KR101776536B1 - Tube for counting target cells and counting method of using the same - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 시료 중에 극미량으로 포함된 표적세포를 용이하게 계수할 수 있는 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법에 관한 것이다.The present invention relates to a target cell counting tube and a target cell counting method using the same, and more particularly, to a target cell counting tube capable of easily counting a target cell contained in a trace amount in a sample, and a target cell counting method using the same will be.
생검(Biopsy)에 기반한 기존의 암진단 방식은 시술 또는 수술 등으로 환자에게 공포와 고통을 수반할 수 있으며, 이를 극복하기 위한 방법으로 도입되고 있는 액체 생검(Liquid Biopsy)의 경우, 표준화된 도구가 없고, 숙련된 실험 전문가 또는 임상 병리사가 필요하며, 신규의 분석 장비 및 생소한 바이오칩 등이 필요한 한계가 존재한다.The existing biopsy-based cancer diagnosis method may involve fear and pain in patients due to surgery or surgery. In the case of liquid biopsy, which is being introduced as a method to overcome this, a standardized tool There is no need for a skilled experimentist or a clinical pathologist, and there is a need for new analytical equipment and unfamiliar biochips.
따라서, 동네 병원, 보건소 등과 같은 소형, 영세 의료기관에서는 암의 조기에 발견하거나, 병의 진행 정도를 기초적인 수준에서 진단할 수 없었다.Therefore, in small, small-scale medical institutions such as neighborhood hospitals and public health centers, it was not possible to detect cancer early or to diagnose disease progression at a basic level.
이러한 문제를 해결하기 위하여, 간단하고, 소형 현미경과 같은 간단한 장비와 호환이 되면서, 표준화된 방법으로 혈중 암세포와 같은 표적 세포를 검출할 수 있는 장치가 요구되었다.In order to solve such a problem, there is a need for a device capable of detecting target cells such as blood cancer cells by a standardized method, while being compatible with simple equipment such as a compact microscope.
또한, 기존의 세포 여과 장치와 같은 방식의 표적 세포 검출 장치에서는 분석을 위해 샘플을 특정 용기에 넣었다가 옮기는 등의 작업이 수차례 반복되게 되는데, 이로 인하여 발생할 수 있는 표적 세포의 손실이 혈중 암세포와 같은 희귀 세포의 경우 분석에 있어서 치명적인 문제가 될 수 있었다. In addition, in a conventional target cell detection apparatus such as a conventional cell filtering apparatus, a sample is transferred to a specific container for analysis several times, for example, to be repeated several times. In the case of the same rare cell, it could be a fatal problem in the analysis.
본 발명의 과제는 상술한 바와 같은 종래의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 소형 현미경 등과 같은 간단한 장비를 이용한 영상을 통해 표적세포를 검출 및 계수할 수 있는 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법이 제공된다.The object of the present invention is to solve the conventional problems as described above, and it is an object of the present invention to provide a target cell counting tube capable of detecting and counting target cells through an image using simple equipment such as a small microscope, / RTI >
또한, 간단한 촬상만으로도 표적세포에 대한 계수 및 이를 토대로 한 분석이 가능하여 손쉬운 표적 세포 검출 결과의 공유 및 희귀 표적 세포 분석의 저가격화 등을 가능하게 할 수 있는 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법이 제공된다.In addition, it is possible to perform a target cell counting and a target cell counting using the same, which can perform the analysis based on the counting of the target cell by simple imaging alone, thereby facilitating the sharing of the result of easy target cell detection and the cost reduction of the rare target cell analysis. Method is provided.
상기 과제는, 본 발명에 따라, 계수할 표적세포가 포함된 시료를 담을 수 있도록 마련되며, 저면이 개구된 튜브몸체; 및, 상기 튜브몸체의 저면을 막도록 결합되며, 상기 튜브몸체의 개구된 부분과 맞닿은 부분에는 상기 표적세포가 안착가능한 세포계수부가 형성된 계수캡;을 포함하는 표적세포 계수용 튜브에 의해 달성될 수 있다.According to an embodiment of the present invention, there is provided a tubular body including a tubular body having a bottom opened to contain a sample containing target cells to be counted; And a coefficient cap which is coupled to close the bottom surface of the tube body and has a cell count portion capable of seating the target cell in a portion of the tube body that is in contact with the opened portion of the tube body, .
