KR101732933B1 - 신생아의 성장 또는 심혈관계 질환 예후 진단 방법 - Google Patents

신생아의 성장 또는 심혈관계 질환 예후 진단 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 인간으로부터 분리된 제대혈 시료를 수집하는 단계; 상기 제대혈 시료 내의 중성지방, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 함량을 조사하는 단계; 및 대조군의 함량과 비교하는 단계를 포함하는 신생아의 성장 예측 방법 또는 신생아의 심혈관계 질환 예후 진단 방법에 대한 것으로, 신생아의 건강한 성장 및 발달에 기여할 수 있다.

Description

신생아의 성장 또는 심혈관계 질환 예후 진단 방법{Diagnosing method for growth or prognosis cardiovascular disease of newborn baby}
본 발명은 태아의 제대혈을 이용하여 신생아의 성장 또는 심혈관계 질환 예후를 진단하는 방법에 대한 것이다.
태아발육지연(fetal growth restriction, FGR)은 임신 중 약 5 내지 10%의 빈도로 발생하며 유전적으로 결정된 성장능력에 따른 성장을 하지 못하는 경우를 말한다. 태아발육지연이 산전에 진단되지 않고 출생한 신생아는 산전에 진단되어 적절한 관리를 받고 출생한 신생아에 비해 주산기 이환율 및 사망률의 증가와 같은 불량한 예후에 대한 위험이 높으므로 산전 진단 및 관리의 중요성이 강조되고 있다. 태아발육지연으로 출생한 신생아는 호흡곤란(respiratory difficulties), 적혈구증가증(polycythemia), 저혈당증(hypoglycemia), 뇌실내출혈(intraventricular hemorrhage), 저체온증(hypothermia)을 겪을 수 있다. 장기적으로는 뇌성마비(cerebral palsy), 성장 지연(developmental delay), 행동기능장애(behavioral dysfunction) 등이 발생할 수 있다. 뿐만 아니라 태아발육지연이 성인기의 대사증후군과 관련되어 있다고 보고된 바 있다. Barker 등은 헬싱키대학병원에서 1924년부터 1944년 사이에 출생한 13,517명의 종단 연구(longitudinal study)에서 작은 크기(small size)로 출생하여 유년기 시기 동안 가속된 체중증가 소견이 있는 경우 2형 당뇨병(type 2 diabetes), 고혈압(hypertension) 등과 관련이 있었다고 보고하였다. 따라서, 태아발육지연은 태아, 신생아, 소아 및 성인에서뿐만 아니라 향후 부모가 되어서도, 그리고 사회적으로도 중요한 의미를 가진다. 최근의 초음파와 도플러(Doppler)의 발전은 태아발육지연에 대한 여러 가지 기전을 밝혀주었다. 그러나 아직 태아발육지연의 중증도(severity)의 진단에 관한 일관된 특징의 기술이나 구분에 대한 자료는 없는 실정이다. 치료할 수 있는 상태가 아니기 때문에 처치는 구조화된 산전 태아 감시(antepartum fetal surveillance) 프로그램에 의존해야 하나, 현재까지 분만시점의 결정에 관해 정해진 지침이 없어 임상 진료에 있어서 많은 딜레마가 있다. 따라서 신생아의 성장 및 향후 발생할 수 있는 질병에 대해 효율적으로 정확하게 진단할 수 있는 방법의 개발이 요구된다.
1. 한국등록특허 10-1454013호.
따라서 본 발명은 신생아의 성장 예측 방법을 제공하는 데 그 목적이 있다.
더불어 본 발명은 신생아의 심혈관계 질환 예후 진단 방법을 제공하는 데 또 다른 목적이 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인간으로부터 분리된 제대혈 시료를 수집하는 단계; 상기 제대혈 시료 내의 중성지방의 함량, 혈당의 함량, 콜레스테롤에스테르수송단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP)의 활성, 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)의 함량, 아포지질단백질 C-3(Apolipoprotein C-III, apoC-III)의 함량, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물의 함량 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물의 함량으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 지표를 분석하는 단계; 및 대조군의 그것과 비교하는 단계를 포함하는 신생아의 성장 예측 방법을 제공한다.
