KR101873682B1 - Novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 having immune enhancing activity and use thereof - Google Patents

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신재호
김원일
박영준
박건석
정병권
홍성준
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Abstract

A novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain of the present invention increase the weight of pig, decreases viremia, and has an effect of mitigate lung lesion such that the present invention can be used as a microbial agent for enhancing immune systems of stocks. In addition, the present invention can be effectively used in various conditions such as oral freeze drying powder agent or an animal feed additive.

Description

면역 증강 효과를 갖는 신규한 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주 및 이의 용도 {Novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 having immune enhancing activity and use thereof}Novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain having immunity enhancing effect and its use (Novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 having immune enhancing activity and use thereof)

본 발명은 돼지의 체중을 증가시키고, 혈중 바이러스 농도를 감소시키며, 폐 병변을 완화하는 면역 증강 효과를 가진 신규한 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주 및 이를 이용한 가축 면역 증강제, 경구용 동결건조 분말제제 및 사료 첨가제에 관한 것이다.The present invention relates to a novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain having an immune enhancing effect for increasing the body weight of pigs, reducing blood virus concentration, alleviating lung lesions, and a livestock immune enhancer, To a freeze-dried powder preparation for oral use and a feed additive.

가축은 예로부터 인간에 의하여 순화되어 공동생활을 하는 유용한 동물로 알려져 있다. 이러한 가축은 농업활동에도 도움을 주지만 유용한 식량자원으로써도 활용되어 왔고, 이 중 돼지는 중요한 식량자원 중 하나이며 지금까지도 원활한 소비가 이뤄지고 있다. 돼지는 성장 시기별로 자돈, 육성돈, 비육돈, 성돈(모돈)으로 나뉘며, 자돈은 새끼 돼지를 뜻하고 자돈 단계를 지나 육성하는 단계의 돼지를 육성돈이라 하며 식용을 목적으로 사육하는 돼지를 비육돈이라 하고 완전히 자란 돼지를 성돈이라 한다. 자돈 시기 중 젖을 물리는 시기를 이유자돈이라 하는데 특히 이유자돈은 젖을 물리며 돼지의 면역을 형성하는 시기이므로 돼지의 사육에서 중요한 시기 중 하나이다.Livestock has been known as a useful animal that has been refined by humans for generations. These livestock have helped farming but have also been used as useful food resources, of which pigs are an important food resource and are still being consumed. Pigs are divided into piglets, breeding pigeons, finishing pigs, and sows (sows) by growth period. The pigs mean pigs and pigs that grow up after the piglets are called breeding pigs. Growing pigs are called pens. Weaning period is the period when weaning is the reason for weaning pigs. In particular, weaning pigs are one of the most important periods in the breeding of pigs because they are the time to form pigs immunity by milking.

이러한 이유자돈 시기의 돼지가 바이러스에 의한 질병 감염에 의해 집단 폐사하는 등 돼지의 바이러스성 질병에 의한 피해가 최근 급증하고 있다. 특히, 가스교환이 일어나는 동물의 호흡기계는 외부 병원체에 쉽게 노출되므로 선천성 면역이 가장 활발하게 일어나는 곳이며, 호흡기 질환을 일으키는 바이러스는 그 종류가 매우 다양하고, 감염 부위, 숙주 범위 및 임상 증상이 바이러스에 따라 큰 차이를 나타낸다. 또한, 대부분의 바이러스성 호흡기 질환은 전파속도가 매우 빠른 것이 특징이므로 돼지의 바이러스성 질병의 예방과 치료에 어려움이 많다.Recently, pandemic influenza has been increasingly affected by swine viral diseases, such as those caused by the infectious diseases caused by viruses. In particular, the respiratory system of animals in which gas exchange occurs is the most active place of innate immunity since it is easily exposed to external pathogens. Viruses causing respiratory diseases are very diverse, and the infection site, host range, . In addition, most viral respiratory diseases are characterized by a very fast propagation rate, which makes it difficult to prevent and cure viral diseases in pigs.

또한, 바이러스성 질병은 돼지의 사육 및 시장 공급에 큰 영향을 미치고 있어, 이를 해결하기 위해 차단 방역 및 예방 백신 접종 투여 등 바이러스 감염 억제 노력이 활발하게 이루어지고 있다. 그러나 바이러스의 유전적 변이, 백신의 불완전한 효능 외에 동물용으로 사용 가능한 항바이러스제의 부재 등으로 어려움을 겪고 있다.In addition, viral diseases have a great influence on the breeding and market supply of pigs. Efforts to control viral infections, such as blocking and vaccination of preventive vaccines, have been actively conducted to solve these problems. However, genetic variation of the virus, incomplete efficacy of the vaccine, and lack of antiviral agents for use in animals are causing difficulties.

한편, 백신은 바이러스에 대응하는 항체를 인위적으로 유도하기 위해 만들어진 희석된 병원체이므로 백신에 의해서도 질병이 유발될 수 있으며, 또한 가축의 발정을 미약하게 하며, 접종 부위에 혹을 발생시키거나, 성장 정체, 백신 접종 직후 쇼크 및 쇼크사 등 다양한 부작용이 있는 것으로 알려져 있다. 최근 이러한 부작용을 해소하고, 친환경 축산업에 대한 요구에 부응하기 위해 가축 면역 증강제가 높은 관심을 받고 있다.On the other hand, since the vaccine is a diluted pathogen made to artificially induce the antibody corresponding to the virus, diseases can be induced by the vaccine, the feebleness of the livestock is weakened, , And there are various side effects such as shock and shock after vaccination. Recently, the livestock immune enhancer has been attracting much attention in order to solve these side effects and meet the demand for environmentally friendly livestock industry.

