KR101931050B1 - Analysis method for feature and quality control of jeju dendropanax morbifera - Google Patents

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Abstract

The present invention relates to an analysis method for feature and quality control of a Jeju Dendropanax morbiferus extract, and more particularly, to an analysis method for feature and quality control of a Dendropanax morbiferus extract, in which the content of kaempherol was analyzed to establish the method of differentiating raw materials of the Dendropanax morbiferus extract, and the analysis method using the same is developed to be able to manage the quality of a product using the Dendropanax morbiferus extract.

Description

제주 황칠나무 특성 및 품질 관리를 위한 분석방법{ANALYSIS METHOD FOR FEATURE AND QUALITY CONTROL OF JEJU DENDROPANAX MORBIFERA}METHOD FOR FEATURE AND QUALITY CONTROL OF JEJU DENDROPANAX MORBIFERA.

본 발명은 황칠나무 추출물의 특성 및 품질관리를 위한 분석방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 지표성분의 함량을 이용하는 황칠나무 추출물의 특성 및 품질관리용 분석방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for analyzing the characteristics and quality of the extract of Hokutogi, and more particularly, to a method for analyzing the characteristics and quality of Hokutogi extract using the content of the indicator component.

황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.)는 두릅나무과의 아열대성 상록교목으로 우리나라에서는 남부 해안 지역과 제주도에서 분포 자생하고 있다. 제주에서는 한라산에 널리 분포하였으나 마구 벌채되어 지금은 일반인이 접근하기 어려운 돈내코 계곡과 수악계곡 등을 중심으로 해발 400~600m 지대에 주로 자생하고 있다. 황칠나무는 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피에 상처를 주면 황색의 수지액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라고 한다. 황칠은 삼국시대부터 황제의 갑옷, 투구, 기타 금속 장신구의 황금색을 발하는 진귀한 도료로 이용되어 왔으며 고려시대에 쓰여진 고려사절요, 중국의 계림유사, 계림지, 해동역사에 황칠의 채취시기, 사용용도 등이 기록되어 있으며 그 이전인 백제의 특산품이었다는 것이 당나라 역사서인 책부원구, 통전에 남아있다. 이시진의 본초강목에는 황칠나무가 번열 제거, 안질 및 화상치료, 나병에 효과가 있으며 무해하다고 기록되어 있으며, 최근 차 등 식용으로 이용되고 있다.Dendropanax morbifera Lev. Is a subtropical evergreen arboreous tree of Araliaceae. It is distributed in southern coastal area and Jeju Island in Korea. Jeju is widely distributed in Mt. Halla, but it is mainly grown in 400 ~ 600m above sea level, mainly in the Donnaeko Valley and Suokak Valley, which are now difficult to access by ordinary people. Yellow-eyed tree is a species that does not support fallen leaves in the winter. If you bruise the bark, yellow resinous liquid comes out and it is called 黄 漆. Huangchil has been used as a rare paint for the emperor's armor, helmet, and other metal ornaments since the Three Kingdoms period. It has been used in the Goryeo period, which was written in the Goryeo period, the Guilin variety in China, And it is said that it was a special product of Baekje which was before it, and it remains in the passage of the book department of the Tang history book. It is said that it is effective for burning removal, eye quality, burn treatment, leprosy, harmlessness, and it is used recently for tea and food.

최근 황칠나무의 우수한 항암·항균 효과 등 유용한 효능이 밝혀지며 그를 원료로 이용하는 산업화가 활발하게 이루어지고 있으며 이를 재배하는 농가도 늘어나고 있다. 황칠나무의 수확은 개화시기 전인 5월경과 과실의 결실시기 후인 11월경에 이루어지고 있으며, 보편적으로는 지역별로 1개월 가량의 차이는 있으나 11월에서 2월 사이에 이루어진다. 여름인 8월경에는 미성숙한 과실이 혼합될 수 있어 수확시기로 적절하지 않아, 재배 농가에서 8월에는 황칠나무의 채취 또는 수확이 거의 이루어지지 않고 있다.Recently, the beneficial effects such as excellent anticancer and antimicrobial effects of Hwangchujang have been revealed, and industrialization using it as a raw material has been actively carried out, and farmers who grow it are also increasing. The harvesting of Hwangchil trees occurs around May before the flowering period and around November after the fruits have been harvested. It is usually between November and February, although there is a difference of about one month in each region. In the summer of August, immature fruit can be mixed and it is not suitable for the harvest time. Therefore, the harvesting or harvesting of yellowtail is hardly achieved in August at the farmers.

현재 산업적으로 생산되는 황칠나무 제품은 주로 황칠나무의 잎 및 가지를 원료로 하는 추출물을 이용하여 제조되고 있다. 황칠나무의 원료 중 잎으로는 성숙잎이, 가지로는 원가지가 사용되고 있으며, 새순잎 및 소지는 거의 사용되고 있지 않다. 황칠나무 추출물은 주로 황칠나무의 잎 및 가지를 3:7 비율로 혼합한 것을 원료로 하는 경우가 많으나, 황칠나무 원료 자체의 높은 가격과 공급 부족으로 인하여 잎 대신 가지의 비율을 높여 사용하거나 또는 고품질을 지향하며 잎만을 원료로 이용하여 생산되는 경우도 있어, 제품에 사용되는 황칠나무 추출물의 품질을 관리하는 기준이 모호한 문제가 있어 왔다. Currently, the industrially produced Hwangchu-wood products are mainly produced by using extracts of leaves and branches of Hwangchujang. Mature leaves are used as the leaves in the raw materials of the Hwangchu-gil, and leaves are used as the branches. It is often used as a raw material when a mixture of 3: 7 ratio of leaf and branches of Hwangchil is widely used. However, due to high price and shortage of raw materials of Hwacheolchu, And there are also cases where the leaves are produced using only the raw materials. Thus, the standard for managing the quality of the extract of Hokkaido tree used in the products has been ambiguous.

천연물을 이용한 제품의 경우, 식물 전체를 사용하는 경우도 있지만, 식물체의 일부분만을 선택적으로 사용하는 경우가 많기 때문에 유통품에 대한 감별이 쉽지 않은 실정이다. 또한, 천연물의 재배 시간, 환경 등의 다양한 요인에 따라 그 함유 성분에 차이가 있게 되어 변동성이 강한 경향을 보인다. 이에 천연물 제품의 품질관리를 위하여, 지표성분(marker)을 이용하여 그 함량을 측정하고 측정된 함량을 기준과 비교하여 천연물의 품질을 구별하기 위한 방법론이 개시되고 있다. 지표성분은 천연물에서 화학적으로 규명된 성분으로, 천연물을 이용한 제품의 품질을 관리하기 위한 목적으로 정량적 또는 정성적 분석을 위해 사용되며, 활성 지표성분(active marker) 또는 분석 지표성분(analytical marker)으로 구분할 수 있다.In the case of products using natural products, the entire plant may be used, but since only a part of the plant is selectively used, it is not easy to discriminate between the products. In addition, there is a tendency that the content is varied depending on various factors such as the cultivation time of the natural product, the environment, and the variability. Accordingly, a method for distinguishing the quality of a natural product by measuring the content of the natural product using the marker and comparing the measured content with the standard is disclosed. The indicator component is chemically defined in natural products. It is used for quantitative or qualitative analysis for the purpose of controlling the quality of products using natural products. It is used as an active marker or an analytical marker .