여기서, 상기 세포계수부는 격자일 수 있고, 상기 격자의 크기는 상기 표적세포의 크기와 대응되도록 형성될 수 있다. 상기 격자의 크기는 바람직하게는 10㎛ 내지 1000㎛일 수 있다.Here, the cell counting unit may be a lattice, and the size of the lattice may correspond to the size of the target cell. The size of the lattice may preferably be 10 [mu] m to 1000 [mu] m.
또한, 상기 격자의 높이는 상기 표적세포의 직경과 대응되거나 크게 형성될 수 있다.In addition, the height of the lattice may correspond to or be greater than the diameter of the target cell.
또한, 상기 계수캡은 상기 격자가 형성되는 계수부와, 상기 계수부의 가장자리에 형성되어 바닥면에 놓을 수 있도록 마련되는 안착부를 포함할 수 있다.In addition, the coefficient cap may include a counting portion in which the grid is formed, and a seating portion formed at an edge of the counting portion and provided to be placed on a floor surface.
상기 계수캡은 투명 재질이며, 폴리디메틸실록세인(PDMS, Polydimethylsiloxane), 폴리우레탄 수지, 폴리프로필렌, 폴리스틸렌, 폴리에틸렌 수지, 에폭시 수지 및 유리 중 중 어느 하나를 포함할 수 있다.The coefficient cap may be a transparent material and may include any one of polydimethylsiloxane (PDMS), polyurethane resin, polypropylene, polystyrene, polyethylene resin, epoxy resin and glass.
또한, 상기 계수캡의 내부 벽면에는 세포의 흡착을 줄일 수 있는 PEG(Polyethylene glycol), 홍합의 접착 단백질, 불소계 코팅제 및 실리콘계 코팅제 중 적어도 어느 하나가 코팅될 수 있다.At least one of PEG (polyethylene glycol), a mussel adhesive protein, a fluorine-based coating agent, and a silicone-based coating agent capable of reducing the adsorption of cells may be coated on the inner wall surface of the coefficient cap.
한편, 상기 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법은, 계수할 표적세포가 포함된 시료를 담을 수 있도록 마련되며, 저면이 개구된튜브몸체와, 상기 튜브몸체의 저면을 막도록 결합되며, 상기 튜브몸체의 개구된 부분과 맞닿은 부분에는 상기 표적세포가 안착가능한 세포계수부가 배열형성된 계수캡을 포함하는 표적세포 계수용 튜브를 준비하는 준비단계; 상기 튜브에 상기 시료 및 비드를 투입하여, 상기 표적세포와 상기 비드가 결합되어 표적세포-비드 결합체를 형성하는 투입단계; 밀도차에 따라 상기 시료의 각 성분들이 상기 튜브의 길이방향을 따라 배열되게 하여, 상기 표적세포-비드 결합체는 상기 계수캡의 격자가 형성된 부분으로 침강하는 배열단계; 및, 상기 계수캡의 하향에서 촬상부를 이용하여 상기 계수캡의 격자가 형성된 부분을 촬상하여 영상을 획득하는 촬상단계;를 포함한다.Meanwhile, the target cell counting method using the target cell counting tube may include a tube body having a bottom opened so as to contain a sample containing a target cell to be counted, a bottom body coupled to the bottom of the tube body, Preparing a target cell counting tube including a counting cap on which a target cell is seated and a cell counting portion in which the target cell is seated; Injecting the sample and the bead into the tube to bind the target cell and the bead to form a target cell-bead conjugate; Arranging each component of the sample according to a density difference along the longitudinal direction of the tube so that the target cell-bead combination precipitates into a lattice-formed portion of the coefficient cap; And an imaging step of capturing an image of a portion of the coefficient cap where a grid is formed using the imaging unit at a downward direction of the coefficient cap to acquire an image.
