KR101947277B1 - Tram-34를 함유하는 화상 후 비후성 반흔 형성 예방용 약학 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 TRAM-34를 함유하는 화상 후 비후성 반흔 형성 예방용 조성물에 관한 것이다.

Description

TRAM-34를 함유하는 화상 후 비후성 반흔 형성 예방용 약학 조성물 {Pharmaceutical composition containing TRAM-34 for preventing post-burn hypertrophic scar formation}

본 발명은 K_ca3.1 채널 선택적 차단제를 함유하는 비후성 반흔 형성 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

화상 후 비후성 반흔은 화상 이후 상처가 회복되는 과정에서 흉터가 위로 불거져 나오는 것을 말한다. 화상 후 비후성 반흔의 발생비율은 화상환자의 60%~90%로 발생 빈도가 매우 높아 화상환자들의 육체적, 정신적 고통과 경제적 피해는 매우 크고 심각한 사회적 문제이다. 비후성 반흔은 화상 상처가 치유되면서 1~2주 경부터 생겨나기 시작해, 대부분 4~6개월, 길게는 2년까지 자라며 다양한 증상을 동반하는데, 치료를 하지 않으면 영구적으로 남아 이차적인 피부 구축 (contraction)과 관절 구축을 초래한다. 또한, 정상 피부와 달리 땀샘이나, 지방샘, 모발, 모낭 등 피부 부속기를 포함하지 않아 경미한 자극에도 쉽게 상처가 생기고 잘 아물지 않는다. 화상 후 비후성 반흔은 보기에 흉할 뿐만 아니라 통증과 가려움증 등 다양한 감각 이상을 동반하며 부위에 따라 심각한 기능 장애를 초래한다.

화상 후 비후성 반흔은 화상환자들에게서 나타나는 매우 흔하고 심각한 문제이지만 아직까지 정확한 발병 기전과 정립된 효과적인 치료방법이 없어 명확한 병태생리학적 발생기전 규명과 그 기전에 근거한 병증 특이적 치료제 개발이 시급한 실정이다.

다양한 자극에 대해 세포는 세포막과 소포체막에 위치한 칼슘채널을 통해 세포질내 칼슘 농도를 증가시킨다. 증가한 세포질내 칼슘 이온은 세포막에 위치한 K_ca 채널 (calcium-activated potassium channel)을 활성화하여 세포막을 탈분극시키고 세포의 증식과 이동 등 다양한 형태의 반응을 가능하게 한다.

화상 후 비후성 반흔형성의 원인은 섬유아세포의 과다증식과 세포외 기질인 타입 III 콜라겐 등의 과다분비 (1) 때문인데, K_ca3.1 채널은 섬유아세포에 특이적으로 분포하는 K_ca 채널의 일종으로 섬유아세포의 활성에 주된 기능을 담당한다.

K_ca3.1 채널에 선택적으로 부착해 기능을 억제하는‘선택적 차단제’로 잘알려진 TRAM-34 (1-[(2-Chlorophenyl)diphenylmethyl]-1H-pyrazole)는 기존 연구들에서 신장 조직의 항섬유화 작용, 폐조직의 항섬유화 작용, 혈관신생성 억제효과, 항동맥경화 작용 등이 보고되었으나 (2-5), 아직 화상환자에서 화상 후 비후성 반흔 형성과 관련된 연구는 보고된 바 없다.

Oliveira GV et al., Hypertrophic versus non hypertrophic scars compared by immunohistochemistry and laser confocal microscopy: type I and III collagens. Int Wound J. 2009; 6: 445-52 Huang C et al., KCa3.1 mediates activation of fibroblasts in diabetic renal interstitial fibrosis. Nephrol Dial Transplant. 2014; 29: 313-24. Roach KM et al., The K+ channel KCa3.1 as a novel target for idiopathic pulmonary fibrosis. PLoS One. 2013; 8: e85244 Kohler R et al., Blockade of the intermediateconductance calcium-activated potassium channel as a new therapeutic strategy for restenosis. Circulation 2003; 108: 1119-1125 Wulff H et al., Modulators of small- and intermediate-conductance calcium-activated potassium channels and their therapeutic indications. Curr Med Chem 2007; 14: 1437-1457 Jensen BS et al., Inhibition of T cell proliferation by selective block of Ca(2+)-activated K(+) channels. Proc Natl Acad Sci U S A. 1999; 96: 10917-21 Arakawa M et al., Increased collagen synthesis accompanying elevated m-RNA levels in cultured Werner's syndrome fibroblasts. J Invest Dermatol 1990; 94:187-90. Kim JB et al., Expression patterns of two potassium channel genes in skeletal muscle cells of patients with familial hypokalemic periodic paralysis. Neurol India 2011;59:527-31.