KRKR 101490711101490711 B1B1

본 발명은 다양한 조건별 황칠나무 추출물의 지표성분 함량의 변화를 확인하여 황칠나무 추출물의 품질평가시 활용하기 위한 기준을 설정하고, 그를 활용하는 황칠나무 추출물의 품질관리 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 상세하게는, 검량선법을 활용하는 지표성분 분석을 통해 황칠나무 추출물의 원료 감별법을 확립하고, 이를 이용한 분석방법을 개발하여 황칠나무 추출물을 이용하는 제품의 품질관리 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention aims to provide a method for quality control of the extract of Hokkaido japonica extract by setting a criterion for use in assessing the quality of Hokkaido japonica extract by confirming the change of the surface component content of the Hokkaido japonica extract according to various conditions . More particularly, the present invention aims to provide a method for quality control of a product using the extract of Huangchu tree by establishing a method for discriminating raw materials of Huchilchu extract by analyzing an indicator component utilizing the calibration curve method and developing an analysis method using the same.

본 발명의 일 측면에 따르면, 황칠나무 추출물의 품질 평가를 위한 지표성분으로 캠페롤의 검량선을 작성하여 회귀식을 도출하는 제 1단계; 원료의 채취 또는 추출에 있어 적어도 하나의 조건을 달리하여 수득한 황칠나무 추출물을 대상으로 HPLC(High performance liquid chromatography)를 수행하고 크로마토그램으로부터 피크면적을 구하는 제 2단계; 상기 제 1단계의 회귀식 및 상기 제 2단계의 피크면적을 이용하여 상기 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 함량을 도출하는 제 3단계; 상기 제 3단계에서 도출된 캠페롤 함량을 이용하여 품질관리 기준을 설정하는 제 4단계; 평가대상 황칠나무 추출물을 대상으로 HPLC를 수행하고 크로마토그램으로부터 피크면적을 구하는 제 5단계; 상기 제 1단계의 회귀식 및 상기 제 5단계의 피크면적을 이용하여 상기 평가대상 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 함량을 도출하는 제 6단계; 및 상기 제 4단계의 품질관리 기준 및 상기 제 6단계의 캠페롤 함량을 비교하여 상기 평가대상 황칠나무 추출물의 품질을 평가하는 제 7단계를 포함하는 황칠나무 추출물의 품질관리용 분석방법이 제공된다.According to an aspect of the present invention, there is provided a method for preparing a crude oil extract, comprising the steps of: preparing a calibration curve of camphor as an index component for evaluating the quality of the extract; A second step of performing HPLC (High Performance Liquid Chromatography) on the extract of Hwangcholgulchiae obtained by differentiating at least one condition from the extraction or extraction of raw materials and obtaining a peak area from the chromatogram; A third step of deriving a content of camphor in the Hwigae mackerel extract using the regression equation of the first step and the peak area of the second step; A fourth step of setting a quality control standard using the camphor content derived in the third step; A fifth step of performing HPLC on the target Hwanyeongnam extract and determining the peak area from the chromatogram; A sixth step of deriving a content of camphor in the to-be-tested Tochigi leaf extract using the regression equation of the first step and the peak area of the fifth step; And a seventh step of comparing the quality control standard of the fourth step and the camphor content of the sixth step to evaluate the quality of the to-be-tested Tochigi leaf extract, .

또한, 상기 제 1단계는 캠페롤의 표준용액을 제조하는 단계; 상기 표준용액별 HPLC를 수행하고 크로마토그램으로부터 피크면적을 구하는 단계; 상기 표준용액별 피크면적 및 농도를 변수로 검량선을 작성하는 단계를 포함할 수 있다.In addition, the first step may include the steps of: preparing a standard solution of camphor; Performing HPLC according to the standard solution and obtaining a peak area from the chromatogram; And generating a calibration curve using the peak area and the concentration as standard variables.

또한, 상기 회귀식은 하기 수학식 1로 표현될 수 있다.Further, the above regression equation can be expressed by the following equation (1).

[수학식 1][Equation 1]

Figure 112018026528512-pat00001
Figure 112018026528512-pat00001

(상기 수학식 1에서, y는 크로마토그램 피크면적이고 x는 캠페롤 농도이다.)(Where y is the chromatogram peak area and x is the camphor concentration).

또한, 상기 제 7단계에서 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 함량이 0.19 내지 0.98mg/mL 인 것을 바람직한 것으로 판단할 수 있다.In addition, it is preferable that the content of Camphor in the Hwanyeolmum extract in the seventh step is 0.19 to 0.98 mg / mL.

또한, 상기 지표성분으로 쿼세틴을 더 사용하여 동시분석할 수 있다.In addition, simultaneous analysis can be performed by using quercetin as the indicator component.

본 발명의 일 측면에 따른 분석방법에 의하면, 다양한 조건에 따른 황칠나무 추출물의 지표성분 함량 차이를 확인하여 황칠나무 제품에 사용된 황칠나무 추출물의 원료 비율을 역추적할 수 있는 지표방법이 제공된다. 이를 통하여, 황칠나무 추출물에 사용된 황칠나무 원료의 사용 채취부위 비율 또는 타 원료의 혼용 여부를 도출할 수 있다. 또는 추출물 자체의 품질관리 기준을 설정할 수 있다.According to the analysis method according to one aspect of the present invention, an indicator method is provided for checking the difference in the content of the indicator components of the Hwigaechuang Extract according to various conditions to trace back the ratio of the ingredients of the Hwigae . Through this, it is possible to derive the ratio of the harvested portion of the raw materials of Horticulture used in the Horticultural Extract or the mixed use of the other raw materials. Or the quality control standard of the extract itself can be set.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 황칠나무 추출물의 품질관리용 분석방법의 순서도이고,
도 2는 채취부위에 따른 황칠나무 원료의 구분기준을 나타낸 것이고,
도 3은 지표성분인 쿼세틴, 캠페롤 및 이소람네틴의 HPLC 크로마토그램이고,
도 4는 지표성분인 쿼세틴, 캠페롤 및 이소람네틴의 검량선 및 회귀식이다.
FIG. 1 is a flow chart of an analysis method for quality control of an extract of Euphorbiaceae according to an embodiment of the present invention,
FIG. 2 shows the classification criteria of the raw material of Hwangchulchu according to the harvesting site,
FIG. 3 is an HPLC chromatogram of the indicator components quercetin, camphorol and isorhamnetin,
FIG. 4 is a calibration curve and a regression equation of the indicator components quercetin, camphorol and isorhamnetin.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 구체적인 실시예를 상세히 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 첨부된 특허청구범위를 제한하는 것이 아니며, 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 실시예에 대한 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다. 아울러 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 구성 또는 기능에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략한다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings. It will be apparent to those skilled in the art that these embodiments are illustrative of the present invention and are not intended to limit the scope of the appended claims and that various changes and modifications may be made to the embodiments within the scope and spirit of the invention , And it is natural that such variations and modifications fall within the scope of the appended claims. In the following description of the present invention, detailed description of known functions and configurations incorporated herein will be omitted when it may make the subject matter of the present invention rather unclear.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 황칠나무 추출물의 품질관리용 분석방법을 나타낸 순서도이다.FIG. 1 is a flowchart illustrating an analysis method for quality control of the extract of U. pergola according to an embodiment of the present invention.

도 1을 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따른 황칠나무 추출물의 품질관리용 분석방법은 지표성분의 검량선을 작성하여 회귀식을 도출하는 단계; 황칠나무 추출물의 품질관리를 위한 기준을 설정하는 단계; 및 품질을 평가하고자 하는 평가대상 황칠나무 추출물의 지표성분 함량을 도출하고 품질을 평가하는 단계를 포함하여 이루어진다.Referring to FIG. 1, the analysis method for quality control of the extract of U. perilla according to an embodiment of the present invention comprises the steps of: preparing a calibration curve of an indicator component to derive a regression equation; Establishing criteria for quality control of Horticultural extract; And a step of deriving the surface component content of the Tochigiokus extract to be evaluated and evaluating the quality thereof.

