KR101810138B1 - Composition comprising tea extract and lactic acid bacteria - Google Patents

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Abstract

본 발명은 차(tea) 추출물 및 유산균을 포함하는 장(腸) 질환 예방 또는 개선용 조성물을 개시한다. 또한 유산균으로 발효시킨 차를 추출하는 단계를 포함하는 상기 조성물의 제조 방법을 개시한다.The present invention discloses a composition for preventing or ameliorating intestinal diseases including tea extract and lactic acid bacteria. And a step of extracting tea fermented with a lactic acid bacterium.

Description

차 추출물 및 유산균을 포함하는 조성물{Composition comprising tea extract and lactic acid bacteria}[0001] The present invention relates to a tea extract and a composition containing lactic acid bacteria,

본 발명은 차 추출물 및 유산균을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition comprising a tea extract and a lactic acid bacterium.

일반적으로 음용하는 차는 동백나무과의 카멜리아 시넨시스(Camellia sinensis)의 싹이나 잎 속에 존재하는 산화 효소를 불활성화시키고 수분을 제거한 것이다. 기원전부터 음용하기 시작한 차에는 폴리페놀, 카페인, 아미노산, 단백질, 사포닌, 비타민, 미네랄 등이 함유되어 있으며, 항암 효과 및 면역력을 증가시키는 효과가 있다고 알려져 있다. In general, drinking tea is the deactivation and dehydration of oxidizing enzymes present in camellia sinensis buds or leaves of Camellia sinensis. Tea started drinking from BC to contain polyphenols, caffeine, amino acids, proteins, saponins, vitamins, minerals, and has been known to have an effect of increasing the anti-cancer effect and immunity.

유산균은 프로바이오틱스(probiotics)에 속하며, 섭취시 건강에 유익한 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 유산균이 효과적으로 작용 하기 위해서는 위산과 답즙산에 저항성을 가져 소장까지 도달함으로써 장내에 증식하고 정착할 수 있어야 하며, 장관 내에서 유용한 효과를 나타냄과 동시에 무독성 및 비-병원성이어야 한다. 현재 건강 기능 식품에서 허용하는 유산균은 총 19종이며, 이를 보다 세분화하면 락토바실러스(Lactobacillus) 11종, 락토코커스(Lactococcus) 1종, 엔테로코커스(Enterococcus) 2종, 스트렙토코커스(Streptococcus) 1종, 비피도박테리움(Bifidobacterium) 4종으로 나눌 수 있다. 장내 유익균 증식 및 유해균 억제, 배변 활동 원활의 효과를 나타내기 위해서는 108 내지 1010 CFU/g의 유산균을 섭취하여야 한다고 알려져 있다.
Lactobacillus belongs to probiotics and is known to have beneficial health effects upon ingestion. In order for lactic acid bacteria to work effectively, they should resist resistance to stomach acid and succulent acid, so that they can reach the small intestine and proliferate and settle in the intestine. They should be useful in the intestine and be non-toxic and non-pathogenic. Currently, there are 19 kinds of lactic acid bacteria allowed in health functional food, and 11 kinds of Lactobacillus, 1 kind of Lactococcus, 2 kinds of Enterococcus, 1 kind of Streptococcus, Bifidobacterium (Bifidobacterium) can be divided into four species. It is known that lactic acid bacteria of 10 8 to 10 10 CFU / g should be consumed in order to exhibit the effect of proliferation of the intestinal beneficial bacteria, inhibition of harmful bacteria, and smoothness of bowel activity.

본 발명은 장(腸) 질환 예방 또는 개선용 조성물을 제공하고자 한다. 또한 본 발명은 상기 조성물의 효과적인 제조 방법을 제공하고자 한다.
The present invention is intended to provide a composition for preventing or ameliorating bowel disease. The present invention also provides a method for effectively producing the composition.

본 발명의 일측면은 차(tea) 추출물 및 유산균을 포함하는 장(腸) 질환 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention provides a composition for preventing or ameliorating intestinal diseases including tea extract and lactic acid bacteria.

본 발명의 다른 일측면은 유산균으로 발효시킨 차를 추출하는 단계를 포함하는 상기 조성물의 제조 방법을 제공한다.
Another aspect of the present invention provides a method for producing the composition comprising extracting tea fermented with lactic acid bacteria.

본 발명에 따른 조성물은 차(tea) 추출물 및 유산균을 포함함으로써, 암세포의 증식을 억제함과 동시에 장관 면역 세포 및 대식 세포를 활성화하여 장 질환을 예방 또는 개선할 수 있다.The composition according to the present invention can prevent or ameliorate intestinal diseases by inhibiting proliferation of cancer cells and activating intestinal immune cells and macrophages by including tea extract and lactic acid bacteria.

본 발명에 따른 상기 조성물 제조 방법은 유산균 및 차 추출물을 포함하는 조성물을 한 번에 보다 효율적으로 제조할 수 있다.
The composition according to the present invention can produce a composition containing a lactic acid bacterium and a tea extract more efficiently at a time.

도 1은 카테킨 및 유산균 중 하나 이상을 포함하는 조성물의 대장암 세포 억제 효능을 나타낸 그래프이다.
도 2는 카테킨 및 유산균 중 하나 이상을 포함하는 조성물의 장관 면역 세포 활성화 정도를 나타낸 그래프이다.
도 3은 카테킨 및 락토바실러스 파라카제이를 포함하는 조성물의 대식 세포 활성화 정도를 나타낸 것이다.
1 is a graph showing the inhibitory effect of a composition containing at least one of catechin and lactic acid bacteria on colorectal cancer cells.
Figure 2 is a graph showing the degree of intestinal immune cell activation of a composition comprising at least one of catechin and lactic acid bacteria.
3 shows the degree of macrophage activation of a composition comprising catechin and a lactobacillus paracase.

본 명세서에서 "차 추출물(tea extract)"은 넓게는 차 잎에서 비롯된 추출물을 모두 포함하는 개념으로, 구체적으로는 가공 전 혹은 가공 후 차 잎을 추출한 액, 차 잎을 증열한 후 냉수나 이온수를 가하여 추출한 액, 차 잎을 추출한 액을 농축시킨 액, 차 잎을 추출한 액을 가공한 고형 제제 등을 포함한다. 본 명세서에서 "차 잎"은 카멜리아 시넨시스(Camellia sinensis)의 싹이나 잎을 의미하는 것으로, 그 품질 또는 종류를 구분하지 않는다. 구체적으로 수확 시기에 따른 봄차, 여름차, 가을차의 싹이나 잎을 모두 포함하며, 용도에 따라 차광막을 씌워 엽록소 양을 증가시킨 옥로차의 싹이나 잎을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.In the present specification, the term "tea extract" broadly includes all extracts derived from tea leaves. Specifically, the tea extract is prepared by extracting tea leaves before or after processing, tea leaves, and then adding cold water or ionized water A liquid obtained by concentrating the tea leaf extract, a solid preparation prepared by processing tea leaf extract, and the like. As used herein, the term "tea leaf " refers to shoots or leaves of Camellia sinensis and does not distinguish its quality or type. Specific examples include sprouts and leaves of spring tea, summer tea, autumn tea according to harvesting time, and shoots or leaves of ocher tea which increase the amount of chlorophyll by covering a light-shielding film depending on the application, but are not limited thereto.

