KR101970691B1 - Cell counting and cell size measuring system with a fluid focusing channel - Google Patents
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Abstract
본 발명은 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 관한 것으로서, 유체에 함유된 세포를 일 방향으로 집속되게 유도함으로써 세포의 계수 및 세포의 크기를 정밀하게 측정할 수 있는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 관한 것이다.
본 발명은 측정대상 세포가 함유된 샘플이 일 방향으로 유동할 수 있게 형성되고, 상기 세포에 광이 조사될 수 있게 형성된 유체포커싱채널부와; 상기 유체포커싱채널부에 광을 제공하기 위한 광원부와; 상기 광원부에서 광출되어 상기 유체포커싱채널부를 경유하는 광을 수신하기 위한 수광부와; 상기 광원부에서 방출되는 광이 상기 유체포커싱채널부를 경유하도록 안내 및 상기 유체포커싱채널부를 경유한 광을 상기 수광부로 안내하는 광학계와; 상기 수광부에 수신된 광을 신호처리하는 신호처리부와; 상기 신호처리부에 의해 처리된 광신호를 이용하여 세포의 수를 카운트 및 세포의 크기를 측정 및 분석하는 분석부;를 구비한다.The present invention relates to a cell counting and cell-size measuring system having a fluid focusing channel unit, and more particularly, to a fluid-focusing channel measuring method and apparatus for measuring a cell count and a cell size accurately by inducing cells contained in a fluid to be concentrated in one direction, And a system for measuring cell size and cell size.
The present invention relates to a fluorescence microscope comprising a fluid focusing channel part formed so that a sample containing a measurement target cell can flow in one direction and is formed such that light can be irradiated to the cell; A light source unit for providing light to the fluid focusing channel unit; A light receiving unit for receiving the light emitted from the light source unit and passing through the fluid focusing channel unit; An optical system for guiding the light emitted from the light source unit to pass through the fluid focusing channel unit and guiding the light passed through the fluid focusing channel unit to the light receiving unit; A signal processing unit for signal processing the light received by the light receiving unit; And an analyzer for counting the number of cells and measuring and analyzing the size of the cells using the optical signal processed by the signal processor.
Description
본 발명은 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 관한 것으로서, 유체에 함유된 세포를 일 방향으로 집속되게 유도함으로써 세포의 계수 및 세포의 크기를 정밀하게 측정할 수 있는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 관한 것이다.The present invention relates to a cell counting and cell-size measuring system having a fluid focusing channel unit, and more particularly, to a fluid-focusing channel measuring method and apparatus for measuring a cell count and a cell size accurately by inducing cells contained in a fluid to be concentrated in one direction, And a system for measuring cell size and cell size.
주지된 바와 같이, 바이오 관련 마이크로 소자분야, 예를 들면 랩온어칩(Lab on a chip) 분야는 소형화, 저가격화, 집적화, 자동화 및 실시간 진단 기능을 구현하기 위하여 현재에도 다양한 연구가 진행되고 있다. As is well known, various researches are currently being carried out in the field of bio-related micro devices, for example, in the field of lab-on-a-chip, in order to realize miniaturization, low cost, integration, automation and real-
그 중에서 생화학적 분석을 위한 바이오칩 또는 바이오센서에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 이러한 바이오칩 또는 바이오센서는 최소량의 샘플을 사용하여 정확도가 높은 분석을 수행할 수 있고, 저렴한 비용으로 제작될 수 있는 것이 바람직하며, 근래에는 마이크로칩 형태의 유체 채널, 즉 미세 유체채널에 대한 관심이 증가하고 있다. Among them, biochips or biosensors for biochemical analysis are being actively researched. It is desirable that such a biochip or a biosensor can perform analysis with high accuracy using a minimum amount of samples and can be manufactured at low cost. In recent years, interest in a microchip type fluid channel, that is, a microfluidic channel .
생화학적 분석의 일 예인 유세포 계수법(Flow Cytometry)은, 유동세포계수법으로 불리기도 하는데, 유액상태의 입자나 세포가 감지 영역을 통과할 때 각각의 입자나 세포의 특성(입자나 세포의 수, 크기, 세포 내부의 조성 정도 등)을 분석하는 방법을 말하며, 이를 위한 장치를 유세포 계수기라 한다. Flow cytometry, which is an example of biochemical analysis, is sometimes referred to as flow cytometry. When particles or cells in a liquid state pass through a sensing region, the characteristics of each particle or cell (the number of particles, , The degree of composition of the interior of the cell, etc.), and the device for this is called a flow cell counter.
미세 유체역학적 방법으로 유세포 계수를 구현하기 위해서 가장 이상적인 세포 집속의 형태는 3차원 세포집속(3 dimensional cell focusing, 시스유체가 유세포의 둘레를 감싸서 유동하는 구조의 세포집속, 즉 유체의 중심에 유세포가 집속된 형태)인데, 구현이 불가능한 것은 아니지만 실제로 구현하기가 매우 힘들고 구현을 위해서는 고가의 비용이 소요되는 실정이다. In order to realize the flow cytometry by the microfluidic method, the most ideal type of cell focusing is three dimensional cell focusing, in which the cell concentration of the cis-fluid flows around the circumference of the flow cell, that is, But it is not impossible to implement, but it is very difficult to implement and it is expensive to implement.
특히, 미세가공기술(microfabrication Technology)을 이용하여 3차원 세포집속을 구현하는 것은 매우 어려우며, 이러한 미세가공기술을 이용한 3차원 세포집속은 2단계 내지 3단계의 단차를 가지는 멀티 레이어(multi-layer) 구조의 마이크로채널을 사용해야 하기 때문에, 장치가 복잡해지고 제조가 힘들며 제조비용이 비싸다는 문제점이 있다. In particular, it is very difficult to realize three-dimensional cell focusing using microfabrication technology. Three-dimensional cell focusing using such a microfabrication technique is a multi-layered process having two or three steps, There is a problem that the apparatus is complicated, the manufacturing is difficult, and the manufacturing cost is high.