가축 면역 증강제란 가축의 정상 혹은 저하된 면역능을 증강시키는 물질로, 최근 미생물 감염에 대한 생체 방어능의 증강에 주목하여 면역 증강제로서 생균제(프로바이오틱스, probiotics)를 사용하고 있다. 프로바이오틱스는 1989년 R. Fuller에 의해 "숙주동물의 장내 미생물 균총의 개선으로 숙주동물에 유익한 작용을 하는 생균제"라고 정의 되었다. 생균제로 사용되는 균주로는 락토바실러스, 엔테로코커스, 비피도박테리움, 바실러스 등의 세균류, 사카로마이세스를 포함하는 효모류, 아스퍼질러스 등을 포함하는 곰팡이류 등이 있다. 프로바이오틱스는 GRAS(Generally Recognized As Safe)로 분류되며, 사람과 동물에 대한 독성유전자를 보유하고 있지 않으며 병원성 물질 또한 생산하지 않는다. 그리고 가축 생산성에 대한 개선 효능이 확인된 미생물이여야 한다. 생균제의 특징은 비병원성이며, in vitro 증식이 용이하며, 생체 내에서 빠른 성장을 하며, 내산성, 내담즙성을 가지고 있어야 한다. 또한 사료성분에 의한 활성이 억제되지 않아야 하며, 실온에서 효과를 유지하여, 사료에 혼합하여 사용하기 편리하여야 한다.The livestock immunity enhancer is a substance that enhances the normal or decreased immunity of livestock. Recently, the probiotics (probiotics) have been used as an immunity enhancer by paying attention to enhancement of bio-defense against microbial infection. Probiotics was defined by R. Fuller in 1989 as "Probiotics that have beneficial effects on host animals due to improved intestinal microflora of host animals". Examples of the strain used as a probiotic agent include fungi such as Lactobacillus, Enterococcus, Bifidobacterium, and Bacillus, yeasts including Saccharomyces, and fungi including Aspergillus. Probiotics are classified as Generally Recognized As Safe (GRAS), do not have toxic genes for humans and animals, and do not produce pathogenic substances. And microorganisms whose improvement efficacy against livestock productivity has been confirmed. Characteristics of probiotics are non-pathogenic, easy in vitro propagation, fast growing in vivo, acidic, and biliary. In addition, the activity by the feed ingredient should not be inhibited, and the effect should be maintained at room temperature.

따라서, 최근 가축의 사료에 유산균을 섞어 병원성 또는 유해성 미생물의 생육을 억제하고자 하는 연구(한국 공개 특허 10-2008-0075389)가 진행 중이나, 아직 미비한 실정이다.Therefore, a recent study (Korean Patent Laid-Open No. 10-2008-0075389) for inhibiting the growth of pathogenic or harmful microorganisms by mixing lactic acid bacteria with the feed of livestock has been under way yet.

이에, 본 발명자들은 건강한 돼지의 분변에서 가축 면역 증강제로서의 효과를 갖는 신규한 균주를 분리 및 동정하였으며, 상기 균주는 GRAS 균주로 경구 투여시 안전성이 확보되어 사료 첨가제로 유용하게 사용할 수 있을 것이다.Accordingly, the present inventors have isolated and identified a novel strain having an effect as a poultry immunity enhancer in the feces of healthy pigs. The strain is safe for oral administration as a GRAS strain, and can be usefully used as a feed additive.

따라서 본 발명자들은 백신에 의한 문제점을 완화하고 면역 증강 효과를 통해, 돼지 사육을 증대시키기 위해 예의 노력한 결과, 락토바실러스 에시도필러스 KNU-02 균주가 돼지의 일당증체율 증가 효과, 혈중 바이러스 농도(viremia) 감소 효과 및 폐 병변 완화에 대한 효과를 가지는 것을 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have made intensive efforts to increase the breeding of pigs by alleviating the problems caused by the vaccine and enhancing the immunity. As a result, the Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 has been shown to increase the daily gain of pigs, ) Reduction effect and an effect on alleviation of lung lesion, and based on this, the present invention has been completed.

이에, 본 발명의 목적은 면역 증강 효과를 갖는 신규한 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP)를 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 (Accession No. KCTC13233BP) having an immunostimulating effect.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 가축 면역 증강제, 경구용 동결건조 분말제제 및 사료 첨가제를 제공하는 것이다.In addition, another object of the present invention is to provide a method for producing Lactobacillus acidophilus KNU-02, which is selected from the group consisting of Lactobacillus acidophilus strain KNU-02, a culture of the strain, a concentrate of the culture, a dried product of the culture, A lyophilized immune enhancer, an oral lyophilized powder preparation, and a feed additive comprising at least one active ingredient.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be solved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 면역 증강 효과를 갖는 신규한 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP)를 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention provides a novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain (Accession No. KCTC13233BP) having an immunostimulating effect.

본 발명의 일 구현예로서, 상기 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 암호화하는 유전자(rDNA) 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 한다.In one embodiment of the present invention, the strain is characterized in that it comprises a gene (rDNA) base sequence encoding 16S rRNA of SEQ ID NO: 1.

또한, 본 발명은 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 가축 면역 증강제를 제공한다.The present invention also relates to a method for producing Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain (Accession No. KCTC13233BP), a culture of the strain, a concentrate of the culture, a dried product of the culture and a combination thereof Or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명의 일 구현예로서, 상기 가축은 돼지인 것을 특징으로 한다.In one embodiment of the present invention, the livestock is a pig.

본 발명의 다른 구현예로서, 상기 돼지는 이유자돈인 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the pig is characterized by being a progeny.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 가축 면역 증강제는 일당증체율을 증가시키는 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the livestock enhancer is characterized in that it increases the daily gain rate.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 가축 면역 증강제는 혈중 바이러스 농도(viremia)를 감소시키는 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the livestock enhancer is characterized by reducing viremia in the blood.

본 발명의 또 다른 구현예로서, 상기 가축 면역 증강제는 폐 병변의 완화 효과를 가지는 것을 특징으로 한다.In still another embodiment of the present invention, the livestock enhancer is characterized by having a mitigation effect on lung lesions.

또한, 본 발명은 상기 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 경구용 동결건조 분말제제를 제공한다.The present invention also relates to a method for producing a microorganism belonging to the group consisting of the Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain (Accession No. KCTC13233BP), a culture of the strain, a concentrate of the culture, a dried product of the culture, Wherein the freeze-dried powder preparation for oral use contains at least one selected as an active ingredient.

아울러, 본 발명은 상기 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 사료 첨가제를 제공한다.In addition, the present invention provides a method for producing Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 (strain No. KCTC13233BP), a culture of the strain, a concentrate of the culture, a dried product of the culture, A feed additive containing at least one selected as an active ingredient is provided.