본 발명은 좀 더 효과적인 비후성 반흔 형성 예방용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

섬유아세포는 세포 손상시 반흔 형성에 주된 역할을 담당한다. 본 발명에서는 섬유아세포에 널리 분포하며 증가한 세포내 칼슘 농도에 의한 세포 활성에 주된 기능을 수행하는 중간 전도도 K_ca3.1 채널 (intermediate-conductance K_ca channel)의 선택적 억제제 (selective blocker)인 TRAM-34 (1-[(2-Chlorophenyl)diphenylmethyl]-1H-pyrazole)를 이용해 화상 후 비후성 반흔 형성 억제를 통한 새로운 피부개선제 개발 가능성을 확인하고자 한다.

본 발명자들은 좀 더 효과적인 화상후 비후성 반흔 예방용 약학 조성물을 개발하기 위하여 연구한 결과, 화상 세포에서는 정상 세포와 비교하여 현저히 높은 세포질 칼슘 이온 농도가 나타남을 처음으로 확인하였고, 정상 세포와 비교하여 화상 섬유아세포의 막 분획에서는 K_Ca3.1 발현이 현저히 높았고 (1.43±0.12, P<0.01), 세포질 분획에서는 낮았다 (0.64±0.25, P<0.01). 이와 같은 실험 결과를 근거로 하여 화상 세포막의 K_Ca3.1 채널 활성을 억제하면 화상 이후 섬유아세포의 과도한 활성으로 인한 섬유아세포의 과다 증식 및 세포외 기질인 타입 III 콜라겐 등의 과다생성을 억제해 비후성 반흔 형성을 예방하는 효과가 있을 것으로 예측하였다.

본 발명은 K_ca3.1 채널 활성 저해제를 포함하는 비후성 반흔 형성 예방용 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 K_ca3.1 채널 활성 저해제가 K_ca3.1 채널 선택적 차단제임을 특징으로 하는 비후성 반흔 형성 예방용 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 K_ca3.1 채널 선택적 차단제가 TRAM-34임을 특징으로 하는 비후성 반흔 형성 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

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본 발명의 K_ca3.1 채널 활성 저해제를 유효성분으로 함유하는 비후성 반흔 형성 예방용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 0.0001 내지 50 중량%로 포함한다.

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본 발명의 조성물은 상기 K_ca3.1 채널 활성 저해제인 TRAM-34를 유효성분으로 함유하는 비후성 반흔 형성 예방용 조성물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은 임상 투여시 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 K_ca3.1 채널 단백질에 대한 억제제를 포함하는 비후성 반흔 형성 예방용 조성물을 제공한다. K_ca3.1 채널 억제제로는 K_ca3.1 채널 선택적 차단제인 TRAM-34를 사용한다.

본 발명의 비후성 반흔 형성 예방용 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

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또한, 본 발명의 비후성 반흔 형성 예방용 조성물은 하나 또는 그 이상의 비후성 반흔 형성 예방용 조성물과 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 비후성 반흔 형성 예방용 조성물은 본 발명의 분야에서 통상의 지식을 가진 기술자에게 잘 알려진 화학요법약제 (chemotherapeutic agent)를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 비후성 반흔 형성 예방용 조성물은 상기 유효 성분 외에도 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 포함할 수 있으며, 이러한 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 가용화제 등이 있다.

또한, 본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

이와 같이 제조된 제제는 목적하는 바에 따라 비경구 방식 즉, 피하 투여, 근육 투여 또는 국소적용(topical application)할 수 있으며, 용량은 일일 투여량이 0.001㎍~10㎎/㎏의 양을 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 투여시간, 투여방법, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

또한, 본 발명의 K_ca3.1 채널 활성 저해제를 유효성분으로 하는 도포제는 통상적인 제조방법에 따라 어떤 형태로든 용이하게 제조할 수 있다. 일례로서 크림형 도포제를 제조함에 있어서는 일반적인 수중유형(O/W) 또는 유중수형(W/O)의 크림 베이스에 본 발명의 K_ca3.1 채널 활성 저해제를 함유시키고 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등을 필요에 따라 사용하는 한편, 물성개선을 목적으로 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 병용할 수 있다.

액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 비후성 반흔 형성 예방용 조성물의 제제 형태는 연고, 크림제, 과립제, 산제, 피복정, 정제, 캡슐제, 좌제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등이 될 수 있다.

