KR101969793B1 - Feed additive composition for reducing methane emission from ruminants comprising cacao by-product or cassava root - Google Patents

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Abstract

본 발명은 카카오박, 카사바 뿌리 또는 포도박을 유효성분으로 함유하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물 및 사료 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 사료 조성물은 반추동물의 반추위 내 미생물 발효에는 영향을 주지 않으면서 건물 소화율 및 휘발성 지방산의 생산량은 증가시키고 메탄 생성량은 감소시켜 메탄으로 손실되는 에너지를 줄임으로써 실질적으로 사용할 수 있는 에너지가 증가하도록 하여 가축의 생산성 증진에 도움을 줄 수 있을 것이다.The present invention relates to a feed additive composition and feed composition for reducing methane production of ruminants containing cacao foil, cassava root or grape leaves as an active ingredient, the feed composition of the present invention affects the microbial fermentation of ruminants in rumen Without increasing the amount of building digestibility and volatile fatty acids produced, the amount of methane produced can be reduced, thereby reducing the energy lost to methane, thereby increasing the amount of energy actually available, which can help to improve livestock productivity.

Description

카카오박 또는 카사바 뿌리를 함유하는 반추동물 메탄 저감용 사료첨가제 조성물{Feed additive composition for reducing methane emission from ruminants comprising cacao by-product or cassava root}Feed additive composition for reducing methane emission from ruminants comprising cacao by-product or cassava root}

본 발명은 카카오박 또는 카사바 뿌리를 함유하는 반추동물 메탄 저감용 사료첨가제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a feed additive composition for reducing ruminant methane containing cacao foil or cassava root.

전 세계적으로 온실가스에 의한 지구온난화 문제에 국제적인 관심이 높으며 이러한 기후 변화에 대응하기 위해 기후협약을 체결하여 각 나라마다 온실가스 감축을 의무화하고 있다.There is high international interest in global warming caused by greenhouse gases around the world, and in order to cope with such climate change, climate agreements are mandatory for each country to reduce greenhouse gases.

지구온난화를 일으키는 주요 온실가스로는 국제연합 기후변화협약(UNFCC)에서 지정한 이산화탄소(CO2), 메탄가스(NH4), 아산화질소(N2O), 과불화탄소(PFCS), 수소불화탄소(HFCS), 불화유황(SF6)이 있으며, 이들 온실가스가 증가함에 따라 지구의 평균 기온과 해수면이 상승할 뿐만 아니라 사막화, 가뭄, 홍수, 태풍 등의 기상 이변도 발생하고 있다. 특히, 메탄가스는 반추동물의 장내 발효에 의한 소화과정에서 발생하는 자연적인 부산물로, 전 지구 온실가스 배출량의 18% 정도를 차지하고 있으며 전 세계 자동차가 내뿜는 온실가스 양인 13.5%보다 많다. 국내의 경우 동물이 생산하는 총 메탄 배출량 중 소가 약 75% 정도를 차지하고 있으며, 최근 서구 식습관의 영향으로 육류 소비가 증가함에 따라 축산분야의 온실가스 발생량이 증가되고 있는 추세이다.The main greenhouse gases that cause global warming include carbon dioxide (CO 2 ), methane gas (NH 4 ), nitrous oxide (N 2 O), perfluorocarbons (PFCS), and hydrogen fluorocarbons (HFCS), as defined by the United Nations Framework Convention on Climate Change (UNFCC). ), And sulfur fluoride (SF 6 ), and as these greenhouse gases increase, global average temperatures and sea levels rise, as well as extreme weather events such as desertification, droughts, floods, and typhoons. In particular, methane is a natural by-product of digestion by intestinal fermentation of ruminants, accounting for about 18% of global greenhouse gas emissions and more than 13.5% of global greenhouse gas emissions. In Korea, cows account for about 75% of the total methane emissions produced by animals. Recently, as the consumption of meat increases due to Western eating habits, greenhouse gas emissions in the livestock sector are increasing.

반추동물(ruminants)은 포유류 소목 중 낙타과, 애기사슴과, 사슴과, 기린과, 소과의 동물로서, 반추위(ruminant stomach)를 가지고 있으며 한번 삼킨 먹이를 다시 게워 내어 씹는 특성을 가지고 있다. 흔히 되새김 동물이라고도 일컫는다. 반추동물은 보통 4개의 위로 구성되어 있으며 제1, 2위를 반추위라고 한다. 반추위의 가장 큰 기능은 반추위 내에 있는 다양한 미생물들에 의해 일반 가축이나 사람이 이용할 수 없는 섬유질이 많은 풀 사료들을 효과적으로 분해, 발효 및 소화시킴으로써 필요한 영양분을 동물에게 공급하는 것이다.Ruminants are camels, baby deer, deer, giraffes, and bovines of mammalian cattle, which have ruminant stomach and have the characteristics of chewing and chewing food once swallowed. It is also commonly referred to as a ruminant animal. Ruminants are usually composed of four stomachs, the first and second place is called ruminant. The primary function of the rumen is to provide the animal with the nutrients it needs by effectively breaking down, fermenting and digesting the fiber-rich grass feed that is not available to normal livestock or humans by the various microbes in the rumen.

