²S를 나타낸다.In Equation 1, R _unknown represents the stable isotope ratio of the target sample, and R _standard represents the stable isotope ratio of the international standard value. Carbon (C), nitrogen (N), oxygen (O) or sulfur (S) elements can be used as the stable isotope, wherein the stable isotope ratio is ¹³ C / ¹² C, ¹⁵ N / ¹⁴ N, respectively. , ¹⁸ O / ¹⁶ O or ³⁴ S / ³² S.

그 결과 도 2에서 나타난 바와 같이, 총 6 개 지역에서 재배된 양송이버섯 내 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소 비율이 버섯의 생산 지역에 따라 유의적인 차이를 나타내는 것을 확인하였다. 각각의 동위원소 비율을 박스 플롯으로 도식화하였을 때(도 2), 음성산 버섯은 모든 다른 지역에서 재배된 버섯에 비해 δ¹³C, δ¹⁵N 및 δ³⁴S의 수준이 높은 것으로 확인하였으며, 이에 비해 δ¹⁸O은 다른 지역 간에 유의적인 차이를 나타내지 않는 것으로 확인하였다.As a result, as shown in Figure 2, δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S isotope ratios in mushrooms grown in a total of 6 regions showed significant differences according to the mushroom production region Confirmed. When each isotope ratio is plotted in a box plot (FIG. 2), Eumsan mushrooms are found to have higher levels of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N and δ ³⁴ S compared to mushrooms grown in all other regions. In comparison, it was confirmed that δ ¹⁸ O did not show a significant difference between different regions.

또한, 양송이버섯 시료 내 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 값은 대부분의 버섯 재배 지역 간 정규 분포를 나타내는 것으로 확인하였다. 그러나, 보령산 양송이버섯은 다른 5 개 지역과는 다른 분포 양상을 나타내어, δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S의 비균일한 분포를 나타내었고, 이러한 경향은 양송이 버섯 재배 농가의 재배 방법 및 양송이 버섯의 품종에 따른 유전적 차이에 의한 결과인 것으로 판단하였다(도 2).In addition, it was confirmed that the δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S values in the mushroom mushroom sample showed a normal distribution among most mushroom cultivation regions. However, Boryeongsan mushrooms showed a different distribution pattern from the other 5 regions, and showed a non-uniform distribution of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S. It was judged to be the result of genetic differences according to the cultivation method and mushroom cultivar (Fig. 2).

<2-2> 동일 품종에 대하여 재배 지역에 따른 동위원소 지수 분포 확인<2-2> Isotope Index Distribution by Cultivation Region for the Same Variety

양송이버섯의 품종에 따른 유전적 차이에 의해, 양송이버섯 자실체의 동위원소 비율이 차이를 나타낼 수 있는 것으로 판단하여, 양송이버섯 품종은 새도(Saedo) 및 새한(Saehan) 품종으로 설정해 각각 다른 지역에서 재배된 동일 품종 간 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 차이를 비교하였다(표 2).It is judged that the isotope ratio of the mushroom mushroom body can be different due to genetic differences according to the varieties of the mushroom mushroom, and the mushroom mushroom varieties are set as Saedo and Saehan varieties in different regions. Δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S differences between the same cultivars were compared (Table 2).

그 결과 하기 [표 2]에서 나타난 바와 같이, 동일 품종 간의 δ¹³C, δ¹⁵N 및 δ³⁴S 값은 부여, 논산, 음성, 보령 및/또는 경주에서 재배된 양송이 버섯 시료 간 지역적 분포를 보다 유의적으로 나타내는 것을 확인하였다. 이와 대조적으로, δ¹⁸O 값은 동일 품종에 대하여 지역간 차이가 상대적으로 적은 수준으로 나타나는 것으로 확인하였다(표 2). As a result, as shown in the following [Table 2], δ ¹³ C, δ ¹⁵ N and δ ³⁴ S values between the same varieties show the regional distribution among the mushroom samples grown in Buyeo, Nonsan, Eumseong, Boryeong and / or Gyeongju. It was confirmed that it was significant. In contrast, it was confirmed that the δ ¹⁸ O value was relatively low for regional differences for the same variety (Table 2).