이에 대부분의 미세유체채널(Microfluidic Channel) 기반 유세포분석기(유세포계수기)는 유세포의 양측에 시스 유체(Sheath Fluid)를 흐르게 하여 채널의 양측을 흐르는 시스유체의 사이에 유세포를 집속하는 구조(채널의 중앙부로 유세포를 집속하는 구조)인 2차원 세포 집속(Focusing)를 이용하고 있다. Most microfluidic channel-based flow cytometry analyzers (flow cytometry) are designed to flow sheath fluid on both sides of the flow cytometry to concentrate flow cells between the cis-fluids flowing on both sides of the channel Which focuses the flow cells on the cell surface (focusing).
따라서, 유세포 샘플을 2차원적으로 집속하여 채널의 Z방향(유체의 유동방향에 수직한 방향)에서 조사되는 광원(대부분 laser)에 대부분의 샘플을 노출시킬 수 있지만, Z방향으로 동시에 여러 개의 세포가 들어올 경우 세포측정오차(세포의 Coincidence로 인한 doublet)가 많이 생기게 된다.Therefore, it is possible to expose most of the sample to the light source (mostly laser) irradiated in the Z direction of the channel (the direction perpendicular to the flow direction of the fluid) by two-dimensionally focusing the flow cell sample, (Doublet due to the coincidence of the cell) occurs when the cell is introduced.
그리고 유세포 샘플이 유동하는 유체 채널의 높이를 낮게 할 경우, 즉 미세유체채널의 높이를 낮게 할 경우에는 더블릿(Doublet)으로 인한 오차는 줄일 수 있지만, 낮은 채널높이로 인하여 채널 막힘(Channel clogging) 현상과 입구(유세포 주입구)에서의 세포침전(Cell sedimentation) 현상이 발생하게 된다.When the height of the fluid channel through which the flow cell sample flows is lowered, that is, when the height of the microfluidic channel is lowered, the error due to the doublet can be reduced. However, channel clogging due to the lower channel height, And the phenomenon of cell sedimentation occurs at the entrance (flow cell inlet).
현재에는 FACS(Fluorescence Activated Cell Sorter)라는 공법으로 상용화된 장비도 많이 개발되어 있으며, 상기 유세포 계수에서 PBS(Phosphate Buffered Saline)나 물과 같은 세포 무해성 유체(Biocompatible fluid)인 시스 유체(Sheath flows)를 이용하여 유세포를 집속시키는 방법이 주로 사용되고 있고, 미세유체 시스템의 발전을 통하여 미세유체채널을 통한 유세포 계수법이 개발되고 있다.At present, many commercialized devices using a fluorescence activated cell sorter (FACS) method have been developed. In the flow cytometry, sheath flows, which are biocompatible fluids such as PBS (Phosphate Buffered Saline) and water, And flow cytometry using a microfluidic channel has been developed through development of a microfluidic system.
이러한 미세유체채널을 통한 유세포 계수법은 과거에 비해 적은 양의 샘플로 유세포 계수가 가능케 되었고 더 높은 민감도(Signal-to-noise)를 보여주므로 최근 많은 각광을 받고 있다. 그리고, 미세유체채널을 통한 유세포계수법은 값싸게 검사를 구현할 수 있는 등의 장점을 지니고 있으나, 기존의 유체 채널, 즉 유세포 계수기의 미세유체채널에서는 다음과 같은 문제점들이 있다. Flow cytometry using these microfluidic channels has received a lot of attention in recent years because it allows flow cytometry with a smaller amount of samples than in the past and exhibits higher sensitivity (signal-to-noise). In addition, the flow cytometry method using a microfluidic channel has advantages such as being able to implement a low-cost inspection. However, the following problems occur in a microfluidic channel of a conventional fluid channel, that is, a flow cytometer.
먼저, 상기 유체 채널은 채널의 단면적이 좁아지는 지역에서 세포가 뭉쳐서 채널을 막아 유체의 흐름을 방해하는 문제가 발생한다. 특히 민감도를 높이기 위해 채널의 폭을 줄일수록 이러한 문제점이 분명하게 나타난다. 참고로, 유체 채널의 폭과 관계되는 집속도(Focusing flow)와 세포 입자 크기의 비(ratio)는 계수 정확도에 영향을 미치는 인자로서, 채널의 폭이 넓을수록 민감도(sensitivity)가 저하된다는 것은 세포 입자가 광원(light source)에 정확이 광학적으로 포커싱(optically focusing) 되지 않을 확률이 높다는 것을 의미한다.First, in the region where the cross-sectional area of the channel is narrowed, the fluid channel is clogged with cells to block the flow of the fluid. This problem is evident especially as the channel width is reduced to increase the sensitivity. For reference, the focusing rate and the cell particle size ratio, which are related to the width of the fluid channel, are factors that influence the accuracy of the counting. As the width of the channel becomes wider, the sensitivity decreases. Which means that there is a high probability that the particles will not be optically focused accurately to the light source.
또 다른 문제점으로는, 유세포 계수법에서 세포를 정확히 계수하기 위해서는 샘플로 투입되는 세포의 손실을 최소화해야 하나, 기존 미세유체채널을 이용한 유세포 계수법은 여전히 많은 세포 손실이 나타나는데, 그 이유는 세포가 들어오는 샘플 주입구 영역에서 세포 침전이 크게 발생하기 때문이다. 이러한 문제 때문에 감지 영역에서의 세포 계수에 많은 오류가 나타나고 이에 따라 계수의 정확도도 떨어지는 문제점이 있다. Another problem is that to accurately count the cells in the flow cytometry method, the loss of the cells injected into the sample should be minimized, but the flow cytometry using the conventional microfluidic channel still shows a lot of cell loss because the sample This is because cell precipitation occurs at the injection site. Because of this problem, many errors occur in the cell counting in the detection area, and the accuracy of the coefficient is also deteriorated.
