KR101836859B1 - Biomarker composition for diagnosing radiation exposure comprising caveolin-1 and method for diagnosing using the same marker - Google Patents
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Abstract
본 발명은 방사선 피폭 시 혈액의 백혈구 내에서 카베올린-1의 발현이 감소된 것을 확인한 것으로, 상기 카베올린-1은 방사선 민감성 마우스뿐 아니라 방사선 저항성 마우스에서도 발현이 현저히 감소하였으므로 이를 바탕으로 방사선 피폭을 진단할 수 있는 방사선 피폭 진단용 바이오마커 조성물, 키트 또는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다. 특히 본 발명은 혈액 중 백혈구 내의 단백질 발현 변화에 기반한 것으로 기존 방법보다 쉽고 빠른 장점이 있다.The present inventors confirmed that the expression of caveolin-1 in the blood leukocytes was reduced in the case of radiation exposure, and the caveolin-1 significantly decreased expression in radiation-sensitive mice as well as in radiation-resistant mice, A method for providing information necessary for diagnosing a radiation exposure diagnosis biomarker composition, a kit, or a radiation exposure diagnosis. In particular, the present invention is based on a change in protein expression in leukocytes in blood, which is easier and quicker than conventional methods.
Description
본 발명은 방사선 피폭시 백혈구에서 특정 단백질의 발현 변화를 확인한 것으로, 이를 이용한 방사선 피폭 진단용 바이오마커 조성물, 키트, 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법에 대한 것이다.The present invention relates to a biomarker composition for the diagnosis of radiation exposure, a kit, and a method for providing information necessary for diagnosis of radiation exposure using the same.
2012년 일본 후쿠시마 원전사고 이후 방사선 피폭에 대한 우려가 커지고 있다. 방사선 피폭은 원전사고, 테러와 같은 사고로 인한 의도치 않은 피폭뿐만 아니라 방사선을 이용한 치료 및 방사선 관련 직업 종사자들에서도 피폭에 대한 위험은 항상 도사리고 있다. 특히 후자의 경우 저선량의 방사선 피폭이 되었을 때 이를 진단할 기술이 개발되어져 있지 않다.Concerns about radiation exposure have increased since the Fukushima nuclear plant accident in Japan in 2012. Radiation exposure is not always the result of unintentional exposure due to accidents such as nuclear accidents or terrorism, but radiation workers are also exposed to radiation risks. In particular, the latter technique has not been developed to diagnose low dose radiation exposure.
지난 수십 년간 방사선피폭 마커에 대한 연구는 주로 암에 집중되어 왔지만 최근 들어 방사선에 노출된 정상 조직에서 발견될 수 있는 피폭 마커를 찾는 연구로 더욱 확대되었다. 이러한 피폭 마커는 원전사고, 테러 또는 방사선치료에 의한 피폭에 따른 인체의 영향과 예후판단에 중요하게 사용될 수 있을 것이다.Studies of radiation exposure markers over the last few decades have been focused mainly on cancer, but have recently expanded to research on finding exposure markers that can be found in normal tissues exposed to radiation. Such an exposure marker can be used to determine the impact of the human body on the exposure caused by a nuclear accident, terrorism, or radiation therapy, and to determine the prognosis.
방사선피폭에 의한 인체 손상정도를 측정하기 위해 세포학적, 유전학적인 측정법들이 지난 수십 년간 사용되어 왔다. 하지만 이러한 측정법들은 방사선에 대한 인체의 유전자 또는 세포의 손상 여부를 확인해 줄 수 있을 뿐이지, 방사선에 대한 인체 반응의 분자적 기작에 대한 정보는 제공하지는 않는다. 따라서, 방사선 피폭을 편리하고 정확하게 진단할 수 있도록 하는 마커를 찾기 위해 지금도 많은 노력이 경주되고 있다.Cytological and genetic assays have been used for decades to measure the extent of human injury from radiation exposure. These measurements, however, can only confirm the damage of human genes or cells to radiation, but they do not provide information on the molecular mechanism of human response to radiation. Therefore, much effort is still being sought to find markers that allow for convenient and accurate diagnosis of radiation exposure.