우선, 지표성분을 선정하고 검량선을 작성하여 회귀식을 도출하는 단계(S1)가 수행된다. 지표성분은 황칠나무 원료의 채취부위별, 채취시기별, 수령별 또는 지역별 요인의 차이에 의한 변동성이 적으면서 독성을 포함한 특성 자료가 풍부하고 지표성분으로 활용사례가 많아 식품의약품안전처 승인이 가능한 성분이 선정되는 것이 바람직하다. 황칠나무의 원료, 제조공정 및 최종 제품까지 적용되어 황칠나무를 규격화 할 수 있는 지표성분을 발굴하기 위해 다양한 성분들을 검토하고 스크리닝을 수행한 결과, 황칠나무의 잎에서 다른 성분들과 구분되어 유의미한 검출 결과를 나타내는 캠페롤(kaempferol, C15H10O6)이 지표성분으로 선정되었다. 필요에 따라, 쿼세틴(quercetin, C15H10O7) 또는 이소람네틴(isorhamnetin, C16H12O7)을 지표성분으로 더 사용할 수 있다. 쿼세틴은 다른 많은 식품 소재에서도 그 존재가 확인되며, 황칠나무 추출물에서 특이성이 확인되어 황칠나무 채취부위별 혼용률을 감별하기 위한 지표성분으로 캠페롤과 함께 활용될 수 있다. 이소람네틴은 황칠나무 추출물에서는 검출되지 않는 것으로 나타나, 황칠나무 추출물에서 검출되지 않는 또 다른 지표성분으로 캠페롤과 함께 활용될 수 있다. 상세하게는, 쿼세틴을 또 다른 지표성분으로 활용함으로써 평가대상 시료의 황칠나무 혼용률의 감별 또는 추정 신뢰도를 향상시킬 수 있고, 이소람네틴을 또 다른 지표성분으로 활용함으로써 평가대상 시료의 이소람네틴 검출 여부에 따라 다른 소재의 혼입 여부를 예측할 수 있다. 쿼세틴 또는 이소람네틴은 캠페롤과 동시분석이 가능한 지표성분으로, 캠페롤 외에 쿼세틴 또는 이소람네틴을 더 활용함으로써 황칠나무 추출물의 품질관리 신뢰도를 향상시키고 다양한 정보를 제공할 수 있다.First, a step (S1) of deriving a regression equation by selecting an indicator component and creating a calibration curve is performed. Indicator components are low in variability due to differences in harvesting sites, sampling periods, receipts, or regional factors of Hwangchilgae raw materials, and there are abundant characteristics data including toxicity, It is desirable that the components be selected. As a result of screening various components to find out the index component which can be applied to the raw material, manufacturing process and the final product of Hwangchu - wood, it is distinguished from other components in the leaves of Hwangchu - Camerol (kaempferol, C 15 H 10 O 6 ) was selected as an indicator component. If necessary, quercetin (C 15 H 10 O 7 ) or isorhamnetin (C 16 H 12 O 7 ) can be further used as an indicator component. The presence of quercetin is confirmed in many other food materials, and its specificity is confirmed in the extract of Hwangchujang, and it can be used together with camphorol as an indicator component to discriminate the mixing ratio of each part of Hwangchuek. Isolametin is not detected in the extract of Hwangchilan tree, and it can be used together with camphorol as another index component which is not detected in the Hwangchil tree extract. In detail, by using quercetin as another indicator component, it is possible to improve the discrimination or estimation reliability of the blossoming percentage of yellowtail tree of the sample to be evaluated, and isoramnetin is used as another indicator component, It is possible to predict whether other materials are mixed or not. Quercetin or isorhamnetin is an index component that can be analyzed simultaneously with camphorol. By using quercetin or isorhamnetin in addition to camphorol, it can improve the quality control reliability and provide various information.

본 발명에서 사용한 지표성분은 검량선법(calibration method)을 이용하여 정량된다. 이는 시료 중 특정 물질의 농도나 함량을 측정하기 위하여 정확한 농도를 알고 있는 표준물질 용액을 분석기기로 측정하여 그 값을 기억한 후 분석하고자 하는 시료를 주입하여 나온 신호값과 표준용액의 신호값을 이용해 농도를 환산해내는 방법이다. 표준물질인 캠페롤, 쿼세틴 및 이소람네틴을 각각 HPLC(High performance liquid chromatography)용 용매에 녹여 다양한 농도의 표준용액으로 제조하고 HPLC를 실시하여 산출된 흡광도 값을 이용한 크로마토그램(chromatogram)으로부터 각 표준용액별 피크면적을 구하고, 상기 피크면적과 표준용액의 농도를 변수로 검량선을 작성하여 각 표준물질별 회귀직선 방정식(이하 회귀식이라 함)을 얻을 수 있다.The index component used in the present invention is quantified using a calibration method. In order to measure the concentration or content of a specific substance in a sample, the standard solution solution having a known accurate concentration is measured by an analyzer, and the value is stored. The signal value of the sample to be analyzed and the signal value of the standard solution It is a method to convert the concentration by using. The standard substances camperol, quercetin and isorhamnetin were each dissolved in a solvent for high performance liquid chromatography (HPLC) and prepared as standard solutions at various concentrations. From the chromatograms using the absorbance values calculated by HPLC, A peak area of each solution is determined, and a calibration curve is prepared by using the peak area and the concentration of the standard solution as parameters to obtain a regression linear equation (hereinafter referred to as a regression equation) for each reference material.

다음으로, 황칠나무 추출물의 품질관리시 활용하기 위한 기준을 설정하는 단계(S2)가 수행된다. 본 단계는 다양한 조건별 수득된 황칠나무 추출물을 대상으로 HPLC를 수행하는 단계(S21); 상기 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 함량을 도출하는 단계(S22); 및 이를 이용하여 품질관리 기준을 설정하는 단계(S23)를 포함하여 수행된다.Next, a step S2 is performed to set a criterion for utilizing in the quality control of the extract. In this step, step (S21) of performing HPLC on the extract obtained from various varieties of Hokkaido chrysanthemum; (S22) deriving the content of camphor in the Hokkaido extract; And setting a quality control standard using the same (S23).

황칠나무 추출물의 품질관리 기준을 설정하기 위하여는 다양한 조건별 기준이 되는 정보를 확보하여 데이터베이스화하는 것이 바람직하므로 원료의 채취 또는 추출에 있어 적어도 하나의 조건을 달리하여 황칠나무 추출물을 수득하는 것이 좋다. 상세하게는, 황칠나무 원료의 채취부위, 채취시기, 채취수령 및 추출용매로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나의 조건을 달리하여 황칠나무 추출물을 수득하는 것이 좋다. 이후 수득한 각 추출물별로 HPLC를 수행하게 된다. 상기 황칠나무 추출물은 전처리 된 후 HPLC가 수행되는 것이 바람직하다. 상기 전처리는 황산 및 메탄올을 포함하는 용액을 첨가하고 80 내지 95℃에서 산가수분해 처리하여 수행될 수 있다. HPLC로 얻어지는 각 추출물별 크로마토그램으로부터 피크면적을 구하게 되며, 이전 단계(S1)에서 구한 지표성분의 회귀식과 상기 각 추출물별 피크면적을 이용하여 각 추출물별로 추출물 내의 지표물질 농도가 산출되고, 이후 희석배수 및 시료 무게를 다시 보정하면 지표 성분의 함량이 도출되며, 도출된 각 추출물별 지표물질 함량을 이용하여 품질관리 기준을 설정하게 된다. 예를 들면, 각 추출물별 지표물질 함량을 데이터베이스화하고 각 조건별 함량을 기준점으로 설정하여 활용하거나 또는 보편적으로 이용되는 추출물의 채취시기 및 채취부위를 고려하여 바람직한 지표물질 함량을 범위로 산출하여 기준으로 활용할 수 있다.In order to establish the quality control standard for the extract of Horticultura, it is desirable to acquire information which is a standard for various conditions and to make it into a database. Therefore, it is better to obtain the Horticultural Extract by differentiating at least one condition of the raw material . In detail, it is preferable to obtain the extract of Hokkaido chinensis by at least one condition selected from the group consisting of the harvesting site, the harvesting time, the harvesting time and the extraction solvent of the Hokutogi source. Then, HPLC is performed for each extract obtained. It is preferred that the Hwigaechu extract is pretreated and then subjected to HPLC. The pretreatment can be carried out by adding a solution containing sulfuric acid and methanol and carrying out an acid hydrolysis treatment at 80 to 95 ° C. The peak area is obtained from the chromatogram of each extract obtained by HPLC. The index substance concentration in the extract is calculated for each extract using the regression formula of the index component obtained in the previous step (S1) and the peak area for each of the extracts, When the drainage and sample weight are corrected again, the content of the indicator component is derived, and the quality control standard is set by using the derived indicator content of each extract. For example, the indicator material content of each extract is databaseed, and the content of each condition is set as a reference point, or a preferable index material content is calculated in consideration of sampling time and sampling site of the commonly used extract, .