여기서, 상기 배열단계 이후에 상기 튜브를 흔들거나, 원심분리기를 이용하여 상기 격자에 상기 표적세포-비드 결합체를 안착시키는 안착단계를 더 포함할 수 있다.The method may further include a step of placing the target cell-bead conjugate on the lattice by shaking the tube after the arranging step or using a centrifugal separator.
또한, 상기 투입단계에서는 버퍼용액을 더 투입하며, 상기 버퍼용액은 상기 안착단계에서 상기 표적세포-비드 결합체와 다른 시료성분 사이에 위치할 수 있다.Further, the buffer solution may be further introduced in the step of injecting, and the buffer solution may be positioned between the target cell-bead conjugate and the other sample components in the placing step.
또한, 상기 투입단계 이전 또는 이후에 상기 표적세포-비드 결합체를 염색하는 염색제를 투입하는 염색제 투입단계를 더 포함할 수 있다.Further, the method may further include a step of injecting a staining agent for staining the target cell-bead conjugate before or after the step of injecting.
또한, 상기 염색제는 DAPI일 수 있다.Also, the dye may be DAPI.
또한, 상기 비드는 상기 시료 중 표적세포를 제외한 다른 시료보다 높은 밀도를 가질 수 있다.In addition, the beads may have a higher density than other samples except the target cells in the sample.
또한, 상기 시료가 혈액인 경우 상기 표적세포는 암세포이며, 상기 비드의 밀도는 3 g/ml 내지 4 g/ml 일 수 있다.In addition, when the sample is blood, the target cell may be a cancer cell, and the density of the bead may be 3 g / ml to 4 g / ml.
본 발명에 따르면, 소형 현미경 등과 같은 간단한 장비를 이용한 영상을 통해 표적세포를 검출 및 계수할 수 있는 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법을 제공함에 있다.According to the present invention, there is provided a target cell counting tube capable of detecting and counting target cells through an image using simple equipment such as a miniature microscope, and a method for counting target cells using the same.
또한, 간단한 촬상만으로도 표적세포에 대한 계수 및 이를 토대로 한 분석이 가능하여 손쉬운 표적 세포 검출 결과의 공유 및 희귀 표적 세포 분석의 저가격화 등을 가능하게 할 수 있는 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법을 제공함에 있다.In addition, it is possible to perform a target cell counting and a target cell counting using the same, which can perform the analysis based on the counting of the target cell by simple imaging alone, thereby facilitating the sharing of the result of easy target cell detection and the cost reduction of the rare target cell analysis. Method.
도 1은 본 발명의 제1실시예에 따른 표적세포 계수용 튜브의 개략도,
도 2는 본 발명에 따른 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법의 순서도,
도 3 내지 도 5는 도 2의 순서에 따른 공정도이다.1 is a schematic view of a target cell counting tube according to a first embodiment of the present invention,
FIG. 2 is a flowchart of a target cell counting method using a target cell counting tube according to the present invention,
3 to 5 are process drawings according to the procedure of FIG.
설명에 앞서, 여러 실시예에 있어서, 동일한 구성을 가지는 구성요소에 대해서는 동일한 부호를 사용하여 대표적으로 제1실시예에서 설명하고, 그 외의 실시예에서는 제1실시예와 다른 구성에 대해서 설명하기로 한다.Prior to the description, components having the same configuration are denoted by the same reference numerals as those in the first embodiment. In other embodiments, configurations different from those of the first embodiment will be described do.
이하, 첨부한 도면을 참조하여 본 발명의 제1실시예에 따른 표적세포 계수용 튜브에 대하여 상세하게 설명한다.Hereinafter, a target cell counting tube according to a first embodiment of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.