한편, 단백질은 세포의 가장 기본적인 기능단위이며 소변이나 혈액에서 쉽게 채집할 수 있고, 항원 항체반응의 특이성을 이용하여 체액이나 세포 그리고 조직에서 빠르고 신뢰성 있게 정량이 가능하며, 이러한 측정법들은 자동화가 가능하다는 점에 있어서 진단용 마커로서 장점이 있다. On the other hand, proteins are the basic functional units of cells and can be easily collected from urine or blood, and can be quantified quickly and reliably in body fluids, cells and tissues using the specificity of antigen-antibody reaction. There is an advantage as a diagnostic marker in point.
따라서 본 발명은 방사선 피폭 진단용 바이오마커 조성물을 제공하는데 그 목적이 있다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a biomarker composition for diagnosis of radiation exposure.
또한, 본 발명은 방사선 피폭 진단용 키트를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.It is another object of the present invention to provide a radiation exposure diagnostic kit.
또한, 본 발명은 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공하는데 또 다른 목적이 있다. It is another object of the present invention to provide a method for providing information necessary for diagnosis of radiation exposure.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 카베올린-1(Caveolin-1)을 포함하는 방사선 피폭 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a biomarker composition for the diagnosis of radiation exposure, which comprises caveolin-1.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 카베올린-1을 검출하는 제제를 포함하는 방사선 피폭 진단용 키트를 제공한다.According to another aspect of the present invention, there is provided a radiation exposure diagnostic kit comprising an agent for detecting caveolin-1.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 개체로부터 분리된 시료 중 카베올린-1 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 것을 특징으로 하는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.To achieve the above and other objects, the present invention provides a method for providing information necessary for diagnosis of radiation exposure, which comprises measuring the level of expression of a caveolin-1 protein or a gene encoding the caveolin-1 protein in a sample separated from an individual do.
본 발명은 방사선 피폭 시 혈액의 백혈구 내에서 카베올린-1의 발현이 감소된 것을 확인한 것으로, 상기 카베올린-1은 방사선 민감성 마우스뿐 아니라 방사선 저항성 마우스에서도 발현이 현저히 감소하였으므로 이를 바탕으로 방사선 피폭을 진단할 수 있는 방사선 피폭 진단용 바이오마커 조성물, 키트 또는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.The present inventors confirmed that the expression of caveolin-1 in the blood leukocytes was reduced in the case of radiation exposure, and the caveolin-1 significantly decreased expression in radiation-sensitive mice as well as in radiation-resistant mice, A method for providing information necessary for diagnosing a radiation exposure diagnosis biomarker composition, a kit, or a radiation exposure diagnosis.
도 1은 방사선 2 Gy을 조사한 방사선 민감성 마우스의 혈액으로부터 카베올린-1 단백질 발현을 확인한 결과이고,
도 2는 방사선 2 Gy을 조사한 방사선 저항성 마우스의 혈액으로부터 카베올린-1 단백질 발현을 확인한 결과이다.FIG. 1 shows the results of confirming the expression of caveolin-1 protein from the blood of a radiation-sensitive mouse irradiated with 2 Gy of radiation,
FIG. 2 shows the results of confirming the expression of caveolin-1 protein from the blood of a radiation-resistant mouse irradiated with 2 Gy of radiation.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 발명자들은 방사선 피폭 시 피폭을 진단할 수 있는 진단마커에 대하여 연구하던 중, 방사선을 조사한 후 혈액에서 수집한 백혈구 내 카베올린-1(Caveolin-1)의 발현 변화를 확인하여 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention studied the diagnostic markers capable of diagnosing exposure in radiation exposure and confirmed the change in the expression of caveolin-1 in white blood cells collected from blood after irradiation with radiation, Completed.
상기 카베올린-1(Caveolin-1)은 멤브레인(membrane)에 주로 존재하며 카베올라(Caveolae)라고 하는 원형질막(plasma membrane)에 있는 함몰 구조물을 형성하는데에 중요한 역할을 하는 단백질이다. 카베올린 단백질 패밀리는 3종류의 카베올린으로 구성되어 있으며, 카베올린-1은 다양한 조직에서 발현하고 카베올린-2는 카베올린-1과 함께 발현하여 멤브레인의 안정화에 기여한다. 카베올린-3는 근육조직에 특이적으로 발현한다. Caveolin-1 is a protein mainly present on a membrane and plays an important role in forming a depressed structure in a plasma membrane called Caveolae. The caveolin protein family is composed of three kinds of caveolin, caveolin-1 is expressed in various tissues and caveolin-2 is expressed together with caveolin-1 and contributes to the stabilization of the membrane. Caveolin-3 is expressed specifically in muscle tissue.