본 명세서에서 "유산균"은 당류를 발효하여 에너지를 획득하고 다량의 락트산(lactic acid)을 생성하는 세균을 총칭한다. 일반적으로 유산균은 락토바실러스(Lactobacillus), 락토코커스(Lactococcus), 류코노스톡(Leuconostoc), 페디오코커스(Pediococcus) 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속 균을 포함한다.
In the present specification, "lactic acid bacteria" is generically referred to as bacteria that ferment saccharides to obtain energy and produce a large amount of lactic acid. Typically, lactic acid bacteria include Lactobacillus bacteria (Lactobacillus), Lactococcus (Lactococcus), flow Stock Kono (Leuconostoc), Peddie Oh Caucus (Pediococcus) and Bifidobacterium (Bifidobacterium) spp.

항암 효과 및 면역력 강화와 같은 차(tea)의 유익한 효과는 그에 포함된 카테킨에 기인한 것으로 알려져 있는데, 일반적으로 차는 차 중량 대비 13 내지 30 중량% 정도의 카테킨을 포함한다. 차에 포함된 카테킨으로는 에피갈로카테킨 갈레이트(EGCG), 에피갈로카테킨(EGC), 에피카테킨 갈레이트(ECG), 에피카테킨(EC) 및 그 구조 이성질체인 갈로카테킨 갈레이트(GCG), 갈로카테킨(GC), 카테킨 갈레이트(CG), 카테킨(C)의 8종이 알려져 있다. 이 중 에피갈로카테킨 갈레이트가 전체 중량 대비 9 내지 13 중량%로 가장 많은 함량을 차지한다. 차를 물로 추출한 차 추출물은 그 추출 수율이 15 내지 25% 정도이며, 그에 포함된 카테킨의 50% 이상이 에피갈로카테킨 갈레이트 또는 에피갈로카테킨이다.The beneficial effect of tea, such as the anticancer effect and immunity enhancement, is known to be due to the catechins contained therein. Generally, the tea contains about 13 to 30% by weight of catechin relative to the weight of tea. Catechins contained in the tea include epigallocatechin gallate (EGCG), epigallocatechin (EGC), epicatechin gallate (ECG), epicatechin (EC) and its structural isomers gallocatechin gallate (GCG) Eight species of catechin (GC), catechin gallate (CG), and catechin (C) are known. Among them, epigallocatechin gallate occupies the largest content of 9 to 13% by weight based on the total weight. The tea extract extracted from the tea with water has an extraction yield of about 15 to 25%, and more than 50% of the catechins contained therein are epigallocatechin gallate or epigallocatechin.

살아있는 유산균, 즉 생균인 유산균은 일반적인 공기의 상온 조건 하에서는 활성이 억제되므로 그 효능을 발휘하기 위해서는 냉동 또는 진공 포장되어 유통 및 보관되어야 한다. 또한 유산균은 위산과 답즙산에 대한 저항성이 낮아 위를 통과하고 나면 활성이 억제되므로 코팅하거나 캡슐화 하여 장까지 도달될 수 있도록 해야 한다. 한편, 사균(死菌)인 유산균도 장관 면역 세포를 활성화시켜 면역력을 증가시키고, 장내 환경을 개선한다고 알려져 있다. 사균인 유산균은 생균에 비해 유통 기한이 길고 그 보관이 용이하므로 산업적으로 가치가 높다.Live lactic acid bacteria, that is, lactic acid bacteria which are live bacteria, are inhibited from activity under normal temperature conditions of air, so they must be stored and circulated in refrigeration or vacuum to exhibit their efficacy. In addition, lactic acid bacteria have low resistance to gastric acid and succinic acid, and after the passage through the stomach, the activity is inhibited so that they can be coated or encapsulated to reach the intestines. On the other hand, it is known that lactic acid bacteria, which are dead bacteria, also activate immune cells to increase immunity and improve the intestinal environment. Lactic acid bacteria, which are dead bacteria, have a long shelf life and are easy to store and have high industrial value compared to live bacteria.

지금까지 건강에 유익한 카테킨을 포함한 차 및 유산균 각각의 효과에 대해서는 연구가 상당히 이루어진 바 있으나, 차 추출물의 존재 하에서 활발하게 증식하는 유산균 및 차 추출물과 유산균의 시너지 효과에 대해서는 알려지지 않았다. 이에 본 발명자들은 이를 밝혀 본 발명을 완성하였다.
The effects of tea and lactic acid bacteria including catechins, which are beneficial to health, have been extensively studied. However, synergistic effects between lactic acid bacteria and tea extracts and lactic acid bacteria that actively grow in the presence of tea extracts are not known. The present inventors have thus found out the present invention.

본 발명의 일측면은 차(tea) 추출물 및 유산균을 포함하는 장(腸) 질환 예방 또는 개선용 조성물을 제공한다. 차 추출물과 유산균을 함께 포함하는 조성물은 각각을 단독으로 포함한 조성물에 비해 장관 면역 세포 및 대식 세포를 활성화시키는 효과가 월등히 뛰어나므로 장 면역 기능을 증진시켜, 장 질환을 예방 또는 개선할 수 있다. 또한 특히 대장암 세포 증식을 억제하는 효과가 우수하여 대장암을 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.One aspect of the present invention provides a composition for preventing or ameliorating intestinal diseases including tea extract and lactic acid bacteria. The composition comprising the tea extract and the lactic acid bacterium has an excellent effect of activating the intestinal immune cells and the macrophage cells, respectively, as compared with the composition containing the tea extract alone, thereby improving the intestinal immune function and preventing or ameliorating intestinal diseases. In addition, particularly, the effect of inhibiting the proliferation of colon cancer cells is excellent, so that colon cancer can be effectively prevented or treated.