도 1은 본 발명의 제1실시예에 따른 표적세포 계수용 튜브의 개략도이다. 도 1을 참조하면, 본 발명의 제1실시예에 따른 표적세포 계수용 튜브는 튜브캡(A), 튜브몸체(10) 및 계수캡(20)을 포함하여 구성된다.1 is a schematic view of a target cell counting tube according to a first embodiment of the present invention. Referring to FIG. 1, a target cell counting tube according to a first embodiment of the present invention comprises a tube cap A, a
상기 튜브캡(A)은 튜브몸체(10)의 상단면에 결합되며, 튜브몸체(10) 내부로 시료 및 각종 시약을 투입완료한 뒤에 그 상단면을 마감한다.The tube cap A is coupled to the upper end surface of the
상기 튜브몸체(10)는 일 방향으로 길게 형성되어 내부에는 계수할 표적세포가 포함된 시료를 담을 수 있도록 마련되고, 상단면과 하단면은 개구된 형태로 마련된다.The
상기 계수캡(20)은 계수부(21)와 안착부(22)를 포함하여 튜브몸체(10)에 착탈가능하도록 결합된다. 상기 계수캡(20)은 튜브몸체(10)에 억지끼워맞춤 등의 방법으로 착탈가능하게 결합되거나 소정의 나사결합 등의 방법으로 착탈가능하게 결합될 수 있다.The
계수캡(20)은 투명 재질로 마련되며, 폴리우레탄 수지, 폴리프로필렌 수지, 폴리스틸렌 수지, 폴리에틸렌 수지, 에폭시 수지 및 유리 중 어느 하나를 포함할 수 있다.The
또한, 계수캡(20)의 내부 벽면에는 세포의 흡착을 줄일 수 있는 PEG(Polyethylene glycol), 계면활성제, 불소계 코팅제 및 실리콘계 코팅제 중 적어도 어느 하나가 코팅될 수 있다. 또한, 상기 계수캡(20)의 재질과 혼합되어 계수캡(20)의 재질로 사용될 수도 있다.At least one of PEG (polyethylene glycol), a surfactant, a fluorine-based coating agent, and a silicone-based coating agent capable of reducing the adsorption of cells may be coated on the inner wall surface of the
상기 계수부(21)는 튜브몸체(10)의 저면을 막아서 마감하도록 마련되며, 상면에는 표적세포가 안착가능한 세포계수부(21a)가 형성된다.The
여기서, 상기 세포계수부(21a)는 다수의 격자로 배열형성되며, 격자의 크기는 안착되는 표적세포의 크기와 대응되도록 형성되며, 바람직하게는 세포 계수가 용이하도록 10㎛ ~ 1000㎛일 수 있다.Here, the
상기 안착부(22)는 계수부의 가장자리에 형성되어 튜브몸체(10)와 결합되며, 바닥면에 놓을 수 있도록 마련된다.The
지금부터는 상술한 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법에 대하여 설명한다.Hereinafter, the target cell counting method using the above-mentioned target cell counting tube will be described.
도 2는 본 발명에 따른 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법의 순서도이다. 도 2를 참조하면, 본 발명에 따른 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법은 준비단계(S10), 투입단계(S20), 염색제 투입단계(S30), 배열단계(S40), 안착단계(S50) 및 촬상단계(S60)를 포함하여 구성된다.2 is a flowchart of a method of counting target cells using a target cell counting tube according to the present invention. Referring to FIG. 2, the target cell counting method using the target cell counting tube according to the present invention comprises steps S10, S20, S30, S40, S50, And an imaging step S60.
먼저, 준비단계(S10)로서, 상술한 표적세포 계수용 튜브를 준비한다. 그리고, 투입단계(S20)로서, 튜브몸체(10)에 표적세포가 포함된 시료 및 비드를 투입하여 표적세포와 비드가 결합되어 표적세포-비드 결합체를 형성한다.First, as the preparation step (S10), the above-mentioned target cell counting tube is prepared. In the injecting step S20, a sample and a bead containing a target cell are introduced into the
이때, 비드는 해당 표적세포와 결합하여 표적세포-비드 결합체를 형성하는 구성으로서, 시료 중 표적세포를 제외한 다른 시료보다 높은 밀도(density)를 가지는 것이 바람직하다.At this time, it is preferable that the beads have a higher density than the other samples except for the target cells in the sample, in which the beads bind to the target cells to form a target cell-bead conjugate.