반추동물이 섭취한 사료는 반추위 내 미생물에 의해 분해되어 이산화탄소, 암모니아, 수소, 휘발성 지방산 등이 생산된다. 이와 같은 발효산물들 중 휘발성 지방산이나 암모니아 등은 반추동물이나 반추위 내 미생물에 의해 이용되어 가축의 생산성에 중요하게 작용하지만, 이산화탄소와 수소는 발효의 가장 마지막 단계에서 메탄 생성 박테리아에 의해 메탄으로 생성될 수 있으며, 메탄이 생성되는 경우에는 반추동물의 체내에서 흡수되지 못하고 트림을 통해 반추위로부터 배출된다. 또한, 반추동물이 사료로부터 섭취한 총 에너지의 3~12%가 메탄생성으로 소실되므로 사료 이용 효율과도 깊은 관련이 있다. Feeds consumed by ruminants are broken down by microbes in the rumen to produce carbon dioxide, ammonia, hydrogen, and volatile fatty acids. Among these fermented products, volatile fatty acids and ammonia are used by ruminants and rumen microorganisms to play an important role in the production of livestock. If methane is produced, it is not absorbed by the ruminant's body and is discharged from the rumen through the trim. In addition, since 3-12% of the total energy consumed by ruminants from feed is lost to methane production, it is closely related to feed efficiency.

이와 같이, 반추동물의 반추위 내에서 메탄이 생성되는 경우 지구온난화로 인한 환경 문제가 발생하고 사료 이용 효율이 감소하기 때문에, 반추동물의 메탄가스 생성을 감소시키기 위해 모넨신(monensin)과 같은 항생제를 사료에 첨가하거나, 반추위 내의 프로토조아(protozoa)를 제거하거나, 할로겐 화합물을 사료에 첨가하거나, 생균제(probiotics)를 급여하는 등의 방법이 연구되고 있다. 그러나 항생제를 가축의 사료에 첨가하는 것은 최종적으로 인체에 유해할 수 있으며, 프로토조아를 제거하는 것은 섬유소를 감소시킬 수 있는 문제가 있고, 할로겐 화합물을 사료에 첨가하는 것은 메탄가스 억제효과가 지속되지 않고 축산물로의 잔류성 등의 안전성 관련 문제가 발생할 수 있으며, 생균제를 급여하는 것은 생균제의 발효 양상이나 메탄가스 생성 실험시 첨가한 균주가 상이하게 나타날 수 있는 문제가 있다.As such, when methane is produced in the rumen of the ruminant, an environment such as monensin is used to reduce the production of methane gas in the ruminant because environmental problems due to global warming and feed efficiency are reduced. Methods have been studied such as adding to feed, removing protozoa in the rumen, adding halogenated compounds to feed, feeding probiotics, and the like. However, adding antibiotics to livestock feed can ultimately be harmful to the human body, eliminating protozoa has the problem of reducing fibrin, and adding halogenated compounds to feed does not sustain methane suppression. Safety-related problems such as residuals to livestock products may occur, and feeding probiotics may cause different strains to be added during fermentation or methane production experiments of probiotics.

따라서, 가축의 생산성에 부정적인 영향을 미치지 않음과 동시에 환경에 유해한 메탄가스를 효율적으로 줄일 수 있는 메탄 발생 저감 기술이 필요하다.Therefore, there is a need for a methane generation reduction technology capable of efficiently reducing methane gas harmful to the environment while not adversely affecting the productivity of livestock.

이에 본 발명에서는 카카오박, 카사바 뿌리 또는 포도박을 이용하여, in vitroin situ 방법을 통해 기존 조사료 자원인 볏짚과 비교하여 반추동물의 메탄 생성량이 감소되는 것을 확인하였다. Therefore, in the present invention, using the cacao foil, cassava root or grape foil, it was confirmed that the methane production of ruminants by the in vitro and in situ method compared to rice straw, which is a conventional forage resource.

한편, 한국등록특허 제1689812호에는 '내피어 그라스과 카사바 잎을 이용한 사료 조성물 및 이를 이용한 가축 사육방법'가 개시되어 있고, 중국등록특허 제102293336호에는 '물소의 위장관에서 메탄 생성을 감소시키는 사료 조성물'이 개시되어 있으나, 본 발명의 카카오박 또는 카사바 뿌리를 이용한 반추동물 메탄 저감용 사료첨가제 조성물에 대해서는 기재된 바가 없다.Meanwhile, Korean Patent No. 1689812 discloses a 'feed composition using inner pier grass and cassava leaves and a livestock breeding method using the same', and Chinese Patent No. 102293336 describes a 'feed composition for reducing methane production in the gastrointestinal tract of buffaloes. Although it is disclosed, there is no description of the feed additive composition for reducing ruminant methane using cacao foil or cassava root of the present invention.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 카카오박, 카사바 뿌리 또는 포도박에 대한 반추위 발효 특성 평가를 위해 in vitroin situ 방법을 이용하였고, in vitro 실험을 통해 본 발명의 카카오박 또는 카사바 뿌리가 반추위 내 pH의 변화에 영향을 주지 않으면서 메탄가스 생성량은 볏짚보다 감소되었고, 암모니아태 질소(암모니아성질소) 및 휘발성 지방산의 생성량은 볏짚에 비해 증가되는 것을 확인하였다. 또한 in situ 실험을 통해 반추위 내 건물 소화율을 측정한 결과 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박이 볏짚보다 소화율이 우수한 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다. The present invention was derived by the above requirements, in the present invention was used in vitro and in situ methods for the evaluation of the rumen fermentation characteristics for cacao, cassava root or grape leaves, and in vitro experiments of the present invention It was confirmed that methane gas production was reduced compared to rice straw without cacaobac or cassava roots affecting the change of pH in the rumen, and that the production of ammonia nitrogen (ammonia nitrogen) and volatile fatty acids was increased compared to rice straw. In addition, in situ experiments were carried out to measure the dry digestibility of the building in the rumen, cacao foil, cassava root and grape foil was confirmed that the digestibility is better than rice straw, the present invention was completed.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 카카오박 또는 카사바 뿌리를 유효성분으로 함유하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a feed additive composition for reducing methane production of ruminants containing cacao foil or cassava root as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a feed composition for reducing methane production of ruminants comprising the feed additive composition for reducing methane production of the ruminant.