본 발명의 일측면에서, 차 추출물은 카테킨을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 카테킨은 에피갈로카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 에피카테킨 갈레이트, 에피카테킨, 갈로카테킨 갈레이트, 갈로카테킨, 카테킨 갈레이트 및 카테킨 중 하나 이상을 포함한다. 보다 구체적으로 상기 카테킨은 에피갈로카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 에피카테킨 갈레이트 및 에피카테킨 중 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 차 추출물은 차 추출물 중량 대비 5 내지 50 중량%, 구체적으로 10 내지 40 중량%의 카테킨을 포함할 수 있다.In one aspect of the invention, the tea extract comprises catechin. In another aspect of the invention, the catechin comprises at least one of epigallocatechin gallate, epigallocatechin, epicatechin gallate, epicatechin, gallocatechin gallate, gallocatechin, catechin gallate and catechin. More specifically, the catechin comprises at least one of epigallocatechin gallate, epigallocatechin, epicatechin gallate, and epicatechin. In another aspect of the invention, the tea extract may comprise from 5 to 50% by weight, in particular from 10 to 40% by weight, of catechin based on the weight of the tea extract.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 조성물 전체 중량 대비 0.0001 중량% 내지 90 중량%, 구체적으로 0.001 중량% 내지 80 중량%, 보다 구체적으로는 0.01 중량% 내지 70 중량%의 차 추출물을 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 조성물이 차 추출물을 상기 중량%로 포함하는 경우 장 질환 예방 또는 개선 효과 및 유산균을 함께 포함함에 의한 시너지 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.
The composition according to one aspect of the present invention may comprise from 0.0001% to 90%, especially 0.001% to 80%, more specifically 0.01% to 70% by weight of tea extract, based on the total weight of the composition . When the composition according to one aspect of the present invention contains the tea extract in the above weight percentage, it is not only suitable for exhibiting a synergistic effect of preventing or ameliorating bowel disease and containing lactic acid bacteria, but also satisfying the stability and safety of the composition And it may be appropriate to include the above range in terms of cost effectiveness.

본 발명의 일측면에서, 유산균은 사균(死菌)일 수 있다. 사균은 냉동 또는 진공 포장하여 보관하지 않아도 무방하므로, 그 유통 및 보관이 생균에 비해 용이하며 그에 따른 처리 비용도 보다 저렴하다.In one aspect of the present invention, the lactic acid bacteria may be dead bacteria. The dead cells are not required to be stored by freezing or vacuum packing, and the distribution and storage thereof are easier than live bacteria, and the processing cost is accordingly lower.

본 발명의 일측면에서, 생균인 유산균을 물리적 또는 화학적으로 처리하여 사균인 유산균으로 할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에서, 생균인 유산균에 초음파를 처리하거나 생균인 유산균을 분쇄하여 사균인 유산균으로 할 수 있다.In one aspect of the present invention, lactic acid bacteria which are live bacteria can be physically or chemically treated to produce lactic acid bacteria which are dead bacteria. In another aspect of the present invention, the lactic acid bacteria which are live bacteria can be treated with ultrasonic waves or the live bacteria can be crushed into lactic acid bacteria which are dead bacteria.

본 발명의 일측면에서, 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 사케이(Lactobacillus sakei), 락토바실러스 액시도필러스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 아종 락티스(Lactobacillus ssp . lactis), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc Mesenteroides), 류코노스톡 슈도메센테로이드(Leuconostoc pseudoesenteroides), 류코노스톡 시트륨(Leuconostoc citreum), 페디오코쿠스 펜토사세우스(Pediococcus . pentosaceus), 엔테로코커스 패시움(Enterococcus faecium), 스트렙토코커스 써머필러스(Streptococcusthermophilus) 및 락토코커스 락티스 아종 락티스(Lactococcus lactis ssp . lactis) 중 선택된 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 및 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 중 하나 이상을 포함한다. 본 발명의 또 다른 일측면에서, 락토바실러스 플란타룸은 기탁번호가 KCCM11179P 또는 KCCM11181P인 것을 포함한다. 상기 락토바실러스 플란타룸 2종은 각각 2011년 2011년 3월 28일 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM)에 미생물 기탁번호 KCCM11179P 및 KCCM11181P로 기탁되었다.
In one aspect of the invention, the lactic acid bacteria are selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum), Lactobacillus paracasei (Lactobacillus paracasei), Lactobacillus brevis (Lactobacillus brevis), Lactobacillus casei (Lactobacillus sakei), Lactobacillus acidophilus (Lactobacillus acidophilus), Lactobacillus Johnson (Lactobacillus johnsonii), Lactobacillus casei (Lactobacillus gasseri), Lactobacillus subtilis (Lactobacillus ssp . lactis), Lactobacillus lambatus (Lactobacillus rhamnosus), Leuconostoxesteroid (Leuconostoc Mesenteroides), Leucono stokudomesenteroid (Leuconostoc pseudoesenteroides), Leuconosistium (Leuconostoc citreum), Pediococcus pentosaceus (Pediococcus . pentosaceus), Enterococcus pathum (Enterococcus faecium), Streptococcus thermophilus (Streptococcusthermophilus) And Lactococcus lactis subunit lactis (Lactococcus lactis ssp . lactis). ≪ / RTI > In another aspect of the invention, the lactic acid bacteria are selected from the group consisting of Lactobacillus plantarumLactobacillus plantarum) And Lactobacillus paracasei (Lactobacillus paracasei). ≪ / RTI > In another aspect of the present invention, the Lactobacillus plantarum comprises KCCM 11179P or KCCM 11181P. Two of these Lactobacillus plantarum were deposited at the Korean Culture Center of Microorganisms (KCCM) on March 28, 2011 as microorganism deposit numbers KCCM11179P and KCCM11181P, respectively.

기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국내)Name of depository: Korea Microorganism Conservation Center (Domestic)

수탁번호 : KCCM11179PAccession number: KCCM11179P

수탁일자 : 20110328
Checked on: 20110328

기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국내)Name of depository: Korea Microorganism Conservation Center (Domestic)

수탁번호 : KCCM11181PAccession number: KCCM11181P

수탁일자 : 20110328
Checked on: 20110328

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 조성물 전체 중량 대비 0.1 중량% 내지 20 중량%, 구체적으로 0.1 중량% 내지 10 중량%의 유산균을 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 일측면에 따른 조성물은 조성물 g 당 105 내지 1013 CFU, 구체적으로 106 내지 1010 CFU의 유산균을 포함할 수 있다. 본 발명의 일측면에 따른 조성물이 유산균을 상기 범위로 포함하는 경우 장 질환 예방 또는 개선 효과 및 차 추출물을 함께 포함함에 의한 시너지 효과를 나타내기에 적절할 뿐만 아니라, 조성물의 안정성 및 안전성을 모두 만족할 수 있으며, 비용 대비 효과의 측면에서도 상기 범위로 포함하는 것이 적절할 수 있다.
The composition according to one aspect of the present invention may contain lactic acid bacteria in an amount of 0.1% by weight to 20% by weight, specifically 0.1% by weight to 10% by weight, based on the total weight of the composition. A composition according to another aspect of the present invention may comprise 10 5 to 10 13 CFU, particularly 10 6 to 10 10 CFU of lactic acid bacteria per g of composition. When the composition according to one aspect of the present invention contains the lactic acid bacterium within the above range, it is not only suitable for exhibiting the synergistic effect of preventing or ameliorating intestinal disease and containing the tea extract, but also satisfying the stability and safety of the composition , And it may be appropriate to include the above range in terms of cost-effectiveness.