가령, 시료가 혈액인 경우 표적세포는 암세포이며, 이때 비드의 밀도는 2 ~ 4 g/ml 또는 3 ~ 4 g/ml일 수 있다. 이때 비드는 폴리스티렌(PS) 복합체 비드, 폴리에틸렌(PE) 복합체 비드 또는 자성미소비드(magnetic microbead) 등일 수 있다. 통상적으로 백혈구는 1.08 g/ml, 적혈구는 1.1 g/ml, 혈장은 1.025 g/ml 정도의 밀도를 가지고 있다.For example, if the sample is blood, the target cell is a cancer cell, wherein the density of the bead may be 2-4 g / ml or 3-4 g / ml. The beads may be polystyrene (PS) composite beads, polyethylene (PE) composite beads or magnetic microbeads, and the like. Typically, white blood cells have a density of 1.08 g / ml, red blood cells have a density of 1.1 g / ml, and plasma has a density of 1.025 g / ml.
또한, 투입단계(S20)에서 버퍼용액을 더 투입할 수 있다. 여기서, 버퍼용액은 표적세포-비드 결합체보다는 낮고, 다른 성분들보다는 높은 밀도를 가지는 용액이다. 시료가 혈액인 경우에는 대표적으로 ficoll 또는 percoll이 사용될 수 있다.Further, the buffer solution may be further introduced in the charging step S20. Here, the buffer solution is a solution having a lower density than the target cell-bead conjugate and a higher density than the other components. If the sample is blood, typically ficoll or percoll may be used.
한편, 투입단계(S20) 다음에 염색제 투입단계(S30)로서, 튜브 내로 염색제를 더 투입할 수 있다. 여기서, 염색제는 표적세포-비드 결합체를 염색할 수 있는 제재로서, DAPI(4,6-diamidino-2-phenylindole) 등을 사용할 수 있다. 상기 염색제에 의해 표적세포-비드 결합체가 염색되면, 후술할 촬상단계를 통해 획득된 영상에서 표적세포-비드 결합체의 계수를 더 정확히 할 수 있다. 상기 염색제 투입단계(S30)는 투입단계(S20) 이전에 실행할 수도 있고, 선택적으로 실시 또는 비실시할 수도 있다.On the other hand, as a dye-applying step (S30) after the charging step S20, a dye can be further injected into the tube. Here, the dye may be DAPI (4,6-diamidino-2-phenylindole) or the like as a material capable of staining a target cell-bead conjugate. When the target cell-bead conjugate is stained with the stain agent, the target cell-bead conjugate can be more accurately counted in the image obtained through the imaging step described later. The coloring agent applying step (S30) may be performed before the input step (S20), or may be selectively performed or not.
다음, 배열단계(S40)로서, 도 3을 참조하면, 튜브의 계수캡(20)이 아래쪽 방향으로 위치하도록 하면, 튜브 내에 투입된 각각의 성분들은 밀도차에 따라 배열된다. 필요에 따라 소정의 바닥면에 계수캡(20)이 맞닿도록 위치시킬 수도 있다.Next, in the arrangement step S40, referring to FIG. 3, when the
여기서, 각각의 밀도차에 따른 배열은, 시료의 표적세포와 비드는 화학적 결합을 통해 표적세포-비드 결합체를 형성하여 가장 하측으로 침강함으로써 a영역에 위치하고, 버퍼용액은 표적세포-비드 결합체와 나머지 성분의 사이인 b영역에 위치하고, 시료의 나머지 성분은 표적세포-비드 결합체의 상향인 c영역에 위치하여, 각각의 밀도차에 따라 배열된다.Here, the arrangement according to each density difference is such that the target cell of the sample and the bead form a target cell-bead conjugate through chemical bonding, and settle down to the lowest position to be located in the a region, and the buffer solution binds to the target cell- And the remaining components of the sample are located in the upward c-region of the target cell-bead combination, and are arranged according to the respective density differences.