혈액은 백혈구(White blood cell, WBC), 적혈구(Red blood cell, RBC), 혈소판(platelets)으로 구성되어 있다. 호중구(Neutrophil)가 백혈구의 대부분(약 60%)을 차지하고, T cell 및 B cell로 구성된 림프구(Lymphocyte)가 30%, 나머지 단핵구(monocyte), 호산구(eosinophil), 호염구(basophil)로 이루어져 있다. Blood consists of white blood cells (WBC), red blood cells (RBC), and platelets. Neutrophil accounts for most of the leukocytes (about 60%), and lymphocytes composed of T cells and B cells account for 30%, and the remaining monocytes, eosinophils and basophils.
본 발명의 "카베올린-1(Caveolin-1)"는 사람, 소, 염소, 양, 돼지, 마우스, 토끼 등의 포유류를 포함하는 카베올린-1을 가지는 모든 진핵 생물 유래의 단백질일 수 있으며, 바람직하게는, 마우스 유래 GenBank: AAA85784.1일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다."Caveolin-1" of the present invention may be any eukaryotic protein having caveolin-1, including mammals such as human, cow, goat, sheep, pig, mouse, rabbit, Preferably, it can be, but is not limited to, mouse-derived GenBank: AAA85784.1.
따라서 본 발명은 카베올린-1(Caveolin-1)을 포함하는 방사선 피폭 진단용 바이오마커 조성물을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a biomarker composition for the diagnosis of radiation exposure, which comprises caveolin-1.
더불어 본 발명은 카베올린-1을 검출하는 제제를 포함하는 방사선 피폭 진단용 키트를 제공한다.In addition, the present invention provides a radiation exposure diagnostic kit comprising a preparation for detecting caveolin-1.
상기 제제는 카베올린-1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 상기 단백질에 특이적인 결합 도메인을 갖는 부분 펩티드 및 상기 단백질을 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 또는 프로브로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이나, 이에 제한되는 것은 아니다.The agent may be any one selected from the group consisting of an antibody specifically binding to the caveolin-1 protein, a partial peptide having a binding domain specific to the protein, and a primer or probe specifically binding to the gene encoding the protein But is not limited thereto.
상기 항체는 다클론성 항체(polyclonal antibody) 또는 단일클론 항체(monoclonal antibody)이다.The antibody is a polyclonal antibody or a monoclonal antibody.
상기 다클론성 항체는 당업자에 알려진 방법에 따라 면역원으로 상기 카베올린-1 단백질 또는 그 단편을 외부 숙주에 주사함으로써 제조할 수 있다. 외부 숙주는 마우스, 랫트, 양 또는 토끼와 같은 포유동물을 포함한다. 면역원은 근내, 복강내 또는 피하 주사방법으로 주사되며, 일반적으로 항원성을 증가시키기 위한 보조제(adjuvant)와 함께 투여된다. 외부숙주로부터 정기적으로 혈청을 채취하여 향상된 역가 및 항원에 대한 특이성을 보이는 혈청을 수거하거나 이로부터 항체를 분리정제한다.The polyclonal antibody may be prepared by injecting the caveolin-1 protein or fragment thereof into an external host with an immunogen according to methods known to those skilled in the art. External hosts include mammals such as mice, rats, sheep or rabbits. The immunogen is injected intraperitoneally, intraperitoneally or subcutaneously, and is generally administered with an adjuvant to increase the antigenicity. Serum is collected periodically from an external host to collect the sera showing improved titer and specificity for the antigen or isolate and purify the antibody therefrom.