본 발명에 따른 신규한 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주는 돼지의 일당증체율을 증가시키고, 혈중 바이러스 농도(viremia)를 감소시키며, 폐 병변을 완화하는 효과를 가져, 가축 면역 증강용 미생물 제제로서 사용이 가능하며, 이를 이용한 경구용 동결건조 분말제제 또는 사료 첨가제 등 다양한 조건에서 효과적으로 이용될 수 있다.The novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain according to the present invention has an effect of increasing the daily rate of growth of pigs, decreasing viremia in the blood, alleviating lung lesions, Can be used as a microbial preparation for enhancing, and can be effectively used under various conditions such as a freeze-dried powder preparation for oral use or a feed additive using the same.

도 1은 본 발명의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주의 16S rRNA를 암호화하고 있는 유전자(rDNA)의 염기서열을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주의 16S rRNA를 암호화하고 있는 유전자(rDNA)의 염기서열을 공지 균주와 비교하여 분석한 계통발생학적 모식도이다.
도 3은 본 발명의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주에 의한 이유자돈의 일당증체율 증가 효과를 나타낸 결과이다.
도 4는 본 발명의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주에 의한 이유자돈의 혈중 바이러스 농도(viremia) 감소 효과를 나타낸 결과이다.
도 5는 본 발명의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주에 의한 이유자돈의 폐 병변 감소 효과를 나타낸 결과이다.
도 6은 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주를 동결건조시켜 얻은 분말을 나타낸 것이다.
1 is a nucleotide sequence of a gene (rDNA) encoding 16S rRNA of Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 of the present invention.
FIG. 2 is a phylogenetic diagram showing the nucleotide sequence of the gene (rDNA) encoding 16S rRNA of Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 of the present invention in comparison with known strains.
FIG. 3 is a graph showing the effect of the Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain of the present invention on the daily growth rate of the weaning piglets.
4 is a graph showing the effect of the Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 according to the present invention on the viremia reduction effect of the piglets of the present invention.
FIG. 5 is a graph showing the effect of the Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain of the present invention on pulmonary lesion reduction of the weaned piglets.
Fig. 6 shows a powder obtained by lyophilizing Lactobacillus acidophilus strain KNU-02.

본 발명자들은 신규한 락토바실러스 에시도필러스 KNU-02 균주의 돼지 증체율 증가, 혈중 바이러스 농도(viremia) 감소 및 폐 병변 완화에 대한 효과를 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.The present inventors confirmed the effect of the novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain on the increase of swine growth rate, decrease of viremia in blood, and mitigation of lung lesion.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 면역 증강 효과를 갖는 신규한 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP)를 제공한다.The present invention provides a novel Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 (Accession No. KCTC13233BP) having an immunostimulating effect.

본 발명에서 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주는 서열번호 1의 16S rRNA를 암호화하는 유전자(rDNA) 염기서열을 포함하며, 상기 염기서열이 공시된 균주인 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) JCM7711와 99%의 상동성을 가지며, 양 균주 간 1%의 상이성이 인정되어 신규한 균주로 판명되었다.In the present invention, Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain comprises a gene (rDNA) sequence encoding 16S rRNA of SEQ ID NO: 1, and the Lactobacillus acidophilus acidophilus acidophilus 99% homology to Lactobacillus acidophilus JCM7711, and 1% homology between both strains was recognized and proved to be a novel strain.

이에, 본 발명자들은 상기 수득된 신규한 균주를 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02로 명명하고, 2017년 03월 30일자로 한국생명공학연구원에 수탁번호 KCTC13233BP로 기탁하였다.Therefore, the present inventors named the novel strain obtained as Lactobacillus acidophilus KNU-02 and deposited it on KCT13233BP, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology on March 30, 2017.

본 발명의 일 실시예에서는, 건강한 돼지의 분변으로부터 가축 면역에 좋은 효과를 주는 것으로 알려진 미생물을 분리하여, 가축 면역 증강제로 사용이 가능한 상기 신규 균주를 분리 및 동정하였으며, 경구 투여를 위해 상기 신규 균주와 yeast를 배양하였다(실시예 1 참조).In one embodiment of the present invention, the microorganism known to give a good effect on livestock immunity from the feces of healthy pigs was isolated and the new strain capable of being used as a livestock immune enhancer was isolated and identified. For the oral administration, And yeast were cultured (see Example 1).

본 발명의 다른 실시예에서는, 본 발명의 신규한 균주의 당 대사 특성을 분석하기 위하여 다양한 유효성분을 사용하여 균주를 배양한 후, 균주의 생육을 확인한 결과, D-프룩토오스, D-셀로비오스, D-수크로오스, D-글루코오스, D-갈락토오스, D-만노오스를 에너지원으로 사용하는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).In another embodiment of the present invention, in order to analyze the sugar metabolism characteristics of the novel strain of the present invention, the strain was cultured using various active ingredients, and then the growth of the strain was examined. As a result, it was confirmed that D-fructose, It was confirmed that bios, D-sucrose, D-glucose, D-galactose and D-mannose were used as energy sources (see Example 2).

본 발명의 또 다른 실시예에서는, 본 발명의 신규한 균주의 가축 면역 증강 효과를 확인하기 위해, 이유자돈에 대한 일당증체율 증가 효과(실시예 3-1 참조), 혈중 바이러스 농도(viremia) 감소 효과(실시예 3-2 참조), 폐 병변 감소 효과(실시예 3-3 참조)를 확인하였으며, 본 발명의 상기 균주를 이용하여 경구용 동결건조 분말을 제조하고, 균주의 생존율을 통해 생존 활성을 확인하였다(실시예 4 참조).In another embodiment of the present invention, in order to confirm the livestock immune enhancing effect of the novel strain of the present invention, the effect of increasing the daily gain rate (see Example 3-1), reducing the viremia in the blood (viremia) (See Example 3-2), pulmonary lesion reduction effect (see Example 3-3), and the freeze-dried powder for oral use was prepared using the strain of the present invention, and the survival rate (See Example 4).

따라서, 본 발명의 신규한 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주의 가축 면역 증강제, 경구용 동결건조 분말제제 및 사료 첨가제는 돼지에 대한 일당증체율 증가시키고, 혈중 바이러스 농도(바이러스 혈증; viremia) 감소시키며, 폐 병변을 감소시켜, 가축의 면역 증강 효과를 나타내어, 가축 면역 증강용 미생물 제제로서 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the novel livestock immune enhancer, oral lyophilized powder preparation and feed additive of the Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain of the present invention increases the daily gain rate of pigs and the blood viral concentration viremia), reduces lung lesions, and exhibits immune enhancing effect of livestock, and can be usefully used as a microbial preparation for livestock immune enhancement.