새도 품종의 경우, δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 값은 다른 버섯 시료에 비해 음성산 버섯에서 보다 높은 수준으로 나타났으며, 논산산 버섯에서는 보다 낮은 수준의 동위원소 값을 나타내는 것으로 확인하였다. 또한, 새도 품종에서 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S은, 같은 부여산임에도 불과하고 농가 A 및 E 간에 유의적인 차이를 나타내는 것으로 확인하였다.For Saedo varieties, δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S values were higher in negative mushrooms than in other mushroom samples, and lower isotopes in nonsan mushrooms It confirmed that it showed a value. In addition, it was confirmed that δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S in the Saedo variety are only the same Buyeo acid and show significant differences between farms A and E.

새한 품종의 경우, 부여산에서 δ¹⁸O 및 δ³⁴S 값이 유의적으로 높은 수준을 나타내는 반면, 경주산 버섯에서는 δ¹⁵N가 높은 수준으로 나타나는 것을 확인하였다. 이를 통해, 원산지에 따른 버섯 자실체 내의 동위원소값에서 차이를 나타내는 것은 버섯 재배 방법(재배 배지의 조성, 조사 광량, 습도, 온도 등)과 매우 밀접한 관련이 있으므로, 재배 농가 또는 재배 지역에 의해 동위원소 조성이 유의적으로 변화할 수 있음을 확인하였다.In the case of Saehan varieties, it was confirmed that δ ¹⁸ O and δ ³⁴ S values were significantly higher in Buyeosan, while δ ¹⁵ N was higher in Gyeongju mushroom. Through this, the difference in the isotope value in the mushroom fruiting body according to the origin is very closely related to the mushroom cultivation method (the composition of the cultivation medium, the amount of irradiated light, humidity, temperature, etc.). It was confirmed that the composition can be significantly changed.

재배 지역에 따른, 새도 품종 및 새한 품종의 양송이버섯 내 동위원소 비율Ratio of isotopes in the mushroom mushrooms of Saedo and Saehan varieties according to the cultivation area CultivarCultivar RegionRegion FarmFarm ReplicateReplicate δ¹³C, ‰δ ¹³ C, ‰ δ¹⁵N, ‰δ ¹⁵ N, ‰ δ¹⁸O, ‰δ ¹⁸ O, ‰ δ³⁴S, ‰δ ³⁴ S, ‰ SaedoSaedo BuyeoBuyeo AA n=10 n = 10 -24.58±0.13^y -24.58 ± 0.13 ^y 7.73±0.42^y 7.73 ± 0.42 ^y 20.99±0.59^y 20.99 ± 0.59 ^y 9.69±0.46^y 9.69 ± 0.46 ^y EE n=9 n = 9 -24.25±0.18^x -24.25 ± 0.18 ^x 10.07±1.57^x 10.07 ± 1.57 ^x 24.33±1.10^x 24.33 ± 1.10 ^x 11.99±0.45^x 11.99 ± 0.45 ^x MeanMean n=19 n = 19 -24.42±0.23^b -24.42 ± 0.23 ^b 8.84±1.62^d 8.84 ± 1.62 ^d 22.57±1.91^a 22.57 ± 1.91 ^a 10.78±1.26^b 10.78 ± 1.26 ^b NonsanNonsan HH n=15 n = 15 -24.98±0.14^c -24.98 ± 0.14 ^c 11.60±0.79^c 11.60 ± 0.79 ^c 21.88±0.43^ab 21.88 ± 0.43 ^ab 7.80±0.51^c 7.80 ± 0.51 ^c EumseongEumseong KK n=10 n = 10 -24.07±0.16^a -24.07 ± 0.16 ^a 19.11±0.60^a 19.11 ± 0.60 ^a 21.82±0.27^ab 21.82 ± 0.27 ^ab 15.02±0.14^a 15.02 ± 0.14 ^a GyeongjuGyeongju OO n=10 n = 10 -24.46±0.08^b -24.46 ± 0.08 ^b 18.19±0.53^b 18.19 ± 0.53 ^b 21.44±0.36^b 21.44 ± 0.36 ^b 8.18±0.24^c 8.18 ± 0.24 ^c LSDLSD _{0.05 for region0.05 for region} 0.140.14 0.890.89 0.950.95 0.650.65 SaehanSaehan BuyeoBuyeo DD n=10 n = 10 -24.25±0.18^b -24.25 ± 0.18 ^b 10.93±0.53^c 10.93 ± 0.53 ^c 23.49±1.07^a 23.49 ± 1.07 ^a 10.94±1.06^a 10.94 ± 1.06 ^a BoryeongBoryeong II n=15 n = 15 -23.69±0.11^a -23.69 ± 0.11 ^a 14.97±0.54^b 14.97 ± 0.54 ^b 23.09±0.43^a 23.09 ± 0.43 ^a 9.19±0.31^b 9.19 ± 0.31 ^b GyeongjuGyeongju OO n=10 n = 10 -24.57±0.07^c -24.57 ± 0.07 ^c 17.39±0.63^a 17.39 ± 0.63 ^a 22.14±0.18^b 22.14 ± 0.18 ^b 8.58±0.41^c 8.58 ± 0.41 ^c LSDLSD _{0.05 for region0.05 for region} 0.110.11 0.490.49 0.560.56 0.550.55