또한, 본 발명은 상기 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 반추동물에 급여하여 반추동물의 메탄 생성을 저감하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for reducing the methane production of ruminants by feeding the ruminant feed composition for reducing the methane production of the ruminant.

본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 또는 포도박을 포함하는 반추동물 사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료조성물은 메탄 가스의 방출에 의한 에너지 손실을 감소시켜 반추동물의 생산성을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라, 환경오염원의 배출을 억제하여 환경오염 방지 효과를 가져올 것으로 기대된다.Ruminant feed additives comprising cacao meal, cassava root or grape leaves of the present invention and feed composition comprising the same can reduce the energy loss due to the release of methane gas to improve the productivity of ruminants, as well as environmental pollution sources It is expected to bring about the effect of preventing environmental pollution by suppressing the emission of

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 카카오박 또는 카사바 뿌리를 유효성분으로 함유하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a feed additive composition for reducing methane production of ruminants containing cacao foil or cassava root as an active ingredient.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 포도박을 추가로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. The feed additive composition of the present invention may further include grape foil, but is not limited thereto.

상기 사료첨가제 조성물에서, 상기 카카오박은 카카오 열매에서 과육부분(초콜렛 원료)을 제거하고 남은 외피부분을 수거하여 건조한 상태의 것이고, 포도박은 포도열매를 착즙하고 남은 포도껍질을 건조한 것이나, 이에 제한되지 않는다.In the feed additive composition, the cacao foil is dried by collecting the remaining skin portion after removing the flesh portion (chocolate raw material) from the cacao fruit, grape juice is the grape fruit juice and dried grape skins, but is not limited thereto. .

본 발명의 조성물에 있어서, 상기 메탄은 메탄가스를 의미하는 것으로, 반추위 내에서 수소와 이산화탄소를 전구물질로 하여 메탄 생성균에 의해 생성되므로 상기 메탄가스 생성량을 감소시키기 위해서는 반추위 내에서 메탄 생성의 전구물질인 수소의 발생량 자체를 제어하는 방법, 이미 발생된 수소를 제어하는 방법, 전구물질들을 이용하여 메탄가스를 직접 발생시키는 메탄 생성균을 제어하는 방법 또는 동일한 전구물질을 이용하여 메탄 생성균과 경합하여 초산을 생성하는 초산 생성균을 우점시켜 대사경로를 변환시키는 제어 방법 등이 있을 수 있다.In the composition of the present invention, the methane means methane gas, and is produced by the methane producing bacteria using hydrogen and carbon dioxide as precursors in the rumen, so to reduce the amount of methane produced, precursors of methane production in the rumen How to control the amount of phosphorus hydrogen itself, how to control the already generated hydrogen, how to control the methane producing bacteria that directly generate methane gas using precursors or by using the same precursors to compete with methane producing bacteria There may be a control method for converting metabolic pathways by predominantly producing acetic acid producing bacteria.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 메탄 생성 저감 효과가 우수하여 사료 이용 효율을 증진시킬 수 있으며, 반추위의 소화율 개선 효능도 가지므로, 가축에게 꾸준히 섭취하게 하면 가축의 생산성이 증가될 수 있다.Feed additive composition of the present invention is excellent in the effect of reducing methane production can improve the feed utilization efficiency, and also has the effect of improving the digestibility of the rumen, and if the livestock to be ingested steadily can increase the productivity of the livestock.

본 발명의 사료첨가제 조성물에 있어서, 상기 반추동물은 반추위가 있어 되새김질을 하여 음식을 소화시키는 동물을 말하며, 예를 들어 소, 염소, 양, 기린, 사슴, 버팔로 또는 낙타를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 소일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the feed additive composition of the present invention, the ruminant refers to an animal that has ruminant rubbing and digests food, and may include, for example, a cow, goat, sheep, giraffe, deer, buffalo or camel. May be small, but is not limited thereto.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 단독으로 가축에게 급여할 수도 있지만, 일반 사료에 첨가, 혼합하여 가축에게 급여할 수 있다. 예를 들면, 소, 양, 염소 등의 반추 동물은 제1위가 형성될 때까지는 모유 또는 대용유와 고형 사료가 병행 급여되며, 이유와 동시에 고형 사료로 완전히 바뀔 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 따라서 본 발명의 사료첨가제 조성물은 이들 중 어느 사료에 첨가해도 사료 요구율 및 증체 효율을 개선시킬 수 있다.The feed additive composition of the present invention may be fed to livestock alone, but may be added to a general feed and mixed to feed livestock. For example, ruminants such as cattle, sheep and goats are fed in parallel with breast milk or substitute milk and solid food until the first place is formed, but may be completely changed to solid food at the same time, but is not limited thereto. Therefore, the feed additive composition of the present invention can improve feed demand and increase efficiency even when added to any of these feeds.