즉, 기존의 미세유체채널은 유세포 샘플이 주입되는 샘플 주입구 및 그 주변 영역, 더 나아가 유세포 샘플이 유동하는 채널(메인 유동채널)에 유세포 샘플의 침전이 쉽게 일어나며, 결과적으로 감지 영역에서 검출되는 유세포의 수가 줄어들게 하는 결과를 야기함으로써 측정 오류를 발생시키는 문제점이 있다.That is, in the conventional microfluidic channel, precipitation of flow cell samples easily takes place in the sample inlet where the flow cell sample is injected and its peripheral region, and furthermore, in the channel (main flow channel) in which the flow cell sample flows, Resulting in a measurement error.
본 발명은 상기와 같은 종래의 문제를 해결하기 위한 것으로서, 유체가 흐르는 채널의 단면적이 좁아지는 지역에서 세포가 뭉쳐서 채널을 막아 유체의 흐름을 방해하는 문제를 해결 및 세포가 들어오는 샘플 주입구 영역에서 세포의 침전을 억제함으로써 투입되는 세포의 손실을 최소화함으로써 세포 계수 및 세포 사이즈의 측정 정밀도 및 정확도를 높일 수 있는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템을 제공하는 데 그 목적이 있다.Disclosure of the Invention The present invention has been made to solve the above-mentioned conventional problems, and it is an object of the present invention to solve the problem that cells clog the channel to obstruct the flow of fluid in a region where the cross- The present invention provides a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit for minimizing the loss of injected cells by suppressing the sedimentation of the cells, thereby increasing the precision and accuracy of measurement of cell count and cell size.
상기와 같은 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템은 측정대상 세포가 함유된 샘플이 일 방향으로 유동할 수 있게 형성되고, 상기 세포에 광이 조사될 수 있게 형성된 유체포커싱채널부와; 상기 유체포커싱채널부에 광을 제공하기 위한 광원부와; 상기 광원부에서 광출되어 상기 유체포커싱채널부를 경유하는 광을 수신하기 위한 수광부와; 상기 광원부에서 방출되는 광이 상기 유체포커싱채널부를 경유하도록 안내 및 상기 유체포커싱채널부를 경유한 광을 상기 수광부로 안내하는 광학계와; 상기 수광부에 수신된 광을 신호처리하는 신호처리부와; 상기 신호처리부에 의해 처리된 광신호를 이용하여 세포의 수를 카운트 및 세포의 크기를 측정 및 분석하는 분석부;를 구비하고, 상기 유체포커싱채널부는 유체가 흐르는 샘플 채널과, 시스 유체가 흐르는 시스 플로우 채널과, 샘플과 시스 유체가 합쳐져 포커싱된 샘플의 입자가 흐르는 포커싱 채널 및 포커싱 채널의 일부 중 상기 광원부에서 방출되는 빛이 조사되는 부분을 확장하여 형성한 확장 채널을 포함하는 것을 특징으로 한다.According to an aspect of the present invention, there is provided a system for measuring cell count and cell size, comprising a fluid focusing channel unit according to the present invention, wherein a sample containing a measurement target cell is formed to flow in one direction, A fluid focusing channel portion formed to be able to be rotated; A light source unit for providing light to the fluid focusing channel unit; A light receiving unit for receiving the light emitted from the light source unit and passing through the fluid focusing channel unit; An optical system for guiding the light emitted from the light source unit to pass through the fluid focusing channel unit and guiding the light passed through the fluid focusing channel unit to the light receiving unit; A signal processing unit for signal processing the light received by the light receiving unit; And an analysis unit for counting the number of cells and measuring and analyzing the size of the cells using the optical signal processed by the signal processing unit, wherein the fluid focusing channel unit includes a sample channel through which the fluid flows, And an enlarged channel formed by expanding a portion of the focusing channel through which the particles of the sample focused by the sample and the cis-fluid flow and the portion of the focusing channel through which the light emitted from the light source is irradiated.
상기 광학계는 일 단이 상기 광원부에 결합되는 제1광섬유와, 상기 제1광섬유의 타 단에 결합되는 제1콜리메이터와, 상기 제1콜리메이터에서 출력되는 광을 상기 유체포커싱채널부로 반사시키는 제1반사부와, 일 단이 상기 수광부에 결합되는 제2광섬유와, 상기 제2광섬유의 타 단에 결합되는 제2콜리메이터와, 상기 유체포커싱채널부를 경유하는 광을 상기 제2콜리메이터로 반사시키는 제2반사부를 포함하는 것을 특징으로 한다.The optical system includes a first optical fiber having one end coupled to the light source unit, a first collimator coupled to the other end of the first optical fiber, a first collimator for reflecting light output from the first collimator to the fluid focusing channel unit, A second collimator coupled to the other end of the second optical fiber; a second collimator for reflecting light passing through the fluid focusing channel to the second collimator; And the like.
상기 광원부와 상기 제1콜리메이터 사이의 상기 제1광섬유에 설치되는 제1광커플러와, 상기 수광부와 상기 제2콜리메이터 사이의 상기 제2광섬유에 설치되는 제2광커플러와, 상기 제1광커플러에 일 단이 결합되고 타 단은 상기 제2광커플러에 결합되는 광지연선로부;를 더 구비하고, 상기 광지연선로부는 상기 제1광커플러에 일 단이 결합되는 제3광섬유와, 상기 제3광섬유의 타 단에 결합되는 제3콜리메이터와, 상기 제2광커플러에 일 단이 결합되는 제4광섬유와, 상기 제4광섬유의 타 단에 결합되어 상기 제3콜리메이터에서 방출되는 빛을 받아 상기 제4광섬유로 전달하는 제4콜리메이터를 포함하는 것을 특징으로 한다.A first optical coupler provided in the first optical fiber between the light source unit and the first collimator, a second optical coupler installed in the second optical fiber between the light receiving unit and the second collimator, And a third optical fiber coupled to the first optical coupler at one end, and a third optical fiber coupled at one end to the first optical coupler; and a third optical fiber coupled at one end to the first optical coupler, A third collimator coupled to the other end of the optical fiber, a fourth optical fiber coupled to the second optical coupler at one end, and a second collimator coupled to the other end of the fourth optical fiber to receive light emitted from the third collimator, And a fourth collimator for transmitting the fourth collimator to the fourth optical fiber.