이에, 본 발명의 다른 양태로서, 본 발명은 상기 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하는 가축 면역 증강제, 경구용 동결건조 분말 제제 및 사료 첨가제를 제공한다. 보다 구체적으로, 상기 가축은 돼지 또는 이유자돈일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.Accordingly, in another aspect of the present invention, the present invention provides a method for producing the Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain (Accession No. KCTC13233BP), a culture of the strain, a concentrate of the culture, A lyophilized immune enhancer, an oral lyophilized powder preparation, and a feed additive comprising at least one selected from the group consisting of a combination of these as an active ingredient. More specifically, the animal may be, but is not limited to, a pig or a weaned pig.

본 발명에서 사용되는 용어, "가축 면역 증강제"란 가축의 정상 혹은 저하된 면역능을 증강시켜 가축의 사육을 증대시키는 물질로서, 미생물 감염에 대한 생체 방어능을 향상시키는 것을 의미한다.As used herein, the term "livestock immune enhancer" means a substance that enhances the normal or decreased immunity of livestock to increase the rearing of livestock, and means to improve bio-defense against microbial infection.

본 발명에서 사용되는 용어, "사료 첨가제"란 동물을 건강하게 성장시키며, 생산성을 개선하고, 육질을 개선하여 품질을 높이는 목적으로 사료에 소량 배합되는 비 영양소 보조물질로서, 항생제, 생균제(probiotics), 효소제, 유기산제, 향미제, 항산화제, 각종 천연물질 및 기능성 물질이 사료 첨가제로 분류된다.The term "feed additive " as used in the present invention refers to a non-nutrient aid material that is formulated into feeds in small amounts for the purpose of improving the animal health, improving the productivity, improving the meat quality, , Enzymes, organic acids, flavors, antioxidants, various natural substances and functional substances are classified as feed additives.

본 발명에 따른 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주는 사료 첨가제 중 생균제에 속하며, "생균제"란 발효물을 포함한 살아있는 유익 미생물을 함유한 제제로서 동물의 장내에 정착하여, 다른 병원성 미생물과 경쟁적 배제를 통해 유해 미생물의 성장을 억제하고, 섭취한 사료의 소화와 흡수를 도와줌으로서 동물의 성장을 촉진하고, 사료 효율을 개선시켜주는 미생물 제제를 의미한다.The Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 according to the present invention belongs to a probiotics in feed additives, and is a preparation containing living beneficial microorganisms including fermented products as "probiotics" Means a microbial formulation that inhibits the growth of harmful microorganisms through competitive exclusion with pathogenic microorganisms and helps digestion and absorption of the feed to promote animal growth and improve feed efficiency.

본 발명에서 사용되는 용어, "바이러스 혈증(viremia)"이란 바이러스가 병소로부터 혈류로 나오는 것을 의미한다. 보통 제1차 병소로부터 국소 림프절로 이동해 혈류로 나와 제1차 바이러스 혈증을 일으켜 전신으로 퍼지며 이 단계에서는 아직 임상증상은 출현하지 않고, 이때에는 혈중항체가 유효하게 작용한다. 그 뒤 바이러스가 특정 장기중의 특정세포에서 대량으로 증식하여 제2차 바이러스 혈증을 일으키며, 그 정도와 지속은 제1차 바이러스 혈증 보다 훨씬 크고, 임상 증상의 발현과 직접 관련되는 경우가 많다.As used herein, the term "viremia" means that the virus exits from the lesion into the bloodstream. Usually, it migrates from the primary lesion to the local lymph node and exits into the bloodstream to cause primary viremia and spread to the whole body. At this stage, clinical symptoms do not appear yet, and blood antibodies work effectively. Thereafter, the virus multiplies in a large number of cells in a specific organ to cause a second viremia. The degree and the duration of the viremia are much larger than those of the first viremia and are directly related to the manifestation of clinical symptoms.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

[실시예][Example]

실시예 1. 락토바실러스 에시도필러스 (Example 1: Lactobacillus acidophilus ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) KNU-02 균주의 분리, 동정 및 경구 투여용 배양) Isolation, Identification and Cultivation for Oral Administration of KNU-02 Strain

1-1. 락토바실러스 에시도필러스 (1-1. Lactobacillus acidophilus ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) KNU-02 균주의 분리) Isolation of KNU-02 strain

가축 면역 증강제로써 활용 가능한 미생물을 분리하기 위해 경상북도 문경시 소재의 양돈 농가에서 사육중인 건강하다고 알려진 돼지의 돈분을 시료로 수집하였다. 돈분으로부터 미생물 분리는 돈분 시료 1 g을 생리식염수 (0.85% NaCl solution) 9 mL에 넣어 충분히 교반하고 9 mL의 새 생리식염수를 이용하여 단계별 희석을 실시하였다. 희석을 한 각 시료 구간에서 100 μL를 덜어 낸 다음 nutrient agar에 도말하였다. 단일 콜로니로 자란 미생물들은 문헌 정보를 토대로 콜로니 외형을 이용한 형태학적 분류방법을 이용하였고 가축 면역에 좋은 효과를 주는 것으로 알려진 미생물을 일차적으로 분리하였다. 분리한 미생물을 이용하여 가축 면역 증강제로서의 효과를 확인하여 최종 분리 균주를 선정하였다.In order to isolate the microorganisms which can be used as a livestock immune enhancer, swine flour, which is known to be healthy in breeding pig farms in Mungyeong city, Gyeongbuk province, was collected as a sample. To separate the microorganisms from the swine, 1 g of the swine sample was added to 9 mL of physiological saline solution (0.85% NaCl solution), thoroughly stirred, and diluted stepwise with 9 mL of fresh physiological saline. After dilution, 100 μL was removed from each sample section and spread on nutrient agar. The microorganisms grown as a single colony were classified by the morphological classification method using the colony outline based on the literature information and the microorganisms known to give good effects to the livestock immunity were firstly isolated. The final isolate was selected by confirming the efficacy of the isolated microorganism as a livestock immune enhancer.