본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 제공한다. In order to achieve another object of the present invention, the present invention provides a feed composition for reducing the methane production of ruminants comprising a feed additive composition for reducing the methane production of ruminants.

본 발명에 있어서, 용어 "사료"는 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다.In the present invention, the term "feed" means any natural or artificial diet, one meal or the like or any ingredient of the one meal for the animal to eat, ingest and digest.

본 발명의 사료 조성물은 가루 및 펠릿과 같은 종래의 사료 조성물의 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않고, 당업계에 알려진 다양한 형태의 사료로 제조가 가능하다.The feed composition of the present invention may be prepared in the form of conventional feed compositions such as powder and pellets, but is not limited thereto, and may be prepared in various forms of feed known in the art.

상기 사료 조성물에는 탄수화물, 단백질, 지방, 무기질, 비타민, 광물질 및 물과 같은 사료에 통상적으로 첨가되는 성분들이 포함될 수 있다. 이러한 각 성분의 종류에 있어서 특별히 제한되는 바가 없으며, 당 분야에서 통상적으로 사용되는 것은 모두 사용 가능하다.The feed composition may include ingredients commonly added to feeds such as carbohydrates, proteins, fats, minerals, vitamins, minerals and water. There is no restriction | limiting in particular in the kind of each such component, Any conventionally used in the field can be used.

또한, 본 발명은 상기 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 반추동물에 급여하여 반추동물의 메탄 생성을 저감하는 방법을 제공한다. 본 발명의 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물은 유효성분으로 메탄 생성 저감 효과가 있는 카카오박 또는 카사바 뿌리를 포함하고 있어, 상기 사료 조성물을 반추동물에 급여하게 되면 반추동물의 메탄 생성이 감소하게 되는 것이다.
The present invention also provides a method for reducing the methane production of ruminants by feeding the ruminant feed composition for reducing the methane production of the ruminant. The feed composition for reducing methane production of the ruminant of the present invention includes cacao foil or cassava root having an effect of reducing methane production as an active ingredient, and when the feed composition is fed to the ruminant, the methane production of the ruminant is reduced. Will be.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

실시예 1. Example 1. In vitroIn vitro 반추위 발효 시험 Rumen Fermentation Test

1. 재료 및 방법1. Materials and Methods

1-1. 공시축 및 사양관리1-1. Disclosure axis and specification management

충청남도 부여군에 소재한 목장에서 반추위 캐뉼라(cannula)를 장착한 홀스테인(Holstein) 거세우(체중 700 ± 50 kg) 2 두를 공시하였다. 공시축은 큰 송아지 배합사료 3 kg와 볏짚 10 kg를 1일 제한 급여하였고, 미네랄 블록 및 물은 자유 섭취하도록 하였다.
Two herds of Holstein castrate (700 ± 50 kg) with rumen cannula were presented at a ranch in Buyeo, Chungcheongnam-do. The diet was given a daily limit of 3 kg of large calf feed and 10 kg of rice straw, and mineral blocks and water were taken freely.

1-2. 반추위액의 준비1-2. Preparation of Rumen Liquid

반추위액은 실험 당일 오전 사료 급여 30분 전에 채취하였고, 채취된 반추위액의 사료입자를 제거하기 위해 4겹의 거즈로 여과한 후 2 L 보온용기에 담아 실험실로 운반하여 사용하였다. The rumen juice was collected 30 minutes before the morning feed of the day of the experiment, filtered to remove the feed particles of the collected rumen juice was filtered with four layers of gauze and used in a 2 L warm container transported to the laboratory.

상기 반추위액과 탄산수소나트륨(NaHCO3) 9.8 g, 제2인산나트륨·2수화물(Na2HPO4·2H2O) 4.62 g, 염화칼륨(KCl) 0.57 g, 염화나트륨(NaCl) 0.47 g, 황산마그네슘·7수화물(MgSO4·7H2O) 0.12 g, 염화칼슘(CaCl2 또는 염화칼슘·2수화물(CaCl2·2H2O)) 4(또는 5.3) g/100 mL로 구성된 McDougall's 완충용액을 1:4 비율로 혼합하여 반추위 접종원(rumen inoculum)으로 사용하였다. 또한, 위액의 희석 및 여과 과정 동안 O2-free CO2를 분사하여 위액이 산소에 노출되지 않도록 혐기상태를 유지하였다. 9.8 g of the rumen liquid and sodium bicarbonate (NaHCO 3 ), 4.62 g of dibasic sodium phosphate dihydrate (Na 2 HPO 4 .2H 2 O), 0.57 g of potassium chloride (KCl), 0.47 g of sodium chloride (NaCl), magnesium sulfate McDougall's buffer solution consisting of 0.12 g of heptahydrate (MgSO 4 7H 2 O) and 4 g (or 5.3) calcium chloride (CaCl 2 or calcium chloride dihydrate (CaCl 2 · 2H 2 O)) The ratio was used as rumen inoculum. In addition, O 2 -free CO 2 was sprayed during the dilution and filtration of gastric juice to maintain anaerobic conditions so that gastric juice was not exposed to oxygen.

혐기상태의 반추위액 50 mL과 볏짚(대조구), 카카오박, 카사바뿌리 또는 포도박의 시험사료 0.5 g을 혐기적인 조건에서 혼합한 후에 발효를 개시하였고, 반추위액 발효 시험은 Tilley와 Terry(1963)의 방법에 따라 수행되었다.
Fermentation was started after 50 mL of anaerobic rumen liquid and 0.5 g of rice straw, cacao foil, cassava root or grape leaves were mixed under anaerobic conditions, and the rumen liquid fermentation test was performed by Tilley and Terry (1963). Was performed according to the method.