상기 또 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 인간으로부터 분리된 제대혈 시료를 수집하는 단계; 상기 제대혈 시료 내의 중성지방의 함량, 혈당의 함량, 콜레스테롤에스테르수송단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP)의 활성, 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)의 함량, 아포지질단백질 C-3(Apolipoprotein C-III, apoC-III)의 함량, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물의 함량 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물의 함량으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 지표를 분석하는 단계; 및 대조군의 그것과 비교하는 단계를 포함하는 신생아의 심혈관계 질환 예후 진단 방법을 제공한다.
본 발명에 따르면, 인간으로부터 분리된 제대혈 시료 내의 중성지방, 혈당, apoA-1, apoC-III, 저밀도 지단백질, 고밀도 지단백질의 함량 또는 CETP의 활성을 분석하고 이를 정상 대조군과 비교, 분석하면 신생아의 성장을 예측할 수 있을 뿐만 아니라, 향후 신생아의 심혈관계 질환 예후를 진단할 수 있으므로, 신생아의 건강한 성장 및 발달에 기여할 수 있다.
도 1은 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 항산화 능력을 비교한 결과이고,
도 2는 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 LDL 산화 민감도를 확인한 결과이고,
도 3은 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 HDL 당화산물의 양을 측정한 결과이고,
도 4는 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 지단백질을 분석한 결과이고,
도 5는 저체중 신생아의 LDL을 사람 혈관 대식세포에 처리한 후 탐식 작용을 확인한 결과이고,
도 6은 저체중아 HDL에서 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I) 감소 및 apoC-III 증가를 확인한 결과이다.
이하, 본 발명을 하기에서 보다 상세하게 설명한다.
본 발명의 발명자는 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아의 제대혈을 비교 분석한 결과 상이한 차이를 발견하였다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아의 제대혈을 분석한 결과, 저체중 신생아의 제대혈에서는 단백질 농도가 감소하였고 중성 지방이 2배 이상 증가하였으며 혈당이 증가된 것을 확인하였다.
본 발명의 다른 실시예에 따르면, 저체중 신생아 제대혈은 가장 낮은 환원능력을 보여주었고, 더 큰 산화 민감도를 보였다.
더불어 다른 실시예에 따르면, 저체중 신생아 제대혈은 높은 CETP 활성을 보여주었다.
더불어 다른 실시예에 따르면, 저체중 신생아 제대혈 HDL에서 정상 신생아의 HDL보다 apoA-I이 감소되고 apoC-III이 증가된 것을 확인하였다.
더불어 다른 실시예에 따르면, 저체중 신생아 제대혈 HDL의 당화산물 양이 정상 신생아의 HDL보다 더 많이 존재하는 것을 확인하였다.
따라서 본 발명은 인간으로부터 분리된 제대혈 시료를 수집하는 단계; 상기 제대혈 시료 내의 중성지방의 함량, 혈당의 함량, 콜레스테롤에스테르수송단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP)의 활성, 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)의 함량, 아포지질단백질 C-3(Apolipoprotein C-III, apoC-III)의 함량, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물의 함량 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물의 함량으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 지표를 분석하는 단계 및 대조군의 그것과 비교하는 단계를 포함하는 신생아의 성장 예측 방법을 제공한다.
상기 대조군과 비교하는 단계에서, 제대혈 시료 내의 중성지방, 혈당, apoC-III, LDL의 산화물 및 HDL의 당화산물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 지표의 함량이 정상 대조군에 비해 높게 측정될 때 저체중아 위험군으로 진단할 수 있다.
상기 대조군과 비교하는 단계에서, 제대혈 시료 내의 apoA-I의 함량이 정상 대조군에 비해 낮게 측정될 때 저체중아 위험군으로 진단할 수 있다.
더불어 상기 대조군과 비교하는 단계에서, 상기 CETP의 활성이 정상 대조군에 비해 높게 측정될 때 저체중아 위험군으로 진단할 수 있다.
상기 중성지방은 트리글리세라이드(Triglyceride), 모노글리세라이드(monoglyceride) 및 디글리세라이드(diglyceride)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이나 이에 제한되는 것은 아니다.