1-2. 락토바실러스 에시도필러스 (1-2. Lactobacillus acidophilus ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) KNU-02 균주의 동정) Identification of KNU-02 strain

상기 실시예 1-1에서 분리한, 가축 면역 증강제로 사용이 가능한 균주의 동정을 위하여, 회수한 균체로부터 유전체 DNA(genomic DNA)를 추출한 후(Thompson, 1980), 분리한 유전체 DNA를 주형으로 사용하여 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR)을 통해 16S rRNA gene을 증폭하였다. 이 때 사용한 다용도 프라이머(universal primer)는 27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')와 1492R(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')을 각각 사용하였으며(Lane 1991), 증폭한 PCR 산물은 PCR 정제 시스템(Solgent, Daejeon, Korea)을 이용하여 정제하였다. 정제한 PCR 산물의 전체 염기서열을 분석하기 위한 염기서열분석(sequencing)은 솔젠트(Solgent, Daejeon, Korea)에 의뢰하여 실시하였다. In order to identify the strains which can be used as a livestock immune enhancer isolated in Example 1-1, genomic DNA was extracted from the recovered cells (Thompson, 1980), and the separated genomic DNA was used as a template The 16S rRNA gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The universal primers used were 27F (5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3 ') and 1492R (5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3') respectively (Lane 1991) , Daejeon, Korea). Sequencing to analyze the entire nucleotide sequence of the purified PCR product was performed by Solgent (Daejeon, Korea).

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 16S rRNA를 암호화하는 유전자(rDNA)의 염기서열(서열번호 1)을 확인하였다.As a result, as shown in Fig. 1, the nucleotide sequence (SEQ ID NO: 1) of the gene (rDNA) encoding 16S rRNA was confirmed.

동정한 균주의 염기서열 결과는, NCBI(National Center for Biotechnology Information)의 BLASTN을 이용하여 비교하였고, 염기서열의 상동성 및 계통발생학적 모식도(phylogenetic tree)는 Bioedit와 Mega6 프로그램을 통해 인접결합방법(neighbor-joining methods)을 사용하여 분석하였다.The nucleotide sequences of the identified strains were compared using BLASTN from National Center for Biotechnology Information (NCBI), and the homology and phylogenetic tree of the nucleotide sequences were determined using the adjacent binding method neighbor-joining methods).

그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 분리한 균주는 기존에 보고된 공시 균주인 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) JCM7711 와 99%의 상동성을 가지는 것을 확인하였으며, 상기 공시 균주와 1%의 상이한 서열을 가지는 것이 확인되어, 에시도필러스 종에 속하는 신규한 균주로 인정되었다. 이를 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02으로 명명하고, 상기 균주를 한국생명공학연구원 생물자원센터에 기탁하였다(수탁번호 KCTC13233BP).As a result, as shown in FIG. 2, it was confirmed that the isolated strain had a homology of 99% with Lactobacillus acidophilus JCM7711, a previously reported published strain, and 1% , And thus it was recognized as a novel strain belonging to the species of the Acidophilus. This strain was named Lactobacillus acidophilus KNU-02, and the strain was deposited at the BRC (National Institute of Bioscience and Biotechnology) (Accession No. KCTC13233BP).

1-3. 경구 투여를 위한 분리균주와 yeast의 배양1-3. Culture of isolates and yeast for oral administration

경구 투여를 위한 미생물로는 최종 선발된 분리균주와 yeast를 사용하였다. Yeast의 경우 PRRSV 캡시드단백질 유전자 (PRRSV 7)가 형질전환된 Pichia pastoris를 사용하였다. 미생물의 배양에는 분리균주의 최적 배지인 MRS 배지와 yeast의 최적 배지인 YPD 배지를 사용하였다. 1 L의 MRS 액체 배지와 YPD 액체배지에 각각 분리균주와 yeast를 1% 접종하여 30℃에서 24시간 배양하였다. 배양한 분리균주와 yeast는 각각 원심분리를 통해 균체를 회수하였고 각각의 균체는 생리식염수 60 mL에 재현탁 하였다. 최종 만들어진 60 mL의 균체 현탁액들은 1회 투여 시 20 mL을 사용하여 총 3회 분량으로 사용되었다.As a microorganism for oral administration, the final isolated isolate and yeast were used. For Yeast PRRSV capsid protein gene (PRRSV 7) is transformed Pichia Pastoris was used. For the culture of microorganisms, MRS medium and YPD medium were used. 1 L of MRS liquid medium and YPD liquid medium were inoculated with 1% isolate and yeast, respectively, and cultured at 30 ° C. for 24 hours. Cells were recovered by centrifugation and each cell was resuspended in 60 mL of physiological saline. The final 60 mL of cell suspension was used in triplicate, using 20 mL per dose.

실시예Example 2.  2. 락토바실러스Lactobacillus 에시도필러스Ashford Fillers ( ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) ) KNUKNU -02 균주의 당 대사 특성 확인Identification of the sugar metabolism property of -02 strain

상기 실시예 1-1을 통해 분리된 신규한 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주의 당 대사 특성을 확인하기 위하여, API 20 NE 키트(Bio Merioux사)를 이용하여 공급회사의 실험방법에 따라 실험하였다. 하기 표 1에 나타낸 유효성분들을 사용하여 상기 균주를 30℃ 배양기에서 48시간 동안 배양한 후 비교하고, API 20 NE 키트의 색깔 변화 및 균주 생육에 따른 혼탁도를 이용하여 결과를 작성하였다.In order to confirm the glucose metabolism of the novel Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 isolated from Example 1-1, an API 20 NE kit (Bio Merioux) Experiments were conducted according to the experimental method. Using the active ingredients shown in the following Table 1, the strains were cultured in a 30 ° C incubator for 48 hours, and the results were compared using the color change of the API 20 NE kit and the turbidity depending on the growth of the strain.

그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 본 발명의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주는 탄소원으로 D-프룩토오스, D-셀로비오스, D-수크로오스, D-글루코오스, D-갈락토오스, D-만노오스를 에너지원으로 사용함을 확인하였다.As a result, as shown in Table 1, the Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain of the present invention is a D-fructose, D-cellobiose, D-sucrose, D- Galactose, and D-mannose as an energy source.