1-3. 반추위 pH 측정1-3. Rumen pH Measurement

반추위의 pH는 발효가 종료된 배양병 내의 반추위액을 50 mL 튜브로 옮긴 후 pH 측정기(S20 Seven EazyTM, Mettler-Toledo, 스위스)를 이용하여 측정하였다.
The pH of the rumen was measured using a pH meter (S20 Seven Eazy , Mettler-Toledo, Switzerland) after transferring the rumen liquid in the fermentation broth to a 50 mL tube.

1-4. 총 가스 생산량 및 메탄과 수소 생산량 측정1-4. Measure total gas production and methane and hydrogen production

총 가스 발생량은 반추위액을 24시간 동안 배양한 후 100 mL의 유리 주사기를 이용하여 배양병에 있는 가스량을 측정하였고, 메탄 및 수소 생산량을 측정하기 위해 유리 주사기 안의 가스를 고무 마개(rubber stopper)가 장착된 알루미늄 팩에 포집하였다.The total amount of gas generated was incubated for 24 hours and the amount of gas in the vial was measured using a 100 mL glass syringe, and a rubber stopper was applied to the gas in the glass syringe to measure the production of methane and hydrogen. It was collected in a mounted aluminum pack.

포집한 가스는 CarboxenTM fused silica capillary column(0.53 mm I.d × 30 m length, SUPELCO, 미국)이 장착되어 있는 가스 크로마토그래피(HP7890, Agilant, 미국)를 이용하여 분석하였다.
The collected gases were analyzed using gas chromatography (HP7890, Agilant, USA) equipped with a Carboxen fused silica capillary column (0.53 mm Id × 30 m length, SUPELCO, USA).

1-5. 암모니아태 질소(NH1-5. Ammonia nitrogen (NH) 33 -N) 생성량 측정-N) production volume measurement

반추위액 내 암모니아태 질소(NH3-N) 생성량은 Chaney와 Marbach(1962)의 방법에 따라 측정하였다. 반추위액을 4,000 rpm으로 원심 분리하여 사료입자가 제거된 반추위액의 상등액 20 ㎕에 페놀 컬러 시약(phenol color reagent) 1 mL과 알칼리-하이포클로라이트 시약(alkali hypochlorite reagent) 1 mL를 완전히 혼합하여 37℃의 항온수조기에서 15분 동안 반응시킨 후, 분광광도계(Optizen UV2120, Mecasis, 한국)를 이용하여 630 nm에서 흡광도를 측정하였다.
The amount of ammonia nitrogen (NH 3 -N) in the rumen fluid was measured according to the method of Chaney and Marbach (1962). Centrifuge the rumen fluid at 4,000 rpm to thoroughly mix 1 mL of phenol color reagent and 1 mL of alkali-hypochlorite reagent in 20 µl of the supernatant of the rumen liquid from which feed particles were removed. After reacting for 15 minutes in a constant temperature bath of ℃, the absorbance was measured at 630 nm using a spectrophotometer (Optizen UV2120, Mecasis, Korea).

1-6. 휘발성 지방산(1-6. Volatile fatty acids ( volatilevolatile fattyfatty acidacid , , VFAVFA ) 생산량 측정Output measurement

반추위액 내 휘발성 지방산 생성량은 Erwin 등(1961)의 방법에 따라 측정하였다. 상기 사료입자가 제거된 반추위액의 상등액 1 mL에 25% 메타인산(metaphosphoric acid) 200 ㎕를 첨가하여 30분 동안 정치시키고, 13,000 rpm에서 원심 분리한 후 NukolTM fused silica capillary column(0.25 mm I.d.× 0.25 μm film × 30 m length, SUPELCO, 미국)이 장착된 가스 크로마토그래피로 분석하였다.
The amount of volatile fatty acid produced in the rumen fluid was measured according to the method of Erwin et al. (1961). 200 μl of 25% metaphosphoric acid was added to 1 mL of the supernatant of the rumen liquid from which the feed particles had been removed, and allowed to stand for 30 minutes, followed by centrifugation at 13,000 rpm, followed by Nukol TM fused silica capillary column (0.25 mm Id ×). Analysis was carried out by gas chromatography equipped with 0.25 μm film × 30 m length, SUPELCO, USA.

1-7. 건물소화율의 측정1-7. Measurement of building fire extinguishing rate

건물소화율은 Moore(1970)의 방법에 따라 측정하였다. 상기 혐기상태의 반추위액과 시험사료를 혼합하여 발효시킨 발효물은 여과지(Whatman filter paper No.541, whatman, 독일)를 이용하여 여과한 후 65℃ 건조기에서 48시간 동안 건조하여 무게를 측정함으로써, 발효 과정으로 인해 소실된 건물의 양을 계산하여 산출하였다.
Dry extinguishing rate was measured according to the method of Moore (1970). The fermented product fermented by mixing the anaerobic rumen liquid and the test feed is filtered using a filter paper (Whatman filter paper No. 541, whatman, Germany) and then dried in a 65 ℃ dryer for 48 hours and weighed, The amount of dry matter lost due to fermentation was calculated and calculated.