상기 광학계는 상기 광원부에 일 단이 결합되는 제1광섬유와, 상기 제1광섬유의 타 단에 결합되는 콜리메이터와, 상기 콜리메이터에서 방출되는 광을 상기 유체포커싱채널부로 반사시키는 반사부와, 상기 수광부에 일 단이 결합되는 제2광섬유와, 상기 광원부와 상기 제1콜리메이터 사이의 상기 제1광섬유의 일 지점과 상기 제2광섬유의 타 단을 결합시키는 광커플러를 포함하는 것을 특징으로 한다.The optical system includes a first optical fiber coupled to the light source unit, a collimator coupled to the other end of the first optical fiber, a reflection unit reflecting the light emitted from the collimator to the fluid focusing channel unit, And an optical coupler coupling one end of the first optical fiber between the light source unit and the first collimator to the other end of the second optical fiber.
상기 광커플러에 일 단이 결합되는 제3광섬유와, 상기 제3광섬유의 타 단에 결합되는 제2콜리메이터를 더 구비하는 것을 특징으로 한다.A third optical fiber coupled to the optical coupler at one end, and a second collimator coupled to the other end of the third optical fiber.
상기 광학계는 상기 광원부에 일 단이 결합되는 제1광섬유와, 상기 제1광섬유의 타 단에 결합되는 광 서큘레이터와, 상기 광서큘레이터에 일 단이 결합되는 제2광섬유와, 상기 제2광섬유의 타 단에 결합되는 콜리메이터와, 상기 콜리메이터에서 방출되는 광을 상기 유체포커싱채널부로 반사시키는 반사부와, 상기 수광부에 일 단이 결합되고 타 단은 상기 광 서큘레이터에 결합되는 제3광섬유를 포함하는 것을 특징으로 한다.The optical system includes a first optical fiber having one end coupled to the light source unit, an optical circulator coupled to the other end of the first optical fiber, a second optical fiber having one end coupled to the optical circulator, A collimator coupled to the other end of the collimator, a reflector for reflecting the light emitted from the collimator to the fluid focusing channel, and a third optical fiber coupled to the optical receiver at one end and coupled to the optical circulator at the other end .
본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 의하면, 유체가 흐르는 채널의 단면적이 좁아지는 지역에서 세포가 뭉쳐서 채널을 막아 유체의 흐름을 방해하는 문제를 해결 및 세포가 들어오는 샘플 주입구 영역에서 세포의 침전을 억제함으로써 투입되는 세포의 손실을 최소함으로써 세포 계수 및 세포 사이즈의 측정 정밀도 및 정확도를 높일 수 있는 장점이 있다.According to the cell counting and cell-size measuring system having the fluid focusing channel unit according to the present invention, it is possible to solve the problem that cells clump in the region where the cross-sectional area of the channel through which the fluid flows narrows to obstruct the flow of the fluid, By suppressing the precipitation of cells in the area of the sample injection port, it is possible to minimize the loss of injected cells, thereby increasing the accuracy and accuracy of measurement of cell count and cell size.
도 1은 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 개념도.
도 2는 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 구성을 나타낸 블록도.
도 3은 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 유체포커싱채널부를 나타낸 사시도.
도 4는 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 유체포커싱채널부를 통과하는 세포의 상태를 나타낸 도면.
도 5는 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 신호처리부에 의한 신호처리 과정을 나타낸 개념도.
도 6은 본 발명에 따른 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템을 통해 세포의 계수 및 세포의 크기를 분석하는 방법을 나타낸 개념도.
도 7은 발명의 제2실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 개념도.
도 8은 본 발명의 제3실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 개념도.
도 9는 본 발명의 제4실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 개념도.
도 10은 본 발명의 제5실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 개념도.1 is a conceptual diagram of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel according to the present invention.
2 is a block diagram illustrating a configuration of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit according to the present invention.
3 is a perspective view of a fluid focusing channel of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel according to the present invention;
4 is a view showing a state of a cell passing through a fluid focusing channel part of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel part according to the present invention.
5 is a conceptual diagram illustrating a signal processing process by a signal processing unit of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit according to the present invention.
6 is a conceptual diagram illustrating a method of analyzing cell counts and cell sizes through a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit according to the present invention.
7 is a conceptual diagram of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel according to a second embodiment of the present invention.
FIG. 8 is a conceptual diagram of a cell counting and cell-size measuring system having a fluid focusing channel according to a third embodiment of the present invention; FIG.
9 is a conceptual diagram of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel according to a fourth embodiment of the present invention.
10 is a conceptual diagram of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel according to a fifth embodiment of the present invention.
이하, 첨부된 도면을 참조하면서 본 발명의 바람직한 실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 대하여 상세하게 설명한다. Hereinafter, a detailed description will be given of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit according to a preferred embodiment of the present invention with reference to the accompanying drawings.
이하, 첨부된 도면을 참조하면서 본 발명의 바람직한 실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에 대하여 상세하게 설명한다. 도 1 내지 도 10에는 본 발명의 다양한 실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템이 도시되어 있다.Hereinafter, a detailed description will be given of a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit according to a preferred embodiment of the present invention with reference to the accompanying drawings. 1 to 10 show a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel according to various embodiments of the present invention.
먼저, 도 1 내지 도 6을 참조하여 본 발명의 제1실시 예에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템을 설명한다.First, referring to FIGS. 1 to 6, a cell counting and cell size measuring system having a fluid focusing channel unit according to a first embodiment of the present invention will be described.