플롯 통계 분석을 이용한 원산지 판별방법Method of determining origin using plot statistical analysis

<3-1> 2차원 플롯(2D plot) 통계 분석<3-1> Statistical analysis of 2D plot

δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 값을 이용해 양송이버섯의 원산지를 판별하는 기준을 제시할 수 있는지 재확인하고자, 2차원 플롯을 통해 양송이버섯 내 동위원소 지수의 분포를 시각화 하였다. 본 발명에서 수행한 통계 분석은 통계 분석 프로그램인 SAS(version 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)에서 일반적인 직선 모델을 사용하여 수행하였으며, 최소 유의차 검정(least significant difference) 분석은 0.05 신뢰도 수준에서 수행하였다.To reconfirm whether it is possible to provide a criterion for determining the origin of the mushrooms using the values of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S, the distribution of the isotope index in the mushrooms was visualized through a two-dimensional plot. . Statistical analysis performed in the present invention was performed using a general linear model in the statistical analysis program SAS (version 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), and the least significant difference analysis was 0.05. It was performed at the reliability level.

먼저, 모든 품종을 대상으로 하여, 6 개 지배지역 15 개 농가로부터 각각 수확한 양송이버섯 시료에서 확인한 δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S 동위원소 값을 사용해 2차원 플롯을 작성하였다. 그 결과, 도 3에서 나타난 바와 같이, 6 개 재배지역 간 유의적인 차이를 나타내지 않아, 2차원 플롯으로는 원산지 구분에 대한 신뢰도가 낮을 것으로 보이며, 이에 따라 품종에 따른 유전적 특성의 차이가 영향을 미칠 수 있을 것으로 확인하였다(도 3).First, for all varieties, a two-dimensional plot was created using the δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S isotope values from the mushroom samples harvested from 15 farms in six dominant regions. Did. As a result, as shown in FIG. 3, since there is no significant difference between the six cultivated regions, the 2-D plot seems to have low confidence in origin classification, and accordingly, the difference in genetic characteristics according to varieties is affected. It was confirmed to be insane (Fig. 3).