본 발명의 조성물은 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 근육 내, 동맥 내, 복강 내, 흉골 내, 경피, 비측 내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구 내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.

본 발명의 화상 후 비후성 반흔 형성 예방용 조성물에 있어서, "유효량"은 화상 후 비후성 반흔 형성을 억제하는 효과를 이루는데 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 본 발명의 유효 성분의 "유효량"은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 성인의 경우, 상기 억제제를 1일 1회 내지 수회 투여시, 화합물일 경우 0.1ng/㎏~10㎎/㎏의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 유전공학적 기술과 관련된 사항은 샘브룩 등의 문헌(Sambrook, et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001)) 및 프레드릭 등의 문헌 (Frederick M. Ausubel et al., Current protocols in molecular biology volume 1, 2, 3, John Wiley & Sons, Inc. (1994))에 개시되어 있는 내용에 의해 좀 더 명확해진다.

본 발명의 화상 후 비후성 반흔 형성 예방 또는 치료용 조성물은 단독으로, 또는 레이저 치료, 화학 치료 등과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따르면, 정상 세포와 비교하여 화상 섬유아세포의 막 분획에서는 K_Ca3.1 채널 단백질 발현이 현저히 높게 나타나, 화상 세포 막의 K_Ca3.1 채널 활성을 억제하면 화상 이후 섬유아세포의 과도한 활성으로 인한 섬유아세포의 과다 증식과 세포외 기질 합성을 억제해 비후성 반흔 형성을 예방하거나 치료하는 효과가 있을 것으로 예상된다.

도 1은 Fura-2AM (fura-2-acetoxymethyl ester) 염색과 유동 세포 분석법 (flow cytometry)으로 섬유아세포 내의 세포질 칼슘 수준을 측정한 것이다. 도 1a와 도 1b는 각각 화상세포가 정상 세포에 비하여 세포질에서 칼슘 이온농도가 현저히 높음을 보여주는 히스토그램과 막대그래프이다. ^* P<0.01은 정상 시료와 비교한 것이다.
도 2a는 정상 세포 및 화상 세포의 막 분획에서 K_Ca3.1 단백질을 웨스턴 블롯팅 분석한 결과이다. 도 2b는 K_Ca3.1 단백질을 밀도계로 분석한 것이다. 각 값은 배수 변화 (fold-change)로 나타내었다. 정상 세포는 1로 나타낸다. ^* P<0.01은 정상 세포와 비교한 것이다. 플라즈마 막 Ca^{2 +} ATPase (PMCA ATPase)가 막 단백질의 로딩 대조군으로 사용되었다.
도 3a는 정상 세포와 화상 세포의 세포질 분획에서 K_Ca3.1 단백질을 웨스턴 블롯 분석한 결과이다. 도 3b는 상기 도 3a의 결과를 밀도계로 분석한 결과이다. 각 값은 배수 변화 (fold-change)로 나타내었다. 정상 세포는 1로 나타낸다. ^* P<0.01은 정상 세포와 비교한 것이다. β-액틴을 세포질 단백질의 로딩 대조군으로 사용하였다.
도 4a와 도 4b는 각각 화상 세포에서 TRAM-34 처리가 타입 Ⅲ 콜라겐 mRNA와 단백질 수준을 투여량 의존적으로 감소시킴을 보여주는 실시간 RT-PCR (도 4a)과 웨스턴 블롯 및 밀도계 분석(도 4b) 결과이다. 담체는 DMSO로 처리한 화상 세포를 나타내며, 이는 상대적 밀도 100%로 정의되었다. Normal vehicle은 DMSO로 처리한 정상 세포를 말한다. ^* P<0.01은 정상 세포와 비교한 것이다. β-액틴을 로딩 대조군으로 사용하였다.

아래에서는 구체적인 실시예를 들어 본 발명의 구성을 좀 더 자세히 설명한다. 그러나, 본 발명의 범위가 실시예의 기재에만 한정되는 것이 아님은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명하다.

1. 피험자

화상 후 1-2주 되고, 한림대학교 한강성심병원에서 외과 수술을 받은 36명 환자의 외상 부위 피부조직과 그 환자의 정상 피부조직을 채취하였다. 환자들은 체표면적 전체의 20% 이상에 3도 화상을 입었고, 나이는 6~18세였다. 모든 환자에게서 조직 제공에 관하여 서면 동의를 받았고, 연구는 한림대학교 부속 한강성심병원의 임상시험심사위원회의 가이드라인에 따라 수행하였다.