이때, 표적세포-비드 결합체는 가장 하측으로 침강하여 계수캡(20)의 세포계수부(21a)인 격자에 안착되며, 그 상부에는 각 성분들의 밀도에 따라 배열되고, 버퍼용액은 표적세포-비드 결합체와 다른 시료성분 사이에 위치하게 된다.At this time, the target cell-bead conjugate precipitates to the lowest position and is placed on the lattice of the
상기 배열단계(S40)를 통한 표적세포-비드 결합체는 세포계수부(21a)인 격자 내부에 안착되어야 하나 세포계수부(21a)인 격자 상부에 위치하거나 다른 표적세포-비드 결합체의 상부에 적층되는 것이 발생한다.The target cell-bead conjugate through the arranging step S40 should be placed inside the lattice of the
이에 따라, 안착단계(S50)로서, 소정의 시간 동안 튜브를 흔들기 또는 회전 등의 외력을 인가하면, 도 4에서와 같이, 세포계수부(21a)인 격자 상부에 위치하거나 다른 표적세포-비드 결합체의 상부에 적층된 상태 등의 세포계수부(21a)인 격자 내에 위치하지 못한 표적세포-비드 결합체가 세포계수부(21a)인 격자 내부로 이동하여 안착된다. 상기 튜브의 흔들기 또는 회전은 검사자가 직접 하거나 원심분리기 등을 이용하여 실행할 수 있다.As a result, when an external force such as shaking or rotating the tube is applied for a predetermined period of time as the seating step S50, as shown in Fig. 4, the
그리고, 촬상단계(S60)로서, 도 5를 참조하면, 계수캡(20)이 촬상부(30)의 렌즈(32)와 대향되는 방향에 위치하도록 놓고, 촬상부(30)를 통해 계수캡(20)을 촬상하여 이미지 또는 영상을 획득한다. 상기 촬상부(30)는 소형 현미경 등과 같은 이미지 또는 영상획득이 가능한 장치이다.5, the
여기서, 계수캡(20)이 놓여지는 부분은 촬상부(30)의 촬상바디(31)일 수도 있고, 소정의 받침대 같은 것이 될 수도 있다. 도시된 바는 촬상부(30)의 촬상바디(31)에 튜브가 놓여지고, 그 하측에 촬상부(30)의 렌즈(32)가 위치하는 것이 도시되어 있다.Here, the portion where the
촬상부(30)를 통해 획득된 영상에는 세포계수부(21a)인 격자에 안착된 표적세포-비드 결합체가 나타날 수 있으며, 이를 통해 시료 ml(cc)당 표적세포의 갯수를 정확히 계수해 낼 수 있다.The target cell-bead conjugate placed on the lattice of the
종래에는 시료 내에 매우 미약한 수를 가진 표적세포인 경우, 이를 측정하기 위해 순차적으로 시료를 담는 기구를 옮겨가며 다단계를 검사과정을 거치면서 측정함으로써, 매우 미약한 수의 표적세포의 손실이 발생하여 그 측정결과의 신뢰도가 현저하게 낮았다.Conventionally, in the case of a target cell having a very weak number in the sample, a very small number of target cells are lost by measuring the multistage while carrying out a procedure for sequentially transferring the sample to measure the target cell The reliability of the measurement result was remarkably low.
그러나, 상술한 바와 같은 본 발명에 따른 표적세포 계수용 튜브 및 이를 이용한 표적세포 계수방법을 이용하면, 하나의 튜브 내에서 모든 공정이 이뤄질 수 있어 표적세포의 손실이 발생하지 않아 정확한 계수가 가능할 수 있다.However, using the target cell counting tube according to the present invention as described above and the target cell counting method using the same, all processes can be performed in one tube, so that loss of target cells does not occur and accurate counting is possible .
또한, 각 표적세포-비드 결합체가 염색제에 의해 염색됨으로써 한눈에 그 수가 계수가능할 수 있다. 이에 따라, 획득한 영상을 필요한 의료진 또는 환자에게 직접 제공하여도 그 의미를 명확히 설명할 수 있다.In addition, each target cell-bead conjugate can be stained with a stain agent, so that the number of the target cell-bead conjugates can be counted at a glance. Accordingly, even if a captured image is directly provided to a necessary medical staff or a patient, the meaning can be clearly described.