이에, 동일 품종에 대하여 2차원 플롯을 작성하였을 때에는 동위원소 비율의 분포가 유의적인 의미를 나타낼 수 있는지 확인하고자, 새도 품종 및 새한 품종을 대상으로 각각 이차원 플롯을 작성하였다. 그 결과, 새도 품종 및 새한 품종 모두 부여, 논산, 음성, 보령 또는 경주의 재배 지역 간에 δ¹⁵N 및 δ³⁴S 값을 변수로 하는 2차원 플롯에서 유의적으로 구분이 가능한 분포를 나타내는 것으로 확인하였다(도 4 및 도 5). 이와 함께, 부여산 양송이버섯의 경우, 재배 농가 A 및 농가 E의 차이에 따라, 동일 지역에서 재배된 양송이버섯이라고 하더라도 다차원 플롯에서 구분된 분포를 나타내는 것으로 확인하였다(도 4d).Thus, when a two-dimensional plot was created for the same variety, to determine whether the distribution of the isotope ratio could have a significant meaning, a two-dimensional plot was created for each new breed and new breed. As a result, it was confirmed that both the Saedo and Saehan varieties show a distribution that is significantly distinguishable in a two-dimensional plot with δ ¹⁵ N and δ ³⁴ S values as variables between the cultivated regions of Buyeo, Nonsan, Eumseong, Boryeong, or Gyeongju. (Figs. 4 and 5). Along with this, in the case of the mushrooms from Buyeo-san, it was confirmed that the mushrooms cultivated in the same region showed a distinct distribution in a multi-dimensional plot according to the difference between farms A and E in cultivation (FIG. 4D).

<3-2> 3차원 플롯(three-dimensional plot) 통계 분석<3-2> Three-dimensional plot statistical analysis

2차원 플롯을 통해, 동일 품종에 대해 δ¹⁵N 및 δ³⁴S 값을 변수로 하는 플롯을 작성하였을 때 재배 지역간의 유의적인 구분이 가능함을 확인하여, 3 종류의 동위원소를 변수로 하는 3차원 플롯을 작성해, 새도 품종 및 새한 품종에서 양송이버섯의 원산지 구분에 유의성을 가지는지 확인하고자 하였다.Through a two-dimensional plot, when plotting the δ ¹⁵ N and δ ³⁴ S values for the same variety as variables, it was confirmed that significant distinction between cultivated regions was possible, and that three-dimensional isotopes were used as variables. By creating a plot, the purpose of this study was to check whether the saedo and saehan varieties have significance in the distinction between the origins of mushrooms.

그 결과, 도 6에서 나타난 바와 같이 δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S의 조합의 변수로 하여 새도 품종 및 새한 품종에 대해 각각의 플롯 분포를 확인하였을 때, 양송이버섯 재배 지역에 따른 원산지 구별이 가능한 수준임을 확인하였다. 이에, 동위원소 비율의 차이를 양송이버섯 재배지 판단을 위한 마커로 적용할 수 있을 것임을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 6, when each plot distribution was confirmed for Saedo varieties and Saehan varieties as variables of the combination of δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S, the origin of the mushroom cultivation region It was confirmed that the level was distinguishable. Thus, it was confirmed that the difference in the isotope ratio could be applied as a marker for judging the mushroom cultivation site.

다변량 통계 분석법을 이용한 원산지 판별방법Origin determination method using multivariate statistical analysis

<4-1> 재배 지역의 차이에 따른 다변량 통계 분석<4-1> Multivariate statistical analysis according to differences in cultivated regions

다차원 플롯 분석을 통해 양송이버섯의 자실체 내 동위원소의 비율을 통해 원산지 판별이 가능할 것으로 확인하였으므로, 이의 신뢰도를 보다 더하기 위해, 주성분 분석(principal component analysis, PCA) 및 부분최소자승판별 분석(partial least-squares discriminate analysis, PLS-DA)을 수행하였다. PCA 및 PLS-DA는 집단의 크기가 큰 생물학적 통계 자료의 차원수를 감소시켜 통계 자료의 패턴을 가시화할 수 있는 화학 계량적 접근 방법으로 사용될 수 있다. 이러한 PCA 및 PLS-DA 방법을 통해 시료 간의 차이를 시각화할 수 있는 스코어 플롯 및 집단 구분을 명확하게 제시할 수 있는 로딩 플롯을 이용하여, 결과적으로 시각적 패턴을 제공할 수 있다.Since it was confirmed through the multidimensional plot analysis that the origin can be determined through the ratio of isotopes in the fruiting body of the mushroom, the principal component analysis (PCA) and partial least-order analysis (partial least-) squares discriminate analysis (PLS-DA) was performed. PCA and PLS-DA can be used as chemical and quantitative approaches to visualize patterns in statistical data by reducing the number of dimensions in large-scale biological statistics. Through this PCA and PLS-DA method, a score plot capable of visualizing differences between samples and a loading plot capable of clearly presenting the population classification can be used to provide a visual pattern as a result.