도 1 내지 도 6을 참조하면, 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템은 측정대상 세포가 함유된 샘플이 일 방향으로 유동할 수 있게 형성되고, 상기 세포에 광이 조사될 수 있게 형성된 유체포커싱채널부(10)와; 상기 유체포커싱채널부(10)에 광을 제공하기 위한 광원부(20)와; 상기 광원부(20)에서 광출되어 상기 유체포커싱채널부(10)를 경유하는 광을 수신하기 위한 수광부(30)와; 상기 광원부(20)에서 방출되는 광이 상기 유체포커싱채널부(10)를 경유하도록 안내 및 상기 유체포커싱채널부(10)를 경유한 광을 상기 수광부(30)로 안내하는 광학계(40)와; 상기 수광부(30)에 수신된 광을 신호처리하는 신호처리부(50)와; 상기 신호처리부(50)에 의해 처리된 광신호를 이용하여 세포의 수를 카운트 및 세포의 크기를 측정 및 분석하는 분석부(60);를 구비한다.Referring to FIGS. 1 to 6, a cell counting and cell-size measuring system having a fluid focusing channel part is formed so that a sample containing a measurement target cell can flow in one direction, A formed fluid focusing channel section (10); A light source part (20) for providing light to the fluid focusing channel part (10); A
상기 유체포커싱채널부(10)는 세포의 분석을 위해 세포를 집속하는 것으로서, 도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이 유체인 세포가 포함된 샘플이 흐르는 샘플 채널(12)과, 시스 유체가 흐르는 시스 플로우 채널(14)과, 샘플과 시스 유체가 모이는 조인트부(50)에서 합쳐져 포커싱된 샘플의 입자가 흐르는 포커싱 채널(16) 및 포커싱 채널(16)의 일부 중 광원부에서 방출되는 빛이 조사되는 부분을 확장하여 형성한 확장 채널을 포함한다.3 and 4, the fluid focusing
이때, 샘플 채널(12)의 선단부에는 샘플이 공급되는 샘플챔버(11)가 연결되고, 시스 플로우 채널(14)의 선단부에는 시스 유체가 공급되는 시스유체챔버(13)가 결합된다.At this time, a
도시되어 있지 않으나, 상기 포커싱 채널(16)에서 포커싱된 샘플 입자들이 포커싱 채널 또는 확장 채널을 통과할 때, 포커싱된 샘플 입자들이 포커싱 상태를 유지하면서 유속이 느려지도록 하여 샘플 입자 샘플과 시스 유체가 포커싱 채널을 흐르도록 하는 압력 제어 수단을 더 구비할 수 있다.Although not shown, when the focused sample particles in the focusing
상기 포커싱 채널(16)은 빛이 투과할 수 있게 투명하게 형성된다.The focusing
상기 광원부(20)는 여러 파장대의 빛이 섞인 광대역 파장의 빛을 방출하는 것을 적용한다.The
상기 수광부(30)는 광원부(20)에서 방출되어 세포유동채널부(10) 및 광학계(40)를 경유하는 빛을 수신하여 신호처리부(50)로 전송한다.The
상기 광학계(40)는 일 단이 광원부(20)에 결합되는 제1광섬유(41)와, 제1광섬유(41)의 타 단에 결합되는 제1콜리메이터(42)와, 제1콜리메이터(42)에서 출력되는 광을 세포유동채널부(10)로 반사시키는 제1반사부(43)와, 일 단이 수광부(30)에 결합되는 제2광섬유(44)와, 제2광섬유(44)의 타 단에 결합되는 제2콜리메이터(45)와, 세포유동채널부(10)를 경유하는 광을 제2콜리메이터(45)로 반사시키는 제2반사부(46)를 포함한다.The
상기 신호처리부(50)는 수광부(30)에 수신된 빛을 받아 파장별로 분산시키는 분광기(51)와, 분광기(51)에 의해 파장별로 분산된 빛을 수광하는 복수의 CCD(52)와, 각 CCD(52)에 수광된 빛의 세기를 측정하는 광세기측정부(53) 및 광세기측정부(53)에서 측정된 광신호를 푸리에 변환시키는 푸리에변환부(54)를 포함한다.The
상기 분석부(60)는 상기 푸리에변환부(54)에서 변환된 신호의 피크를 검출하는 피크검출부(61)와, 상기 피크검출부(61)에서 검출된 피크에 대응되는 지점의 위치 및 세포의 굴절률에 대한 정보를 종합하여 세포의 크기를 판별하는 판별부(62)를 포함한다. 상기 분석부(60)를 통해 세포의 계수 및 계수된 각 세포의 크기를 측정할 수 있다.The
상기 신호처리부(50)는 수광부(30)에서 수신된 빛을 받아 푸리에 변환하고, 상기 분석부(60)는 변환된 신호에서의 피크를 검출하여 세포수를 카운트하고, 피크가 검출된 지점의 위치에 따라 세포의 크기를 결정하여 크기별로 세포수를 카운트 한다.The
신호처리부(50)와 분석부(60)에 의한 세포의 계수 및 세포의 크기 측정과정을 도 5 및 도 6을 참조하여 더욱 상세하게 설명한다.The process of measuring the cell count and cell size by the
먼저, 분광기(51)를 통해서 얻은 간섭신호는 각각의 파장별로 분산되어 CCD의 각각의 셀에 의해서 도 6(a) 와 같이 형태의 광세기가 측정되며, 이 측정된 값은 파장대역에서 간섭무늬로 측정된다.First, the interference signal obtained through the
즉, 간섭신호와 간섭에 관여하지 않은 광신호가 측정되기 때문에 분광기에 의해서 불연속적인 획득된 데이타는 간섭신호 뿐만 아니라 광원의 스펙트럼에 해당되는 해당되는 광세기가 동시에 측정된다.That is, since the interference signal and the optical signal not involved in the interference are measured, the discontinuous data obtained by the spectroscope can simultaneously measure the corresponding light intensity corresponding to the spectrum of the light source as well as the interference signal.