결과적으로, 본 발명에서와 같은 표적세포 계수용 튜브를 이용한 계수방법을 이용하면, 소형 현미경 등과 같은 간단한 장비를 이용한 이미지 또는 영상을 통해 표적세포를 검출, 계수 및 이를 토대로 한 분석이 용이해질 수 있다.As a result, by using the counting method using the target cell counting tube as in the present invention, detection, counting, and analysis based on the target cell can be facilitated through an image or an image using simple equipment such as a small microscope.
따라서, 손쉬운 표적 세포 검출 결과의 공유 및 희귀 표적 세포 분석의 저가격화 등을 가능하게 할 수 있다.Therefore, it is possible to easily share the target cell detection result and to reduce the price of the rare target cell analysis.
본 발명의 권리범위는 상술한 실시예에 한정되는 것이 아니라 첨부된 특허청구범위 내에서 다양한 형태의 실시예로 구현될 수 있다. 특허청구범위에서 청구하는 본 발명의 요지를 벗어남이 없이 당해 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 누구든지 변형 가능한 다양한 범위까지 본 발명의 청구범위 기재의 범위 내에 있는 것으로 본다.The scope of the present invention is not limited to the above-described embodiments, but may be embodied in various forms of embodiments within the scope of the appended claims. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the present invention as defined by the appended claims.
※도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명※
10 : 튜브몸체 20 : 계수캡
21 : 계수부 22 : 안착부
21a : 세포계수부
30 : 촬상부 31 : 촬상바디
32 : 렌즈 [Description of Reference Numerals]
10: tube body 20: coefficient cap
21: counting section 22:
21a:
30: imaging section 31: imaging body
32: lens
Claims (15)
상기 튜브몸체의 저면을 막도록 결합되며, 표적세포를 계수하도록 상기 튜브몸체의 개구된 부분과 맞닿은 부분에는 상기 표적세포가 안착가능한 세포계수부가 형성된 계수캡;을 포함하고,
상기 세포계수부는 격자로 구성되며, 상기 세포계수부에 안착된 표적세포를 촬상하여 계수할 수 있도록 상기 계수캡은 투명 재질로 마련되는 표적세포 계수용 튜브.A tube body provided with a bottom open so as to contain a sample containing the target cell to be counted;
And a coefficient cap, which is coupled to the bottom surface of the tube body and has a cell counting portion capable of seating the target cell at a portion of the tube body contacting the opened portion thereof to count target cells,
Wherein the cell counting unit comprises a lattice, and the counting cap is made of a transparent material so that the target cell placed on the cell counting unit can be imaged and counted.
상기 격자의 크기는 상기 표적세포의 크기와 대응되는 표적세포 계수용 튜브.The method according to claim 1,
Wherein the size of the lattice corresponds to the size of the target cell.
상기 격자의 크기는 10㎛ 내지 1000㎛인 표적세포 계수용 튜브.The method of claim 3,
Wherein the size of the lattice is 10 占 퐉 to 1000 占 퐉.
상기 격자의 높이는 상기 표적세포의 직경과 대응되거나 크게 형성되는 표적세포 계수용 튜브.The method according to claim 1,
Wherein the height of the lattice corresponds to or is greater than the diameter of the target cell.
상기 계수캡은 상기 격자가 형성되는 계수부와, 상기 계수부의 가장자리에 형성되어 바닥면에 놓을 수 있도록 마련되는 안착부를 포함하는 표적세포 계수용 튜브.The method according to claim 1,
Wherein the coefficient cap includes a counting portion in which the grating is formed and a seating portion formed at an edge of the counting portion and provided to be placed on a floor surface.
상기 계수캡은 투명 재질이며, 폴리디메틸실록세인(PDMS, Polydimethylsiloxane), 폴리우레탄 수지, 폴리프로필렌 수지, 폴리스틸렌 수지, 폴리에틸렌 수지, 에폭시 수지 및 유리 중 중 어느 하나를 포함하는 표적세포 계수용 튜브.The method according to claim 1,
Wherein the coefficient cap is a transparent material and comprises any one of polydimethylsiloxane (PDMS), polyurethane resin, polypropylene resin, polystyrene resin, polyethylene resin, epoxy resin and glass.