다음으로, 평가대상 황칠나무 추출물의 지표성분 함량을 도출하고 품질을 평가하는 단계(S3)가 수행된다. 본 단계는 평가대상 황칠나무 추출물을 대상으로 HPLC를 수행하는 단계(S31); 상기 평가대상 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 함량을 도출하는 단계(S32); 및 이의 품질을 평가하는 단계(S33)를 포함하여 수행된다. Next, a step (S3) of deriving the surface component content of the Tochigi extract and evaluating the quality thereof is carried out. In this step, a step (S31) of carrying out HPLC on an extract of Tochigi koreana is conducted; (S32) deriving the content of camphor in the tofu extract; And evaluating the quality thereof (S33).

평가대상 황칠나무 추출물을 대상으로 HPLC를 수행하고 그 크로마토그램으로부터 피크면적을 구한 후, 구해낸 피크면적 및 상기 회귀식을 이용하여 평가대상 황칠나무 추출물 내의 지표물질 함량이 정량 분석되어 도출된다. 이전 단계(S2)에서 설정된 품질관리 기준 및 상기 평가대상 황칠나무 추출물의 지표물질 함량을 비교하여 상기 평가대상 황칠나무 추출물의 품질을 평가할 수 있다. 예를 들면, 다양한 조건별 황칠나무 추출물의 지표물질 함량 데이터베이스를 기준으로 평가대상 추출물 내 지표물질의 함량이 현저한 차이를 보이는 경우 다른 원료소재의 혼입을 유추할 수 있다. 또는, 조건별 지표물질 함량 차이를 확인함으로써 채취시기 및 채취부위별 혼용률을 참고하여 평가대상 추출물의 원료소재 혼용 비율을 역으로 추적할 수 있다.The peak area was obtained from the chromatogram of the Hwangchu extract of the subject and quantitatively analyzed by using the obtained peak area and the regression equation. The quality control standard set in the previous step S2 and the indicator substance content of the to-be-tested Tochigi can be evaluated to evaluate the quality of the Tochigi extract. For example, if there is a significant difference in the content of indicator substances in the extract to be evaluated based on the index substance content database of various extracts of Hokkaido tree extracts, the incorporation of other raw materials may be inferred. Alternatively, by checking the difference in the indicator material content by condition, it is possible to trace the mixed ratio of the raw material material of the subject to be evaluated in reverse by referring to the mixing ratio of the harvesting time and the harvesting site.

이하, 본 발명의 구체적인 구성 및 효과를 하기 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다.Hereinafter, the specific structures and effects of the present invention will be described in more detail with reference to the following examples.

실시예Example

<황칠나무 추출물의 제조>&Lt; Preparation of an extract of Wuchulia chinensis>

품질관리 기준을 설정하기 위하여 황칠나무의 다양한 조건별 추출물을 준비하였다. 상세하게는, 황칠나무 원료 채취부위별, 채취시기별, 수령별 및 추출용매별로 구분하여 추출분말을 제조하였다. 황칠나무는 제주시 및 서귀포시에서 채취하였으며 5년생, 8년생, 10년생 및 15년생으로 수령을 구분하고, 채취 부위는 잎, 가지 및 열매로 구분하여 준비하였다. 채취 부위 중 잎 및 가지는 도 2에 나타낸 바와 같이 연녹색을 띄는 어린 부분과 녹색의 성숙한 부분으로 다시 구분하여, 최종으로는 채취 부위를 새순잎, 성숙잎, 소지, 원가지 및 열매로 구분하여 준비하였다. 채취시기는 5월, 8월 및 11월로 달리하여 원료를 준비하였다. 황칠나무의 채취 부위 중 소지 또는 새순잎의 경우에는 현재 그만을 원료로 산업적으로 사용을 하는 경우는 드물고 열매의 경우에는 식품법상 식용이 허가되어 있지 않는 식용불가 부위이나 비교군으로 원가지 및 성숙잎 부위와 함께 진행하였다. 각 원료를 2cm 내외로 세절한 후 50℃에서 15시간 열풍건조를 실시하여 건조시킨 후 그를 원료로 추출용매를 가해 추출하였다. 황칠나무의 추출물의 제조시 상업적으로 열수추출법을 이용한 열수추출 또는 주정을 용매로 하는 추출이 가장 널리 이용되고 있어, 추출시에도 열수, 30%(v/v) 주정 및 60%(v/v) 주정으로 추출용매를 달리하여 추출물을 제조하였다. 주정은 증류수로 희석하여 제조하여 사용하였다. 각 조건별로 온도별 시간별로 조건을 다르게 하여 수율을 측정하여 최적의 조건을 선택하였으며, 선택된 최종 추출 조건은 열수 추출의 경우 85℃에서 3시간, 30%(v/v) 주정의 경우 75℃에서 4시간, 그리고 60%(v/v) 주정의 경우 70℃에서 4시간으로 추출하였다. 추출후 여과, 농축 및 동결건조하여 각 원료별로 분말 형태의 황칠나무의 추출물을 얻었다. 조건을 상이하게 하여 제조된 황칠나무의 추출물을 하기 표 1에 정리하였다.In order to establish the quality control standard, various extracts of Hwangchu - In detail, the extract powder was prepared by dividing by the harvesting site, sampling period, receipt date and extracting solvent of the Hwangchil tree raw material. Hwangchilchu was collected from Jeju City and Seogwipo City, and 5, 8, 10 and 15 year olds were collected and the harvesting site was divided into leaves, branches and fruits. As shown in Fig. 2, the leaves and branches of the harvesting site were again divided into a young green part and a green mature part. Finally, the harvesting part was divided into a larval leaf, a mature leaf, a leaf, a raw egg and a fruit . The harvesting time was different from May, August and November, and raw materials were prepared. In the case of Leaf or Leaf Leaf, it is rarely used industrially as a raw material. In case of fruit, it is not allowed to be edible under the Food Act, . Each raw material was finely divided into 2 cm and dried by hot air drying at 50 ° C for 15 hours, and then extracted with an extraction solvent as a raw material. The extracts of 30% (v / v) alcohol and 60% (v / v) water were the most widely used in the extraction of hot pepper, Extracts were prepared by extracting different solvents. The alcohol was diluted with distilled water and used. The optimum conditions were selected by selecting the optimum conditions for each condition. The final extraction conditions were: 3 hours at 85 ℃ for hot water extraction, 75 ℃ for 30% (v / v) 4 hours, and 70% (v / v) for 4 hours. After extraction, it was filtered, concentrated and lyophilized to obtain powdery Hwangchuek tree extract for each raw material. Table 1 shows the extracts of Hwangchujang which were prepared by different conditions.