그리고, 획득한 파장영역에서의 간섭무늬 신호가 가우시안 형태가 아닌 경우가 대부분이기 때문에 적절한 윈도우 함수를 이용해서 도 6(b)와 같이 가우시안에 가까운 형태로 스펙트럼을 변형시킨다. 이 과정에서 간섭무늬가 가지는 파장영역에서의 주기성의 변화는 발생되지 않는다. 이때 가우시안이 아닌 광원 스펙트럼은 푸리에 변환에서 세포 두께 분석에서 에러로 작용할 수 있기 때문에 윈도우 함수를 적용하여 가우시안에 근사한 형태로 변화시킨다.Since the interference fringe signal in the acquired wavelength region is not Gaussian in most cases, the spectrum is transformed into a form close to Gaussian as shown in FIG. 6 (b) using a suitable window function. In this process, the change in the periodicity in the wavelength range of the interference fringe does not occur. At this time, since the non-Gaussian light source spectrum can act as an error in the cell thickness analysis in the Fourier transform, the window function is changed to approximate to Gaussian.
이후, 먼저 획득한 간섭무늬 신호를 적절하게 제로패딩(zero-padding)을 통해서 도 6(c)에 도시된 바와 같이 데이타 수를 증가시켜 피크 위치를 분석하는데 정확도를 높일 수 있도록 한다. Then, the accuracy of the analysis of the peak position can be increased by increasing the number of data as shown in FIG. 6 (c) through zero padding appropriately with the interference fringe signal obtained first.
즉, 불연속적으로 획득된 간섭신호의 푸리에 변환에서의 정확한 분석을 위해서 제로패딩 또는 내삽법(interpolation)을 이용하여 데이타의 수를 증가시킨다.That is, the number of data is increased by using zero padding or interpolation for accurate analysis in the Fourier transform of discontinuously obtained interference signals.
다음으로, 푸리에 변환을 통해서 도 6(d)에 도시된 바와 같이 각각의 세포의 두께에 해당되는 값에 대한 정보로 환산되도록 한다. 여기서, 획득한 두께는 광학적 두께로 세포의 물리적인 두께 정도는 굴절률에 대한 정보를 반영하여 계산하여 얻게 된다. 즉, 전처리된 신호를 푸리에 변환을 수행하여 간섭무늬에 해당하는 공간주파수로 분석하고 이 값을 광경로차로 환산하여 세포의 두께 정보를 획득한다.Next, as shown in FIG. 6 (d) through the Fourier transform, the information is converted into information about the value corresponding to the thickness of each cell. Here, the acquired thickness is an optical thickness, and the physical thickness of the cell is obtained by calculating information on the refractive index. That is, the preprocessed signal is subjected to Fourier transform to analyze the spatial frequency corresponding to the interference fringe, and the value of the cell is converted into a light path difference to obtain thickness information of the cell.
이와 같은 구조는 상술한 바와 같이 신호처리를 통해서 개별적으로 구분된 세포의 개체수를 셀 수 있을 뿐만 아니라 서로 붙어 흐르는 세포의 경우에도 개체수의 구분이 가능한 장점이 있다.Such a structure can be used not only to count the number of individual cells classified by the signal processing as described above but also to be able to distinguish the number of cells attached to each other.
한편, 본 발명에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템은 도 7에 도시된 바와 같이 상기 광원부(20)와 상기 제1콜리메이터(42) 사이의 상기 제1광섬유(41)에 설치되는 제1광커플러(41a)와, 상기 수광부(30)와 상기 제2콜리메이터(45) 사이의 상기 제2광섬유(44)에 설치되는 제2광커플러(44a)와, 상기 제1광커플러(41a)에 일 단이 결합되고 타 단은 상기 제2광커플러(44a)에 결합되는 광지연선로부(70);를 더 구비할 수 있다.7, a cell counting and cell size measuring system according to the present invention includes a first
상기 광지연선로부(70)는 상기 제1광커플러(41a)에 일 단이 결합되는 제3광섬유(71)와, 상기 제3광섬유(71)의 타 단에 결합되는 제3콜리메이터(72)와, 상기 제2광커플러(44a)에 일 단이 결합되는 제4광섬유(73)와, 상기 제4광섬유(73)의 타 단에 결합되어 상기 제3콜리메이터(72)에서 방출되는 빛을 받아 상기 제4광섬유(73)로 전달하는 제4콜리메이터(74)를 포함한다.The optical
한편, 도 8에는 본 발명의 제3실시 예에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템이 도시되어 있다. 본 발명의 제3실시 예에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템은 세포유동채널부(10), 광원부(20), 수광부(30), 광학계(40), 신호처리부(50), 분석부(60)를 구비하며, 상기 광학계(40)를 제외한 나머지 구성요소는 본 발명의 제1실시 예에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템에서 설명하고 있는 바와 동일한 구성을 적용하였다.Meanwhile, FIG. 8 shows a cell counting and cell size measuring system according to a third embodiment of the present invention. The cell counting and cell size measuring system according to the third embodiment of the present invention includes a cell
상기 광학계(40)는 상기 광원부(20)에 일 단이 결합되는 제1광섬유(41)와, 상기 제1광섬유(41)의 타 단에 결합되는 제1콜리메이터(42)와, 상기 제1콜리메이터()에서 방출되는 광을 상기 세포유동채널부(10)로 반사시키는 반사부(43)와, 상기 수광부(30)에 일 단이 결합되는 제2광섬유(44)와, 상기 광원부(20)와 상기 제1콜리메이터(42) 사이의 상기 제1광섬유(41)의 일 지점과 상기 제2광섬유(44)의 타 단을 결합시키는 광커플러(41a)를 포함한다.The
그리고, 본 발명의 제3실시 예에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템은 도 9에 도시된 바와 같이 상기 광커플러(41a)에 일 단이 결합되는 제3광섬유(71)와, 상기 제3광섬유(71)의 타 단에 결합되는 제2콜리메이터(45)를 더 구비할 수 있다.As shown in FIG. 9, the cell counting and cell-size measuring system according to the third embodiment of the present invention includes a third
한편, 도 10에는 본 발명의 제5실시 예에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템이 도시되어 있다. 본 발명의 제5실시 예에 따른 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템의 광학계(40)는 상기 광원부(20)에 일 단이 결합되는 제1광섬유(41)와, 상기 제1광섬유(41)의 타 단에 결합되는 광 서큘레이터(47)와, 상기 광 서큘레이터(47)에 일 단이 결합되는 제2광섬유(44)와, 상기 제2광섬유(44)의 타 단에 결합되는 콜리메이터(42)와, 상기 콜리메이터(42)에서 방출되는 광을 상기 세포유동채널부(10)로 반사시키는 반사부(43)와, 상기 수광부(30)에 일 단이 결합되고 타 단은 상기 광 서큘레이터(47)에 결합되는 제3광섬유(71)를 포함한다.FIG. 10 shows a cell counting and cell size measuring system according to a fifth embodiment of the present invention. The
이상에서 설명한 본 발명에 따른 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템은 첨부된 도면을 참조로 설명하였으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시 예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 진정한 기술적 보호의 범위는 첨부된 청구범위의 기술적 사상에 의해서만 정해져야 할 것이다.Although the present invention has been described with reference to the preferred embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed embodiments. It will be appreciated that variations and equivalents of other embodiments are possible. Accordingly, the true scope of protection of the present invention should be determined only by the technical idea of the appended claims.