상기 계수캡의 내부 벽면에는 세포의 흡착을 줄일 수 있는 PEG(Polyethylene glycol), 계면활성제, 불소계 코팅제 및 실리콘계 코팅제 중 적어도 어느 하나가 코팅되는 표적세포 계수용 튜브.The method according to claim 1,
Wherein at least one of polyethylene glycol (PEG), a surfactant, a fluorine-based coating agent, and a silicone-based coating agent is coated on the inner wall surface of the coefficient cap to reduce adsorption of cells.
상기 튜브에 상기 시료 및 비드를 투입하여, 상기 표적세포와 상기 비드가 결합되어 표적세포-비드 결합체를 형성하는 투입단계;
밀도차에 따라 상기 시료의 각 성분들이 상기 튜브의 길이방향을 따라 배열되게 하여, 상기 표적세포-비드 결합체는 상기 계수캡의 격자가 형성된 부분으로 침강하는 배열단계; 및,
투명 재질로 마련된 상기 계수캡의 하향에서 촬상부를 이용하여 상기 계수캡의 격자가 형성된 부분을 촬상하여 영상을 획득하는 촬상단계;를 포함하는 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.The tube body is provided with a tube body having a bottom open so as to contain a sample containing the target cell to be counted. The tube body is connected to the bottom surface of the tube body and abuts against the open portion of the tube body to count the target cells. Preparing a target cell counting tube, wherein the target cell comprises a counting cap on which a cell counting portion capable of seating is formed, and the cell counting portion comprises a grating;
Injecting the sample and the bead into the tube to bind the target cell and the bead to form a target cell-bead conjugate;
Arranging each component of the sample according to a density difference along the longitudinal direction of the tube so that the target cell-bead combination precipitates into a lattice-formed portion of the coefficient cap; And
And an image capturing step of capturing an image of a portion of the coefficient cap where the lattice is formed using the imaging unit at a downward direction of the coefficient cap provided with a transparent material to obtain an image.
상기 배열단계 이후에 상기 튜브를 흔들거나, 원심분리기를 이용하여 상기 격자에 상기 표적세포-비드 결합체를 안착시키는 안착단계를 더 포함하는 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.10. The method of claim 9,
Further comprising the step of placing the target cell-bead conjugate on the lattice by shaking the tube after the arraying step or using a centrifuge.
상기 투입단계에서는 버퍼용액을 더 투입하며,
상기 버퍼용액은 상기 안착단계에서 상기 표적세포-비드 결합체와 다른 시료성분 사이에 위치하는 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.11. The method of claim 10,
In the charging step, the buffer solution is further introduced,
Wherein the buffer solution is located between the target cell-bead conjugate and the other sample component in the seating step.
상기 투입단계 이전 또는 이후에 실행하며,
상기 표적세포-비드 결합체를 염색하는 염색제를 투입하는 염색제 투입단계를 더 포함하는 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.10. The method of claim 9,
Before or after the step of injecting,
Further comprising the step of injecting a staining agent for staining the target cell-bead conjugate.
상기 염색제는 DAPI인 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.13. The method of claim 12,
Wherein said staining agent is a DAPI target cell counting tube.
상기 비드는 상기 시료 중 표적세포를 제외한 다른 시료보다 높은 밀도를 가지는 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.10. The method of claim 9,
Wherein the bead is a target cell counting tube having a density higher than that of the other samples except for the target cells in the sample.
상기 시료가 혈액인 경우 상기 표적세포는 암세포이며,
상기 비드의 밀도는 3 g/ml 내지 4 g/ml 인 표적세포 계수용 튜브를 이용한 표적세포 계수방법.15. The method of claim 14,
When the sample is blood, the target cell is a cancer cell,
Wherein the density of the beads is from 3 g / ml to 4 g / ml.
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