2. 결과2. Results

2-1. 반추위 발효 pH2-1. Rumen Fermentation pH

본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박과 기존 조사료 자원인 볏짚의 반추위 발효에 의한 반추위 pH 변화를 측정하였다. 상기 카카오박은 아프리카산 카카오 열매에서 과육부분(초콜렛 원료)을 제거하고 남은 외피부분을 수거하여 건조한 것을 사용하였고, 상기 포도박은 미국산 포도열매를 착즙하고 남은 포도껍질을 수거하여 건조한 것을 사용하였다.Changes in rumen pH were measured by the rumen fermentation of cacao foil, cassava root and grape foil of the present invention and rice straw, which is an existing feedstock. The cacao foil was used to remove the skin part (chocolate raw material) from the cacao fruit from Africa and collect the remaining outer skin part and use the dried one.

그 결과, 기존 조사료원인 볏짚과 본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박의 반추위 pH는 6.68~6.78 범위인 것으로 관찰되었고, 이는 반추위 내 적정 pH인 5.8~7.2 범위 내에서 유지되므로, 반추위 내 미생물 활동에 영향을 미치지 않을 것으로 확인되었다(표 1). As a result, the rumen pH of the rice straw and cacao foil, cassava root and grape foil of the present invention was observed to be in the range of 6.68 ~ 6.68, which is maintained within the range of 5.8 ~ 7.2, the optimum pH in the rumen, microorganisms in the rumen It was found not to affect the activity (Table 1).

Figure 112017077460118-pat00001
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2-2. 암모니아태 질소 생성량2-2. Ammonia nitrogen production

기존 조사료원인 볏짚과 본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박의 반추위 발효에 의한 암모니아태 질소의 생성량을 측정하였다.The amount of ammonia-nitrogen produced by the rumen fermentation of rice straw and the cacao meal, cassava root and grape leaves of the present invention was measured.

그 결과, 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박은 볏짚보다 암모니아태 질소의 생성량이 증가하였고, 특히 카카오박의 암모니아태 질소의 생성량이 현저하게 증가된 것을 확인하였다(표 2).As a result, it was confirmed that the amount of ammonia-nitrogen produced more cacaobak, cassava root and grape leaves than rice straw, in particular, the amount of ammonia-nitrogen produced by cacaobak significantly increased (Table 2).

Figure 112017077460118-pat00002
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2-3. 건물소화율2-3. Building fire extinguishing rate

본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박과 기존 조사료 자원인 볏짚의 반추위 발효에 의한 건물소화율을 측정하였다.The rate of dry matter digestion by the rumen fermentation of cacao foil, cassava root and grape foil of the present invention and rice straw, which is an existing feedstock, was measured.

그 결과, 카카오박 및 카사바 뿌리는 볏짚보다 건물소화율이 증가하였으며, 특히 카카오박의 건물소화율이 현저하게 증가되었지만, 포도박은 볏짚에 비해 건물소화율이 낮은 것으로 관찰되었다. 건물 소화율은 반추위 내 사료자원의 분해율을 의미하는 것으로, 이를 통해 상기 시험사료들 중 카카오박의 분해율이 가장 우수함을 확인하였다(표 3).As a result, cacaobac and cassava roots showed higher dry matter digestibility than rice straw, and especially cacaobacca significantly increased dry matter digestion rate, but grape foil was observed to have lower dry matter digestion rate than rice straw. Dry matter digestibility means the decomposition rate of feed resources in the rumen, it was confirmed that the highest decomposition rate of cacao foil of the test feeds (Table 3).

Figure 112017077460118-pat00003
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2-4. 휘발성 지방산 생성량2-4. Volatile Fatty Acid Production

반추위에서 생성되는 휘발성 지방산은 반추동물의 생명 유지에 필요한 에너지의 70%를 공급해주는 중요한 에너지원이다. 휘발성 지방산 중 초산은 반추위 내 섬유소 분해율과 밀접한 관련이 있고, 프로피온산은 반추위벽에서 흡수되어 간에서 포도당으로 전환된 후 유선조직에서 우유 생산에 필요한 에너지로 사용되기 때문에 젖소의 유생산성과 밀접한 관련이 있다. 이에, 본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박과 기존 조사료 자원인 볏짚의 반추위 발효에 의한 휘발성 지방산의 생성량을 분석하였다.Volatile fatty acids produced in the rumen are an important source of energy that provides 70% of the energy needed to sustain the life of ruminants. Acetic acid among volatile fatty acids is closely related to the rate of fibrin breakdown in the rumen, and propionic acid is closely related to the dairy productivity of cow's milk because it is absorbed from the rumen wall and converted to glucose in the liver and used as energy for milk production in the mammary tissue. Thus, the amount of volatile fatty acids produced by the rumen fermentation of cacao foil, cassava root and grape foil of the present invention and rice straw, which is a conventional feedstock resource, was analyzed.

그 결과, 총 휘발성 지방산의 생성량은 카카오박 및 카사바 뿌리가 볏짚 보다 증가한 것으로 관찰되었고, 카카오박 및 카사바 뿌리 모두 휘발성 지방산 중 초산과 프로피온산에서 상대적으로 높은 생성량을 나타내었지만, 포도박은 볏짚에 비해 휘발성 지방산의 생성량이 낮은 것으로 확인되었다. 또한, 초산과 프로피온산의 비율은 2:1 이상이 적정 비율이므로, 이를 통해 반추위 발효가 안정적으로 이루어진 것을 알 수 있었다(표 4).As a result, the amount of total volatile fatty acid produced was higher than that of rice straw in cacao and cassava roots. It was confirmed that the amount of produced was low. In addition, the ratio of acetic acid and propionic acid is 2: 1 or more, so it can be seen that through this rumen fermentation was made stable (Table 4).