No.No. 부위별By region 채취시기When to collect 년생Year 추출 용매Extraction solvent 1One 열매Fruit 9월September 10년10 years 열수Heat number 22 열매Fruit 11월November 10년10 years 열수Heat number 33 새순잎Seed Leaf 5월In May 8년8 years 열수Heat number 44 새순잎Seed Leaf 5월In May 10년10 years 열수Heat number 55 새순잎Seed Leaf 5월In May 15년15 years 열수Heat number 66 새순잎Seed Leaf 11월November 8년8 years 열수Heat number 77 새순잎Seed Leaf 11월November 10년10 years 열수Heat number 88 새순잎Seed Leaf 11월November 15년15 years 열수Heat number 99 성숙잎Mature leaf 5월In May 8년8 years 열수Heat number 1010 성숙잎Mature leaf 5월In May 8년8 years 30% 주정30% alcohol 1111 성숙잎Mature leaf 5월In May 10년10 years 열수Heat number 1212 성숙잎Mature leaf 5월In May 10년10 years 30% 주정30% alcohol 1313 성숙잎Mature leaf 5월In May 10년10 years 60% 주정60% alcohol 1414 성숙잎Mature leaf 5월In May 15년15 years 열수Heat number 1515 성숙잎Mature leaf 5월In May 15년15 years 30% 주정30% alcohol 1616 성숙잎Mature leaf 8월August 10년10 years 열수Heat number 1717 성숙잎Mature leaf 8월August 10년10 years 30% 주정30% alcohol 1818 성숙잎Mature leaf 11월November 8년8 years 열수Heat number 1919 성숙잎Mature leaf 11월November 8년8 years 30% 주정30% alcohol 2020 성숙잎Mature leaf 11월November 10년10 years 열수Heat number 2121 성숙잎Mature leaf 11월November 10년10 years 30% 주정30% alcohol 2222 성숙잎Mature leaf 11월November 10년10 years 60% 주정60% alcohol 2323 성숙잎Mature leaf 11월November 15년15 years 열수Heat number 2424 성숙잎Mature leaf 11월November 15년15 years 30% 주정30% alcohol 2525 소지Possession 5월In May 8년8 years 열수Heat number 2626 소지Possession 5월In May 10년10 years 열수Heat number 2727 소지Possession 5월In May 15년15 years 열수Heat number 2828 소지Possession 11월November 8년8 years 열수Heat number 2929 소지Possession 11월November 10년10 years 열수Heat number 3030 소지Possession 11월November 15년15 years 열수Heat number 3131 원가지One way 5월In May 8년8 years 열수Heat number 3232 원가지One way 5월In May 8년8 years 30% 주정30% alcohol 3333 원가지One way 5월In May 10년10 years 열수Heat number 3434 원가지One way 5월In May 10년10 years 30% 주정30% alcohol 3535 원가지One way 5월In May 10년10 years 60% 주정60% alcohol 3636 원가지One way 5월In May 15년15 years 열수Heat number 3737 원가지One way 5월In May 15년15 years 30% 주정30% alcohol 3838 원가지One way 8월August 10년10 years 열수Heat number 3939 원가지One way 8월August 10년10 years 30% 주정30% alcohol 4040 원가지One way 11월November 8년8 years 열수Heat number 4141 원가지One way 11월November 8년8 years 30% 주정30% alcohol 4242 원가지One way 11월November 10년10 years 열수Heat number 4343 원가지One way 11월November 10년10 years 30% 주정30% alcohol 4444 원가지One way 11월November 10년10 years 60% 주정60% alcohol 4545 원가지One way 11월November 15년15 years 열수Heat number 4646 원가지One way 11월November 15년15 years 30% 주정30% alcohol

<지표성분의 검량선 작성><Preparation of calibration curve of surface indices>

황칠나무 추출물에 대하여 검토 및 스크리닝을 수행한 결과 황칠나무 잎에서 HPLC 피크(peak)가 특징적으로 나타나는 지표성분으로 캠페롤이 확인되었다. 또한, 황칠나무를 원료로 하는 추출물의 지표성분으로 쿼세틴이 확인되었다. 플라보노이드 성분 중 이소람네틴은 황칠나무 추출물에서 검출되지 않는 것으로 나타났으며, 이에 같은 플라보노이드 계열의 성분으로 황칠나무에서는 검출되지 않는 이소람네틴을 대조적 기준으로 활용하기 위하여 또 다른 지표성분으로 선정하였다.Examination and screening were carried out on the extracts of Hwangchilchu tree, and the camphorol was identified as an index component of HPLC peaks in the leaves of Hwachunil. In addition, quercetin was identified as an indicator component of the extract of Hwangchulchae. Among the flavonoids, isoramnetin was not detected in the extracts of Hwangchilchu tree. As a comparative reference, Isolamnetin, which is a component of flavonoids and not detected in Hwangchulchil, was selected as another index component.

지표성분의 정량을 위하여, 표준물질인 캠페롤, 쿼세틴 및 이소람네틴은 HPLC용 MeOH에 녹여 1 mg/mL stock solution을 조제한 후 각각 농도를 달리한 검액을 제조하여 검량선용 표준용액으로 하였다. 상세하게는, 쿼세틴은 5 μg/mL, 10 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL 및 100 μg/mL농도, 캠페롤 및 이소람네틴은 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 25 μg/mL 및 50 μg/mL농도의 검액을 만들어 사용하였다. 각 표준용액 20 μL를 시료로 취해 HPLC를 실시하여 얻은 크로마토그램으로부터 면적을 구하여, 이들 면적과 표준용액의 농도를 변수로 하여 검량선을 작성하여 회귀식을 얻었다. 표준물질별 HPLC 크로마토그램은 도 3에 나타내고, 검량선은 도 4에 나타냈다. 캠페롤의 회귀식은 하기 수학식 1로, 쿼세틴의 회귀식은 하기 수학식 2로, 이소람네틴의 회귀식은 하기 수학식 3으로 표현된다.In order to quantify the surface components, camptol, quercetin and isorhamnetin, which are standard substances, were dissolved in MeOH for HPLC and 1 mg / mL stock solution was prepared. In detail, quercetin was administered at concentrations of 5 μg / mL, 10 μg / mL, 25 μg / mL, 50 μg / mL and 100 μg / mL, camelol and isorhamnetin at 1 μg / mL, μg / mL, 25 μg / mL and 50 μg / mL, respectively. 20 μL of each standard solution was taken as a sample and the area was determined from the chromatogram obtained by HPLC. A calibration curve was prepared using these areas and the concentration of the standard solution as parameters, and a regression equation was obtained. The HPLC chromatogram for standard substances is shown in Fig. 3, and the calibration curve is shown in Fig. The regression equation of camphor is represented by the following equation (1), the regression equation of quercetin is represented by the following equation (2), and the regression equation of isorhamnetine is expressed by the following equation (3).

Figure 112018026528512-pat00002
Figure 112018026528512-pat00002

Figure 112018026528512-pat00003
Figure 112018026528512-pat00003

Figure 112018026528512-pat00004
Figure 112018026528512-pat00004

(상기 수학식 1 내지 3에서, y는 HPLC를 수행한 시료의 크로마토그램 피크면적이고 x는 HPLC를 수행한 시료의 지표성분 농도이다.)(In the above Equations 1 to 3, y is the chromatogram peak area of the sample subjected to HPLC, and x is the concentration of the indicator component of the sample subjected to HPLC.)

<지표성분의 정량분석><Quantitative analysis of surface elements>

제조된 표 1의 황칠나무의 추출물들에 대하여 지표성분의 정량분석을 수행하였다. Quantitative analysis of the indicator components was carried out on the extracts of P. japonicus in Table 1.