더불어 본 발명의 일실시예에 따르면, 저체중 신생아의 LDL을 사람혈관 대식세포에 처리한 경우, 정상 신생아의 LDL처리보다 훨씬 많은 LDL의 탐식을 확인하였다.
LDL의 탐식은 동맥경화 유발의 초기단계이며, 상기 LDL의 산화 민감도의 증가는 동맥경화와 같은 심혈관 질환의 유발 가능성을 높인다고 알려져 있다.
따라서 본 발명은 인간으로부터 분리된 제대혈 시료를 수집하는 단계; 상기 제대혈 시료 내의 중성지방의 함량, 혈당의 함량, 콜레스테롤에스테르수송단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP)의 활성, 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)의 함량, 아포지질단백질 C-3(Apolipoprotein C-III, apoC-III)의 함량, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물의 함량 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물의 함량으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 지표를 분석하는 단계 및 대조군의 그것과 비교하는 단계를 포함하는 신생아의 심혈관계 질환 예후 진단 방법을 제공한다.
상기 대조군과 비교하는 단계에서, 제대혈 시료 내의 중성지방, 혈당, apoC-III, LDL의 산화물 및 HDL의 당화산물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 지표의 함량이 정상 대조군에 비해 높게 측정될 때 심혈관계 예후 위험군으로 진단할 수 있다.
상기 대조군과 비교하는 단계에서, 제대혈 시료 내의 apoA-I의 함량이 정상 대조군에 비해 낮게 측정될 때 심혈관계 예후 위험군으로 진단할 수 있다.
더불어 상기 대조군과 비교하는 단계에서, 상기 CETP의 활성이 정상 대조군에 비해 높게 측정될 때 심혈관계 예후 위험군으로 진단할 수 있다.
상기 중성지방은 트리글리세라이드(Triglyceride), 모노글리세라이드(monoglyceride) 및 디글리세라이드(diglyceride)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이나, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
< 실시예 1> 실험 방법
1) 지단백질의 분리
보라매병원(서울특별시에 위치)에서 얻은 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아의 제대혈 혈청 및 해당 산모의 혈청에 NaCl과 KBr을 첨가하여 밀도를 조정하였다. 그런 후, Himac CP-90α(Hitachi, Tokyo, Japan)를 사용하여 초원심분리 (100,000g)를 통해 지단백질 분획들을 아주 저밀도의 지단백질(Very low-density lipoproteins, VLDL, d<1.019 g/mL), 저밀도의 지단백질(low-density lipoproteins, LDL, 1.019<d<1.063), 고밀도의 지단백질(high-density lipoproteins, HDL2, 1.063<d<1.125), HDL3 (1.125<d<1.225)를 순차적으로 분리하였다.
2) 혈청화학분석
정상 신생아, 저체중 신생아 및 과체중 신생아 제대혈 내의 혈청 콜레스테롤, 중성지방 등 리피드 인자와 C-반응성 단백질(C-reactive protein, CRP), 트로포닌 I(Troponin I), 트로포닌 T(troponin T), 크레아틴 효소(Crentine Kinase)인 CK-MB, GOT (glutamate oxaloacetate transaminase), 글루탐산 피루브산 트랜스아미네이스(glutamate pyruvate transaminase, GPT) 및 락트산 수소 이탈 효소(Lactate dehydrogenase, LDH)를 자동화 기기(Chemistry analyzer AU4500 Olympus, Tokyo, Japan)를 이용하여 분석하였다. 혈청 염증 인자 단백질인 인터루킨-6(interleukin-6) 혹은 혈청 아밀로이드 A(serum amyloid A) 등은 효소면역측정법 키트(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA kit)로 정량하여 비교하였다.