Figure 112017077460118-pat00004
Figure 112017077460118-pat00004

2-5. 발효 가스 생성량2-5. Fermentation Gas Production

본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박과 기존 조사료 자원인 볏짚의 반추위 발효에 의한 총 가스 생성량 및 메탄과 수소의 생성량을 측정하였다.Total gas production and methane and hydrogen production were measured by the rumen fermentation of cacao foil, cassava root and grape gourd of the present invention and rice straw as an existing feedstock.

그 결과, 총 가스 생산량의 경우 포도박은 볏짚보다 감소하였고 카카오박 및 카사바 뿌리는 볏짚보다 증가하였지만, 메탄 생성량의 경우 카카오박 및 카사바 뿌리가 볏짚보다 감소하였고 포도박은 볏짚에 비해 상대적으로 증가한 것으로 관찰되었다.As a result, the total gas production was lower than the rice straw and the cacao and cassava roots were higher than the rice straw, while the methane production was higher than the rice straw and the grape leaves were relatively higher than the rice straw. .

또한, 반추위 내 혐기성 미생물의 발효작용에 의해 생성된 수소는 메탄 생성 박테리아에 의해 메탄으로 생성될 수 있으나, 카카오박, 카사바 뿌리, 포도박 및 볏짚의 반추위 발효에 의한 수소의 생성량은 모두 낮은 수준으로 유지되었으므로, 이는 메탄 생성의 감소에 영향을 줄 수 있음을 확인하였다(표 5).In addition, hydrogen produced by the fermentation of anaerobic microorganisms in the rumen can be produced as methane by methane-producing bacteria, but the amount of hydrogen produced by the rumen fermentation of cacao foil, cassava root, grape leaves and rice straw is all at a low level. As it was maintained, it was confirmed that this could affect the reduction of methane production (Table 5).

Figure 112017077460118-pat00005
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실시예 2. Example 2. In situIn situ 반추위 발효 시험 Rumen Fermentation Test

1. 재료 및 방법1. Materials and Methods

1-1. 공시축 및 사양관리1-1. Disclosure axis and specification management

충청남도 부여군에 소재한 목장에서 반추위 캐뉼라(cannula)를 장착한 홀스테인(Holstein) 거세우(체중 700 ± 50 kg) 2 두를 공시하였다. 공시축은 큰 송아지 배합사료 3 kg와 볏짚 10 kg를 1일 제한 급여하였고, 미네랄 블록 및 물은 자유 섭취하도록 하였다.
Two herds of Holstein castrate (700 ± 50 kg) with rumen cannula were presented at a ranch in Buyeo, Chungcheongnam-do. The diet was given a daily limit of 3 kg of large calf feed and 10 kg of rice straw, and mineral blocks and water were taken freely.

1-2. 반추위 내 건물소실률 측정1-2. Measurement of building loss rate in rumen

카카오박, 카사바 뿌리, 포도박 및 볏짚을 2 mm 체(sieve)가 장착된 실험용 분쇄기로 세절하여 나일론 백(nylon bag, 80×150 mm; 45 ㎛ pore size)에 각각 5 g씩 넣고 밀봉하였다. 상기 나일론 백을 실험 수행 20분 전부터 39~40℃의 미온수에 담가 빠르게 용해되는 수용성 영양분의 함량을 조사하였다. 나일론 백은 3번 반복으로 진행하였으며 공시동물의 오전 사료 급여와 동시에 반추위에 넣어 0, 4, 8, 12, 24, 48 및 72 시간 동안 배양하였다. 배양이 끝난 나일론 백은 반추위에서 즉시 꺼내어 얼음물에 침지하여 미생물의 성장을 억제시키고, 흐르는 맑은 물에 충분히 세척하였다. 세척된 나일론 백은 60℃ 환류 건조기에서 48시간 동안 건조시키고, 30분 동안 데시케이터(desiccator)에서 식힌 후에 무게를 측정하여 건물소실율을 계산하였다.Cacao foil, cassava root, grape foil and rice straw were cut into a laboratory grinder equipped with a 2 mm sieve and sealed in a nylon bag (80 × 150 mm; 45 μm pore size) of 5 g each. 20 minutes before the experiment, the nylon bag was immersed in lukewarm water at 39-40 ° C. to examine the content of water-soluble nutrients. The nylon bag was repeated three times and incubated for 0, 4, 8, 12, 24, 48 and 72 hours in the rumen at the same time as the feed of morning animals. After incubation, the nylon bag was immediately taken out of the rumen and immersed in ice water to inhibit the growth of microorganisms, and washed sufficiently with clear water. The washed nylon bags were dried for 48 hours in a reflux dryer at 60 ° C., cooled in a desiccator for 30 minutes, and weighed to calculate dryness loss.

Figure 112017077460118-pat00006

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1-3. 반추위 내 건물 분해율 측정1-3. Determination of building breakdown rate in rumen

반추위 내 건물 분해율은 나일론 백 실험을 통하여 얻어진 발효 시간대별 건물 소실율을 바탕으로하여 다음의 Ørskov와 McDonald 공식을 이용하여 산출하였다. The rate of dry matter decay in the rumen was calculated using the following Ørskov and McDonald formulas based on the rate of dry matter loss during fermentation time obtained from nylon bag test.