유효성분Active ingredient 결과result 유효성분Active ingredient 결과result D-프룩토오스D-fructose ++ D-글루코오스D-glucose ++ D-셀로비오스D-cellobiose ++ D-리보오스D-ribose -- D-아라비노오스D-arabinose -- D-갈락토오스D-galactose ++ D-만노오스D-mannose -- D-만니톨D-mannitol -- D-자일로오스D-xylose -- D-솔비톨D-sorbitol -- D-수크로오스D-sucrose ++ D-만노오스D-mannose ++

실시예Example 3.  3. 락토바실러스Lactobacillus 에시도필러스Ashford Fillers ( ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) ) KNUKNU -02 균주에 대한 가축 면역 효과 측정Measurement of livestock immune effect on -02 strain

3-1. 3-1. 이유자돈에On the weaning money 대한  About 일당증체율Daily growth rate 증가 효과 측정 Increase effect measurement

최종 선발한 분리균주를 이용하여 이유자돈에 대한 일당증체율을 확인하기 위하여 건강한 모돈으로부터 유래한 PRRS 음성돼지를 처리그룹마다 3마리씩 준비하였고, 매주 체중을 측정한 다음 분리균주, yeast, 식염수 (mock, 물질 비투여 그룹)를 2주 간격으로 경구 급여 튜브를 통해 3회 투여하였다. 공격 접종은 2주 후에 PRRSV 북미형 표준 바이러스주인 JA142를 103 TCID50/ml의 농도로 비강을 통해 실시하였다. 일당증체율의 측정은 3회 투여 후 공격접종 전과 공격접종 2주 후의 체중을 기준으로 바이러스 접종 전과 바이러스 접종 후의 평균일당증체율(Average daily weight gain. ADWG)을 산출함으로써 확인하였다.Three isolates of PRRS-negative pigs from healthy sows were prepared for each group, and weighed and weighed in a separate strain, yeast, saline (mock, Untreated group) were administered three times via an oral feeding tube every two weeks. Two weeks after challenge, PRRSV North American standard virus host JA142 was administered at a concentration of 103 TCID 50 / ml through the nasal cavity. The daily gain rate was determined by calculating the average daily weight gain (ADWG) before and after inoculation of the virus, based on the body weight of the mice before the inoculation and after 2 weeks of the inoculation.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 공격 접종 전에 상기 균주인 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02를 처리한 실험군과 yeast, 생리색염수를 처리한 실험군의 이유자돈에 대한 일당증체율을 비교하였을 때, 상기 균주를 처리한 실험군에서 높은 일당증체율을 보이며, 다른 실험군과 극명한 차이가 있는 것을 확인하였다. 또한 공격 접종 후에도 상기 균주인 KNU-02를 처리한 실험군의 일당증체율이 yeast와 생리식염수를 처리한 실험군에 비해 높은 일당증체율을 보이는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 3, the daily gain rate of the test strain treated with the strain Lactobacillus acidophilus KNU-02 and the test strain treated with yeast and physiological saline before the attack was inoculated As a result, it was confirmed that the strain treated with the strain showed a high daily growth rate and a significant difference from the other experimental groups. In addition, it was confirmed that the daily growth rate of the experimental group treated with the strain KNU-02 was higher than that of the yeast and physiological saline treated groups after the inoculation.

3-2. 3-2. 이유자돈에On the weaning money 대한 혈중 바이러스 농도( Serum viral concentration for viremiaviremia ) 감소 효과 측정) Reduction effect measurement

최종 선발한 분리균주를 이용하여 이유자돈에 대한 혈중 바이러스 농도의 측정을 확인하기 위하여 건강한 모돈으로부터 유래한 PRRS 음성돼지를 처리그룹마다 3마리씩 준비하였고 분리균주, yeast, 식염수 (mock, 물질 비투여 그룹)를 2주 간격으로 경구 급여 튜브를 통해 3회 투여하였다. 공격 접종은 2주 후에 PRRSV 북미형 표준 바이러스주인 JA142를 103 TCID50/ml의 농도로 비강을 통해 실시하였다. 혈중 바이러스 농도의 측정은 공격 접종 이후 매주 채혈을 실시하여 혈청에서 바이러스 RNA를 추출하였다. 추출한 바이러스 RNA를 이용하여 정량 PCR (quantitative PCR)을 실행하였다. 혈청 내의 바이러스 RNA copy 수를 바탕으로 바이러스 역가 (TCID50/mL)를 산출하였다.Three isolates of PRRS-negative pigs from healthy sows were prepared for isolation of isolate strain, yeast, saline (mock, non-administered group) Were administered three times via an oral feeding tube every two weeks. Two weeks after challenge, PRRSV North American standard virus host JA142 was administered at a concentration of 103 TCID 50 / ml through the nasal cavity. The serum viral concentration was measured every week after the inoculation, and viral RNA was extracted from the serum. Quantitative PCR was performed using the extracted viral RNA. The viral titer (TCID 50 / mL) was calculated based on the number of viral RNA copies in the serum.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 상기 균주인 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02를 처리하였을 때, 다른 두 실험군에 비해 이유자돈에 대한 혈중 바이러스 농도가 현저히 감소하는 것을 확인하였다.As a result, as shown in Fig. 4, when the strain Lactobacillus acidophilus KNU-02 was treated, it was confirmed that the blood virus concentration of the weedy piglets was significantly reduced compared to the other two experimental groups.

3-3. 3-3. 이유자돈에On the weaning money 대한 폐 병변 감소 효과 측정 Measurement of lung lesion reduction effect

최종 선발한 분리균주를 이용하여 이유자돈에 대한 폐 병변 확인하기 위하여 건강한 모돈으로부터 유래한 PRRS 음성돼지를 처리그룹마다 3마리씩 준비하였고 분리균주, yeast, 식염수 (mock, 물질 비투여 그룹)를 2주 간격으로 경구 급여 튜브를 통해 3회 투여하였다. 공격 접종은 2주 후에 PRRSV 북미형 표준 바이러스주인 JA142를 103 TCID50/ml의 농도로 비강을 통해 실시하였다. 폐 병변을 측정하기 위해 공격 접종 2주 후에 모든 돼지는 안락사 시킨 후 부검을 실시하고 폐를 적출하여 PRRSV 특이 폐 병변을 평가하였다. 폐 병변의 평가 기준은 0: 무병변, 1: 약한 간질성 폐렴, 2: 중등도 간질성 폐렴, 3: 고도 간질성 폐렴으로 구분하였다.Three isolates of PRRS-negative pigs from healthy sows were prepared for each isolate strain, yeast, saline (mock, non-administered group) every 2 weeks For three times via an oral feeding tube. Two weeks after challenge, PRRSV North American standard virus host JA142 was administered at a concentration of 103 TCID 50 / ml through the nasal cavity. To measure the lung lesion, all pigs were euthanized after 2 weeks of inoculation and autopsied and the lungs were removed to evaluate PRRSV - specific lung lesions. Criteria for evaluation of lung lesions were 0: no lesion, 1: weak interstitial pneumonia, 2: moderate interstitial pneumonia, and 3: highly interstitial pneumonia.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 상기 균주인 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02를 처리하였을 때 이유자돈에 대한 폐 병변 감소 효과가 다른 실험군에 비해 약한 간질성 폐 병변 수준으로 떨어지는 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 5, when the strain Lactobacillus acidophilus KNU-02 was treated, the lung lesion reduction effect on the weaning pig fell to the level of the weak interstitial lung lesion Respectively.