본 발명의 일측면에 따른 조성물은 장의 면역력 약화, 암세포 증식, 장 내 유해 세균의 과다 증식 또는 장 내 유익균의 증식 저하에 기인한 질환을 예로 들 수 있는 장 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다. 구체적으로, 본 발명의 일측면에 따른 조성물은 대장암, 장염, 장 궤양, 과민성 대장 증후군, 설사 및 변비 중 하나 이상을 포함하는 장 질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다.
The composition according to one aspect of the present invention can prevent, ameliorate, or treat intestinal diseases such as diseases caused by weakening of immunity of intestines, proliferation of cancer cells, excessive proliferation of harmful bacteria in intestines, or decreased proliferation of beneficial bacteria in intestines. Specifically, the composition according to one aspect of the present invention can prevent, ameliorate, or treat intestinal diseases including at least one of colon cancer, enteritis, intestinal ulcer, irritable bowel syndrome, diarrhea and constipation.

본 발명의 일측면은 차 추출물 및 유산균을 유효 성분으로 포함하는 식품 조성물을 제공한다. 상기 식품 조성물은 건강 식품 조성물일 수 있다.One aspect of the present invention provides a food composition comprising tea extract and lactic acid bacteria as an active ingredient. The food composition may be a health food composition.

상기 식품 조성물의 제형은 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 환제, 연질 및 경질 캅셀제, 과립제, 드링크제, 캐러멜, 다이어트바, 티백 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.The formulation of the food composition is not particularly limited, but may be formulated into tablets, pills, soft and hard capsules, granules, drinks, caramels, diet bars, tea bags and the like. The food composition of each formulation can be blended with the ingredients commonly used in the field in addition to the active ingredient without difficulty by those skilled in the art depending on the purpose of formulation or use, and synergistic effect can be obtained when the composition is applied simultaneously with other ingredients.

상기 유효 성분의 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 투여 용량은 예를 들어 차 추출물의 경우 0.1mg/일 내지 10,000mg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/일 내지 5000 mg/일이 될 수 있으며, 유산균의 경우 105 내지 1013 CFU/일, 보다 구체적으로는 106 내지 1010 CFU/일이 될 수 있으나, 이에 제한되지 않으며, 투여하고자 하는 대상의 연령, 건강 상태, 합병증 등의 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다.
The determination of the dosage of the active ingredient is within the level of those skilled in the art, and its daily dose is, for example, from 0.1 mg / day to 10,000 mg / day for tea extract, more specifically from 50 mg / day to 5000 mg / day And may be 10 5 to 10 13 CFU / day, more specifically, 10 6 to 10 10 CFU / day for lactic acid bacteria, but is not limited to the age, health condition, complication And the like.

본 발명의 일측면은 차 추출물 및 유산균을 유효 성분으로 포함하는 약학 조성물을 제공한다.One aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition comprising tea extract and lactic acid bacterium as an active ingredient.

본 발명에 따른 조성물을 의약품에 적용할 경우에는, 상용되는 무기 또는 유기의 담체를 가하여 고체, 반고체 또는 액상의 형태로 경구 투여제로 제제화 할 수 있다.  본 발명의 조성물을 상법에 따라서 실시하면 용이하게 제제화할 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제, 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.When the composition according to the present invention is applied to medicines, it may be formulated into a solid, semi-solid or liquid form by adding a compatible inorganic or organic carrier. The composition of the present invention can be easily formulated according to the conventional method, and can be easily formulated using surfactants, excipients, coloring agents, spices, stabilizers, preservatives, preservatives, wettability agents, emulsification accelerators, suspending agents, salts for controlling osmotic pressure and / , And other commonly used adjuvants may be used as appropriate.

상기 경구 투여를 위한 제재로서는 정제, 환제, 과립제, 연질 및 경질 캅셀제, 산제, 세립제, 분제, 액제, 유탁제, 시럽제, 펠렛제 등을 들 수 있다. 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로오스 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 또는 폴리에틸렌 글리콜), 또는 결합제(예: 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 폴리비닐피롤리딘)를 함유할 수 있다. 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제, 흡수제, 착색제, 향미제, 또는 감미제 등의 약제학적 첨가제를 함유할 수 있다. 상기 정제는 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 의해 제조될 수 있다.Examples of the agent for oral administration include tablets, pills, granules, soft and hard capsules, powders, fine granules, powders, solutions, emulsions, syrups and pellets. These formulations may contain, in addition to the active ingredient, a diluent such as lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose or glycine, a lubricant such as silica, talc, stearic acid and its magnesium or calcium salt or polyethylene glycol, (E.g., magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose or polyvinylpyrrolidine). Optionally, disintegrating agents such as starch, agar, alginic acid or its sodium salt, absorbing agents, coloring agents, flavoring agents, or sweetening agents. The tablets may be prepared by conventional mixing, granulating or coating methods.

또한, 상기 유효 성분의 적용량은 치료 받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여 경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있다.
Further, the application amount of the effective ingredient will depend on the age, sex, and weight of the subject to be treated, the specific disease or pathological condition to be treated, the severity of the disease or pathological condition, the administration route and the judgment of the prescriber. Determination of the amount of application based on these factors is within the level of those skilled in the art.

본 발명의 일측면은 유산균으로 발효시킨 차를 추출하는 단계를 포함하는 상기 조성물의 제조 방법을 제공한다. 본 발명의 다른 일측면에서, 상기 방법은 차 잎을 유산균으로 발효시킨 후 물 또는 에탄올을 예로 들 수 있는 알코올로 추출하는 단계를 포함할 수 있다. 차 추출물과 유산균을 별도로 준비하는 방법에 비해 본 발명에 따른 방법은 보다 효율적이고 간편하게 본 발명의 일측면에 따른 조성물을 제조할 수 있다.
One aspect of the present invention provides a method for producing the composition comprising extracting tea fermented with lactic acid bacteria. In another aspect of the present invention, the method may include a step of fermenting tea leaves with lactic acid bacteria, followed by extracting with water, or an alcohol such as ethanol. The method according to the present invention can more efficiently and simply prepare the composition according to one aspect of the present invention in comparison with the method of separately preparing tea extract and lactic acid bacteria.