3) 아포지단백질의 조성 변화
각 제대혈로부터 분리된 각각의 지단백질들의 주요 아포 지단백질 혹은 효소의 발현 변화를 소듐 도데실 설페이트-폴리아크릴아마이드 전기영동(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide electrophoresis, SDS-PAGE)과 웨스턴 블롯(western blotting) 분석으로 비교하였다. 단백질을 멤브레인에 이동시킨 후, 5% 무지방 건조 밀크(non-fat dry milk)를 0.1% 트윈 20(tween 20)이 포함된 트리스 완충 식염수(tris-bufferd saline, TBST)에 용해시킨 후, 이를 상기 멤브레인에 첨가하여 상온에서 1시간 동안 블락킹하였다. 그런 후, 5% 탈지유가 포함된 TBST에 1:2000 혹은 1:4000으로 희석된 apoA-I 항체, apoA-II 항체, apoC-III 항체, 엘캐트(lecithin:cholesterol acyltransferase, LCAT) 항체, 콜레스테롤에스테르수송단백질 (cholesteryl ester transfer protein, CETP) 항체를 넣고 4℃에서 하룻밤 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 멤브레인을 TBST을 이용하여 상온에서 10분간 3번 세척하고 각각의 2차 항체와 함께 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 그런 후, 화학발광법(chemiluminescence system, GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)을 이용하여 가시화하였다.
4) 항산화 능력 라디칼 소거 능력 비교
HDL의 주요한 기능적 장점은 우수한 항산화 기능에 있고, 자유라디칼의 소거능력이 항산화 능력에 매우 중요하므로 제 2 철이온(ferric ion)의 환원능력을 시험하여 저체중 신생아의 HDL이 가지는 라디칼 소거 능력의 변화를 관찰하였다.
이는 자유 라디칼 분석 시스템(Free Radical Analytical System, FRAS)을 통하여 확인하였다. 먼저, 25 ml의 0.2 M 아세테이트 버퍼(acetate buffer, pH 3.6)와 2.5 ml의 10 mM 2,4,6, 트리피리딜-s-트리아진(tripyridyl-s-triazine), 그리고 2.5 ml의 20 mM FeCl3 6H2O 용액을 혼합하여 철이온 라디칼 용액을 만들었고, 이에 10 μl의 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아의 HDL 용액을 넣어 환원되는 철이온의 양을 593 nm의 흡광도에서 30분간 측정하여 계산하였다.
5) LDL 산화 억제 효과 비교
HDL의 효과는 LDL의 산화를 억제하는 활성에서 유래하므로, 초원심분리를 통해 분리한 LDL(0.3 mg/mL)에 구리 이온을 첨가하여 산화시키면서, 정상 신생아, 저체중 신생아 및 과체중 신생아로부터 분리한 HDL을 첨가하여 대조군과 비교하였다. 산화의 형성물인 공역 디엔(conjugate diene)을 234 nm의 자외선 흡광도 증가량으로 120분간 모니터링하고, 반응 후 LDL들을 아가로스 겔(agarose gel) 상에서 전기영동하여 이동성을 비교하였다.
6) CETP 활성 능력 비교
HDL의 콜레스테롤은 CETP의 활성에 의해 LDL 혹은 VLDL로 전달되는데, CETP는 HDL의 긍정적 기능을 방해하여, 성인 질환의 유발인자로 인식되고 있으므로, 아포지단백질의 조성 변화가 CETP의 활성에 주는 영향을 조사하였다. 먼저, 방사능 동위원소 [3H]-콜레스테릴올리에이트([3H]-cholesteryl oleate, TRK886, GE healthcare, Uppsala, Sweden)에 3.5 mCi/mg의 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)을 첨가하여 합성하고, 합성한 후에 환원된 HDL(reconstituted HDL, rHDL)을 반응시킨 후 분리가 용이하도록 아가로즈 비드(agarose bead, CNBr-activated Sepharose 4B, Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden)에 고정시켰다. 각 아가로즈에 고정화된 rHDL(0.25 mg/mL, 0.05 mL)과 사람 혈장으로부터 분리한 LDL(0.25 mg/mL, 0.25 mL)과 정상 신생아, 저체중 신생아 및 과체중 신생아의 혈장 0.02 mL를 혼합하여 37℃에서 6시간 이상 반응시켰다. 반응이 끝난 후 4℃에서 원심분리(10,000 g)하여 rHDL을 분리하고, 상등액의 LDL 중 일부 (150 μL)를 취하여 섬광 계수(scintillation counting)로 agarose-rHDL에서 LDL로 전달된 방사능량을 계산하여 % [3H]-CE transfer로 표시하였다.