PCA 및 PLS-DA 분석에 있어서, 먼저 6 개 재배지역의 15 개 재배 농가에서 재배된 양송이버섯을 모집단 대상으로 하여 분석을 수행하였다.In the analysis of PCA and PLS-DA, first, the mushrooms grown in 15 cultivated farms in 6 cultivated regions were analyzed for the population.

구체적으로, 본 발명에서 수행한 통계 분석은 통계 분석 프로그램인 SAS(version 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)에서 일반적인 직선 모델을 사용하여 수행하였으며, 최소 유의차 검정(least significant difference) 분석은 0.05 신뢰도 수준에서 수행하였다. 또한, 주성분 분석(PCA) 및 부분최소자승판별 분석(PLS-DA)은 대상 시료 버섯 품종의 유전적 특징을 고려하거나 배재한 조건에서 양송이 버섯의 지역적 차이를 구분하기 위해 수행하였다. PCA 분석은 통계 분석 프로그램 SIMCA-P(version 13.0; Umetrics, Umea, Sweden)를 이용해 수행하였다. δ¹³C, δ¹⁵N, δ¹⁸O 및 δ³⁴S의 각각의 분석 결과는 먼저 단위 변수를 조절한 후 다변량 분석을 수행하였다.Specifically, the statistical analysis performed in the present invention was performed using a general linear model in the statistical analysis program SAS (version 9.2; SAS Institute Inc., Cary, NC, USA), and the least significant difference test Analysis was performed at a 0.05 confidence level. In addition, main component analysis (PCA) and partial least-decision determination (PLS-DA) were performed to consider the genetic characteristics of the target sample mushroom varieties or to distinguish regional differences in mushrooms under conditions of exclusion. PCA analysis was performed using the statistical analysis program SIMCA-P (version 13.0; Umetrics, Umea, Sweden). As for the results of each analysis of δ ¹³ C, δ ¹⁵ N, δ ¹⁸ O, and δ ³⁴ S, multivariate analysis was performed after first adjusting the unit variables.

그 결과, 도 7에서 나타난 바와 같이 PCA에서 가장 높은 점수를 나타내는 2 가지 성분은 전체 변수 중 61.8%를 차지하였으며, 음성산 버섯을 제외하고, 원산지 간 버섯의 구분이 불분명한 것으로 확인하였다. PCA 모델의 정확성을 반영하여 통계 분석 모델에서 분산비율을 나타내는 척도로서, R_X ² 값을 사용한다. 본 발명의 PCA 모델에서 전체 R_X ²값은 0.618이나, PCA 스코어 플롯에서는 다차원 분석 데이터의 시각화가 유의적으로 이루어지지 않은 것으로 확인하였다(도 7a).As a result, as shown in FIG. 7, the two components showing the highest score in PCA accounted for 61.8% of the total variables, and it was confirmed that the distinction between mushrooms between origins was not clear, except for the negative mushrooms. Reflecting the accuracy of the PCA model, as a measure of the dispersion rate in the statistical analysis model, and uses the R value _X ^2. In the PCA model of the present invention, the total R _X ² value was 0.618, but it was confirmed that the visualization of the multidimensional analysis data was not significantly made in the PCA score plot (FIG. 7A).