이하, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
Hereinafter, the constitution and effects of the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Experimental Examples. However, these examples and experimental examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereto.

[실시예 1] 차 추출물의 제조[Example 1] Preparation of tea extract

차 잎을 정제수로 추출하고 주정으로 정제한 후, 농축 및 건조하여 식용에 적합하도록 한다. 제조된 차 추출물은 차 추출물 전체 중량 대비 27.0 내지 41.0 중량%의 에피갈로카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 에피카테킨 갈레이트 및 에피카테킨과 5 중량% 이하의 카페인을 포함한다.
The tea leaves are extracted with purified water, purified with alcohol, concentrated and dried to be suitable for edible use. The prepared tea extract contains 27.0 to 41.0% by weight of epigallocatechin gallate, epigallocatechin, epicatechin gallate and epicatechin, and 5% by weight or less of caffeine, based on the total weight of the tea extract.

[실시예 2] 유산균의 준비[Example 2] Preparation of lactic acid bacteria

유산균은 -80℃ 스톡(Stock)의 MRS 아가 플레이트(agar plate)에서 계대후 24시간 배양한다. 배양한 단일 콜로니를 MRS 브로스(broth)에 접종하여 24시간 배양한다. 배양한 콜로니 100㎕를 다시 MRS 브로스에 접종하여 48시간 배양한다. 이후 5000 rpm에서 5분간 셀 다운(cell down) 하여 3차 증류수로 세 번 세척한다. 4℃의 온도에서 2시간 동안 초음파 처리(sonication)하여 분쇄한 유산균을 준비한다.
Lactic acid bacteria are cultured on an MRS agar plate at -80 ° C stock for 24 hours after passage. The cultured single colonies are inoculated on MRS broth and cultured for 24 hours. 100 쨉 l of the cultured colonies are inoculated again on MRS broth and cultured for 48 hours. The cell is then down for 5 minutes at 5000 rpm and washed three times with tertiary distilled water. And sonicated at a temperature of 4 캜 for 2 hours to prepare pulverized lactic acid bacteria.

[실시예 3] 유산균 및 차 추출물을 포함하는 조성물의 제조[Example 3] Preparation of a composition containing lactic acid bacteria and tea extract

차 잎을 유산균으로 발효시킨 후 이를 물로 추출하고 정제하여 유산균 및 차 추출물을 포함하는 조성물을 제조한다.
The tea leaves are fermented with lactic acid bacteria, extracted with water and purified to prepare a composition containing lactic acid bacteria and tea extract.

[실험예 1] 유산균에 따른 차 추출물의 발효 정도 평가[Experimental Example 1] Evaluation of degree of fermentation of tea extract according to lactic acid bacteria

50ml 코니칼 튜브(conical tube)에 차 잎을 절반 정도 차게 넣는다. 차 잎: 포도당 용액이 6 : 4의 비율이 되도록 멸균한 2% 포도당 용액을 튜브에 첨가한다. 실시예 2에서 준비한 유산균을 g당 107~108 정도 되도록 튜브에 접종한다. 튜브 뚜껑을 닫은 상태에서 37℃ 인큐베이터에 넣고 정치 배양한다. 24시간 배양 후 증류수로 10배 희석하여 pH를 측정한다. 총 12종의 유산균에 대해 상기와 같이 실험하였으며, 그 결과를 아래 표에 나타내었다.Place the tea leaves in a 50ml conical tube with about half the tea. Tea leaves: Add 2% glucose solution sterilized to a ratio of 6: 4 glucose solution to the tube. The tubes are inoculated with the lactic acid bacteria prepared in Example 2 at about 10 7 to 10 8 g / g. Put the tube lid in a closed incubator at 37 ℃, and incubate the cells with static. After culturing for 24 hours, dilute 10 times with distilled water and measure the pH. A total of 12 kinds of lactic acid bacteria were tested as described above, and the results are shown in the table below.

nono 입수 경로Access route 종속명Dependent name pHpH nono 입수 경로Access route 종속명Dependent name pHpH 1One 기탁번호 KCCM11179PAccession number KCCM11179P 락토바실러스 플란타룸Lactobacillus Florata Room 4.614.61 22 기탁번호 KCCM11181PAccession number KCCM11181P 락토바실러스 플란타룸Lactobacillus Florata Room 4.724.72 33 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 파라카제이Lactobacillus paracasei 4.164.16 44 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 브레비스Lactobacillus brevis 5.575.57 55 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 사케이Lactobacillus saccharae 5.485.48 66 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 류코노스톡 메센테로이드Ryukono Stokesensteroid 5.505.50 77 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 액시도필러스Lactobacillus acidophilus 5.355.35 88 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 존소니Lactobacillus Johnson 5.535.53 99 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 페디오코쿠스 펜토사세우스Pediococcus pentosaceus 5.485.48 1010 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 스트렙토코커스 써머필러스Streptococcus thermophilus 5.535.53 1111 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 람노서스Lactobacillus lambosus 5.275.27 1212 CTCbio에서 입수Acquired from CTCbio 락토바실러스 아종 락티스Lactobacillus acidophilus 5.625.62

상기 결과에서 볼 수 있듯이, 락토바실러스 플란타룸과 락토바실러스 파라카제이로 차 잎을 발효시키는 경우 pH가 낮게 유지됨을 알 수 있다. 이는 상기 유산균들이 차 잎과 함께 증식되어 락트산이 생산되었고 유산균에 의해 차 잎이 발효되었음을 의미한다. 상기 결과를 기초로, 락토바실러스 플란타룸과 락토바실러스 파라카제이로 차 잎을 발효시킨 후 추출하면 유산균과 카테킨을 모두 포함하는 차 추출물을 수득할 수 있음을 확인할 수 있다.
As can be seen from the above results, when the tea leaves are fermented with Lactobacillus plantarum and Lactobacillus paracasei, the pH is kept low. This means that the lactic acid bacteria were proliferated together with tea leaves to produce lactic acid and the tea leaves were fermented by the lactic acid bacteria. Based on the above results, it can be confirmed that a tea extract containing both lactic acid bacteria and catechin can be obtained by fermenting tea leaves with Lactobacillus plantarum and Lactobacillus paracasei.