HPLC를 수행할 시험액의 제조를 위하여 분말상의 추출물 0.1 g을 정밀히 취하여 H2SO4이 포함된 50%(v/v) MeOH 3 ml를 가하고 90℃에서 30분간 산가수분해를 실시하였다. 가수분해가 종료된 용액을 25 mL 정용플라스크에 담고 50%(v/v) MeOH로 정용한 후 0.45 μm membrane filter로 여과하여 시험액으로 사용하였다. 각각의 시험액으로 20 μL씩 HPLC를 실시하여 얻은 크로마토그램에서 피크면적을 구하여 회귀식으로부터 각각의 지표성분의 함량을 구했다. 상세하게는, 상기 수학식 1 내지 3의 y변수에 미지시료인 시험액별 피크면적을 대입하고 x변수인 시험액별 시료의 농도를 도출하여 함량을 계산하였다. HPLC 장비는 1525 Binary pump, column oven 및 2998 photodiode array detector(Waters HPLC system, Millford, MA, USA)를 사용하였고, 데이터 수집 및 처리를 위해 Empower3 software program(Waters Corporation, Milford, MA, USA)을 사용하여 피크면적을 구했다. HPLC 조건은 하기 표 2에 나타냈다. 제조된 표 1의 황칠나무의 추출물들의 HPLC 크로마토그램을 이용한 지표성분의 정량분석 결과에 희석배수 및 시료 무게를 다시 보정하여 황칠나무 추출물의 조건별 지표물질 함량을 구하고 그를 하기 표 3에 나타냈다. 표 3에서, N.D는 검출되지 않음(Not Detected)을 의미한다.For the preparation of the test solution to be subjected to HPLC, 0.1 g of the powdery extract was precisely taken, 3 ml of 50% (v / v) MeOH containing H 2 SO 4 was added and acid hydrolysis was carried out at 90 ° C for 30 minutes. The hydrolyzed solution was placed in a 25-mL constant volume flask, diluted with 50% (v / v) MeOH, filtered through a 0.45 μm membrane filter, and used as the test solution. 20 μL of each test solution was subjected to HPLC, and the peak area was obtained from the chromatogram obtained. The content of each indicator component was obtained from the regression equation. In detail, the peak area of the test solution as the unknown sample was substituted into the y variable of the above Equations 1 to 3, and the concentration was calculated by deriving the concentration of the sample by the test solution as the x variable. HPLC was performed using Empower3 software program (Waters Corporation, Milford, Mass., USA) for data acquisition and processing, using 1525 binary pump, column oven and 2998 photodiode array detector And the peak area was obtained. HPLC conditions are shown in Table 2 below. Table 3 shows the results of the quantitative analysis of the surface components of the extracts of Hwangchujang (Table 1) using HPLC chromatogram and the dilution drainage and sample weights were corrected again to obtain the index material contents of the Hwachunilchu extracts according to the conditions. In Table 3, ND means Not Detected.

이동상
(mobile phase)
Mobile phase
(mobile phase)
Time(min)Time (min) 0.1% TFA in H2O0.1% TFA in H 2 O 0.1% TFA in ACN0.1% TFA in ACN
22 8080 2020 2525 5555 4545 3030 00 100100 3131 8080 2020 컬럼
(column)
column
(column)
Phenomenex C18 column (4.6 ×250 mm, 5 μm)Phenomenex C18 column (4.6 x 250 mm, 5 [mu] m)
디텍터
(detector)
Detector
(detector)
Waters 2998 UV detector (370 nm)Waters 2998 UV detector (370 nm)
유속
(flow rate)
Flow rate
(flow rate)
1 ml/min1 ml / min
주입용량
(injection volume)
Injection capacity
(injection volume)
20 μL20 μL

No.No. 부위별By region 채취시기When to collect 년생Year 추출 용매Extraction solvent 지표성분(mg/g)Surface composition (mg / g) 쿼세틴Quercetin 캠페롤Camphor roll 이소람네틴Isorhamnetine 1One 열매Fruit 9월September 10년10 years 열수Heat number N.DN.D. N.DN.D. N.DN.D. 22 열매Fruit 11월November 10년10 years 열수Heat number N.DN.D. N.DN.D. N.DN.D. 33 새순잎Seed Leaf 5월In May 8년8 years 열수Heat number 16.3216.32 0.250.25 N.DN.D. 44 새순잎Seed Leaf 5월In May 10년10 years 열수Heat number 10.2010.20 0.280.28 N.DN.D. 55 새순잎Seed Leaf 5월In May 15년15 years 열수Heat number 17.2017.20 0.980.98 N.DN.D. 66 새순잎Seed Leaf 11월November 8년8 years 열수Heat number 4.234.23 0.240.24 N.DN.D. 77 새순잎Seed Leaf 11월November 10년10 years 열수Heat number 9.729.72 0.500.50 N.DN.D. 88 새순잎Seed Leaf 11월November 15년15 years 열수Heat number 1.371.37 0.220.22 N.DN.D. 99 성숙잎Mature leaf 5월In May 8년8 years 열수Heat number 5.375.37 0.320.32 N.DN.D. 1010 성숙잎Mature leaf 5월In May 8년8 years 30% 주정30% alcohol 7.207.20 0.350.35 N.DN.D. 1111 성숙잎Mature leaf 5월In May 10년10 years 열수Heat number 5.865.86 0.300.30 N.DN.D. 1212 성숙잎Mature leaf 5월In May 10년10 years 30% 주정30% alcohol 18.0618.06 0.500.50 N.DN.D. 1313 성숙잎Mature leaf 5월In May 10년10 years 60% 주정60% alcohol 20.1520.15 0.520.52 N.DN.D. 1414 성숙잎Mature leaf 5월In May 15년15 years 열수Heat number 19.5119.51 0.400.40 N.DN.D. 1515 성숙잎Mature leaf 5월In May 15년15 years 30% 주정30% alcohol 19.7519.75 0.570.57 N.DN.D. 1616 성숙잎Mature leaf 8월August 10년10 years 열수Heat number 10.5110.51 0.580.58 N.DN.D. 1717 성숙잎Mature leaf 8월August 10년10 years 30% 주정30% alcohol 12.6112.61 0.630.63 N.DN.D. 1818 성숙잎Mature leaf 11월November 8년8 years 열수Heat number 8.688.68 0.470.47 N.DN.D. 1919 성숙잎Mature leaf 11월November 8년8 years 30% 주정30% alcohol 13.0313.03 0.630.63 N.DN.D. 2020 성숙잎Mature leaf 11월November 10년10 years 열수Heat number 0.820.82 0.190.19 N.DN.D. 2121 성숙잎Mature leaf 11월November 10년10 years 30% 주정30% alcohol 6.596.59 0.200.20 N.DN.D. 2222 성숙잎Mature leaf 11월November 10년10 years 60% 주정60% alcohol 9.989.98 0.540.54 N.DN.D. 2323 성숙잎Mature leaf 11월November 15년15 years 열수Heat number 2.242.24 0.280.28 N.DN.D. 2424 성숙잎Mature leaf 11월November 15년15 years 30% 주정30% alcohol 8.038.03 0.500.50 N.DN.D. 2525 소지Possession 5월In May 8년8 years 열수Heat number 0.410.41 N.DN.D. N.DN.D. 2626 소지Possession 5월In May 10년10 years 열수Heat number 0.300.30 N.DN.D. N.DN.D. 2727 소지Possession 5월In May 15년15 years 열수Heat number 0.330.33 N.DN.D. N.DN.D. 2828 소지Possession 11월November 8년8 years 열수Heat number 0.780.78 N.DN.D. N.DN.D. 2929 소지Possession 11월November 10년10 years 열수Heat number 0.440.44 N.DN.D. N.DN.D. 3030 소지Possession 11월November 15년15 years 열수Heat number 0.490.49 N.DN.D. N.DN.D. 3131 원가지One way 5월In May 8년8 years 열수Heat number 0.420.42 N.DN.D. N.DN.D. 3232 원가지One way 5월In May 8년8 years 30% 주정30% alcohol 0.330.33 N.DN.D. N.DN.D. 3333 원가지One way 5월In May 10년10 years 열수Heat number 0.570.57 N.DN.D. N.DN.D. 3434 원가지One way 5월In May 10년10 years 30% 주정30% alcohol 0.520.52 N.DN.D. N.DN.D. 3535 원가지One way 5월In May 10년10 years 60% 주정60% alcohol 0.940.94 N.DN.D. N.DN.D. 3636 원가지One way 5월In May 15년15 years 열수Heat number 0.550.55 N.DN.D. N.DN.D. 3737 원가지One way 5월In May 15년15 years 30% 주정30% alcohol 0.940.94 N.DN.D. N.DN.D. 3838 원가지One way 8월August 10년10 years 열수Heat number 0.350.35 N.DN.D. N.DN.D. 3939 원가지One way 8월August 10년10 years 30% 주정30% alcohol 0.280.28 N.DN.D. N.DN.D. 4040 원가지One way 11월November 8년8 years 열수Heat number 0.710.71 N.DN.D. N.DN.D. 4141 원가지One way 11월November 8년8 years 30% 주정30% alcohol 1.131.13 N.DN.D. N.DN.D. 4242 원가지One way 11월November 10년10 years 열수Heat number 0.940.94 N.DN.D. N.DN.D. 4343 원가지One way 11월November 10년10 years 30% 주정30% alcohol 1.031.03 N.DN.D. N.DN.D. 4444 원가지One way 11월November 10년10 years 60% 주정60% alcohol 1.051.05 N.DN.D. N.DN.D. 4545 원가지One way 11월November 15년15 years 열수Heat number 0.560.56 N.DN.D. N.DN.D. 4646 원가지One way 11월November 15년15 years 30% 주정30% alcohol 0.830.83 N.DN.D. N.DN.D.