상기 단일클론 항체는 당업자에 알려진 융합에 의한 불멸화된 세포주 생성기술에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 유전자에 의해 발현된 단백질을 마우스에 면역화시키거나 펩타이드를 합성하여 소혈청 알부민과 결합시켜 마우스에 면역화시킨다. 마우스에서 분리된 항원-생산 B 임파구를 인간 또는 마우스의 골수종(myeloma)과 융합하여 불멸화된 하이브리도마(hybridoma)를 생성하며, 상기 하이브리도마 세포를 가지고 간접적인 효소 결합 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunoabsorbent assays, ELISA)을 사용하여 모노클노날 항체의 생성 여부를 확인하고 양성 클론을 택하여 배양한 후 항체를 분리정제하거나 랫트의 복강에 주입한 후 복수를 채취함으로써, 단일클론 항체를 제조할 수 있다.Such monoclonal antibodies can be produced by immortalized cell line generation techniques by fusion as known to those of skill in the art. For example, a protein expressed by the gene is immunized with a mouse or a peptide is synthesized and bound to bovine serum albumin and immunized with a mouse. An antigen-producing B lymphocyte isolated from a mouse is fused with a myeloma of a human or a mouse to generate an immortalized hybridoma, and an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) linked immunoabsorbent assays (ELISA) to identify monoclonal antibodies. After positive clones were selected, the antibodies were isolated and purified, or injected into the abdominal cavity of rats, and the ascites was collected to obtain monoclonal antibodies have.
상기 단일클론 항체는 일반적으로 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase, AP) 또는 호올스래디쉬 퍼옥시다제(horseradish peroxidase, HRP) 등의 효소가 결합된 2차 항체 및 이들의 기질을 사용하여 발색반응 시킴으로써 정량분석할 수도 있고, 또는 직접 상기 단백질에 대한 단일클론 항체에 AP 또는 HRP 효소 등이 결합된 것을 사용하여 정량분석할 수 있다.The monoclonal antibody can be quantitatively assayed by using a secondary antibody to which an enzyme such as alkaline phosphatase (AP) or horseradish peroxidase (HRP) is conjugated, or a substrate thereof, Or may be quantitatively analyzed using a monoclonal antibody against the protein directly coupled with an AP or HRP enzyme or the like.
상기 단백질과 항체의 반응은 웨스턴 블랏(western blot), 면역침강법(Immunoprecipitation, IP), 효소 결합 면역흡착 분석법(enzyme-linked immunoabsorbent assays, ELISA) 및 면역염색법(Immunohistochemistry, IHC)등의 단백질 확인 실험을 통해 확인할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The reaction of the protein with the antibody can be carried out using a protein identification test such as western blot, immunoprecipitation (IP), enzyme-linked immunoabsorbent assays (ELISA) and immunohistochemistry (IHC) However, the present invention is not limited thereto.
상기 항체를 포함하는 키트는 전형적으로 동결건조 형태의 항체와 버퍼, 안정화제, 불활성 단백질 등을 포함할 수 있으며, 상기 항체는 방사종(radionuclides), 형광원(fluorescors), 효소(enzymes) 등에 의해 표지화될 수 있다.The kit comprising the antibody may typically comprise a lyophilized form of the antibody and a buffer, a stabilizer, an inert protein, and the like, wherein the antibody is radionuclides, fluorescors, enzymes, etc. Lt; / RTI >
또한, 본 발명은 개체로부터 분리된 시료 중 카베올린-1 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 것을 특징으로 하는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for providing information necessary for diagnosis of radiation exposure, which comprises measuring the level of expression of a caveolin-1 protein or a gene encoding the caveolin-1 protein in a sample separated from an individual.
상기 시료는 혈액, 뇌척수액 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나이며, 보다 바람직하게는 혈액 중 구성성분인 백혈구이다.The sample is any one selected from the group consisting of blood, cerebrospinal fluid, and urine, and more preferably, leukocyte is a constituent of blood.
상기 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법은 개체로부터 분리된 시료에서 카베올린-1 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준을 측정하는 단계; 상기 발현 수준을 정상 대조군 시료의 발현 수준과 비교하는 단계; 및 상기 시료의 카베올린-1 단백질 또는 이를 코딩하는 유전자의 발현 수준이 정상 대조군 시료의 그것보다 낮은 경우 방사선에 피폭된 것으로 진단하는 단계;를 포함한다.The method for providing information necessary for diagnosis of radiation exposure includes measuring the expression level of a caveolin-1 protein or a gene encoding the caveolin-1 protein in a sample separated from the subject; Comparing the expression level to an expression level of a normal control sample; And diagnosing that the sample is exposed to radiation when the level of expression of the caveolin-1 protein or gene thereof is lower than that of the normal control sample.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples. However, the following examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. Embodiments of the present invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.