[실험예 2] 대장암 세포 증식 억제 평가[Experimental Example 2] Evaluation of inhibition of proliferation of colon cancer cells

(1) 대장암 세포 배양(1) Culture of colon cancer cells

인간 대장암 HT-29 세포주(KCLB 30038)를 한국 셀라인 뱅크(Korean Cell Line Bank)(KCLB)에서 구입하였다. HT-29 대장암 세포를 1X105 cell/mL의 농도가 되도록 조절한 후 48-웰 플레이트에 200㎕씩 분주하고, 약 48시간 주기로 배양액을 교체하면서 5% CO2의 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하여 준비하였다. 이 때 배지는 10% FBS가 포함되고 페니실린-스트렙토마이신을 첨가한 RPMI1640 배지를 사용하였다.
Human colon cancer HT-29 cell line (KCLB 30038) was purchased from Korean Cell Line Bank (KCLB). HT-29 colon cancer cells were adjusted to a concentration of 1 × 10 5 cells / mL, and 200 μl each was dispensed into a 48-well plate. The cells were cultured in a 5% CO 2 incubator for 24 hours Prepared. At this time, the medium was RPMI1640 medium supplemented with 10% FBS and supplemented with penicillin-streptomycin.

(2) 대장암 세포 증식 억제 평가(2) Evaluation of inhibition of proliferation of colon cancer cells

1 ppm 농도의 카테킨, 1 ppm 농도의 카테킨과 실시예 2와 같이 준비한 107, 106 및 105 CFU/500㎕ 농도의 유산균을 상기 배양하여 준비한 인간 대장암 세포에 처리한 다음 다시 72시간 동안 5% CO2의 인큐베이터에서 배양하였다. 상기에서 유산균은 락토바실러스 플란타룸(L. plantarum) 1((주)아모레퍼시픽에서 입수, 기탁번호: KCCM11179P)(이하, "LP 1"이라 한다), 락토바실러스 플란타룸(L. plantarum) 2((주)아모레퍼시픽에서 입수, 기탁번호: KCCM11181P)(이하, "LP 2"라 한다), 락토바실러스 플란타룸(L. plantarum) 3(㈜CTCbio에서 입수)(이하, "LP 3"이라 한다), 락토바실러스 파라카제이(L. paracasei)(㈜CTCbio에서 입수), 락토바실러스 액시도필러스(L. acidophilus)(㈜CTCbio에서 입수) 및 락토바실러스 람노서스(L. rhamnosus)(㈜CTCbio 에서 입수)를 이용하였다. 이후 배양액을 제거하고, PBS로 세포를 두 번 세척하였다. 각 웰에 100㎕씩의 MTT 용액을 첨가하고 4시간 배양한 후 MTT 희석액을 조심스럽게 제거하였다. 각 웰에 100㎕씩의 DMSO를 첨가하고 15-20분간 쉐이커로 조심스럽게 흔들어 준 후 ELISA 리더를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
Catechin at a concentration of 1 ppm and catechin at a concentration of 1 ppm and lactic acid bacteria at a concentration of 10 7 , 10 6 and 10 5 CFU / 500 μl prepared as in Example 2 were cultured and cultured in human colon cancer cells, And cultured in an incubator of 5% CO 2 . Lactobacillus was obtained from L. plantarum 1 (obtained from Amorepacific, Accession No .: KCCM11179P) (hereinafter referred to as "LP 1"), Lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum, (Hereinafter referred to as " LP 3 "), Lactobacillus plantarum 3 (available from CTCbio) (hereinafter abbreviated as " LP 3 ", available from AmorePacific Co., Ltd., Accession No .: KCCM11181P) L. paracasei (obtained from CTCbio), Lactobacillus acidophilus (obtained from CTCbio), and L. rhamnosus (obtained from Lactobacillus L.) CTCbio) were used. The culture was then removed and the cells were washed twice with PBS. 100 μl of MTT solution was added to each well, followed by incubation for 4 hours. Then, the MTT dilution was carefully removed. 100 μl of DMSO was added to each well, carefully shaken for 15-20 minutes with a shaker, and absorbance was measured at 540 nm using an ELISA reader.

(3) 결과 (3) Results

MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-y1]-2,5-diphenyltetrazolium bromide)는 살아 있는 세포의 미토콘드리아 내막에 존재하는 산화-환원 효소의 작용에 의해 환원되어 보라색의 불용성 포르마잔(formazan)을 생성한다. 따라서 MTT의 발색 정도를 흡광도로 측정함으로써 살아 있는 세포 수를 계측할 수 있다. 상기에서 계측한 세포 수를 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타낸 시험 결과는 유산균의 농도를 105 CFU/500㎕로 한 것이다.MTT (3- [4,5-dimethylthiazol-2-y1] -2,5-diphenyltetrazolium bromide) is reduced by the action of oxidation-reduction enzymes present in the mitochondrial inner membrane of living cells, producing purple insoluble formazan ). Therefore, the living cell count can be measured by measuring the degree of color development of MTT by absorbance. The number of cells measured in the above is shown in Fig. The test results shown in Fig. 1 show that the concentration of lactic acid bacteria was 10 5 CFU / 500 μl.

유산균만을 처리한 경우, 락토바실러스 플란타룸 1(LP 1)과 락토바실러스 파라카제이가 유의적으로 대장암 세포의 증식을 억제하는 것을 확인할 수 있다. 도 1의 왼쪽 그래프에서 락토바실러스 플란타룸 1(LP 1)과 락토바실러스 파라카제이가 각각 대장암 세포 증식을 33%와 23% 가량 억제함을 알 수 있다. In the case of treatment with only lactic acid bacteria, it can be confirmed that Lactobacillus plantarum 1 (LP 1) and Lactobacillus paracase inhibit the proliferation of colon cancer cells significantly. In the left graph of FIG. 1, Lactobacillus plantarum 1 (LP 1) and Lactobacillus paracase inhibit the growth of colorectal cancer cells by 33% and 23%, respectively.

유산균과 카테킨을 함께 처리한 경우, 락토바실러스 파라카제이가 가장 유의적으로 대장암 세포의 증식을 억제하는 것을 확인할 수 있다. 락토바실러스 파라카제이는 단독으로 처리할 때에 비해 19% 정도 더 대장암 세포 증식을 억제하였다. 이와 같은 결과를 통해 유산균과 카테킨이 함께 사용되는 경우 대장암 세포 증식 억제 효과에 있어 시너지 효과를 나타내는 것을 알 수 있다.
When lactic acid bacteria and catechin are treated together, it can be confirmed that Lactobacillus paracase inhibits the proliferation of colon cancer cells most significantly. Lactobacillus paracase inhibited the proliferation of colorectal cancer cells by about 19% as compared with the treatment alone. These results show that synergistic effects are obtained in inhibiting the proliferation of colon cancer cells when the lactic acid bacteria and catechin are used together.