2. 피부조직 채취 등

피부조직 시료를 채취하고 70% 에탄올로 세 번 씻은 다음 Ca^{2 +}-Mg^{2 +} 및 항생제와 항진균제가 함유된 차가운 PBS에 두었다 (Gibco, Life Technologies, Waltham, MA, USA). 피하지방과 느슨한 결합조직은 미세한 핀셋과 메스를 이용하여 제거하였다. 조직은 폭을 약 3-4mm가 되는 작은 조각으로 만들고 10㎖ 디스페이즈 (dispase) Ⅱ 용액 (1U/㎖) (Gibco, Life Technologies)을 함유한 50 ㎖ 코니칼 튜브로 옮기고 4℃에서 16시간 동안 유지하였다. 분해반응 후, 진피와 표피를 소독한 핀셋으로 당기거나 벗겨내었다. 분리된 진피는 콜라게네이즈 타입 Ⅳ 용액 (500U/㎖) (Gibco, Life Technologies)으로 37℃에서 30분간 분해하였다. 이후 시료는 10% 우태혈청, 2μM 글루타민 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), 1% 비필수 아미노산 (Thermo Scientific), 0.1mM β-머캅토에탄올 (Sigma-Aldrich), 5-ng/mL 섬유아세포 성장인자 기반 재조합 인간 단백질 (fibroblast growth factor-basic recombinant human protein, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신 (Caisson, Logan, UT, USA)이 함유된 DMEM 배지 (Thermo Scientific, Marietta, OH, USA)에 넣어 콜라게네이즈를 불활성화하고, 여과한 다음 300 x g로 5분간 원심분리했다. 침전은 10% FBS 함유 DMEM에 재현탁하고 하루 동안 37℃로 95% 공기, 5% CO₂ 함유 배양기 (Thermo Scientific)에서 배양하였다. 다음날 섬유아세포를 모든 실험에 사용하였다. 세포는 0.1μM, 1μM 또는 10μM TRAM-34 (1-[(2-chlorophenyl) diphenylmethyl]-1H-pyrazole; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) (DMSO 용액으로 제조된 것); Sigma-Aldrich)에 24시간 동안 노출된 다음 배양 상층액, 총 RNA 및 세포 용균액을 각각 모았다.

3. 세포질 칼슘 수준 측정

세포질 칼슘 수준은 막 투과성 칼슘-민감성 형광 안료인 Fura-2AM (fura-2-acetoxymethyl ester)(Sigma-Aldrich)을 이용하여 분석하였다. 정상 및 화상 세포를 모두 4 mM 칼륨 완충액에 희석한 1μM Fura-2AM에 로딩하고 30분 동안 CO₂ 배양기에 넣어두었다. 잔여 안료를 제거하기 위하여 칼륨 완충액으로 씻은 다음, 세포를 트립신 EDTA (Caisson)로 처리했다. 이후, 세포를 모아 Ca^{2 +}가 없는 PBS로 세척하고, 유동 세포 분석법으로 분석하였다 (Millipore, Billerica, MA, USA). 모든 실험 프로토콜은 세 번 수행하였다.

4. 정량적 역전사 PCR 분석

TRIzol 시약 (Invitrogen)을 이용하여 섬유아세포로부터 총 RNA를 추출하고, 제조자의 지시에 따라 SuperScript Ⅲ 역전사효소 (Invitrogen)를 이용하여 총 RNA 100 ng을 cDNA로 전환하였다. AccuPower PCR PreMix (Bioneer, Daejun, Korea)를 반응 혼합물에 가하고, K_Ca3.1 채널 유전자 KCNN4와 타입 Ⅲ 콜라겐 유전자 COL3A1에 대한 프라이머를 이용하여 정량적 역전사 PCR 분석을 수행하였다. 프라이머는 VectorNTI10 (Invitrogen) 및 Primer3 소프트웨어 (http://sourceforge.net/projects/primer3/)를 이용하여 디자인하였다. PCR 조건은 다음과 같다: 95℃로 5분간 첫 변성 단계, 이후 95℃로 30초간, 55℃로 30초간, 72℃로 1분간을 30회 반복, 마지막으로 72℃로 5분간 최종 연장. 모든 반응은 세 번 수행하였다. 각 유전자의 mRNA 발현 수준은 GAPDH (glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)의 발현에 대해 표준화하였다.