실시예Example 4.  4. 락토바실러스Lactobacillus 에시도필러스Ashford Fillers ( ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) ) KNUKNU -02 균주를 이용한 경구용 동결건조 분말제조 및 생존율 확인-02 strain, and the survival rate was confirmed.

4-1. 4-1. 락토바실러스Lactobacillus 에시도필러스Ashford Fillers ( ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) ) KNUKNU -02 균주의 동결건조 분말제조Freeze-dried powder preparation of -02 strain

최종 선발 분리균주인 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02를 최적 배양 배지인 MRS 액체배지에 접종하고 최적 조건에서 24시간 배양하였다. 배양이 완료된 KNU-02 균주를 원심분리 하고 상등액을 제거한 다음 생리식염수에 재현탁하고 다시 원심분리 하여 상등액을 제거하였다. 원심분리 후 남은 균체는 -70℃에서 1시간 냉동하고 동결건조기를 이용하여 0.051 mbar, -51℃ 조건에서 3일간 동결건조를 실시하였다. 동결건조 분말은 동결건조가 끝난 균체를 파쇄하여 얻었으며 분말의 무게를 측정하여 중량을 확인하였다. Lactobacillus acidophilus KNU-02, the final selective isolate, was inoculated into the MRS liquid medium, which was the optimal culture medium, and cultured for 24 hours under optimal conditions. The cultured KNU-02 strain was centrifuged, supernatant was removed, resuspended in physiological saline and centrifuged again to remove the supernatant. After centrifugation, the remaining cells were frozen at -70 ° C for 1 hour and lyophilized for 3 days at 0.051 mbar and -51 ° C using a freeze dryer. The lyophilized powder was obtained by disruption of the lyophilized cells. The weight of the powder was measured by weighing the powder.

그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 동결건조를 통해 만들어진 파우더 형태의 락토바실러스 에시도필러스 (Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주를 얻었으며, 동결건조 분말의 중량은 1.42 g 인 것을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 6, Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 in powder form prepared by freeze-drying was obtained, and it was confirmed that the weight of the lyophilized powder was 1.42 g.

4-2. 동결건조 분말을 이용한 4-2. Using freeze-dried powder 락토바실러스Lactobacillus 에시도필러스Ashford Fillers ( ( Lactobacillus acidophilusLactobacillus acidophilus ) ) KNUKNU -02 균주의 생존율 측정-02 survival rate of strains

상기 실시예 4-1에서 만들어진 동결건조 분말을 최적 배지인 MRS 액체 배지에 1% 접종한 다음 최적 조건에서 24시간 배양하였다. 다음 배양액을 이용하여 단계별 희석을 실시하고 각 희석액 100 μL를 MRS 고체배지에 도말하였다. 도말된 배지에 생성된 콜로니의 수를 세어 mL당 균체 농도를 cfu (colony forming unit)으로 표현하여 배양액의 농도를 확인하였다. 생존율의 확인은 동결건조 전의 KNU-02 균주 배양액의 농도와 동결건조 분말을 이용하여 배양한 KNU-02 균주 배양액의 농도를 이용하여 계산함으로써 확인하였다.The lyophilized powder prepared in Example 4-1 was inoculated 1% in MRS liquid medium, which was the optimal medium, and cultured for 24 hours under optimal conditions. Stepwise dilution was carried out using the following culture medium, and 100 μL of each dilution was applied to MRS solid medium. The number of colonies produced in the medium was counted to determine the concentration of the culture in terms of cfu (colony forming unit) per mL. The survival rate was confirmed by calculating the concentration of KNU-02 strain before freeze drying and the concentration of KNU-02 strain cultured using freeze-dried powder.

그 결과, 하기의 표 2에 나타낸 바와 같이, 동결건조 전과 동결건조 후의 미생물 생육 농도는 다음과 같으며 이를 이용하여 계산한 결과 약 18%의 생존율을 확인하였다.As a result, as shown in the following Table 2, the microbial growth concentrations before and after freeze-drying were as follows, and the survival rate of about 18% was confirmed using the results.

동결건조 전, 후의 미생물 생육 농도Microbial growth before and after lyophilization 동결건조 전Before lyophilization 동결건조 후After lyophilization 1.67 × 1011 cfu/mL1.67 x 10 < 11 > cfu / mL 3.04 × 1010 cfu/mL3.04 × 10 10 cfu / mL

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.It will be understood by those skilled in the art that the foregoing description of the present invention is for illustrative purposes only and that those of ordinary skill in the art can readily understand that various changes and modifications may be made without departing from the spirit or essential characteristics of the present invention. will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive.