[실험예 3] 장관 면역 활성도 평가[Experimental Example 3] Evaluation of intestinal immune activity

6 내지 7주령의 C3H/HeJ계 암컷 마우스를 1주일 정도 주위 환경에 적응시킨 다음, 건강 상태가 양호한 마우스를 선별하여 실험에 사용한다. 실험 동물을 경추 탈골로 희생시킨 후, 무균적으로 소장을 적출하고, 소장에서 페이에르 판(Peyer's patch)만을 분리한다. 페이에르 판을 RPMI 1640 배지(medium)(Lonza)로 세척하고, 100mm Desh를 이용하여 두 번 분쇄하여, 면역 세포들을 추출한다. 배양액에 추출된 장관 면역 세포는 300 rpm으로 10분간 원심 분리한다. 장관 면역 세포는 10% FBS-RPMI 1640에 5X106 cells/ml가 되도록 현탁하고, 96-웰 플레이트에 90㎕씩 분주한다. A C3H / HeJ female mouse at 6 to 7 weeks of age is adapted to the surrounding environment for about one week, and mice having good health are selected and used in the experiment. The animals are sacrificed by cervical dislocations, and aseptically the small intestine is removed and only the Peyer's patch is removed from the small intestine. The Feyer's plate is washed with RPMI 1640 medium (Lonza) and pulverized twice using 100 mm Desh to extract the immune cells. The extracted intestinal immune cells are centrifuged at 300 rpm for 10 minutes. The immune cells are suspended in 10% FBS-RPMI 1640 at 5 × 10 6 cells / ml, and 90 μl / well in a 96-well plate.

1 ppm 농도의 카테킨, 1 ppm 농도의 카테킨과 실시예 2와 같이 준비한 107, 106 및 105 CFU/500㎕ 농도의 유산균을 10㎕씩 세포에 처리하며, 임파구의 증진을 촉진시키기 위하여 LPS를 10ug/ml의 농도로 처리한다. 상기 유산균으로는 실험예 2에서 사용한 LP 1, LP 2, LP 3, 락토바실러스 파라카제이 및 락토바실러스 람노서스를 사용한다. 처리한 세포를 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 72시간 배양한다. 장관 면역 세포의 활성도를 평가하기 위해, 세포 배양 종료 3시간 전에 CCK-8(Cell counting kit-8) 시스템(Dojindo, 일본) 10㎕를 처리한 후, 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 계속 배양한다. 세포 활성화 값은 450nm에서 OD(optical density)를 측정하여 도 2에 나타내었다.10 [mu] l of catechin at a concentration of 1 ppm, catechin at a concentration of 1 ppm and lactic acid bacteria at a concentration of 10 7 , 10 6, and 10 5 CFU / 500 μl prepared as in Example 2 were each treated with LPS Is treated at a concentration of 10 ug / ml. LP 1, LP 2, LP 3, Lactobacillus paracase, and Lactobacillus lambosus used in Experimental Example 2 are used as the lactic acid bacteria. The treated cells are cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C for 72 hours. 10 μl of CCK-8 (Cell counting kit-8) system (Dojindo, Japan) was treated 3 hours before the end of cell culture and then cultured in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. to evaluate the activity of intestinal immune cells do. The cell activation value is shown in FIG. 2 by measuring OD (optical density) at 450 nm.

도 2에서 확인할 수 있듯이, 카테킨은 아무 것도 처리하지 않은 음성 대조군(control) 대비 장관 면역 활성을 103% 더 증가시켰다. 카테킨과 유산균을 함께 처리한 경우, 음성 대조군(control)과 대비할 때, 유산균이 각각 LP 1인 경우 103%, LP 2인 경우 73%, LP 3인 경우 100%, 락토바실러스 파라카제이인 경우 186%, 락토바실러스 람노서스인 경우 46% 정도 장관 면역 활성을 더 증가시켰다. 한편, 양성 대조군으로 사용된 10 ㎍/ml 농도의 LPS는 장관 면역 활성을 음성 대조군 대비 179% 더 증가시켰다.As can be seen in Fig. 2, the catechin increased 103% more of the intestinal immune activity than the negative control that did nothing. When catechin and lactic acid bacteria were treated together, 103% of LP 1, 73% of LP 2, and 100% of LP 3, respectively, were compared with the negative control (control) 186% in the case of Lactobacillus paracasei, and 46% in the case of Lactobacillus laminocus. On the other hand, the 10 μg / ml LPS used as a positive control increased the intestinal immune activity by 179% compared to the negative control.

이와 같이 유산균과 카테킨을 함께 처리하는 경우 각각을 단독으로 처리하는 경우에 비해, 장관 면역 활성을 더욱 증가시킨다는 것을 확인할 수 있는데, 특히 락토바실러스 파라카제이와 카테킨을 함께 처리하는 경우 유의적으로 장관 면역 활성이 더욱 증가하는 것을 확인할 수 있다. 이는 양성 대조군인 LPS를 처리한 경우보다 훨씬 효과가 우수하였다. 즉, 유산균과 카테킨을 포함하는 차 추출물을 함께 사용하는 경우 장관 면역 활성 증가에 시너지 효과를 나타냄을 알 수 있다.
As described above, when lactic acid bacteria and catechin are treated together, it is confirmed that they exert greater intestinal immune activity than the case of treating alone with each other. Especially, when Lactobacillus paracasei and catechin are treated together, The activity is further increased. This was much more effective than the positive control, LPS. That is, when tea extracts containing lactic acid bacteria and catechin are used together, synergy is shown to increase the intestinal immune activity.

[실험예 4] 대식 세포 활성도 평가[Experimental Example 4] Evaluation of macrophage activity

마우스 대식 세포주(Raw 264.7)를 1X103 cells/웰이 되도록 멸균 글라스-슬라이드 챔버(sterile glass-slide chamber)에 넣고 48시간 동안 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 배양한다. 배양 후, 실험예 3과 같이 준비한 유산균 및 카테킨 시료를 대식 세포에 처리하고 48시간 배양 한 후 배양액을 제거하고, 10% 포르말린에서 고정시킨 후 전자현미경을 이용하여 대식 세포의 모양 및 크기를 확인한다. 락토바실러스 파라카제이와 카테킨을 함께 처리한 경우의 대식 세포 활성화 정도를 음성 대조군(control)과 대비하여 도 3에 나타내었다.The mouse macrophage cell line (Raw 264.7) is put into a sterile glass-slide chamber at 1 × 10 3 cells / well and cultured in a 5% CO 2 , 37 ° C. incubator for 48 hours. After culturing, the prepared lactic acid bacteria and catechin samples prepared in Experimental Example 3 were treated with macrophages and cultured for 48 hours. Then, the culture medium was removed, fixed with 10% formalin, and then examined for the shape and size of macrophages using an electron microscope . The degree of macrophage activation when Lactobacillus paracasei and catechin were treated together is shown in Fig. 3 as compared to the negative control.