이에, 지도식의 패턴 인식 방법으로서 사용되는 분석 방법인 PLS-DA 분석을 추가로 수행하여, 버섯 재배 지역 간의 차이를 보다 명확하게 나타내고자 하였다(도 7b). 그 결과, 대구 및 보령을 제외한, 다른 재배 지역은 각 지역간의 분석 결과의 차이를 나타내는 것으로 확인하였다. PLS-DA 모델에 분석 결과를 적용하였을 때, PCA 모델만을 수행하였을 때보다 정확도가 개선되어, R_X ² 값이 0.548를 나타내는 것으로 확인하였다. PLS-DA 모델에 의해 예측되는 결과값에서 분산비율을 나타나는 척도로 이용되는 예측력(predictive ability) 값인 Q² 값을 확인하였을 때, 0.276인 것으로 확인하였다. Q² 값이 0.5 이상인 경우 좋은 예측력을 나타내는 것으로 간주할 수 있으므로, 본 발명의 분석 결과는 PLS-DA 모델을 통해 확인한 6 개 지역의 버섯 원산지 판별에 있어서는 낮은 예측력을 나타내는 것으로 판단하였다(도 7b). 또한, VIP(variable importance in the projection) 점수는 PLS-DA 통계 분석 모델에서 주요 변수를 확인하는 기준으로 사용될 수 있다. 이에 VIP 값을 확인한 결과, δ¹⁵N 및 δ³⁴S가 각각 VIP 값을 1.49 및 1.21로 나타내어, 양송이버섯의 원산지 구분을 위한 PLS-DA 모델에서 주요 변수로 작용하는 것을 확인하였다(도 7c).Accordingly, PLS-DA analysis, which is an analysis method used as a map pattern recognition method, was additionally performed to more clearly show differences between mushroom growing regions (FIG. 7B). As a result, it was confirmed that other cultivated regions except Daegu and Boryeong showed differences in analysis results between regions. When applying the analysis results to the PLS-DA model, it was confirmed that the accuracy was improved, and the R _X ² value was 0.548, compared to when only the PCA model was performed. When the value predicted by the PLS-DA model was used to measure the variance ratio, the predictive ability value Q ² was confirmed to be 0.276. If the Q ² value is 0.5 or more, it can be regarded as indicating good predictive power, and thus, the analysis results of the present invention were judged to show low predictive power in determining the origin of mushrooms in 6 regions identified through the PLS-DA model (FIG. 7B). . In addition, the variable importance in the projection (VIP) score can be used as a criterion for identifying key variables in the PLS-DA statistical analysis model. As a result of checking the VIP value, it was confirmed that δ ¹⁵ N and δ ³⁴ S represent VIP values as 1.49 and 1.21, respectively, and act as a main variable in the PLS-DA model for classifying the origin of the mushrooms (FIG. 7C).

<4-2> 새도 품종 및 새한 품종에 대한 다변량 통계 분석<4-2> Multivariate statistical analysis of Saedo varieties and Saehan varieties

원산지 구분에 있어서, 유전적 특징이 영향을 미치는 것으로 확인하였으므로, 보다 명확한 판별 모델을 확립하기 위해, 각각의 재배 지역에서 생산된 새도 품종 및 새한 품종을 대상으로, 동위원소 분석 결과를 사용해 다시 한번 PLS-DA 분석을 수행하였다.Since it was confirmed that genetic characteristics influenced the classification of origin, in order to establish a clearer discriminant model, the isotope analysis results of the cultivars of Saedo and Saehan produced in each cultivation area were used once again. PLS-DA analysis was performed.

그 결과 도 8에서 나타난 바와 같이, 새도 및 새한 품종을 모두 사용한 PLS-DA 분석을 통해, 가장 높은 순위의 PC는 전체 변수 중 ~82%로 나타나, 각 원산지 간에 분명한 지역적 차이를 나타내는 것으로 확인하였다. 본 모델의 정확성(quality) 지표는 높은 수준을 나타내어, 새도 품종이 R_x ² = 0.798 및 Q² = 0.563을 나타내고, 새한 품종에서는 R_x ² = 0.819 및 Q² = 0.894으로 나타난 것으로 확인하였다(도 8a). 추가로, 새도 품종에 대한 로딩 플롯에서 δ³⁴S 값이 보다 높은 수준으로 나타나, δ³⁴S 값은 다른 지역에서 재배된 버섯과 음성산 버섯을 구분하기 위한 주요 요인으로 작용할 수 있음을 확인하였다(도 8a). 새한 품종에 대해서는 δ¹⁵N 값이 높은 수준으로 나타나, 경주산 버섯을 판별하기 위한 주요 변수로 작용할 수 있음을 확인하였다(도 8b).As a result, as shown in FIG. 8, through PLS-DA analysis using both Saedo and Saehan varieties, the highest ranking PC was found to be ~ 82% of all variables, indicating that there was a clear regional difference between each origin. . The quality index of this model was high, indicating that the new varieties showed R _x ² = 0.798 and Q ² = 0.563, and the Saehan varieties showed R _x ² = 0.819 and Q ² = 0.894 ( Figure 8a). In addition, it was confirmed that the δ ³⁴ S value was higher in the loading plot for the Saedo variety, and that the δ ³⁴ S value may serve as a major factor for distinguishing mushrooms grown in different regions from Mushrooms of Eumseong. (FIG. 8A). For the Saehan variety, the value of δ ¹⁵ N was shown to be high, and it was confirmed that it could act as a main variable for discriminating Mt.