<< 참고예Reference example 1> 동물 모델 준비 및 방사선 조사 1> Preparation of animal models and irradiation
방사선 민감성 마우스종으로 알려져 있는 7주령 Balb/C 마우스와 방사선 저항성 마우스종으로 알려져 있는 C57BL/6 마우스를 코아텍에서 구입하여 일주일간 청정 환경에서 순화기간을 거친 후 실험에 사용하였다. 상기 마우스에 X-ray 조사기(X-rad 320 X-ray irradiator, Precision Xray Inc., USA)를 이용하여 2 Gy의 방사선을 조사하였다.Seven weeks old Balb / C mice, known as radiation-sensitive mouse species, and C57BL / 6 mice known as radiation-resistant mouse species were purchased from Koatech and used for the experiment after a period of purification in a clean environment for one week. The mice were irradiated with 2 Gy of radiation using an X-ray irradiator (X-ray 320 X-ray irradiator, Precision Xray Inc., USA).
이때, 다음과 같이 기계 세팅 값을 설정하였다: 2 Gy- filter 1, 260KV, 10mA, FSD 59cm, 1Gy/min, 노출 시간(exposure time): 2 분.At this time, the machine setting values were set as follows: 2 Gy-
<< 참고예Reference example 2> 백혈구 및 적혈구 분리 2> Leukocyte and red blood cell separation
마우스의 심장으로부터 혈액을 채취하고 3500rpm에서 2분 원심분리한 후 혈장과 혈구세포를 일차적으로 분리하였다. 혈장은 새 튜브에 옮겨 혈구세포와 분리하였다. 남은 혈구세포로부터 적혈구와 백혈구를 분리하기 위해 적혈구 용해 버퍼(155mM NH4Cl, 12mM NaHCO3, 0.1mM EDTA)를 이용해 적혈구를 용해하였다. 그런 후 이를 2500 rpm에서 5분동안 원심분리하여 용해된 적혈구와 백혈구를 분리하였다. 이때, 백혈구는 침전물로 얻었다. 백혈구의 경우 세포용해 버퍼(Cell Signaling Technology, Inc., USA)를 이용하여 추가적인 세포용해 후 사용하였다.Blood was collected from the heart of the mouse, centrifuged at 3500 rpm for 2 minutes, and plasma and hemocyte were firstly isolated. Plasma was transferred to a new tube and separated from the blood cells. In order from the remaining blood cells to separate the red blood cells and white blood cells with a red blood cell lysis buffer (155mM NH4Cl, 12mM NaHCO 3, 0.1mM EDTA) it was dissolved red blood cells. Then, it was centrifuged at 2500 rpm for 5 minutes to separate dissolved red blood cells and white blood cells. At this time, white blood cells were obtained as precipitates. For leukocytes, cell lysis buffer (Cell Signaling Technology, Inc., USA) was used for further cell lysis.
<<
실시예Example
1> 방사선 민감성 마우스에 방사선 2 1> Radiation to the radiation-
방사선 민감성 마우스인 Balb/C 마우스에 상기 참고예 1과 동일한 방법으로 방사선 2 Gy를 전신 조사하고 하루 후에 혈액을 채취한 뒤 백혈구를 분리하여 카베올린-1의 발현을 확인하였다. Radiosensitive mouse Balb / C mice were systemically irradiated with 2 Gy of radiation in the same manner as in Reference Example 1, and blood was collected one day later, and leukocytes were separated to confirm the expression of caveolin-1.