도 3에서 볼 수 있듯이, 아무 것도 처리하지 않은 음성 대조군의 경우, 대식 세포는 둥근 원형을 유지하며 표면이 펼쳐지지 않는다. 하지만, 락토바실러스 파라카제이와 카테킨을 함께 처리한 경우, 대식 세포는 활성화 되어 수지상 세포(dendritic cell)와 유사한 모양을 하게 된다. 따라서, 유산균과 카테킨을 포함하는 차 추출물은 대식 세포를 활성화 하며, 면역력을 증가시킬 수 있음을 알 수 있다.
As can be seen from Fig. 3, in the case of the negative control group in which nothing is processed, the macrophage maintains a round shape and the surface is not unfolded. However, when Lactobacillus paracase and catechin are treated together, macrophages are activated and resemble dendritic cells. Thus, tea extracts containing lactic acid bacteria and catechin can activate macrophages and increase immunity.

이하 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 보다 상세하게 설명하나, 조성물은 여러 가지 제형으로 응용 가능하고, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
Hereinafter, formulation examples of the composition according to the present invention will be described in more detail. However, the composition can be applied to various formulations, and it is not intended to limit the present invention but to specifically describe it.

[제형예 1 내지 3] 환제[Formulation Examples 1 to 3]

구성 성분Constituent 제형예 1Formulation Example 1 제형예 2Formulation Example 2 제형예 3Formulation Example 3 차 추출물(mg)Tea extract (mg) 100100 20002000 1000010000 유산균(cfu)Lactic acid bacteria (cfu) 1013 10 13 1013 10 13 106 10 6 식이섬유(mg)Dietary Fiber (mg) 10001000 10001000 30003000 스테비오사이드(mg)Stevioside (mg) 1010 100100 300300 올리고당(mg)The oligosaccharide (mg) 30003000 30003000 30003000 구연산(mg)Citric acid (mg) 100100 300300 500500 자몽향(mg)Grapefruit flavor (mg) 8080 160160 300300 파안애플 추출물(mg)Fir Apple Extract (mg) 500500 800800 15001500 아라비아검(mg)Gum arabic (mg) 300300 100100 5050

[제형예 4] 건강 음료 [Formulation Example 4] Health drinks

차 추출물................1000 ㎎Tea extract ............ 1000 mg

유산균...................1000 mgLactic acid bacteria ................... 1000 mg

구연산...................1000 ㎎ Citric acid ................... 1000 mg

올리고당...................100 g Oligosaccharides ................... 100 g

타우린.......................1 g Taurine ....................... 1 g

정제수를 가하여 전체......900 ㎖ Purified water was added to the whole to obtain 900 ml

통상의 건강 음료 제조 방법에 따라 상기의 성분들을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한다. 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득한 후 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강 음료 조성물 제조에 사용한다.
The above ingredients are mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and then heated with stirring at 85 캜 for about 1 hour. The resulting solution is filtered, sterilized in a sterilized 2 liter container, sterilized by sealing, and stored in a refrigerator for use in manufacturing a health beverage composition of the present invention.

[제형예 5] 산제[Formulation Example 5] Powder

차 추출물.........................100 mgTea extract ......................... 100 mg

유산균............................100 mg Lactic acid bacteria ............................ 100 mg

유당..............................100 mg Lactose .............................. 100 mg

탈크...............................10 mg Talc ............................... 10 mg

유지.................................5 mg Maintenance ................................. 5 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
The above components are mixed and filled in airtight bags to prepare powders.

한국미생물보존센터(국내)Korea Microorganism Conservation Center (Domestic) KCCM11179PKCCM11179P 2011032820110328 한국미생물보존센터(국내)Korea Microorganism Conservation Center (Domestic) KCCM11181PKCCM11181P 2011032820110328

Claims (12)

유효성분으로서 카테킨 및 유산균의 조합을 포함하며,
상기 유산균은 락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei)인 장(腸) 질환 예방 또는 개선용 조성물.
A combination of catechin and lactic acid bacteria as active ingredients,
Wherein the lactic acid bacterium is Lactobacillus paracasei .
삭제delete 제 1 항에 있어서,
카테킨은 에피갈로카테킨 갈레이트, 에피갈로카테킨, 에피카테킨 갈레이트 및 에피카테킨 중 하나 이상을 포함하는 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the catechin comprises at least one of epigallocatechin gallate, epigallocatechin, epicatechin gallate, and epicatechin.
제 1 항에 있어서,
유산균은 사균(死菌)인 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the lactic acid bacterium is dead bacteria.
제 1 항에 있어서,
상기 유산균의 농도는 105-1013 CFU/500㎕인 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the concentration of the lactic acid bacteria is 10 < 5 > -10 < 13 >
제 1 항에 있어서,
조성물은 조성물 전체 중량 대비 0.000005 중량% 내지 45 중량%의 카테킨 및 0.1 중량% 내지 20 중량%의 유산균을 포함하는 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the composition comprises 0.000005 wt.% To 45 wt.% Catechin and 0.1 wt.% To 20 wt.% Lactic acid bacteria relative to the total weight of the composition.
제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
장 질환은 대장암, 장염, 장 궤양, 과민성 대장 증후군, 설사 및 변비 중 하나 이상을 포함하는 조성물.
7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Intestinal disorders include at least one of colon cancer, enteritis, intestinal ulcer, irritable bowel syndrome, diarrhea and constipation.
제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
조성물은 장(腸) 면역 기능을 증진시키는 조성물.
7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Wherein the composition enhances intestinal immune function.
제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
조성물은 대식 세포를 활성화하는 조성물.
7. The method according to any one of claims 1 to 6,
The composition activates macrophages.
제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
조성물은 식품 조성물인 조성물.
7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Wherein the composition is a food composition.
제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
조성물은 약학 조성물인 조성물.
7. The method according to any one of claims 1 to 6,
Wherein the composition is a pharmaceutical composition.
제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법으로서,
유산균으로 발효시킨 차를 추출하는 단계를 포함하는 제 1 항 또는 제 3 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 제조 방법.
7. A process for the production of a composition according to any one of claims 1 to 6,
7. A method for producing a composition according to any one of claims 1 to 6, comprising the step of extracting tea fermented with lactic acid bacteria.
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