상기 표 3을 보면, 캠페롤은 황칠나무의 잎을 추출원료로 한 추출물에서만 특이적으로 검출되는 것으로 나타났으며, 성숙잎을 대상으로는 8월에 채취한 10년생 수령의 황칠나무 잎을 원료로 30%(v/v)에서 추출하는 경우 0.63mg/mL으로 가장 높은 함량을 보이는 것으로 확인되었다. 새순잎을 대상으로는 5월에 채취한 15년생 수령의 황칠나무 잎을 원료로 열수추출하는 경우 0.98mg/mL으로 가장 높은 함량을 보이는 것으로 확인되었다. 캠페롤은 황칠나무 원료 중 잎의 사용 유무 및 그 사용 비율을 도출하기 위한 기준을 제공하는 지표성분으로 활용될 수 있다. As shown in Table 3 above, camphorol was specifically detected only in the extracts obtained from the extracts of the leaves of the perennials. In the mature leaves, the extracts of 10% And 30% (v / v), respectively. The highest content was obtained at 0.98 mg / mL of hot water extracts from the leaves of 15 - year - old Hwangchu - Camphorol can be used as an indicator component to provide a criterion for determining whether or not the leaves are used and the ratio of the use thereof.

쿼세틴은 황칠나무 수령별, 채취시기별, 채취부위별로 검출 함량에 뚜렷한 차이가 나타나는 것을 확인할 수 있다. 쿼세틴은 소지 및 원가지보다는 잎에서 높은 함량으로 검출되는 것으로 나타났으며, 5월에 채취한 10년생 수령의 황칠나무 성숙잎을 원료로 60%(v/v)에서 추출하는 경우 그 함량이 가장 높은 것으로 나타났다. 쿼세틴은 열매를 제외한 황칠나무 원료를 이용한 추출물에서 모두 검출되는 것으로 나타나, 통상적인 황칠나무 제품의 품질관리를 위한 기준을 제공하는 지표물질로 활용될 수 있는 것을 확인할 수 있다. 따라서 캠페롤과 동시분석하여 이용하는 경우, 황칠나무 원료의 혼용률에 대한 감별분석 신뢰도를 보다 향상시킬 수 있다.Quercetin showed significant differences in the contents of the extracts according to the order of pickling, sampling period and sampling sites. Quercetin was found to be detected at higher contents than leaves and leaves. In the case of 60% (v / v) extracts of 10 - year - old mature leaves of 10 - year old harvested from May, Respectively. Quercetin can be detected as an indicator material for the quality control of common whitewood products by showing that quercetin is detected in all the extracts using the raw material of Hwangchu wood except for the fruit. Therefore, the simultaneous analysis with camphor can be used to improve the reliability of discrimination analysis of the mixed ratio of the raw material of Horticulture.

이소람네틴은 모든 황칠나무 추출물에서 검출되지 않은 것으로 나타났으며, 황칠나무 추출물에 황칠나무 외 다른 원료물질의 첨가 여부를 확인하기 위한 지표물질로 활용될 수 있다.Isolametin was not detected in all the extracts of Hwangchujang tree, and it could be used as an indicator to determine the addition of Hwangchilgae and other raw materials.

상기 표 3의 정량결과를 참고하면, 황칠나무의 잎을 원료로 이용하는 추출물에서 캠페롤 피크가 특징적으로 검출되어, 가지만을 이용한 저비용의 황칠나무 추출물을 감별할 수 있다. 또한, 가지와 잎을 혼합하여 추출 원료로 이용하는 통상의 추출물에서는 쿼세틴 및 캠페롤 피크가 특징적으로 검출되고 이소람네틴은 검출되지 않을 것을 예측할 수 있다. 또한, 지표성분의 정량값에 희석배수 및 시료 무게를 다시 보정하여 황칠나무 추출물의 조건별 지표물질 함량을 구할 수 있다. 상기 표 3의 정량결과를 이용하면 조건별 지표성분의 함량 변화를 확인할 수 있으며, 이를 품질관리 기준으로 이용하여 황칠나무 추출물의 제조시에 사용된 천연물 원료물질 중 잎 및 가지의 사용 비율을 도출해낼 수 있다. 예를 들면, 평가하고자 하는 황칠나무 추출물에 대하여 본 발명에 따른 분석방법을 적용하는 경우 지표성분의 함량이 현저히 낮거나 또는 높은 경우에는 다른 채취부위 또는 다른 소재의 혼입을 유추할 수 있으며, 이를 통하여, 황칠나무 추출물을 이용하는 제품의 등급을 판정하고 품질을 관리하는 데 활용될 수 있다. 또한, 하나의 지표성분을 단독으로 사용하지 않고 둘 이상 조합하는 경우 분석신뢰도를 보다 향상시킬 수 있다. 예를 들면, 쿼세틴은 많은 다른 식품 소재에도 존재하므로 분석대상 시료의 쿼세틴의 함량이 상기 표 3의 결과를 이용하여 도출되는 함량 범위에 비해 월등히 많은 경우에는 다른 소재의 혼입을 예측할 수 있으며, 이소람네틴의 검출 여부에 따라 보다 신뢰도 높은 결과를 얻을 수 있다.With reference to the quantitative results in Table 3, a camphor peak is distinctly detected in an extract using a leaf of a Japanese whitish wood as a raw material, and a low-cost extract of a Japanese whitneywood using an eggplant can be distinguished. In addition, it can be predicted that quercetin and camphorol peak are characteristically detected and isorhamnetine is not detected in a conventional extract using a mixture of branches and leaves and used as an extraction raw material. In addition, the dilution factor and the sample weight are corrected to the quantitative value of the indicator component, and the index substance content of the extract of U. peruviana can be obtained. Using the quantitative results shown in Table 3, the change of the content of the indicator component by the condition can be confirmed, and it can be used as a quality control standard to derive the use ratio of the leaves and branches among the natural material raw materials used in the manufacture of the extract. . For example, when the analysis method according to the present invention is applied to the Hokutake japonica extract to be evaluated, it is possible to deduce the incorporation of other harvesting sites or other materials when the content of the indicator component is remarkably low or high. , And can be used to determine the grade of the product using the Hokutogi extract and to manage the quality. In addition, when two or more indicators are combined without using a single indicator component, the reliability of analysis can be further improved. For example, since quercetin exists in many other food materials, it is possible to predict the incorporation of other materials when the content of quercetin in the sample to be analyzed is much higher than the content range derived from the results of Table 3 above, More reliable results can be obtained depending on the detection of the net.