10 : 세포유동채널
11 : 샘플챔버
12 : 샘플 채널
13 : 시스유체챔버
14 : 시스 플로우 채널
15 : 조인트부
16 : 포커싱 채널
20 : 광원부
30 : 수광부
40 : 광학계
50 : 신호처리부
51 : 분광기
52 : CCD
53 : 광세기측정부
54 : 푸리에변환부
60 : 분석부
61 : 피크검출부
62 : 판별부
70 : 광지연선로부10: Cell flow channel
11: Sample chamber
12: Sample channel
13: Cisternal chamber
14: SysFlow channel
15: joint part
16: Focusing channel
20:
30:
40: Optical system
50: Signal processor
51: spectroscope
52: CCD
53: light intensity measuring unit
54: Fourier transform unit
60: Analytical Department
61: Peak detection section
62:
70: optical delay line section
Claims (6)
상기 유체포커싱채널부에 광을 제공하기 위한 광원부와;
상기 광원부에서 광출되어 상기 유체포커싱채널부를 경유하는 광을 수신하기 위한 수광부와;
상기 광원부에서 방출되는 광이 상기 유체포커싱채널부를 경유하도록 안내 및 상기 유체포커싱채널부를 경유한 광을 상기 수광부로 안내하는 광학계와;
상기 수광부에 수신된 광을 신호처리하는 신호처리부와;
상기 신호처리부에 의해 처리된 광신호를 이용하여 세포의 수를 카운트 및 세포의 크기를 측정 및 분석하는 분석부;를 구비하고,
상기 유체포커싱채널부는 유체가 흐르는 샘플 채널과, 시스 유체가 흐르는 시스 플로우 채널과, 샘플과 시스 유체가 합쳐져 포커싱된 샘플의 입자가 흐르는 포커싱 채널 및 포커싱 채널의 일부 중 상기 광원부에서 방출되는 빛이 조사되는 부분을 확장하여 형성한 확장 채널을 포함하는 것을 특징으로 하는 유체포커싱채널부를 구비하며,
상기 포커싱 채널에 포커싱된 샘플 입자들이 포커싱 채널을 통과할 때, 포커싱 된 상태 및 유속이 느려진 상태로 포커싱 채널을 흐르도록 하는 압력 제어 수단;을 더 구비하고,
상기 신호처리부는 수광부에 수신된 빛을 받아 파장별로 분산시키는 분광기와, 분광기에 의해 파장별로 분산된 빛을 수광하는 복수의 CCD와, 각 CCD에 수광된 빛의 세기를 측정하는 광세기측정부 및 광세기측정부에서 측정된 광신호를 푸리에 변환시키는 푸리에변환부를 포함하고,
상기 분석부는 상기 푸리에변환부에서 변환된 신호의 피크를 검출하는 피크검출부와, 상기 피크검출부에서 검출된 피크에 대응되는 지점의 위치 및 세포의 굴절률에 대한 정보를 종합하여 세포의 크기를 판별하는 판별부를 포함하며,
상기 신호처리부는 상기 분광기를 통해서 얻은 간섭신호를 윈도우 함수를 이용해서 가우시안에 근사한 형태로 변환 및 변환된 간섭무늬 신호를 제로패딩을 통해 데이타 수를 증가시키며, 전처리된 신호를 푸리에 변환을 수행하는 것을 특징으로 하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템.
A fluid focusing channel part formed so that a sample containing a cell to be measured can flow in one direction and is irradiated with light;
A light source unit for providing light to the fluid focusing channel unit;
A light receiving unit for receiving the light emitted from the light source unit and passing through the fluid focusing channel unit;
An optical system for guiding the light emitted from the light source unit to pass through the fluid focusing channel unit and guiding the light passed through the fluid focusing channel unit to the light receiving unit;
A signal processing unit for signal processing the light received by the light receiving unit;
And an analyzer for counting the number of cells and measuring and analyzing the size of the cells using the optical signal processed by the signal processor,
Wherein the fluid focusing channel portion includes a sample channel through which a fluid flows, a cis-flow channel through which a cis-fluid flows, a focusing channel through which particles of the sample focused by the sample and the cis-fluid flow together, And an extension channel formed by expanding a portion of the fluid channel,
And pressure control means for causing the focusing channel to flow in a focused state and in a slow flow state when the focused sample particles pass through the focusing channel,
The signal processing unit includes a spectroscope for receiving the light received by the light receiving unit and dispersing the received light for each wavelength, a plurality of CCDs for receiving light dispersed by wavelengths by the spectroscope, an optical intensity measuring unit for measuring the intensity of the light received by each CCD, And a Fourier transform unit for Fourier-transforming the optical signal measured by the optical intensity measuring unit,
The analyzing unit includes a peak detecting unit for detecting a peak of the signal converted by the Fourier transform unit, a discrimination unit for discriminating the size of the cell by synthesizing information on a position of a point corresponding to the peak detected by the peak detecting unit and a refractive index of the cell, ≪ / RTI >
The signal processing unit converts the interference signal obtained through the spectroscope into a form approximating Gaussian using a window function, increases the number of data through zero padding of the converted interference fringe signal, and performs Fourier transform on the pre-processed signal Characterized by a cell counting and cell sizing system.