P = a + b(1-e-ct)P = a + b (1-e -ct )

P: 시간 “t”경과 시의 반추위 내 건물 분해율(%)P : Decomposition rate of building in rumen during time “t” (%)

a:“0”시간대의 건물 분해율(%), 즉 빠르게 분해되는 건물 부분a :% of building breakdown in time “0”, ie the part of the building that breaks down quickly

b: a를 제외하고 분해될 수 있는 잠재적 건물 분해율(%)b : Potential building decomposition rate (%) that can be decomposed except a

c:“b”의 시간당 분해상수c: hourly decomposition constant of “b”

t: 반추위 내 발효 시간
t : fermentation time in the rumen

1-4. 반추위 내 건물 유효분해도 측정1-4. Determination of Building Effective Resolution in Rumen

반추위 내 건물 유효분해도(effective ruminal degradability, ED)는 사료의 반추위 내 통과 속도를 시간당 2%(r=0.02)로 가정하여, 다음과 같은 공식으로 추정하였다. The effective ruminal degradability (ED) in the rumen was estimated by the following formula, assuming that the feed rate in the rumen was 2% per hour (r = 0.02).

ED = a + b{c/(c+r)}ED = a + b {c / (c + r)}

ED : 건물 유효분해율ED: effective decomposition rate of building

a, b, c: 건물분해율 상수(건물소실율 공식에서와 동일)a, b, c: dry matter decay rate constant (same as in the building loss rate formula)

r: 사료의 반추위 통과율 상수(시간당 2%로 가정)
r : rumen pass rate constant of feed (assuming 2% per hour)

2. 결과2. Results

분해상수 'a'값은 공식의 Y축 절편으로 반추위 발효 0시간 대 분해율을 의미하며, 이론적으로는 0%이지만 수용성이거나 입자도가 너무 작아 물리적으로 나일론 백을 빠져나가는 등 반추위 발효에 의하지 않고 나일론 백을 빠져나가는 건물량을 의미한다.The decomposition constant 'a' is the Y-axis intercept of the formula, which means 0 hours of rumen fermentation versus decomposition rate.Theoretically, it is 0%, but it is water-soluble or the particle size is too small to physically exit the nylon bag. Means the amount of building exiting.

또한, 'b'값은 반추위 내에서 미생물에 의해 분해되는 건물부분을 의미하며, 'c' 값은 시간당 분해속도를 나타내는 것으로 소화율 추정을 위해서는 반드시 고려되어야 한다. In addition, the 'b' value refers to the building part that is decomposed by the microorganisms in the rumen, and the 'c' value represents the decomposition rate per hour and must be considered for estimating digestibility.

반추위 내 소실율을 기초로 얻어진 분해상수들은 사료의 반추위 내 통과속도가 고려되지 않은 값이므로, 사료의 반추위 통과속도를 시간당 2%(r=0.02)로 가정하여 산출한 반추위 내 유효분해도(ED) 값을 통해 카카오박, 카사바 뿌리, 포도박 및 볏짚의 반추위 내 소화율을 추정하였다.Decomposition constants obtained on the basis of the loss rate in the rumen do not consider the rate of transit in the rumen of the feed, so the effective resolution (ED) value in the rumen calculated by assuming that the rate of feed through the rumen is 2% per hour (r = 0.02) We estimated the digestibility of cacao foil, cassava root, grape leaves and rice straw in the rumen.

그 결과, 반추위 내 건물 소화율에서 카카오박은 63.129%, 카사바 뿌리는 66.598%, 포도박은 44.041%, 볏짚은 41.249%로, 본 발명의 카카오박, 카사바 뿌리 및 포도박이 볏짚보다 건물 소화율이 증가되었고, 특히 카카오박과 카사바 뿌리의 소화율은 볏짚에 비해 현저히 증가되었으며, 카사바 뿌리의 소화율이 가장 우수함을 확인하였다(표 6). As a result, in the rumination of the building digestibility of the cacao foil 63.129%, cassava root 66.598%, grape gourd 44.041%, rice straw 41.249%, the cacao foil, cassava root and grape leaves of the present invention increased the building digestibility of rice straw, in particular The digestibility of cacao and cassava roots was significantly increased compared to rice straw, and the digestibility of cassava roots was the best (Table 6).

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Claims (6)

카카오박 또는 카사바 뿌리를 유효성분으로 함유하고, 포도박을 추가로 함유하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물.A feed additive composition for reducing methane production of ruminant, which contains cacao foil or cassava root as an active ingredient and further contains grape foil. 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물은 반추위 소화율 개선 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물.The feed additive composition for reducing methane production according to claim 1, wherein the feed additive composition for reducing methane production has a ruminant digestibility improvement effect. 제1항에 있어서, 상기 반추동물은 소, 염소, 양, 기린, 사슴, 버팔로 또는 낙타인 것을 특징으로 하는 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물.The feed additive composition for reducing methane production according to claim 1, wherein the ruminant is cow, goat, sheep, giraffe, deer, buffalo or camel. 제1항, 제3항 및 제4항 중 어느 한 항의 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료첨가제 조성물을 포함하는 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물.A feed composition for reducing methane production of ruminant, comprising a feed additive composition for reducing methane production of the ruminant of claim 1. 제5항의 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 조성물을 반추동물에 급여하여 반추동물의 메탄 생성을 저감하는 방법.A method for reducing methane production of ruminants by feeding the ruminant the feed composition for reducing the methane production of the ruminant of claim 5.
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