기탁기관명 : 한국생명공학연구원Institution name: Korea Biotechnology Research Institute

수탁번호 : KCTC13233BPAccession number: KCTC13233BP

수탁일자 : 20170330Checked on: 20170330

<110> Kyungpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 having immune enhancing activity and use thereof <130> MP16-235 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1453 <212> DNA <213> Lactobacillus acidophilus <400> 1 gcgtgctaat acatgcaagt cgagcgagct gaaccaacag attcacttcg gtgatgacgt 60 tgggaacgcg agcggcggat gggtgagtaa cacgtgggga acctgcccca tagtctggga 120 taccacttgg aaacaggtgc taataccgga taagaaagca gatcgcatga tcagcttata 180 aaaggcggcg taagctgtcg ctatgggatg gccccgcggt gcattagcta gttggtaggg 240 taacggccta ccaaggcaat gatgcatagc cgagttgaga gactgatcgg ccacattggg 300 actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc acaatggacg 360 aaagtctgat ggagcaacgc cgcgtgagtg aagaaggttt tcggatcgta aagctctgtt 420 gttggtgaag aaggatagag gtagtaactg gcctttattt gacggtaatc aaccagaaag 480 tcacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggat 540 ttattgggcg taaagcgagc gcaggcggaa gaataagtct gatgtgaaag ccctcggctt 600 aaccgaggaa ctgcatcgga aactgttttt cttgagtgca gaagaggaga gtggaactcc 660 atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg gaagaacacc agtggcgaag gcggctctct 720 ggtctgcaac tgacgctgag gctcgaaagc atgggtagcg aacaggatta gataccctgg 780 tagtccatgc cgtaaacgat gagtgctaag tgttgggagg tttccgcctc tcagtgctgc 840 agctaacgca ttaagcactc cgcctgggga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa 900 ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac 960 cttaccaggt cttgacatct agtgcaatcc gtagagatac ggagttccct tcggggacac 1020 taagacaggt ggtgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg 1080 caacgagcgc aacccttgtc attagttgcc agcattaagt tgggcactct aatgagactg 1140 ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc atcatgcccc ttatgacctg 1200 ggctacacac gtgctacaat ggacagtaca acgaggagca agcctgcgaa ggcaagcgaa 1260 tctcttaaag ctgttctcag ttcggactgc agtctgcaac tcgactgcac gaagctggaa 1320 tcgctagtaa tcgcggatca gcacgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc 1380 gcccgtcaca ccatgggagt ctgcaatgcc caaagccggt ggcctaacct tcgggaagga 1440 gccgtctaag cag 1453 <110> Kyungpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Novel Lactobacillus acidophilus KNU-02 having immune enhancing          activity and use thereof <130> MP16-235 <160> 1 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 1453 <212> DNA <213> Lactobacillus acidophilus <400> 1 gcgtgctaat acatgcaagt cgagcgagct gaaccaacag attcacttcg gtgatgacgt 60 tgggaacgcg agcggcggat gggtgagtaa cacgtgggga acctgcccca tagtctggga 120 taccacttgg aaacaggtgc taataccgga taagaaagca gatcgcatga tcagcttata 180 aaaggcggcg taagctgtcg ctatgggatg gccccgcggt gcattagcta gttggtaggg 240 taacggccta ccaaggcaat gatgcatagc cgagttgaga gactgatcgg ccacattggg 300 actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc acaatggacg 360 aaagtctgat ggagcaacgc cgcgtgagtg aagaaggttt tcggatcgta aagctctgtt 420 gttggtgaag aaggatagag gtagtaactg gcctttattt gacggtaatc aaccagaaag 480 tcacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggat 540 ttattgggcg taaagcgagc gcaggcggaa gaataagtct gatgtgaaag ccctcggctt 600 aaccgaggaa ctgcatcgga aactgttttt cttgagtgca gaagaggaga gtggaactcc 660 atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg gaagaacacc agtggcgaag gcggctctct 720 ggtctgcaac tgacgctgag gctcgaaagc atgggtagcg aacaggatta gataccctgg 780 tagtccatgc cgtaaacgat gagtgctaag tgttgggagg tttccgcctc tcagtgctgc 840 agctaacgca ttaagcactc cgcctgggga gtacgaccgc aaggttgaaa ctcaaaggaa 900 ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac 960 cttaccaggt cttgacatct agtgcaatcc gtagagatac ggagttccct tcggggacac 1020 taagacaggt ggtgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg agatgttggg ttaagtcccg 1080 caacgagcgc aacccttgtc attagttgcc agcattaagt tgggcactct aatgagactg 1140 ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc atcatgcccc ttatgacctg 1200 ggctacacac gtgctacaat ggacagtaca acgaggagca agcctgcgaa ggcaagcgaa 1260 tctcttaaag ctgttctcag ttcggactgc agtctgcaac tcgactgcac gaagctggaa 1320 tcgctagtaa tcgcggatca gcacgccgcg gtgaatacgt tcccgggcct tgtacacacc 1380 gcccgtcaca ccatgggagt ctgcaatgcc caaagccggt ggcctaacct tcgggaagga 1440 gccgtctaag cag 1453

Claims (11)

삭제delete 삭제delete 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하고, 혈중 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) 농도(viremia)를 감소시키는 효과 또는 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus)에 의한 폐 병변의 완화 효과를 갖는 가축 면역 증강제.
One or more selected from the group consisting of Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 (Accession No. KCTC13233BP), culture of the strain, concentrate of the culture, dried product of the culture, and combinations thereof , Which has the effect of decreasing the PRRSV (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) concentration (viremia) or the effect of alleviating lung lesions caused by PRRSV (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus).
제3항에 있어서,
상기 가축은 돼지인 것을 특징으로 하는, 가축 면역 증강제.
The method of claim 3,
Wherein the livestock is a pig.
제4항에 있어서,
상기 돼지는 이유자돈인 것을 특징으로 하는, 가축 면역 증강제.
5. The method of claim 4,
Wherein the pig is a progeny animal.
제 3 항에 있어서,
상기 가축 면역 증강제는 일당증체율을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 가축 면역 증강제.
The method of claim 3,
Wherein the animal immunity enhancer increases the daily gain rate.
삭제delete 삭제delete 삭제delete 락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP), 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물, 상기 배양물의 건조물 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상을 유효성분으로 포함하고, 혈중 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) 농도(viremia)를 감소시키는 효과 또는 PRRSV(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus)에 의한 폐 병변의 완화 효과를 갖는 사료 첨가제.
One or more selected from the group consisting of Lactobacillus acidophilus strain KNU-02 (Accession No. KCTC13233BP), culture of the strain, concentrate of the culture, dried product of the culture, and combinations thereof (PRRSV) (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) or PRRSV (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus).
제3항에 있어서,
상기락토바실러스 에시도필러스(Lactobacillus acidophilus) KNU-02 균주(수탁번호 KCTC13233BP)는 서열번호 1의 16S rRNA를 암호화하는 유전자(rDNA) 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 가축 면역 증강제.
The method of claim 3,
The Lactobacillus acidophilus KNU-02 strain (Accession No. KCTC13233BP) comprises a gene (rDNA) base sequence encoding 16S rRNA of SEQ ID NO: 1.
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