전체적으로, 본 발명에서는 버섯 재배 지역의 판별에 가장 중요한 요인을 확인하였다. 새도 품종에 대해서는 δ¹⁵N 동위원소 비율이 가장 주요 요인으로 작용할 수 있고, 이 때의 VIP 스코어는 1.31임을 확인하였다. 또한, 새한 품종에 대하여는 δ¹³C 동위원소 비율이 가장 주요 요인으로 작용할 수 있으며, 이 때의 VIP 스코어는 1.38인 것으로 확인하였다. 이와 함께, 농가 A 및 농가 H 간에서 확연한 차이가 나타난 바와 같이, PLS-DA 모델을 통해 버섯 재배 농가 간의 유의적인 군집 분류(clustering)가 가능함을 확인하였다(R_x ² = 0.8222 및 Q² = 0.448). δ¹⁵N의 VIP 스코어가 1.11인 것은, 본 발명의 버섯 재배 농가 간 구분이 가능하며, 이를 위한 기준으로 δ¹⁵N를 사용할 수 있음을 나타낸다(도 8c).Overall, in the present invention, the most important factors were identified for discrimination of mushroom growing regions. It was confirmed that the δ ¹⁵ N isotope ratio may be the most important factor for the Saedo variety, and the VIP score at this time is 1.31. In addition, for the Saehan variety, the δ ¹³ C isotope ratio may act as the most important factor, and the VIP score at this time was confirmed to be 1.38. In addition, it was confirmed that significant clustering (clustering) between mushroom-cultivated farmers was possible through the PLS-DA model, as a distinct difference was seen between farm A and farm H (R _x ² = 0.8222 and Q ² = 0.448). ). The VIP score of δ ¹⁵ N is 1.11, indicating that it is possible to distinguish between the mushroom cultivation farms of the present invention, and δ ¹⁵ N can be used as a reference for this (FIG. 8C).

Claims

i) measuring the nitrogen isotope (δ ¹⁵ N) ratio and the sulfur isotope (δ ³⁴ S) ratio of the mushroom mushroom ( Agaricus bisporus ) fruiting sample, respectively;
ii) measuring the nitrogen isotope index and the sulfur isotope index using the nitrogen isotope ratio and the sulfur isotope ratio measured in step i), respectively, according to the following [Equation 1]; And
iii) comparing the isotope index measured in step ii) to determine the origin of the mushrooms, the method of determining the origin of the mushrooms
The origin of the mushrooms mushroom is any one selected from the group consisting of Buyeo, Nonsan, Boryeong, Eumseong, Daegu and Gyeongju, how to determine the origin of mushrooms mushrooms:
[Equation 1]
δ, ‰ = [( R _unknown - R _standard ) / R _standard ]
(In Equation 1, R _unknown represents the stable isotope ratio of the target sample, and R _standard represents the stable isotope ratio of the international standard value. Nitrogen or sulfur elements can be applied as the stable isotope. Stable isotope ratios represent ¹⁵ N / ¹⁴ N or ³⁴ S / ³² S, respectively.)

The method according to claim 1, wherein the mushroom mushroom of step i) is a Saedo cultivar, a Saehan cultivar, or both.