7) 대식세포 모델에서 LDL 탐식 저해 능력 비교
단핵구(Monocyte) 세포가 대식세포(Macrophage)로 분화되어 LDL을 탐식 (phagocytosis)하여 동맥 내벽에 침착과 괴사가 일어나고 거품 세포가 축적된다. 따라서 대식세포의 LDL 탐식은 동맥경화의 중요 단계이며, HDL이 LDL의 산화를 막아 탐식을 저해하는 것으로 알려져 있다.
정상 신생아와 저체중 신생아 간의 HDL의 탐식 저해를 비교하기 위해 THP-1 세포를 RPMI1640 배지에 배양한 후 포볼12-미리스테이트 13-아세트산(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA, final 150 nM)를 처리하여 대식세포로 분화시키고, 산화된 LDL을 처리하여 LDL의 탐식을 유도하였다. LDL 처리와 동시에 재조합 HDL 혹은 apoA-II 와 apoC-III가 포함된 재조합 HDL을 처리하여 apoA-I만으로 이루어진 HDL에 비해 LDL의 탐식을 저해하는 활성의 변화를 관찰하였다.
< 실시예 2> 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아의 제대혈 분석
정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아의 제대혈을 분석한 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
그 결과, 저체중 신생아 제대혈은 정상 또는 과체중에 비하여 단백질 농도가 감소되었고, 중성 지방이 2배 이상 증가한 것을 확인하였다.
또한 저체중아는 정상 대조군 (AGA)에 비해 20% 높은 혈당을 보이며 실험군 중 혈당이 가장 높았고, CETP 활성도 정상 대조군(AGA)에 비해 유의적으로 증가하였다. 이는 중성지방의 증가와 잘 일치하며, 상기 CETP는 동맥경화 및 심혈관 질환의 유발인자로 잘 알려져 있다.
AGA (n=15) SGA (n=15) LGA (n=5)
Weight(g) 3213±246 2589±192 3872±183
GAD(week) 39±1 39±1 39±1
Protein(mg/mL) 56±10 56±4 58±5
Total cholesterol(mg/dL) 60±12 62±16 66±9
Triglyceride(mg/dL) 26±8 44±10 30±11
Glucose(mg/dL) 67±29 80±25 46±26
GOT(Karmen/mL) 16±2 17±2 16±1
GPT (Karmen/mL) 15±1 15±1 16±1
CETP activity(%) 33±6 37±4 39±5
* 정상 신생아(AGA), 저체중 신생아(SGA), 과체중 신생아(LGA)
* 임신 후 분만 주수(gestational age delivery, GAD)
* 글루탐산 옥살로초산 트란스아미나제(glutamic oxaloacetic transaminase, GOT)
* 글루탐산 피루빈산 트란스아미나제(glutamic pyruvic transaminase, GPT)
< 실시예 3> 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 항산화 능력 분석
정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 철이온 환원 능력을 비교하여 이로부터 항산화 능력을 분석하였다.
그 결과 도 1과 같이, 정상 대조군(AGA)이 초기값에서 34% 증가하는 가장 높은 항산화능력, 환원능력을 보여주었으며, 저체중 신생아는 26%의 증가만을 보여 가장 낮은 환원능력을 보여주었다.
< 실시예 4> 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 LDL 산화 민감도 분석
산화가 많이 진행될수록 LDL의 전하가 증가하고 입자크기가 작아지므로 더 빠른 이동성을 보이게 된다. 따라서 LDL의 산화민감도가 증가하면 동맥경화, 심혈관질환의 유발 가능성은 더욱 높아진다.
정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 LDL 산화 민감도 분석한 결과 도 2와 같이, 정상 신생아의 LDL은 180분 동안 구리이온의 처리에 인해 산화되는 경향이 초기값에 비해 99% 증가하는데에 비하여, 저체중 신생아의 LDL에서는 구리이온의 처리에 인해 276% 산화물이 증가하였다. 따라서 저체중 신생아 LDL은 정상 신생아에 비하여 산화에 대하여 1.9배의 민감성을 보여주었다.
< 실시예 5> 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 HDL 당화산물의 양 측정
정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 HDL 당화산물의 양을 측정한 결과 도 3 중 A와 같이, 저체중 신생아의 HDL에 존재하는 당화산물의 양은 정상 신생아의 HDL 당화산물의 양보다 1.3배 더 높은 것으로 나타났다. 이를 형광활성으로 비교해본 결과, 저체중 신생아의 HDL이 더 많이 당화 변형되어있음을 확인하였다.