5. 웨스턴 블롯 분석

단백질분해효소 저해제가 함유된 RIPA 완충액 (Roche, 독일) 내의 배양 상층액과 세포 용균액에서 타입 Ⅲ 콜라겐을 측정하였다. K_Ca3.1의 발현 패턴을 평가하기 위하여 정상 세포와 화상 세포의 세포질 단백질 분획과 막 단백질 분획을 분리하여 웨스턴 블롯팅으로 분석하였다. 분획 및 웨스턴 블롯 분석의 구체적인 방법은 종래 논문에 기술된 바와 같다 (2). 채널 단백질을 탐지하기 위하여 K_Ca3.1에 대한 일차 항체 (IK1 [D-5]), 타입 Ⅲ 콜라겐에 대한 일차 항체, β-액틴에 대한 일차 항체 (β-actin [C4]) 및 플라즈마 막 Ca^{2 +} ATPase에 대한 일차 항체 (PMCA ATPase [5F10])를 항염소, 항마우스 또는 항토끼 이차항체와 조합하여 사용하였다. 단백질은 제조자의 지시에 따라 TINA 2.0 밀도분석 시스템 (Raytest Isotopenmeβgerate GmbH, Straubenhardt, Germany)을 이용하여 정량하였다. 모든 실험은 적어도 세 번 수행하였다.

6. 통계 분석

통계 분석에는 IBM SPSS Statistics ver. 19.0 (IBM Co., Armonk, NY, USA)을 이용하였다. 데이터는 평균±표준편차로 나타내었다. Student's t-test와 이원분산분석으로 통계학적 유의성을 나타내는 P<0.01과 비교하였다.

결과 1: 섬유아세포의 세포질 칼슘 수준

칼슘-민감성 안료 Fura-2AM을 이용하여 정상 섬유아세포와 화상 섬유아세포 모두에서 세포질 칼슘 수준을 측정하였다. 형광 백분율은 유동 세포 분석법으로 측정하였다. 각 시료에서 최소 5,000개의 세포를 InCite 소프트웨어 ver. 2.2.2 (Millipore)로 분석하였고, 극치 값은 SSC 291이었다. 화상 세포는 정상 세포와 비교하여 현저히 높은 세포질 칼슘 이온 농도를 나타내었다 (40.41%±3.70% vs. 28.31%±1.56%, P<0.01) (도 1).

결과 2: K _Ca 3 . 1 채널 mRNA 발현

화상 세포와 정상 세포 간의 K_Ca3.1 채널 유전자 KCNN4의 mRNA 수준을 비교하기 위하여 정량적 RT-PCR을 수행하였다. 두 종류의 섬유아세포 간에 현저한 차이점은 없었다 (1.01±0.02, P>0.01).

결과 3: K _Ca 3.1 단백질 발현 패턴을 평가하기 위한 웨스턴 블롯 분석

화상 세포 및 정상 세포의 K_Ca3.1 채널 단백질 발현 프로파일을 비교하였다. 세포의 막 분획과 세포질 분획을 분리하고 K_Ca3.1 단백질 수준을 웨스턴 블롯으로 측정하였다. 정상 세포와 비교하여 화상 섬유아세포의 막 분획에서는 K_Ca3.1 발현이 현저히 높았고 (1.43±0.19, P<0.01), 세포질 분획에서는 낮았다 (0.64±0.25, P<0.01)(도 2, 3).

결과 4: TRAM-34는 타입 Ⅲ 콜라겐의 발현을 저해한다.

실시간 RT-PCR 분석은 0.1μM, 1μM 및 10μM TRAM-34를 화상 유래 섬유아세포에 처리한 경우, DMSO 처리 화상 유래 섬유아세포 (담체 대조군)와 비교하여 섬유형성 마커인 타입 Ⅲ 콜라겐의 mRNA 발현이 투여량 의존적으로 감소함을 보여준다 (41.84-87.63%, P<0.01) (도 4A). 웨스턴 블롯 결과는 나아가 0.1μM, 1μM 및 10μM 농도의 TRAM-34 처리가 담체 대조군과 비교하여 농도 의존적으로 타입 Ⅲ 콜라겐의 발현을 감소시킴을 보여준다 (26.32-72.15%, P<0.01)(도 4B).

<110> Industry Academic Cooperation Foundation, Hallym University <120> Pharmaceutical composition containing Kca3.1 channel selective blockers for preventing hypertrophic scar formation <130> HallymU-JuneBumKim-Kca3.1 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 11 <212> DNA <213> Rattus norvegicus <400> 1 rvrkhrkreq v 11

Claims (6)

1. TRAM-34 (1-[(2-Chlorophenyl)diphenylmethyl]-1H-pyrazole)를 함유하는 화상 후 비후성 반흔 형성 예방용 약학 조성물.
   
   
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