상기에서 분리한 백혈구 및 적혈구를 브래드포드(bradford) 방법을 이용하여 단백질 정량하였다. 정량한 단백질은 SDS-PAGE에 의하여 크기에 따라 분리하였고, PVDF 멤브레인(Hydrophobic Polyvinylidene Fluoride membrane, Millipore, Darmstadt, Germany)에 고정하였다. 5% 탈지분유(skim milk)와 0.05% 트윈 20(tween 20)을 포함한 인산완충식염수(phosphate buffer saline, PBS)를 이용하여 멤브레인을 블럭킹하였으며, 1차 항체로 래빗 폴리클로날 안티-카베올린-1 항체(Rabbit polyclonal anti-Caveolin-1 antibody, 1:1000, sc-894, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA)를 4℃에서 밤새 반응시켰다. PBS로 10분간 3회 세척 후 겨자무과산화효소(horseradish peroxidase, HRP)가 결합된 고트 안티-래빗 IgG(H+L)-HRP(Goat anti-rabbit IgG(H+L)-HRP, 1:10000, SA002-500, gendepot, Baker, TX, USA)를 상온에서 1시간 반응시키고 ECL(enhanced chemiluminescence) 프로토콜을 따라 X-ray 필름에 노출하였다.The leukocytes and erythrocytes isolated from the above were quantified by the Bradford method. The quantified proteins were separated by size by SDS-PAGE and fixed on a PVDF membrane (Hydrophobic Polyvinylidene Fluoride membrane, Millipore, Darmstadt, Germany). Membranes were blocked with phosphate buffered saline (PBS) containing 5% skim milk and 0.05% tween 20, and the membranes were blocked with rabbit polyclonal anti-caveolin- 1 antibody (1: 1000, sc-894, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, USA) overnight at 4 ° C. (H + L) -HRP (Goat anti-rabbit IgG (H + L) -HRP, 1: 10000) conjugated with horseradish peroxidase (HRP) , SA002-500, gendepot, Baker, TX, USA) were reacted at room temperature for 1 hour and exposed to X-ray film by ECL (enhanced chemiluminescence) protocol.
그 결과, 도 1과 같이 방사선 조사 후 카베올린-1 단백질 발현이 현저히 감소한 것을 확인하였다.As a result, it was confirmed that the expression of caveolin-1 protein after radiation irradiation was remarkably decreased as shown in Fig.
<<
실시예Example
2> 방사선 저항성 마우스에 방사선 2 2> Radiation-
방사선 저항성 마우스인 C57BL/6 마우스에 상기 참고예 1과 동일한 방법으로 2 Gy를 전신 조사하고 하루 후에 혈액을 채취한 뒤 백혈구를 분리하여 카베올린-1의 발현을 확인하였다.C57BL / 6 mice, which are radiation resistant mice, were systemically irradiated with 2 Gy in the same manner as in Reference Example 1, and blood was collected one day later, and leukocytes were separated to confirm the expression of caveolin-1.
상기 실시예 1과 동일한 방법으로 웨스턴 블롯을 수행한 결과 도 2와 같이, 방사선 저항성 C57BL/6 마우스에서도 방사선 민감성 마우스와 같이 백혈구에서 카베올린-1 발현이 방사선 조사에 의해 현저히 감소되는 것을 확인할 수 있었다.As a result of Western blotting in the same manner as in Example 1, it was confirmed that, even in radiation-resistant C57BL / 6 mice, the expression of caveolin-1 in white blood cells was markedly reduced by irradiation .
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시예일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that such detail is solved by the person skilled in the art without departing from the scope of the invention. will be. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
Claims (7)
상기 제제는 카베올린-1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 상기 단백질에 특이적인 결합 도메인을 갖는 부분 펩티드인 것을 특징으로 하는 방사선 피폭 진단용 키트.3. The method of claim 2,
Wherein said agent is an antibody that specifically binds caveolin-1 protein or a partial peptide having a binding domain specific to said protein.
상기 발현 수준을 정상 대조군 시료의 발현 수준과 비교하는 단계; 및
상기 시료의 카베올린-1 단백질의 발현 수준이 정상 대조군 시료의 그것보다 낮은 경우 방사선에 피폭된 것으로 진단하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.Measuring the level of expression of the caveolin-1 protein in a sample isolated from the subject;
Comparing the expression level to an expression level of a normal control sample; And
And diagnosing the patient to be exposed to radiation when the level of expression of the caveolin-1 protein in the sample is lower than that of a normal control sample.
상기 시료는 혈액, 뇌척수액 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.5. The method of claim 4,
Wherein the sample is any one selected from the group consisting of blood, cerebrospinal fluid, and urine.
혈액 중 구성성분인 백혈구를 시료로써 사용하는 것을 특징으로 하는 방사선 피폭 진단에 필요한 정보를 제공하는 방법.The method according to claim 4 or 5,
A method for providing information necessary for the diagnosis of radiation exposure, characterized by using white blood cells constituting the blood as a sample.
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