The method of claim 1, wherein the determination of step iii) is
When the nitrogen isotope index is 7.0 to 12.0 ‰ and the sulfur isotope index is 9.0 to 11.0 ‰, it is determined as a mushroom of the mushroom of Buyeosan;
When the nitrogen isotope index is 11.0 to 13.0 ‰ and the sulfur isotope index is 6.0 to 8.0 ‰, it is determined as a mushroom of Nonsan Mountain;
When the nitrogen isotope index is 12.0 to 15.0 ‰ and the sulfur isotope index is 3.0 to 10.0 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms;
When the nitrogen isotope index is 18.0 to 20.0 ‰ and the sulfur isotope index is 14.5 to 15.5 ‰, it is determined as a mushroom of Mt.
When the nitrogen isotope index is 10.0 to 11.0 ‰ and the sulfur isotope index is 7.0 to 11.0 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu;
When the nitrogen isotope index is 17.0 to 19.0 ‰ and the sulfur isotope index is 8.0 to 9.0 ‰, it is distinguished as a mushroom from Gyeongju-san;

The method of claim 1, wherein the isotope ratio of step i) is measured using an isotope ratio mass spectrometry (IRMS).

According to claim 1, Characterized in that it further comprises the steps a) and b), the method of determining the origin of mushrooms mushrooms:
a) measuring the oxygen isotope (δ ¹⁸ O) ratio and the carbon isotope (δ ¹³ C) ratio of the mushroom mushroom fruiting body sample, respectively;
b) measuring the oxygen isotope index and the carbon isotope index using the oxygen isotope ratio and the carbon isotope ratio measured in step a), respectively, according to the following [Equation 2]:
[Equation 1]
δ, ‰ = [( R _unknown - R _standard ) / R _standard ]
(In Equation 1, R _unknown represents the stable isotope ratio of the target sample, R _standard represents the stable isotope ratio of the international standard value. Carbon or oxygen elements can be applied as the stable isotope. Stable isotope ratios represent ¹³ C / ¹² C or ¹⁸ O / ¹⁶ O, respectively.)

According to claim 5, the result of the measurement in step b),
When the oxygen isotope index is 21.0 to 23.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.2 to -24.7 ‰, it is determined as a mushroom of the mushroom of Buyeosan;
When the oxygen isotope index is 21.5 to 22.5 ‰ and the carbon isotope index is -25.0 to -24.4 ‰, it is determined as a mushroom of Nonsan Mountain;
When the oxygen isotope index is 22.5 to 25.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.6 to -23.6 ‰, it is determined as Boryeongsan mushrooms;
When the oxygen isotope index is 21.6 to 22.0 ‰ and the carbon isotope index is -24.2 to -23.9 ‰, it is determined as a mushroom of Mt.
When the oxygen isotope index is 21.0 to 22.5 ‰ and the carbon isotope index is -24.5 to -24.0 ‰, it is determined as a mushroom from Daegu;
When the oxygen isotope index is 21.0 to 22.4 ‰ and the carbon isotope index is -24.6 to -24.4 ‰, it is determined as a mushroom from Gyeongju-san;

i) measuring the nitrogen isotope (δ ¹⁵ N) ratio and the sulfur isotope (δ ³⁴ S) ratio of the samples of Saedo cultivar mushroom (Agaricus bisporus) or Saehan cultivar mushroom mushroom;
ii) measuring the nitrogen isotope index and the sulfur isotope index using the nitrogen isotope ratio and the sulfur isotope ratio measured in step i), respectively, according to the following [Equation 1];
iii) performing a partial least-squares discriminate analysis (PLS-DA) on the isotope index measured in step ii); And
iv) determining the origin of the mushrooms using the analysis result of the partial least-minority determination performed in step iii) as a method of determining the origin of the mushrooms
When the mushroom is a new breed, the origin is any one selected from the group consisting of Buyeo, Nonsan, Eumseong and Gyeongju,
If the mushroom mushroom is a new breed, the country of origin is any one selected from the group consisting of Buyeo, Boryeong and Gyeongju, how to determine the origin of the mushroom mushroom:
[Equation 1]
δ, ‰ = [( R _unknown - R _standard ) / R _standard ]
(In Equation 1, R _unknown represents the stable isotope ratio of the target sample, and R _standard represents the stable isotope ratio of the international standard value. Nitrogen or sulfur elements can be applied as the stable isotope. Stable isotope ratios represent ¹⁵ N / ¹⁴ N or ³⁴ S / ³² S, respectively.)

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