순수 황칠나무 잎을 원료로 하는 추출물의 경우에는 상기 표 3의 캠페롤 정량최소값인 0.19mg/g의 값을 기준점으로 하여 캠페롤이 그 이상으로 검출되는 것이 바람직한 것으로 판단하여 활용할 수 있다. 상기 표 3의 함량을 참고하면, 캠페롤은 성숙잎 기준 최대 0.63mg/g, 새순잎 기준 최대 0.98mg/g 까지 검출되었다. 순수 황칠나무 잎을 원료로 하는 추출물의 쿼세틴 함량은 0.82 내지 20.15mg/g으로 나타났다. 산업적으로 가장 널리 이용되는 통상의 황칠나무 원료인 성숙잎 및 원가지가 3 : 7의 중량비율로 혼합 사용되는 황칠나무 추출물을 기준으로 고려하는 경우, 캠페롤은 상기 표 3에서 각 최소값 및 최대값에 그 비율을 적용하여 얻은 값인 0.057 내지 0.189mg/g이내에서 검출되고, 쿼세틴의 경우에는 최소값은 100:0.82=30:x1 및 100:0.28=70:x2를 계산한 후 x1 및 x2의 합으로 계산되고 최대값은 100:20.15 = 30:x3 및 100:1.13=70:x4를 계산한 후 x3 및 x4의 합으로 계산되어 쿼세틴 함량 0.442 내지 6.836mg/g이내에서 검출되는 것이 바람직한 것으로 판단될 수 있다. In the case of extracts from raw pomegranate leaves, it is judged that camphorol is more preferably detected based on the value of 0.19 mg / g, which is the minimum value of camphor in Table 3, as a reference point. With reference to the contents in Table 3 above, camphorol was detected up to 0.63 mg / g based on mature leaves and up to 0.98 mg / g based on sardine leaves. The content of quercetin in the extracts of raw pomegranate leaves was 0.82 to 20.15 mg / g. When the matured leaves and the raw leaves, which are the most commonly used conventional whitish wood raw materials, are considered on the basis of the extract of Hokutogi, which is mixed at a weight ratio of 3: 7, the camphor is classified into each minimum value and maximum value by applying the ratio to be detected in less than 0.057 to 0.189mg / g value obtained, in the case of kwosetin is minimum is 100: 0.82 = 30: x 1 and 100: 0.28 = 70: after computing the x 2 x 1 and x 2 and the maximum value is calculated as the sum of x 3 and x 4 after calculating 100: 20.15 = 30: x 3 and 100: 1.13 = 70: x 4 and is within a quercetin content of 0.442 to 6.836 mg / g It can be judged that it is desirable to be detected.

본 발명의 분석방법에 따르면, 상기와 같이 황칠나무 추출물의 원료 혼합률 또는 다른 물질과의 혼용률을 감별 또는 추정하여 황칠나무 추출물의 품질을 판단할 수 있다. 이를 통하여, 황칠나무 추출물을 이용하는 황칠나무 제품의 품질을 관리하기 위한 품질관리방법으로 활용될 수 있다.According to the analysis method of the present invention, it is possible to judge the quality of the extract of Huchulchuang by differentiating or estimating the mixing ratio of the Huchulchuang extract or the mixing ratio with the other substances. As a result, it can be used as a quality control method for controlling the quality of the woody products using the extract.

Claims (5)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 삭제delete 황칠나무 추출물의 품질 평가를 위한 지표성분으로 캠페롤 및 쿼세틴을 선택하고, 캠페롤은 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 25 μg/mL 및 50 μg/mL농도, 쿼세틴은 5 μg/mL, 10 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL 및 100 μg/mL농도로 메탄올에 녹인 표준용액을 만들어 검량선을 작성하여 회귀식을 도출하는 제 1단계;
황칠나무 추출물의 품질관리 기준을 설정하기 위하여, 원료의 채취에 있어 적어도 하나의 조건을 달리하고 열수, 30%(v/v) 주정 또는 60%(v/v) 주정을 용매로 추출하여 수득한 황칠나무 추출물에 황산 및 메탄올을 포함하는 용액을 첨가하고 80 내지 95℃에서 산가수분해 처리하여 HPLC(High performance liquid chromatography)를 수행하고 크로마토그램으로부터 피크면적을 구하는 제 2단계;
상기 제 1단계의 회귀식 및 상기 제 2단계의 피크면적을 이용하여 상기 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 및 쿼세틴 함량을 도출하고, 조건별 황칠나무 추출물의 지표물질 함량을 데이터베이스화하는 제 3단계;
상기 제 3단계에서 도출된 캠페롤 및 쿼세틴 함량을 이용하여 품질관리 기준을 설정하는 제 4단계;
평가대상 황칠나무 추출물을 대상으로 HPLC를 수행하고 크로마토그램으로부터 피크면적을 구하는 제 5단계;
상기 제 1단계의 회귀식 및 상기 제 5단계의 피크면적을 이용하여 상기 평가대상 황칠나무 추출물 내의 캠페롤 및 쿼세틴 함량을 도출하는 제 6단계; 및
상기 제 4단계의 품질관리 기준 및 상기 제 6단계의 캠페롤 및 쿼세틴 함량을 비교하여 상기 평가대상 황칠나무 추출물의 품질을 평가하는 제 7단계를 포함하는, 황칠나무 추출물에 사용된 황칠나무 원료의 사용 채취부위 비율 또는 타 원료의 혼용 여부를 도출할 수 있는 황칠나무 추출물의 품질관리용 분석방법에 있어서,
상기 지표성분으로 이소람네틴을 더 사용하여 동시분석하는 것을 특징으로 하는 황칠나무 추출물의 품질관리용 분석방법.

The concentrations of camelol and cholesterol were determined as 1 μg / mL, 5 μg / mL, 10 μg / mL, 25 μg / mL and 50 μg / mL, respectively. A standard solution prepared by dissolving in methanol at a concentration of 5 μg / mL, 10 μg / mL, 25 μg / mL, 50 μg / mL and 100 μg / mL to prepare a calibration curve to derive a regression equation;
In order to establish the quality control standard for the extract of Hokutogi, extracts were prepared by extracting 30% (v / v) or 60% (v / v) A second step of performing an acid hydrolysis treatment at 80 to 95 占 폚 by adding a solution containing sulfuric acid and methanol to the extract of Hwangcholgwa extract to perform high performance liquid chromatography (HPLC) and obtaining a peak area from the chromatogram;
A third step of deriving the content of camphor and quercetin in the extract of Hwigae et al. Using the regression equation of the first step and the peak area of the second step, and databaseing the index material content of the Hwacheonchu extract according to the condition;
A fourth step of setting a quality control standard using the camphor and quercetin content derived in the third step;
A fifth step of performing HPLC on the target Hwanyeongnam extract and determining the peak area from the chromatogram;
A sixth step of deriving the camphor content and the quercetin content in the to-be-tested Tochigi extract using the regression equation of the first step and the peak area of the fifth step; And
And a seventh step of comparing the quality control standard of the fourth step and the content of camphor and quercetin of the sixth step to evaluate the quality of the to-be-tested Tochigi leaf extract. A method for quality control for extracting Hwacheonchu extract, which is able to derive the ratio of used parts or the mixture of different raw materials,
Characterized in that isomalin is further used as the indicator component and simultaneously analyzed.

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AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
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