더불어 각 제대혈의 HDL을 구성하는 주된 단백질인 apopA-I을 비교하였다. 그 결과 도 3 중 B와 같이, 저체중 신생아의 apoA-I는 정상 신생아보다 조금 더 작은 크기를 보여주었으며 정상 신생아에 비해 52% 감소한 것을 보여주었다. 따라서 저체중 신생아에서 HDL을 구성하는 주된 단백질인 apoA-I이 감소함을 확인하였다.
< 실시예 6> 정상 신생아, 저체중 신생아 또는 과체중 신생아 제대혈의 중성지방 및 산화물 측정
각 제대혈의 지단백질 성분을 분석한 결과 도 4 중 A와 같이, 저체중 신생아의 지단백질에서 중성지방의 증가가 현저하였으며 VLDL, LDL, HDL 모두에서 유의적으로 정상 신생아보다 높음을 확인하였다. 중성지방의 증가는 염증유발과 연관성이 높으므로 저체중 신생아의 지단백질이 염증의 유발, 산화물의 증가와 밀접할 것으로 해석되었다. 더불어 도 4 중 B와 같이, 지단백질 내의 산화물인 말론디알데히드(Malondialdehyde)를 정량한 결과 저체중 신생아에서 정상 신생아보다 유의적으로 높았는데, HDL2에서는 7% 증가, HDL3에서는 1.9배 증가하였다. 이는 중성지방의 증가와 산화물의 증가가 일치함을 보여주므로 저체중 신생아의 지단백질들이 염증유발에 더욱 밀접할 것으로 판단되었다.
<실시에 7> 저체중 신생아의 LDL을 사람 혈관 대식세포에 처리한 후 탐식 작용 확인
저체중 신생아 LDL을 사람혈관 대식세포에 처리한 후 탐식 작용을 확인한 결과 도 5와 같이, 정상 신생아의 LDL을 처리한 경우보다 훨씬 많은 탐식 작용을 확인하였다. 이는 상기 실시예를 통해 확인한 저체중 신생아의 제대혈에서 중성지방이 증가하고 산화물이 증가한 결과와 잘 일치하고 있으며, LDL의 탐식은 동맥경화 유발에서 초기단계이기 때문에 저체중 신생아에서 동맥경화 위험이 높은 것으로 확인되었다.
< 실시예 8> 저체중 신생아의 apoA -Ⅰ과 apoC -Ⅲ 발현 변화 확인
상기 실시예 1 중 3의 방법을 따라 저체중 신생아와 정상 신생아의 apoA-Ⅰ과 apoC-Ⅲ의 발현을 비교하였다.
그 결과 도 6과 같이, 저체중아 신생아의 높은 HDL 분획에 있어서, apoA-I이 감소하였고 apoC-III가 증가하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (10)

  1. 인간으로부터 분리된 제대혈 시료를 수집하는 단계;
    상기 제대혈 시료 내의 중성지방의 함량, 혈당의 함량, 콜레스테롤에스테르수송단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP)의 활성, 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)의 함량, 아포지질단백질 C-3(Apolipoprotein C-III, apoC-III)의 함량, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물의 함량 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물의 함량을 분석하는 단계; 및
    상기 중성지방의 함량, 혈당의 함량, 콜레스테롤에스테르수송단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP)의 활성, 아포지질단백질 C-3(Apolipoprotein C-III, apoC-III)의 함량, 저밀도 지단백질(Low density lipoprotein, LDL)의 산화물의 함량 및 고밀도 지단백질(High density lipoprotein, HDL)의 당화산물의 함량이 정상 대조군에 비해 높게 측정되고, 아포지질단백질 A-1(Apolipoprotein A-I, apoA-I)의 함량이 정상 대조군에 비해 낮게 측정될 때 저체중아 위험군으로 진단하는 단계를 포함하는 신생아의 성장 예측 방법.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 중성지방은 트리글리세라이드(Triglyceride), 모노글리세라이드(monoglyceride) 및 디글리세라이드(diglyceride)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 신생아의 성장 예측 방법.





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