상기 광학계는
일 단이 상기 광원부에 결합되는 제1광섬유와,
상기 제1광섬유의 타 단에 결합되는 제1콜리메이터와,
상기 제1콜리메이터에서 출력되는 광을 상기 유체포커싱채널부로 반사시키는 제1반사부와,
일 단이 상기 수광부에 결합되는 제2광섬유와,
상기 제2광섬유의 타 단에 결합되는 제2콜리메이터와,
상기 유체포커싱채널부를 경유하는 광을 상기 제2콜리메이터로 반사시키는 제2반사부를 포함하는 것을 특징으로 하는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템.
The method according to claim 1,
The optical system
A first optical fiber having one end coupled to the light source unit,
A first collimator coupled to the other end of the first optical fiber,
A first reflector for reflecting the light output from the first collimator to the fluid focusing channel,
A second optical fiber having one end coupled to the light receiving unit,
A second collimator coupled to the other end of the second optical fiber,
And a second reflector for reflecting light passing through the fluid focusing channel part to the second collimator.
상기 광원부와 상기 제1콜리메이터 사이의 상기 제1광섬유에 설치되는 제1광커플러와,
상기 수광부와 상기 제2콜리메이터 사이의 상기 제2광섬유에 설치되는 제2광커플러와,
상기 제1광커플러에 일 단이 결합되고 타 단은 상기 제2광커플러에 결합되는 광지연선로부;를 더 구비하고,
상기 광지연선로부는
상기 제1광커플러에 일 단이 결합되는 제3광섬유와,
상기 제3광섬유의 타 단에 결합되는 제3콜리메이터와,
상기 제2광커플러에 일 단이 결합되는 제4광섬유와,
상기 제4광섬유의 타 단에 결합되어 상기 제3콜리메이터에서 방출되는 빛을 받아 상기 제4광섬유로 전달하는 제4콜리메이터를 포함하는 것을 특징으로 하는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템.
3. The method of claim 2,
A first optical coupler installed in the first optical fiber between the light source unit and the first collimator,
A second optical coupler installed in the second optical fiber between the light receiving unit and the second collimator,
And an optical delay line portion coupled to one end of the first optical coupler and coupled to the second optical coupler,
The optical delay line section
A third optical fiber coupled to the first optical coupler,
A third collimator coupled to the other end of the third optical fiber,
A fourth optical fiber coupled at one end to the second optical coupler,
And a fourth collimator coupled to the other end of the fourth optical fiber for receiving the light emitted from the third collimator and transmitting the light to the fourth optical fiber. .
상기 광학계는
상기 광원부에 일 단이 결합되는 제1광섬유와,
상기 제1광섬유의 타 단에 결합되는 콜리메이터와,
상기 콜리메이터에서 방출되는 광을 상기 유체포커싱채널부로 반사시키는 반사부와,
상기 수광부에 일 단이 결합되는 제2광섬유와,
상기 광원부와 상기 콜리메이터 사이의 상기 제1광섬유의 일 지점과 상기 제2광섬유의 타 단을 결합시키는 광커플러를 포함하는 것을 특징으로 하는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템.
The method according to claim 1,
The optical system
A first optical fiber coupled to the light source unit at one end thereof,
A collimator coupled to the other end of the first optical fiber,
A reflector for reflecting the light emitted from the collimator to the fluid focusing channel,
A second optical fiber having one end coupled to the light receiving unit,
And an optical coupler coupling one end of the first optical fiber between the light source unit and the collimator to the other end of the second optical fiber.
상기 광커플러에 일 단이 결합되는 제3광섬유와,
상기 제3광섬유의 타 단에 결합되는 제2콜리메이터를 더 구비하는 것을 특징으로 하는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템.
5. The method of claim 4,
A third optical fiber having one end coupled to the optical coupler,
Further comprising a second collimator coupled to the other end of the third optical fiber, wherein the second collimator is coupled to the other end of the third optical fiber.
상기 광학계는
상기 광원부에 일 단이 결합되는 제1광섬유와,
상기 제1광섬유의 타 단에 결합되는 광 서큘레이터와,
상기 광서큘레이터에 일 단이 결합되는 제2광섬유와,
상기 제2광섬유의 타 단에 결합되는 콜리메이터와,
상기 콜리메이터에서 방출되는 광을 상기 유체포커싱채널부로 반사시키는 반사부와,
상기 수광부에 일 단이 결합되고 타 단은 상기 광 서큘레이터에 결합되는 제3광섬유를 포함하는 것을 특징으로 하는 유체포커싱채널부를 구비하는 세포 계수 및 세포 크기 측정시스템.
The method according to claim 1,
The optical system
A first optical fiber coupled to the light source unit at one end thereof,
An optical circulator coupled to the other end of the first optical fiber,
A second optical fiber coupled to the optical circulator at one end,
A collimator coupled to the other end of the second optical fiber,
A reflector for reflecting the light emitted from the collimator to the fluid focusing channel,
And a third optical fiber coupled to the optical circulator, the other end of the third optical fiber being coupled to the light receiving unit, and the other end being coupled to the optical circulator.
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